CN114660200A - 一种高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，该方法使用伏立康唑‑d3和泊沙康唑‑d4稳定同位素为内标(IS)，采用蛋白沉淀法从血浆样品中提取4种待测物和内标。质谱仪采用正离子电喷雾离子化(ESI)模式、采用多离子反应监测(MRM)方案对待测物和内标的母离子和子离子的质荷比(m/z)进行监测。首次提出对血浆中氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑这4种抗真菌药物同时测定，该方法专属性强、样品处理过程简单、分析时间短，方法学验证各参数均符合行业标准，为临床上指导抗真菌药物合理用药及药物浓度监测提供可靠的检测方法。
Description
技术领域
本发明属于临床分析检测领域，具体而言，涉及一种高效液相色谱串联质谱技术同时检测血浆中4种抗真菌药物血药浓度的方法。
背景技术
恶性肿瘤患者、器官移植患者和恶性血液病患者由于放疗、化疗等治疗措施，患者的免疫功能低下，导致患者侵袭性真菌感染的发病率呈逐年上升趋势，死亡率增加。其种，念珠菌和曲霉菌是侵袭性真菌感染的主要病原体。
目前，临床上用于治疗侵袭性真菌感染的三唑类药物，主要有氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑等。氟康唑为第一代三唑类抗真菌药，抗菌谱广作用强，但对曲霉菌无效，一般不作为侵袭性真菌感染重症患者的用药。伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑均为第二代三唑类抗真菌药。伏立康唑是治疗侵袭性曲霉病的首选药物，对多数霉菌有杀菌作用，对氟康唑耐药的光滑念珠菌也有效，对毛霉菌无效。伏立康唑经肝脏代谢，在成人体内呈非线性药动学特征，药动学个体差异较大，并且治疗窗相对较窄(Cmin为0.5～5.5mg/L)，特别对于肝功能损伤的患者，易发生肝功能毒性反应，其他不良反应还有视觉障碍、皮疹、中枢神经系统毒性等。泊沙康唑作为新型三唑类抗真菌药，一般作为治疗侵袭性真菌感染的预防性用药，较同类药物相比，抗菌谱更广，临床上可用于曲霉病、接合菌病及镰刀菌病的治疗，亦可用于部分氟康唑耐药的念珠菌属感染的治疗。泊沙康唑混悬剂的药物吸收程度受食物影响较大，与食物同服会使药物吸收增加400％，与高脂肪食物同服其AUC0～72h增加4倍。缓释片和静脉制剂在增加了血药浓度的同时，也增加了不良反应的发生；并且泊沙康唑是CYP3A4抑制剂，可能会与通过CYP3A4酶代谢的药物产生相互作用，从而使药物清除率增加而使血药浓度降低导致治疗失败。艾沙康唑为最新的广谱抗真菌药，主要用于治疗侵袭性曲霉菌病和毛霉菌病，该药于2021年12月在中国上市。经公开的研究表明，艾沙康唑口服生物利用度高，不受进食影响，具有较好的前药水溶性、较高的生物利用度和可预测的线性药动学性质，不良反应低于其他三唑类药物。艾沙康唑与CYP450系统代谢的药物有明显的相互作用，尤其是同工酶CYP3A4，艾沙康唑是CYP3A4的底物，CYP3A4抑制药或诱导药可影响艾沙康唑的血浆浓度，从而引发药物不良反应或使药物体内清除率加快，影响药物疗效。
抗菌药物血药浓度检测的方法主要有高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)、免疫学方法。其中应用液相色谱串联质谱法检测抗真菌药物，具有高灵敏度、高特异性、高选择性、分析时间短、分析效率高、检测结果准确等优点。目前，已有文献和专利报道关于使用液相色谱串联质谱法检测一种或同时检测几种抗真菌药。如中国专利，公布号：CN112748198A一种液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法装置，该专利文中提到配制7种浓度的标准工作液，未明确表示可以检测哪7种抗真菌药物。中国专利，公布号：CN112326824A公开了一种同时测定血浆中6种一线抗结核药物及抗菌药物伏立康唑血药浓度的方法，该专利只针对伏立康唑这一种抗真菌药进行检测，未提及其他临床上常用抗真菌药的检测；中国专利，公布号：CN111766312A公开了一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法，该方法虽然同时检测7种抗真菌药，但未提供最新的抗真菌药物艾沙康唑的检测方法；该方法检测的基质为血清，未提供临床上另一种常用检测基质血浆的检测方法；并且此发明采用7个不同浓度点配制标准曲线。目前，对艾沙康唑治疗药物的监测领域尚为空白，同时由于伏立康唑具有非线性药代动力学的特征，并且目前无同时检测氟康唑、伏立康唑、艾沙康唑和泊沙康唑的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效液相色谱串联质谱技术同时检测血浆中4种抗真菌药物血药浓度的方法。可以一次性对这4种抗菌药的血药浓度进行检测，为临床实现个体化给药，减少不良反应，指导临床医生合理使用抗菌药提供依据。
