CN116515681B - 一株具有降尿酸能力的植物乳杆菌f4-7及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物领域，具体涉及一株具有降尿酸能力的植物乳杆菌F4‑7、包含其的菌剂、组合物及其应用。本发明提供的植物乳杆菌F4‑7是从健康婴儿粪便中筛选得到的，其具有较强的降解肌苷和鸟苷的能力，能够有效降低血清尿酸水平，从而起到缓解和治疗高尿酸血症的作用，对于预防、缓解和/或治疗高尿酸血症和/或痛风及其并发症具有较好的开发利用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域，具体涉及一株具有降尿酸能力的植物乳杆菌F4-7，包含其的菌剂、组合物，及其应用。
背景技术
高尿酸血症(HUA)是指由于机体内嘌呤代谢紊乱，导致机体内尿酸生成增加或排出减少，使得血液中的尿酸浓度长时间超出正常范围而引起的一种代谢性疾病；当血尿酸超过其在血液或组织液中的饱和度时可形成尿酸钠结晶，该结晶可在关节、肾脏等部位沉积从而造成损害。目前，有研究发现，高尿酸血症与痛风、心血管疾病、肾脏病变、代谢综合征等多种疾病的发生存在密切关联，临床常见的有痛风性关节炎、痛风性肾病等。目前，全球范围内正面临着高尿酸血症和痛风患病率持续上升的趋势，且高尿酸血症与慢性肾脏病、高血压、肥胖、2型糖尿病和动脉粥样硬化性心脏病等疾病的发生发展密切相关。
控制血尿酸水平是预防痛风等并发症的关键因素，也是健康管理与风险评估的重要环节。血尿酸的控制，一方面需要在饮食上限制高嘌呤、高果糖饮食，另一方面可以通过药物治疗。然而，至今为止，由于疾病及其并发症的发病机制尚未完全阐明，新药的研发也存在一定的局限性和迟滞性。
乳酸菌是公认的食品安全微生物，在预防和治疗代谢性疾病中发挥着重要作用，如改善肠道功能、降血脂、降胆固醇、抗动脉粥样硬化、降血糖、预防和治疗骨质疏松等；而痛风与糖尿病、高血脂症等同属代谢调控类疾病，且密切相关，因此，乳酸菌有用于缓解高尿酸血症和痛风的潜力。
植物乳杆菌是乳酸菌的一种，常存在于发酵的蔬菜和果汁中，多数是从植物中分离得到，因此命名为植物乳杆菌。
因此，筛选具有降尿酸能力的植物乳杆菌，作为辅助治疗高尿酸血症的手段，具有巨大的应用前景。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
发明目的
本发明的目的在于提供一种具有降尿酸能力、可缓解高尿酸血症的植物乳杆菌F4-7，包含其的菌剂、组合物，及其应用。
解决方案
为实现本发明目的，本发明采用如下技术方案。
第一方面，本发明提供了一株具有降尿酸能力的植物乳杆菌F4-7，所述植物乳杆菌F4-7的分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，已于2023年1月6日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏单位地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏编号为CGMCC No.26414。
本发明的植物乳杆菌F4-7是从健康婴儿的粪便样本中分离获得的，经体外实验证实，该菌株具有较强的降解肌苷和鸟苷的能力，而肌苷、鸟苷为嘌呤代谢的中间产物，在人体内最终代谢为尿酸，肌苷、鸟苷含量上升，会导致尿酸生成增多，尿酸含量长期在高水平状态将导致高尿酸血症，鉴于此，本发明菌株表现出治疗高尿酸血症的潜能；进一步将本发明菌株施用于小鼠以观察该菌株的降尿酸功效，结果显示：本发明的植物乳杆菌F4-7能够显著降低小鼠的血清尿酸水平，起到缓解高尿酸血症的作用。
此外，经检测，植物乳杆菌F4-7还具有以下特性：
1)具有一定的耐酸性；
2)具有一定的耐胆盐性，且相对比较稳定；
3)具有较好的耐热性；
4)对克拉霉素、头孢曲松、氨苄西林、卡那霉素4种抗生素表现为敏感；对红霉素表现为中度敏感；对四环素、头孢唑林、阿莫西林、青霉素、苯唑西林、新霉素、庆大霉素、链霉素、恩诺沙星、依诺沙星、诺氟沙星、多菌粘素B共12种抗生素表现出耐受；
5)对氯仿具有强疏水性，对甲苯具有中疏水性，对二甲苯具有弱疏水性；
6)对大肠杆菌的抑菌圈直径为(16.17±0.43)mm；对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为(15.18±0.37)mm。
