CN116148372A - 一种同时检测样品中9种抗生素的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及一种同时检测样品中9种抗生素的分析方法，所述分析方法包括如下步骤：利用LC‑MS/MS分析方法对待测样品进行检测，并利用9种抗生素分别对应的标准曲线确定待测样品中9种抗生素的含量；其中，所述9种抗生素包括头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑和伊曲康唑。本公开提供的分析方法能够一份样本实现9种抗生素的同时检测，并且本公开提供的分析方法重现性良好，加样回收率高，检测结果准确性高，检测过程简便快捷，分析时间短，实验成本低，有利于大批量的样本检测。
Description
技术领域
本公开涉及药品浓度检测技术领域，尤其涉及一种同时检测样品中9种抗生素的分析方法。
背景技术
细菌感染是致病性和死亡率的一个重要来源，使用抗生素治疗成为住院病人管理的一个重要方面。头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、伏立康唑、伊曲康唑、泊沙康唑、氟康唑、利奈唑胺、哌拉西林是9种常用的抗生素，分别针对于不同的细菌感染，但是均存在治疗窗窄，个体间差异较大，经验性给药方案不能使多数重症患者的血药浓度达到治疗目标范围的缺点，因此需要进行血药浓度监测从而优化重症患者的治疗方案。
目前的抗生素血药浓度监测大多都是同一种类的抗生素放在一个方法包中，但在实际情况中，往往会存在联合用药的情况，特别是不同生理功能的抗生素同时用药，在目前的常规检测中，若想对几类抗生素同时进行药物浓度监测，则需要一次采集较大量的血，分别处理，分别监测，不仅样本的使用量较大，而且检测时间长，检测结果较慢。
因此，需要提供一种能够同时检测血液中9种抗生素的液相色谱质谱分析方法，确保只需要用一份标本就可以完成多种抗生素的血药浓度监测，能够提高检测效率。
发明内容
为了解决上述技术问题，本公开提供了一种同时检测样品中9种抗生素的分析方法。
第一方面，本公开提供了一种同时检测样品中9种抗生素的分析方法，所述分析方法包括如下步骤：
利用LC-MS/MS分析方法对待测样品进行检测，并利用9种抗生素分别对应的标准曲线确定待测样品中9种抗生素的含量；
其中，所述9种抗生素包括头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑和伊曲康唑。
现有提供的方法包通常仅包括一类生理功能相近且极性相近的药物，本公开提供的9种抗生素的极性跨度较大，并无法使用目前现有的方法完成检测，并且在目前的质谱检测中，头孢哌酮和头孢他啶一般采用负离子检测模式，而其他抗生素一般采用正离子检测模式。
本公开提供的9种抗生素的极性大小见表1：
表1
| 抗生素 | 极性(logP) | 抗生素 | 极性(logP) |
| 头孢他啶 | -1.6 | 哌拉西林 | 0.3 |
| 美罗培南 | -0.6 | 伏立康唑 | 1 |
| 头孢哌酮 | -0.74 | 泊沙康唑 | 5.5 |
| 利奈唑胺 | 0.9 | 伊曲康唑 | 5.7 |
| 氟康唑 | 0.5 |
由表1可知，本公开中的9种抗生素极性跨度较大，且有部分物质的极性相近，在目前现有的方法中难以同时对上述9种抗生素进行含量检测。
本公开提供的分析方法在同一种采集模式(正离子采集进行检测分析，避免正负切换带来的一系列繁琐步骤和操作)的前提下，能够将不同生理功能且极性相差较大的抗生素放在同一方法包中进行分析，只需一份样本即可完成9种抗生素的同时检测。
作为本公开的一种优选技术方案，在所述LC-MS/MS分析方法中，液相色谱参数包括：
色谱柱为：phenomenex Luna Omega Polar C18、phenomenex Kinetex Polar C18或Shim-pack Velox SP-C18；
梯度洗脱参数包括：
流速：0.2-0.5mL/min；
0.00min：A 95-100％，B 0-5％；
0.10-1.50min：A 30-60％，B 40-70％；
1.01-3.50min：A 0-10％，B 100-90％；
2.01-5.50min：A 95-100％，B 0-5％。
