CN112569237B - 伊马替尼及其衍生物与尼古丁或其类似物联用或复方在防治尼古丁成瘾与复吸中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了伊马替尼及其衍生物与尼古丁或其类似物联合用药或复方制剂在预防和治疗尼古丁成瘾与复吸中的应用。本发明制剂包含了100‑400mg/天剂量含量的甲磺酸伊马替尼与尼古丁配比联合给药或复方给药用以预防和治疗尼古丁成瘾，防治复吸，同时减轻戒断症状，彻底消除心瘾。本发明利用大量的动物实验模型进行筛选，从有效性和安全性等不同角度同时证明了配比组方后药效好和安全性高，为尼古丁成瘾治疗一线药物临床应用提供一种新组合物或联合用药制剂。

Description

伊马替尼及其衍生物与尼古丁或其类似物联用或复方在防治 尼古丁成瘾与复吸中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及伊马替尼及其衍生物与尼古丁或其类似物联合用药或复方制剂在预防和治疗尼古丁成瘾与复吸中的应用。

背景技术

吸烟是当今世界最严重的公共卫生问题之一，世界卫生组织最新发布的《2000年-2025年吸烟趋势全球报告》指出，吸烟和被动吸烟是导致癌症、心脏病、中风等心血管疾病发作的主要因素。尽管全球烟草使用率已从2000年的27％降到2016年的20％，但每年仍有700多万人死于烟草，其中每年全球烟草造成的心血管疾病死亡约300万例。

烟瘾是一种慢性、依赖性疾病，其主要生物碱成分是尼古丁，能进入脑内奖励中心，与烟碱型乙酰胆碱受体高度结合，刺激多巴胺的释放，让人产生愉快的感觉，通过反复持续的吸烟行为，从而导致尼古丁成瘾。但如果吸烟者长时间没有吸烟，体内尼古丁逐渐被清除掉了，乙酰胆碱受体增多，神经信号传递紊乱，身体就出现烦躁、恶心、头痛等戒断反应，吸烟意念随之强烈。

在戒烟过程中，戒断症状重且复吸率极高，一旦成瘾就很难戒掉，虽然目前替代戒烟的方法众多，如电子烟、咀嚼片、尼古丁透皮贴等，还有戒烟药物安非他酮、可乐定、去甲替林等，均可在一定程度改善吸烟患者对烟的依赖，但可持续性差，且易产生副作用，其中安非他酮、去甲替林类药物可能会产生癫痫等精神疾病的困扰，可乐定的使用也会出现明显的镇静、口干等副作用。因此目前对尼古丁“心瘾”的控制和复吸预防仍缺乏有效药物。

本发明是关于尼古丁成瘾药物治疗新药的研发，采用全新理念，发现戒烟和成瘾治疗特异有效的药物甲磺酸伊马替尼与尼古丁或其类似物联合使用或制备成复方制剂在尼古丁成瘾治疗中的很好效果，并可预防复吸，为戒烟治疗提供了一套完整有效的药物治疗体系。

伊马替尼或衍生物甲磺酸伊马替尼，也称格列卫(Gleevec或STI571)，是一种苯氨嘧啶的衍生物，由瑞士诺华公司研制应用于慢性粒细胞性白血病(CML)，于2001年美国FDA批准上市，被称为人类第一个分子靶向肿瘤生成机制的抗癌新药，故被“Science”杂志评论为里程碑式的发现，与人类基因工程等并列为2001年世界10大科技突破之一。目前，据Therapeutic Target Database(TTD)记载伊马替尼的靶标主要为原癌基因c-Abl、干细胞因子受体c-kit、血小板衍生生长因子受体，原癌基因c-Abl存在于慢性粒细胞白血病和急性淋巴性白血病等肿瘤，血小板衍生生长因子受体主要存在于结缔组织和血管，在组织损伤与修复中起重要作用。成瘾患者是正常机体，除了神经系统病理改变外，没有肿瘤和组织的损伤。因此，伊马替尼作用靶点主要是c-kit，作用于原癌基因c-Abl和血小板衍生生长因子受体的效应弱，产生副作用小。前期我们所申请专利CN 105974131 A和CN 106074555 A已经报道，急性吗啡给药后检测到伏隔核中c-kit会被激活，并且大鼠活动量会增加，而给予c-kit抑制剂伊马替尼及其衍生物后，可防止吗啡条件位置偏爱和敏化的形成，并能阻断由给药环境唤起的成瘾记忆再巩固防治戒断后的复燃等，从而证实c-kit可作为潜在预防和治疗成瘾及戒断后复吸的靶标，而伊马替尼及其衍生物能特异性针对c-kit起效防治成瘾和戒断后复吸，可作为尼古丁成瘾防治的药物。