第二方面，本发明提供了一种菌剂，所述菌剂的活性成分包括如上述第一方面所述的植物乳杆菌F4-7。
在具体的实施方案中，所述菌剂为固体制剂或液体制剂；优选地，所述固体菌剂为采用冷冻干燥法制备而成的粉剂。
第三方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含如上述第一方面所述的植物乳杆菌F4-7，或者包含如上述第二方面所述的菌剂。
在优选的实施方案中，所述组合物为药物组合物，所述药物组合物包含如上述第一方面所述的植物乳杆菌F4-7或者如上述第二方面所述的菌剂，以及药学上可接受的载体。
在可行的实施方案中，所述药学上可接受的载体包括但不限于：填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。
优选地，所述药物组合物为口服剂型。
进一步优选地，所述口服剂型选自：溶液剂、悬浮液剂、乳剂、粉末剂、锭剂、丸剂、糖浆剂、口含锭剂、片剂以及胶囊剂。
第四方面，本发明提供了如上述第一方面所述的植物乳杆菌F4-7、如上述第二方面所述的菌剂或者如上述第三方面所述的组合物在制备用于以下用途的产品中的应用：
1)降尿酸；
2)预防、缓解和/或治疗高尿酸血症、痛风及其并发症。
鉴于本发明菌株的降解肌苷、鸟苷的能力以及降尿酸活性，本发明的菌株及其衍生产品能够用于制备具有降尿酸功能或具有抗痛风功能的产品；并且，进一步地，其可以单独使用或与其他具有降尿酸功能或具有抗痛风功能的产品联合应用；这些产品可制备为微生物制剂或药物。
在可行的实施方案中，所述并发症为痛风性关节炎或痛风性肾病。
在可行的实施方案中，所述产品为药品。
有益效果
本发明提供的植物乳杆菌F4-7是从健康婴儿的粪便样本中分离得到的；所述植物乳杆菌F4-7具有较强的降解肌苷和鸟苷的能力，能够有效降低血清尿酸水平，从而起到缓解和治疗高尿酸血症的作用，可用于预防、缓解和/或治疗高尿酸血症和/或痛风及其并发症。
此外，所述植物乳杆菌F4-7还具有一定的耐酸性、耐胆盐性，较好的耐热性，对克拉霉素、头孢曲松等4种抗生素敏感，对致病性大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌具有较好的抑制作用，因此有望被开发并应用于药品行业。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1是肌苷和鸟苷的高效液相色谱(HPLC)色谱图；
图2是通过高效液相色谱法建立的测定肌苷(图2A)和鸟苷(图2B)含量的标准曲线；其中，横坐标为肌苷或鸟苷的标准品浓度，纵坐标为HPLC色谱图上对应于肌苷或鸟苷的峰面积；
图3显示了菌株F4-7的形态学结果；其中，图3A为肉眼观察菌落形态的图片，图3B为其电子显微镜照片；
图4为实施例4所测定的菌株F4-7的生长曲线；
图5为实施例4所测定的菌株F4-7的耐酸性实验结果；
图6为实施例4所测定的菌株F4-7的耐胆盐性实验结果；
图7为实施例4所测定的菌株F4-7的耐热性实验结果；
图8为实施例4所测定的菌株F4-7的疏水性实验结果；
图9为实施例5所记载的菌株F4-7(图9A)和植物乳杆菌P6(图9B)的降解核苷的HPLC色谱图；
图10显示了实施例6所测定的菌株F4-7对高尿酸血症小鼠的降尿酸效应。
本发明的植物乳杆菌F4-7分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，保藏日期：2023年1月6日；保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏编号为CGMCCNO.26414。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
下述实施例中，除了用作对照的植物乳杆菌P6(其分类命名为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，已于2020年4月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.19748)外，其它所用原料均可商购获得；例如：
MRS固体培养基购自北京陆桥技术股份有限公司，货号为CM188；
MRS肉汤培养基购自北京陆桥技术股份有限公司，货号为CM187；
营养琼脂购自北京陆桥技术股份有限公司，货号为CM107；
肌苷、鸟苷标准品溶液购自Sigma，货号分别为I4125、G6752。