在本公开的梯度洗脱条件中，对于“0.10-1.50min和1.01-3.50min”或者对于“1.51-3.50min和3.01-5.50min”，其对应的梯度洗脱条件，并不指二者存在时间上的交叉，而是指在此范围内，可以择一使用，示例性的进行以下解释：对于“0.10-1.50min和1.01-3.50min”A相占比既可以参照0.10-1.50min中限定的30-60％，也可以参照1.01-3.50min中限定的0-10％，均能实现本公开的发明目的。
本公开所述0.10-1.50min可以是0.10-1.00min、0.10-1.10min、0.10-1.20min、0.10-1.30min、0.10-1.40min等。
本公开所述1.01-3.50min可以是1.01-2.00min、1.01-2.40min、1.01-2.80min、1.01-3.00min、1.01-3.40min、1.11-2.00min、1.11-3.00min、1.11-3.40min、1.31-2.00min、1.41-2.00min等。
本公开所述2.01-5.50min可以是2.11-5.50min、2.41-5.50min、2.81-5.50min、3.01-5.50min、3.21-5.50min、3.41-5.50min等。
本公开所述95-100％可以是96％、97％、98％、99％等；所述0-5％可以是1％、2％、3％、4％等，所述30-60可以是35％、40％、45％、50％、55％等，所述40-70％可以是45％、50％、55％、60％、65％等，所述0-10可以是2％、4％、6％、8％等，所述100-90％可以是98％、96％、94％、92％等。
作为本公开的一种优选技术方案，在所述液相色谱参数中，所述梯度洗脱参数包括：
0.00min：A 95-100％，B 0-5％；
0.10-1.50min：A 30-45％，B 55-70％；
1.51-3.00min：A 0-10％，B 90-100％；
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本公开所述95-100％可以是96％、97％、98％、99％等；所述0-5％可以是1％、2％、3％、4％等，所述30-45可以是32％、34％、36％、40％、42％等，所述55-70％可以是58％、60％、62％、65％、68％等，所述0-10可以是2％、4％、6％、8％等，所述100-90％可以是98％、96％、94％、92％等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述液相色谱参数还包括：
流动相为：A为含有0.1-0.2v/v％甲酸和1-5mM甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B为含有0-0.2v/v％甲酸的乙腈；
所述0.1-0.2v/v％可以是0.12v/v％、0.15v/v％、1.18v/v％等，所述1-5mM可以是2mM、3mM、4mM等，所述0-0.2可以是0.05v/v％、0.1v/v％、0.15v/v％等。
洗针液为含有0.1-0.5v/v％甲酸的乙腈，例如0.2v/v％、0.3v/v％、0.4v/v％等；
进样量为1-10μL，例如2μL、4μL、6μL、8μL等。
作为本公开的一种优选技术方案，在所述LC-MS/MS分析方法中，质谱检测仪的检测模式为ESI+检测模式，质谱参数包括：
干燥气温度：250-350℃，例如260℃、280℃、300℃、340℃等；干燥气流速：3-15L/min，例如4L/min、6L/min、8L/min、10L/min、12L/min、14L/min等；鞘气温度：300-400℃，例如320℃、340℃、360℃、380℃等；鞘气流速：8-11L/min，例如9L/min、10L/min等；喷雾器：40-50psi，例如42psi、45psi、48psi等；毛细管电压3000-4500V，例如3200V、3500V、3800V、4000V、4200V等。
相较于现有的对于头孢哌酮和头孢他啶的质谱检测，一般采用负离子检测模式，本公开提供了一种正离子检测模式即可完成对二者的质谱检测，进而能够和其他抗生素放在同一方法包中，实现一份样本同时检测9种抗生素，且分析时间短，定量准确性高，能够尽可能的缩短检测时间，具有优异的检测效率。
作为本公开的一种优选技术方案，所述样品选自血清样品或血液样品，将所述血液样品或血清样品离心得到血浆或血清，然后再进行前处理。
作为本公开的一种优选技术方案，所述蛋白沉淀剂选自乙腈。
