CN115969850A - 小檗胺在制备镇痛药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于制药技术领域，公开了小檗胺在制备镇痛药物中的应用；具体涉及小檗胺及其药学上可使用的盐作为镇痛药物及其组合物在制备具有镇痛药物中的用途，小檗胺可通过口服、鞘内等给药方式发挥缓解急、慢性疼痛的作用；本发明所述的小檗胺可用作活性成分，应用于镇痛药物中，开拓了小檗胺的新用途，为镇痛药物提供了新选择。

Description

小檗胺在制备镇痛药物中的应用

技术领域

本发明属于制药技术领域，具体涉及小檗胺在制备镇痛药物中的应用。

背景技术

疼痛是一种不愉快、多层面的感觉和情感体验，与实际或潜在的组织损伤相关，涉及身体、情感和社会心理等因素，也是最常见的就诊原因之一。痛觉可作为机体受到伤害的一种警告，引起机体一系列防御性保护反应，但是某些急性的或长期的剧烈疼痛，对机体是一种难以忍受的折磨。疼痛是临床上最常见的症状之一，也是医务工作者迫切需要解决的重要问题。

疼痛可分为急性疼痛和慢性疼痛。伤害性疼痛是由于外界伤害性刺激使伤害性感受器兴奋引起的疼痛，在失去刺激损伤修复后，疼痛可自行消失，持续时间短，也称为急性痛；慢性疼痛可产生于身体或内脏中，由机体的炎症，病理和功能性异常引起，可在在病灶恢复后仍然维持数月、数年甚至终生，治疗困难。慢性疼痛需要在急性损伤后建立“痛觉敏化诱发”状态，从而能将急性痛觉过敏转化为慢性痛觉过敏，即急性痛向慢性痛的转化。无论是急性疼痛还是慢性疼痛，临床仍对其治疗需求远远没有得到满足。

慢性疼痛机制尤为复杂，文献报道脊髓中枢敏化在慢性疼痛尤其是慢性神经病理性疼痛的产生及维持中具有十分重要的作用。当外周信号传入脊髓中枢神经时，可增加兴奋性神经递质如谷氨酸的释放，作用于神经元突触后膜上的受体，使神经元活化。神经元激活之后可释放ATP以及趋化因子等作用于神经元周围的星形胶质细胞及小胶质细胞上的受体，使胶质细胞激活。激活的胶质细胞会释放多种炎症因子如TNF-α以及IL-β，这些炎症因子也可作用于神经元上的炎症因子受体，从而进一步促进神经元的激活。神经元与胶质细胞的相互作用进一步促进了脊髓中枢敏化的形成。MAPK包括ERK，p38及JNK是脊髓中枢敏化以及慢性疼痛中的最显著的通路之一，在慢性疼痛的进程中发挥了重要作用。MAPK家族蛋白表达在脊髓中不同的细胞，一般认为ERK主要表达在神经元中，JNK主要表达在星形胶质细胞中，而p38主要分布于小胶质细胞中。抑制脊髓中枢敏化可显著抑制慢性疼痛。但是，这些干预研究的结果多是应用不具有临床开发潜力的实验室工具实现的，仅仅只能提示这些环节对慢性疼痛是关键性的环节，就干预手段而言，并不具备开发或者广泛应用的潜力。

目前镇痛药物主要包括非甾体类抗炎药（NSAIDs）、抗抑郁药、抗惊厥药和皮质类固醇等，而对重度疼痛的治疗通常采用阿片类药物。但在使用过程中非阿片类药物镇痛效果有限，且也多具有副作用，如三环类药物会导致口干、便秘、视物模糊、尿潴留、嗜睡、体重增加，还具有神经和心脏毒性。阿片类药物虽镇痛作用强，但长期使用会导致非常严重的副作用，会引起如恶心呕吐、镇静嗜睡、呼吸抑制、便秘、急性中毒、成瘾、依赖等不良反应，这些不良反应严重限制了其作为优良镇痛药物的广泛应用。因此，开发安全、有效、副作用小的镇痛药物具有重要的意义和临床价值。

小檗胺(Berbamine)是存在于小檗属植物中的一种双苄基异喹啉类生物碱。小檗胺已用于临床治疗各种原因引起的白细胞减少症，在癌症患者进行放疗、化疗中，同时还能防止白细胞减少。但其镇痛作用机制尚未得到清晰阐明，迄今为止也没有小檗胺关于缓解急慢性疼痛的研究报道。