本发明的技术方案为：
一种高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，4种抗真菌药物包括氟康唑(Fluconazole，FCZ)、伏立康唑(Voriconazole，VCZ)、泊沙康唑(Posaconazole，PCZ)、艾沙康唑(Isavuconazole，ICZ)；将4种三唑类抗真菌药的标准品粉末中加入配制成标准品储备溶液，随后用稀释液配制成8个不同浓度的标准曲线工作溶液、4个不同浓度的质控工作溶液，再以一定比例稀释到血浆基质中，得到标准曲线中各浓度样品和质控样品，再将标准曲线中各浓度样品和质控样品与预先配制好的混合内标工作液混合，经振荡涡旋后，离心，上清液与一定比例的稀释液混匀后，取适量溶液用液质联用仪进行分析，以药物浓度为X轴，以药物峰面积与内标峰面积的比值为Y轴，绘制标准曲线；将临床待测样品与预先配制好的内标工作液混合，经振荡涡旋后，离心，上清液与一定比例的稀释液混匀后，取适量溶液用液质联用仪进行分析，根据标准曲线计算出临床待测样品中各药物的浓度，
液相色谱条件：
流动相A为甲酸/水的混合溶液或乙酸/水的混合溶液；流动相B为甲酸/乙腈的混合溶液或乙酸/乙腈的混合溶液；洗针液为乙腈/水/异丙醇/甲醇/甲酸的混合溶液，乙腈/水/异丙醇/甲醇/乙酸的混合溶液，乙腈/水/甲酸的混合溶液，乙腈/水/乙酸的混合溶液中的一种，
采用梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：0.00～0.20min，流动相A和流动相B的比例为85.0％：15.0％；0.20～1.50min，流动相A和流动相B的比例为85.0～40.0％：15.0～60.0％；1.50～4.00min，流动相A和流动相B的比例为40.0～10.0％：60.0～90.0％；4.00～4.50min，流动相A和流动相B的比例为10.0％：90.0％；4.50～4.60min，流动相A和流动相B的比例为10.0～85.0％：90.0～15.0％；4.60～6.00min，流动相A和流动相B的比例为85.0％：15.0％；流速为0.3～0.5mL/min，进样量为2～5μL,样品采集时间为6.0min，进样器温度4℃，柱温为室温。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，质谱条件为：采用电喷雾离子源，正离子模式，多离子反应监测方案，雾化气为氮气；质谱条件为：干燥气温度350℃,干燥气流速5L/min,雾化气压力45psi,辅助气体温度350℃,辅助气体流速11L/min,毛细管电压3500V，
表3
待测物和内标的离子对及质谱参数见以上表3。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，液相色谱条件为：流动相A为含0.1％甲酸的水溶液；流动相B为含0.1％甲酸的乙腈水溶液；洗针液为含0.1％甲酸的乙腈/水混合溶液，其中乙腈与水的体积比为4:1。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，混合内标工作溶液是用蛋白质沉淀剂配制的伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4的混合内标工作溶液。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，蛋白质沉淀剂为甲醇、乙腈或体积比为1:1的甲醇和乙腈的混合溶液，混合内标工作溶液中的伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4浓度分别为1000ng/mL、2000ng/mL。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，液相色谱条件中的色谱柱为Eclipse Plus C18：100×2.1mm，3.5μm。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑的标准品储备溶液浓度均为1.00mg/mL，以及标准品储备液的溶解剂为二甲基亚砜、甲醇或乙腈。