作为本公开的一种优选技术方案，所述样品与蛋白沉淀剂的体积比为1:(5-10)，例如1:6、1:7、1:8、1:9等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述样品与内标工作液的体积比为(2-10):1，例如3:1、4:1、6:1、8:1等。
作为本公开的一种优选技术方案，所述上清液与纯水的体积比为1:(1-5)，例如1:2、1:3、1:4等。
本公开提供的样品前处理方法摈弃了复杂且时间较长的前处理过程，仅通过利用蛋白沉淀剂即可完成样品的前处理，操作简单，能够尽可能的降低前处理失误。
实际上，本公开提供的样品前处理方法配合本公开提供的检测方法能够实现在不添加空白基质的前提下实现标准曲线的确定。
本公开提供的分析方法以及样品前处理方法能够将样本使用量降低至20μL，极大的减小了样本使用量。
作为本公开的一种具体实施方式，所述待测样品的前处理方法包括：用移液枪移取血清待测样品、内标工作液和乙腈，混匀5-10min，离心10-15min，取上清加水，混匀1-3min，取上清进样分析。
作为本公开的一种具体实施方式，所述待测样品的前处理方法包括：用移液枪移取血清待测样品，加入内标工作液和乙腈，1500-2500r/min混匀5-10min，12000-14000r/min离心10-15min，取上清加水，1500-2500r/min混匀1-3min，取上清进样分析，进样量为4μL。
作为本公开的一种具体实施方式，所述待测样品的前处理方法包括：用移液枪移取20μL血清待测样品，加入10μL内标工作液，加入100μL乙腈，2000r/min混匀5min，14000r/min离心10min，取上清40μL，加水200μL，2000r/min混匀1min，取上清150μL进样分析，进样量为4μL。
本公开并不限定标准溶液和标准曲线的确定方法，示例性的，作为本公开的一种优选技术方案，所述标准曲线的确定方法包括：
制备至少三种不同浓度的标准溶液，并利用LC-MS/MS分析方法分别对不同浓度的标准溶液进行检测，建立9种抗生素的标准曲线。
作为本公开的一种优选技术方案，所述确定待测样品中9种抗生素的含量的方法为内标法。
作为本公开的一种优选技术方案，所述9种抗生素使用的内标物包括头孢哌酮-D5、头孢他啶-D5、美罗培南-D6、利奈唑胺-D3、伏立康唑-D3、氟康唑-D4、哌拉西林-D5、泊沙康唑-D4和伊曲康唑-D5。
本公开实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：
(1)本公开提供的分析方法能够一份样本实现9种抗生素的同时检测；
(2)本公开提供的LC-MS/MS分析方法重现性良好，加样回收率高，检测结果准确性高；
(3)本公开提供的LC-MS/MS分析方法检测过程简便快捷，分析时间短，实验成本低，有利于大批量的样本检测。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本公开的实施例，并与说明书一起用于解释本公开的原理。
为了更清楚地说明本公开实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为安捷伦1260/6470A检测的标准溶液中9种抗生素的色谱图；
图2为安捷伦1260/6470A检测的血清样本中9种抗生素的色谱图；
图3为实施例4检测的血清样本中9种抗生素的色谱图；
图4为实施例5检测的血清样本中9种抗生素的色谱图；
图5为实施例6检测的血清样本中9种抗生素的色谱图；
图6为实施例7检测的血清样本中9种抗生素的色谱图；
图7为对比例1得到的头孢他啶和美罗培南的液相色谱图；
图8为对比例2得到的头孢哌酮的液相色谱图；
图9为对比例2得到的伏立康唑的液相色谱图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本公开的上述目的、特征和优点，下面将对本公开的方案进行进一步描述。需要说明的是，在不冲突的情况下，本公开的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本公开，但本公开还可以采用其他不同于在此描述的方式来实施；显然，说明书中的实施例只是本公开的一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
本实施例提供了具有8种级别浓度的标准工作液，具体见表2：
表2
实施例2
