CN112195123B - 一种植物乳杆菌及其制剂和应用 - Google Patents
一种植物乳杆菌及其制剂和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112195123B CN112195123B CN202011081780.9A CN202011081780A CN112195123B CN 112195123 B CN112195123 B CN 112195123B CN 202011081780 A CN202011081780 A CN 202011081780A CN 112195123 B CN112195123 B CN 112195123B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- oligosaccharide
- cholesterol
- cgmcc
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 112
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 112
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 112
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 78
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 39
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 31
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 30
- FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N fructooligosaccharide Chemical group OC[C@H]1O[C@@](CO)(OC[C@@]2(OC[C@@]3(OC[C@@]4(OC[C@@]5(OC[C@@]6(OC[C@@]7(OC[C@@]8(OC[C@@]9(OC[C@@]%10(OC[C@@]%11(O[C@H]%12O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]%12O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%11O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]%10O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]9O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]8O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]7O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]6O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]5O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]4O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]3O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]2O)[C@@H](O)[C@@H]1O FTSSQIKWUOOEGC-RULYVFMPSA-N 0.000 claims description 19
- 150000003271 galactooligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 18
- 229940107187 fructooligosaccharide Drugs 0.000 claims description 18
- 235000021255 galacto-oligosaccharides Nutrition 0.000 claims description 18
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 8
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 claims description 6
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 claims description 6
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 claims description 6
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 claims description 6