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，取氟康唑、艾沙康唑储备溶液各80.0μL、伏立康唑、泊沙康唑各40.0μL，加入260μL稀释液中，配制成最高浓度的工作溶液，然后依次由高到低稀释；取各浓度混合工作溶液20.0μL分别加入至180μL空白血浆基质中，依次得到标准曲线中各浓度样品，其中，氟康唑的浓度分别为：16.0μg/mL、12.8μg/mL、8.00μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.400μg/mL、0.200μg/mL；伏立康唑的浓度分别为：8.00μg/mL、6.40μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.500μg/mL、0.200μg/mL、0.100μg/mL；艾沙康唑的浓度分别为：16.0μg/mL、12.8μg/mL、8.00μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.400μg/mL、0.200μg/mL；泊沙康唑的浓度分别为：8.00μg/mL、6.40μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.500μg/mL、0.200μg/mL、0.100μg/mL。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，标准曲线中各浓度样品、质控样品和临床待测样品中的血浆样品的处理方法如下：取50.0μL血浆样品于1.5mL离心管中，再加入200μL含混合内标的工作溶液，经振荡涡旋2min，在2～8℃和14000rpm条件下离心5min，取上清液200μL加入到200μL稀释液中，混合均匀，取100μL加入塑料内插管中，用液质联用仪进行分析。
优选的，在上述高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法中，稀释液为体积比为1:1的甲醇/水或乙腈/水溶液，或为含0.1％甲酸或乙酸的体积比为1:1的甲醇/水或乙腈/水混合溶液。
本发明技术方案的有益效果：
本发明方法应用高效液相色谱串联质谱技术可以同时检测血浆中氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑4种抗真菌药物的血药浓度。该检测方法线性良好、灵敏度高、分析时间短，对待测物和内标具有专属性，方法学验证各项参数均符合要求，可满足临床高通量样品检测需求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例提供的4种三唑类抗真菌药的总离子流图；
图2为本发明实施例提供的空白血浆的色谱图；
图3为本发明实施例提供的氟康唑和内标的色谱图；
图4为本发明实施例提供的伏立康唑和内标的色谱图；
图5为本发明实施例提供的艾沙康唑和内标的色谱图；
图6为本发明实施例提供的泊沙康唑和内标的色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。
一种高效液相色谱串联质谱技术同时检测血浆中氟康唑(Fluconazole，FCZ)、伏立康唑(Voriconazole，VCZ)、泊沙康唑(Posaconazole，PCZ)、艾沙康唑(Isavuconazole，ICZ)4种抗真菌药物血药浓度的方法，包括以下步骤：将4种抗真菌药的标准品粉末中加入溶解剂配制成标准品储备溶液。随后用稀释液配制成8个不同浓度的标准曲线工作溶液、4个不同浓度的质控工作溶液，再以一定比例稀释到血浆基质中，得到标准曲线中各浓度样品和质控样品，再将标准曲线中各浓度样品和质控样品与预先配制好的内标工作液混合，经振荡涡旋后，离心，上清液与一定比例的稀释液混匀后，取适量溶液用液质联用仪进行分析。以药物浓度为X轴，以药物峰面积与内标峰面积的比值为Y轴，绘制标准曲线；测定临床待测样品与预先配制好的内标工作液混合，经振荡涡旋后，离心，上清液与一定比例的稀释液混匀后，取适量溶液用液质联用仪进行分析，再根据标准曲线计算出临床样品中各药物的浓度。其中，血浆是人或动物的血浆。
该方法使用伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4稳定同位素为内标(IS)，采用蛋白沉淀法从血浆样品中提取4种待测物和内标。质谱仪采用正离子电喷雾离子化(ESI)模式、采用多离子反应监测(MRM)方案对待测物和内标的母离子和子离子的质荷比(m/z)进行监测。由于伏立康唑具有非线性药代动力学的特征，因此本发明检测方法中设置8个浓度建立标准曲线，增加测定结果的准确性。
本发明方法可以同时检测血浆中氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑这4种抗真菌药物的血药浓度，该方法专属性强、样品处理过程简单、分析时间短，方法学验证各参数均符合行业标准，为临床上指导抗真菌药物合理用药及药物浓度监测提供可靠的检测方法。
实施例
1.实验材料
(1)试剂耗材：乙腈、甲醇、异丙醇、二甲基亚砜、水、甲酸及乙酸均为色谱纯(Fisher)；色谱柱Agilent Eclipse Plus C18(100×2.1mm,3.5μm)。
(2)药品：氟康唑(中国药品生物制品检定所，批号100314-201906)；伏立康唑(中国药品生物制品检定所，批号100862-201903)；泊沙康唑(北京阳光英锐生物科技有限公司，508B02)；艾沙康唑(APEXBIO，批号B4826213377BD)；伏立康唑-d3(TLC，批号2944-044A4)；泊沙康唑-d4(ISOREAG，批号ZZS-20-X227-A2)。
