CN101589026B

CN101589026B - 治疗脑神经胶质瘤的方法

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Publication number: CN101589026B
Application number: CN2007800311672A
Authority: CN
Inventors: 阿什利·布什; 佩内罗普·J·哈金斯; 杰克·G·帕森斯; 盖克·B·科克; 维加亚·肯克
Original assignee: Prana Biotechnology Ltd
Current assignee: Alterity Therapeutics Ltd
Priority date: 2006-06-22
Filing date: 2007-06-22
Publication date: 2013-10-16
Anticipated expiration: 2027-06-22
Also published as: WO2007147217A1; CA2656825A1; US8163760B2; CN101589026A; CA2656825C; AU2007262670A1; US20100069393A1; EP2044026A1; ES2474865T3; JP2009541223A; DK2044026T3; AU2007262670A2; EP2044026A4; AU2007262670B2; JP5415942B2; EP2044026B1

Abstract

本发明大体上涉及治疗剂，包含它们的制剂和它们在治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤及相关病症中的用途。所述治疗剂包含两个稠合的6-元环并且在这两个稠合的6-元环上至少在1位为氮和在8位为羟基。

Description

治疗脑神经胶质瘤的方法

技术领域

本发明主要涉及治疗剂，包含它们的制剂以及它们在治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤(glioma brain tumour)和相关病症中的用途。

背景技术

癌症是一种全世界范围的严重的人类健康问题，且是致死和致病的最大单个原因之一。术语″癌症″描述了一系列与累积多遗传突变(cumulativemultiple genetic mutation)相关的不同的疾病，所述突变导致致癌基因的活化和/或肿瘤抑制基因的失活。这些突变的原因和起源在人体器官的不同癌症之间是不同的。

在人类脑中的癌症构成非常特别的、严重的和通常晚期的疾病，尽管提供最佳的可用的治疗，但病人的平均存活时间仍少于1年。由于被血脑屏障(BBB)分离，脑的非常独特的生物学环境明显导致了一些在该器官中的位点特异性的癌症，这需要与人体其它部位的癌症不同的治疗。

在美国每年诊断大约17,000原发性脑瘤的患者。其中，大约60％是神经胶质瘤或‘星形细胞瘤’，其来源于称作星形胶质细胞或它们的前体的脑细胞。星形胶质细胞是在支持神经元功能的中枢神经系统中的细胞。星形细胞瘤可以通过表示增加恶性肿瘤成为星形细胞瘤、间变型星形细胞瘤或多形性成胶质细胞瘤(GBM)的组织学特征分级。认为间变型星形细胞瘤和GBM是高等级的神经胶质瘤，而星形细胞瘤被认为是低等级的神经胶质瘤。高等级的肿瘤快速生长，且能够容易地在脑中渗入和扩散。高等级的肿瘤的攻击性大得多，且需要非常强的治疗。儿童中大多数星形细胞瘤是低等级的，相反成人中大多数是高等级的。星形细胞瘤可能出现在脑和脊髓中的任何地方，然而大多数出现在大脑半球。

患有脑癌的患者大多数通常存在癫痫发作和缓慢进行的神经缺陷，通常运动无力。或者，患者可能出现增加颅内压的泛发性症状，包括头疼、恶心和呕吐、和认知缺损。

虽然在检测和治疗脑癌疾病中已经取得了一些进展，但目前仍没有普遍成功的预防或治疗的方法。目前用于许多脑癌的治疗一般基于化疗或手术与放疗的组合，且不断证明在许多患者中是不够的。

例如，脑神经胶质瘤的治疗仍然是困难的，因为目前没有有效的治疗方法。治疗无效主要是因为当肿瘤第一次被临床检测或辐射摄影时，肿瘤超过局部控制的能力。在过去的25年中在治疗脑癌方面没有明显的进步。没有治疗，GBM患者均在3个月之内死亡。相反接受最佳治疗(包括手术切除、放疗和化疗)的病人平均存活大约1年。因此，对于患有脑癌的患者的治疗通常是减轻，且包括和/或手术、放疗和化疗。

与单独手术相比，放疗以及手术已经表现出延长脑癌患者的生存时间，然而这些癌症对放疗的响应不同。在许多情况中，放疗可导致一定时期的减轻，通常标志为神经缺陷稳定或回复以及减小对比增加肿块(contrast-enhancing mass)的大小。不幸的是，响应的任何阶段通常在脑癌中短期存在，因为肿瘤通常在1年内复发，导致进一步的临床恶化。

对于脑癌的化疗方案已经表明少于25％的病人从辅助化疗得到了明显的存活延长。卡莫司汀(BCNU)和顺铂(cisplatin)已经成为用于抵抗恶性神经胶质瘤的主要化疗化合物。所用的所有试剂的响应率均不大于30-40％，且大多数为10-20％。将化疗化合物用于脑瘤的主要的障碍是BBB有效地排除许多试剂进入CNS。尽管最初尝试研究通过动脉内(而不是静脉内)途径递送化疗化合物，但是没有观察到存活延长。

手术的程度(活组织检查对切除)已经表明在许多研究中影响存活时间。例如，患有高级神经胶质瘤的患者，接受全部切除术的患者有2年存活时间的存活率为19％，而次全切除的患者有2年存活时间的存活率为0％。

由于许多脑癌不能用手术治愈，因此手术的目的是建立病理学诊断，减轻肿块效应(mass effect)，以及如果可能实现全部切除以促进辅助治疗。

在一些情况下已经考虑立体定位的活组织检查，然后放疗。包括在脑的语言区域(eloquent area)患有肿瘤的患者；具有最小肿块效应或渗透而没有离散边缘的肿瘤的患者；和在较差医疗条件不能全身麻醉的的患者。据报道立体定位的活组织检查和放疗后的平均存活为27-47周。

根据上述，非常需要新颖的方法治疗成胶质细胞瘤和其它脑神经胶质瘤。

发明内容

本发明一部分涉及测定具体试剂抑制人类脑神经胶质瘤和相关病况发展的有效性。因此，本发明考虑使用包含有两个稠合的6-元环并且在这两个稠合的6-元环上至少在1位为氮和在8位为羟基的化合物的试剂降低人受试者中脑神经胶质瘤且尤其是成胶质细胞瘤(GBM)的生长。本发明尤其用于治疗或预防或降低GBM发展的危险，然而本发明延及治疗任何脑神经胶质瘤，包括星形细胞瘤(astrocytomas)、间变型星形细胞瘤(anaplastic astrocytoma)、混合性神经胶质瘤(mixed glioma)、少突胶质细胞瘤(oligodendroglioma)和其它神经胶质瘤。

本发明的试剂可具有一种或多种下述性质：通过BBB，表现出降低不良副作用；在水环境中稳定；对癌症细胞的选择性细胞毒；和表现出对于非恶性细胞降低的细胞毒性。优选地，所述试剂具有2种或更多，3种或更多，或4种或更多，或5种或更多的上述性质。而且，所述试剂可以根据其与其它试剂(如化疗、免疫或细胞因子试剂)的协同作用进行选择。

有用的试剂包括式(I)化合物，其如下所述。

在第一方面，本发明提供了治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤的方法，其包括向有此需要的受试者给药有效量的包含式(I)化合物，其盐、水合物、溶剂合物、衍生物、前体药物、互变异构体和/或异构体的试剂：