为了解决临床吸烟成瘾的问题，本发明在此前我们所申请专利(CN 105974131 A和CN 106074555 A)“c-kit作为药物成瘾治疗靶点的应用”和“伊马替尼及其衍生物在治疗成瘾中的新用途”以及Yan Wang and Howard B.Gutstein等的报道伊马替尼衍生物—甲磺酸伊马替尼可用于预防吗啡耐受(Nat Med.；18(3):385–387.doi:10.1038/nm.2633.)以及伊马替尼流体给药用于阿片依赖的治疗(PCT/US2008/079198)报道后，提出实质性进步新技术，即采用新干预范式即非条件性刺激诱导、新剂量配比(即临床使用剂量最低剂量100mg/天，最高剂量不超过400mg/天)和新作用机制应用于新适应症的完全不同的模式，与原有成瘾物质尼古丁或其类似物配比联合用药或制备各种新复方制剂，提供具有强大预防和治疗尼古丁成瘾与复吸作用的联合用药方式或各种规格的制剂。而且，本发明中使用甲磺酸伊马替尼剂量(100mg-400mg/天/70kg)在临床使用过程中少有副作用发生，处于临床使用安全剂量范围内，具有很好的临床有效性与安全性，可广泛应用于临床吸烟患者的成瘾治疗和复吸的预防。

本发明发现甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比低于40:1时，无法防治尼古丁成瘾，当甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比大于或者等于40:1时，可成功预防尼古丁成瘾，并减轻尼古丁戒断症状。此种典型的剂量效应在镇痛药阿司匹林的临床应用中具有类似的例子，如阿司匹林小剂量用于抗血栓、中剂量用于解热镇痛、高剂量抗炎抗风湿，抗血栓、解热镇痛和抗炎抗风湿三类临床适应证的药物作用效果完全不同，具有实质性区别。此外，本发明发现甲磺酸伊马替尼在治疗尼古丁成瘾复吸时，若尼古丁成瘾记忆唤起剂量与尼古丁成瘾剂量之间大于或等于3:10，则预防尼古丁成瘾的甲磺酸伊马替尼剂量无法预防和治疗尼古丁成瘾的复吸；若低于3:10，则预防尼古丁成瘾的甲磺酸伊马替尼剂量可预防和治疗尼古丁成瘾的复吸。因此，本发明此甲磺酸伊马替尼治疗剂量配比效应(大鼠甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比范围40:1以上，其他种属使用等同剂量，临床剂量100mg/天以上)与尼古丁记忆唤起的剂量配比效应(大鼠尼古丁记忆唤起剂量与尼古丁成瘾剂量配比范围3:10以下，其他种属使用等同剂量)是甲磺酸伊马替尼在尼古丁成瘾领域的实质性新发现，此剂量配比范围内甲磺酸伊马替尼和尼古丁药物联合用药或制备成各种复方制剂，防治尼古丁成瘾和戒断后的复吸，是本药物在不同剂量范围内不同适应症应用，是与前期发明实质性区别应用和进步的发明。

针对现有研究基础，本发明具有实质性进步和区别有以下几点：

1)剂量上的实质性进步，本发明发现了甲磺酸伊马替尼用于预防和治疗尼古丁成瘾与复吸时的有效剂量配比需要大于或等于40:1，并且尼古丁成瘾记忆唤起剂量与尼古丁成瘾记忆形成剂量配比需要低于3:10。

2)本发明在治疗策略上与此前我们申请的专利(CN 105974131 A和CN 106074555A)有显著性区别，前两个专利主要采用给药环境再唤起后干预记忆再巩固过程的治疗范式，本发明采用新干预范式即非条件性刺激(及成瘾物质本身或其类似物)诱导再巩固过程后进行药物治疗。将伊马替尼及其衍生物和尼古丁或其类似物配比联合使用或复方后，治疗模式和机制完全不同，使治疗效果更加有效，且使操作范式和服药程序简便易行，避免病人用药的不便，应用性更好。

3)跟现有治疗尼古丁成瘾药物相比，本发明在作用机制上也有显著性区别，甲磺酸伊马替尼通过阻断c-kit受体抑制多种信号转导通路如PKC、PI3K-AKT、ERK等调节激酶活性、蛋白表达、基因表达与调控启动尼古丁奖赏、记忆和神经可塑性过程，阻断尼古丁产生的多种效应，从而达到预防和治疗成瘾与复吸的作用。

本发明第一次从剂量配比、新干预范式和新作用机制的角度，提出将伊马替尼及其衍生物与成瘾物质尼古丁或其类似物配比制备成各种复方制剂或联用制剂用于成瘾与复吸治疗，更好的适用于临床需求，在此基础上将成瘾防治问题推进了一大步。从分子结构来看，伊马替尼与尼古丁并无相互作用的基团，因此，提出本发明伊马替尼及其衍生物与尼古丁联合用药或制备复方制剂来进行尼古丁成瘾治疗是行之有效的，效果好，安全性高，临床可操控性强，是尼古丁成瘾治疗的实质性进步。

