CN117330660A - Uplc-ms/ms联用检测艾沙康唑的方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种UPLC‑MS/MS联用检测艾沙康唑的方法及应用，涉及生物分析领域。该方法包括：取艾沙康唑标准品，以溶剂溶解，稀释，配制成标准溶液；取艾沙康唑‑d4，以溶剂溶解，稀释，配制成内标液；将样品进行样品前处理，得到待测样品；将标准溶液进行标准品前处理，得到待测标准溶液；将待测标准溶液通过超高效液相色谱‑质谱法进行检测，构建标准曲线；将待测样品通过超高效液相色谱‑质谱法进行检测，得到检测图谱，将检测图谱与标准曲线进行比较，得到检测结果。该方法所需样品量少、操作简单，重现性好，灵敏度高，分析速度快，基质效应影响小，提取回收率高，线性范围较宽，适用于各种剂量艾沙康唑的血药浓度的评估。

Description

UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑的方法及应用

技术领域

本发明涉及生物分析领域，特别是涉及UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑的方法及应用。

背景技术

侵袭性真菌感染的病原体正变得越来越普遍，并且对目前仅有的几种抗真菌药物治疗往往存在较大的副作用。如伏立康唑，两性霉素B等主流治疗药物均需要定时进行药物血药浓度监测保证其药物安全有效。

目前，新型三唑类抗真菌药物艾沙康唑是Basilea开发的一种新型抗真菌药，欧洲白血病感染会议(ECIL-6)和欧洲临床微生物学和感染病学会(ESCMID)/欧洲医学真菌学联合会(ECMM)发布的侵袭性曲霉病指南，均推荐艾沙康唑作为治疗血液病患者侵袭性曲霉病的一线治疗方案。作为一种新上市的具有广谱抗真菌活性的新型三唑类药物，临床应用反响好，但同样存在各种药物不良反应，因此及时实施血药浓度监测是势在必行的。

现有文献报道中使用HPLC-UV、HPLC-FL、HPLC-UV/FL以及LC/MS/MS等方法对血浆中艾沙康唑进行检测。这些方法通常存在着前处理复杂、耗时，血浆用量大，分析时间长及定量下限高等缺点。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑的方法，该方法所需样品量少、操作简单，重现性好，灵敏度高，分析速度快，基质效应影响小，提取回收率高，线性范围较宽，适用于各种剂量艾沙康唑的血药浓度的评估。

为了达到上述目的，本发明提供一种UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑的方法，包括以下步骤：

配制标准溶液：取艾沙康唑标准品，以溶剂溶解，稀释，配制成标准溶液；

配制内标液：取艾沙康唑-d4，以溶剂溶解，稀释，配制成内标液；

处理样品：将样品进行样品前处理，得到待测样品；将标准溶液进行标准品前处理，得到待测标准溶液；

检测：将待测标准溶液通过超高效液相色谱-质谱法进行检测，构建标准曲线；将待测样品通过超高效液相色谱-质谱法进行检测，得到检测图谱，将检测图谱与标准曲线进行比较，得到检测结果。

