CN116615523A

CN116615523A - 脂氧合酶的用途

Info

Publication number: CN116615523A
Application number: CN202180073216.9A
Authority: CN
Inventors: I·达马格
Original assignee: Novozymes AS
Current assignee: Novozymes AS
Priority date: 2020-10-28
Filing date: 2021-10-27
Publication date: 2023-08-18
Also published as: WO2022090320A1; EP4237525A1; US20230399588A1

Abstract

本发明涉及脂氧合酶用于漂白或从表面去除污渍的用途，其中洗涤液包含降低的洗涤剂水平。

Description

脂氧合酶的用途

序列表的引用

本申请含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及脂氧合酶用于通过衣物洗涤或餐具洗涤来漂白或从表面去除污渍的用途，其中洗涤液包含降低的洗涤剂水平。在另一个方面，本发明涉及包含脂氧合酶和生物表面活性剂的洗涤剂组合物。

背景技术

洗涤剂从纺织品表面去除污渍的能力显然是消费者所关心的，各种表面活性剂成分在该过程中发挥作用。然而，出于多种原因，希望减少家庭护理中使用的洗涤剂的量。一个原因是洗涤剂中的一些成分衍生自石油化学资源，并且由于环境问题而面临审查，最重要的是因为它们来自不可再生来源并且难以生物降解或甚至一直存在于环境中，因此是不可持续的。另一个原因是降低洗涤液中的洗涤剂浓度可降低生产成本，并将最终导致较少的洗涤剂运输，并且因此减少对环境的负担。这种趋向于洗涤剂压实和表面活性剂洗涤浓度降低的趋势需要开发解决方案，以确保洗涤剂的持续性能，包括新的酶和酶的新用途。

EP 3483243(宝洁公司(Procter&Gamble))披露了包含本发明的SEQ ID NO 1(在EP 3483243中称为SEQ ID NO 57)的脂氧合酶的洗涤剂组合物。

WO 2014/090940(诺维信公司(Novozymes))披露了包含本发明的SEQ ID NO 1(在WO 2014/090940中称为SEQ ID NO 3)的脂氧合酶的洗涤剂组合物。

现有技术文献都没有披露脂氧合酶通过衣物洗涤或餐具洗涤来漂白或去除污渍的改进效果，其中洗涤液包含降低的洗涤剂水平。

发明内容

在先前的洗涤测试中，当以全剂量施用洗涤剂时，脂氧合酶仅显示出有限的污渍漂白效果。诸位发明人现已惊讶地发现，当以降低的水平加入洗涤剂时，脂氧合酶在洗涤中对污渍漂白具有非常好的性能。本发明使得能够在洗涤剂中使用脂氧合酶，其具有良好的益处，并且同时允许显著降低洗涤中的洗涤剂加载量。因此，本发明披露了洗涤液中具有脂氧合酶活性的多肽用于漂白或去除纺织品上的污渍的用途，其中该洗涤液包含约0g洗涤剂/L洗涤液至约4g洗涤剂/L洗涤液，和任选地一种或多种另外的酶。

在另一个方面，本发明涉及包含脂氧合酶和一种或多种生物表面活性剂的洗涤剂组合物。

定义

根据此详细描述，以下定义适用。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“该/这些(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。除非另外定义或由上下文明确指示，否则本文所用的全部技术与科学术语具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

AEP(活性酶蛋白)具有催化活性的酶蛋白。有多种方式来确定AEP。例如，可以通过将总活性除以酶的比活性来计算AEP。

细菌的：术语关于多肽(如酶，例如，脂氧合酶)的“细菌的”是指由细菌基因组编码并且因此可直接从细菌基因组衍生的多肽，其中这种细菌未经过遗传修饰来编码所述多肽，例如，通过重组DNA技术将编码序列引入基因组中。因此，在本发明的上下文中，术语“细菌脂氧合酶”或“获得自细菌来源的具有脂氧合酶活性的多肽”或“细菌来源的多肽”是指由细菌物种的基因组编码并且因此可直接从细菌物种的基因组衍生的脂氧合酶，其中这些细菌物种未经受通过引入编码所述脂氧合酶的重组DNA进行的遗传修饰。编码具有脂氧合酶活性的细菌多肽的序列也可以称为野生型脂氧合酶(或亲本脂氧合酶)。具有脂氧合酶活性的细菌多肽包括重组产生的野生型。在另一个方面，本发明提供了具有脂氧合酶活性的多肽，其中所述多肽与细菌脂氧合酶基本上同源。在本发明的上下文中，术语“基本上同源”表示具有脂氧合酶活性的多肽与所选择的细菌脂氧合酶的氨基酸序列具有至少80％，优选地至少85％，更优选地至少90％，更优选地至少95％，甚至更优选地至少96％、97％、98％，以及最优选地至少99％的同一性。

生物表面活性剂：生物表面活性剂是在微生物细胞表面产生或分泌并降低表面和界面张力的活性化合物。与合成表面活性剂相比，微生物表面活性剂具有几个优点，例如低毒性和高生物可降解性，并且通常在极端pH和盐度下保持活性。生物表面活性剂由细菌、酵母和丝状真菌产生，并且通常分为低分子量分子(脂肽、糖脂)和高分子量聚合物(聚合物表面活性剂和颗粒表面活性剂)。生物表面活性剂包括但不限于鼠李糖脂和槐糖脂。

生物表面活性剂也可以获得自植物而不是传统的石油化学工艺，包括但不限于SLS、APG、AEO和SLES。

洗涤剂辅助剂成分：洗涤剂辅助剂成分不同于本发明的脂氧合酶。这些另外的辅助剂组分的精确性质及其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在其中使用组合物的操作的性质。适合的辅料包括但不限于以下描述的组分，如表面活性剂、助洗剂、絮凝助剂、螯合试剂、染料转移抑制剂、酶、酶稳定剂、酶抑制剂、催化材料、漂白活化剂、过氧化氢、过氧化氢源、预形成的过酸、s、s、增亮剂、抑泡剂、染料、香料、结构弹力剂、织物柔软剂、载体、水溶助剂、助洗剂和共助洗剂、织物调色剂、消泡剂、分散剂、加工助剂、溶剂、和/或颜料。

洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(如纺织品)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品，用于家用清洁和工业清洁二者。这些术语涵盖选择用于希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊状、条状、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；织物清新剂；织物柔软剂；洗衣增效剂；以及纺织品和衣物预去污剂/预处理)。除了含有本发明的酶之外，该洗涤剂配制品还可以含有一种或多种另外的酶(如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶、或其任何混合物)，和/或洗涤剂辅助剂成分，如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物(如本文所列)、织物柔顺剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防腐蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂以及增溶剂。

洗涤剂加载量是洗涤周期中使用的洗涤剂的量。

酶洗涤益处：术语“酶洗涤益处”在本文定义为将酶添加至洗涤剂中与不具有该酶的相同洗涤剂相比的有利效果。可以由酶提供的重要洗涤益处是污渍去除伴随在洗涤和/或清洁之后无可见污垢或可见污垢非常少、防止或减少在洗涤过程中所释放的污垢再沉积(也被称作抗再沉积的效果)、完全或部分地恢复纺织品的白度(也被称作变白的效果)，该纺织品最初是白色的，但是在反复使用和洗涤后获得淡灰或淡黄色外观。还包括维持白度，例如，防止灰化或暗沉。不直接与催化污渍去除或防止污垢再沉积相关的纺织品护理益处对于酶洗涤益处而言也是重要的。此类纺织品护理益处的实例是防止或减少染料从一织物转移至另一织物或同一织物的另一部分(也被称作染料转移抑制或抗返染的效果)，从织物表面去除突出或断裂的纤维以减少起球倾向或去除已经存在的球或绒毛(也被称作抗起球的效果)，改善织物柔软性，使织物的颜色澄清以及去除陷在织物或服装的纤维中的微粒状污垢。酶漂白是另一种酶洗涤益处，其中通常将催化活性用于催化漂白组分(如过氧化氢或其他过氧化物)的形成。

脂肪酸：脂肪酸是具有脂肪族尾部(链)的羧酸，其是饱和的或不饱和的。大多数天然存在的脂肪酸具有4至28个偶数个碳原子的链。脂肪酸通常衍生自甘油三酯或磷脂。当它们不与其他分子连接时，它们被称为“游离”脂肪酸。脂肪酸的实例包括但不限于，丁酸(酪酸)、戊酸(缬草酸)、己酸(羊油酸)、庚酸(葡萄花酸)、辛酸(羊脂酸)、壬酸(天竺葵酸)、癸酸(羊蜡酸)、十二烷酸(月桂酸)、十四烷酸(肉豆蔻酸)、十六烷酸(棕榈酸)、十八烷酸(硬脂酸)、二十烷酸(花生酸)、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸以及二十二碳六烯酸。应当理解，在本发明的上下文中，脂肪酸和脂质的酰基基团是等同的。当脂肪酸是脂质的酰基基团时，脂质可以是甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂或鞘脂。该酰基基团可以是饱和的或不饱和的，并且任选地，可以附接官能团(取代基)。酰基基团的实例包括但不限于以下各项的酰基形式：丁酸(酪酸)、戊酸(缬草酸)、己酸(羊油酸)、庚酸(葡萄花酸)、辛酸(羊脂酸)、壬酸(天竺葵酸)、癸酸(羊蜡酸)、十二烷酸(月桂酸)、十四烷酸(肉豆蔻酸)、十六烷酸(棕榈酸)、十八烷酸(硬脂酸)、二十烷酸(花生酸)、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸以及二十二碳六烯酸。

片段：术语“片段”意指具有从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失的一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽；其中该片段具有脂氧合酶活性。

真菌的：在本发明的上下文中，术语关于多肽(如酶，例如，脂氧合酶)的“真菌的”是指由真菌基因组编码并且因此可直接从真菌基因生的多肽，其中这种真菌未经过遗传修饰来编码所述多肽，例如，通过重组DNA技术将编码序列引入基因组中。因此，在本发明的上下文中，术语“真菌脂氧合酶”或“获得自真菌来源的具有脂氧合酶活性的多肽”是指由真菌物种基因组编码并且因此可直接从真菌物种基因组衍生的脂氧合酶，其中该真菌物种未经受通过引入编码所述脂氧合酶的重组DNA进行的遗传修饰。因此，编码具有脂氧合酶活性的真菌多肽的核苷酸序列是天然在真菌物种遗传背景中的序列。由这种序列编码的具有脂氧合酶活性的真菌多肽还可以是指野生型脂氧合酶(或亲本脂氧合酶)。在另一个方面，本发明提供了具有脂氧合酶活性的多肽，其中所述多肽与真菌脂氧合酶基本上同源。在本发明的上下文中，术语“基本上同源”表示具有脂氧合酶活性的多肽与所选择的真菌脂氧合酶的氨基酸序列具有至少80％，优选地至少85％，更优选地至少90％，更优选地至少95％，甚至更优选地至少96％、97％、98％，以及最优选地至少99％的同一性。与真菌脂氧合酶基本上同源的多肽可以被包括于本发明的洗涤剂中，和/或在本发明的方法中使用。

宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不相同的任何亲本细胞子代。

改善的洗涤性能：术语“改善的洗涤性能”在本文定义为相对于没有酶的相同洗涤剂组合物的洗涤性能，酶展示出在洗涤剂组合物中增加的洗涤性能，例如，通过增加污渍去除或改善漂白。术语“改善的洗涤性能”包括在衣物中的洗涤性能。

分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的组分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组生产；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。分离的物质可以存在于发酵液样品中；例如宿主细胞可以经遗传修饰以表达本发明的多肽。来自该宿主细胞的发酵液将包含分离的多肽。

衣物洗涤：术语“衣物洗涤”涉及家庭衣物洗涤和工业衣物洗涤，并且意指用含有洗涤剂组合物和任选地一种或多种酶的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家庭或工业洗衣机进行，或可以手动进行。