发明内容

针对上述背景中尼古丁成瘾治疗存在的问题，本发明目的是提供伊马替尼及其衍生物在尼古丁成瘾治疗领域的新用途和新制剂及剂型，将伊马替尼及其衍生物与成瘾物质尼古丁联合使用或合用作复方制剂来预防或减轻成瘾与停止使用后的心瘾及戒断症状，防治复吸。

本发明主要进行了如下研究：

(1)伊马替尼及其衍生物与成瘾物质尼古丁联合用药或复方制剂预防或治疗成瘾配比剂量效应及其机制。

为了证明伊马替尼及其衍生物与尼古丁联合用药或复方制剂能预防或治疗尼古丁单独用药过程中的成瘾且具有剂量配比依赖的效应，本发明通过以下实验完成：预先腹腔给予实验大鼠1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼，然后皮下注射0.25、5mg/kg尼古丁，或分别采用1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼与0.25、5mg/kg尼古丁制备成混合注射剂后给药，采用经典评价成瘾的大鼠条件位置偏爱模型，确定甲磺酸伊马替尼对大鼠尼古丁条件位置偏爱形成防治作用的剂量配比效应；进一步采用急性尼古丁给药后60分钟观察对中脑边缘多巴胺系统包括VTA、伏隔核、杏仁体、海马、前额皮层的c-kit活性的变化以及c-kit磷酸化水平的变化，多色免疫荧光共标确定其下游激活靶分子，确定尼古丁成瘾分子新机制和甲磺酸伊马替尼防治成瘾的作用机制。

(2)运用CPP成瘾模型，观察1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼非条件性刺激诱发后对大鼠尼古丁成瘾后觅药行为影响的剂量效应。大鼠尼古丁CPP形成之后，给予小剂量尼古丁激发，然后腹腔给予1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼(联合给药)，或者给予甲磺酸伊马替尼与并于药物干预后第1天测CPP值以观察对觅药行为的影响，药物尼古丁的混合物(复方制剂)，并于干预后第7天测CPP值。

(3)运用CPP成瘾模型，观察30mg/kg甲磺酸伊马替尼与环境线索联合、非条件性刺激联合(不同剂量)、直接使用对大鼠尼古丁成瘾后后觅药行为及复吸的影响，大鼠尼古丁CPP形成之后，采用环境线索诱导、非条件性刺激诱发或无诱导并给予甲磺酸伊马替尼。其中环境线索诱导即将成瘾的大鼠放入CPP箱的伴药侧以诱发成瘾记忆，后给予甲磺酸伊马替尼；非条件性刺激诱发即给予尼古丁(0.1、0.15mg/kg)，也就是尼古丁与甲磺酸伊马替尼的联合使用，并分为联合用药和复方制剂两个组；无诱导即不放入CPP箱，不给予尼古丁，而直接用甲磺酸伊马替尼治疗。药物干预后第1天测CPP值以观察对觅药行为的影响，药物干预后第7天测CPP值，干预后第9天给予所有大鼠低剂量(0.1mg/kg)吗啡激发并观察对复吸的影响。

(4)运用CPP成瘾模型，在尼古丁CPP形成之后，甲磺酸伊马替尼与尼古丁联合给药或甲磺酸伊马替尼与尼古丁复方给药，观察不同剂量伊马替尼对戒断症状的影响。

为了证明伊马替尼及其衍生物与成瘾物质尼古丁联合用药或复方制剂可治疗尼古丁戒断症状且具有剂量配比依赖的效应，本发明通过以下实验完成：采用条件性位置偏爱模型，大鼠0.25、0.5mg/kg尼古丁成瘾后，第二天腹腔注射1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼，30分钟后皮下注射0.1mg/kg尼古丁，或将1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼与0.15mg/kg尼古丁制备成混合注射剂后给药。60分钟后采用自发活动箱，根据大鼠尼古丁戒断后自发活动量变化，确定甲磺酸伊马替尼治疗成瘾物质尼古丁戒断症状的剂量效应。

(5)在临床应用中，伊马替尼或其衍生物与尼古丁剂量配比用量为100-400mg/天。

采用条件性位置偏爱模型，无论是联合给药还是复方给药，甲磺酸伊马替尼与尼古丁大于或等于40：1的剂量配比可防治尼古丁成瘾和复吸，并减弱尼古丁成瘾戒断症状。其中甲磺酸伊马替尼最低剂量为10mg/kg，在临床应用中，人和动物间按体表面积折算的等效剂量换算可参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》：

例如：大鼠的剂量为Xmg/kg，换算成人的临床剂量为：

人的临床剂量＝Xmg/kg×0.2kg/0.018＝11.1Xmg/天，故大鼠甲磺酸伊马替尼剂量(1、5、10、20、30mg/kg)换算成人的临床剂量分别为11、55、110、220、330mg/天。