其中

R²为H；任选被取代的C_1-6烷基；任选被取代的C_2-6烯基；任选被取代的C_2-6炔基；任选被取代的C_3-6环烷基；任选被取代的芳基；任选被取代的杂环基；CN；OR⁶、SR⁶、COR⁶、CSR⁶、HCNOR⁶或HCNNR⁶，其中R⁶为H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂环基；NR⁸R⁹或SO₂NR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂环基；CONR⁹R¹⁰，其中R⁹如上定义且R¹⁰为任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂环基；CH₂CONR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹如上定义；和(CH₂)_nNR⁹R¹¹，其中R⁹如上定义且R¹¹选自任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂环基，和SO₂R¹²，其中R¹²为任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂环基，且n为1-6；

R³选自H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂环基、任选被取代的C_1-6烷氧基、任选被取代的酰基、羟基、任选被取代的氨基、任选被取代的硫基(thio)、任选被取代的磺酰基、任选被取代的亚磺酰基、任选被取代的磺酰基氨基、卤素、SO₃H、胺、CN、CF₃和卤素。

X为CH或N；

Y为CH、CO、CS或N；且

q为1、2或3。

本发明尤其延及脑瘤的神经胶质瘤形式，如星形细胞瘤、GBM、间变型星形细胞瘤、混合性神经胶质瘤和少突胶质细胞瘤。

在这些神经胶质瘤中，GBM尤其可用本文公开的试剂治疗。可给药限定的或特定的剂量。

本发明也提供了抑制与脑中神经胶质瘤相关的细胞生长或存活的特定剂量范围。该剂量范围包括每受试者每次给药约1ng至约1g。给药可以为单剂量或一系列分开的剂量。

本发明还提供包含上述定义的式(I)化合物的试剂在制备用于治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤的药物中的用途。

本发明还提供包含上述定义的式(I)化合物的试剂在治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤中的用途。

组合治疗也是本发明的一部分，其中可以给药2种或更多试剂，或给药试剂和其它活性物如化疗化合物、细胞因子、基因分子、抗氧化剂和/或麻醉剂。

涉及的″化疗化合物″包括化学化合物(chemical compound)、免疫化合物、天然产物或sRNAi复合物或引入的病毒载体的产物。

虽然，优选的受试者为人，本发明用于兽医和动物饲养工业，因此本发明延及非人动物。

在第二方面，本发明提供了包括含上述定义的式(I)化合物的试剂的制剂，其用于治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤。

附图说明

图1为表示以5mg/kg的标称剂量静脉注射(IV)给药到Swiss Outbred小鼠后化合物的脑和血浆浓度的图。数据表示为平均1SD(n＝3)。用字母给化合物编号，且如说明书中的定义。

图2为表示化合物对于C6细胞的细胞毒筛选的图。用字母给待测化合物编号，且如说明书中的定义。

图3为表示不同试剂对于U87MG细胞的细胞毒筛选的图。用字母给待测化合物编号，且如说明书中的定义。

图4为表示化合物对于SMA 560细胞的细胞毒筛选的图。用字母给待测化合物编号，且如说明书中的定义。

图5为表示化合物对于3T3细胞的细胞毒筛选的图。用字母给待测化合物编号，且如说明书中的定义。

图6a至d为表示化合物A、B、S和H在C6神经胶质瘤模型(a，c)和SMA560神经胶质瘤模型(b，d)中的作用的图。

发明详述

化合物

式(I)化合物优选为式(I′)化合物：

其中

R²为H；任选被取代的C_1-6烷基；任选被取代的C_2-6烯基；任选被取代的C_2-6炔基；任选被取代的C_3-6环烷基；任选被取代的芳基；任选被取代的杂环基；CN；OR⁶、SR⁶、COR⁶、CSR⁶、HCNOR⁶或HCNNR⁶，其中R⁶为H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂环基；NR⁸R⁹或SO₂NR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基和任选被取代的杂环基；CONR⁹R¹⁰，其中R⁹如上定义，且R¹⁰为任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂环基；CH₂CONR⁸R⁹，其中R⁸和R⁹如上定义；和(CH₂)_nNR⁹R¹¹，其中R⁹如上定义，且R¹¹选自任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的杂环基，和SO₂R¹²，其中R¹²为任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的杂环基，且n为1-6；

R⁵和R⁷独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基和卤素；

X为CH或N；

Y为CH、CO、CS或N；且

q为1、2或3。

式(I’)化合物包括下述化合物，其中X和Y为CH；在3位上的X为N，在6位上的X为CH，且其它X为CH，且Y为CO或CS；在3和6位上的X为CH，且其它X为N，且Y为CO；X为CH，且Y为N；Y和在3位上的X为CH；在6位上的X为N，且其它X为C。

在一个实施方案中，式(I’)化合物具有式(IA)：

其中

R²、R⁵、R⁷、R⁸和q如上定义。

R²优选在2或3位上或2和3位两者上，且选自H；任选被取代的C_1-4烷基；任选被取代的C_2-4烯基；任选被取代的C_3-6环烷基；任选被取代的6-元芳基，其任选与任选被取代的6-元芳基或杂芳基稠合；任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基或杂芳基稠合；(CH₂)_nR¹³，其中n如上定义且R¹³为任选被取代的C_1-4烷基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基或任选被取代的6-元芳基；NR¹⁴R¹⁵，其中R¹⁴和R¹⁵独立地选自H、任选被取代的C_1-4烷基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基和任选被取代的6-元芳基；HCNOR¹⁶，其中R¹⁶为H、任选被取代的C_1-4烷基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基或任选被取代的6-元芳基；CH₂CONR¹⁷R¹⁸，其中R¹⁷和R¹⁸独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基和任选被取代的5或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基稠合；和(CH₂)_nNR¹⁹R²⁰，其中R¹⁹和R²⁰独立地选自任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_3-6环烷基，和SO₂R²¹，其中R²¹选自任选被取代的C_1-6烷基和任选被取代的6-元芳基，且n如上定义。

更优选地，R²为H、任选被取代的C_1-4烷基或(CH₂)_nNR¹⁹R²⁰，其中n、R¹⁹和R²⁰如上定义。

优选地，R⁵和R⁷均为卤素，更优选均为氯或一个为氯，另一个为碘。

式(IA)化合物的亚类具有式(Ia)：

其中

R²、R⁵和R⁷如上定义。

式(Ia)化合物的亚类如下：

其中

R²选自H或任选被取代的饱和或不饱和6-元含N杂环基，如吡啶基；且

R⁷为Cl或I。

代表性的实例如下：

化合物A

化合物ZA

其中

R¹⁹和R²⁰独立地选自H和任选被取代的C_1-6烷基。

代表性的实例如下：

化合物B

化合物D

化合物G

化合物J

化合物K

其中

R⁹为H；且

R¹⁰选自任选被取代的C_1-6烷基，更优选C_1-6烷基，其任选被5-元含N杂环基如咪唑基取代。

代表性的实例如下：

化合物C

化合物E

其中

R⁸和R⁹独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基和任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基，如吡啶基。