(3)仪器：6460Triple Quad LC/MS(Agilent)；1260高效液相色谱仪(Agilent)；多管漩涡混合仪(TARGIN-TECH)；Vortex(DLAB)；离心机(Sigma)。
(4)样品来源于中国人民解放军总医院收集的生物样品。
(5)在下面溶液配制及样品处理方法中所用的稀释液为甲醇/水或乙腈/水(v/v,1:1)溶液，或为含0.1％甲酸(或乙酸)的甲醇/水或乙腈/水(v/v,1:1)混合溶液。优选地，稀释液为含0.1％甲酸的乙腈/水(v/v,1:1)溶液。
2.液相色谱条件
流动相A：含0.1％甲酸的水溶液；流动相B：含0.1％甲酸的乙腈水溶液；洗针液：含0.1％甲酸的乙腈/水混合溶液，其中乙腈：超纯水＝4:1(v/v)；
在其他实施例中，流动相A：含0.1％乙酸的水溶液；流动相B：含0.1％乙酸的乙腈水溶液；洗针液：含0.1％甲酸(或乙酸)的乙腈/水/异丙醇/甲醇混合溶液，其中乙腈/水/异丙醇/甲醇的体积比为1:1:1:1。
色谱柱为Eclipse Plus C18(100×2.1mm，3.5μm)；其中，流动相中使用的水为蒸馏水或超纯水；样品采集时间为6.0min，进样器温度4℃；柱温为室温，进样体积5μL。采用梯度洗脱方式，洗脱程序见表1：
表1
3.质谱条件
采用电喷雾离子源，正离子模式，多离子反应监测方案，雾化气为氮气，质谱条件见表2。
表2
待测物和内标的离子对及质谱参数见表3：
表3
2.溶液配制及样品处理方法
(1)待测物标准品储备液的配制
用适量二甲基亚砜(DMSO)配制氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑标准品，使其浓度均为1.00mg/mL，于-20℃冰箱中保存备用。
(2)混合内标工作溶液的配制
配制内标工作液的溶液为甲醇、乙腈溶液或甲醇/乙腈的混合溶液。优选的，用蛋白质沉淀剂(甲醇/乙腈(v/v，1:1)溶液)配制伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4的混合内标工作溶液，使伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4浓度分别为1000ng/mL、2000ng/mL，混合内标直接配制在蛋白质沉淀剂中。
(3)标准曲线、质控工作溶液的配制
8个不同浓度的标准曲线工作溶液的配制：精密吸取氟康唑、艾沙康唑储备溶液各80.0μL、伏立康唑、泊沙康唑各40.0μL，加入260μL稀释液中，配制成最高浓度的工作溶液，然后依次由高到低稀释，得到8个不同浓度的标准曲线工作溶液。
4个不同浓度的质控样品工作溶液的配制：精密吸取氟康唑、艾沙康唑储备溶液各42.0μL、伏立康唑、泊沙康唑各21.0μL，加入224μL稀释液中，配制成HQC最高浓度的工作溶液，然后依次由高到低稀释，得到4个不同浓度的工作溶液。
(4)标准曲线中各浓度样品和质控样品的配制
将(3)中配制的8个不同浓度的标准曲线工作溶液、4个不同浓度的质控工作溶液以一定比例稀释到血浆基质中。具体地，取上述(3)中各浓度混合工作溶液20.0μL分别加入至180μL空白血浆基质中，依次得到标准曲线中各浓度样品和质控样品。其中，氟康唑的浓度分别为：16.0μg/mL、12.8μg/mL、8.00μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.400μg/mL、0.200μg/mL；伏立康唑的浓度分别为：8.00μg/mL、6.40μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.500μg/mL、0.200μg/mL、0.100μg/mL；艾沙康唑的浓度分别为：16.0μg/mL、12.8μg/mL、8.00μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.400μg/mL、0.200μg/mL；泊沙康唑的浓度分别为：8.00μg/mL、6.40μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.500μg/mL、0.200μg/mL、0.100μg/mL。
(5)血浆样品的预处理
其中，血浆样品包括标准曲线中各浓度样品、质控样品以及临床待测样品中的血浆样品，其预处理方法相同。预处理方法为：取50.0μL血浆样品于1.5mL离心管中，再加入200μL混合内标工作溶液，经振荡涡旋2min，14000rpm(2～8℃)条件下离心5min，取上清液200μL加入到200μL稀释液中，混合均匀，取100μL加入塑料内插管中，用液质联用仪进行分析。
本发明方法中的检测基质为血浆，相对于血清基质，采用血浆基质，采集全血样本后，直接离心获得待检测样品，直接进入抗真菌药物的检测环节，使得本发明检测步骤更加简化快捷；且相对于血清基质的检测，需要更少量的全血样本，即，可以从人或动物采集更少的血液就可以满足检测要求。