按照上市药品格列卫imatinib

发布的临床试验数据，400mg/天/70kg在临床使用过程中少有副作用发生，因此选择100-400mg/天/70kg作为甲磺酸伊马替尼作为临床用药剂量。

基于上述研究内容，本发明提供如下技术方案：

伊马替尼或其衍生物与尼古丁或其类似物在制备药物中的应用，所述药物包括尼古丁成瘾预防、治疗及防复吸的药物。所述药物使用方式为伊马替尼或其衍生物与尼古丁或其类似物联合使用或复方使用。伊马替尼或其衍生物与尼古丁或其类似物按照其有效成分配比大于或等于40:1，在临床上伊马替尼或其衍生物的用量为100-400mg/天。在尼古丁成瘾记忆唤起时，所用剂量与成瘾使用剂量按照其有效成分配比应小于3:10，伊马替尼或其衍生物才可有效预防、治疗尼古丁成瘾和防治复吸。所述药物适用于制成如下剂型或规格中的一种：注射剂、输液剂、皮下埋植剂、丸剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、散剂、口服液、缓释剂、酊剂、栓剂、贴剂。

本发明具有如下有益效果：传统单药使用相比，本发明在大于或等于40:1剂量配比的伊马替尼及其衍生物与尼古丁联合用药或复方用药可有效防治尼古丁成瘾和复吸，并减弱成瘾后戒断症状，有效解决临床患者尼古丁成瘾治疗问题。

附图说明

图1为甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对大鼠尼古丁成瘾形成的影响；A为甲磺酸伊马替尼与0.25mg/kg尼古丁联合给药对大鼠尼古丁成瘾形成的影响；B为甲磺酸伊马替尼与0.5mg/kg尼古丁联合给药对大鼠尼古丁成瘾形成的影响；C为甲磺酸伊马替尼与0.25mg/kg尼古丁复方给药对大鼠尼古丁成瘾形成的影响；D为甲磺酸伊马替尼与0.5mg/kg尼古丁复方给药对大鼠尼古丁成瘾形成的影响。

图2为甲磺酸伊马替尼预防尼古丁成瘾分子新机制；A为c-kit免疫组化检测分析；B为Opal/TSA多标记染色检测分析。

图3为甲磺酸伊马替尼对大鼠尼古丁成瘾后非条件性刺激诱导记忆再唤起后觅药行为的影响；A为甲磺酸伊马替尼与尼古丁联合给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.25mg/kg；B为甲磺酸伊马替尼与尼古丁复方给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为的影响；训练CPP的尼古丁剂量为0.25mg/kg；C为甲磺酸伊马替尼与尼古丁联合给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg；D为甲磺酸伊马替尼与尼古丁复方给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg；

图4为甲磺酸伊马替尼非条件性刺激后给药(联合、复方)、环境线索刺激后给药、直接给药对大鼠尼古丁成瘾后觅药行为及戒断后复吸的影响；A为甲磺酸伊马替尼与尼古丁联合给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg，诱发剂量为0.1mg/kg；B为甲磺酸伊马替尼与尼古丁复方给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg，诱发剂量为0.1mg/kg；C为甲磺酸伊马替尼与尼古丁联合给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg，诱发剂量为0.15mg/kg；D为甲磺酸伊马替尼与尼古丁复方给药对非条件刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg，诱发剂量为0.15mg/kg；E为甲磺酸伊马替尼对环境刺激诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg；F为甲磺酸伊马替尼直接给药对尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响，训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg；G为甲磺酸伊马替尼对尼古丁类似物诱发的尼古丁成瘾大鼠觅药行为及复吸的影响训练CPP的尼古丁剂量为0.5mg/kg，诱发剂量为相当于0.15mg/kg。

图5为甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对尼古丁戒断症状的影响；A为甲磺酸伊马替尼与尼古丁联合给药对大鼠尼古丁戒断症状的影响；B为甲磺酸伊马替尼与尼古丁复方给药对大鼠尼古丁戒断症状的影响。

图6为甲磺酸伊马替尼使用剂量与临床使用剂量的换算。

图7为甲磺酸伊马替尼戒烟效果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对大鼠尼古丁成瘾形成的影响及分子机制

实验1：甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对大鼠尼古丁成瘾形成的影响

一、材料

药品：尼古丁(Nicotine，Apexbio)，甲磺酸伊马替尼(Selleck Chemicals)。

实验动物：SPF级SD雄性大鼠，体重180-220g。三峡大学实验动物中心提供，动物合格证号为NO.42010200001750，生产许可证号：SCXK(鄂)2017-0012。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

实验仪器：条件性位置偏爱仪(中国医学科学院药物研宄所研制)：实验采用计算机自动控制。装置由三箱构成的条件性位置偏爱箱：两个侧室和一个中间室。三室由可移动的隔板分开，内外均为黑色。其中A箱和B箱位于中间箱的两侧，大小相同，A箱侧壁上有9盏能发出黄光二极管构成的正方形，底板为不锈钢钢条，B箱底板为不锈钢网格。大鼠在各箱的停留时间和出入次数可通过数据传送到计算机，自动收集记录行为学资料。

