CN102335169B - 吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗老年痴呆药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生化合物在制备治疗老年痴呆药物中的新的应用，该类药物可通过提高细胞内抗自由基的特定基因的表达，增强细胞主动清除自由基的能力，减轻自由基对细胞和组织的伤害。DIM和I3C及其衍生化合物可有效降低老年痴呆动物模型的发病症状，明显改善SAM-P/8小鼠的运动障碍，明显提高SAM-P/8小鼠的脑组织SOD活性，降低脑组织MDA含量，降低脑组织胆碱酯酶活性，增强脑组织Na＋-K＋-ATP酶、Ca2 ＋-ATP酶的活性，故其可以作为治疗老年痴呆的候选药物分子。同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输，具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗老年痴呆的药物中的应用。
背景技术
老年痴呆(AD)是一组病因未明的原发性进行性发展的致死性神经退行脑变性疾病，多起病于老年期，潜隐起病，病程缓慢且不可逆，临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，以智能损害为主并有各种神经精神症状和行为障碍。据世界卫生组织统计，我国老年痴呆(AD)病人至少在400万以上，因此对老年痴呆(AD)研究十分必要。由于目前报告的新药药物作用的有效性和特异性不够，毒副反应较多，或使用不便，不易吸收或难以透过血脑屏障等，临床用药受到限制，所以尚无公认的、行之有效的防治老年痴呆(AD)药物。
老年痴呆的显著性病理生理学变化之一是淀粉样蛋白沉积，引起神经细胞内的应激，产生大量的自由基，直接杀伤神经细胞，有证据显示，降低病变组织内的自由基浓度，可以有效延缓和减轻老年痴呆的发病进程和发病症状。吲哚-3-甲醇(I3C)和二吲哚甲烷(DIM)是来自于云台属，十字花科植物的天然产物，长期以来这类物质作为保健食品添加剂在西方社会被广泛使用，具有明显的保健，抗癌等功效。发明人的研究表明，DIM和I3C可通过提高细胞内抗自由基的特定基因的表达，增强细胞主动清除自由基的能力，减轻自由基对细胞和组织的伤害。在动物试验中发现，DIM和I3C可有效降低老年痴呆动物模型的发病症状，可以成为治疗老年痴呆的候选药物分子。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够有效降低老年痴呆动物模型的发病症状，可作为治疗老年痴呆的候选药物分子即吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗老年痴呆的药物中的应用。
本发明的具有结构式(I)的吲哚-3-甲醇及其衍生物在制备治疗老年痴呆药物中的应用，结构式(I)中，R1、R2、R4、R5、R6、R7各自为H或卤素取代基或硝基或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基。
优选的，所述结构式(I)中，当R1、R2、R4、R5、R6、R7均为氢时，该结构式所示的化合物即为吲哚-3-甲醇；
当R5为卤素取代基或硝基或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R2、R4、R6、R7均为氢，此时，该结构式(I)所示的化合物包括：5-氯-吲哚-3-甲醇，5-溴-吲哚-3-甲醇、5-氟-吲哚-3-甲醇；5-硝基-吲哚-3-甲醇；5-甲基-吲哚-3-甲醇，5-乙基-吲哚-3-甲醇，5-丙基-吲哚-3-甲醇，5-丁基-吲哚-3-甲醇，5-戊基-吲哚-3-甲醇、5-甲氧基-吲哚-3-甲醇、5-乙氧基-吲哚-3-甲醇、5-丙氧基-吲哚-3-甲醇、5-丁氧基-吲哚-3-甲醇、5-戊氧基-吲哚-3-甲醇等；
当R1为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7均为氢，此时，该结构式(I)所示的化合物包括：N-甲基-吲哚-3-甲醇、N-乙基-吲哚-3-甲醇、N-丙基-吲哚-3-甲醇、N-丁基-吲哚-3-甲醇、N-戊基-吲哚-3-甲醇、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇、N-乙氧基-吲哚-3-甲醇、N-丙氧基-吲哚-3-甲醇、N-丁氧基-吲哚-3-甲醇、N-戊氧基-吲哚-3-甲醇等；