代表性的实例如下所示：

其中

R¹⁶为H或任选被取代的C_1-6，优选为C_1-4烷基。

代表性的实例如下所示：

Figure DEST_PATH_G51308031150138000D000032

在另一个实施方案中，式(I′)化合物具有式(IB)：

Figure DEST_PATH_G51308031150138000D000033

其中

R²、R⁵、R⁷和Y如上定义；且

r为1或2。

R²优选在2或3位上或2和3位两者上，且选自H；任选被取代的C_1-4烷基；任选被取代的C_1-4烯基；任选被取代的C_3-6环烷基；任选被取代的6-元芳基，其任选与任选被取代的6-元芳基或杂芳基稠合；任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基或杂芳基稠合；(CH₂)_nR¹³，其中n如上定义，且R¹³为任选被取代的C_1-4烷基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基或任选被取代的6-元芳基；NR¹⁴R¹⁵，其中R¹⁴和R¹⁵独立地选自H、任选被取代的C_1-4烷基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基和任选被取代的6-元芳基；NHCOR¹⁶，其中R¹⁶为任选被取代的C_1-4烷基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基或任选被取代的6-元芳基；CH₂CONR¹⁷R¹⁸，其中R¹⁷和R¹⁸独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基和任选被取代的5或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基稠合；和(CH₂)_nNR¹⁹R²⁰，其中R¹⁹和R²⁰独立地选自任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_3-6环烷基和SO₂R²¹，其中R²¹选自任选被取代的C_1-6烷基和任选被取代的6-元芳基，且n如上定义，

更优选地，R²选自任选被取代的C_1-4烷基；任选被取代的C_1-4烯基；任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基或杂芳基稠合；(CH₂)_nR¹³，其中n为1-3，且R¹³为任选被取代的C_3-6环烷基或任选被取代的饱和或不饱和5-或6-元含N杂环基；NR¹⁴R¹⁵，其中R¹⁴为H，且R¹⁵为H或任选被取代的C_1-4烷基或任选被取代的6-元芳基；NHCOR¹⁶，其中R¹⁶为任选被取代的C_1-4烷基或任选被取代的6-元芳基。

优选地，R⁵为H或氯，且R⁷为氯或碘。

式(IB)化合物的亚类具有式(Ib)

其中

R²、R⁵、R⁷、Y和q如上定义。

式(Ib)化合物的亚类如下：

其中

R²选自任选被取代的C_1-6烷基和任选被取代的C_3-6环烷基；

R⁵为Cl或H；

R⁷为Cl或I；且

Y为CO或CS。

代表性的实例如下：

化合物F

化合物P

化合物R

化合物Z

其中

R⁵和R⁷如上定义；且

R¹³如上定义，优选为任选被取代的C_3-6环烷基或任选被取代的5-或6-元杂环基，如吡啶基、噻唑基或异噁唑基。

代表性的实例如下：

化合物H

化合物I

化合物N

化合物O

化合物U

其中

R¹⁴和R¹⁵如上定义，优选独立地选自H和任选被取代的6-元芳基，如被卤素取代的苯基。

代表性的实例如下：

化合物Q

其中

R²选自任选被取代的C_1-6烷基、CH₂NR⁹R¹¹其中R⁹为H且R¹¹为任选被取代的C_1-6烷基。

代表性的实例如下：

化合物T

在另一个实施方案中，式(I′)化合物具有式(IC)：

其中

R²、R⁵、R⁷和r如上定义。

R²优选在3位上，且选自H、任选被取代的C_1-4烷基和CONR⁹R¹⁰，其中R⁹和R¹⁰如上定义，优选R⁸为H且R⁷为氯或碘。

式(IC)化合物的亚类具有式(Ic)：

其中R²、R⁵和R⁷如上定义。

式(Ic)化合物的亚类如下：

其中R²为任选被取代的C_1-6烷基；且

R⁷如上定义，优选为H或I。

代表性的实例如下：

化合物V

化合物W

化合物X

化合物S

其中

R⁷如上定义，优选I；

R⁹为H；且

R¹⁰为任选被取代的C_1-6烷基。

代表性的实例如下：

化合物Y

在另一个实施方案中，式(I′)化合物具有式(ID)：

其中

R²、R⁵、R⁶和r如上定义。

式(ID)化合物的亚类具有式(Id)：

其中

R²、R⁵、R⁶和R⁷如上定义。

优选R²为任选被取代的C_1-6烷基，且R⁵和R⁷均为氯。

代表性的实例如下：

化合物M

在另一个实施方案中，式(I’)化合物具有式(IE)：

其中

R²、R⁵和q如上定义。

式(IE)化合物的亚类具有式(Ie)：

其中

R²如上定义；且

R⁷为任选被取代的C_1-6烷基。

代表性的实例如下：

化合物L

单独或在化合物(如“任选被取代的C_1-4烷基”)中使用的术语“C_1-6烷基”或“C_1-4烷基”是指分别具有1-6个和1-4个碳原子的直链或支链烃基。代表性的这些烷基为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基或己基，优选为甲基、乙基或丙基。

本文所用的术语“(CH₂)_n”包括直链或支链。

术语“C_2-6烯基”是指具有至少一个E或Z立体化学的双键和2-6个碳原子的直链或支链烃基。实例包括：乙烯基、1-丙烯基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。

单独或在化合物中(如“任选被取代的C_2-6炔基”)所用的术语“C_2-6炔基”是指具有2-6个碳原子且具有一个叁键的直链或支链烃基。示例性的这些基团为乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。

单独或在化合物中(如“任选被取代的C_3-6环烷基”)所用的术语“C_3-6环烷基”是指具有3-6个碳原子的饱和碳环基团。示例性的这些基团为环丙基、环丁基、环戊基和环己基，优选为环丙基。

术语“杂环基”是指饱和或不饱和的，单环或多环烃基，其含有至少一个选自氮、硫和氧的杂原子。

适合的杂环基包括含N杂环基，如含1-4个氮原子的不饱和的5-或6-元杂单环基团，例如，吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基或四唑基；

含有1-4个氮原子的饱和的5-或6-元杂单环基，如吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶子基(piperidino)或哌嗪基；

含有1-5个氮原子的不饱和的稠合的杂环基，如吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基或四唑并哒嗪基；

含有1-2个氧原子和1-3个氮原子的不饱和的5-或6-元杂单环基，如噁唑基、异噁唑基或噁二唑基；

含有1-2个氧原子和1-3个氮原子的饱和的5-或6-元杂单环基，如吗啉基；

含有1-2个硫原子和1-3个氮原子的不饱和的5-或6-元杂单环基，如噻唑基或噻二唑基；和

含有1-2个硫原子和1-3个氮原子的饱和的3-6-元杂单环基，如噻唑烷基。

优选的杂环基为含有1-3个氮原子的不饱和的5或6-元杂单环基，如吡唑基、吡啶基、嘧啶基或咪唑基；含有1-4个氮原子的饱和的5或6-元杂单环基，如吡咯烷基或哌嗪基；含有1-5个氮原子的不饱和的稠合的杂环基，如苯并咪唑基；含有1-2个氧原子和1-3个氮原子的饱和的5或6-元杂单环基，如吗啉基；或含有1-2个硫原子和1-3个氧原子的不饱和的5-或6-元杂单环基，如噻唑基。

单独或在化合物中(如“任选被取代的不饱和的或饱和的5-或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基稠合”)使用的术语“不饱和的或饱和的5-或6-元含N杂环基，其任选与任选被取代的6-元芳基稠合”是指含有至少一个氮原子和任选其它选自硫和氧的杂原子的单环或多环杂环基。

术语“芳基”是指芳香烃的单核、多核、轭合或稠合残基。实例包括苯基、联苯基、三联苯基(terphenyl)、四联苯基(quaterphenyl)、萘基、四氢萘基、蒽基、二氢蒽基、苯并蒽基、二苯并蒽基和菲基。优选的芳基为苯基。