二、实验方法

基础值测试：第1天，拿掉隔板，开放三箱的通道，启动计算机上CPP程序，大鼠由中间室放入，任其在三箱中自由活动15分钟，电脑同步记录其在各室中停留的时间。根据测试结果进行淘汰，分为6组(尼古丁+生理盐水组、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组(1mg/kg)、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组(5mg/kg)、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组(10mg/kg)、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组(20mg/kg)、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组(30mg/kg))，每组10只，并区分各大鼠的伴药侧与非伴药侧。

条件性位置偏爱训练：第2至9天，封闭三箱间通道，其中甲磺酸伊马替尼和尼古丁采用联合给药方式或复方制剂给药方式。第2、4、6、8天，各组腹腔注射不同剂量甲磺酸伊马替尼(1、5、10、20、30mg/kg，i.p.)或生理盐水(1mL/kg，i.p.)，30分钟后皮下注射尼古丁(0.25、0.5mg/kg，s.c.)，或每组大鼠同时皮下注射不同剂量配比的甲磺酸伊马替尼(1、5、10、20、30mg/kg，s.c.)或生理盐水(1mL/kg，s.c.)和尼古丁(0.25、0.5mg/kg，s.c.)混合试剂，并放入伴药侧45分钟；第3、5、7、9天，尼古丁组大鼠均腹腔注射生理盐水(1mL/kg，i.p.)，30分钟后皮下注射生理盐水(1mL/kg，s.c.)，或每组大鼠皮下注射生理盐水(1mL/kg，s.c.)，并放入非伴药侧45分钟。每只大鼠的伴药侧是固定的。每组大鼠实验完后放回饲养笼。

尼古丁CPP测试：第10天，CPP测试，与基础值测试阶段相似。开放三箱间的通道，不予任何注射，启动计算机上CPP程序，大鼠由中间室放入，任其在箱中自由活动15分钟，电脑同步记录其在各室中停留的时间。CPP分值(CPP score)为伴药侧时间与非伴药侧时间的差值。将大鼠在伴药箱中条件位置偏爱后测值与前测值比较确定大鼠是否形成条件位置偏爱。

三、实验结果

结果见图1A，甲磺酸伊马替尼+尼古丁联合给药组的条件位置偏爱分值和生理盐水+尼古丁组相比差异具有显著性，并呈剂量配比依赖性，腹腔注射10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼可抑制大鼠0.25mg/kg尼古丁条件性位置偏爱的形成，而1、5mg/kg甲磺酸伊马替尼不具有抑制性；未给予甲磺酸伊马替尼的大鼠，条件性位置偏爱依然存在。图1B显示，腹腔注射20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼可抑制大鼠0.5mg/kg尼古丁条件性位置偏爱的形成，而1、5、10mg/kg甲磺酸伊马替尼则不具有抑制性，说明甲磺酸伊马替尼与尼古丁呈剂量配比大于或等于40:1时可抑制大鼠尼古丁成瘾的形成。同样，图1C、1D中甲磺酸伊马替尼和尼古丁复方制剂给药也得到相似结果。

实验2：甲磺酸伊马替尼预防尼古丁成瘾分子新机制

由实验1的结果可知，无论联合给药还是混合制剂，甲磺酸伊马替尼(10-30mg/kg)对尼古丁CPP形成有不同程度的抑制作用。本实验采用免疫组化和多色免疫荧光分子实验检测药物奖赏脑区c-kit磷酸化水平的变化及其下游激活靶分子，确定尼古丁成瘾分子新机制和甲磺酸伊马替尼防治成瘾的作用机制。

一、材料

药品：尼古丁(Nicotine，Apexbio)，甲磺酸伊马替尼(Selleck Chemicals)。

实验动物：SPF级SD雄性大鼠，体重180-220g。三峡大学实验动物中心提供，动物合格证号为NO.42010200001704，生产许可证号：SCXK(鄂)2017-0012。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

二、实验方法

随即将动物分为生理盐水+生理盐水组、生理盐水+甲磺酸伊马替尼组、尼古丁+生理盐水组、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组，每组10只，各组大鼠腹腔给予生理盐水(1mL/kg，i.p.)或甲磺酸伊马替尼(30mg/kg，i.p.)，30分钟后皮下注射尼古丁(0.5mg/kg，s.c.)，60分钟后观察对中脑边缘多巴胺系统包括VTA、伏隔核、杏仁体、海马、前额皮层的c-kit活性的变化，免疫组化观察c-kit磷酸化水平的变化，多色免疫荧光共标确定其下游激活靶分子，确定尼古丁成瘾分子新机制和甲磺酸伊马替尼防治成瘾的作用机制。