当R2为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7均为氢，此时，该结构式(I)所示的化合物包括：2-甲基-吲哚-3-甲醇、2-乙基-吲哚-3-甲醇、2-丙基-吲哚-3-甲醇、2-丁基-吲哚-3-甲醇、2-戊基-吲哚-3-甲醇、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇、2-乙氧基-吲哚-3-甲醇、2-丙氧基-吲哚-3-甲醇、2-丁氧基-吲哚-3-甲醇、2-戊氧基-吲哚-3-甲醇等；
本发明的具有结构式(II)的二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗老年痴呆药物中的应用，
其中，R1、R2、R4、R5、R6、R7、R1’、R2’、R4’、R5’、R6’、R7’各自为氢或卤素取代基或硝基或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基。
优选的，所述结构式(II)中，当R1、R2、R4、R5、R6、R7、R1’、R2’、R4’、R5’、R6’、R7’均为氢时，此时该结构式所示的化合物即为二吲哚甲烷；
当R5和R5’同时为卤素取代基或硝基或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R2、R4、R6、R7、R1’、R2’、R4’、R6’、R7’均为氢，此时，结构式(II)所示化合物包括：5，5’-二氯-二吲哚甲烷、5，5’-二溴-二吲哚甲烷或5，5’-二氟-二吲哚甲烷；5，5’-二硝基-二吲哚甲烷；5，5’-二甲基-二吲哚甲烷、5，5’-二乙基-二吲哚甲烷、5，5’-二丙基-二吲哚甲烷、5，5’-二丁基-二吲哚甲烷、5，5’-二戊基-二吲哚甲烷、5，5’-二甲氧基-二吲哚甲烷、5，5’-二乙氧基-二吲哚甲烷、5，5’-二丙氧基-二吲哚甲烷、5，5’-二丁氧基-二吲哚甲烷或5，5’-二戊氧基-二吲哚甲烷等。
当R1和R1’同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7、R2’、R4’、R5’、R6’、R7’均为氢，此时，结构式(II)所示化合物包括：N，N’-二甲基-二吲哚甲烷、N，N’-二乙基-二吲哚甲烷、N，N’-二丙基-二吲哚甲烷、N，N’-二丁基-二吲哚甲烷、N，N’-二戊基-二吲哚甲烷。N，N’-二甲氧基-二吲哚甲烷、N，N’-二乙氧基-二吲哚甲烷、N，N’-二丙氧基-二吲哚甲烷、N，N’-二丁氧基-二吲哚甲烷或N，N’-二戊氧基-二吲哚甲烷等。
当R2和R2’同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7、R1’、R4’、R5’、R6’、R7’均为氢，此时，结构式(II)所示化合物包括：2，2’-二甲基-二吲哚甲烷、2，2’-二乙基-二吲哚甲烷、2，2’-二丙基-二吲哚甲烷、2，2’-二丁基-二吲哚甲烷、2，2’-二戊基-二吲哚甲烷、2，2’-二甲氧基-二吲哚甲烷、2，2’-二乙氧基-二吲哚甲烷、2，2’-二丙氧基-二吲哚甲烷、2，2’-二丁氧基-二吲哚甲烷或2，2’-二戊氧基-二吲哚甲烷等。
本发明的吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生物在制备治疗老年痴呆药物中的应用，单一的化合物吲哚-3-甲醇或二吲哚甲烷或其衍生物的一种的使用能够治疗老年痴呆，那么显然，上述化合物的各种形式的混配亦能够达到一定的治疗效果。
使用商业上可得的吲哚取代物来合成I3C的取代衍生物可能是获得这些化合物最便捷的方法。DIM的衍生物同样可以通过甲醛缩合吲哚取代物的方法制备。然而，后者的劣势在于副产物的形成使得分离纯化所需要的DIM衍生物更为复杂。
本发明所提供的化合物是通过使用二甲基甲酰胺缩合吲哚取代物来合成制备取代的吲哚-3-乙醛，被取代的吲哚-3-乙醛产物通过使用甲醇以及硼氢化钠处理还原其醛基从而得到I3C的取代衍生物。吲哚-3-甲醇(I3C)在体内胃酸环境中很不稳定，可发生缩合反应形成低聚物3，3’-二吲哚甲烷。本发明的二吲哚甲烷(DIM)的取代衍生物是通过缩合吲哚-3-甲醇(I3C)的取代产物加以合成，这可以通过采取例如PH值5.5左右的磷酸盐缓冲液处理等方法实现(I3C及DIM的衍生物制备参考美国专利US 5948808)。