发明内容

本发明针对上述现有技术存在的技术问题提供小檗胺在制备镇痛药物中的应用。本发明的目的在于提供一种包含小檗胺为有效成分药物，用于缓解和治疗伤害性刺激引起的急性疼痛以及用于缓解和治疗慢性疼痛。

本发明通过以下技术方案来实现的：

本发明提供小檗胺或其药学上可接受的盐作为制备缓解和治疗急性疼痛药物中的应用。

本发明提供小檗胺或其药学上可接受的盐作为制备缓解和治疗慢性疼痛药物中的应用。

本发明提供一种药物组合物，包含小檗胺或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或辅料。

本发明还提供一种药物组合物，包含小檗胺及其它活性成分组成的复方制剂。

所述药学上可接受的载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。

本发明提供药物组合物作为制备缓解和治疗急性疼痛药物中的应用。

本发明提供药物组合物作为制备缓解和治疗慢性疼痛药物中的应用。

所述药物通过口服或鞘内途径给药。

所述药物以注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂、气雾剂以及其他外用制剂形式存在。

上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

术语“药学上可接受的盐”是指，在可靠的医学判断范围内，适合与人和低等动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、变态反应等等，并且与合理的益处/危险比例相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域是众所周知的。例如，Berge等人在J.PharmaceuticalSciences （1977）66:1-19中详细描述的药学上可接受的盐。

本发明具有以下有益效果：本发明首次公开了小檗胺用于镇痛的药理作用，并且阐述了小檗胺上述效应的作用机制：脊髓中枢敏化在慢性疼痛的产生及维持中具有十分重要的作用，小檗胺可阻断上述环节而发挥镇痛作用。本发明也提供了可以实现的制剂形式。本发明所述的小檗胺可用作活性成分，应用于镇痛药物中，开拓了小檗胺的新用途，为镇痛药物提供了新选择。本发明预期能够发现一种安全、有效和副作用小的镇痛药物，为疼痛治疗提供更多的选择。

附图说明

图1为灌胃给药模式下，小檗胺缓解小鼠急性疼痛的示意图。

图2为灌胃及局部鞘内给药模式下，小檗胺缓解大鼠神经病理性疼痛的示意图。

图3为灌胃及局部鞘内给药模式下，小檗胺缓解大鼠骨癌痛的示意图。

图4为灌胃给药模式下，小檗胺抑制CCI大鼠脊髓星形胶质细胞活化的示意图。

图5为灌胃给药模式下，小檗胺抑制CCI大鼠脊髓小胶质细胞活化的示意图。

图6为灌胃给药模式下，小檗胺抑制CCI大鼠脊髓神经元细胞活化的示意图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。下述实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂盒材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1、小檗胺可升高小鼠的热甩尾潜伏期

（1）试验动物：

健康雌性 ICR 小鼠，SPF级，体重为 18-22 g，由南通大学动物中心提供。实验动物饲养于12h-12h 昼夜交替的独立环境中，室温维持在 24±2℃，自由饮水和摄食，在适应环境 1 周后进行实验。对动物的所有处理均遵循国际疼痛研究协会伦理委员会的要求。

（2）试验药品及试剂：

盐酸小檗胺，购自辽宁可济药业有限公司。

（3）试验方法

小檗胺给药剂量及方法：盐酸小檗胺用研钵研碎，逐渐加入0.5% CMC-Na混悬，剂量分别为10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg，给药方式为灌胃；

灌胃给药方法：将小鼠头部固定，自嘴角进针，小鼠是否出现吞咽反射可辅助判断是否进入胃中。

ICR小鼠随机分为4组，分别为空白对照组，小檗胺低剂量组，小檗胺中剂量组和小檗胺高剂量组。治疗组小鼠在给药前和灌胃给予小檗胺10 mg/kg，20 mg/kg，40 mg/kg后的30，60，120和180分钟后进行痛阈值测定。

小檗胺对小鼠热甩尾痛阈值测试：给药前和灌胃给予小鼠小檗胺10 mg/kg，20mg/kg，40 mg/kg后30、60、120和180分钟后分别测定镇痛效应(52℃水浴)。分别将小鼠的尾巴（约3 cm）浸入52℃的恒温水浴锅，以开始出现甩尾反应的时间作为甩尾潜伏期。疼痛反应截止期为10 s。记录给药前后的甩尾潜伏期，按照公式计算出最大镇痛效应百分比MPE。MPE (%) = (给药后潜伏期-给药前潜伏期)/(10-给药前潜伏期)×100%。