三、实验结果

结果见图2，急性尼古丁给药后，免疫组化和多色免疫荧光共标结果显示，特异性激活伏隔核并非其他脑区神经元c-kit受体及受体后多种信号转导通路如PKC、PI3K-AKT、ERK等调节激酶活性、蛋白表达、基因表达与调控启动尼古丁奖赏、记忆和神经可塑性过程，说明伏隔核c-kit受体是尼古丁急性给药激活特异性脑区；甲磺酸伊马替尼通过阻断c-kit受体抑制多种信号转导通路如PKC、PI3K-AKT、ERK等调节激酶活性、蛋白表达、基因表达与调控启动尼古丁奖赏、记忆和神经可塑性过程，从而达到预防尼古丁成瘾的作用。

实施例3：甲磺酸伊马替尼对大鼠尼古丁成瘾后非条件性刺激诱导记忆再唤起后觅药行为的影响

由实施例1可知，伊马替尼及其衍生物甲磺酸伊马替尼通过抑制伏隔核区域c-kit磷酸化活性来抑制大鼠尼古丁成瘾的形成，本实施例通过建立条件性位置偏爱实验模型，探讨甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对大鼠尼古丁成瘾复吸的影响。

一、材料

药品：尼古丁(Nicotine，Apexbio)，甲磺酸伊马替尼(Selleck Chemicals)。

实验动物：SPF级SD雄性大鼠，体重180-220g。三峡大学实验动物中心提供，动物合格证号为NO.42010200001855，生产许可证号：SCXK(鄂)2017-0012。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

实验仪器：同实施例1

二、实验方法

基础值测试：同实施例1

条件性位置偏爱训练：第2至9天，封闭三箱间通道，大鼠皮下注射0.25、0.5mg/kg尼古丁，并放入伴药侧45分钟；第3、5、7、9天，各组大鼠均皮下注射生理盐水(1mL/kg，s.c.)，并放入非伴药侧45分钟。每只大鼠的伴药侧是固定的。每组大鼠实验完后放回饲养笼。

尼古丁CPP测试：同实施例1

模型建立：第11天，将大鼠按照CPP分值分为12组

大鼠暴露于伴药侧或皮下注射0.25、0.5mg/kg尼古丁，15分钟后，腹腔注射不同剂量甲磺酸伊马替尼(1、5、10、20、30mg/kg，i.p.)或生理盐水(1mL/kg，i.p.)；或者每组大鼠同时皮下注射不同剂量配比的甲磺酸伊马替尼(1、5、10、20、30mg/kg，s.c.)或生理盐水(1mL/kg，s.c.)和尼古丁(0.25、0.5mg/kg，s.c.)混合试剂。

在实验的第11天，将大鼠注射0.15mg/kg尼古丁后放入伴药侧15分钟，然后给予不同剂量甲磺酸伊马替尼(1、5、10、20、30mg/kg，i.p.)或生理盐水(1mL/kg，i.p.)；或注射尼古丁与甲磺酸伊马替尼的混合物后放入伴药侧15分钟。

尼古丁CPP重新测试：甲磺酸伊马替尼给药后第1天和第7天，即第12天和第18天，测试大鼠伴药箱的偏爱程度，与基础值测试阶段相似。中间第13天和第17天，对大鼠不做任何处理。

三、实验结果

结果可见图3A、3B，不管是联合给药还是反复给药，对于0.25mg/kg尼古丁训练CPP的大鼠来说，10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼对条件性线索暴露引起的尼古丁觅药行为有不同程度的抑制作用；图3C、3D显示，对于0.5mg/kg尼古丁训练的大鼠来说，不管是联合给药还是反复给药，20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼对其觅药行为有明显的抑制。表明非条件性线索引起的尼古丁成瘾的觅药行为可被得到有效治疗，其中训练尼古丁CPP的剂量与甲磺酸伊马替尼剂量配比需小于1:40，无论是联合给药还是混合制剂均有此效果。

实施例4：甲磺酸伊马替尼非条件性刺激后给药(联合、复方)、环境线索刺激后给药、直接给药对大鼠尼古丁成瘾后觅药行为及戒断后复吸的影响。

一、材料

药品：尼古丁(Nicotine，Apexbio)，甲磺酸伊马替尼(Selleck Chemicals)。

实验动物：SPF级SD雄性大鼠，体重180-220g。三峡大学实验动物中心提供，动物合格证号为NO.42010200001721，生产许可证号：SCXK(鄂)2017-0012。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

实验仪器：同实施例1

分组：

条件性位置偏爱训练：第2至9天，封闭三箱间通道。第2、4、6、8天，给药组皮下注射尼古丁(0.5mg/kg)并放入伴药侧45分钟：对照组皮下注射生理盐水(1mL/kg)并放入非伴药侧45分钟。第3、5、7、9天，给药组及对照组大鼠均注射生理盐水(1mL/kg)，给药组放入非伴药侧，对照组放入伴药侧，均为45分钟。每只大鼠的伴药侧是固定的。每组大鼠之后被放回饲养笼。