3.方法学验证
氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑的总离子流图见图1；空白血浆检测色谱图见图2。氟康唑、伏立康唑、艾沙康唑和泊沙康唑和内标的色谱图见图3-图6；
(1)标准曲线：采用内标法，以药物浓度为X轴，以药物峰面积与内标峰面积的比值为Y轴，用加权重1/X2最小二乘法进行回归计算，绘制标准曲线，各药物线性回归方程、线性范围及相关系数见下表4所示。
表4
(2)准确度和精密度
准确度与精密度实验分别在三个批次考察，并在至少2天进行。准确度与精密度实验质控样品考察当日新鲜配制。每一个准确度与精密度分析批包含4个浓度水平的质控验证样品，包括定量下限浓度(LLOQ)、低浓度(LQC)、中浓度(MQC)和高浓度(HQC)，每个浓度6个样品，4个化合物的准确度与精密度均符合要求，结果见表5。
表5
(3)加样回收率和基质效应考察见表6
表6
通过比较经过提取的样品与未经过提取的样品中分析物和内标的响应值计算回收率。经考察，4个化合物的低、中、高浓度的提取回收率变异系数分别在15.0％以内，三个浓度间的提取回收率变异系数在15.0％以内，符合行业标准。
(5)基质效应考察结果见表7。
表7
选用6个不同批次的人个体血浆计算得到的用于评价基质因子的内标归一化基质因子，并在低、中，高浓度水平分别进行考察，基质因子在0.83-1.04之间，且变异系数(％)均小于15.0％，基本无基质效应影响。
(6)血浆样品稳定性
本发明考察了4个化合物的血浆样品在室温下放置、四次冻融循环(-20℃、-80℃)条件下的稳定性，低、高浓度下的偏差值均小于15.0％，符合行业标准，说明本发明同时测定4种抗真菌药时检测稳定性较好。结果见表8。
表8
综上所述，本发明提供了一种应用高效液相色谱串联质谱技术同时检测血浆中氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑和艾沙康唑血药浓度的方法，采用同位素内标，大大减少了基质效应的影响，并且不受临床样品中结构类似物的干扰，增加了检测结果的准确性。该检测方法线性良好，方法学验证各参数均符合行业标准，灵敏度高、分析时间短、专属性强、准确度和精密度较好、提取回收率高、方法可重复性强，可满足临床高通量样品检测需求。采用蛋白沉淀法可简化样品前处理程序，提高检测效率。本发明实现了同时检测血浆样品中4种抗菌药的血药浓度，尤其填补了艾沙康唑的检测方法，为临床上指导合理用药提供依据。
以上所描述的实施例仅用于详细解释本发明的技术要点，不构成对本发明的限制；对于同行业的技术人员应当明确：如果对本发明所描述的实施例和技术要点进行等同替换、优化改进等，均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，所述4种三唑类抗真菌药物包括氟康唑(Fluconazole，FCZ)、伏立康唑(Voriconazole，VCZ)、泊沙康唑(Posaconazole，PCZ)、艾沙康唑(Isavuconazole，ICZ)；
将所述4种三唑类抗真菌药的标准品粉末中加入配制成标准品储备溶液，随后用稀释液配制成8个不同浓度的标准曲线工作溶液、4个不同浓度的质控工作溶液，再以一定比例稀释到血浆基质中，得到标准曲线中各浓度样品和质控样品，再将所述标准曲线中各浓度样品和所述质控样品与预先配制好的混合内标工作液混合，经振荡涡旋后，离心，上清液与一定比例的稀释液混匀后，取适量溶液用液质联用仪进行分析，以药物浓度为X轴，以药物峰面积与内标峰面积的比值为Y轴，绘制标准曲线；
将临床待测样品与预先配制好的内标工作液混合，经振荡涡旋后，离心，上清液与一定比例的稀释液混匀后，取适量溶液用液质联用仪进行分析，根据标准曲线计算出临床待测样品中各药物的浓度，液相色谱条件：
流动相A为甲酸/水的混合溶液或乙酸/水的混合溶液；流动相B为甲酸/乙腈的混合溶液或乙酸/乙腈的混合溶液；洗针液为乙腈/水/异丙醇/甲醇/甲酸的混合溶液，乙腈/水/异丙醇/甲醇/乙酸的混合溶液，乙腈/水/甲酸的混合溶液，乙腈/水/乙酸的混合溶液中的一种，
采用梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：0.00～0.20min，所述流动相A和所述流动相B的比例为85.0％：15.0％；0.20～1.50min，所述流动相A和所述流动相B的比例为85.0～40.0％：15.0～60.0％；1.50～4.00min，所述流动相A和所述流动相B的比例为40.0～10.0％：60.0～90.0％；4.00～4.50min，所述流动相A和所述流动相B的比例为10.0％：90.0％；4.50～4.60min，所述流动相A和所述流动相B的比例为10.0～85.0％：90.0～15.0％；4.60～6.00min，所述流动相A和所述流动相B的比例为85.0％：15.0％；流速为0.3～0.5mL/min，进样量为2～5μL,样品采集时间为6.0min，进样器温度4℃，柱温为室温。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，质谱条件为：