本发明人在针对艾沙康唑的研究过程中发现，艾沙康唑由于其前药分为硫酸艾沙康唑注射液和艾沙康唑硫酸酯胶囊两种剂型，患者服用后在体内经血浆丁酰胆碱酯酶水解后得到的成分包括了活性药物和无活性成分，活性药物为艾沙康唑，再加上艾沙康唑的高度蛋白结合性能(大于99％)，均对药物血药浓度检测带来极大的干扰。并且，常规的色谱质谱方法对待测样品的纯净度要求极高，对大分子蛋白质及其他大分子物质的分离处理复杂，耗时，同时需要大量的血浆进行前处理，分析时间长，又由于艾沙康唑的基质效应的影响以及仪器的局限性，定量下限高，因此，常规的色谱质谱方法难以应用于艾沙康唑的临床检测当中。而超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)作为以高效液相色谱法(HPLC)为基础的技术，其超高压和极小的粒径能够较快地实现样品分离，并且缩短检测时间，超高效液相色谱-质谱仪自带超高压输液泵，高速采样速度的灵敏检测器，低扩散、低交叉污染自动进样器，与传统的HPLC相比，超高效液相色谱(UPLC)的速度、灵敏度及分离度分别是高效液相色谱法(HPLC)的9倍、3倍及1.7倍，不仅缩短了分析时间，同时减少了溶剂用量降低了分析成本。而理想的内标物应当能以准确、已知的量加到样品中去，和被分析的样品有基本相同或尽可能一致的物理化学性质、色谱行为和响应特征，因此，在采用内标法时，内标物的选择是一项十分重要的工作。基于上述原因，本发明人提出，采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)检测样品中艾沙康唑时，同时采用艾沙康唑-d4作为内标，艾沙康唑-d4为同位素内标，使得内标与样品中的艾沙康唑，二者在溶解性及色谱保留行为基本一致，在色谱分析条件下，内标物能与样品中各组分充分分离，重现性、准确度均较好，进而使最终构建得到的方法所需样品量少、操作简单，重现性好，灵敏度高，分析速度快，基质效应影响小，提取回收率高，线性范围较宽，适用于各种剂量艾沙康唑的血药浓度的评估。

在其中一个实施例中，所述处理样品步骤中，所述样品前处理包括以下步骤：取样品，加入内标液和沉淀剂，振荡，离心，取上清液，将上清液与复溶液混合，得到待测样品；

所述处理样品步骤中，所述标准品前处理包括以下步骤：取标准溶液，加入内标液和沉淀剂，振荡，离心，取上清液，将上清液与复溶液混合，得到待测标准溶液。

采用上述蛋白沉淀法对样品进行前处理，可以简化样品前处理步骤，节省时间，且使用的试剂危害更小，可以避免血浆中基质杂峰对化合物峰形的影响，使检测方法选择性更高，定量下限更低，同时获得高回收率。艾沙康唑的总体提取回收率可达到101.11％。

在其中一个实施例中，所述处理样品步骤中，样品、内标液、沉淀剂的体积比为1：1：(8-12)；

所述处理样品步骤中，标准溶液、内标液、沉淀剂的体积比为1：1：(8-12)；

所述配制标准溶液步骤中，所述溶剂包括甲醇，所述稀释的稀释液包括乙腈；

所述配制内标液步骤中，所述溶剂包括甲醇，所述稀释的稀释液包括乙腈，所述内标液的艾沙康唑-d4的工作浓度为4.5-5.5μg/mL。

上述工作浓度为上述成分在使用时能够达到预期效果的浓度，可以理解的，本领域技术人员在配制上述内标液时，可以配制浓度更高的母液或者储备液，待使用时再稀释，所述母液或者储备液及其浓度均在本发明的保护范围之内。

在其中一个实施例中，所述样品、内标液、沉淀剂的体积比为1：1：10。

在其中一个实施例中，所述标准溶液、内标液、沉淀剂的体积比为1：1：10。

在其中一个实施例中，所述沉淀剂包括乙腈，所述复溶液包括乙腈；所述振荡的转速为1500-2500rpm/min，所述振荡的时间为25-35s，所述离心的温度为24-28℃，所述离心的转速为12500-13500rpm/min，所述离心的时间为15-25min。

在其中一个实施例中，所述复溶液包括体积比为1：(0.8-1.2)的乙腈和水。

在其中一个实施例中，所述沉淀剂为体积浓度50％的乙腈溶液。

在其中一个实施例中，所述振荡的转速为2000rpm/min，所述振荡的时间为30s，所述离心的温度为26℃，所述离心的转速为13000rpm/min，所述离心的时间为20min。