（4）实验结果描述：

如图1A所示，随着给药浓度的增加，小鼠的热甩尾潜伏期逐渐增加，其中给予高剂量的小檗胺 （40mg/kg，p.o.）后60 min镇痛效果最好。效果以最大镇痛百分率（%MPE）表示。图1 B为最大镇痛效应百分比 (MPE)% (n=10，与模型组相比，*  P < 0.05, ** P < 0.01,*** P < 0.001）。

实施例2、小檗胺能够缓解大鼠坐骨神经慢性压迫损伤模型（CCI）引起神经病理性疼痛

（1）试验动物：

健康雄性SD大鼠，SPF级，体重为180-200g，由南通大学动物中心提供。实验动物饲养于12 h-12 h昼夜交替的独立环境中，室温维持在24±2℃，自由饮水和摄食，在适应环境1 周后进行实验。对动物的所有处理均遵循国际疼痛研究协会伦理委员会的要求。

（2）试验药品及试剂：

盐酸小檗胺，购自辽宁可济药业有限公司；小檗胺二盐酸盐， 购自sigma公司；Tris、TEMED、β-Mercaptoethanol、甘氨酸、吐温-20SDS、30% Acrylamide / Bis、AmmoniumPersulfate、GAPDH 购自 sigma；Marker 购自 Thermo；溴酚蓝、甘油、BovineSerumAlbumin 购于Sunshine；甲醇、氯化钠、丙三醇购于南京化学试剂有限公司；p-ERK,p-p38 以及 p-JNK 抗体，anti-rabbit，anti-mouse购于cell signaling； RIPA裂解液购自 Beyotime Biotechnology；ECL 发光液购自 Pierce。

（3）试验方法

小檗胺给药剂量及方法：小檗胺二盐酸盐用无菌生理盐水溶解，剂量分别为1 mM，3 mM，5 mM，给药方式为鞘内注射；盐酸小檗胺用研钵研碎，逐渐加入0.5% CMC-Na混悬，剂量分别为5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg。

灌胃给药方法：将小鼠头部固定，自嘴角进针，小鼠是否出现吞咽反射可辅助判断是否进入胃中。

鞘内注射方法：按压大鼠腰骶部两侧固定，自L5-L6 棘突间进针，以鼠尾突然出现侧向运动为注射成功标志。用100μL微量注射器，注射容积为20 μL，注射时间10 s，留针20s。

坐骨神经慢性压迫损伤模型（CCI）制备：健康SD大鼠麻醉后，将大鼠右侧俯卧位固定于手术板上。将大鼠后肢大腿外侧至股骨区域进行剪毛处理，用75%酒精消毒，于左侧股骨中部外侧，顺股骨方向进行切口，顺肌纹钝性分离肌肉组织，暴露坐骨神经，以羊肠线（4-0）于坐骨神经处结扎4道正反结（间隔1 mm），当观测到大鼠小腿肌肉或脚趾有轻微抽动现象，表明结扎松紧程度适宜。依次缝合肌肉、皮下组织、皮肤，随后肌肉注射4,000单位青霉素。

机械性缩足反射阈值测定：大鼠置于底部为金属网的有机玻璃箱内，Von-Frey丝垂直刺激大鼠后肢足底5s，刺激力量以触丝弯曲为准。选择8根Von-Frey丝，标度分别为1、1.4、2、4、6、8、10和15 g，大鼠出现抬足或舔足行为则为阳性反应，记录标度，重复5次取平均值。

热刺激缩足反射潜伏期测定：大鼠在底为3 mm的玻璃板上设置有机玻璃箱内，适应环境15min调节刺激光源的强度为55℃，刺激大鼠后肢足底，同时开始计时，当出现抬脚、舔脚、躲避等反应时，在刺激仪上读出时间，设定自动切断时间为30.1s重复5次取平均值。

如图2所示，在CCI模型中，大鼠的机械性缩足反射阈值和热刺激缩足反射潜伏期显著降低（与空白组相比#  P＜0.05，##  P＜0.01，###  P＜0.001），而灌胃给予小檗胺5，10，20 mg/kg或鞘内给予小檗胺1，3，5 mM可剂量依赖性显著抑制CCI诱导的痛阈降低（与模型组相比，*  P < 0.05, ** P < 0.01，*** P < 0.001）。