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 claims description 6
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 5
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 5
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 5
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 claims description 5
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 claims description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 5
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 5
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 20
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 abstract description 15
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 15
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 10
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 abstract description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 abstract description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 12
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 6
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 3
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 229960004261 cefotaxime Drugs 0.000 description 3
- AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M cefotaxime sodium Chemical compound [Na+].N([C@@H]1C(N2C(=C(COC(C)=O)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 AZZMGZXNTDTSME-JUZDKLSSSA-M 0.000 description 3
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 description 3
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 3
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 3
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 3
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 3
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 3
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 2
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 239000012880 LB liquid culture medium Substances 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 1
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 1
- 201000010538 Lactose Intolerance Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L calcium carbonate Substances [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000007910 chewable tablet Substances 0.000 description 1
- 229940097572 chloromycetin Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N d-xylitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 1
- 239000010699 lard oil Substances 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229940054441 o-phthalaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N phthalaldehyde Chemical compound O=CC1=CC=CC=C1C=O ZWLUXSQADUDCSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000021108 sauerkraut Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Abstract
本发明涉及了一种新的保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌ZK001，该菌株具有良好的益生性能，不仅耐酸耐胆盐，而且具有抗生素耐药和抑菌性，可应用于抑制细菌生长的抑菌剂、配合抗生素用药、降低降低胆固醇和甘油三酯。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域，尤其涉及一株具有降低胆固醇和甘油三酯能力且能利用低聚糖的植物乳杆菌ZK001及其制剂和应用。
背景技术
肠道是盘曲在人体腹部的消化道。大部分的消化作用与近乎全部的食物、营养物质的吸收都在肠道中进行，对于人体健康至关重要。在人体肠道内栖息着约百万亿个细菌，被称为肠道菌群。乳酸菌是人体胃肠道的益生菌群，代谢可产生有机酸、抗菌肽、双乙酰、细菌素等多种天然抑菌活性物质，具有维持肠道正常菌群平衡，增强免疫力等保健功能，所以常作为益生菌添加到食品中以增进人体健康。
益生菌大多是乳酸菌中的乳杆菌和双歧杆菌，其中植物乳杆菌与人类的生活密切相关，被广泛用于乳制品、泡菜以及肉制品中，它能通过胃肠道并定植于肠道发挥益生作用，因此，也越来越多地被添加到人用益生菌粉、益生菌咀嚼片等产品中。
植物乳杆菌是一种革兰氏阳性菌，最适生长温度为30～35℃，是典型的兼性厌氧菌。菌体呈短杆状，不产芽孢，在MRS固体培养基中呈乳白色不透明，圆形，光滑的菌落。植物乳杆菌为同型发酵乳酸菌，能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等，在发酵过程中只产生乳酸，有很强的的发酵碳水化合物的能力，有较强的耐酸耐胆盐能力。
高胆固醇血症也称高低密度脂蛋白胆固醇血症，是导致动脉粥样硬化性心血管病的首要危险因素。当前针对预防心血管疾病，提倡遵守低脂或低饱和脂肪食物的膳食原则。最新研究显示，当前国内已成功通过动物实验和人群临床试验证实嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌等乳酸菌有显著降低胆固醇的效果。这也充分表明，具有降低胆固醇的乳酸菌在食品和药品领域具有广泛的应用前景。
低聚糖难以被人体肠道吸收利用，但是可以作为营养物质被微生物选择性利用，且能够提高益生菌的新陈代谢，促进益生菌的生长繁殖。然而，由于益生菌具有极强的菌株特异性，不同种益生菌甚至同种不同株益生菌对低聚糖的利用情况也不尽相同，因此，通过研究植物乳杆菌对低聚糖的利用情况可以研制出营养价值更高的调节肠道的益生菌产品。
发明内容
为此，需要提供一种耐酸耐胆盐可适用人体胃肠道，而且具有抗生物耐药性和抑菌性，降低甘油三酯及胆固醇的植物乳杆菌。
为达到本发明第一方面的目的，本发明提供了保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，的植物乳杆菌ZK001；保藏日期为：2020年05月15日，分类命名：植物乳杆菌；拉丁名称：Lactobacillusplantarum。
植物乳杆菌ZK001处理2h后在0.3％胆盐浓度时存活率可达到83％，在0.5％胆盐浓度时存活率可达到76％，说明该菌株具有较强的耐酸和耐胆盐能力，可适用于人的胃肠道环境。
进一步的，所述植物乳杆菌具有利用低聚糖进行生长繁殖的能力。低聚糖可以促进植物乳杆菌ZK001的繁殖,该菌株可有效利用人体肠道内难以吸收的各种低聚糖进行增殖。
进一步的，所述低聚糖为低聚果糖和/或低聚半乳糖。
其中优选为：
低聚果糖3％、低聚半乳糖0％
或
低聚半乳糖2％、低聚果糖0％
或
低聚果糖3％、低聚半乳糖7％
可根据饮食及身体情况配合低聚果糖、低聚半乳糖使用，例如针对乳糖不耐受或减肥等情况，针对性的选择所配合的低聚糖。
为达到本发明的第二方面的目的，提供了保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌在抑制细菌生长方面的应用，所述细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌和单核增生李斯特菌。
为达到本发明第三方面的目的，提供了一种抑菌剂，所述抑菌剂中含有本发明第一方面所述植物乳杆菌作为其有效成分。
进一步地，所述抑菌剂中还包括低聚糖。