在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱法的液相条件包括：

固定相：亚乙基桥杂化颗粒为填料的色谱柱；

流动相：以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；所述流动相A为甲酸的水溶液，所述流动相B为甲酸的乙腈溶液。

在其中一个实施例中，所述色谱柱为BEH C18色谱柱，长度为150mm，直径为2.1mm，填料粒径为1.7μm；

所述流动相A的甲酸的体积百分比为0.1-1％；所述流动相B的甲酸的体积百分比为0.1-0.15％。

高效液相色谱中常使用粒径为5μm的十八烷基硅胶键合柱，而本发明中采用超高效液相色谱，其色谱柱的粒径为1.7μm，这样的粒径更加有利于物质分离。同时，超高效液相色谱的超高压和极小粒径的填料，虽然有利于样品分离，缩短检测时间，但同时会产生高压损坏设备或高压导致样品变形的风险，因此，要将超高效液相色谱-质谱法较好地应用于艾沙康唑的检测，其色谱柱和填料的选择非常关键。对色谱柱的要求：柱效高、选择性好，分析速度快等。本发明人提出采用甲酸的超纯水溶液和0.1％甲酸的乙腈溶液作为流动相，以BEH C18作为色谱柱，在其他条件的配合下，内源性物质不干扰样品的测定，且血浆样品用量少、样品前处理简单、分析时间短、线性范围宽、重现性好、灵敏度高、基质效应影响小。理论上，在仪器能够承受的压力范围内选择粒径最小的填料，样品分离的效果会最理想，但粒径越小也就意味着压力越高，伴随而来的仪器泄露、色谱柱堵塞等问题的风险也就越高，因此，并非粒径越小的填料越适用于艾沙康唑的检测应用中。本发明人根据艾沙康唑本身的性质，对色谱柱和填料进行反复选择，以缩短检测时间为导向，兼顾最终构建得到的方法能够具有较好的普及性，选择上述色谱柱和1.7μm粒径的填料，再与特定的梯度洗脱流程相配合，最终使检测时间缩短为2.5min，极大地提高了艾沙康唑的检测效率，并且具有较高的精准度和批间一致性。

在其中一个实施例中，所述流动相A为甲酸体积百分数0.1％的水溶液，所述流动相B为甲酸体积百分数0.1％的乙腈溶液。

在其中一个实施例中，所述梯度洗脱条件为：

0-0.5min，流动相A与流动相B的体积比为90:10；

0.5-0.8min，流动相A与流动相B的体积比由90:10变化至70:30；

0.8-1.1min，流动相A与流动相B的体积比由70:30变化至1:99；

1.1-2.2min，流动相A与流动相B的体积比为1:99；

2.2-2.5min，流动相A与流动相B的体积比由1:99变化至90:10。

采用上述梯度洗脱的方式进行分析，分析的时间短，大大缩短了分析时间，使大批量生物样本分析更加方便、可行。

在其中一个实施例中，所述液相条件还包括：

流速：0.3-1.0mL/min；

柱温：35-45℃；

进样口温度：3-5℃；

进样量：500-600μL。

在其中一个实施例中，所述液相条件还包括：

流速：0.5mL/min；

柱温：40℃；

进样口温度：4℃；

进样量：550μL。

在其中一个实施例中，所述超高效液相色谱-质谱法的质谱条件包括：

离子源：ESI正离子离子源；

监测模式：多重反应监测模式；

离子源温度：400-550℃；

艾沙康唑的监测离子对为：438.13→369.09，去簇电压为35-45V，碰撞电压为18-22V；艾沙康唑-d4的监测离子对为：442.15→373.12，去簇电压为35-45V，碰撞电压为18-22V。

在其中一个实施例中，艾沙康唑的监测离子对为：438.13→369.09，去簇电压为40V，碰撞电压为20V；艾沙康唑-d4的监测离子对为：442.15→373.12，去簇电压为40V，碰撞电压为20V。