单独或在化合物中(如“任选被取代的6-元芳基”)使用的术语“6-元芳基”表示6-元碳环芳香基。示例性的这些芳基为苯基。优选地，所述芳基为任选被取代的苯基，如4-卤代苯基，更优选地为4-氟苯基。

单独或在化合物中(如“任选被取代的6-元杂芳基”)使用的术语“6-元杂芳基”表示含有一个或多个杂原子的6-元芳香杂环。实例包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基，每个可以任选被甲基或甲氧基取代。

术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，优选为氟、碘或氯，更优选为氯或碘。

单独或在化合物中(如“任选被取代的酰基”、“芳酰基”或“烷酰基”)使用的术语“酰基”表示氨基甲酰基、脂肪族酰基、含有芳香环的酰基(其称为芳香酰基)或含有杂环的酰基(其称为杂环酰基)，所述酰基含有1-20个碳原子，优选为1-14个碳原子。酰基的实例包括氨基甲酰基；直链或支链的烷酰基，如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、2-甲基丙酰基、戊酰基、2，2-二甲基丙酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、壬酰基、癸酰基、十一酰基、十二酰基、十三酰基、十四酰基、十五酰基、十六酰基、十七酰基、十八酰基、十九酰基或二十酰基；烷氧基羰基，如甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、叔戊氧基羰基或庚氧基羰基；环烷基羰基，如环丙基羰基、环丁基羰基、环戊基羰基或环己基羰基；烷基磺酰基，如甲基磺酰基或乙基磺酰基；烷氧基磺酰基，如甲氧基磺酰基或乙氧基磺酰基；芳酰基，如苯甲酰基、甲苯甲酰基(toluoyl)或萘甲酰基；芳烷酰基，如苯基烷酰基，例如，苯基乙酰基、苯基丙酰基、苯基丁酰基、苯基异丁基、苯基戊酰基或苯基己酰基或萘基烷酰基，例如，萘基乙酰基、萘基丙酰基或萘基丁酰基；芳烯酰基，如苯基烯酰基，例如苯基丙烯酰基、苯基丁烯酰基、苯基甲基丙烯酰基、苯基戊烯酰基或苯基己烯酰基或萘基烯酰基，例如萘基丙烯酰基、萘基丁烯酰基或萘基戊烯酰基；芳烷氧基羰基如苯基烷氧基羰基，例如，苄氧基羰基；芳氧基羰基如苯氧基羰基或萘氧基羰基，芳氧基烷酰基如苯氧基乙酰基或苯氧基丙酰基，芳基氨基甲酰基如苯基氨基甲酰基；芳基硫代氨基甲酰基(arylthiocarbamoyl)如苯基硫代氨基甲酰基，芳基乙醛酰基如苯基乙醛酰基或萘基乙醛酰基；芳基磺酰基如苯基磺酰基或萘基磺酰基；杂环羰基；杂环烷酰基如噻吩基乙酰基、噻吩基丙酰基、噻吩基丁酰基、噻吩基戊酰基、噻吩基己酰基、噻唑基乙酰基、噻二唑基乙酰基或四唑基乙酰基，杂环烯酰基如杂环丙烯酰基、杂环丁烯酰基、杂环戊烯酰基或杂环己烯酰基；或杂环乙醛酰基如噻唑基乙醛酰基或噻吩基乙醛酰基。

术语“任选被取代的硫基(thio)”是指任选的取代基连接到二价硫原子上，所述任选的取代基如含有1-10个碳原子，优选1-6个碳原子，更优选1-4个碳原子的直链或支链的基团。烷基硫基的实例包括甲基硫基、乙基硫基、丙基硫基、丁基硫基和己基硫基。

术语“任选被取代的亚磺酰基”是指任选的取代基连接到二价-S(＝O)-基团上，所述任选的取代基如含有1-10个碳原子，优选1-6个碳原子，更优选1-4个碳原子的直链或支链的基团。实例包括甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、丁基亚磺酰基和己基亚磺酰基。

术语“任选被取代的磺酰基”是指任选的取代基链接到二价-SO₂-基团上，所述任选的取代基如含有1-10个碳原子，优选1-6个碳原子，更优选1-4个碳原子的直链或支链的基团。实例包括甲基磺酰基、乙基磺酰基和丙基磺酰基。

术语“烷氧基”是指直链或支链的含氧基团，烷基部分优选各自具有1至约6个碳原子。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和叔丁氧基。

术语“任选被取代的”是指基团可以或不可以进一步被一个或多个选自下述的基团取代：C_1-6烷基、C_3-6环烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、芳基、杂环基、卤素、卤代C_1-6烷基、卤代C_3-6环烷基、卤代C_2-6烯基、卤代C_2-6炔基、卤代芳基、卤代杂环基、羟基、C_1-6烷氧基、C_2-6烯氧基、C_2-6炔氧基、芳氧基、杂环基氧基、羧基、卤代C_1-6烷氧基、卤代C_2-6烯氧基、卤代C_2-6炔氧基、卤代芳氧基、硝基、硝基C_1-6烷基、硝基C_2-6烯基、硝基芳基、硝基杂环基、叠氮基、氨基、C_1-6烷基氨基、C_2-6烯基氨基、C_2-6炔基氨基、芳基氨基、杂环基氨基酰基、C_1-6烷基酰基、C_2-6烯基酰基、C_2-6炔基酰基、芳基酰基、杂环基酰基、酰基氨基、酰氧基、醛基(aldehydo)、C_1-6烷基磺酰基、芳基磺酰基、C_1-6烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、C_1-6烷基磺酰氧基、芳基磺酰氧基、C_1-6烷基亚磺酰基(sulphenyl)、C_2-6烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷氧羰基、芳氧羰基、巯基、C_1-6烷基硫基、芳基硫基、酰基硫基、氰基等。优选地，任选的取代基为C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、羟基、卤素、C_1-4烷氧基或C_1-4烷基酰基。

优选的衍生物为“药学可接受的衍生物”。“药学可接受的衍生物”是指任何药学可接受的盐、水合物、酯、醚、酰胺、活性代谢产物、类似物、残基(residue)或任何其它非生物学的或不需要的且诱导所需的药理学和/或生理学作用的化合物。

式(I)化合物的盐优选为药学可接受的，但是应理解非药学可接受的盐也落入本发明的范围内，因为它们用作制备药学可接受的盐的中间体。药学可接受的盐的实例包括药学可接受的阳离子(如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵)的盐；药学可接受的无机酸(如盐酸、正磷酸、硫酸、磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸)的酸加成盐；或药学可接受的有机酸(如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、三卤代甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天门冬氨酸、谷氨酸、乙二胺四乙酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、鞣酸、抗坏血酸和戊酸)的盐。胺基团的盐也可以包括季铵盐，其中氨基氮原子带有合适的有机基团，如烷基、烯基、炔基或芳烷基。

盐可以通过常规方式形成，如通过游离碱形式的化合物与一或多当量的适合的酸在溶剂或介质(其中盐是不可溶的)中反应，或在溶剂如水(其在真空中或通过冻干移除)中反应，或通过现有的盐与其它阴离子在适合的离子交换树脂上进行阴离子交换而形成。