采用本发明的吲哚-3-甲醇(I3C)、二吲哚甲烷(DIM)及其衍生物，与多种药学上可以接受的载体相结合，通过如口腔、静脉、鼻腔、直肠或其他任何可以输送有效剂量的活性物质的给药方式，可以制备成各种液体制剂如注射剂、口服液制剂等，也可以制备成各种有效且易于给药的固体制剂如胶囊剂、栓剂等。其中，用于注射或口服用的液体制剂，其所需的载体可以为无菌水、无菌盐水或者水溶性有机载体如环糊精、玉米油、橄榄油、油酸乙酯、二醇类等医学上可接受的载体；固体给药制剂在制备中可加入固体制剂常用的辅料如赋形剂葡萄糖、乳糖、纤维素等，还可加入润滑剂聚乙二醇、硬脂酸镁等，以及粘结剂、矫味剂等固体制剂所需的辅料成分，再通过混合、制粒等工序成型。上述这些制剂中的活性物质的有效量是能使老年痴呆症状明显降低的量，具有常规技术的研究人员将能够确定本项发明所提供的试剂的最有效的给药剂量和时间考虑给药方式，药物代谢，以及其他一些药代动力学参数例如药物分布，清除率等。
本发明通过老年痴呆模型进行例证。此处的动物包括但是不限于：小鼠，大鼠，驯养动物包括但是不限于猫，狗，以及其它一些动物例如但是不限于牛，羊，猪，马，灵长类动物例如但是不限于猴子和人。
本发明提出了吲哚-3-甲醇、二吲哚甲烷及其衍生化合物在制备治疗老年痴呆药物中的新的应用，该药物可通过提高细胞内抗自由基的特定基因的表达，增强细胞主动清除自由基的能力，减轻自由基对细胞和组织的伤害。在动物试验中发现，DIM和I3C及其衍生化合物可有效降低老年痴呆动物模型的发病症状，可明显改善SAM-P/8小鼠的运动障碍，明显提高SAM-P/8小鼠的脑组织SOD活性，降低脑组织MDA含量，降低脑组织胆碱酯酶活性，增强脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性，故其可以作为治疗老年痴呆的候选药物分子。同时，本发明所使用的小分子药物易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面的实验例用以解释本发明，但是并非对本发明实质内容的限制。
【化合物制备】
实施例1
(5-氯吲哚-3-甲醇及5，5’-二氯二吲哚甲烷的制备)
将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0℃的二甲基甲酰胺中。将8.6mmol 5-氯吲哚(购于南京锐马精细化工有限公司)溶解于1.0ml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37℃加热60分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入1ml的冰水，再缓慢加入10ml含有3.75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-氯吲哚-3-乙醛。
将1.0克5-氯吲哚-3-乙醛溶于5.0ml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0℃，过滤，避光真空干燥获得5-氯吲哚-3-甲醇，得率约90％。
将1.0克5-氯吲哚-3-甲醇加入到pH为5.5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时，反应过程通过薄层层析(TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5，5’-二氯二吲哚甲烷，得率约85％。
实施例2
(5-硝基吲哚-3-甲醇及5，5’-二硝基二吲哚甲烷的制备)
5-硝基吲哚可以通过商业购买获得(南京锐马精细化工有限公司)。将0.92ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0℃的二甲基甲酰胺中。将8.2mmol 5-硝基吲哚溶解于1.0ml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在42℃加热90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入1ml的冰水，再缓慢加入10ml含有3.75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-硝基吲哚-3-乙醛。
将1.0克5-硝基吲哚-3-乙醛溶于5.0ml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0℃，过滤，避光真空干燥获得5-硝基吲哚-3-甲醇，得率约87％。
将1.0克5-硝基吲哚-3-甲醇加入到pH为5.5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时，反应过程通过薄层层析(TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5，5’-二硝基双吲哚甲烷，得率约80％。
实施例3
(5-戊基吲哚-3-甲醇及5，5’-二戊基-二吲哚甲烷的制备)