本实施例提供了一种内标工作液，具体见表3：
表3
| 抗生素 | 内标工作液浓度(μg/mL) |
| 头孢他啶-D5 | 20 |
| 美罗培南-D6 | 4 |
| 头孢哌酮-D5 | 10 |
| 利奈唑胺-D3 | 0.5 |
| 氟康唑-D4 | 1 |
| 哌拉西林-D5 | 10 |
| 伏立康唑-D3 | 4 |
| 泊沙康唑-D4 | 1 |
| 伊曲康唑-D5 | 2 |
实施例3
本实施例提供了一种样本处理方法以及检测方法。
(1)配制标准溶液
首先用移液器移取标准工作液20μL和内标工作液10μL置于1.5mL离心管中混合，然后再加入乙腈100μL，在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀0.5-1min后，取40μL上清液，再加入200μL水混合，得到标准溶液，参照上述方法，依次配制得到8种不同浓度的标准溶液。
(2)待测样本的前处理方法
移液枪移取20μL待测血清样品，加入10μL内标工作液和100μL乙腈，2000r/min混匀5min，14000r/min离心10min，取上清40μL，加水200μL，2000r/min混匀1min，取上清150μL作为待测样品。
(3)标准溶液和待测样品的检测
使用高效液相色谱质谱联用仪对标准溶液进行检测，分别建立9种抗生素的标准曲线；
在建立标准曲线时，以目标物的峰面积和其对应内标峰面积的比值为Y，以目标物的浓度和其对应内标浓度的比值为X；
使用高效液相色谱质谱联用仪对待测样品进行检测，并利用建立的标准曲线确定待测样本中9种抗生素的浓度。
检测参数为：
A、检测仪器为安捷伦1260/6470A
所使用的分析色谱柱流动相为：A相：水(0.2％甲酸+5mM甲酸铵)，B相：乙腈，分析色谱柱采用梯度洗脱方式，色谱条件参数见表4：
表4
对于质谱条件，所使用的离子源参数见表5，离子对参数见表6，其中，Dwell为25ms，Cell Accelerator Voltage值为3V；
表5
| 参数 | 设定值 | 参数 | 设定值 |
| 采集模式 | ESI(﹢),MRM | Sheath Gas Flow | 11L/min |
| Gas Temp | 300℃ | Nebulizer | 40psi |
| Gas Flow | 5L/min | Capillary(+) | 4000V |
| Sheath Gas Temp | 400℃ | Delta-EMV(+) | 200V |
表6
| 物质名称 | 保留时间/min | 母离子 | 子离子 | Fragment or | CE(V) |
| 头孢他啶 | 1.99 | 547.2 | 468.2 | 100 | 10 |
| 美罗培南 | 1.99 | 384.2 | 141 | 90 | 16 |
| 头孢哌酮 | 2.14 | 646.2 | 143.1 | 100 | 38 |
| 哌拉西林 | 2.28 | 518.2 | 143 | 110 | 18 |
| 利奈唑胺 | 2.21 | 338.1 | 296.1 | 130 | 18 |
| 氟康唑 | 2.15 | 307.1 | 238.1 | 100 | 14 |
| 伏立康唑 | 2.65 | 350.1 | 127.1 | 90 | 38 |
| 泊沙康唑 | 3.26 | 701.6 | 127.1 | 160 | 76 |
| 伊曲康唑 | 3.66 | 705.3 | 392.4 | 160 | 40 |
| 头孢他啶-D5 | 1.99 | 553.2 | 469.2 | 100 | 10 |
| 美罗培南-D6 | 1.99 | 390.2 | 147 | 90 | 16 |
| 头孢哌酮-D5 | 2.14 | 651.2 | 148.1 | 100 | 38 |
| 利奈唑胺-D3 | 2.21 | 341.1 | 297.1 | 130 | 18 |
| 氟康唑-D4 | 2.15 | 311.1 | 242.1 | 100 | 14 |
| 哌拉西林-D5 | 2.28 | 523.2 | 148 | 110 | 18 |
| 伏立康唑-D3 | 2.65 | 353.1 | 130.1 | 90 | 38 |
| 泊沙康唑-D4 | 3.26 | 705.6 | 549.9 | 160 | 76 |
| 伊曲康唑-D5 | 3.66 | 710.3 | 397.4 | 160 | 40 |