脂氧合酶：脂氧合酶(EC 1.13.11.12，亚油酸酯：氧化还原酶，LOX)是一种催化含有顺,顺-1,4-戊二烯单元的多不饱和脂肪酸(如亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸)的氧化并产生这些脂肪酸的氢过氧化物的酶。本发明的脂氧合酶能够氧化含有顺-顺-戊二烯基部分的底物。因此，它可以作用于多不饱和脂肪酸，例如亚油酸(18个碳原子，2个双键)、亚麻酸(18:3)、花生四烯酸(20:4)、二十碳五烯酸(EPA，20:5)和/或二十二碳六烯酸(DHA，22:6)。

脂氧合酶可以是具有氧化亚油酸和亚麻酸中的碳原子9和10之间的双键的能力的9-脂氧合酶，或者它可以是具有氧化亚油酸和亚麻酸中的碳原子12和13之间的双键的能力的13-脂氧合酶，或者它可以是具有氧化碳原子9和10之间以及碳原子12和13之间的双键的能力的9/13-脂氧合酶。

脂氧合酶可以来自动物、植物或微生物来源。植物脂氧合酶可以来自豆科(蝶形花科(Fabaceae))、(大豆)(脂氧合酶1、2和3)、黄瓜或大麦的植物。微生物脂氧合酶可以来自酵母(例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))、嗜热放线菌(例如普通嗜热放线菌(Thermoactinomyces vulgaris))或嗜热丝孢菌属(Thermomyce)(例如疏绵状嗜热丝孢菌(T.lanuginosus))，或来自真菌。

真菌脂氧合酶可以衍生自子囊菌门(Ascomycota)，特别是地位未定子囊菌门(Ascomycota incertae sedis)，例如巨座壳科(Magnaporthaceae)(如顶囊壳属(Gaeumannomyces)或梨孢菌属(Magnaporthe))，或无性型巨座壳科(如梨孢属(Pyricularia))，或可替代地无性型子囊菌门，如地丝菌属(Geotrichum)(例如白地霉(G.candidum))。真菌脂氧合酶可以来自禾顶囊壳(Gaeummanomyces graminis)，例如禾顶囊壳禾谷变种(G.graminis var.graminis)、禾顶囊壳燕麦变种(G.graminis var.avenae)或禾顶囊壳小麦变种(G.graminis var.tritici)(WO 0220730)，或稻小球腔菌(Magnaporthe salvinii)(WO 2002/086114)。此外，真菌脂氧合酶可以来自镰孢属(Fusarium)例如尖孢镰孢(F.oxysporum)或层生镰孢(F.proliferatum)，或青霉属物种(Penicillium sp)。

恶臭：术语“恶臭”意指清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干净，而没有粘附在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物，这些化合物可以是微生物生产的。另一个实例是令人不愉快的气味可以是粘附于已经与人类或动物接触的物品的汗味或体味。恶臭的另一个实例可以是来自香味料的气味，其粘附于物品，例如气味强烈的咖喱或其他异国香味料。

成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如N-末端加工、C-末端截短、糖基化作用、磷酸化作用等之后处于其最终形式的多肽。

序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的关联度通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人,2000,Trends Genet.[遗传学趋势]16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：

(相同的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)

出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(EMBOSS:The European Molecular Biology Open Software Suite)，Rice等人.,2000,同上)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔程序中所实施的尼德尔曼-翁施算法(Needleman和Wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性。使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5以及EDNAFULL(NCBI NUC4.4的EMBOSS版本)取代矩阵。使用尼德尔标记的“最长同一性”的输出(使用非简化(-nobrief)选项获得)作为同一性百分比并且如下计算：

(相同的脱氧核糖核苷酸x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。

纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。纺织品或织物可以处于针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。纺织品可以基于纤维素，如天然纤维素，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。纺织品或织物也可以不基于纤维素，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝，或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸酯、聚丙烯和氨纶(spandex)/弹性纤维(elastane)、或其共混物以及基于纤维素的纤维和不基于纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/纤维胶与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳族聚酰胺纤维)和/或含纤维素的纤维(例如人造丝/纤维胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污渍的家用衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。在本发明的上下文中，术语“纺织品”还涵盖织物。在本发明的上下文中，术语“纺织品”可与织物和布料互换使用。

已使用或已穿着：本文所用的关于纺织品的术语“已使用或已穿着”意指已经由消费者使用或穿着或者已经与人类皮肤(例如在生产或零售期间)接触的纺织品。消费者可以是购买纺织品的人，例如，在商店购买纺织品(例如，新衣服或床上用品)的人或购买纺织品(例如，床上用品、茶巾或桌布)用于企业用途的企业，例如，酒店、饭店、专业厨房、机构、医院等。在某些情况下，此类已使用或已穿着的纺织品会带有尚未完全洗掉的常规污渍，并可以形成粘合基础，以吸引和积聚更多空气中的颗粒物。

变体：术语“变体”意指在一个或多个(例如，几个)位置处包含改变(即，取代、插入和/或缺失)的与亲本酶具有相同活性的多肽。取代意指用不同的氨基酸替代占据某一位置的氨基酸；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；而插入意指在邻接并且紧随占据某一位置的氨基酸之后添加氨基酸。在本发明的上下文中，鉴定的脂氧合酶的变体具有亲本的酶活性。在一个实施例中，以亲本脂氧合酶(例如，SEQ ID NO:1的成熟多肽)为参比，变体的脂氧合酶活性是增加的。

洗涤周期：术语“洗涤周期”在本文定义为如下洗涤操作，其中将纺织品浸泡在洗涤液中，将某种机械作用应用于该纺织品，以释放污渍，并且协助洗涤液流进和流出该纺织品，并且最终去除多余的洗涤液。在一个或多个洗涤周期后，总体上对该纺织品进行漂洗和干燥。

洗涤液：术语“洗涤液”在本文定义为水和脂氧合酶的溶液或混合物。除了脂氧合酶之外，洗涤液还可以包括洗涤剂组分和任选地一种或多种酶。

洗涤性能：术语“洗涤性能”被用作在洗涤期间洗涤剂组合物、酶或聚合物去除存在于有待清洁的物体上的污渍或保持纺织品的颜色和白度的能力。洗涤性能的改进可以通过计算如实验部分中所述的所谓ΔREM来量化。

重量百分比：缩写为w/w％、wt％或w％。这些缩写可互换使用。

白度：术语“白度”在本文定义为在不同领域并且针对不同消费者具有不同含义的广义术语。白度可以用在白色纺织品上或可互换地用作有色纺织品的亮度。白度或亮度的损失可以例如归因于灰化、黄化、或光学增亮剂/调色剂的去除。灰化和黄化可归因于污垢再沉积、污渍再沉积、污物/泥浆再沉积、污染粒子、身体污垢、来自例如铁和铜离子或染料转移的着色。白度的损失可以包括来自以下列表的一个或几个问题：着色剂或染料作用；不完全污渍去除(例如身体污垢、皮脂等)；再沉积(物体的灰化、黄化或其他变色)(去除的污垢与纺织品的其他部分(弄脏的或未弄脏的)再关联)；在应用过程中纺织品的化学变化；以及颜色的澄清或淡色化。

序列综述

SEQ ID NO:1是来自橹豆(Glycine max)的脂氧合酶

SEQ ID NO:2是来自疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)的脂肪酶

具体实施方式

本发明的诸位发明人已惊讶地发现，当以降低的洗涤剂水平加入洗涤剂时，脂氧合酶在洗涤中对污渍漂白或去除具有非常好的性能。本发明使得能够使用脂氧合酶用于污渍去除，其具有良好的益处，并且同时可以显著降低洗涤剂加载量。

因此，本发明涉及洗涤液中脂氧合酶用于漂白或去除纺织品上的污渍的用途，其中该洗涤液包含约0-4g/L洗涤剂，例如0-3.5g/L洗涤剂，和任选地一种或多种另外的酶。

洗涤液可以具有在5℃至95℃范围内、或在10℃至80℃范围内、在10℃至70℃范围内、在10℃至60℃范围内、在10℃至50℃范围内、在15℃至40℃范围内或在20℃至40℃范围内的温度。

在本发明的一个实施例中，用于洗涤物品的方法进一步包括在完成洗涤周期后排掉洗涤液或部分洗涤液。然后可以将洗涤液在后续洗涤周期中或在后续漂洗周期中重复使用。在第一个和任选地第二个或第三个洗涤周期期间，可以将该物品暴露于洗涤液。在一个实施例中，在暴露于洗涤液后，漂洗该物品。可以将该物品用水或用包括柔顺剂的水进行漂洗。

适用于如本申请所述用途的脂氧合酶优选地是大豆脂氧合酶，例如来自大豆(橹豆)的LOX-1。

在实施例中，脂氧合酶包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，或包含与SEQ ID NO 1的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列。在一方面，这些多肽与包含SEQ ID NO:1的多肽相差多达10个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、或10个)氨基酸。

在实施例中，SEQ ID NO:1的脂氧合酶在一个或多个(例如，几个)位置处包含取代、缺失和/或插入。在实施例中，引入SEQ ID NO:1的多肽中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目不超过10，例如1、2、3、4、5、6、7、8、或9。氨基酸改变可以是具有微小性质的，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。

保守取代的实例在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸和组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸)、芳族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)、以及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.Neurath和R.L.Hill,1979,于The Proteins[蛋白质],Academic Press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、和Asp/Gly。

可替代地，这些氨基酸改变具有使多肽的物理化学性质改变的这样一种性质。例如，氨基酸改变可以改善多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适pH，等等。

可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham和Wells,1989,Science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，Hilton等人,1996,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，如通过以下技术例如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记进行确定的对结构进行物理学分析，从而确定酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见例如，de Vos等人,1992,Science[科学]255:306-312；Smith等人,1992,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]224:899-904；Wlodaver等人,1992,FEBS Lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。

可以使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序做出单氨基酸或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序例如由Reidhaar-Olson和Sauer,1988,Science[科学]241:53-57；Bowie和Sauer,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如Lowman等人,1991,Biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)以及区域定向诱变(Derbyshire等人,1986,Gene[基因]46:145；Ner等人,1988,DNA 7:127)。

诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(Ness等人,1999,Nature Biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的DNA分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。

多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的N-末端或C-末端处融合。

多肽可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明多肽的N-末端或C-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸与本发明的多核苷酸融合来生产融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(Cooper等人,1993,EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；Dawson等人,1994,Science[科学]266:776-779)。

融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：Martin等人,2003,J.Ind.Microbiol.Biotechnol.[工业微生物学与生物技术杂志]3:568-576；Svetina等人,2000,J.Biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；Rasmussen-Wilson等人,1997,Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；Ward等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:498-503；和Contreras等人,1991,Biotechnology[生物技术]9:378-381；Eaton等人,1986,Biochemistry[生物化学]25:505-512；Collins-Racie等人,1995,Biotechnology[生物技术]13:982-987；Carter等人,1989,Proteins:Structure,Function,and Genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及Stevens,2003,Drug Discovery World[药物发现世界]4:35-48。

核苷酸的PCR、克隆、连接等的一般方法是本领域技术人员熟知的，并且可以例如在以下文献中发现：“Molecular cloning:A laboratory manual[分子克隆：实验室手册]”,Sambrook等人(1989),Cold Spring Harbor lab.[冷泉港实验室],冷泉港,纽约州；Ausubel,F.M.等人(编辑)；“Current protocols in Molecular Biology[分子生物学现代方法]”,John Wiley and Sons[约翰威利父子出版公司],(1995)；Harwood,C.R.,和Cutting,S.M.(编辑)；“DNA Cloning:A Practical Approach,Volumes I and II[DNA克隆：实用方法，第I和II卷]”,D.N.Glover编辑(1985)；“Oligonucleotide Synthesis[寡核苷酸合成]”,M.J.Gait编辑(1984)；“Nucleic Acid Hybridization[核酸杂交]”,B.D.Hames和S.J.Higgins编辑(1985)；“A Practical Guide To Molecular Cloning[分子克隆实用指南]”,B.Perbal,(1984)。

洗涤液中脂氧合酶(作为AEP)的浓度典型地在0.05-20ppm(mg/L)活性酶蛋白的范围内，例如在0.1-15ppm的范围内、在0.5-15ppm的范围内、在1-15ppm的范围内、在1-10ppm的范围内、在2-10ppm的范围内。