采用电喷雾离子源，正离子模式，多离子反应监测方案，雾化气为氮气；质谱条件为：干燥气温度350℃,干燥气流速5L/min,雾化气压力45psi,辅助气体温度350℃,辅助气体流速11L/min,毛细管电压3500V,
表3
其中，待测物和内标的离子对及质谱参数见表3。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，液相色谱条件为：流动相A为含0.1％甲酸的水溶液；流动相B为含0.1％甲酸的乙腈水溶液；洗针液为含0.1％甲酸的乙腈/水混合溶液，其中乙腈与水的体积比为4:1。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，所述混合内标工作溶液是用蛋白质沉淀剂配制的伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4的混合内标工作溶液。
5.根据权利要求4所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，所述蛋白质沉淀剂为甲醇、乙腈或体积比为1:1的甲醇和乙腈的混合溶液，所述混合内标工作溶液中伏立康唑-d3和泊沙康唑-d4的浓度分别为1000ng/mL、2000ng/mL。
6.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，所述液相色谱条件中的色谱柱为Eclipse Plus C18：100×2.1mm，3.5μm。
7.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，氟康唑、伏立康唑、泊沙康唑、艾沙康唑的标准品储备溶液浓度均为1.00mg/mL，以及所述标准品储备液的溶解剂为二甲基亚砜、甲醇或乙腈。
8.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，取氟康唑、艾沙康唑储备溶液各80.0μL、伏立康唑、泊沙康唑各40.0μL，加入260μL稀释液中，配制成最高浓度的工作溶液，然后依次由高到低稀释；取各浓度混合工作溶液20.0μL分别加入至180μL空白血浆基质中，依次得到标准曲线中各浓度样品，其中，氟康唑的浓度分别为：16.0μg/mL、12.8μg/mL、8.00μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.400μg/mL、0.200μg/mL；伏立康唑的浓度分别为：8.00μg/mL、6.40μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.500μg/mL、0.200μg/mL、0.100μg/mL；艾沙康唑的浓度分别为：16.0μg/mL、12.8μg/mL、8.00μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.400μg/mL、0.200μg/mL；以及泊沙康唑的浓度分别为：8.00μg/mL、6.40μg/mL、4.00μg/mL、2.00μg/mL、1.00μg/mL、0.500μg/mL、0.200μg/mL、0.100μg/mL。
9.根据权利要求1所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，所述标准曲线中各浓度样品、所述质控样品和所述临床待测样品中的血浆样品的处理方法如下：取50.0μL血浆样品于1.5mL离心管中，再加入200μL含混合内标的工作溶液，经振荡涡旋2min，在2～8℃和14000rpm条件下离心5min，取上清液200μL加入到200μL稀释液中，混合均匀，取100μL加入塑料内插管中，用液质联用仪进行分析。
10.根据权利要求1-9任一项所述的高效液相色谱串联质谱技术同时测定血浆中4种三唑类抗真菌药物血药浓度的方法，其特征在于，所述稀释液为体积比为1:1的甲醇/水或乙腈/水溶液，或为含0.1％甲酸或乙酸的体积比为1:1的甲醇/水或乙腈/水混合溶液。
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115389650A (zh) * | 2022-07-22 | 2022-11-25 | 四川大学华西医院 | Uplc-ms/ms法同时测定人血浆中缬沙坦、沙库巴曲及其代谢物浓度的方法 |
| CN115480009A (zh) * | 2022-09-14 | 2022-12-16 | 郑州大学第一附属医院 | 一种同时测定泊沙康唑、伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法 |