5-戊基吲哚可以通过商业购买获得(南京锐马精细化工有限公司)。将0.82ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0℃的二甲基甲酰胺中。将9.2mmol 5-戊基吲哚溶解于1.0ml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37℃加热40-60分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入1ml的冰水，再缓慢加入10ml含有3.75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得5-戊基吲哚-3-乙醛。
将1.0克5-戊基吲哚-3-乙醛溶于5.0ml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0℃，过滤，避光真空干燥获得5-戊基吲哚-3-甲醇，得率约85％。
将1.0克5-戊基吲哚-3-甲醇加入到pH为5.5的磷酸缓冲液中，室温搅拌10小时，反应过程通过薄层层析(TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得5，5’-二戊基双吲哚甲烷，得率约70％。
实施例4
(N-甲氧基吲哚-3-甲醇及N，N’-二甲氧基-二吲哚甲烷的制备)
N-甲氧基吲哚可以通过商业购买获得(南京锐马精细化工有限公司)。将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0℃的二甲基甲酰胺中。将8.9mmol N-甲氧基吲哚溶解于1.0ml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在40℃加热60-90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入1ml的冰水，再缓慢加入10ml含有3.75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得N-甲氧基吲哚-3-乙醛。
将1.0克N-甲氧基吲哚-3-乙醛溶于5.0ml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0℃，过滤，避光真空干燥获得N-甲氧基吲哚-3-甲醇，得率约80％。
将1.0克N-甲氧基吲哚-3-甲醇加入到pH为5.5的磷酸缓冲液中，室温搅拌12小时，反应过程通过薄层层析(TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得N，N’-二甲氧基双吲哚甲烷，得率约70％。
实施例5
(1-丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇及1，1’-二丁基-2，2’-二甲基二吲哚甲烷的制备)
1-丁基-2-甲基吲哚可以通过商业购买获得(南京锐马精细化工有限公司)。将0.82ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0℃的二甲基甲酰胺中。将8.2mmol 1-丁基-2-甲基吲哚溶解于1.0ml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在42℃加热90分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入1ml的冰水，再缓慢加入10ml含有3.8克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得1-丁基-2-甲基吲哚-3-乙醛。
将1.0克1-丁基-2-甲基吲哚-3-乙醛溶于5.0ml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0℃，过滤，避光真空干燥获得1-丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇，得率约85％。
将1.0克1-丁基-2-甲基吲哚-3-甲醇加入到pH为5.5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时，反应过程通过薄层层析(TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得1，1’-二丁基-2，2’-二甲基双吲哚甲烷，得率约80％。
实施例6
(4-溴吲哚-3-甲醇及4，4’-二溴二吲哚甲烷的制备)