本发明还提供了一种艾沙康唑的血药浓度监测方法，采用所述方法对待测样本中的艾沙康唑进行检测。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑的方法及应用，该方法所需样品量少、操作简单，重现性好，灵敏度高，分析速度快，基质效应影响小，提取回收率高，线性范围较宽，适用于各种剂量艾沙康唑的血药浓度的评估。

附图说明

图1为实施例1的艾沙康唑色谱图；

图2为实施例1的艾沙康唑-d4色谱图；

图3为实施例1中采用本发明的UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑方法得到的标准曲线；

图4为对比例1中检测艾沙康唑得到的标准曲线。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

来源：

设备：超高效液相色谱串联四级杆/飞行时间质谱仪(Waters BioAccord系列一体化解决方案)；微量天平(II，Sartorius)；离心机(CR22N，Eppendorf)；振荡器(SDC-3000-D-KB，Biocomma)。

试剂：乙腈(Merck，UPLC级别)，水(超纯水)，甲酸(Merck，UPLC级别)，甲醇(Merck，UPLC级别)，空白血浆(抗凝剂：肝素钠，来源于健康受试者)，艾沙康唑(辉瑞，批号：07062255-01-0001)，艾沙康唑-d4(MCE，批号：HY-14273)。

实施例1

一、配制标准溶液、质控品。

以艾沙康唑作为艾沙康唑标准品，精密称取艾沙康唑标准品1mg，置于1.5mL的EP管中，用甲醇(溶剂)溶解，制备成艾沙康唑浓度为1mg/mL的艾沙康唑储备溶液，储存于-20℃。取艾沙康唑储备溶液，用乙腈水溶液(稀释液，乙腈与水的体积比为1:1)稀释成一系列标准溶液，其中艾沙康唑的浓度分别为：0.1、0.2、0.6、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0μg/mL。

采用与标准溶液相同的方法，配制得到不同浓度的质控品，其中艾沙康唑的浓度分别为：0.2、0.5、2.5、7.5μg/mL。

配制用于各项方法学考察的标准曲线样品、质控样品。

精密吸取ISA梯度浓度的标准溶液，以50μL空白血浆+50μL内标液+50μL标准溶液形成待测溶液。对于每个浓度水平的标准曲线样品和质控样品，其配制过程举例如下：在50μL的空白血浆中加入50μl内标液(CS工作溶液)与50μL标准溶液(IS)，混合均匀。配制体积可据实际情况适当调整，配成含艾沙康唑浓度分别为200、1000、2500、5000ng/mL的标准曲线样品和浓度分别为0.2μg/mL(LLOQ QC，定量下限)、0.5μg/mL(LQC，低浓度)、2.5μg/mL(MQC，中浓度)、7.5μg/mL(HQC，高浓度)的质控样品。

上述标准溶液、质控品的储存条件为4℃。

因艾沙康唑药物作为辉瑞新上市的独家药物，市面上暂未发现仿制药物，且来源并非辉瑞的艾沙康唑原料药，其制造工艺，辅料，杂质等均存在较大差异，为避免采用仿其他原料药配制标准溶液形成误差，在本实施例中，本发明人采用辉瑞公司的艾沙康唑作为艾沙康唑标准品。

二、配制内标液。

精密称取艾沙康唑-d41mg，置于1.5mL的EP管中，用甲醇(溶剂)溶解，制备成艾沙康唑-d4浓度为1mg/mL的艾沙康唑-d4储备溶液，储存于-20℃。取艾沙康唑储备溶液，用乙腈水溶液(稀释液，乙腈与水的体积比为1:1)稀释成艾沙康唑-d4的浓度为5μg/ml的内标液，储存于4℃。

三、处理样品。

1、制备待测样品。

取50μL空白血浆作为样品，采用蛋白沉淀法进行前处理，具体为：向样品中加入50μL内标液和500μL的乙腈水溶液(乙腈的体积浓度为50％)，以2000rpm/min转速进行涡旋振荡30s后，在26℃条件下以13000rpm/min转速离心20min，取上清液，采用乙腈水溶液(复溶液，乙腈与水的体积比为1:1)将上清液稀释10倍，得到待测样品。