而且，一些本发明化合物可以与水或常用有机溶剂形成溶剂合物。这些溶剂合物也包括在本发明的范围内。

术语“前体药物”是指式(I)化合物的官能衍生物，其在体内容易地转变为所需式(I)化合物。对于选择和制备适当前体药物衍生物的常规方法描述于，例如，“Design of Prodrugs”H.Bundgaard，Elsevier，1985中。

前体药物可以为活性化合物的无药理学活性的衍生物，其需要在体内转化以释放活性化合物，且其提高了活性化合物的递送性质。体内转化可以为，例如，由于一些代谢过程产生，如羧酸、磷酸或硫酸酯的化学水解或酶水解，或易转化的官能团的还原或氧化。在一个实施方案中，式(I)化合物的8-羟基可以被保护形成前体药物，尤其是酯前体药物。8-羟基表示化合物代谢的重要位点：与葡糖醛酸或硫酸盐结合形成将被排泄的亲水物质。

本为所用的术语“互变异构体”为其最广的意义，包括能够以两种异构体形式的平衡状态存在的式(I)化合物。这些化合物在连接两个原子或基团的键上可以不同，且在该化合物中的这些原子或基团的位置可以不同。

本文所用的术语“异构体”为其最广的意义，且包括结构、几何和立体异构体。对于式(I)化合物，可以具有一个或多个手性中心，其能够以对映体形式存在。

其中连接可检测的标记、亲和标记物和光敏基团中至少一个的式I化合物也包括在本发明中。

治疗、改善和/或预防方法

包含式(I)化合物的试剂可以用于治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤如星形细胞瘤、GBM和间变型星形细胞瘤、混合性神经胶质瘤和少突胶质细胞瘤。

所述的″试剂″包括两种或多种活性试剂的组合。″组合″也包括多部分，如2部分的组合物，其中试剂分开提供且分开给予或配制，或在配制前混合在一起。例如，多部分的药包可以具有两种或多种分开保存的试剂。因此，本发明的该方面包括组合治疗。组合治疗包括同时给药试剂和其它活性试剂，如化疗化合物、细胞因子、遗传分子和/或麻醉剂。

本文所用的试剂的术语″有效量″和″治疗有效量″是指足量的试剂以提供所需的治疗或生理作用或结果。这些作用或结果包括抑制与脑中神经胶质瘤相关的细胞的生长或存活。已证明有时不希望的作用，如副作用伴随所需的治疗作用；因此，在确定多少是适合的″有效量″时，技术人员平衡可能的益处与可能的危险。精确的量需要根据受试者的不同而改变，这依赖于受试者的人种、年龄和身体状况，给药方式等。因此，不可能明确指出精确的″有效量″。然而，在任何个体病例中适合的″有效量″可以由本领域普通技术人员仅使用常规实验确定。

有效量被认为是抑制与神经胶质瘤有关的细胞生长和存活所需的量。有效量包括约1ng至约1g/受试者给药。给药可以为单剂量或一系列分开的剂量。量包括约5ng至约800mg/受试者给药。实际的量包括每患者约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100ng或200、300、400、500、600、700、800、900、1000ng或2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100mg或200、300、400、500、600、700、800、900、1000mg。

″治疗″受试者可以包括调节或改善在患病受试者中脑神经胶质瘤的生长，以及治疗受试者(具有可能为脑神经胶质瘤或发展的脑神经胶质瘤的生物或免疫指标)的临床症状，以对受试者有利。在一个具体的实施方案中，本发明考虑降低与神经胶质瘤相关的细胞的生长或存活。

所述的″脑肿瘤″包括脑癌。术语″肿瘤″和“癌症″在本文中可以互换使用。所述的″神经胶质瘤″包括GMB、星形细胞瘤、间变型星形细胞瘤、混合性神经胶质瘤、少突胶质细胞瘤或相关的脑癌。

本文中所用更多″受试者″是指动物，优选为哺乳动物，且更优选为灵长类动物，包括低等灵长类动物，且甚至更优选为人，它们能够受益于本发明的制剂和方法。受试者(无论是人或非人动物)可以称为个体、患者、动物、宿主或接受者。本发明的试剂和方法用于人药、兽药中，以及通常在驯养或野生动物饲养业中。为了方便，“动物”包括禽类如家禽(包括鸭子、鸡、火鸡和鹅)、飞禽(aviary bird)或猎禽。在非人类动物中的情况可能不会自然的发生但是会如在动物模型中一样诱导其形成。

如上所述，优选的动物是人类、非人类的灵长类、牲畜动物、实验室实验动物、群居动物(companion animals)或俘获的野生动物，其中非人类的灵长类例如狨猴(marmosets)、狒狒、猩猩、例如tupia的低等灵长类。人类是最优选的对象。但是，也可以使用非人类的动物模型。

实验室实验动物的例子包括小鼠、大鼠、兔、豚鼠和仓鼠。兔和例如大鼠和小鼠的啮齿动物提供方便的实验系统或类似于灵长类或低等灵长类的动物模型。牲畜动物包括羊、牛、猪、山羊、马和驴。也可使用非哺乳动物例如鸟类、斑马鱼、两栖类(包括蔗蟾)和例如黑腹果蝇的果蝇类。实验系统也可以包括组织培养系统来代替活体动物模型。

药物制剂

本发明的制剂包含至少一种式(I)化合物与一种或多种药学可接受的载体，和任选其它治疗剂。每种载体必须为药学“可接受的”，其意义为与其它制剂成分兼容，且不伤害受试者。载体可以包括赋形剂和其它添加剂，如稀释剂、清洁剂、着色剂、润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、防腐剂等。制剂包括那些适合于口服给药的、直肠给药的、鼻内给药的、局部给药的(包括含服的和舌下)、阴道给药的或肠胃外给药的(包括皮下注射给药的、肌肉内注射给药的、静脉注射给药的和皮内注射给药的)。制剂可方便地以单位剂型存在并且可用制药领域中熟知的方法制备。这些方法包括使活性成分与载体结合的步骤，其中该载体构成一种或多种辅助成分。一般来说，制剂均匀制备并且使活性成分与液态载体、稀释剂、佐剂和/或赋形剂或细粒固体载体或两者紧密结合，然后如果需要形成制品。

式(I)化合物可以剂量单位制剂的形式口服给药、局部给药、或肠胃外给药，其中剂量单位制剂包含常规的无毒的药学上可接受的载体、佐剂、和溶媒。在此处使用的术语肠胃外包括皮下注射、对肺或鼻腔气雾给药、静脉内法、肌肉内法、鞘内法、颅内法、注射、眼内法或输液法。

本发明也提供用于本发明的新的治疗方法的适合的局部的、口服的、和肠胃外药物制剂。本发明的化合物可以片剂、水性或油性悬浮液、锭剂(lozenge)、含片(troche)、粉剂、粒剂、乳剂、胶囊、糖浆或酏剂的形式口服给药。用于口服使用的制剂可包含一种或多种试剂，该试剂选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以便制备药物美观并且美味的制剂。适合的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、天冬甜素或糖精。适合的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄原胶、皂土、褐藻酸或琼脂。适合的矫味剂包括薄荷油、冬青油、樱桃、橙子或覆盆子(raspberry)调味品。适合的防腐剂包括苯甲酸钠、维生素E、α-生育酚、抗坏血酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。适合的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石。适合的时间延迟剂(time delay agent)包括甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。片剂包含与无毒的药学上可接受的赋形剂混合在一起的活性成分，其中该赋形剂适于制备片剂。