吗啡CPP测试：同实施例1。

(2)甲磺酸伊马替尼对觅药行为作用检测

在实验的第11天，对于物质线索诱导的大鼠，联合用药组提前30分钟注射吗尼古丁(0.1、0.15mg/kg，s.c.)或生理盐水(1mL/kg，s.c.)，然后腹腔给予20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼，复方制剂给药组给予30mg/kg甲磺酸伊马替尼或尼古丁(0.1、0.15mg/kg，i.p.)或生理盐水(1mL/kg)的混合物。环境线索诱导的大鼠放回伴药侧15分钟，然后腹腔注射甲磺酸伊马替尼20、30mg/kg或生理盐水1mL/kg；无诱导的大鼠则直接给予甲磺酸伊马替尼(20、30mg/kg，i.p.)或生理盐水(1mL/kg，i.p.)，然后将大鼠放回饲养笼，于24小时后进行条件位置偏爱行为学的测试。

(3)吗啡CPP重新测试

甲磺酸伊马替尼给药后第1天即第12天，第7天即第18天，测试大鼠对伴药箱的偏爱程度，15分钟，与基础值测试阶段相似。第19天，利用小剂量的尼古丁(0.15mg/kg，s.c.)进行点燃。吗啡注射后将大鼠放入中间箱，开始15分钟的CPP值测试。非检测期间对大鼠不做任何处理。

三、实验结果

结果见图4，给药组与对照组相比差异具有显著性。20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼给药，对所有给药组来说，可显著减弱条件位置偏爱；其他给药剂量的大鼠的大鼠，条件位置偏爱依然存在。说明甲磺酸伊马替尼与尼古丁以40:1配比给药可阻断成瘾后的觅药行为，抑制心理渴求。而用小剂量尼古丁或其类似物激发后，非条件性刺激诱导包括联合给药物和复方制剂组，诱导剂量的尼古丁为0.1mg/kg时，用20、30mg/kg剂量大鼠(包括联合和复方)均未被点燃；环境诱导只有使用30mg/kg甲磺酸伊马替尼组未被点燃；而直接给药伊马替尼的组，全部被点燃。说明当用非条件刺激后给药(联合和复方)可以防止复吸，且只有当甲磺酸伊马替尼所用剂量与训练时用的尼古丁剂量配比大于等于40:1，且非条件性刺激时尼古丁剂量与训练时尼古丁剂量比例小于等于3:10时，所有剂量均抑制觅药行为且不被点燃，很好的防治复燃；而用环境线索刺激后给药(联合和复方)只能部分阻止觅药行为，防止复燃效果弱；直接给药甲磺酸伊马替尼，只有甲磺酸伊马替尼的用量达到30mg/kg才能起到阻止觅药行为的作用，且防止复燃效果很弱。

实施例5：甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对尼古丁戒断症状的影响

由实施例1和2可知，伊马替尼及其衍生物甲磺酸伊马替尼通过抑制伏隔核区域c-kit磷酸化活性来抑制大鼠尼古丁成瘾的形成以及复吸，本实施例通过建立尼古丁成瘾模型，探讨甲磺酸伊马替尼与尼古丁剂量配比效应对大鼠尼古丁戒断症状的影响。

一、材料

药品：尼古丁(Nicotine，Apexbio)，甲磺酸伊马替尼(Selleck Chemicals)。

实验动物：SPF级SD雄性大鼠，体重180-220g。三峡大学实验动物中心提供，动物合格证号为NO.42010200001750，生产许可证号：SCXK(鄂)2017-0012。鼠饲料，购于武汉大学实验动物中心。

实验仪器：条件性位置偏爱仪(同实施例1)；自发活动检测箱(中国医学科学院药物研宄所研制)：实验采用计算机自动控制。装置由四个自发活动观察箱、视频合成器、视频图样采样卡和分析软件等组成。本系统对大鼠活动进行视频跟踪，自动记录大鼠活动轨迹及活动次数。自发活动评价指标是大鼠一定时间内(如60分钟)的活动总次数，即总次数增多显示自发活动增加。

二、实验方法

尼古丁成瘾模型建立：实施例1大鼠0.25、0.5mg/kg尼古丁成瘾后，分为三组(尼古丁+生理盐水组、尼古丁+美加明组(0.5mg/kg)、尼古丁+甲磺酸伊马替尼组，每组10只)，另外完全未经尼古丁处理的生理盐水+生理盐水组作为对照组。

尼古丁戒断模型建立：24小时后，尼古丁组大鼠腹腔注射1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼，30分钟后皮下注射0.15mg/kg尼古丁，或将1、5、10、20、30mg/kg甲磺酸伊马替尼与0.15mg/kg尼古丁制备成混合注射剂后给药。60分钟后采用自发活动箱，测定其自发活动量。