2、制备待测标准溶液。

采用与上述制备待测样品相同的方法，对上述标准溶液进行标准品前处理，得到待测标准溶液。

采用与上述制备待测样品相同的方法，对上述质控品进行前处理。

四、检测。

将待测标准溶液注入超高液相色谱-质谱仪进行检测，构建标准曲线；将待测样品置于超高液相色谱-质谱仪的自动进样器进行检测，得到检测图谱，将检测图谱与标准曲线进行比较，分别记录艾沙康唑浓度、艾沙康唑-d4对应的峰面积，将艾沙康唑和艾沙康唑-d4的峰面积比值以权重系数w＝1/x²进行线性回归，方程表达式，y＝ax+b，计算得到所述样品中艾沙康唑的浓度。具体的超高液相色谱和质谱条件如下。

1、超高液相色谱条件：

固定相：采用Waters BEH C18色谱柱，色谱柱的长度为150mm，直径为2.1mm，填料粒径为1.7μm；

流动相：以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；流动相A为含体积百分比0.1％甲酸的超纯水溶液，流动相B为含体积百分比为0.1％甲酸的乙腈溶液；

流速：0.5mL/min；

柱温：40℃；

进样口温度：4℃；

进样量：550μL。

梯度洗脱条件如下所示：

0-0.5min，流动相A与流动相B的体积比为90:10；

0.5-0.8min，流动相A与流动相B的体积比由90:10匀速渐变至70:30；

0.8-1.1min，流动相A与流动相B的体积比由70:30匀速渐变至1:99；

1.1-2.2min，流动相A与流动相B的体积比为1:99；

2.2-2.5min，流动相A与流动相B的体积比由1:99匀速渐变至90:10。

洗针模式：Beforeand after aspiration；弱洗：甲醇:水(50:50,v/v)；清洗体积：500μL；强洗：甲腈，清洗体积：500μL。

表1艾沙康唑高效液相色谱的梯度洗脱

2、质谱条件：

离子源：ESI正离子离子源；

监测模式：多重反应监测模式(MRM模式)；

校准模式：LE实时校准；

离子源温度：400-550℃；

艾沙康唑的监测离子对为：438.13→369.09，去簇电压(DP值)为40V，碰撞电压(CE值)为20V；艾沙康唑-d4的监测离子对为：442.15→373.12，去簇电压(DP值)为40V，碰撞电压(CE值)为20V。

表2质谱条件

五、检测结果。

根据本实施例的方法对样品进行检测，结果如图1、图2所示。

六、方法学考察。

根据2020年新版《中国药典》中《生物样品定量分析方法验证指导原则》对本实施例的方法进行方法学验证，以确保检测的准确性、可重复性和稳定性。验证包括以下内容：专属性、标准曲线与定量下限、准确度和精密度、基质效应与回收率、稳定性。

1、标准曲线与定量下限。

根据上述方法进行检测，进样分析，结果如下表所示。以艾沙康唑(ISA)标示浓度为横坐标，艾沙康唑(ISA)与艾沙康唑-d4(ISA-d4)的峰面积之比为纵坐标绘制标准曲线，如图3所示。

表3检测结果

2、精确度与精密度。

由3批来自不同供体的定量下限、低、中、高，4种浓度的质控品(QC工作溶液)各6份，按上述方法进行UPLC-MS/MS检测，分别在同一天内和连续3天内每天平行测定6个质控品。

根据标准曲线计算质控品的浓度，实测浓度与标示值对比，计算批内、批间准确度与精密度。

表4精确度与精密度的检测结果

3、基质效应与回收率。

平行配制低、中、高3种浓度的质控品各6份，分以下三组，计算相应峰面积比率：

A：直接注入流动相(采用与本实施例相同的流动相A和流动相B形成的混合流动相)的IS和ISA，其余操作与本实施例的UPLC-MS/MS检测方法相同，检测计算得到峰面积；