这些赋形剂可以是，例如(1)惰性稀释剂，例如碳酸钙、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；(2)制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或褐藻酸；(3)粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和(4)润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。这些片剂可是无包衣的或可通过已知技术包衣以便延迟在胃肠道中的分解和吸收，从而经过较长时期后提供持续的作用。例如，可使用例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯的时间延迟材料。也可使用美国专利号为4256108、4160452、和4265874中所描述的技术进行包衣，以便形成控制释放的渗透治疗片剂。

在本发明的方法中有用的上述化合物以及药物活性试剂可被给药，用于体内使用、在一段时间内单独或一起通过注射或逐次输液肠胃外给药。给药可以是眼内的、静脉内的、动脉内的、腹膜内的、肌肉内的、皮下的、腔内的、经皮的或通过例如渗透泵输入。对于体外研究来说，试剂可被加入到或溶解入适合的生物学上可接受的缓冲液中并加到细胞或组织中。

肠胃外给药制剂包括无菌水性或非水溶剂、悬浮液、和乳液。非水溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、例如橄榄油的植物油、和例如油酸乙酯的可注射有机酯。水性载体包括水，醇/水溶液，乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质。肠胃外溶媒包括氯化钠溶液、林格右旋糖(Ringer′s dextrose)、右旋糖和氯化钠、包括液体和营养补充物的乳酸林格静脉内溶媒、电解质补充剂(例如那些基于林格右旋糖的)等。防腐剂和其它添加剂也可存在，例如抗微生物剂、抗氧化剂、衰减剂(attenuating agent)、生长因子和惰性气体等。

本发明包括多种用于改善疾病的药物制剂。根据本发明的一个实施方案的药物制剂是通过将上述化合物、其类似物、衍生物或盐、或将上述化合物和一种或多种药物活性试剂形成的组合形成一种形式来制备的，其中该形式适于利用载体、赋形剂和添加剂或辅助助剂来给药给于受试者。经常使用的载体或辅助助剂包括碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露醇和其它糖、滑石、牛乳蛋白、明胶、淀粉、维生素、纤维素和其衍生物、动物和植物油、聚乙二醇和例如无菌水、醇、甘油和多元醇的溶剂。静脉内溶媒包括液体和营养补充物。防腐剂包括抗微生物剂、抗氧化剂、衰减剂和惰性气体。如所说明的，其它的药学上可接受的载体包括水溶液、无毒的赋形剂(包括盐)、防腐剂、缓冲液等，例如，在Remington′s Pharmaceutical Sciences，20th ed.Williamsand Wilkins(2000)和The British National Formulary 43rd ed.(British MedicalAssociation and Royal Pharmaceutical Society of Great Britain、2002；http://bnf.rhn.net)，其内容纳入此处作为参考。药物制剂的不同成分的pH值和精确浓度(exact concentration)根据本领域中的常规技术来调整。参见Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis for Therapeutics(7th ed.、1985)。

药物制剂优选以剂量单位的方式制备和给药。固体剂量单位可是片剂、胶囊和栓剂。为了治疗受试者，根据化合物的活性、给药方式、疾病的性质和严重性、受试者的年龄和体重，可使用不同的日剂量。然而，在某种情况下，更高的或更低的日剂量也是适当的。每日剂量的给予可通过以单个剂量单位形式或多份小剂量单位形式的单次给药来实施，也可通过以具体的间隔时间多次给药再分的(subdivided)剂量来实施。

根据本发明的药物制剂可以治疗有效剂量的方式局部或全身给药。对于该使用的有效量当然取决于疾病的严重性和受试者的体重和一般情况。通常，在用于药物组合物的原位给药的量的方面，用于体外的剂量可提供有用的指导，并且动物模型可用于确定用于细胞毒素副作用治疗的有效剂量。例如，在Langer、Science、249：1527，(1990)中描述了各种需要考虑的情况。

用于口服的制剂可是硬的明胶胶囊的形式，其中活性成分与例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土的惰性固体稀释剂相混合。它们也可以是软明胶胶囊的形式，其中活性成分与水或例如花生油、液体石蜡或橄榄油的油性介质相混合。

水悬浮液通常含有与赋形剂混合的活性材料，其中该赋形剂适于制备水悬浮液。此种赋形剂可以是(1)助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；(2)分散或湿润剂，其可以是(a)天然形成的磷脂，例如卵磷脂；(b)烯化氧(alkyleneoxide)和脂肪酸缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯；(c)环氧乙烷和长链脂肪醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基十六醇(heptadecaethylenoxycetanol)；(d)环氧乙烷和衍生于脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或(e)环氧乙烷和衍生于脂肪酸和己糖醇酐(hexitol anhydrides)的偏酯的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。

药物制剂可以为无菌可注射水液或油性悬浮液(oleagenous suspension)的形式。该悬浮液可利用上述提到的那些适合的分散剂或湿润剂和助悬剂根据已知方法来配制。该无菌可注射制剂也可是无毒的肠胃外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1，3-丁二醇中的溶液。在这些可接受的溶媒和溶剂中，可使用水、林格液、和等渗氯化钠溶液。另外，无菌、不挥发油也是通常作为溶剂或悬浮介质使用。为了此目的，任何温和的不挥发油均可使用，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，发现例如油酸的脂肪酸可在制备可注射制剂中使用。

上述化合物可以以脂质体输送系统的形式给药，例如小单室囊泡、大单室囊泡、和多层脂囊。脂质体可由多种磷脂来形成，例如胆固醇、硬脂酰胺、或磷脂酰胆碱。

上述化合物也可以以兽医制剂的形式来使用，其可通过例如在本领域中常规的方法来制备。此种兽医制剂的实例包括那些适于：

(a)口服给药、外用，例如兽用顿服药(例如水性或非水性溶液或悬浮液)；片剂或大丸剂；用于与饲料混合的粉剂、粒剂或小丸剂；用于施加到舌头上的糊剂；

(b)例如通过皮下注射、肌肉内注射或静脉内注射的肠胃外给药，例如，作为无菌溶液或悬浮液；或(当恰当的时候)通过乳房内注射，在乳房处悬浮液或溶液通过乳头导入乳房；

(c)局部应用，例如作为施加到皮肤上的乳膏、软膏或喷雾；或

(d)阴道内的，例如作为阴道栓剂、乳膏或泡沫。

本发明通过随后的非限制的实施例来进行进一步的说明。

实施例1

化合物的评估

下述实验用于评估化合物对于本发明方法中用途的适合性。

实验1.神经毒性实验

原代皮层神经元培养物

如现有说明(White等人，J Neuroscience 18：6207-6217，1998)来制备皮层培养物。移除胚龄14天的BL6Jx129sv小鼠皮质，切除脑膜并在0.025％(wt/vol)胰蛋白酶中分散。将分散的细胞以在MEM中的密度为2×10⁶细胞/mL种植在48孔培养板中并在37℃下培养两小时，其中MEM具有25％(vol/vol)FCS和5％(vol/vol)HS。培养基随后用Neurobasal培养基(InvitrogenLife Technologies)和B27补充物(supplements)(Invitrogen Life Technologies)更换。培养物维持在5％CO₂和37℃下。在实验前，用Neurobasal培养基和B27负抗氧化剂(minus antioxidant)(Invitrogen Life Technologies)更换培养基。