三、实验结果

结果可见图5A显示，尼古丁成瘾大鼠给予美加明后，戒断症状得到激发，自发活动量明显下降，给予甲磺酸伊马替尼后，10、20、30mg/kg，而不是1、5mg/kg可不同程度减弱0.25mg/kg尼古丁成瘾戒断症状，提高活动量；图5B显示，20、30mg/kg，而不是1、5、10mg/kg甲磺酸伊马替尼可减弱0.5mg/kg尼古丁戒断症状，提高自发活动量，表明甲磺酸伊马替尼与尼古丁的剂量配比在大于或等于40:1时可减弱尼古丁成瘾戒断症状。

实施例6：甲磺酸伊马替尼对尼古丁患者烟瘾的影响

由以上施例可知，甲磺酸伊马替尼通过抑制伏隔核区域c-kit磷酸化活性来抑制大鼠尼古丁成瘾的形成以及复吸，且有效剂量在10-30mg/kg，安全剂量范围对应关系如图6所示，甲磺酸伊马替尼是临床使用的药物，使用剂量在每天400mg以下很少有副作用。基于以上有效性和安全性，通过伦理委员会批准，申请ICH-GCP临床试验(注册批号：CHICTR1800019507)，探讨甲磺酸伊马替尼对尼古丁患者烟瘾的影响。

一、药品：甲磺酸伊马替尼(100mg/片，诺华公司产品)。

研究目的：评估甲磺酸伊马替尼片治疗物质成瘾患者的疗效。

评价指标：

1)评价服药后患者戒断症状的变化；

2)评价服药后患者心理渴求变化；

3)生命体征(包括心率、体温、呼吸、血压)、体格检查等。

二、试验设计

采用随机双盲对照设计，包括筛选期、治疗期和30天随访期。

入选标准：

·符合DSM-V-TR物质依赖诊断标准的自愿脱瘾患者；

·18-60岁(包括两端)，无其他精神心理和躯体疾病，男女不限；

·BMI：19-35kg/㎡(包括两端)；

·阿片依赖患者戒断后1-180天内，尼古丁和酒精戒断后1-3天的患者；

·能够理解本研究的程序和方法，愿意严格遵守临床试验方案完成本试验，并自愿签署知情同意书。

排除标准：

·血液系统疾病；

·酒精或碘伏过敏史；

·胃肠道疾病者；

·接受过输血或献血者；

·妊娠或哺乳期女性，或具有生育能力的男性或女性不愿意在试验期间避孕者；

·心脑血管疾病和代谢性疾病等；

·活动性感染者；

·研究者认为患者具有任何可能影响本研究的疗效或安全性评价的其他因素存在。

三、安全性评价

任何不良事件(尤其关注尿潴留、全身浮肿、粒细胞上升等不良事件)、生命体征、体格检查、心电图等检查结果均作为安全性评价指标。

四、试验方案

尼古丁依赖自愿受试患者经过≤1天的筛选期，筛选合格后进入为期3天的治疗期，每组10例，接受药物治疗。每天一次早晨抽少量烟后口服给药，每次3片，连续给药3天，治疗期结束后7天内每日进行电话随访，30天内一周一次电话随访。整个研究期间分别在给药前后和随访期分别进行戒断症状与心理渴求评价，按照身心状态填写相关评价表，在研究期间住院观察，不能使用方案规定以外的其他戒毒药品，遵循医生治疗方案管理。

五、实验结果

临床戒烟受试者研究结果显示给药3天，给药第1、7、30天随访，可控制烟瘾80-90％以上，完全可以戒掉烟瘾，效果很好，如图7所示，此结果为药物有效性和安全性研究和申报新药奠定了坚实的基础，有望应用到临床医药市场，改变目前无药可治的现状。

结论：伊马替尼及其衍生物甲磺酸伊马替尼与尼古丁或其类似物以大于或等于40:1的剂量配比使用可防治其成瘾形成与复吸，并减弱尼古丁成瘾戒断症状，且此剂量在目前临床使用剂量安全范围内，如图6所示。此外，相比于环境线索诱发尼古丁复吸行为，甲磺酸伊马替尼对小剂量尼古丁或其类似物诱发复吸行为有更好预防和治疗效果，并且尼古丁诱发剂量与尼古丁成瘾剂量配比需小于3:10。由此，伊马替尼及其衍生物与尼古丁或其类似物联合用药或制备复方制剂来进行尼古丁成瘾治疗和防治复吸是行之有效的，效果好，安全性高，临床可操控性强，是尼古丁成瘾与复吸治疗实质性进步。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种尼古丁成瘾预防、治疗及防复吸的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包括尼古丁和甲磺酸伊马替尼；甲磺酸伊马替尼与尼古丁按照其有效成分剂量配比为20：0.1。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物适用于制成如下剂型中的一种：注射剂、输液剂、皮下埋植剂、丸剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、散剂、口服液、缓释剂、酊剂、栓剂、贴剂。

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