脂氧合酶(作为配制产品)可以以0.2-10wt％的浓度存在于洗涤剂中，该浓度例如在0.5-5wt％的范围内、例如在0.5-3wt％的范围内、例如在0.5-2.5wt％的范围内、或在0.5-2wt％的范围内、或者甚至在0.5-1wt％的范围内。

可以使用常规稳定剂稳定化本发明的洗涤剂组合物的脂氧合酶，这些常规稳定剂例如是多元醇，例如丙二醇或甘油、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物，例如芳香族硼酸酯，或苯基硼酸衍生物，例如4-甲酰苯基硼酸，并且可以如在例如WO 92/19709和WO 92/19708中所描述配制该组合物。

本发明的多肽还可以结合到WO 97/07202中所披露的洗涤剂配制品中，将其通过引用而特此并入。

液体酶配制品

酶(脂氧合酶、脂肪酶和其他存在的酶)可配制成液体酶配制品，该液体酶配制品通常是可倾流的组合物，不过它也可能具有高粘度。液体酶配制品的物理外观和性质可能有很大变化——例如它们可能具有不同的粘度(凝胶状到水状)，着色的、没有着色的、透明的、模糊的以及甚至具有固体粒子(如在浆液和悬浮液中)。这些最小成分是使其成为液体的酶(脂氧合酶和任选地其他存在的酶)和溶剂系统。

该溶剂系统可以包含水、多元醇(如甘油、(一元、二元或三元)丙二醇、(一元、二元或三元)乙二醇、糖醇(例如山梨醇、甘露糖醇、赤藓糖醇、半乳糖醇、肌醇、木糖醇或核糖醇)、聚丙二醇、和/或聚乙二醇)、乙醇、糖和盐。通常该溶剂系统还包括防腐剂和/或其他稳定剂。

可以通过将溶剂系统和具有所希望纯度的酶浓缩物(或酶粒子以获得浆液/悬浮液)混合来制备液体酶配制品。

在实施例中，该液体酶组合物包含：

(a)至少0.01％w/w活性酶蛋白，

(b)至少0.5％w/w多元醇，

(c)水，以及

(d)任选地防腐剂。

可以使用常规稳定剂使本发明的液体组合物中的酶(脂氧合酶和任选地其他存在的酶)稳定。稳定剂的实例包括但不限于糖，如葡萄糖、果糖、蔗糖、或海藻糖；多元醇(如甘油、丙二醇)；添加盐以提高离子强度；二价阳离子(例如，Ca²⁺或Mg²⁺)；以及酶抑制剂、酶底物、或多种聚合物(例如，PVP)。为配制品选择最佳pH可能对酶稳定性非常重要。最佳pH取决于特定的酶，但典型地在pH 4-9的范围内。在一些情况下，表面活性剂，如非离子表面活性剂(例如，醇乙氧基化物)可以改进酶配制品的物理稳定性。

本发明的一个实施例涉及包含脂氧合酶的组合物，其中该组合物进一步包含：

(i)多元醇，优选地选自甘油、(一元、二元或三元)丙二醇、(一元、二元或三元)乙二醇、聚乙二醇、糖醇、山梨醇、甘露糖醇、赤藓糖醇、半乳糖醇、肌醇、木糖醇和核糖醇；

(ii)任选地另外的酶，优选地选自蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、DNA酶和/或甘露聚糖酶；

(iii)任选地表面活性剂，优选地选自阴离子和非离子表面活性剂，

(iv)任选地盐、二价阳离子、聚合物、或酶抑制剂；

(v)任选地具有pH 4-9范围内的pH；以及

(vi)水。

酶的浆液或分散剂典型地通过将酶的小粒子(例如，喷雾干燥粒子)分散在酶略微可溶的液体介质(例如，液体非离子表面活性剂或液体聚乙二醇)中制备。粉末也能以一定量添加到水性系统中，因此并非全部进入溶液中(高于溶解极限)。另一种形式为晶体悬浮液，该晶体悬浮液也可以是水性液体(参见例如WO 2019/002356)。另一种制备此类分散剂的方法是通过制备油包水乳液，其中酶处于水相中，并从液滴中蒸发水分。可通过添加流变改性剂(如气相二氧化硅或黄原胶)使此类浆液/悬浮液在物理上稳定(以减少或避免沉降)，典型地以实现剪切稀化流变学。

颗粒酶配制品

酶(脂氧合酶和任选地其他存在的酶)也可以配制成固体/颗粒酶配制品。无粉尘颗粒可以例如如在US 4,106,991和US 4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯、和甘油二酯、和甘油三酯。合适的用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。

脂氧合酶可以配制为颗粒，例如配制为结合一种或多种酶的共颗粒或有益剂(如MnTACN或其他漂白组分)。此类另外的酶的实例包括脂肪酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶、半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、淀粉酶、DNA酶、及其混合物。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露内容IPCOM000200739D中。

本发明的实施例涉及包含脂氧合酶的酶颗粒/粒子。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)构成。典型地，该颗粒的颗粒度/粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。

该核心可以包括另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。该核心可以包括黏合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。该核心可以由惰性粒子组成，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。该核心的直径可以是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤出、颗粒化(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。用于制备核心的方法可见于Handbook of Powder Technology[粉末技术手册]；C.E.Capes的Particle size enlargement[粒度增大]；第1卷；1980；Elsevier[爱思唯尔]中。这些方法是本领域所熟知的并且也已经描述于国际专利申请WO 2015/028567，第3-5页中，将其通过引用并入。

该酶颗粒/粒子的核心可以被至少一个包衣包围，例如，以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他合适的包衣材料，如聚乙二醇(PEG)、甲基羟基-丙基纤维素(MHPC)以及聚乙烯醇(PVA)。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于WO 93/07263和WO 97/23606中。

此类包衣是本领域所熟知的，并且早前已经描述于例如WO 00/01793、WO 2001/025412和WO 2015/028567中，将其通过引用并入。

在一方面，本发明提供了颗粒，该颗粒包含：

(a)含有根据本发明的脂氧合酶的核心；以及

(b)任选地由包围该核心的一个或多个层组成的(盐)包衣。

本发明的另一个方面涉及分层的颗粒，该分层的颗粒包含：

(a)(非酶)核心；

(b)包围该核心的包衣，其中该包衣包含脂氧合酶；以及

(c)任选地由包围该含有包衣的酶的一个或多个层组成的(盐)包衣。

包封的酶配制品

酶(脂氧合酶和任选地其他存在的酶)也可以配制成包封的酶配制品(‘包封物’)。当将酶添加到例如(液体)清洁组合物(如下文描述的洗涤剂组合物)中时，这对于将酶与其他成分分离特别有用。

物理分离可以用于解决一种或多种酶与其他组分之间的不相容性。如果其他组分对酶有反应，或者如果其他组分是酶的底物，则可能出现不相容性。其他酶可以是蛋白酶的底物。

酶可以包封在基质中，优选水溶性或水分散基质(例如水溶性聚合物粒子)，例如WO 2016/023685中所述。水溶性聚合物基质的实例是包含聚乙烯醇的基质组合物。此类组合物也用于以单位剂量规格包封洗涤剂组合物。

酶也可以包封在核壳微囊中，例如描述于WO 2015/144784，或描述于IP.com披露内容IPCOM000239419D中。

可以使用本领域已知的多种技术制备此类核壳胶囊，例如，使用油包水或水包油乳液进行界面聚合，其中聚合物在乳液中的液滴表面(水和油之间的界面)交联，因此，在每个液滴/胶囊周围形成壁/膜。

共颗粒中酶的配制品

酶(脂氧合酶和任选地其他存在的酶)可以被配制为颗粒，例如配制为结合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于IP.com披露内容IPCOM000200739D中。

通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于WO 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)少于10wt％沸石(无水的基础上)；和(c)少于10wt％磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含从10wt％至98wt％的水分汇组分(moisture sink component)，并且该组合物另外包含从20wt％至80wt％的洗涤剂水分汇组分。WO 2013/188331还涉及处理和/或清洁表面(优选地织物表面)的方法，该方法包括以下步骤：(i)使所述表面在水性洗涤液中与如在本文要求保护的并且描述的洗涤剂组合物接触，(ii)漂洗和/或干燥该表面。

多酶共颗粒可以包含脂氧合酶和(a)选自由以下组成的组的一种或多种酶：脂肪酶、木葡聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、脂氧合酶、漆酶及其混合物；和(b)选自由以下组成的组的一种或多种酶：半纤维素酶、蛋白酶、护理纤维素酶、纤维素酶、纤维二糖脱氢酶、木聚糖酶、磷脂酶、酯酶、角质酶、果胶酶、甘露聚糖酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、木质酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、地衣聚糖酶、葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、淀粉酶、DNA酶、及其混合物。

配制品中酶的纯化

可以将上述酶配制品中使用的酶(脂氧合酶和任选地其他存在的酶)纯化至任何希望的纯度。这包括高水平的纯化，例如通过使用结晶方法实现，但也包括无纯化或低水平的纯化，例如通过使用粗发酵液实现，如WO 2001/025411或WO 2009/152176中所述。

微生物

酶配制品以及以下所述的洗涤剂配制品可包含一种或多种微生物或微生物体。通常，在酶/洗涤剂配制品中可以使用任何合适的量/浓度的任何一种或多种微生物。微生物可以作为唯一的生物活性成分使用，但它们也可以与上述一种或多种酶结合使用。

添加一种或多种微生物的目的可以是例如在WO 2012/112718中所述的减少恶臭。其他目的可包括原位产生合意的生物化合物，或者用一种或多种微生物接种/占据位置，以竞争地预防其他非希望的微生物形式占据相同位置(竞争排斥)。

术语“微生物”通常意指通过显微镜可见的小的生物。微生物通常以单细胞或细胞集落的形式存在。一些微生物可能是多细胞的。微生物包括原核生物(例如，细菌和古生菌)和真核生物(例如，一些真菌、藻类、原生动物)。细菌的实例可以是革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。细菌的实例形式包括营养细胞和芽孢。真菌的实例可以是酵母、霉菌和蕈类。真菌的实例形式包括菌丝和孢子。在本文中，病毒可以被认为是微生物。

微生物可以是重组或非重组的。在一些实例中，微生物可以产生可用于包含在洗涤剂组合物中的各种物质(例如，酶)。来自微生物的提取物或提取物的级分可用于洗涤剂中。在洗涤剂中也可以使用培养微生物的培养基或来自培养基的提取物或级分。在微生物的一些特定实例中，由微生物，其提取物、培养基和级分产生的物质可以特别排除在洗涤剂之外。在一些实例中，微生物或由微生物产生或提取的物质可以激活、增强、保存、延长洗涤剂活性或洗涤剂所含的组分的活性等。

通常，可以使用本领域已知的方法培养微生物。然后可以以各种方式处理或配制微生物。在一些实例中，微生物可以是干的(例如，冻干的)。在一些实例中，微生物可以是被包封的(例如，喷雾干燥)。许多其他处理或配制也是可能的。这些处理或制备有利于随时间和/或在洗涤剂组分存在下保留微生物活力。然而，在一些实例中，洗涤剂中的微生物可能是无活力的。可以在使用之前或在使用洗涤剂时将经处理/配制的微生物添加到洗涤剂中。

在一个实施例中，微生物是芽孢杆菌属(Bacillus)物种，例如选自由以下组成的组的至少一种芽孢杆菌属物种：枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium)或其组合。在优选的实施例中，上述芽孢杆菌属物种均处于芽孢形式，这显著提高了储存稳定性。

洗涤剂组合物

在一个实施例中，本发明涉及包含脂氧合酶与一种或多种另外的清洁组合物组分的组合的洗涤剂组合物。在一个实施例中，洗涤剂组合物包含具有脂氧合酶活性的多肽，该多肽具有与SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列具有至少60％同一性，如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至100％同一性的氨基酸序列。在一个实施例中，该洗涤剂组合物处于固体形式。在另一个实施例中，该洗涤剂组合物处于液体或凝胶形式。在另一个实施例中，该洗涤剂组合物处于条状形式。在一个实施例中，该洗涤剂可以包裹于水溶性PVOH膜中。另外的组分的选择处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所阐述的示例性非限制性组分。