将0.86ml磷酰氯缓慢加入到2.9ml预先冷却至0℃的二甲基甲酰胺中。将8.6mmol 4-溴吲哚(购于南京锐马精细化工有限公司)溶解于1.0ml的二甲基甲酰胺中，然后缓慢加入前述预冷的磷酰氯溶液中，所形成的悬浮液在37℃加热60分钟，直至澄清的黄色溶液变成淡黄色的糊状物质。然后向此糊状物质中加入1ml的冰水，再缓慢加入10ml含有3.75克KOH的水溶液。将此混合物加热至煮沸后冷却，过滤，水洗，空气中干燥即可获得4-溴吲哚-3-乙醛。
将1.0克4-溴吲哚-3-乙醛溶于5.0ml甲醇，持续加入固体硼氢化钠，直至过量。然后向反应物中加入50ml水，冷却至0℃，过滤，避光真空干燥获得4-溴吲哚-3-甲醇，得率约90％。
将1.0克4-溴吲哚-3-甲醇加入到pH为5.5的磷酸缓冲液中，室温搅拌6小时，反应过程通过薄层层析(TLC)加以监测。反应产物过滤，避光真空干燥即获得4，4’-二溴二吲哚甲烷，得率约85％。
【动物实验例】
I3C、DIM及其衍生化合物的口服液体制剂对老年痴呆动物模型(SAM-P/8)的治疗。
一、实验材料
1、实验动物：为7月龄日本快速老化痴呆小白鼠SAM-P/8，体重25-30g，雄性。7月龄雄性昆明种小鼠，体重30-35g，2月龄昆明种小鼠，体重25-30g。
2、实验药物：
分别将I3C、DIM、5-氯-吲哚-3-甲醇(5-Cl-I3C)、5，5’-二氯-二吲哚甲烷(5，5’-Cl-DIM)、5-戊基-吲哚-3-甲醇(5-C5-I3C)、5，5’-二戊基-二吲哚甲烷(5，5’-C5-DIM)、5-甲氧基-吲哚-3-甲醇(5-MOE-I3C)、5，5’-二甲氧基-二吲哚甲烷(5，5’-MOE-DIM)、5-硝基-吲哚-3-甲醇(5-NO-I3C)、5，5’-二硝基-二吲哚甲烷(5，5’-NO-DIM)、N-甲基-吲哚-3-甲醇(N-Me-I3C)、N，N’-二甲基-二吲哚甲烷(N，N’-Me-DIM)、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇(N-MOE-I3C)、N，N’-二甲氧基-二吲哚甲烷(N，N’-MOE-DIM)、2-戊基-吲哚-3-甲醇(2-C5-I3C)、2，2’-二戊基-二吲哚甲烷(2，2’-C5-DIM)、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇(2-MOE-I3C)、2，2’-二甲氧基-二吲哚甲烷(2，2’-MOE-DIM)、1-丁基-2-甲基-吲哚-3-甲醇(1Bu-2Me-I3C)、1，1’-二丁基-2，2’-二甲基-二吲哚甲烷(1，1’Bu-2，2’Me-DIM)、4-溴-吲哚-3-甲醇(4-Br-I3C)及4，4’-二溴-二吲哚甲烷(4，4’-Br-DIM)用玉米油溶解配成2.0mg/ml口服储液备用。
3、主要试剂：
(1)SOD测定试剂盒；
(2)胆碱酯酶(CHE)测定试剂盒；
(3)丙二醛(MDA)测定试剂盒；
(4)ATP酶试剂盒；
4、实验方法：
(1)分组方法：取184只7月龄雄性日本快速老化痴呆小白鼠SAM-P/8，将动物随机分成23组，每组8只，即老年痴呆模型组、分别用I3C、DIM、5-氯-吲哚-3-甲醇(5-Cl-I3C)、5，5’-二氯-二吲哚甲烷(5，5’-Cl-DIM)、5-戊基-吲哚-3-甲醇(5-C5-I3C)、5，5’-二戊基-二吲哚甲烷(5，5’-C5-DIM)、5-甲氧基-吲哚-3-甲醇(5-MOE-I3C)、5，5’-二甲氧基-二吲哚甲烷(5，5’-MOE-DIM)、5-硝基-吲哚-3-甲醇(5-NO-I3C)、5，5’-二硝基-二吲哚甲烷(5，5’-NO-DIM)、N-甲基-吲哚-3-甲醇(N-Me-I3C)、N，N’-二甲基-二吲哚甲烷(N，N’-Me-DIM)、N-甲氧基-吲哚-3-甲醇(N-MOE-I3C)、N，N’-二甲氧基-二吲哚甲烷(N，N’-MOE-DIM)、2-戊基-吲哚-3-甲醇(2-C5-I3C)、2，2’-二戊基-二吲哚甲烷(2，2’-C5-DIM)、2-甲氧基-吲哚-3-甲醇(2-MOE-I3C)、2，2’-二甲氧基-二吲哚甲烷(2，2’-MOE-DIM)、1-丁基-2-甲基-吲哚-3-甲醇(1Bu-2Me-I3C)、1，1’-二丁基-2，2’-二甲基-二吲哚甲烷(1，1’Bu-2，2’Me-DIM)、4-溴-吲哚-3-甲醇(4-Br-I3C)及4，4’-二溴-二吲哚甲烷(4，4’-Br-DIM)治疗的治疗组。随机抽取7月龄雄性昆明种小鼠8只，为老年对照组。随机抽取2月龄雄性昆明种小鼠8只为青年对照组。
(2)给药方法：治疗组用相应的药物灌胃给药，老年痴呆模型组、老年对照组和青年对照组灌等容量蒸馏水，各组每日灌药一次，连续灌药30日后处死动物。
(3)观测的指标：
①、处死动物前先进行行为学测试，采用爬杆法，标准分为0级：一步一步向下爬，1级：向下滑行，2级：不能抓住棒，3级：翻正反射消失，小鼠的正常值为0-0.3。