B：空白血浆离心提取上清液，加入ISA QCs和IS，其余操作与本实施例的UPLC-MS/MS检测方法相同，检测计算得到峰面积；

C：按本实施例的UPLC-MS/MS检测方法测得的ISA和IS峰面积；

计算基质因子(MF)和回收率(RE)，结果如下所示。

表5回收率结果

表6基质效应结果

表7基质因子的结果

4、稳定性。

制备低、中、高3种浓度的QC样品各3份，分别对以下项目进行验证，具体操作采用本实施例的UPLC-MS/MS检测方法：

(1)配置QC样品在实验台室温放置8h的稳定性；

(2)QC样品在-20℃下储存一个月(至少一周)，考察长期稳定性；

(3)QC样品在-20℃和室温下反复冻融3次后，两次冻融循环之间至少冷冻12小时，考察冻融稳定性；

(4)ISA和IS储备液和工作溶液分别在室温下储存24h和在4℃下储存两周后，平行配置QC样品，测定原溶液稳定性；

(5)ISA 样品处理后的提取液在4℃下放置24h后，测定提取液稳定性。

表8实验台稳定性(n＝3)

表9长期稳定性(一个月，n＝3)

标示浓度(μg/mL)	实际浓度(μg/mL)	准确度RE(％)	精确度RSD(％)
				0.5	0.48±0.02	95.67	4.97
2.5	2.51±0.03	100.32	1.14
				7.5	7.57±0.33	100.94	4.32

表10冻融稳定性(在室温下放置、四次冻融循环(-20℃、-80℃)，n＝3)

标示浓度(μg/mL)	实际浓度(μg/mL)	准确度RE(％)	精确度RSD(％)
				0.5	0.57±0.03	91.87	3.97
2.5	2.25±0.07	90.08	2.94
				7.5	7.37±0.44	98.32	6.01

表11原液稳定性(室温24h，n＝3)

标示浓度(μg/mL)	实际浓度(μg/mL)	准确度RE(％)	精确度RSD(％)
				0.5	0.54±0.02	108.07	2.87
2.5	2.69±0.08	107.40	2.97
				7.5	8.49±0.10	113.16	1.15

表12原液稳定性(4℃2周，n＝3)

标示浓度(μg/mL)	实际浓度(μg/mL)	准确度RE(％)	精确度RSD(％)
				0.5	0.53±0.02	106.40	2.98
2.5	2.78±0.15	111.11	5.39
				7.5	7.56±0.10	100.86	1.34

表13提取液稳定性(n＝3)

标示浓度(μg/mL)	实际浓度(μg/mL)	准确度RE(％)	精确度RSD(％)
				0.5	0.44±0.01	87.00	1.84
2.5	2.32±0.16	97.57	7.01
				7.5	7.5±0.20	107.09	2.68

综上所述，本发明采用BEH C18色谱柱，并筛选出合适的色谱条件，使艾沙康唑色谱峰达到要求，在较短的分析时间内测定艾沙康唑，能快速、高效地检测样品，适用于大批量血浆样品检测。本发明采用艾沙康唑-d4作为内标，内标物能与样品中组分充分分离，样品配制简单，分析时间短，对检测设备要求低，重现性、准确度好。

本方法使用样本量仅为100μL，所用样本量较少适用于大批量血浆样品检测。本发明的检测方法线性范围为200～10000ng/mL，该线性范围较宽，完全涵盖了艾沙康唑的正常正常，负荷剂量有效浓度范围，可以分析不同剂量给药后的血浆样品，应用范围较广且可以避免做多次方法学验证。

对比例1

检测方法条件的优化。

对比例1与实施例1的原料、操作基本相同，区别在于：固定相采用Waters BEH C18色谱柱，填料粒径为4μm，梯度洗脱条件如表14所示。检测结果如表15和图4所示。

表14艾沙康唑超高效液相色谱的梯度洗脱

表15对比例1UPLC-MS/MS检测艾沙康唑的结果

结果分析：对比例1做出来的标准曲线，在小浓度难以达到药典要求的15％误差以内，这说明分子孔径对实验影响极大，并且检测时间也较长，达到单样品5分钟。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种UPLC-MS/MS联用检测艾沙康唑的方法，其特征在于，包括以下步骤：

配制标准溶液：取艾沙康唑标准品，以溶剂溶解，稀释，配制成标准溶液；

配制内标液：取艾沙康唑-d4，以溶剂溶解，稀释，配制成内标液；

处理样品：将样品进行样品前处理，得到待测样品；将标准溶液进行标准品前处理，得到待测标准溶液；

检测：将待测标准溶液通过超高效液相色谱-质谱法进行检测，构建标准曲线；将待测样品通过超高效液相色谱-质谱法进行检测，得到检测图谱，将检测图谱与标准曲线进行比较，得到检测结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述处理样品步骤中，所述样品前处理包括以下步骤：取样品，加入内标液和沉淀剂，振荡，离心，取上清液，将上清液与复溶液混合，得到待测样品；

所述处理样品步骤中，所述标准品前处理包括以下步骤：取标准溶液，加入内标液和沉淀剂，振荡，离心，取上清液，将上清液与复溶液混合，得到待测标准溶液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述处理样品步骤中，样品、内标液、沉淀剂的体积比为1：1：(8-12)；

所述处理样品步骤中，标准溶液、内标液、沉淀剂的体积比为1：1：(8-12)；

所述配制标准溶液步骤中，所述溶剂包括甲醇，所述稀释的稀释液包括乙腈；

所述配制内标液步骤中，所述溶剂包括甲醇，所述稀释的稀释液包括乙腈，所述内标液的艾沙康唑-d4的工作浓度为4.5-5.5μg/mL。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述沉淀剂包括乙腈，所述复溶液包括乙腈；所述振荡的转速为1500-2500rpm/min，所述振荡的时间为25-35s，所述离心的温度为24-28℃，所述离心的转速为12500-13500rpm/min，所述离心的时间为15-25min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱法的液相条件包括：

固定相：亚乙基桥杂化颗粒为填料的色谱柱；

流动相：以流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱；所述流动相A为甲酸的水溶液，所述流动相B为甲酸的乙腈溶液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为BEH C18色谱柱，长度为150mm，直径为2.1mm，填料粒径为1.7μm；

所述流动相A的甲酸的体积百分比为0.1-1％；所述流动相B的甲酸的体积百分比为0.1-0.15％。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：

0-0.5min，流动相A与流动相B的体积比为90:10；

0.5-0.8min，流动相A与流动相B的体积比由90:10变化至70:30；

0.8-1.1min，流动相A与流动相B的体积比由70:30变化至1:99；

1.1-2.2min，流动相A与流动相B的体积比为1:99；

2.2-2.5min，流动相A与流动相B的体积比由1:99变化至90:10。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述液相条件还包括：

流速：0.3-1.0mL/min；

柱温：35-45℃；

进样口温度：3-5℃；

进样量：500-600μL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱法的质谱条件包括：

离子源：ESI正离子离子源；

监测模式：多重反应监测模式；

离子源温度：400-550℃；

艾沙康唑的监测离子对为：438.13→369.09，去簇电压为35-45V，碰撞电压为18-22V；艾沙康唑-d4的监测离子对为：442.15→373.12，去簇电压为35-45V，碰撞电压为18-22V。

10.一种艾沙康唑的血药浓度监测方法，其特征在于，采用权利要求1-9中任一项所述的方法对待测样本中的艾沙康唑进行检测。