(a)用于细胞存活的MTS实验

使用MTS实验测定细胞存活。使用新鲜的Neurobasal培养基加B27补充物负抗氧化剂替代培养基。1/10体积的MTS溶液(Cell Titre 96 AqueousOne，Promega Corporation)，其在37℃培养两小时。在560nm处使用分光光度计测定200微升等分部分。

(b)测试化合物细胞毒性的实验

按照试验2在NB培养基和B27补充物中将神经元皮层细胞培养5天。

在第六天将测试化合物加入到在NB培养基和B27补充物负抗氧化剂中的神经元细胞培养物中。

测试化合物溶解在100％DMSO中，其浓度是2.5mM(如果每小瓶称出过量的化合物则为10mM-然后稀释到2.5mM)。2.5mM储备溶液被连续的以1比10稀释成250μM、25μM、2.5μM的工作溶液。测试化合物不是直接加到细胞上，它们是加到48孔‘药物板’上，该‘药物板’包括以下：

制备“药物板”：

向48孔板中加入：

孔1：576μl NB+B27(无抗氧化剂)^*+24μl 2.5μM测试化合物

孔2：576μl NB+B27(无抗氧化剂)+24μl 25μM测试化合物

孔3：576μl NB+B27(无抗氧化剂)+24μl 250μM测试化合物

孔4：576μl NB+B27(无抗氧化剂)+24μl 2.5μM测试化合物

孔5：576μl NB+B27(无抗氧化剂)+24μl 25μM测试化合物

孔6：576μl NB+B27(无抗氧化剂)+24μl 250μM测试化合物

孔7：576μl NB+B27(无抗氧化剂)+24μl测试化合物稀释剂^**

孔8：600μl NB+B27(无抗氧化剂)

药物板在37℃培养15分钟。每孔加入200μl，一式三份加到相应的细胞板。细胞板在37℃培养4天。

^*NB培养基B27(无抗氧化剂)、

^**PBT稀释剂在NB+B27中10％DMSO(无抗氧化剂)

一旦完成测定，1/10体积的MTS加入到板中的每孔(即25μl/250μl)。该板在37℃下培养两小时，而后在560nm处读出吸光度。

实验2.溶解度实验

在二甲亚砜中制备测试化合物(1mM)的储备液。不溶解的化合物分类为不可溶(N)。该DMSO储液在pH 7.4的PBS中1比100稀释。得到澄清溶液的化合物分类为可溶(Y)，那些溶解于DMSO后得到半透明悬浮液的化合物分类为“粉碎级(crashed out)”(C)。

实验3.生理化学性质

极性表面积计算(PSA)

极性表面积值使用通过“Molinspiration”可得的基于网络的程序(一种计算分子性质的程序包)计算。

比浊溶解性测量

溶解性的评估在pH 2.0和pH 6.5两者下测量。这是在接近人体胃肠道的可预期的pH范围内。

将化合物溶解于DMSO至合适浓度，然后加至(spiked into)0.01M HCl(大约pH＝2.0)或pH 6.5的等渗磷酸盐缓冲液中，终DMSO浓度为1％。然后通过比浊法(Nephelometry)分析样品以确定溶解度范围(Bevan andLloyd，Anal.Chem.72：1781-1787，2000)。

cLog P值

理论的Log P值使用ACD Log P软件确定。引用的值从原始数据库(untrained database)计算并涉及未离子化的种类。

E Log D

有效Log D值使用色谱法测量，该法在pH 7.4，使用辛醇饱和流动相，采用SUPELCOSIL LC-ABZ柱。见F.Lombardo et al，J.Med.Chem.2000，43，2922-2928。

实验4.血脑屏障渗透

证明每种检测化合物能够通过正常的BBB。

通过尾静脉注射雄性Swiss Outbred小鼠(5-7周龄)，给药快速推注的每种检测化合物(50μL的3mg/mL水溶液，含40％丙二醇和10％乙醇)。

在给药后5和60分钟(每个时间点n＝3小鼠)，通过心脏穿刺收集血液，且通过切开后颅骨取出整个脑。取血和取脑前大约3-4分钟，小鼠通过腹膜注射氯胺酮和赛拉嗪(分别为133mg/kg和10mg/kg)麻醉。

将整个脑置于预先称重的聚丙烯瓶中，且分析前于-20℃下储存。在分析当天，将整个脑匀化在3份水中(置于冰上以降低体外脑降解的可能)，且通过LCMS对于化合物的浓度分析等分部分的脑匀化液和血浆。采用空白脑匀化液制备标准品，且通过将乙腈加入到组织匀化液中处理样品和标准品，离心并将等分的上清液进样到LCMS中。

为了确保从脑中完全回收化合物，将化合物(在50％乙腈∶50％水中)加入(spiked)到脑匀化液中得到标称浓度为500ng/mL。然后通过LCMS测定化合物在上清液中的浓度，并与当用乙腈沉淀后加入化合物时的上清液浓度相比较。

计算

C脑＝C脑匀化液-C脑脉管系统 C脑脉管系统＝C血浆^＊V_p

C_脑＝在脑实质(brain parenchyma)中的化合物浓度(ng/g)

C_脑匀化液＝在脑匀化液中的化合物浓度(ng/g)

C_{脑脉管系统}＝在脑脉管系统中的化合物浓度(ng/g)

C_血浆＝在血浆中的化合物浓度(ng/mL)

V_p＝脑血浆体积(对于雄性Swiss Outbred小鼠，26μL/g)

B∶P＝脑与血浆的比例

P_app＝化合物透过血脑屏障的表观渗透系数

(等于给药后5分钟的血浆浓度，假定在该时间范围内没有从脑向血浆的反扩散)

A＝形成血脑屏障的毛细血管的表面积(对于小鼠，240cm²/g脑重)

以标称的5mg/kg剂量静脉注射(IV)给药到雄性Swiss Outbred小鼠后，化合物的脑和血浆浓度如图1中所示。每种检测化合物都表现出一定通过正常BBB的渗透性。

实施例2

化合物的性质

下表提供了本发明化合物的性质和结构。

a-原代皮层神经元培养的细胞(神经元细胞)或M17人成神经瘤细胞(M17细胞)在

1和10μM浓度的检测化合物存在下的存活率

b-目测

c-确认在一个或两个时间点(30分钟至4小时)化合物在血浆中的存在，通过以标称剂量5mg/kg向雄性Swiss Outbred小鼠静脉注射给药后检测化合物的脑吸收。

结果表示为于给药后5分钟和60分钟脑∶血浆的比例。

实施例3

检测化合物的体外和体内功效

筛选12种化合物的体外功效，并检测4种的体内功效。

将乳剂载体用作体外和体内检测体系的对照。通过体外检测初始测试所有化合物以测定对于三种神经胶质瘤细胞系和对照细胞系的功效概况。结果示于图2-5中。

实验设计

体外功效方案

通过MTT细胞存活率实验分析检测物质的体外效果。

下述细胞系用于检测暴露于检测物质的细胞的存活率：C6-大鼠神经胶质瘤细胞系(图1)，VMDK-小鼠神经胶质瘤细胞系(图3)，U87MG-人神经胶质瘤细胞系(图2)，3T3-对照细胞系(图4)。

将细胞置于含有100μl细胞培养基的96孔板中，并使之粘附24小时使大约50％融合。于24小时，用含有化合物或载体乳液的新鲜细胞培养基替换细胞培养基。

然后孵育细胞并生长设定的时间(72小时)，之后将MTT溶液加入到孔中，并于37℃孵育1-2小时。然后于570nm用板读数器测定每孔的吸光度。相对于实验过程中没有化合物时孵育的细胞计算功效概况。