液体洗涤剂组合物

该液体洗涤剂组合物可以包含微囊，并且由此形成处于任何形式的任何洗涤剂组合物的一部分，如液体和粉末洗涤剂，以及皂和洗涤剂条。

在一个实施例中，本发明涉及液体洗涤剂组合物，这些组合物包含微囊(如上所述)与一种或多种另外的清洁组合物组分的组合。

可以将微囊(如上所述)按对应于从0.0001％至5％(w/w)活性酶蛋白(AEP)的量添加至该液体洗涤剂组合物中；优选地从0.001％至5％，更优选地从0.005％至5％，更优选地从0.005％至4％，更优选地从0.005％至3％，更优选地从0.005％至2％，甚至更优选地从0.01％至2％，并且最优选地从0.01％至1％(w/w)活性酶蛋白。

液体洗涤剂组合物具有物理形式，它不是固体(或气体)。它可以是可倾流的液体、糊剂、可倾流的凝胶或不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的或结构性的，优选各向同性的。它可以是用于在自动洗衣机中洗涤或用于手洗的配制品。它还可以是个人护理产品，例如洗发水、牙膏、或洗手皂。

液体洗涤剂组合物可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、或高达20％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以包含于水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的，其中水含量低于10％，优选低于5％。

洗涤剂成分可以通过水可溶的袋中的室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起所选择的组分的延迟溶解。

洗涤剂组合物可以采用单位剂量产品的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它越来越多地用于针对衣物的洗涤剂中。洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂的量的包装(例如，在由水溶性膜制得的袋中)。

袋可以具有适合保存组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物是经选择的聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混物组合物，该共混物组合物包含可水解降解并且水溶性聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在商品参考号M8630下，如由美国印第安纳州盖里(Gary,Ind.,US)的克里斯克拉夫特工业产品公司(Chris Craft In.Prod.)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中，液体组分的室可以与含固体的室不同(参见例如，US 2009/0011970)。

洗涤剂成分

洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品护理)有待清洁的纺织品的类型、污垢的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据特定的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，组分可以包含另外的功能性。

还可以使用本领域中已知用于在洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐蚀剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、黏合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂/崩解试剂、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、和/或多元醇，如丙二醇)、织物柔顺剂(包括粘土)、填料/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢悬浮剂、柔软剂、抑泡剂、晦暗抑制剂、以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域已知的用于在洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全处于技术人员的能力范围内并且包括常规的成分，包括下文所阐述的示例性非限制性组分。

表面活性剂

清洁组合物可以包含一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的，或其混合物。在特定的实施例中，洗涤剂组合物包括表面活性剂系统(包含多于一种表面活性剂)，例如一种或多种非离子表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。在一个实施例中，洗涤剂包含至少一种阴离子表面活性剂和至少一种非离子表面活性剂，阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比可以为20:1至1:20。在一个实施例中，阴离子表面活性剂的量高于非离子表面活性剂的量，例如阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比可以为10:1至1.1:1或5:1至1.5:1。阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的量也可以相等并且重量比为1:1。在一个实施例中，非离子表面活性剂的量高于阴离子表面活性剂的量，并且重量比可以为1:10至1:1.1。阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比优选为10:1至1:10，如5:1至1:5，或5:1至1:1.2。优选地，非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的重量分数为0至0.5或0至0.2，因此如果重量分数为0，则可以存在或不存在非离子表面活性剂，但是如果存在非离子表面活性剂，则非离子表面活性剂的重量分数优选为阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂总重量的至多50％或至多20％。轻垢洗涤剂通常包含比阴离子表面活性剂更多的非离子表面活性剂，并且其中非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的分数优选为0.5至0.9。一种或多种表面活性剂的总重量典型地以按重量计约0.1％至约60％，例如约1％至约40％，或约3％至约20％，或约3％至约10％的水平存在。基于所希望的清洁应用来选择该一种或多种表面活性剂，并且该一种或多种表面活性剂可以包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约1％至约40％的阴离子表面活性剂，如从约5％至约30％，包括从约5％至约15％，或从约15％至约20％，或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，典型地以钠盐或钾盐可用，或单乙醇胺(MEA，2-氨基乙-1-醇)盐或三乙醇胺(TEA，2,2',2”-次氮基三乙-1-醇)盐；特别是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体，如支链烷基苯磺酸盐(BABS)和苯基链烷磺酸盐；烯烃磺酸盐，特别是α-烯烃磺酸盐(AOS)；烷基硫酸盐(AS)，特别是脂肪醇硫酸盐(FAS)，即伯醇硫酸盐(PAS)，例如十二烷基硫酸盐(SLS)；醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)；石蜡磺酸盐(PS)，包括链烷-1-磺酸盐和仲链烷磺酸盐(SAS)；酯磺酸盐，包括磺化脂肪酸甘油酯和α-磺基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES或MES)；烷基琥珀酸或烯基琥珀酸，如十二碳烯基/十四碳烯基琥珀酸(DTSA)；磺基琥珀酸的二酯和单酯；氨基酸的脂肪酸衍生物。阴离子表面活性剂可以作为酸、盐或乙醇胺衍生物添加。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0,1％至约40％的阳离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物、酯季铵及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.2％至约40％的非离子表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，如从约3％至约5％、从约8％至约12％或从约10％至约12％。非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)(例如AEO系列如AEO-7)、醇丙氧基化物(特别是丙氧基化脂肪醇(PFA)、乙氧基化醇和丙氧基化醇)、烷氧基化脂肪酸烷基酯(如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯(尤其是乙氧基甲酯，MEE))、烷基多糖苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)、或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))，以及可以商品名SPAN和TWEEN获得的产品、及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计从约0.01％至约10％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，如烷基二甲基氧化胺，特别是N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛脂烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺及其组合。

当被包括在其中时，该洗涤剂将通常含有按重量计约0.01％至约10％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱，如烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱、及其组合。

可以使用另外的生物基表面活性剂，例如其中表面活性剂是基于糖的非离子表面活性剂，其可以是己基-β-D-麦芽吡喃糖苷、硫代麦芽吡喃糖苷或环状麦芽吡喃糖苷，例如EP 2516606 B1中所述。其他生物表面活性剂可以包括鼠李糖脂和槐糖脂。

水溶助剂

水溶助剂是如下化合物，该化合物在水溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中溶解极性物质)。典型地，水溶助剂具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲性质，如由表面活性剂已知的)；然而，水溶助剂的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如通过Hodgdon和Kaler(2007),Current Opinion in Colloid&Interface Science[胶体和界面科学新见]12:121-128的综述。水溶助剂并不表现如在形成胶束、薄层或其他明确限定的中间相(meso-phase)的表面活性剂和脂质中所见的临界浓度(高于此浓度则发生自聚集)。相反，许多水溶助剂示出了连续类型的聚集过程，在该过程中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，许多水溶助剂改变了含有极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。水溶助剂常规地在从药学、个人护理、食品到技术应用的各个产业中应用。水溶助剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，如相分离或高粘度。

洗涤剂可以含有按重量计0-10％，例如按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的水溶助剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何水溶助剂。水溶助剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠、及其组合。

助洗剂和共助洗剂

洗涤剂组合物可以含有按重量计约0-65％(如约5％至约50％)的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。助洗剂和/或共助洗剂可以特别是与Ca和Mg形成水溶性复合物的螯合试剂。可以利用本领域已知的用于在清洁洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。

助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐如碳酸钠、可溶性硅酸盐如偏硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自科莱恩特公司(Clariant)的SKS-6)、乙醇胺如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为2,2’-亚氨基二乙-1-醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2',2'’-次氮基三乙-1-醇)以及(羧甲基)菊粉(CMI)、及其组合。

该洗涤剂组合物还可以含有按重量计从约0-50％，如约5％至约30％的洗涤剂共助洗剂。洗涤剂组合物可以包括单独或与助洗剂(例如沸石助洗剂)组合的共助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括或其共聚物，如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。根据本发明，这些组分可以以低于目前可用的洗涤剂组合物中的水平包含在内。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐、螯合剂(例如氨基羧酸盐、氨基聚羧酸盐、和膦酸盐)、以及烷基琥珀酸、或烯基琥珀酸。另外的特定实例包括2,2',2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二琥珀酸(IDS)、乙二胺-N,N'-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二基双(膦酸(HEDP)、乙二胺四亚甲基四(膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五亚甲基(膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二琥珀酸(IDA)、N-(2-磺甲基)天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)乙二胺-N,N',N”-三乙酸(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、氨基三亚甲基(膦酸)(ATMP)、及其组合和盐。进一步的示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO09/102854和US 5977053中。

聚合物和分散剂

通常，洗涤剂组合物可以含有按重量计0-10％，如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如上文提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油脂清洁、和/或消泡性质。一些聚合物可以具有多于一种的以上提及的特性和/或多于一种的下文提及的基序。示例性聚合物包括聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。更多示例性聚合物包括聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)、乙氧基硫酸双季铵盐、苯乙烯/丙烯酸共聚物和香料胶囊。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575中。还考虑了以上提及的聚合物的盐。

本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。特别地，粉末洗涤剂可以包含分散剂。合适的水溶性有机材料包括均聚的或共聚的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。合适的分散剂例如描述于Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷,Marcel Dekker,Inc.[马塞尔德克尔公司]中。

然而，根据本发明，上述聚合物中的某些(即聚丙烯酸、经修饰的聚丙烯酸聚合物、经修饰的聚丙烯酸共聚物、马来酸-丙烯酸共聚物、羧甲基纤维素、纤维素胶、甲基纤维素和/或其组合)可以以低于目前可用的洗涤剂组合物中的水平包含在内，或甚至更优选地完全不包含。

织物调色剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，如染料或颜料，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与包含所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相反，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。合适的织物调色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且还可以包括颜料。合适的染料包括小分子染料和聚合物染料。合适的小分子染料包括选自由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成的小分子染料：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如如WO 2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276和EP1876226中所述(通过引用并入本文)。洗涤剂组合物优选地包含从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。合适的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO2007/087243中。

染料转移抑制剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮和N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮和聚乙烯基咪唑、或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂可以按该组合物的重量计以从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％的水平存在。

荧光增白剂

本发明的洗涤剂组合物将优选地还含有另外的组分，这些组分可以给正在清洁的制品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。当存在时，增亮剂的水平优选为约0.01％至约0.5％。在本发明的组合物中可以使用合适的用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。荧光增白剂的二氨基芪-磺酸衍生类型的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-GeigyAG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选的荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(Paramount Minerals and Chemicals)供应。天来宝CBS-X是4.4'-双-(磺基苯乙烯基)-联苯基二钠盐，也称作二苯乙烯基联苯基二磺酸二钠盐。适合的用于本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。

合适的荧光增亮剂水平包括从约0.01、从0.05、从约0.1或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5或甚至0.75wt％的较高水平。

污垢释放聚合物

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉和基于聚酯的织物)去除污垢，特别是从基于聚酯的织物去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子型或阴离子型对苯二甲酸的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如Powdered Detergents[粉末洗涤剂],Surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,第7章,MarcelDekker,Inc.[马塞尔德克尔公司]。另一种类型的污垢释放聚合物是包含核芯结构和附接至该核芯结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物。核芯结构可以包含聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如WO 2009/087523中详细所述的(通过引用并入本文)。而且，随机接枝共聚物是合适的污垢释放聚合物。合适的接枝共聚物更详细地描述于WO2007/138054、WO 2006/108856以及WO 2006/113314中(通过引用并入本文)。

抗再沉积剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。

流变改性剂

本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种流变改性剂、结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自由以下组成的组：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为液体洗涤剂组合物的水性液体基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如，如在EP 2169040中所示。

其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、黏合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂、以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹力剂。

另外的酶

洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种另外的酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、淀粉酶、糖酶、DNA酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶，例如漆酶、和/或过氧化物酶。