图1-2分别为利用安捷伦1260/6470A检测的标准溶液和待测血样中的9种抗生素的液相色谱图，由图可知，本公开提供的样品前处理方法结合液相色谱-质谱检测条件，能够准确的分离并检测9种抗生素的含量。
实施例4
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，利用安捷伦1260/6470A进行检测，梯度洗脱条件见表7：
表7
实施例5
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，利用安捷伦1260/6470A进行检测，梯度洗脱条件见表8：
表8
实施例6
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，利用安捷伦1260/6470A进行检测，梯度洗脱条件见表9：
表9
实施例7
本实施例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，在本实施例中，利用安捷伦1260/6470A进行检测，梯度洗脱条件见表10：
表10
图3-6为实施例4-7检测的血清样本中的9种抗生素的液相色谱图，由图可知，采用本公开提供的检测条件能够成功的将9种抗生素分离，进而能够进行后续的定量分析。
对比例1
本对比例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，本对比例的液相色谱条件(安捷伦1260/6470A)见表11：
表11
图7为本对比例中的头孢他啶和美罗培南的液相色谱图，由图可知，利用上述洗脱条件，得到的头孢他啶和美罗培南的液相色谱图出现明显的峰展宽的现象，峰宽有0.5，同时，美罗培南出现拖尾，均会影响检测的准确性。
对比例2
本对比例提供了一种检测方法。
与实施例3的区别在于，本对比例的液相色谱条件(安捷伦1260/6470A)见表12：
表12
图8-9分别为本对比例中的头孢哌酮和伏立康唑的液相色谱图，由图可知，利用上述洗脱条件，得到的头孢哌酮的峰展宽，峰宽有0.5，同时，伏立康唑的峰出现拖尾，均会影响检测的准确性。
性能分析
对本公开提供的分析方法进行线性、回收率和精密度等分析，方法如下：
(1)定量限和检出限
10μL标准工作液(混合标准溶液L1点)，加入不同体积空白血浆混匀制备不同浓度样本，10μL内标工作液加20μL上述样本，按实施例3提供的样本前处理条件和安捷伦1260/6470A仪器的测定条件，对样本进行测定通过标准曲线确定9种抗生素的检测限、定量限，见表13：
表13
| 目标抗生素 | 定量限(ng/mL) | 检出限(ng/mL) |
| 头孢他啶 | 18.81 | 6.27 |
| 美罗培南 | 7.25 | 2.18 |
| 头孢哌酮 | 6.54 | 1.98 |
| 利奈唑胺 | 2.63 | 0.42 |
| 氟康唑 | 13.42 | 3.82 |
| 哌拉西林 | 28.45 | 8.83 |
| 伏立康唑 | 4.18 | 1.03 |
| 泊沙康唑 | 6.01 | 1.75 |
| 伊曲康唑 | 3.25 | 0.59 |
由表13可知，本公开提供的检测方法的检出限和定量限均较低。
(2)线性分析
将上述配制的20μL的各个浓度的头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑、伊曲康唑混合标准工作液，分别加入10μL内标工作液，分别置于1.5mL离心管中混合制成八种不同浓度的标准溶液，加入100μL乙腈，将上述标准溶液分别在转速为1000-2000rpm下涡旋混匀30s-1min后，取40μL上清液，加入200μL水，进样4μL至LC-MS/MS分析(实施例3提供的安捷伦1260/6470A仪器的测定条件)，各物质线性范围见表14：
表14
由表14可知，本公开提供的分析方法的检测范围广，且线性相关性好。
(3)回收率和精密度
分别取头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑、伊曲康唑标准工作液配制成低、中、高3种浓度进行加样回收率实验和精密度实验，按本公开提供的分析方法进行测定，重复分析测定5批次，头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑、伊曲康唑回收率和精密度分别如表15所示：
表15