为达到本发明第四方面的目的，提供了保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌在抗生素联合用药上的应用，所述抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、万古霉素和多粘菌素B。
大部分微生物菌株会对抗生素敏感，因此在使用抗生素时，不能起到其原有作用。而本发明的植物乳杆菌ZK001，对氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、头孢噻肟、头孢曲松、四环素、克林霉素、青霉素G、氯霉素敏感，不适用于使用以上抗生素的病患。而对庆大霉素、环丙沙星、万古霉素和多粘菌素B具有耐药性，可加入仅使用以上3种抗生物病患的食品，发挥其固有的抑菌、降低胆固醇和甘油三酯的功能。
为达到本发明第五方面的目的，提供了一种适用抗生素治疗病人的食品，所述食品中含本发明第一方面所述植物乳杆菌作为其有效成分。
进一步地，所述食品中还包括低聚糖。
为达到本发明第六方面的目的，提供了保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌在降低胆固醇和甘油三酯方面的应用。
为达到本发明第七方面的目的，提供了一种降低胆固醇和甘油三酯的制剂，所述制剂中含本发明第一方面所述植物乳杆菌作为其有效成分。
区别于现有技术，上述技术方案提供了一种新的保藏于CGMCC，保藏号为CGMCCNo.19825的植物乳杆菌ZK001，该菌株具有良好的益生性能，不仅耐酸耐胆盐，而且具有抗生素耐药和抑菌性，是一株性能优良的菌株；因此具有较高的研究价值和应用价值。同时，该菌株可有效降低胆固醇和甘油三酯。植物乳杆菌ZK001体外胆固醇降低率为65.52％，优于标准菌株植物乳杆菌299v的63.95％；植物乳杆菌ZK001在小白鼠体内试验时，和模型组对比，甘油三酯及胆固醇分别下降28.79％和23.86％。
附图说明
图1植物乳杆菌ZK001体外降解胆固醇能力的测试结果图；
图2植物乳杆菌ZK001体内降解甘油三脂能力的测试结果图；
图3植物乳杆菌ZK001体内降解胆固醇能力的测试结果图；
图4植物乳杆菌ZK001低聚糖的筛选试验结果图；
图5不同浓度的低聚糖对植物乳杆菌ZK001生长的影响图；
图6最适浓度下植物乳杆菌ZK001体外增殖效果图。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合具体实施例并配合说明书附图1-6详予说明。
实施例1植物乳杆菌ZK001菌株的分离、纯化与鉴定
植物乳杆菌ZK001菌株分离纯化：将福建传统农家泡菜发酵液混匀，取发酵液5ml，10倍系列稀释至适宜梯度，每个稀释浓度取200μL涂布于含有CaCO3的选择性培养基MRS培养基上，37℃恒温厌氧培养48h后，挑取平板上典型的单菌落，在MRS固体培养基上划线纯化分离，37℃厌氧培养48h，得到纯的菌落，重复这种纯化方式2～3代，然后对纯化后的菌落进行革兰氏染色鉴定和过氧化氢酶实验。
植物乳杆菌ZK001菌株鉴定：挑取单菌落于载玻片上，经过涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥后镜检，记录革兰氏染色结果；并挑取单菌落于载玻片上，加入3％过氧化氢溶液，观察有无气泡产生，并记录过氧化氢酶接触结果，保留革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性的菌落。
植物乳杆菌ZK001菌种保藏：挑选纯化完成后的单菌落于5mlMRS液体培养基，于37℃厌氧静置培养24h，吸取1ml菌液至保菌管中，4000r/min离心5min，去上清，加入1ml的30％无菌甘油溶液，重悬，置于-80℃保存。
植物乳杆菌ZK001菌株特性：植物乳杆菌ZK001经革兰氏染色后，在光学显微镜下观察，菌株的菌体呈短直圆杆状，成对。植物乳杆菌ZK001在MRS固体培养基上培养48h后呈表面光滑湿润、边缘整齐、圆形、乳白色、隆起的菌落。植物乳杆菌ZK001的常规生理生化实验鉴定结果如表1所示。
表1植物乳杆菌ZK001常规生理生化实验鉴定结果
注：+表示反应阳性，-表示反应阴性。
实施例2植物乳杆菌ZK001对胃肠道环境的耐受性
(1)植物乳杆菌ZK001对酸的耐受性
挑取低温保存的植物乳杆菌ZK001菌株，在MRS液体培养基中厌氧活化18h后，测其菌液浓度为108～109CFU/mL，用移液枪吸取150μL的植物乳杆菌ZK001菌液分别加入到4.5mL含不同pH(pH为2.0、2.5、3.0、3.5、6.5)的MRS液体培养基中，混匀，放置于37℃的厌氧环境静置培养2h，然后将其稀释10倍后，各取500μL倒入MRS固体培养基，混合均匀，待凝固后于37℃厌氧培养24～48h，计数，测定其中植物乳杆菌ZK001菌液的浓度，具体见表2。
按照下列计算公式计算植物乳杆菌ZK001在耐酸耐胆盐后的存活率存活率计算公式：
式中：C为耐酸耐胆盐后的菌液浓度/(CFU/mL),C0为起始菌液浓度/(CFU/mL)表2植物乳杆菌ZK001对不同pH的耐受性测试结果
| pH值 | 起始菌液浓度C<sub>0</sub>(CFU/mL) | 处理2h后菌液浓度C(CFU/mL) | 存活率(％) |
| 2.0 | 3.60×10<sup>8</sup> | 2.16×10<sup>8</sup> | 60 |