实施例1：菌株分离
选取新鲜婴儿粪便样品，用无菌PBS缓冲溶液进行梯度稀释，选择合适的稀释浓度，将其涂布于含有1％CaCO3的MRS固体培养基上，在37℃厌氧条件下培养48h，挑取具有明显透明圈的、呈白色或乳白色的单菌落进行革兰氏染色并镜检，选择杆状且为革兰氏阳性菌的菌株，从众多菌株中选择长势较好的十株菌株，分别命名为F4-1～F4-10；将所选菌株于37℃厌氧条件下进行富集培养，富集培养18～24h；然后，将各培养菌液与灭过菌的30％甘油按照1:1的体积比进行混合，后于-80℃的冰箱保存，待用。
实施例2：具有降解核苷能力的菌株的筛选
一、肌苷、鸟苷标准曲线的建立
通过高效液相色谱(HPLC)法，分别建立测量肌苷和鸟苷含量的标准曲线。肌苷和鸟苷的HPLC色谱图如图1所示。
取已知浓度的肌苷、鸟苷标准品溶液，分别对其进行梯度稀释，制备浓度分别为2.82mmol/L、1.41mmol/L、0.705mmol/L、0.3525mmol/L、0.17625mmol/L的标准品溶液，然后，吸取0.9mL各浓度的标准品溶液，分别与0.1mL、0.1mol/L高氯酸水溶液混合后，取20μL用于进样分析，基于外标法进行测定。
色谱条件：
高效液相色谱仪：Waters e2695；高效液相色谱检测器：2998PDA检测器；
高效液相色谱柱：Cosmosil 5C18-AR-II(4.6×250mm)保留时间：40min；
色谱柱温度：40℃；检测波长：254nm
肌苷和鸟苷的标准曲线分别如图2A和2B所示；其中，横坐标显示肌苷、鸟苷标准品的浓度，纵坐标显示其相应的峰面积。
根据图2A和2B的标准曲线，分别得出如下回归方程公式：
Y肌苷＝1.04×107·C肌苷+116000；R2＝0.999976；R＝0.999988
Y鸟苷＝1.29×107·C鸟苷+312000；R2＝0.999783；R＝0.999892
二、待测菌株的准备
在无菌条件下，将上述于甘油中保存的冷冻菌株F4-1～F4-10解冻后，接种于MRS肉汤培养基中，37℃厌氧条件下培养24h，然后将菌株接种于新的MRS肉汤培养基中，在37℃条件下，培养18h进行活化，连续活化三代。将活化后的菌株以3％接种量传代2次，然后将菌株培养至稳定期后取出备用。
三、测定各菌株的肌苷、鸟苷降解率
取2mL上述菌株培养液置于无菌离心管内，在4℃、6000r/min条件下离心10min，弃去上清液，然后用无菌PBS磷酸盐缓冲液对菌株洗涤三次，收集菌体；向菌体中加入1mL、2.82mmol/L的肌苷-鸟苷溶液，混匀；同时，在一个空的离心管中加入同等体积、同等浓度的肌苷-鸟苷溶液，作为对照组；然后，将菌体与肌苷-鸟苷溶液的混合物、单独的肌苷-鸟苷溶液分别在37℃、厌氧条件下振荡孵育(200r/min)1h；而后，在4℃、8000r/min条件下离心10min，吸取0.9mL上清液并加入0.1mL、0.1mol/L高氯酸水溶液，混匀，终止反应；反应溶液经0.22μm滤膜过滤后，分别加入到液相检测瓶中进行液相定量检测(样品进样量为20μL)，得到各菌株孵育物及对照组的HPLC色谱图。
根据HPLC色谱图上对应于肌苷、鸟苷的峰面积，将其带入上述由图2A和2B的标准曲线得出的回归方程公式，即得出各孵育物中所剩肌苷、鸟苷的浓度及含量；再结合肌苷、鸟苷的初始浓度及含量，分别计算肌苷、鸟苷的降解率，其计算公式如下：
降解率(％)＝菌株孵育组的鸟苷或肌苷浓度/对照组的鸟苷或肌苷浓度×100％
经上述检测和计算，得出菌株F4-1～F4-10的鸟苷降解率及肌苷降解率，见以下表1。
表1
由表1可知，在所筛选的菌株F4-1～F4-10中，菌株F4-7在体外降解核苷的能力最强，其对肌苷、鸟苷降解率均在90％以上，远远高于其它菌株。
实施例3：菌株F4-7的形态学及16S rRNA鉴定
本实施例中，对上述筛选出来的、具有最强降解核苷能力的菌株F4-7分别进行形态学及16S rRNA鉴定。
形态学鉴定
肉眼观察培养板上的菌落形态，结果如图3A所示；对菌株进行革兰氏染色，并在电子显微镜下观察，结果如图3B所示。
由图3A和3B可见，菌株F4-7的菌落直径约为4mm，为乳白色圆形菌落，表面光滑，凸起，边缘整齐；并且，革兰氏染色结果呈蓝紫色，表明其为革兰氏阳性菌，此外，菌株形态为杆状。
16S rRNA鉴定
对菌株F4-7进行DNA提取，然后，通过16S rRNA鉴定；具体地，用通用引物27F/1492R上机测序，并将测序结果进行拼接；将拼接后的序列在NCBI上进行BLAST比对，获得该菌株的鉴定结果，见以下表2。