实施例3、小檗胺能够缓解大鼠骨癌痛

（1）试验动物：

健康雌性SD大鼠，SPF级，体重为180-200g，由南通大学动物中心提供。实验动物饲养于 12h-12h 昼夜交替的独立环境中，室温维持在 24±2℃，自由饮水和摄食，在适应环境 1 周后进行实验。对动物的所有处理均遵循国际疼痛研究协会伦理委员会的要求。

（2）试验药品及试剂：

盐酸小檗胺，购自辽宁可济药业有限公司；小檗胺二盐酸盐， 购自sigma公司。

（3）实验方法

小檗胺给药剂量及方法：小檗胺二盐酸盐用无菌生理盐水溶解，剂量分别为1 mM，3 mM，5 mM，给药方式为鞘内注射；盐酸小檗胺用研钵研碎，逐渐加入0.5 % CMC-Na混悬，剂量分别为5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg。

灌胃给药方法：将小鼠头部固定，自嘴角进针，小鼠是否出现吞咽反射可辅助判断是否进入胃中。

鞘内注射方法：按压大鼠腰骶部两侧固定，自 L5-L6 棘突间进针，以鼠尾突然出现侧向运动为注射成功标志。用100μl 微量进样器，注射容积为20μl，注射时间 10 s，留针20s。

大鼠Walker 256乳腺癌细胞的培养：取出冻存细胞，迅速放入37 ℃恒温水浴锅解冻，转入15 ml离心管中，加入PBS重复洗涤两次，随后细胞中加入适量提前配好的培养基中（含有10%FBS的RPMI 1640培养基），于5% CO2，37 ℃恒温培养箱中培养。待细胞培养4-6 h后（培养基变黄）即可取出，收集细胞，0.01 M PBS清洗两遍，弃上清，取300 μL细胞，加入等体积0.01 M PBS，注射于60-80 g的雌性SD大鼠的腹腔中。5-7天后，待大鼠出现明显腹水时，抽取腹水。离心弃上清，PBS清洗2-3遍后，调整细胞密度（细胞：PBS = 1:1），用于模型的制备。

大鼠胫骨骨癌痛模型（Tibia bone cavity tumor cell implantation，TCI）的制备：健康雌性大鼠麻醉后，固定，取左侧腿，摸到大鼠膝关节的凹面，向下0.5 cm处切皮，沿着肌肉方向用两把弯镊钝性分离肌肉暴露胫骨平面，可见靠胫骨平台内侧筋膜白线。紧贴筋膜白线上方正中点，用1 mL针头垂直于骨平面钻孔，旋转向下用力钻至有一突破感，此时换微量注射器，注入Walker 256细胞5 μL，并固定针不动约1 min。在拔出针头同时，另一手迅速按下骨腊，堵住针孔，按紧3 min。之后用牙科用胶封闭骨头上的针孔，干后缝合皮肤。整个手术尽量在无菌环境中操作。

机械性缩足反射阈值测定：大鼠置于底部为金属网的有机玻璃箱内，Von-Frey丝垂直刺激大鼠后肢足底5s，刺激力量以触丝弯曲为准。采用up-down法，选择8根Von-Frey丝，标度分别为1、1.4、2、4、6、8、10和15 g，大鼠出现抬足或舔足行为则为阳性反应.记录标度，重复5次取平均值。

（4）实验结果描述

如图3所示，在大鼠骨癌痛模型中，大鼠的机械性缩足反射阈值显著降低（与空白组相比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001），而灌胃给予5，10，20 mg/kg小檗胺（3 A）或鞘内给予1，3，5 mM小檗胺（3 B）均可剂量依赖性显著抑制大鼠骨癌痛（与模型组相比，*  P <0.05, ** P < 0.01，*** P < 0.001）。

实施例4、小檗胺可显著抑制CCI诱导的脊髓星形胶质细胞的活化

（1）试验动物：

健康雄性SD大鼠，SPF级，体重为180-200 g，由南通大学动物中心提供。实验动物饲养于 12 h-12 h昼夜交替的独立环境中，室温维持在 24±2℃，自由饮水和摄食，在适应环境 1 周后进行实验。对动物的所有处理均遵循国际疼痛研究协会伦理委员会的要求。