| 2.5 | 3.60×10<sup>8</sup> | 2.45×10<sup>8</sup> | 68 |
| 3.0 | 3.60×10<sup>8</sup> | 2.66×10<sup>8</sup> | 74 |
| 3.5 | 3.60×10<sup>8</sup> | 2.88×10<sup>8</sup> | 80 |
| 6.5 | 3.60×10<sup>8</sup> | 3.46×10<sup>8</sup> | 96 |
检测到植物乳杆菌ZK001在pH2.0时存活率可达到60％，在pH3.5时存活率可达到80％，说明该菌株具有较强的耐酸能力。
(2)植物乳杆菌ZK001对胆盐的耐受性
活化后植物乳杆菌ZK001菌液浓度为108～109CFU/mL，用移液枪吸取150μL的植物乳杆菌菌液分别加入到4.5mL含不同胆盐含量(0.1％、0.3％、0.5％和1.0％)的MRS液体培养基中，混匀，放置于37℃的厌氧环境静置培养2h，然后将其稀释10倍，分别向培养皿中加入500μL的植物乳杆菌菌液，倒入MRS固体培养基混合均匀，待凝固后于37℃厌氧培养24～48h，计数，测定其中植物乳杆菌ZK001菌液的浓度，具体见表3。
表3植物乳杆菌ZK001对不同胆盐浓度的耐受性测试结果
检测到植物乳杆菌ZK001在0.3％胆盐浓度时存活率可达到83％，在0.5％胆盐浓度时存活率可达到76％，说明该菌株具有较强的耐胆盐能力。
(3)植物乳杆菌对抗生素的耐药性
药敏试验根据美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所的药敏纸片。抗生素含量为30μg/片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、头孢噻肟、头孢曲松、四环素、克林霉素、青霉素G、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星、万古霉素和多粘菌素B。药敏结果判定标准按照NCCLS手册2010版。
活化后植物乳杆菌ZK001菌液浓度为108～109CFU/mL，将其稀释至适宜浓度后，用移液枪吸取100μL的植物乳杆菌ZK001稀释液至MRS固体培养基中，用涂布棒涂布整个培养基表面，反复几次，保证涂均匀，待植物乳杆菌ZK001稀释液完全吸收后，用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴3张纸片，其中2个为实验组，1个为对照组，以无抗生素的纸片为空白对照，每张纸片间保持合适的距离，整个过程在菌接种后15min内要贴完纸片。然后将培养皿正面朝上置于37℃厌氧培养48h，用游标卡尺测量抑菌圈直径。根据NCCLS标准进行判读：抑菌圈直径≤12mm为抗生素耐药，抑菌圈直径≥18mm为抗生素素敏感。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，这些都不作为抑菌环的边缘，具体见表4。
表4植物乳杆菌ZK001对12种常见抗生素的耐药性
| 抗生素 | 抑菌圈直径(mm) | ZK001 |
| 氨苄青霉素 | 30.26±0.04 | S |
| 羟氨苄青霉素 | 30.12±0.12 | S |
| 头孢噻肟 | 29.13±0.04 | S |
| 头孢曲松 | 28.94±0.10 | S |
| 四环素 | 29.46±0.06 | S |
| 克林霉素 | 30.26±0.02 | S |
| 青霉素G | 31.33±0.06 | S |
| 庆大霉素 | 30.54±0.12 | S |
| 氯霉素 | 30.22±0.12 | S |
| 环丙沙星 | 10.58±0.04 | R |
| 万古霉素 | 11.23±0.08 | R |
| 多粘菌素B | 10.47±0.10 | R |
注：药敏测试结果根据NCCLS 2010年发布的《抗微生物药物敏感性试验的执行标准(第20版)》进行判读。S：敏感，R：耐药。
由表4可知，植物乳杆菌ZK001对环丙沙星、万古霉素和多粘菌素B具有耐药性，对其他抗生素敏感。
实施例3植物乳杆菌ZK001的抑菌特性
将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、单核增生李斯特菌作为病原菌，在LB液体培养基中各自震荡培养18h后，先向每个已灭菌的培养皿中加入约20ml的LB固体培养基，然后将病原菌稀释至一定梯度，用移液枪吸取100μL至LB固体培养基涂布，静置若干分钟待培养基凝固后，用镊子夹取已灭菌的牛津杯，轻放在培养基上，轻压一下，然后往牛津杯中加入200μL培养24h的植物乳杆菌ZK001菌液，每个培养皿中放3个牛津杯，其中2个做实验组，1个做对照组，对照组加入未添加任何菌液的MRS液体培养基，每个病原菌做3个平行实验，待菌液被完全吸收后，于37℃条件下厌氧培养24～48h，观察并测量抑菌圈直径的大小。
当选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、单核增生李斯特菌作为指示病原菌时，植物乳杆菌ZK001能够抑制这些病原菌的生长。如表5所示，对照组中的MRS液体培养基对这4种病原菌无抑制作用，而植物乳杆菌ZK001能够较强的抑制这4种病原菌的生长。
表5植物乳杆菌ZK001的抑菌圈直径