通常，选择的一种或多种酶的特性应当与所选择的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶成分或非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应当以有效量存在。

纤维素酶

术语“纤维素酶”意指水解纤维素材料的一种或多种(例如，几种)酶。可互换使用两个术语：具有纤维素酶活性的多肽和纤维素酶。纤维素酶可以选自由以下组成的组：属于GH5、GH44、GH45、EC 3.2.1.4、EC 3.2.1.21、EC 3.2.1.91和EC 3.2.1.172的纤维素酶。此类酶包括一种或多种内切葡聚糖酶(例如，EC 3.2.1.4)、一种或多种纤维二糖水解酶、一种或多种β-葡糖苷酶、或其组合。

适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的酶的单组分和混合物。还设想到了化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。纤维素酶可以例如是单组分内切-1,4-β-葡聚糖酶(又称为内切葡聚糖酶)、或单组分内切-1,4-β-葡聚糖酶的混合物。

DNA酶(脱氧核糖核酸酶)

术语“DNA酶”意指具有DNA酶活性的多肽，该多肽催化DNA主链中的磷酸二酯键的水解切割，从而降解DNA。

甘露聚糖酶

合适的甘露聚糖酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是来自芽孢杆菌属或腐质霉属(Humicola)的野生型，特别是来自粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)、地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、嗜碱芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)、或特异腐质霉(H.insolens)。合适的甘露聚糖酶描述于WO 1999/064619中。可商购的甘露聚糖酶是Mannaway(诺维信公司(Novozymes A/S))。

蛋白酶

合适的蛋白酶可以是任何来源的，但优选地是细菌或真菌来源的，任选地呈蛋白质工程化的或化学修饰的突变体的形式。蛋白酶可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是S1家族的(如胰蛋白酶)或S8家族的(如枯草杆菌蛋白酶(subtilisin))。金属蛋白酶可以例如是嗜热菌蛋白酶，例如来自M4家族的嗜热菌蛋白酶，或另一种金属蛋白酶，如来自M5、M7或M8家族的那些。

术语“枯草杆菌酶(subtilase)”是指根据Siezen等人,Protein Eng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和Siezen等人,Protein Sci.[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶的亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为六个亚类：枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶K家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。

尽管适于洗涤剂用途的蛋白酶可以从多种生物(包括如曲霉属(Aspergillus)等真菌)获得，但洗涤剂蛋白酶通常从细菌(特别是从芽孢杆菌属)获得。衍生枯草杆菌酶的芽孢杆菌属物种的实例包括迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalkalophilus)、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)。特别的枯草杆菌蛋白酶包括迟缓枯草杆菌蛋白酶(subtilisinlentus)、枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶BPN'、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168、以及例如蛋白酶PD138(描述于WO93/18140中)。其他有用的蛋白酶是例如在WO 01/16285和WO 02/16547中描述的那些。

胰蛋白酶样蛋白酶的实例包括镰孢属蛋白酶(在WO 94/25583和WO 2005/040372中描述)，以及衍生自纤维单胞菌(Cellumonas)的糜蛋白酶(在WO 2005/052161和WO 2005/052146中描述)。

金属蛋白酶的实例包括在WO 2007/044993中描述的中性金属蛋白酶(例如衍生自解淀粉芽孢杆菌的那些)，以及例如在WO 2015/158723和WO 2016/075078中描述的金属蛋白酶。

有用的蛋白酶的实例是在WO 89/06279、WO 92/19729、WO 96/34946、WO 98/20115、WO 98/20116、WO 99/11768、WO 01/44452、WO 03/006602、WO 2004/003186、WO2004/041979、WO 2007/006305、WO 2011/036263、WO 2014/207227、WO 2016/087617和WO2016/174234中描述的蛋白酶变体。

适合的可商购的蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：Duralase^TM、Durazym^TM、/> Ultra、/> Ultra、Primase^TM、 Ultra、 Ultra、/>Blaze/>100T、Blaze125T、Blaze/>150T、Blaze/>200T、/> Uno、/>In和/>Excel(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：Maxatase^TM、Maxacal^TM、/> Ox、/>OxP、FN2^TM、FN3^TM、FN4^exTM、/>Excellenz^TM P1000、Excellenz^TM P1250、Eraser^TM、/>P100、Purafect Prime、Preferenz P110^TM、Effectenz P1000^TM、Effectenz P1050^TM、/>Ox、Effectenz ^TM P2000、Purafast^TM、Opticlean^TM和/>(丹斯尼克公司(Danisco)/杜邦公司(DuPont))、BLAP(在US 5352604的图29中显示的序列)及其变体(汉高公司(Henkel AG))、以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。

脂肪酶和角质酶

合适的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热丝孢菌属，例如来自如EP 258068和EP305216中描述的疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉(Humicola lanuginosa))的脂肪酶；来自腐质霉属，例如特异腐质霉(H.insolens)(WO 96/13580)的角质酶；来自假单胞菌属(Pseudomonas)的菌株(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属(Burkholderia))，例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)(EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)(EP 331376)、假单胞菌属物种(P.sp.)菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)的脂肪酶；GDSL-型链霉菌属(Streptomyces)脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌(Geobacillusstearothermophilus)脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)(WO 12/137147)的脂肪酶。

其他实例是脂肪酶变体，例如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 07/87508以及WO 09/109500中描述的那些。

优选的商业脂肪酶产品包括Lipolase 100T/L、Lipex 100T/L、Lipex 105T、LipexEvity 100L、Lipex Evity 200L(全部来自诺维信公司)、L 100(杜邦公司)。

仍其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 05/56782)、来自CE 7家族的过水解酶(WO 09/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte Ltd)的商业化产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 10/100028)。

淀粉酶

合适的淀粉酶包括α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属，例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于GB 1,296,839中)获得的α-淀粉酶。

合适的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或与SEQ ID NO:3具有90％序列同一性的其变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO 97/43424中以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，如在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。

不同的合适的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或与SEQID NO:6具有90％序列同一性的其变体。SEQ ID NO:6的优选的变体是在位置181和182处具有缺失并且在位置193处具有取代的那些。

其他合适的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的衍生自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。

其他实例是淀粉酶变体，例如WO 2011/098531、WO 2013/001078和WO 2013/001087中所述的那些。

可商购的淀粉酶为Duramyl^TM、Termamyl^TM、Fungamyl^TM、Stainzyme ^TM、StainzymePlus^TM、Natalase^TM、Liquozyme X和BAN^TM Amplify；Amplify Prime；(来自诺维信公司)、以及Rapidase^TM、Purastar^TM/Effectenz^TM、Powerase、Preferenz S1000、Preferenz S100和Preferenz S110(来自杰能科国际有限公司(Genencor International Inc.)/杜邦公司)。

过氧化物酶/氧化酶

合适的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌、或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(Coprinus)，例如来自灰盖鬼伞(C.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602和WO 98/15257中描述的那些。可商购的过氧化物酶包括Guardzyme^TM(诺维信公司)。

适合的过氧化物酶优选是由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会(Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry andMolecular Biology)陈述的酶分类EC 1.11.1.7，或源自其中的表现出过氧化物酶活性的任何片段构成的过氧化物酶。

适合的过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及表现出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶进行分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯离子形成次氯酸盐。卤代过氧化物酶可以是氯过氧化物酶。优选地，卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在优选方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯离子来源组合。

已从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如，煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属(Alternaria)、弯孢属(Curvularia)(例如，疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属(Drechslera)、细基格孢属(Ulocladium)以及葡萄孢属(Botrytis)。

还已从细菌如假单胞菌属(例如吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。

卤代过氧化物酶可衍生自弯孢属物种，特别是疣枝弯孢或不等弯孢，如WO 95/27046中所述的不等弯孢CBS 102.42；或如描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或衍生自如描述于WO 01/79459中的哈特乐比内脐蠕孢(Drechslerahartlebii)、如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie、或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属物种。

适合的氧化酶特别地包括由酶分类EC 1.10.3.2所构成的任何漆酶或源自其的表现出漆酶活性的任何片段、或表现出类似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(EC1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。

优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以衍生自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。

来自真菌的合适的实例包括可衍生自以下的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(Neurospora)(例如，粗糙脉孢菌(N.crassa))，柄孢壳菌属(Podospora)，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属(Lentinus)，侧耳属(Pleurotus)，栓菌属(Trametes)(例如，长绒毛栓菌(T.villosa)和变色栓菌(T.versicolor))，丝核菌属(Rhizoctonia)(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(Coprinopsis)(例如，灰盖拟鬼伞(C.cinerea)、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及褶纹鬼伞(C.plicatilis))，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(Panaeolus)(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(Myceliophthora)(例如，嗜热毁丝霉(M.thermophila))，柱顶孢霉属(Schytalidium)(例如，嗜热柱顶孢霉(S.thermophilum))，多孔菌属(Polyporus)(例如，非褶菌目多孔菌(P.pinsitus))，射脉菌属(Phlebia)(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(Coriolus)(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。

来自细菌的合适的实例包括可衍生自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。

优选的是衍生自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是衍生自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或来源于嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。

洗涤剂产品的配制

本发明的洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如条，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊剂，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体。

袋可以被配置为单一室或多室。它可以具有合适的用于容持组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不使组合物从袋中释放出来。该袋由水溶性膜制成，它包含了一个内部体积。可以将所述内部体积分成袋的室。优选的膜是聚合物材料，优选地形成膜或薄片的聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物是经选择的聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，聚合物在膜例如PVA中的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，这些共混组合物包含可水解降解并且水溶性聚合物共混物，如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考号M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol有限责任公司(MonoSol LLC)销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。袋可以包含固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在组成上可以与含有固体的室不同：US 2009/0011970 A1。

可以由水可溶的袋中的室或以片剂的不同层来将洗涤剂成分彼此物理分开。因此，可以避免组分间的不良的储存相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起所选择的组分的延迟溶解。

非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地含有按重量计至少20％并且最多达95％的水，如多达约70％的水、多达约65％的水、多达约55％的水、多达约45％的水、多达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚、以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。水性液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。

洗衣皂条

本发明的脂氧合酶可以被添加至洗衣皂条中并用于手洗衣物、织物、和/或纺织品。术语洗衣皂条包括洗衣条、皂条、组合条(combo bar)、合成洗涤剂条、以及洗涤剂条。条的类型的通常区别在于他们含有的表面活性剂的类型，并且术语洗衣皂条包括含有来自脂肪酸的皂和/或合成皂的那些。洗衣皂条具有在室温下为固体而非液体、凝胶、或粉末的物理形式。术语固体被定义为不随时间显著变化的物理形式，即如果固体物体(例如洗衣皂条)被放置在容器里，该固体物体不会为了填充其被放置的容器而发生改变。该条是固体时典型地是条的形式但也可以是其他的固体形状诸如圆形或椭圆。

该洗衣皂条可以包含一个或多个另外的酶、蛋白酶抑制剂如肽醛类(或次硫酸盐加合物或半缩醛加合物)、硼酸、硼酸盐、硼砂和/或苯基硼酸衍生物如4-甲酰基苯基硼酸、一个或多个皂或合成的表面活性剂、多元醇如甘油、pH控制化合物如脂肪酸、柠檬酸、乙酸和/或甲酸、和/或一价阳离子和有机阴离子的盐，其中该一价阳离子可以是例如Na⁺、K⁺或NH₄ ⁺并且该有机阴离子可以是例如甲酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐或乳酸盐，这样使得一价阳离子和有机阴离子的盐可以是例如甲酸钠。

洗衣皂条还可以包含复合剂像EDTA和HEDP、香料和/或不同类型的填料、表面活性剂例如阴离子合成表面活性剂、助洗剂、聚合的污垢释放剂、洗涤剂螯合剂、稳定剂、填料、染料、着色剂、染料转移抑制剂、烷氧基化的聚碳酸酯、抑泡剂、结构剂、黏合剂、浸出剂、漂白活化剂、粘土去污剂、抗再沉积剂、聚合分散剂、增亮剂、织物柔软剂、香料和/或本领域已知的其他化合物。