（2）试验药品及试剂：

盐酸小檗胺，购自辽宁可济药业有限公司，小檗胺二盐酸盐，购自sigma公司，Tris、TEMED、β-Mercaptoethanol、甘氨酸、吐温-20、SDS、30% Acrylamide 、Bis、AmmoniumPersulfate、GAPDH 购自 sigma；Marker 购自 Thermo；溴酚蓝、甘油、BovineSerumAlbumin 购于Sunshine；甲醇、氯化钠、丙三醇购于南京化学试剂有限公司；p-JNK、GFAP 抗体，anti-rabbit，anti-mouse购于cell signaling； RIPA裂解液购自 BeyotimeBiotechnology；ECL 发光液购自 Pierce。

（3）试验方法

小檗胺给药剂量及方法：盐酸小檗胺用研钵研碎，逐渐加入0.5% CMC-Na混悬，剂量分别为5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg。

灌胃给药方法：将小鼠头部固定，自嘴角进针，小鼠是否出现吞咽反射可辅助判断是否进入胃中。

免疫印迹 (Western blotting)：小鼠给药第7天时，给药30min后取小鼠L4-L6 脊髓节段按一定比例加入裂解液，三次匀浆处理，12000转离心15 min，吸取上清，加入5×loading buffer沸水浴6 min，取50 μg蛋白样品上样于 10% SDS-PAGE 进行凝胶电泳，4℃110V电转60 min。5% BSA-TBS 封闭2小时后，分别加入一抗（1:1000）室温孵育3 h，4 ℃过夜，TBST洗10 min × 3，加入二抗（1:1000），室温下孵育3 h，TBST洗10 min × 3，加入ECL发光底物显色。用分子显影仪 (Gel DocTM XR，170-8170) 联合Quantity One-4.6.5(Bio-Rad Laboratories) 软件分析数据。用目的蛋白灰度值与胞浆蛋白内参GAPDH 灰度值之比进行半定量分析。

（4）实验结果描述

如图4所示，CCI可引起大鼠星形胶质细胞活化标志物GFAP蛋白表达显著提高（与空白组相比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001），并上调MAPK家族JNK蛋白的磷酸化水平，而灌胃给予小檗胺5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg可显著抑制CCI上调的大鼠GFAP和p-JNK的表达，提示其可显著抑制CCI诱导的脊髓星形胶质细胞活化（*  P < 0.05, ** P < 0.01，*** P < 0.001）。

实施例5、小檗胺可显著抑制CCI诱导的脊髓小胶质细胞的活化

（1）试验动物：

健康雄性SD大鼠，SPF级，体重为180-200 g，由南通大学动物中心提供。实验动物饲养于12 h-12 h昼夜交替的独立环境中，室温维持在24±2℃，自由饮水和摄食，在适应环境1周后进行实验。对动物的所有处理均遵循国际疼痛研究协会伦理委员会的要求。

（2）试验药品及试剂：

盐酸小檗胺，购自辽宁可济药业有限公司；小檗胺二盐酸盐，购自sigma公司；Tris、TEMED、β-Mercaptoethanol、甘氨酸、吐温-20、SDS、30% Acrylamide 、Bis、AmmoniumPersulfate、GAPDH购自sigma；Marker 购自Thermo；溴酚蓝、甘油、Bovine Serum Albumin购于Sunshine；甲醇、氯化钠、丙三醇购于南京化学试剂有限公司；p-P38、IBA-1 抗体，anti-rabbit，anti-mouse购于cell signaling； RIPA裂解液购自 BeyotimeBiotechnology；ECL 发光液购自 Pierce。

（3）试验方法

小檗胺给药剂量及方法：盐酸小檗胺用研钵研碎，逐渐加入0.5% CMC-Na混悬，剂量分别为5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg。

灌胃给药方法：将小鼠头部固定，自嘴角进针，小鼠是否出现吞咽反射可辅助判断是否进入胃中。

免疫印迹 (Western blotting)：小鼠给药第7天时，给药30 min后取小鼠L4-L6脊髓节段按一定比例加入裂解液，三次匀浆处理，12000转离心15min，吸取上清，加入5×loading buffer沸水浴 6min，取 50μg 蛋白样品上样于 10% SDS-PAGE 进行凝胶电泳，4℃ 110V 电转 60min。5% BSA-TBS 封闭2小时后，分别加入一抗 （1:1000）室温孵育3 h，4℃过夜，TBST 洗10 min × 3，加入二抗（1:1000），室温下孵育3 h，TBST 洗10 min × 3，加入ECL发光底物显色。用分子显影仪 (Gel DocTM XR，170-8170) 联合Quantity One-4.6.5 (Bio-Rad Laboratories) 软件分析数据。用目的蛋白灰度值与胞浆蛋白内参GAPDH灰度值之比进行半定量分析。