由表15可知，本公开提供的分析方法重现性良好，加样回收率高，提高了检测结果的准确度。
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅是本公开的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本公开。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本公开的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本公开将不会被限制于本文所述的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种同时检测样品中9种抗生素的分析方法，其特征在于，所述分析方法包括如下步骤：
利用LC-MS/MS分析方法对待测样品进行检测，并利用9种抗生素分别对应的标准曲线确定待测样品中9种抗生素的含量；
其中，所述9种抗生素包括头孢哌酮、头孢他啶、美罗培南、利奈唑胺、伏立康唑、氟康唑、哌拉西林、泊沙康唑和伊曲康唑。
2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，在所述LC-MS/MS分析方法中，液相色谱参数包括：
色谱柱为：phenomenex Luna Omega Polar C18、phenomenex Kinetex Polar C18或Shim-pack Velox SP-C18；
梯度洗脱参数包括：
流速：0.2-0.5mL/min；
0.00min：A 95-100％，B 0-5％；
0.10-1.50min：A 30-60％，B 40-70％；
1.01-3.50min：A 0-10％，B 100-90％；
2.01-5.50min：A 95-100％，B 0-5％。
3.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，在所述液相色谱参数中，所述梯度洗脱参数包括：
0.00min：A 95-100％，B 0-5％；
0.10-1.50min：A 30-45％，B 55-70％；
1.51-3.00min：A 0-10％，B 90-100％；
3.01-5.50min：A 95-100％，B 0-5％。
4.根据权利要求1-3中的任一项所述的分析方法，其特征在于，所述液相色谱参数还包括：
流动相为：A为含有0.1-0.2v/v％甲酸和1-5mM甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B为含有0-0.2v/v％甲酸的乙腈；
洗针液为含有0.1-0.5v/v％甲酸的乙腈；
进样量为1-10μL。
5.根据权利要求1-4中的任一项所述的分析方法，其特征在于，在所述LC-MS/MS分析方法中，质谱检测仪的检测模式为ESI+检测模式，质谱参数包括：
干燥气温度：250-350℃；干燥气流速：3-15L/min；鞘气温度：300-400℃；鞘气流速：8-11L/min；喷雾器：40-50psi；毛细管电压3000-4500V。
6.根据权利要求1-5中的任一项所述的分析方法，其特征在于，所述样品选自血清样品或血液样品，将所述血液样品或血清样品离心得到血浆或血清，然后再进行前处理。
7.根据权利要求1-6中的任一项所述的分析方法，其特征在于，所述蛋白沉淀剂选自乙腈；
和/或，所述样品与蛋白沉淀剂的体积比为1:(5-10)；
和/或，所述样品与内标工作液的体积比为(2-10):1；
和/或，所述上清液与纯水的体积比为1:(1-5)。
8.根据权利要求1-7中的任一项所述的分析方法，其特征在于，所述标准曲线的确定方法包括：
制备至少三种不同浓度的标准溶液，并利用LC-MS/MS分析方法分别对不同浓度的标准溶液进行检测，建立9种抗生素的标准曲线。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的分析方法，其特征在于，所述确定待测样品中9种抗生素的含量的方法为内标法。
10.根据权利要求9所述的分析方法，其特征在于，所述9种抗生素使用的内标物包括头孢哌酮-D5、头孢他啶-D5、美罗培南-D6、利奈唑胺-D3、伏立康唑-D3、氟康唑-D4、哌拉西林-D5、泊沙康唑-D4和伊曲康唑-D5。
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