洗衣皂条可以在常规的洗衣皂条制造设备中进行加工，如但不限制于混合器、压条机例如双级真空压条机、挤出机、切割机、标识压模机(logo-stamper)、冷却隧道以及包装机。本发明不局限于通过任何单一方法制备洗衣皂条。可以在过程的不同阶段向皂中添加本发明的预混料。例如，可以制备含有皂、脂氧合酶、任选地一种或多种另外的酶、蛋白酶抑制剂以及一价阳离子和有机阴离子的盐的预混料，然后将该混合物压条。脂氧合酶和任选的另外的酶可以同时例如以液体形式添加，作为蛋白酶抑制剂。除了混合步骤和压条步骤以外，该过程还可以进一步包括研磨、挤出、切割、压模、冷却和/或包装的步骤。

本发明的实施例

在以下实施例中进一步总结了本发明。实施例表示为E1、E2等。

E1.洗涤液中具有脂氧合酶活性的多肽用于漂白或去除纺织品上的污渍的用途，其中该洗涤液包含约0g洗涤剂/L洗涤液至约4g洗涤剂/L洗涤液，任选地一种或多种多不饱和脂肪酸，例如亚油酸，和任选地一种或多种另外的酶。

E2.根据实施例1所述的用途，其中该洗涤液包含约0.1-3.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-3.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-2.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-2.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-1.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-1.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-2.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-2.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-3.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-3.5g洗涤剂/L洗涤液。

E3.根据实施例1-2中任一项所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽是大豆脂氧合酶。

E4.根据实施例1-3中任一项所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽是大豆脂氧合酶1(LOX-1)。

E5.根据实施例1-4中任一项所述的用途，其中该脂氧合酶与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

E6.根据实施例1-5中任一项所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽与至少一种另外的酶组合使用，其中该至少一种另外的酶选自由以下组成的组：蛋白酶、淀粉酶、脱氧核糖核酸酶、脂肪酶、木葡聚糖酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶。

E7.根据实施例6所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽与脂肪酶组合使用。

E8.根据实施例6和7中任一项所述的用途，其中该脂肪酶与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

E9.一种洗涤剂组合物，其包含脂氧合酶和选自由鼠李糖脂和槐糖脂组成的组的生物表面活性剂，任选地一种或多种多不饱和脂肪酸和任选地至少一种另外的酶。

E10.根据实施例9所述的洗涤剂组合物，其中该脂氧合酶与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

E11.根据实施例9和10中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该至少一种另外的酶选自由以下组成的组：蛋白酶、淀粉酶、脱氧核糖核酸酶、脂肪酶、木葡聚糖酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶。

E12.根据实施例9至11中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂组合物包含脂肪酶。

E13.根据所述的洗涤剂组合物，其中该脂肪酶与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

E14.根据实施例9至13中任一项所述的洗涤剂组合物用于通过使污渍与洗涤液中的脂氧合酶接触来漂白或从表面去除污渍的用途，其中该洗涤液包含约0.1g洗涤剂/L洗涤液至约4g洗涤剂/L洗涤液，任选地一种或多种多不饱和脂肪酸，例如亚油酸，和任选地一种或多种另外的酶。

E 15.根据实施例14所述的用途，其中该洗涤液包含约0.1-3.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-3.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-2.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-2.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-1.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-1.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-2.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-2.5g洗涤剂/L洗涤液，如约0.2-3.0g洗涤剂/L洗涤液，如约0.1-3.5g洗涤剂/L洗涤液。

E16.一种用于洗涤物品的方法，该方法包括以下步骤：

a)将物品暴露于洗涤液中，该洗涤液包含脂氧合酶、约0g洗涤剂/L洗涤液至约4g洗涤剂/L洗涤液、任选地一种或多种多不饱和脂肪酸和任选地至少一种另外的酶，

b)完成至少一个洗涤周期；

c)任选地漂洗该物品。

E17.根据实施例1和9中任一项所述的用途、根据实施例9所述的洗涤剂组合物或根据实施例16所述的方法，其中该多不饱和脂肪酸是游离脂肪酸或脂质的酰基基团，其中该脂质可以是甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯、磷脂或鞘脂。

E18.在实施例17的优选实施例中，该游离脂肪酸或酰基基团是亚油酸。

洗涤剂组合物

下文提及的洗涤剂组分的范围通常可用于衣物洗涤。

表1：液体洗涤剂组合物

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表2：单位剂量组合物

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表3：粉末洗涤剂组合物：

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表面活性剂成分可以获得自巴斯夫公司(BASF)，路德维希港，德国(Lutensol(R))；壳牌化学公司(Shell Chemicals)，伦敦，英国；斯泰潘公司(Stepan)，诺思菲尔德，III，美国；亨斯曼公司(Huntsman)，盐湖城，犹他州，美国；科莱恩特公司，祖尔茨巴赫，德国(Praepagen(R))。

三聚磷酸钠可以获得自罗地亚公司(Rhodia)，巴黎，法国。沸石可以获得自工业沸石(英国)有限公司(Industrial Zeolite(UK)Ltd)，格雷士，艾塞克斯，英国。柠檬酸和柠檬酸钠可以获得自永本兹劳尔公司(Jungbunzlauer)，巴塞尔，瑞士。NOBS是壬酰基羟苯磺酸钠，由伊士曼公司(Eastman)，贝茨维尔，阿肯色州，美国提供。

TAED是四乙酰乙二胺，在科莱恩特有限公司(Clariant GmbH)，祖尔茨巴赫，德国的Peractive(R)品牌下提供。

碳酸钠和碳酸氢钠可以获得自索尔维公司，布鲁塞尔，比利时。

聚丙烯酸酯、聚丙烯酸酯/马来酸酯共聚物可以获得自巴斯夫公司，路德维希港，德国。

Repel-O-Tex(R)可以获得自罗地亚公司，巴黎，法国。

Texcare(R)可以获得科莱恩特公司，祖尔茨巴赫，德国。过碳酸钠和碳酸钠可以获得自索尔维公司，休斯顿，德克萨斯州，美国。

乙二胺-N,N’-二琥珀酸的Na盐，(S,S)异构体(EDDS)由联合奥泰公司(Octel)，埃尔斯米尔港，英国提供。

羟基乙醇二膦酸盐(HEDP)由美国陶氏化学公司(Dow Chemical)，米德兰，密歇根州，美国提供。

酶Savinase(R)、Savinase(R)Ultra、Stainzyme(R)Plus、Lipex(R)、Lipolex(R)、Lipoclean(R)、Celluclean(R)、Carezyme(R)、Natalase(R)、Stainzyme(R)、Stainzyme(R)Plus、Termamyl(R)、Termamyl(R)ultra、和Mannaway(R)可以获得自诺维信公司，巴格斯瓦德，丹麦。

酶Purafect(R)、FN3、FN4和Optisize可以获得自杰能科国际公司，帕洛阿尔托，加利福尼亚州，美国。

直接紫9和99可以获得自巴斯夫公司(BASF DE)，路德维希港，德国。溶剂紫13可以获得自宁波立兴化工有限公司(Ningbo Lixing Chemical Co.,Ltd.)，宁波，浙江，中国。增亮剂可以获得自汽巴精化有限公司(Ciba Specialty Chemicals)，巴塞尔，瑞士。

除非另外指明，否则所有百分比和比率都是按重量计算。除非另外指明，否则所有百分比和比率都是基于总组合物的活性浓度计算。

应当理解的是贯穿本说明书给出的每一最大数值限度包括每一较低的数值限度，如同此类较低数值限度在此被明确写出。贯穿本说明书给出的每一最小数值限度将包括每一较高的数值限度，如同此类较高数值限度本文被明确写出。本说明书中所给出的每个数值范围将包括落入在这样更宽泛数值范围内的每一狭小的范围，如同此类狭小的数值范围都在本文被明确写出。

实验

材料

污渍

直径为2cm的向日葵油辣椒红亚油酸污渍：

在200mL烧杯中称出辣椒红(80mg，TCI公司)、亚油酸(100mg，西格玛公司(Sigma)，>99％)和向日葵籽油(500mg，西格玛公司)。在通风橱中添加丙酮(31.5mL)并混合。将30μL该混合物施加到纺织品(2cm圆，100％ Equest机织棉，预洗涤)并干燥10min。将污渍在冰箱中避光储存直至使用。

此外，已将以下可商购的污渍用于衣物洗涤测定中：

·纺织品样品C-04叶绿素植物油、C-S-15Bill蓝莓汁和C-S-88咖喱获得自BV测试材料中心(Center for Testmaterials BV)，邮箱120，3133KT，弗拉尔丁恩，荷兰。

·纺织品样品WE5ECWKC咖啡、WE5FSMWKC法国挤压式芥末、WE5RWWKC红酒和WE5TPWKC蕃茄糊获得自沃里克伊奎斯特公司(Warwick Equest)。

酶

·脂氧合酶(LOX)是具有SEQ ID NO:1的多肽。大豆脂氧合酶也可从西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)(L-7395)获得，并具有CAS号：9029-60-1

·脂肪酶是具有SEQ ID NO:2的多肽

·Medley SW和Medley Delicate/>是由诺维信公司提供的可商购的酶共混物。Medley SW/>包含淀粉酶、甘露聚糖酶、脂肪酶、内切葡聚糖酶和果胶裂解酶。Medley Delicate/>包含淀粉酶、甘露聚糖酶、内切葡聚糖酶和果胶裂解酶。Medley SW/>是颗粒状产品，而Medley Delicate/>是液体产品，它们在实验部分中可分别缩写为MD-T和MD-L。

用于评估洗涤性能的强度测量

洗涤性能被测量为亮度，表达为当用白光照亮时从样品反射的光的强度。当样品带有污渍时，反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此，反射光的强度可以用来测量洗涤性能。

用专业平板扫描仪(Kodak iQsmart，柯达(Kodak))进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。

为了从扫描的图像中提取光强度的值，将来自图像的24-位像素值转化为红色、绿色以及蓝色(RGB)的值。通过将RGB值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(Int)：

测定II：脂肪酶活性的测试

脂肪酶活性可以通过使用基于对硝基苯基戊酸酯的水解的比色法来测量，并且可以在400nM处监测pNP的形成

酶测定

测定I：脂氧合酶活性的测试

脂氧合酶活性可以在25℃下通过监测氢过氧化物的形成用分光光度法测定。对于标准分析，将10微升酶添加到含有980微升25mM磷酸钠缓冲液(pH 7.0)和10微升底物溶液(用0.2％(v/v)Tween20分散的10mM亚油酸)的1ml石英比色皿中。典型地将酶充分稀释以确保在第一分钟内最多10％的添加底物的转化。追踪234nm处的吸光度，从曲线的线性部分估计转化速率。假设顺-反-缀合的(过氧化)羟基脂肪酸具有23,000M^-1cm^-1的分子消光系数。

商业洗涤剂的推荐剂量

下表提供了各种可商购的液体洗涤剂的推荐剂量的综述。在本披露的上下文中，推荐剂量也称为“全剂量”或“100％剂量”。

表4：生产商推荐的洗涤剂剂量。

实验中使用的商业洗涤剂

在洗衣实验中使用商业洗涤剂Ecover非生物浓缩物。

Ecover非生物浓缩洗衣液
	水
脂肪醇乙氧基化物C12-18
	月桂基硫酸钠
油酸钾
	变性醇
柠檬酸钠
	乙二胺二琥珀酸三钠
聚对苯二甲酸丙二酯
	香料
柠檬酸
	甘油
柠檬烯
	芳樟醇

表5：Ecover非生物浓缩洗涤剂中的组分

对于手动餐具洗涤(HDW)，使用以下两种洗涤剂：

表6：HDW Ecover Zero商业洗涤剂

表7：HDW Vel商业洗涤剂

实验中使用的模式洗涤剂

在洗衣实验中使用了以下四种模式洗涤剂：

表8：模式1洗涤剂

化合物	化合物的含量(％w/w)
		Na-LAS	12.0
AEOS，SLES	4.0
		皂(KPO)	3.0
AEO	12.0
		乙醇	3.1
MPG	2.0
		TEA	2.0
柠檬酸钠	3.9
		DTMPA	1.5
苯氧基乙醇	0.5
		H₂O，离子交换	56.0