表2
鉴定结果显示：菌株F4-7与参考物种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的16SrRNA的相似度为100％，由此可以判断，菌株F4-7为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。
实施例4：植物乳杆菌F4-7的益生特性测定
4.1生长曲线测定
细菌的生长分为四个时期，分别为迟缓期、对数期、稳定期、衰退期，了解菌株的生长特性，可以选择在合适时期培养菌株。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7的生长曲线。
将培养好的F4-7菌液活化三代，接种于MRS肉汤培养基中，置于37℃培养箱中，在厌氧条件下进行培养，分别于0、2、4、6、8、10、12、16、20、24、28、32、36、40以及48h，测定各时间点的菌株培养物的吸光度OD600；其结果如图4所示。
由图4可知，菌株F4-7的迟缓期较短，接种后很快进入对数期，在培养8h之后进入稳定期，培养10小时左右即可达到较高的菌液浓度，随后在培养40h后开始进入衰退期。
4.2耐酸性测定
益生菌进入人体后必须通过人肠胃才能发挥作用，所以菌株的耐酸能力尤其重要。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7的耐酸性。
将活化后菌株F4-7用无菌PBS洗涤后分别加入pH 1.5、pH 2.0、pH 3.0的无菌MRS肉汤培养基中，37℃厌氧培养，分别于0h、1h、3h取样进行梯度稀释，涂布于MRS固体培养基平板中，37℃、厌氧条件下培养48h后计数，按以下公式计算菌株在各酸性条件下的存活率：
存活率(％)＝(Nt/N0)×100％
注：Nt为1h、3h的菌落数；N0为0h的菌落数。
测定结果如图5所示；由图5可知，植物乳杆菌F4-7在pH 1.5条件下不能存活；在pH2.0、1h的条件下，其存活率在17％左右；在pH 3.0、1h和pH 3.0、3h的条件下，其存活率分别为77％、28％；由此可见，菌株F4-7具有较好的耐酸性。
4.3耐胆盐性测定
胆盐具有抑菌的功效，因此适应人体内小肠的胆盐，是益生菌发挥益生功能的重要前提。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7的耐胆盐性。
将活化后菌株F4-7用无菌PBS洗涤后，重悬于含0.3％的胆盐的无菌MRS肉汤培养基中，在37℃、厌氧条件下培养，分别于0h、1h、3h取样进行梯度稀释，涂布于MRS固体培养基平板中，37℃、厌氧条件下培养48h后计数，按以下公式计算菌株在各胆盐条件下的存活率：
存活率(％)＝(Nt/N0)×100％
注：Nt为1h、3h的菌落数；N0为0h的菌落数。
测定结果如图6所示；由图6可知，在0.3％胆盐1h的条件下，菌株F4-7的存活率在32％左右，而在生长3h的条件下，其存活率在39％左右，由此可见，菌株F4-7的耐胆盐性较好且相对比较稳定。
4.4对抗生素的敏感性测定
抗生素的过量使用会使致病菌菌株的耐药性增强，破坏人体肠道平衡，因此测定益生菌的抗生素敏感性尤为重要。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7的耐药性。
将培养至第三代的菌液稀释至浓度为107CFU/mL，取100μL稀释后的菌液，用涂布棒均匀涂布在MRS固体培养基中，静置20min后，取药敏纸片及空白纸片等距离放置于MRS固体培养基中，轻轻压实，确保不会滑动。在37℃、厌氧条件下培养18-24h后，利用游标卡尺测量其直径(mm)，结果以平均值±平均值表示。
测试了菌株对八类共17种抗生素的敏感性，分别为：
(1)头孢素类：头孢曲松、头孢唑林；(2)四环素类：红霉素、四环素；(3)青霉素类：苯唑西林、青霉素；(4)β-内酰胺酶抑制复合物：氨苄西林、阿莫西林；(5)大环内酯类：克拉霉素；(6)氨基糖苷类：庆大霉素、卡那霉素、链霉素、新霉素；(7)氟诺喹酮类：诺氟沙星、依诺沙星、恩诺沙星；(8)多肽类：多菌粘素B。
测试结果见以下表3。
表3.耐药性测试结果
S：susceptible敏感；I：intermediate中度敏感；R：resistance耐受。