| 实验 | 大肠杆菌 | 金黄色葡萄球菌 | 肠炎沙门氏菌 | 单核增生李斯特菌 |
| MRS液体培养基 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 植物乳杆菌 | 15.83±0.06 | 16.52±0.05 | 16.96±0.06 | 16.32±0.04 |
实施例4植物乳杆菌ZK001体外降解胆固醇能力的测定
本实验采购CGMCC的标准菌株植物乳杆菌299v作为对照。其中，植物乳杆菌299v是已经商业化的具有降胆固醇功能的菌株。具体如下：
首先配制含有胆固醇的MRS液体培养基和不含胆固醇的MRS液体培养基。
MRS-胆固醇培养基：由MRS液体培养基、巯基乙酸钠、胆盐和胆固醇组成，其中，巯基乙酸钠在MRS-胆固醇培养基中的浓度为2g/L，胆盐在MRS-胆固醇培养基中的占比为0.3％，胆固醇的浓度为120μg/mL。
将植物乳杆菌ZK001和植物乳杆菌299v分别转接于不含胆固醇的MRS液体培养基中，37℃厌氧静止培养24h，待用。
实验组：活化的植物乳杆菌ZK001和植物乳杆菌299v菌液按1％接种量分别接种于10mL MRS-胆固醇培养基中。
对照组：没有接种菌株的10mLMRS液体培养基。
将这三组样品放置于37℃恒温培养箱培养24h后，取出摇匀，4000r/min离心15min，取上清液，用邻苯二甲醛显色剂测定上清中胆固醇含量，并计算胆固醇的降解率，其中，胆固醇降解率＝对照组胆固醇与实验组胆固醇的差值/对照组胆固醇含量，实验结果如图1植物乳杆菌ZK001体外降解胆固醇能力的测试结果图所示。
图1的结果显示，植物乳杆菌ZK001降胆固醇降低率为65.52％，优于植物乳杆菌299v组的63.95％，可见植物乳杆菌ZK001有较强的体外降低胆固醇能力，并且其降胆固醇能力,略优于目前已经商业化应用的植物乳杆菌299v标准菌株。
实施例5植物乳杆菌ZK001体内降解胆固醇和甘油三脂能力的测定
(1)实验菌株的的制备
将活化两次的植物乳杆菌ZK001接种于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养18h，6000r/min离心10min，用灭菌生理盐水洗涤后收集菌体。然后加入0.85％生理盐水，调整菌数至1.0×108CFU/mL，然后将活菌按每日使用量分装于15mL的离心管，服用剂量为每天2mL/只，每组10只，共4组，灌胃28天。
(2)实验动物分组及饲养方式
本实验采用5周龄健康昆明种雄性大鼠，自由饲喂至第28天，然后平均分为4组，每组10只，按照以下设置分别对四组进行灌胃28天。
第一组：植物乳杆菌ZK001组，该组灌胃活菌悬液，饲喂高脂饲料；
第二组：模型组，该组灌胃0.85％生理盐水，饲喂高脂饲料；
第三组：正常组，该组灌胃0.85％生理盐水，饲喂标准饲料；
第四组，血脂康组，该组灌胃血脂康(血脂康胶囊用生理盐水溶解，240mg/kg)，饲喂高脂饲料。
每天每只2mL灌胃，持续28天。其中，高脂饲料自行配制，是在购买的标准饲料的基础上添加脂肪或高脂肪物质，具体配方为：78.8％标准饲料、10％猪油、10％蛋黄粉、l％胆固醇、0.2％胆盐。标准饲料为购置于河南天驰实验动物饲料厂的鼠类专用饲料，血脂康胶囊(能显著降低大鼠体内的胆固醇和甘油三酯),规格：每粒0.3g，北京北大维信生物科技有限公司提供。
(3)样品采集与分析测试
正式实验前及第28天时间段进行采血。采血方法为绝食一夜后，于大鼠股静脉采血，凝血后4000r/m离心10min分离血清，利用购自浙江东瓯诊断产品有限公司的总胆固醇测定试剂盒和变色酸显色法，分别检测胆固醇及甘油三酯。其中，酶标仪采用MolecularDevices公司的Spectra MAX190酶标仪。
(4)实验结果
测试结果如图2和图3所示，其中图2为植物乳杆菌ZK001体内降解甘油三脂能力的测试结果图，图3为植物乳杆菌ZK001体内降解胆固醇能力的测试结果图。图2和图3的结果显示，用含植物乳杆菌ZK001菌株菌悬液喂养高脂饲料的大鼠，与模型组对照，两者相比大鼠血液中甘油三酯及胆固醇分别下降28.79％和23.86％，表明植物乳杆菌ZK001在大鼠体内确有降低胆固醇和甘油三酯的功效。
实施例6不同低聚糖对植物乳杆菌ZK001生长的影响
本实验采用健康昆明种小白鼠，40只，雄性，体重14～16g。
实验所用的低聚糖分别为低聚果糖(纯度≥95％)、低聚木糖(纯度≥98％)、低聚半乳糖(纯度≥98％)、低聚异麦芽糖(纯度≥90％)。
(1)低聚糖的筛选试验
将低聚糖添加浓度初步定为1％，分别添加到MRS液体培养基中，接种后于37℃厌氧静止培养48h后，用分光光度计测定菌液浓度，用涂布法测定菌数，从而筛选出在相同条件下效果较好的两种低聚糖进行以下实验。
试验结果如图4植物乳杆菌ZK001低聚糖的筛选试验结果图所示，结果表明：添加相同浓度的低聚糖时，低聚果糖和低聚半乳糖效果较明显，其植物乳杆菌ZK001菌落总数分别为2.76×108、2.43×108CFU/mL，明显高于对照组1.01×108CFU/mL，且低聚果糖的促进效果最好。
(2)低聚糖最适添加量的确定
将确定效果优良的低聚果糖和低聚半乳糖按照不同浓度分别添加到MRS液体培养基中，使其质量浓度分别为0、1％、2％、3％、4％、5％，然后将植物乳杆菌ZK001按1％的接种量接种到不同的培养基中，对照组为将植物乳杆菌ZK001同样按1％的接种量接种到无任何添加物的MRS液体培养基中，利用分光光度计测定菌液浓度，观察不同低聚糖含量对植物乳杆菌ZK001生长状况的影响，从而确定最适添加浓度，然后测出各自最适添加浓度下的菌液，用涂布法确定细菌总数。