| CN115754090A (zh) * | 2022-12-15 | 2023-03-07 | 华夏生生药业(北京)有限公司 | 一种lc-ms检测氟康唑相关杂质的方法 |
| CN115902068A (zh) * | 2022-12-30 | 2023-04-04 | 武汉大学人民医院（湖北省人民医院） | 一种药物成分检测方法及装置 |
| CN116087350A (zh) * | 2022-07-25 | 2023-05-09 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种同时检测血液中9种抗生素的lc-ms/ms分析方法 |
| CN117330660A (zh) * | 2023-09-14 | 2024-01-02 | 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） | Uplc-ms/ms联用检测艾沙康唑的方法及应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140031366A1 (en) * | 2010-12-16 | 2014-01-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Azole pharmaceutical formulations for parenteral administration and methods for preparing and using the same as treatment of diseases sensitive to azole compounds |
| CN109030672A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-12-18 | 易达精准（杭州）科技有限公司 | 同时测定干血斑中四种抗真菌药物的试剂盒及其应用 |
| CN111766312A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-10-13 | 南京品生医学检验实验室有限公司 | 一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法 |
| CN112748198A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-05-04 | 苏州苏研药物分析测试科技有限公司 | 一种液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法装置 |
-
2022
- 2022-03-29 CN CN202210316336.3A patent/CN114660200A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140031366A1 (en) * | 2010-12-16 | 2014-01-30 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Azole pharmaceutical formulations for parenteral administration and methods for preparing and using the same as treatment of diseases sensitive to azole compounds |
| CN109030672A (zh) * | 2018-07-04 | 2018-12-18 | 易达精准（杭州）科技有限公司 | 同时测定干血斑中四种抗真菌药物的试剂盒及其应用 |
| CN111766312A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-10-13 | 南京品生医学检验实验室有限公司 | 一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法 |
| CN112748198A (zh) * | 2020-12-24 | 2021-05-04 | 苏州苏研药物分析测试科技有限公司 | 一种液相色谱串联质谱技术检测血清中抗真菌药物的方法装置 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| A.J. MCSHANE等: "Development and validation of a liquid chromatography-tandem mass spectrometry assay for the simultaneous quantitation of 5 azole antifungals and 1 active metabolite", 《CLINICACHIMICAACTA》 * |