由表3可知，植物乳杆菌F4-7对克拉霉素、头孢曲松、氨苄西林、卡那霉素4种抗生素表现为敏感；对红霉素表现为中度敏感；对四环素、头孢唑林、阿莫西林、青霉素、苯唑西林、新霉素、庆大霉素、链霉素、恩诺沙星、依诺沙星、诺氟沙星、多菌粘素B共12种抗生素表现出耐受。
4.5耐热性测定
了解益生菌的耐热能力，可以根据不同环境选取合适的益生菌进行生产及应用。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7的耐热性。
将活化后的菌液过夜培养12h后，以2％接种量接种于无菌MRS肉汤中，然后分别在37℃、50℃、60℃、70℃条件下恒温水浴20min，水浴结束后将其在37℃、厌氧条件下以180r/min的频率振荡培养8h；然后，以37℃菌液的OD600为对照，测定菌液在不同温度水浴后的存活率，公式如下：
测定结果如图7所示；由图7可知，植物乳杆菌F4-7在50℃的存活率在90％以上；随着温度的上升，F4-7的存活率下降，在60℃时存活率在13％左右，当温度达到70℃其存活率仍在10％以上，表明其有较好的耐热性。
4.6疏水性测定
疏水性是指细菌在水中呈现的不稳定状态会引起菌体重新分布及排列变化，疏水性判定标准为：71％～100％为强疏水性，36％～70％为中疏水性，低于35％为弱疏水性。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7对甲苯、二甲苯、氯仿的疏水性。
将培养至第三代的菌株F4-7接种于MRS液体培养基中培养18～24h后，将菌液在4000r/min、4℃条件下离心10min；弃去上清液，将沉淀用无菌PBS溶液洗涤1～2次；调整菌悬液的浓度使其OD600值为0.6，作为A0；将调整后的菌悬液分别与等体积的氯仿、甲苯、二甲苯混合，用漩涡仪混匀90s，并于室温下静止1h；取分层后液体的水相，测量其OD600值，作为A1；上述OD600测量均以PBS为空白对照。根据下列公式计算菌株表面疏水率：
菌体表面疏水率(％)＝(1-A1/A0)×100％
测定结果如图8所示；由图8可知，植物乳杆菌F4-7对二甲苯的疏水率最低，在30％左右，为弱疏水性；对甲苯的疏水率在50％左右，为中疏水性；而对氯仿的疏水率最高，接近80％，为强疏水性。
4.7抑菌能力测定
抑菌能力是益生菌的重要评价指标。本实施例中，通过以下方法，测定了菌株F4-7对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。
以大肠杆菌ATCC 25922、金黄色葡萄球菌ATCC 25923为指示菌，将活化后的指示菌涂布于营养琼脂上，采用琼脂扩散方法进行抑菌活性的初步测定。用无菌镊子将牛津杯置于平板中，并倒入无菌营养琼脂固定牛津杯，待其凝固后取出牛津杯，并分别吸取100μL植物乳杆菌F4-7的上清液，加入孔中，将平板放入4℃冰箱中扩散3h左右，置于37℃下恒温培养24h，观察抑菌圈直径，并记录大小，结果以平均值±标准差表示。
菌株F4-7对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌能力结果见以下表4。
表4.抑菌能力结果
| 指示菌名称 | 抑菌圈直径(mm) |
| 大肠杆菌ATCC 25922 | 16.17±0.43 |
| 金黄色葡萄球菌ATCC 25923 | 15.18±0.37 |
。
从表4中可以看出，植物乳杆菌F4-7对大肠杆菌的抑菌圈直径为16.17±0.43mm；对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为15.18±0.37mm；由此可见，植物乳杆菌F4-7对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有较好的抑菌能力，其中，对大肠杆菌的抑制效果略好于金黄色葡萄球菌。
实施例5：植物乳杆菌F4-7与已知植物乳杆菌P6的体外降核苷能力对比
根据实施例2所建立的肌苷、鸟苷标准曲线，并按照实施例2中记载的测定和计算菌株的肌苷、鸟苷降解率的方法，检测了已知植物乳杆菌P6在体外降解肌苷、鸟苷的能力，并将其与实施例2所测定的菌株F4-7的肌苷、鸟苷降解率进行对比。
作为结果，本发明菌株F4-7与已知植物乳杆菌P6的降解核苷的HPLC色谱图分别如图9A、9B所示；经计算，两者的肌苷、鸟苷降解率见以下表5。
表5.体外降核苷能力结果