试验结果如图5不同浓度的低聚糖对植物乳杆菌ZK001生长的影响图所示，结果表明：随着低聚糖浓度的增加，植物乳杆菌ZK001总数增加(OD值)，到达一个峰值后，随着低聚糖浓度的增加，反而植物乳杆菌ZK001总数越少。最适添加浓度分别为低聚果糖3％，低聚半乳糖2％。
直接将最适浓度的菌液稀释涂布，然后菌落计数，试验结果如图6最适浓度下植物乳杆菌ZK001体外增殖效果图所示，结果表明：低聚果糖菌落总数为1.42×108CFU/mL，低聚半乳糖菌落总数为1.10×108CFU/mL，空白对照组菌落为0.87×108CFU/mL。两种低聚糖组的菌落总数均明显高于空白对照组，其中3％的低聚果糖效果最为明显，2％低聚半乳糖效果次之。
(3)低聚糖联合使用试验
将筛选出来的低聚果糖和低聚半乳糖联合使用，观察是否有相加作用，低聚果糖：低聚半乳糖浓度分别为1％:9％、2％:8％、3％:7％、4％:6％、5％:5％、6％:4％、7％:3％、8％:2％、9％:1％，并设置低聚果糖组、低聚半乳糖组、不加低聚糖组，利用分光光度计来测定植物乳杆菌ZK001菌液浓度，最后确定其最佳浓度。
试验结果见表6，结果表明：当低聚果糖和低聚半乳糖比例为3:7时，植物乳杆菌ZK001菌液浓度达到1.410，为最高，低聚果糖单独使用时为1.382，低聚半乳糖单独使用时为1.210，空白组为0.254。P<0.05时差异显著，这说明了在混合使用时出现了协同作用，为今后低聚糖配合ZK001植物乳杆菌菌株作为食品或益生元添加剂提供了科学依据。
表6两种不同浓度的低聚糖混合使用试验结果
| 果：半乳 | OD600nm | 果：半乳 | OD600nm | OD600nm |
| 空白组 | 0.254 | 2％：8％ | 1.380# | 1.340# |
| 3％：0 | 1.382# | 3％：7％ | 1.410## | 1.356 |
| 0：2％ | 1.210 | 4％：6％ | 1.394# | 1.310 |
| 1％：9％ | 1.230 | 5％：5％ | 1.371# | 1.223 |
注：果为低聚果糖，半乳为低聚半乳糖，与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括……”或“包含……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的要素。此外，在本文中，“大于”、“小于”、“超过”等理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等理解为包括本数。
需要说明的是，尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述，但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此，基于本发明的创新理念，对本文所述实施例进行的变更和修改，或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围之内。
Claims (9)
1.保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述植物乳杆菌具有利用低聚糖进行生长繁殖的能力。
3.根据权利要求1所述的植物乳杆菌，其特征在于，所述低聚糖为低聚果糖和/或低聚半乳糖。
4.保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的的植物乳杆菌在制备抑制细菌生长药品方面的应用，所述细菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌和单核增生李斯特菌。
5.一种抑菌剂，其特征在于，所述抑菌剂中含有权利要求1所述植物乳杆菌作为其有效成分。
6.保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌在制备抗生素联合使用药品上的应用，所述抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、万古霉素和多粘菌素B。
7.一种适用抗生素治疗病人的食品，其特征在于，所述食品中含有权利要求1所述植物乳杆菌作为其有效成分。
8.保藏于CGMCC，保藏号为CGMCC No.19825的植物乳杆菌在制备降低胆固醇和甘油三酯药品方面的应用。
9.一种降低胆固醇和甘油三酯的制剂，其特征在于，所述制剂中含有权利要求1所述植物乳杆菌作为其有效成分。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011081780.9A CN112195123B (zh) | 2020-10-12 | 2020-10-12 | 一种植物乳杆菌及其制剂和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011081780.9A CN112195123B (zh) | 2020-10-12 | 2020-10-12 | 一种植物乳杆菌及其制剂和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112195123A CN112195123A (zh) | 2021-01-08 |