表9：模式2洗涤剂

化合物	化合物的含量(％w/w)
		SLS	10.0
APG	8.0
		可可皂	4.0
GLDA	1.5
		甘油	5.0
EtOH	5.0
		H₂O，离子交换	66.5

表10：模式3洗涤剂

表11：模式4洗涤剂对于自动餐具洗涤(ADW)，使用以下模式洗涤剂

表12：ADW模式洗涤剂

洗涤测定

瓶洗涤方法描述：

使用Miele洗衣机中的瓶洗涤方法来检测酶的性能。在Miele洗衣机(SofttronicW1935 Ecoline)中，添加具有包括一种或多种酶的25mL洗涤剂溶液的瓶(60mL，DSE PP70X35 Aseptisk，材料编号：216-2620，来自VWR)和四种有污渍的纺织品(向日葵-辣椒红-亚油酸污渍，直径2cm)。洗衣机中包括2kg压载物(茶巾，棉)。在30℃在25L水中在液体洗涤剂(Ecover非生物液)或水中洗涤25min。洗涤后，用自来水漂洗有污渍的纺织品两次(3L)并在干燥箱(伊莱克斯公司(Electrolux)，Intuition，EDD2400)中在室温干燥过夜。在分光光度计(Macbeth Color-Eye 7000Remissions)上在460nm处测量强度。

表13：瓶洗涤方法的测试条件

Terg-O-tometer(TOM)洗涤测定

Terg-O-tometer(TOM)是一种中等规模模式洗涤系统，它可以应用于同时测试16种不同的洗涤条件。TOM基本上是大型温控水浴，其中浸入了多达16个开口金属烧杯。每个烧杯构成一个小的顶装式洗衣机并且在实验期间，每个烧杯将含有特定洗涤剂/酶系统的溶液并且在弄脏的和未弄脏的织物上测试其性能。通过旋转搅拌臂获得机械应力，该旋转搅拌臂搅拌在每个烧杯内的液体。因为TOM烧杯没有盖子，所以能够在TOM实验期间收回样品并且在洗涤期间在线分析信息。

在表14中给出的实验条件下，在欧洲和北美液体洗涤剂模式1、模式2、模式3和欧洲粉末洗涤剂模式4中测试脂氧合酶的Terg-O-tometer(TOM)洗涤性能。模式编号后面的数字(例如，模式3-50中的50)表示全剂量的百分比。对于洗涤剂模式3，全剂量将对应于2.46g/L，因此模式3-50表明测试中应用了50％的全洗涤剂剂量。在洗涤液中指出了浓度。

表14：TOM洗涤测定的实验条件。

如下所述测试脂氧合酶的洗涤性能。

通过添加CaCl₂、MgCl₂和NAHCO₃来调节水硬度至6°dH(Ca²⁺:Mg²⁺:HCO₃ ^-＝2:1:4.5)或15°dH(Ca²⁺:Mg²⁺:HCO₃ ^-＝4:1:7.5)，添加所需量的洗涤剂并在桶内调节温度至30℃来制备洗涤溶液。在磁力搅拌过程中将洗涤剂溶解10分钟(洗涤溶液在制备后30至60min内使用)。将TOM中的水浴中的温度和旋转分别设定为30℃和120rpm。当根据设定(公差是+/-0.5℃)调节温度时，将1000mL的洗涤溶液添加到TOM烧杯中。

将布样(每种类型2个)和酶添加到烧杯中并洗涤20或50分钟。将布样在冷自来水中漂洗5分钟。将布样在干燥橱中的滤纸之间分类并干燥，而不加热过夜。

将洗涤性能测量为所洗涤的纺织品的颜色的亮度，以反射值(REM)或强度单位表示。使用Macbeth 7000Color Eye分光光度计进行反射测量。测量每个干燥的布样。由于存在来自背景的干扰风险，在测量反射期间将布样置于两层织物的顶部。在460nm处测量反射。不包括UV滤光片。计算布样的反射的平均结果。

实例1：洗涤剂浓度对脂氧合酶性能的影响

在各种洗涤剂浓度下测试添加和不添加脂肪酶的脂氧合酶的性能(瓶洗涤测定)。结果清楚地表明，与全剂量洗涤剂(100％)相比，脂氧合酶在水和稀释洗涤剂(5％、10％、20％)中具有改善的漂白或去除益处，其中脂氧合酶具有另外清洁效果。脂氧合酶与脂肪酶的组合可产生另外的或协同作用。

表15：脂氧合酶以及脂氧合酶与脂肪酶的组合的漂白效果。

LOX是SEQ ID NO:1并且脂肪酶是SEQ ID NO:2

实例2：在欧洲条件(6°dH和15°dH，TOM洗涤)下，脂氧合酶在含有亚油酸和MedleySW 506T的粉末洗涤剂中的性能

通过在模式洗涤剂4中以75％的全剂量在6°dH和15°dH下向Medley SW 506T中添加脂氧合酶来测试粉末洗涤剂中脂氧合酶对各种污渍的性能(表16和19)以及对再沉积的影响(表18和21)。测量性能的标准偏差也包括在表中。结果清楚地显示了脂氧合酶在降低的洗涤剂水平(0.36g/L)下的作用。

表16具有亚油酸的模式洗涤剂4-75(6°dH，强度)的性能

A：叶绿素植物油，B：Bill蓝莓汁，C：咖喱，D：含辣椒红的向日葵油

E：法国挤压式芥末，F：红酒，G：蕃茄糊。

LOX是SEQ ID NO:1。

表17具有亚油酸的模式洗涤剂4-75(6°dH，强度)的性能的标准偏差A：叶绿素植物油，B：Bill蓝莓汁，C：咖喱，D：含辣椒红的向日葵油

E：法国挤压式芥末，F：红酒，G：蕃茄糊。

LOX是SEQ ID NO:1。

表18在具有亚油酸的模式洗涤剂4-75(6°dH，强度)中洗涤后脂氧合酶对再沉积物的漂白。法国挤压式芥末、蕃茄糊和红酒污渍的白色部分的强度和标准偏差。

LOX是SEQ ID NO:1。

表19具有亚油酸的模式洗涤剂4-75(15°dH，强度)中脂氧合酶的性能A：叶绿素植物油，B：Bill蓝莓汁，C：咖喱，D：含辣椒红的向日葵油

E：咖啡，F：法国挤压式芥末，G：红酒，H：蕃茄糊。

LOX是SEQ ID NO:1。

表20具有亚油酸的模式洗涤剂4-75(15°dH，强度)的性能的标准偏差A：叶绿素植物油，B：Bill蓝莓汁，C：咖喱，D：含辣椒红的向日葵油，E：咖啡，F：法国挤压式芥末，G：红酒，H：蕃茄糊。

LOX是SEQ ID NO:1。

表21在15°dH下在具有亚油酸的模式洗涤剂4-75(15°dH，强度)中洗涤后，脂氧合酶对布样的白色部分上再沉积物(在法国挤压式芥末上的污渍周围)的漂白。LOX是SEQ IDNO:1。

表18和21显示，使用脂氧合酶防止源自纺织品的白色部分上溶解污渍的材料的再沉积。

实例3：在欧洲条件(15°dH，TOM洗涤)下，含和不含脂肪酶的脂氧合酶在具有亚油酸和Medley Delicate 300L的液体洗涤剂中的性能

在存在和不存在脂肪酶的情况下，测试液体模式洗涤剂2和3中脂氧合酶对各种污渍的性能。表22中的性能结果的标准偏差列于表23中。通过比较模式洗涤剂2中的脂氧合酶性能，可以明显看出，脂氧合酶在100％洗涤剂浓度下没有或具有非常有限的效果，但在降低的洗涤剂水平(10％)下具有非常好的性能。

表22在EU条件(15°dH)下，在具有亚油酸和MD-L的液体洗涤剂中含有或不含脂肪酶的脂氧合酶。LOX是SEQ ID NO:1，脂肪酶是SEQ ID NO:2。

A：叶绿素植物油，B：咖啡，C：咖喱，D：法国挤压式芥末，E：果汁，

F：含辣椒红的向日葵油，G：红酒，H：蕃茄糊

表22中提供的数据的标准偏差如下：

表23在EU条件(15°dH)下，在具有亚油酸和Medley Delicate 300L的液体洗涤剂中含有或不含脂肪酶的脂氧合酶的标准偏差

F：含辣椒红的向日葵油，G：红酒，H：蕃茄糊

以下提供了对污渍材料再沉积的影响(表24)：

/>

表24在EU条件(15°dH)下，在具有亚油酸和Medley Delicate 300L的液体洗涤剂中脂氧合酶对布样的白色部分上再沉积物(在法国挤压式芥末上的污渍周围)的漂白

表24显示，使用脂氧合酶防止源自纺织品的白色部分上溶解污渍的材料的再沉积。

实例4：在北美条件(6°dH，TOM洗涤)下，含和不含脂肪酶的脂氧合酶在具有亚油酸和Medley Delicate 300L的液体洗涤剂中的性能

在存在和不存在脂肪酶的情况下，测试液体模式洗涤剂1(35％的全剂量)和3(50％的全剂量)中脂氧合酶对各种污渍的污渍去除的性能。结果示于表25中，标准偏差列于表26中。

/>

表25在NA条件(6°dH)下，在具有亚油酸(LA)和Medley Delicate 300L(MD-L)的液体洗涤剂中含有或不含脂肪酶的脂氧合酶

F：含辣椒红的向日葵油，G：红酒，H：蕃茄糊

LOX是SEQ ID NO:1，脂肪酶是SEQ ID NO:2

/>

表26在NA条件(6°dH)下，在具有亚油酸和Medley Delicate 300L的液体洗涤剂中含有或不含脂肪酶的脂氧合酶的标准偏差

F：含辣椒红的向日葵油，G：红酒，H：蕃茄糊

表27在NA条件(6°dH)下，在具有亚油酸和Medley Delicate 300L的液体洗涤剂液体洗涤剂中脂氧合酶对布样的白色部分上再沉积物(在法国挤压式芥末上的污渍周围)的漂白

LOX是SEQ ID NO:1，脂肪酶是SEQ ID NO:2

结果显示脂氧合酶对污渍去除以及再沉积的作用(表27)。

实例5：脂氧合酶在自动餐具洗涤(ADW)和手动餐具洗涤(HDW)洗涤剂(瓶洗涤)中的性能

在下表28中列出的实验条件下测试脂氧合酶在ADW和HDW中的性能。

表28：瓶洗涤中ADW和HDW的实验条件

脂氧合酶是SEQ ID NO:1

评估了脂氧合酶在ADW粉末洗涤剂以及液体HDW洗涤剂中的作用，数据在表29中。

表29粉末ADW洗涤剂(21°dH)中的脂氧合酶(SEQ ID NO:1)

*在黑暗中干燥3天后测量ADW模式洗涤剂-50的数据，而在黑暗中干燥1天后测量ADW模式洗涤剂-100的数据。

LOX是SEQ ID NO:1

表30液体HDW洗涤剂(15°dH)中的脂氧合酶(SEQ ID NO:1)

*在黑暗中干燥3天后测量HDW Ecover-50和HDW Vel-50的数据，而在黑暗中干燥1天后测量HDW Ecover-100和HDW Ecover-100的数据。