由图9A、9B及表5可知，本发明的植物乳杆菌F4-7在体外降解肌苷、鸟苷的能力要远远高于植物乳杆菌P6的降解肌苷、鸟苷的能力，这些结果表明：本发明的植物乳杆菌F4-7具有非常强的降解肌苷、鸟苷的能力，表现出治疗高尿酸血症的潜能。
实施例6：植物乳杆菌F4-7对高尿酸血症小鼠的治疗效应
本实施例中，采用昆明系雄性4周龄小鼠(购自中生北动(北京)科技发展有限公司)，通过用果糖和氧嗪酸钾使小鼠尿酸水平升高，以建立高尿酸血症小鼠模型(参考WANGH,et al.Lactobacillus brevis DM9218 ameliorates fructose-inducedhyperuricemia through inosine degradation and manipulation of intestinaldysbiosis.Nutrition.2019；62:63-73.)；并且，通过向该高尿酸血症小鼠模型施用合适量的本发明植物乳杆菌F4-7，然后检测其血清尿酸水平，来评价本发明植物乳杆菌F4-7对于高尿酸血症的治疗效应。
实验分组
本实验分为两组：(1)高尿酸血症模型组，和(2)植物乳杆菌F4-7处理组；每组12只小鼠。
实验方案
对于高尿酸血症模型组和植物乳杆菌F4-7处理组，均通过给小鼠口服果糖溶液和腹腔注射氧嗪酸钾溶液的方式，使小鼠尿酸水平升高，从而建立高尿酸血症小鼠模型；之后，植物乳杆菌F4-7处理组小鼠灌胃植物乳杆菌F4-7的菌液，而模型组小鼠则灌胃等量的生理盐水。
具体方案如下：
①高尿酸血症模型组(简称“高尿酸血症组”)：小鼠适应性喂养7天后，正常饮食+自由饮用15％果糖水(W/V)+腹腔注射0.2mL 200mg/kg/day氧嗪酸钾-0.5％CMC-Na溶液，腹腔注射上述氧嗪酸钾溶液3h后，灌胃0.2ml生理盐水；持续28天；
②植物乳杆菌F4-7处理组(简称“植物乳杆菌F4-7组”)：小鼠适应性喂养7天后，正常饮食+自由饮用15％果糖水(W/V)+腹腔注射0.2mL 200mg/kg/day氧嗪酸钾-0.5％CMC-Na溶液，腹腔注射上述氧嗪酸钾溶液3h后，灌胃0.2mL(1×109CFU/mL)的F4-7菌液；持续28天。
然后，取两组小鼠的血清，通过全自动生化仪(AU5800，美国贝克曼社)检测小鼠血清尿酸水平。
结果如图10所示；由图10可知，与生理盐水处理组相比，植物乳杆菌F4-7处理组小鼠的血清尿酸水平显著降低(P值<0.01)；该结果表明，本发明植物乳杆菌F4-7能够显著降低小鼠的血清尿酸水平，起到缓解高尿酸血症的作用。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一株具有降尿酸能力的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)F4-7，其特征在于：所述植物乳杆菌已于2023年1月6日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.26414。
2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂的活性成分包括如权利要求1所述的植物乳杆菌F4-7。
3.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1所述的植物乳杆菌F4-7，或者包含如权利要求2所述的菌剂。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为口服剂型。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述口服剂型选自：溶液剂、乳剂、粉末剂、锭剂、丸剂、片剂以及胶囊剂。
7.根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述口服剂型为悬浮液剂或糖浆剂。
8.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述锭剂为口含锭剂。
9.根据权利要求1所述的植物乳杆菌F4-7在制备用于以下用途的药物中的应用：
1)降尿酸；
2)预防和/或治疗高尿酸血症。
10.根据权利要求2所述的菌剂在制备用于以下用途的药物中的应用：
1)降尿酸；
2)预防和/或治疗高尿酸血症。
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