| CN112195123B true CN112195123B (zh) | 2022-04-29 |
Family
ID=74012764
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011081780.9A Active CN112195123B (zh) | 2020-10-12 | 2020-10-12 | 一种植物乳杆菌及其制剂和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112195123B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111534452B (zh) * | 2020-03-18 | 2021-07-09 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 具有广谱抑制多重耐药性食源性致病菌的乳酸菌菌株及其应用 |
| CN113373085B (zh) * | 2021-05-25 | 2022-06-21 | 大连工业大学 | 一株降低牛乳β-乳球蛋白抗原性的植物乳杆菌及其应用 |
| CN114262680B (zh) * | 2022-01-04 | 2023-07-04 | 澳优乳业（中国）有限公司 | 菌株及其应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107312726B (zh) * | 2017-05-27 | 2018-05-18 | 武汉科缘生物发展有限责任公司 | 一株植物乳杆菌zn-3及应用 |
| TW202023590A (zh) * | 2018-08-17 | 2020-07-01 | 英商4D製藥研究有限公司 | 包含細菌菌株之組合物 |
-
2020
- 2020-10-12 CN CN202011081780.9A patent/CN112195123B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112195123A (zh) | 2021-01-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112195123B (zh) | 一种植物乳杆菌及其制剂和应用 | |
| CN110272842B (zh) | 一株具有减肥降脂功能的植物乳杆菌lp104 | |
| CN110964655B (zh) | 一种乳双歧杆菌bl-99及其应用 | |
| CN100378214C (zh) | 益生细菌:发酵乳杆菌 | |
| CN112094785B (zh) | 一种动物双歧杆菌及其制剂与应用 | |
| CN110218681B (zh) | 一株发酵乳杆菌kp101及其应用 | |
| CN110777087B (zh) | 一种约氏乳杆菌及其应用 | |
| CN110656060A (zh) | 多联乳杆菌组合物及其在女性阴道健康中的应用 | |
| CN111925961B (zh) | 一株植物乳杆菌Lp2及其应用 | |
| CN113061543B (zh) | 一种植物乳杆菌及其用途 | |
| CN112812999B (zh) | 一株对阴沟肠杆菌具有抑制作用的植物乳杆菌slb01及其衍生产品和应用 | |
| CN106883995A (zh) | 乳酸片球菌jqii-5菌株及其用途 | |
| CN107058171B (zh) | 具有降低胆固醇降低甘油三酯作用的戊糖乳杆菌及应用 | |
| CN114752529A (zh) | 植物乳杆菌hom3201菌株及其活菌制剂、制备方法和用途 | |
| CN113088468B (zh) | 干酪乳杆菌Ma.GLRGJ 1及其应用 | |
| CN117143767A (zh) | 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用 | |
| WO2021248440A1 (zh) | 一种母乳源植物乳杆菌及其应用 | |
| CN116970539A (zh) | 一种鼠联合乳杆菌、其组合物及用途 | |
| CN116590172A (zh) | 乳酸片球菌glp06及其应用和产品 | |
| CN111004735A (zh) | 一株发酵乳杆菌及其在改善肠道健康方面的应用 | |
| CN114921383A (zh) | 一种具有清除胆固醇功能的益生菌制剂及其制备方法 | |
| CN115044504B (zh) | 一株粪肠球菌yz-1及其益生性应用 | |
| CN112972505B (zh) | 一株发酵乳杆菌在制备具有降甘油三酯功能的食品或药品中的应用 | |
| CN111154677B (zh) | 嗜酸乳杆菌及其应用 | |
| CN116396890B (zh) | 用于防治结肠癌的植物乳杆菌zjuids15及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |