CN116223709A - 一种甲钴胺溶出度的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甲钴胺溶出度的测定方法，该方法包括以下步骤：S1、供试品溶液的制备；S2、对照品溶液的制备；S3、系统适用性溶液；S4、取系统适用性溶液、供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，甲钴胺峰与相对保留时间约为1.16杂质峰之间的分离度应大于3.0，根据色谱图计算供试品溶液中甲钴胺的溶出度根据本发明提供的各溶液的制备方法制备的各溶液，在进行溶出度测定时，磷酸盐缓冲液选择磷酸二氢钾，浓度为0.03mol/L，PH值为4.5时，检测的结果最佳，杂质峰和甲钴胺峰的分离效果最优。

Description

一种甲钴胺溶出度的测定方法

技术领域

本发明属于化学药物分析方法技术领域，更具体涉及一种甲钴胺溶出度的测定方法。

背景技术

甲钴胺又名甲基维生素B12，是一种深红色结晶或结晶性粉末；无臭、无味；引湿性强；遇光易分解；甲钴胺分子式为C63H91CON13O14P，分子量为1344.38，其结构是以钴离子为中心的大环络合物，该结构式如下所示：

甲钴胺是甲钴胺颗粒的有效活性成分，是维生素B12(氰钴胺)的衍生物，从上述结构式中可知，因在中央钴分子上结合了一个甲基基团，参与物质的甲基转换及核酸、蛋白质和脂肪代谢，所以甲钴胺颗粒的主要功能是修复损伤的神经，缓解麻木、疼痛和感觉异常，对周围神经病变具有良好的治疗作用，已在临床上得到广泛应用。

综上所述，提供一种快速、准确的检测甲钴胺颗粒溶出度的分析方法，更好的控制本产品质量，是本领域技术人员急需解决的技术难题。

发明内容

本发明提供一种甲钴胺溶出度的测定方法，能够准确控制本制剂产品的质量，解决了上述现有技术的缺陷。

本发明公开了一种甲钴胺溶出度的测定方法，该方法包括以下步骤：

S1、供试品溶液的制备：取甲钴胺在不同时间点的溶出样品作为供试品溶液；

S2、对照品溶液的制备：称取甲钴胺对照品适量，用水溶解并定量稀释制成每1ml含甲钴胺1ug的溶液，作为对照品溶液；

S3、系统适用性溶液：取甲钴胺对照品约5mg，加1mol/L盐酸溶液5.0ml，避光放置1h，立即加入1mol/L的氢氧化钠溶液5.0ml，摇匀；

S4、取系统适用性溶液、供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，甲钴胺峰与相对保留时间约为1.16杂质峰之间的分离度应大于3.0，根据色谱图计算供试品溶液中甲钴胺的溶出度；

其中，色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为300～360nm，进样量为100μl，柱温为30℃，流速为0.5～1.5ml/min；等度洗脱。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

发明人发现根据本发明提供的各溶液的制备方法制备的各溶液，在进行溶出度测定时，磷酸盐缓冲液选择磷酸二氢钾，浓度为0.03mo l/L，PH值为4.5时，检测的结果最佳，杂质峰和甲钴胺峰的分离效果最优。

附图说明

图1为本发明实施例中系统适用性溶液的色谱图；

图2为本发明实施例中空白溶液的色谱图；

图3为本发明实施例中对照品溶液的色谱图；

图4为本发明实施例中甲钴胺颗粒供试品溶液的色谱图。

具体实施方式

下面结合各实施方式对本发明进行详细说明，但应当说明的是，这些实施方式并非对本发明的限制，本领域普通技术人员根据这些实施方式所作的功能、方法、或者结构上的等效变换或替代，均属于本发明的保护范围之内。除非说明书中有特殊说明，本发明中组分、原料均采用化学纯级别。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

本实施例公开了一种甲钴胺溶出度的测定方法，该甲钴胺选择的是甲钴胺颗粒。

本实施例中所述测定方法的色谱条件：

所用的仪器为：岛津高效液相色谱仪；色谱柱：C18色谱柱，规格为50mm×4.6mm，1.8μm；流动相：0.03mo l/l磷酸二氢钾(pH4.5)-乙腈(84：16),流速为0.8ml/mi n；柱温为30℃；进样体积为100μl。

溶液配制：

(1)对照品溶液的制备：

先制备对照品储备液：取适量甲钴胺对照品，加水超声溶解稀释至刻度，制成每1ml约含0.2mg甲钴胺的储备溶液。

对照品溶液的制备：精密吸取上述对照品储备液适量，加水稀释制成每1ml约含2μg甲钴胺的溶液。

(3)供试品溶液的制备：向每个溶出杯中加入500ml溶出介质。使溶出杯中的溶出介质平衡至37.0±0.5℃。取1包甲钴胺颗粒，将设备转速调至50rpm/mi n，将供试品投入溶出杯中，立即操作溶出仪并开始计时在在5mi n、10mi n、15mi n和30mi n时，取出10mL溶液，取出10mL溶液，将此溶液用孔径0.22μm水系滤膜过滤，弃去5ml，取续滤液，作为供试品溶液。

(4)系统适用性溶液的制备：取甲钴胺对照品约5mg，加1mo l/L盐酸溶液5.0m l，避光放置1h，立即加入1mo l/L的氢氧化钠溶液5.0ml，摇匀。精密吸取系统适用性溶液、对照品溶液、空白溶液、供试品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪进行测定，得到色谱图。图1为本发明实施例中系统适用性溶液的色谱图；图2为本发明实施例中空白溶液的色谱图；图3为本发明实施例中对照品溶液的色谱图；图4为本发明实施例中甲钴胺颗粒供试品溶液的色谱图。

根据色谱图，采用外标法计算溶出度。

专属性：将空白溶液按上述条件进样，结果表明，空白溶液不干扰检测。

线性范围：精密称取甲钴胺对照品适量，加水制成每1ml含甲钴胺0.1mg作为对照品储备溶液，分别稀释成一系列浓度(0.25gml～1.5ug/ml)进样分析，绘制标准曲线，线性方程为：Y＝0.000012466X,r＝0.9999

准确度：按样品处方量精密称取适量的空白辅料，按照样品含量的30％、100％和130％加入对照品。每个浓度平行制备3份供试品溶液。实验结果见表1

表1回收率

进样精密度：6袋甲钴胺颗粒溶出样品，按上述色谱条件，进样分析，以峰面积计算溶出度，检测结果见表2

表2重复性

序号	峰面积	溶出度％
			1	78,757	103.7
2	78,147	102.9
			3	79,291	104.4
4	78,379	103.2
			5	78,071	102.8
6	78,415	103.2

以上所述的仅是本发明的一些实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的创造构思的前提下，还可以做出其它变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种甲钴胺溶出度的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、供试品溶液的制备：取甲钴胺在不同时间点的溶出样品作为供试品溶液；

S2、对照品溶液的制备：称取甲钴胺对照品适量，用水溶解并定量稀释制成每1ml含甲钴胺1ug的溶液，作为对照品溶液；

S3、系统适用性溶液：取甲钴胺对照品约5mg，加1mol/L盐酸溶液5.0ml，避光放置1h，立即加入1mol/L的氢氧化钠溶液5.0ml，摇匀；

S4、取系统适用性溶液、供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，甲钴胺峰与相对保留时间约为1.16杂质峰之间的分离度应大于3.0，根据色谱图计算供试品溶液中甲钴胺的溶出度；

其中，色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为300～360nm，进样量为100μl，柱温为30℃，流速为0.5～1.5ml/min；等度洗脱。

2.根据权利要求1所述的一种甲钴胺溶出度的测定方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L，PH值为3.5～5.0。

3.根据权利要求2所述的一种甲钴胺溶出度的测定方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.04mol/L，PH值为4.5。

4.根据权利要求3所述的一种甲钴胺溶出度的测定方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢胺、磷酸氢二胺中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的一种甲钴胺溶出度的测定方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钾。

6.根据权利要求5所述的一种甲钴胺溶出度的测定方法，其特征在于，所述流动相是由0.03mol/L磷酸二氢钾溶液与乙腈按照体积比84：16的比例混合而成。

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