| GIOVANNA FATIGUSO等: "A simple high performance liquid chromatography–mass spectrometry method for Therapeutic Drug Monitoring of isavuconazole and four other antifungal drugs in human plasma samples", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 * |
| MARTIAL, L.C.等: "Individualized drug dosing - it"s all about concentrations", 《HTTPS://REPOSITORY.UBN.RU.NL/HANDLE/2066/173472》 * |
| 张元元等: "LC-MS/MS同时测定人血浆中伏立康唑和泊沙康唑的浓度", 《中国临床药理学杂志》 * |
| 张素洁等: "液相色谱-串联质谱法同时测定血清中5个三唑类抗真菌药物浓度及其治疗药物监测应用", 《药物分析杂志》 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115389650A (zh) * | 2022-07-22 | 2022-11-25 | 四川大学华西医院 | Uplc-ms/ms法同时测定人血浆中缬沙坦、沙库巴曲及其代谢物浓度的方法 |
| CN116087350B (zh) * | 2022-07-25 | 2023-10-24 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种同时检测血液中9种抗生素的lc-ms/ms分析方法 |
| CN116087350A (zh) * | 2022-07-25 | 2023-05-09 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种同时检测血液中9种抗生素的lc-ms/ms分析方法 |
| CN116106435A (zh) * | 2022-07-25 | 2023-05-12 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种含有9种抗生素的标准溶液的制备方法及应用 |
| CN116183736A (zh) * | 2022-07-25 | 2023-05-30 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 同时检测肺泡灌洗液中9种抗生素的lc-ms/ms分析方法 |
| CN116106435B (zh) * | 2022-07-25 | 2023-10-24 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 一种含有9种抗生素的标准溶液的制备方法及应用 |
| CN116183736B (zh) * | 2022-07-25 | 2024-02-09 | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 | 同时检测肺泡灌洗液中9种抗生素的lc-ms/ms分析方法 |
| CN115480009A (zh) * | 2022-09-14 | 2022-12-16 | 郑州大学第一附属医院 | 一种同时测定泊沙康唑、伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法 |
| CN115480009B (zh) * | 2022-09-14 | 2024-05-07 | 郑州大学第一附属医院 | 一种同时测定泊沙康唑、伏立康唑和维奈克拉血药浓度的方法 |
| CN115754090A (zh) * | 2022-12-15 | 2023-03-07 | 华夏生生药业(北京)有限公司 | 一种lc-ms检测氟康唑相关杂质的方法 |
| CN115754090B (zh) * | 2022-12-15 | 2023-08-29 | 华夏生生药业(北京)有限公司 | 一种lc-ms检测氟康唑相关杂质的方法 |
| CN115902068A (zh) * | 2022-12-30 | 2023-04-04 | 武汉大学人民医院（湖北省人民医院） | 一种药物成分检测方法及装置 |
| CN117330660A (zh) * | 2023-09-14 | 2024-01-02 | 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） | Uplc-ms/ms联用检测艾沙康唑的方法及应用 |
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