（4）实验结果描述：

如图5所示，CCI可引起大鼠小胶质细胞活化标志物IBA-1蛋白表达显著提高（与空白组相比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001），并上调MAPK家族P38蛋白的磷酸化水平，而灌胃给予小檗胺5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg可显著抑制CCI上调的大鼠IBA1和p-p38的表达，提示其可显著抑制CCI诱导的小胶质细胞活化（*  P < 0.05, ** P < 0.01，*** P <0.001）。

实施例6、小檗胺（BBM）可显著抑制CCI诱导的大鼠神经元细胞的活化

（1）试验动物：

健康雄性SD大鼠，SPF级，体重为180-200g，由南通大学动物中心提供。实验动物饲养于 12 h-12 h 昼夜交替的独立环境中，室温维持在 24±2℃，自由饮水和摄食，在适应环境1周后进行实验。对动物的所有处理均遵循国际疼痛研究协会伦理委员会的要求。

（2）试验药品及试剂：

盐酸小檗胺，购自辽宁可济药业有限公司；小檗胺二盐酸盐，购自sigma公司，Tris、TEMED、β-Mercaptoethanol、甘氨酸、吐温-20、SDS、30% Acrylamide 、Bis、AmmoniumPersulfate、GAPDH 购自 sigma；Marker 购自 Thermo；溴酚蓝、甘油、BovineSerumAlbumin 购于Sunshine；甲醇、氯化钠、丙三醇购于南京化学试剂有限公司；p-ERK、p-PKC抗体，anti-rabbit，anti-mouse购于cell signaling； RIPA裂解液购自 BeyotimeBiotechnology；ECL 发光液购自 Pierce。

（3）试验方法

小檗胺给药剂量及方法：盐酸小檗胺用研钵研碎，逐渐加入0.5%CMC-Na混悬，剂量分别为5 mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg。

灌胃给药方法：将小鼠头部固定，自嘴角进针，小鼠是否出现吞咽反射可辅助判断是否进入胃中。

免疫印迹 (Western blotting)：小鼠给药第7天时，给药30 min后取小鼠L4-L6脊髓节段按一定比例加入裂解液，三次匀浆处理，12000转离心15min，吸取上清，加入5×loading buffer沸水浴 6 min，取 50 μg 蛋白样品上样于 10% SDS-PAGE 进行凝胶电泳，4℃ 110V 电转 60min。5% BSA-TBS 封闭2小时后，分别加入一抗 （1:1000）室温孵育3 h，4℃过夜，TBST 洗10 min × 3，加入二抗（1:1000），室温下孵育3 h，TBST 洗10 min × 3，加入ECL发光底物显色。用分子显影仪 (Gel DocTM XR，170-8170) 联合Quantity One-4.6.5 (Bio-Rad Laboratories) 软件分析数据。用目的蛋白灰度值与胞浆蛋白内参GAPDH灰度值之比进行半定量分析。

（4）实验结果描述：

如图6所示，CCI可显著上调大鼠神经元细胞活化上调的PKC磷酸化蛋白水平（与空白组相比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001）及ERK磷酸化蛋白水平，而灌胃给予小檗胺5mg/kg，10 mg/kg，20 mg/kg可显著抑制CCI上调的大鼠p-PKC和p-ERK的表达，提示其可显著抑制CCI诱导的脊髓神经元的活化（*  P < 0.05, ** P < 0.01，*** P < 0.001）。

Claims (8)

1.小檗胺或其药学上可接受的盐作为制备缓解和治疗急性疼痛药物中的应用。

2.小檗胺或其药学上可接受的盐作为制备缓解和治疗慢性疼痛药物中的应用。

3.一种药物组合物，其特征在于，包含小檗胺或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体或辅料。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。

5.权利要求3所述的药物组合物作为制备缓解和治疗急性疼痛药物中的应用。

6.权利要求3所述的药物组合物作为制备缓解和治疗慢性疼痛药物中的应用。

7.权利要求1或2或5或6任一项所述的应用，其特征在于，所述药物通过口服或鞘内途径给药。

8.权利要求1或2或5或6任一项所述的应用，其特征在于，所述药物以注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂、气雾剂以及其他外用制剂形式存在。

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