数据显示，向ADW洗涤剂(商业和模式洗涤剂)中添加脂氧合酶对除去(漂白)辣椒红污渍具有有益效果。

实例6：在瓶洗涤中包含槐糖脂和鼠李糖脂的洗涤剂中脂氧合酶的性能

在表31中列出的以下洗涤条件下，评估了包含槐糖脂和鼠李糖脂的洗涤剂中脂氧合酶的作用。洗涤剂的组成列于表32中。结果列于表33中。

表31：瓶洗涤中脂氧合酶的实验条件。

/>

表32：含有槐糖脂和鼠李糖脂的洗涤剂

表33液体衣物洗涤剂(15°dH)中的脂氧合酶

数据显示，向包含槐糖脂和鼠李糖脂的洗涤剂中添加脂氧合酶对除去(漂白)辣椒红污渍具有有益效果。

序列表

<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）

<120> 脂氧合酶的用途

<130> 15207-EP-EPA

<160> 2

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 839

<212> PRT

<213> 橹豆

<400> 1

Met Phe Ser Ala Gly His Lys Ile Lys Gly Thr Val Val Leu Met Pro

1 5 10 15

Lys Asn Glu Leu Glu Val Asn Pro Asp Gly Ser Ala Val Asp Asn Leu

20 25 30

Asn Ala Phe Leu Gly Arg Ser Val Ser Leu Gln Leu Ile Ser Ala Thr

35 40 45

Lys Ala Asp Ala His Gly Lys Gly Lys Val Gly Lys Asp Thr Phe Leu

50 55 60

Glu Gly Ile Asn Thr Ser Leu Pro Thr Leu Gly Ala Gly Glu Ser Ala

65 70 75 80

Phe Asn Ile His Phe Glu Trp Asp Gly Ser Met Gly Ile Pro Gly Ala

85 90 95

Phe Tyr Ile Lys Asn Tyr Met Gln Val Glu Phe Phe Leu Lys Ser Leu

100 105 110

Thr Leu Glu Ala Ile Ser Asn Gln Gly Thr Ile Arg Phe Val Cys Asn

115 120 125

Ser Trp Val Tyr Asn Thr Lys Leu Tyr Lys Ser Val Arg Ile Phe Phe

130 135 140

Ala Asn His Thr Tyr Val Pro Ser Glu Thr Pro Ala Pro Leu Val Ser

145 150 155 160

Tyr Arg Glu Glu Glu Leu Lys Ser Leu Arg Gly Asn Gly Thr Gly Glu

165 170 175

Arg Lys Glu Tyr Asp Arg Ile Tyr Asp Tyr Asp Val Tyr Asn Asp Leu

180 185 190

Gly Asn Pro Asp Lys Ser Glu Lys Leu Ala Arg Pro Val Leu Gly Gly

195 200 205

Ser Ser Thr Phe Pro Tyr Pro Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Pro

210 215 220

Thr Val Thr Asp Pro Asn Thr Glu Lys Gln Gly Glu Val Phe Tyr Val

225 230 235 240

Pro Arg Asp Glu Asn Leu Gly His Leu Lys Ser Lys Asp Ala Leu Glu

245 250 255

Ile Gly Thr Lys Ser Leu Ser Gln Ile Val Gln Pro Ala Phe Glu Ser

260 265 270

Ala Phe Asp Leu Lys Ser Thr Pro Ile Glu Phe His Ser Phe Gln Asp

275 280 285

Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Gly Ile Lys Leu Pro Arg Asp Val Ile

290 295 300

Ser Thr Ile Ile Pro Leu Pro Val Ile Lys Glu Leu Tyr Arg Thr Asp

305 310 315 320

Gly Gln His Ile Leu Lys Phe Pro Gln Pro His Val Val Gln Val Ser

325 330 335

Gln Ser Ala Trp Met Thr Asp Glu Glu Phe Ala Arg Glu Met Ile Ala

340 345 350

Gly Val Asn Pro Cys Val Ile Arg Gly Leu Glu Glu Phe Pro Pro Lys

355 360 365

Ser Asn Leu Asp Pro Ala Ile Tyr Gly Asp Gln Ser Ser Lys Ile Thr

370 375 380

Ala Asp Ser Leu Asp Leu Asp Gly Tyr Thr Met Asp Glu Ala Leu Gly

385 390 395 400

Ser Arg Arg Leu Phe Met Leu Asp Tyr His Asp Ile Phe Met Pro Tyr

405 410 415

Val Arg Gln Ile Asn Gln Leu Asn Ser Ala Lys Thr Tyr Ala Thr Arg

420 425 430

Thr Ile Leu Phe Leu Arg Glu Asp Gly Thr Leu Lys Pro Val Ala Ile

435 440 445

Glu Leu Ser Leu Pro His Ser Ala Gly Asp Leu Ser Ala Ala Val Ser

450 455 460

Gln Val Val Leu Pro Ala Lys Glu Gly Val Glu Ser Thr Ile Trp Leu

465 470 475 480

Leu Ala Lys Ala Tyr Val Ile Val Asn Asp Ser Cys Tyr His Gln Leu

485 490 495

Met Ser His Trp Leu Asn Thr His Ala Ala Met Glu Pro Phe Val Ile

500 505 510

Ala Thr His Arg His Leu Ser Val Leu His Pro Ile Tyr Lys Leu Leu

515 520 525

Thr Pro His Tyr Arg Asn Asn Met Asn Ile Asn Ala Leu Ala Arg Gln

530 535 540

Ser Leu Ile Asn Ala Asn Gly Ile Ile Glu Thr Thr Phe Leu Pro Ser

545 550 555 560

Lys Tyr Ser Val Glu Met Ser Ser Ala Val Tyr Lys Asn Trp Val Phe

565 570 575

Thr Asp Gln Ala Leu Pro Ala Asp Leu Ile Lys Arg Gly Val Ala Ile

580 585 590

Lys Asp Pro Ser Thr Pro His Gly Val Arg Leu Leu Ile Glu Asp Tyr

595 600 605

Pro Tyr Ala Ala Asp Gly Leu Glu Ile Trp Ala Ala Ile Lys Thr Trp

610 615 620

Val Gln Glu Tyr Val Pro Leu Tyr Tyr Ala Arg Asp Asp Asp Val Lys

625 630 635 640

Asn Asp Ser Glu Leu Gln His Trp Trp Lys Glu Ala Val Glu Lys Gly

645 650 655

His Gly Asp Leu Lys Asp Lys Pro Trp Trp Pro Lys Leu Gln Thr Leu

660 665 670

Glu Asp Leu Val Glu Val Cys Leu Ile Ile Ile Trp Ile Ala Ser Ala

675 680 685

Leu His Ala Ala Val Asn Phe Gly Gln Tyr Pro Tyr Gly Gly Leu Ile

690 695 700

Met Asn Arg Pro Thr Ala Ser Arg Arg Leu Leu Pro Glu Lys Gly Thr

705 710 715 720

Pro Glu Tyr Glu Glu Met Ile Asn Asn His Glu Lys Ala Tyr Leu Arg

725 730 735

Thr Ile Thr Ser Lys Leu Pro Thr Leu Ile Ser Leu Ser Val Ile Glu

740 745 750

Ile Leu Ser Thr His Ala Ser Asp Glu Val Tyr Leu Gly Gln Arg Asp

755 760 765

Asn Pro His Trp Thr Ser Asp Ser Lys Ala Leu Gln Ala Phe Gln Lys

770 775 780

Phe Gly Asn Lys Leu Lys Glu Ile Glu Glu Lys Leu Val Arg Arg Asn

785 790 795 800

Asn Asp Pro Ser Leu Gln Gly Asn Arg Leu Gly Pro Val Gln Leu Pro

805 810 815

Tyr Thr Leu Leu Tyr Pro Ser Ser Glu Glu Gly Leu Thr Phe Arg Gly

820 825 830

Ile Pro Asn Ser Ile Ser Ile

835

<210> 2

<211> 269

<212> PRT

<213> 疏棉状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）

<400> 2

Glu Val Ser Gln Asp Leu Phe Asn Gln Phe Asn Leu Phe Ala Gln Tyr

1 5 10 15

Ser Ala Ala Ala Tyr Cys Gly Lys Asn Asn Asp Ala Pro Ala Gly Thr

20 25 30

Asn Ile Thr Cys Thr Gly Asn Ala Cys Pro Glu Val Glu Lys Ala Asp

35 40 45

Ala Thr Phe Leu Tyr Ser Phe Glu Asp Ser Gly Val Gly Asp Val Thr

50 55 60

Gly Phe Leu Ala Leu Asp Asn Thr Asn Lys Leu Ile Val Leu Ser Phe

65 70 75 80

Arg Gly Ser Arg Ser Ile Glu Asn Trp Ile Gly Asn Leu Asn Phe Asp

85 90 95

Leu Lys Glu Ile Asn Asp Ile Cys Ser Gly Cys Arg Gly His Asp Gly

100 105 110

Phe Thr Ser Ser Trp Arg Ser Val Ala Asp Thr Leu Arg Gln Lys Val

115 120 125

Glu Asp Ala Val Arg Glu His Pro Asp Tyr Arg Val Val Phe Thr Gly

130 135 140

His Ser Leu Gly Gly Ala Leu Ala Thr Val Ala Gly Ala Asp Leu Arg

145 150 155 160

Gly Asn Gly Tyr Asp Ile Asp Val Phe Ser Tyr Gly Ala Pro Arg Val

165 170 175

Gly Asn Arg Ala Phe Ala Glu Phe Leu Thr Val Gln Thr Gly Gly Thr

180 185 190

Leu Tyr Arg Ile Thr His Thr Asn Asp Ile Val Pro Arg Leu Pro Pro

195 200 205

Arg Glu Phe Gly Tyr Ser His Ser Ser Pro Glu Tyr Trp Ile Lys Ser

210 215 220

Gly Thr Leu Val Pro Val Arg Arg Arg Asp Ile Val Lys Ile Glu Gly

225 230 235 240

Ile Asp Ala Thr Gly Gly Asn Asn Gln Pro Asn Ile Pro Asp Ile Pro

245 250 255

Ala His Leu Trp Tyr Phe Gly Leu Ile Gly Thr Cys Leu

260 265

Claims

1.洗涤液中具有脂氧合酶活性的多肽用于漂白或去除纺织品上的污渍的用途，其中该洗涤液包含约0g洗涤剂/L洗涤液至约4g洗涤剂/L洗涤液，任选地一种或多种多不饱和脂肪酸，例如亚油酸，和任选地一种或多种另外的酶。

2.根据权利要求1所述的用途，其中该洗涤液包含约0.1-3.5g/L洗涤剂/L洗涤液。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽是大豆脂氧合酶。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽是大豆脂氧合酶1(LOX-1)。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽与SEQ IDNO:1的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

6.根据权利要求1所述的用途，其中该具有脂氧合酶活性的多肽与至少一种另外的酶组合使用，其中该至少一种另外的酶选自由以下组成的组：蛋白酶、淀粉酶、脱氧核糖核酸酶、脂肪酶、木葡聚糖酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶内切葡聚糖酶、黄原胶裂解酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶。

7.根据权利要求6所述的用途，其中具有脂氧合酶活性的多肽与脂肪酶组合使用。

8.根据权利要求6和7中任一项所述的用途，其中该脂肪酶与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

9.一种洗涤剂组合物，其包含脂氧合酶和一种或多种生物表面活性剂，其中该生物表面活性剂选自由鼠李糖脂、槐糖脂和基于植物的生物表面活性剂如SLS、APG、AEO和SLES组成的组，任选地一种或多种多不饱和脂肪酸和任选地至少一种另外的酶。

10.根据权利要求9所述的洗涤剂组合物，其中该脂氧合酶与SEQ ID NO:1的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

11.根据权利要求9和10中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该至少一种另外的酶选自由以下组成的组：蛋白酶、淀粉酶、脱氧核糖核酸酶、脂肪酶、木葡聚糖酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶和甘露聚糖酶。

12.根据权利要求9至11中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该脂肪酶与SEQ ID NO:2的多肽具有至少60％序列同一性，例如至少65％序列同一性、至少70％序列同一性、至少75％序列同一性、至少80％序列同一性、至少85％序列同一性、至少90％序列同一性、至少91％序列同一性、至少92％序列同一性、至少93％序列同一性、至少94％序列同一性、至少95％序列同一性、至少96％序列同一性、至少97％序列同一性、至少98％序列同一性、至少99％序列同一性、或甚至100％序列同一性。

13.根据权利要求9至12中任一项所述的洗涤剂组合物用于漂白或去除表面上的污渍的用途，该用途包括使该污渍在洗涤条件下与该洗涤剂组合物接触。

14.一种用于漂白纺织品上污渍的方法，该方法包括使该污渍与根据权利要求9-12所述的洗涤剂组合物接触。