体内功效方案

使用2种剂量：最大耐受剂量和低于最大耐受剂量的一个剂量水平。

使用3种小鼠模型：

●C6-异种移植的小鼠模型(神经胶质瘤模型)

●SMA560-VMDK小鼠模型(神经胶质瘤模型)

●U87MG-裸小鼠模型

C6-CBA异种移植模型(ATCC号：CCL-107)

使用该模型筛选4种化合物。

SMA560-VMDK小鼠模型(ATCC号：CCL-163)

使用该模型筛选上述用C6异种移植模型筛选的4种化合物。

U87MG裸小鼠模型(ATCC号：CRL-9589)

使用该模型筛选2种化合物。

最初，CBA小鼠用于颅内接种C6神经胶质瘤细胞。简言之，在C6细胞接种后5天时，将1×10⁶个细胞接种到左半球。小鼠每天腹膜(ip)给药在载体乳剂中的检测物质或单独的载体乳剂作为对照，持续8天直到第12天。在第14天，通过吸入CO₂处死小鼠，并取出脑用于组织学处理。

然后将VMDK小鼠株用于筛选与在CBA小鼠中的C6异种移植模型相同的检测物质和载体乳剂。通过标准方法使VMDK小鼠接受接种1×10⁵SMA560细胞进入左半球。在接种SMA560细胞的第5天，小鼠每天接受ip给药在载体乳剂中的试剂或单独的载体乳剂作为对照，持续12天，直到第16天。在C6异种移植模型中使用的检测物质和载体乳剂的剂量与在SMA560模型中所用的相同。在第18天，通过吸入CO₂处死小鼠，并取出脑用于组织学处理。

使用U87MG人神经胶质瘤细胞系的裸小鼠模型筛选试剂。裸小鼠Nu/nu株在左半球接受1×10⁶U87MG的细胞接种。在接种U87MG细胞后的第5天，小鼠每天接受ip给药试剂或单独的载体乳剂作为对照，持续12天，直到第16天。在第18天，通过吸入CO₂处死小鼠，并取出脑用于组织学处理。

使用苏木精和曙红染色的切片检测肿瘤大小以测定相对于对照小鼠检测化合物对于肿瘤生长的功效。

化合物A、B、S和H的效果的结果示于图6a至d中。

图像总结如下：

Y-轴是指以像素表示的肿瘤面积。

柱中的数值表示每组中的小鼠总数(没有包括在非常早期就死亡的小鼠或由于被其它小鼠咬伤头而不能取样的脑)。

带星号的数值指该组小鼠在早期1或2天因为生病或死亡被剔除(cull)。这些包括在最后计算中，因为它们的肿瘤非常大且它们在接近最终剔除点被剔除。

实施例4

化合物B的临床开发

在2-部分的研究中将化合物B向健康志愿者给药，所述2-部分研究包括单剂量给药(阶段A)和多剂量给药(阶段B)。总之，在年轻男性志愿者中化合物B作为单剂量大体上良好的耐受，且在年长健康志愿者中治疗高达7天。

I期试验的目的是检测单口服剂量和多口服剂量的化合物B在健康志愿者中的安全性、耐受性和药物动力学。在荷兰以I期单位进行双盲研究。设计包括安全性检测的方案以检测可能的人副作用。总共65个健康受试者接受化合物B(41个单剂量，24个多剂量)。

受试者的安排-阶段A&B

安全性和耐受性，阶段A-单剂量

在阶段A中，使五十五(55)个健康男性受试者(年龄18-50岁)随机化(3∶1)，以接受以7个剂量水平(25，50，100，200，300，500或800mg)之一的安慰剂或化合物B的单口服剂量。

从阶段A中的分析表明化合物B，当以单口服剂量给药时，在18-50岁的健康男性志愿者中有良好的耐受性。副作用的发生率在化合物B组(43.9％)和安慰剂组(42.9％)中没有差别。

安全性和耐受性，阶段B-多剂量

在阶段B中，使三十二(32)个健康男性和女性受试者(年龄45-75岁)(每剂量水平8个受试者)随机化(3∶1)，以接受以4个剂量(200，400，600或800mg)水平之一的安慰剂或化合物B的日口服剂量(连续7天)。每个剂量水平包括4个男性和4个女性；随机方案确保1个受试者/性别接受安慰剂且3个受试者/性别接受化合物B。

对阶段B的分析表明化合物B在健康年长受试者中通常有良好的耐受性。

应该理解，如果本文涉及任何现有技术出版物，这种引用并不是承认该出版物在澳大利亚或任何其它国家构成公知常识的一部分。

在所附的权利要求书中和在上述本发明的说明书中，除上下文需要或由于语言表示或必要的暗示，否则词语“包含”或其它形式如“包括”或“含有”仅指包含的含义，即表示在本发明的各种实施方案中存在所述特征但不排除其它特征的加入。

本领域技术人员将理解本文描述的发明可以进行除上述具体说明以外的改变和变化。应该理解本发明包括所有这些改变和变化。本发明也单独或全部地包括本说明书涉及或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，且包括任何两种或多种所述步骤或特征的任一种和所有组合。

参考文献

Bevan和Lloyd，Anal.Che m.72：1781-1787，2000

Goodman和Gilman′s，The Pharmacological Basis for Therapeutics 7th ed.，1985

Lombardo et al，J.Med.Chem.43：2922-2928，2000

Remington′s Pharmaceutical Sciences，20th ed.Williams和Wilkins，2000

The British National Formulary 43rd ed.，British Medical Association andRoyal Pharmaceutical Society of Great Britain，2002

Claims

1.包含式(IC)化合物或其盐的试剂在制备用于治疗、改善和/或预防脑神经胶质瘤的药物中的用途：

其中

R²为H；任选被取代的C_1-6烷基；任选被取代的C_2-6烯基；任选被取代的C_2-6炔基；任选被取代的C_3-6环烷基；任选被取代的苯基；CONR⁹R¹⁰，其中R⁹为H、任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的苯基或任选被取代的杂环基，且R¹⁰为任选被取代的C_1-6烷基、任选被取代的C_2-6烯基、任选被取代的C_2-6炔基、任选被取代的C_3-6环烷基、任选被取代的苯基或任选被取代的杂环基；

R⁵和R⁷独立地选自H、任选被取代的C_1-6烷基和卤素；且

r为1或2，

其中所述任选取代基为C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、羟基、卤素、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基酰基、苯基、杂环基或C_1-6烷基氨基，

所述杂环基为吲哚基、异吲哚基、吲嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基、四唑并哒嗪基或噻唑烷基。

2.权利要求1的用途，其中试剂的量为约200至约800mg/受试者。

3.权利要求2的用途，其中试剂的量为约500mg/受试者。

4.权利要求1的用途，其中所述脑神经胶质瘤选自星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、间变型星形细胞瘤、混合性神经胶质瘤和少突胶质细胞瘤。

5.权利要求4的用途，其中所述神经胶质瘤为星形细胞瘤。

6.权利要求4的用途，其中所述神经胶质瘤为成胶质细胞瘤。

7.权利要求4的用途，其中所述神经胶质瘤为间变型星形细胞瘤。

8.权利要求1的用途，其中式(IC)化合物选自：