②、SOD测定：取1％脑组织匀浆50μl加入相关试剂，用旋窝混匀器充分混匀，置37℃恒温水浴40分钟，然后加入显色剂2ml混匀，然后导入1cm光径比色杯中，在波长550nm处比色，读OD值，并参考测试标准曲线，通过计算确定样本中SOD的含量。
③、MDA测定：取10％脑组织匀浆0.2ml，加入相关试剂，混匀，95℃水浴40分钟，取出后3500-4000转/分，离心10分钟，蒸馏水调零，523nm处比色，读OD值，并参考测试标准曲线，通过计算确定样本中MDA的含量。
④、胆碱酯酶(CHE)测定：取10％脑组织匀浆0.05ml加8μl/ml乙酰胆碱应用液0.25ml，加缓冲液0.5ml混匀，37℃水浴20分钟，加相关试剂混匀，3000-3500转/分，离心10分钟，取上清，于520nm处1cm光径比色，空白管调零，读OD值，并参考测试标准曲线，通过计算确定样本中CHE的含量。
⑤、ATP酶的测定：取2％脑组织匀浆100μl，加入相关试剂混匀，离心3000-4000转/分，10分钟，取上清液100μl做定磷测试。各管取上清液100μl，加定磷剂2000μl，45℃水浴20分钟，蒸馏水调零，660nm处测吸光度OD值，并参考测试标准曲线，通过计算确定样本中ATP酶的含量。
实验结果如下：
表1：I3C、DIM及其衍生物对SAM-P/8小鼠行为学的影响
| 组别 | 例数(只) | 行为学分值 |
| 模型对照组 | 8 | 2.1350±0.5214 |
| I3C | 8 | 1.1340±0.5291 |
| DIM | 8 | 1.2460±0.4753 |
| 5-Cl-I3C | 8 | 1.2150±0.6574 |
| 5，5’-Cl-DIM | 8 | 1.1495±0.5843 |
| 5-C5-I3C | 8 | 1.3493±0.3475 |
| 5，5’-C5-DIM | 8 | 1.2746±0.6473 |
| 5-MOE-I3C | 8 | 1.1475±0.5423 |
| 5，5’-MOE-DIM | 8 | 1.2546±0.7824 |
| 5-NO-I3C | 8 | 1.3010±0.4552 |
| 5，5’-NO-DIM | 8 | 1.2104±0.7548 |
| N-Me-I3C | 8 | 1.2943±0.6743 |
| N，N’-Me-DIM | 8 | 1.3145±0.3694 |
| N-MOE-I3C | 8 | 1.1346±0.6954 |
| N，N’-MOE-DIM | 8 | 1.2841±0.4437 |
| 2-C5-I3C | 8 | 1.2498±0.4839 |
| 2，2’-C5-DIM | 8 | 1.1394±0.3452 |
| 2-MOE-I3C | 8 | 1.1843±0.5641 |
| 2，2’-MOE-DIM | 8 | 1.2031±0.6732 |
| 1Bu-2Me-I3C | 8 | 1.1902±0.4905 |
| 1，1’Bu-2，2’Me-DIM | 8 | 1.2039±0.4638 |
| 4-Br-I3C | 8 | 1.1828±0.5743 |
| 4，4’-Br-DIM | 8 | 1.2930±0.7538 |
| 老年对照组 | 8 | 0.5000±0.4538 |
| 青年对照组 | 8 | 0.2500±0.4526 |
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。从表1可看出，模型对照组与青年组相比，存在着明显的协调运动障碍，具有显著性差异(P＜0.01)，药物治疗组与模型对照组相比，协调运动功能明显改善，具有显著性差异(P＜0.05)。
表2：I3C、DIM及其衍生物对SAM-P/8小鼠脑组织SOD水平的影响
| 组别 | 例数(只) | SOD(Nu/ml) |
| 模型对照组 | 8 | 204.3674±24.8374 |
| I3C | 8 | 239.4857±27.4859 |
| DIM | 8 | 238.4553±25.2432 |
| 5-Cl-I3C | 8 | 236.3487±27.3489 |
| 5，5’-Cl-DIM | 8 | 237.5344±22.6323 |
| 5-C5-I3C | 8 | 238.2337±25.0485 |
| 5，5’-C5-DIM | 8 | 235.8873±24.8634 |
| 5-MOE-I3C | 8 | 236.3759±26.0239 |
| 5，5’-MOE-DIM | 8 | 239.9835±27.6502 |
| 5-NO-I3C | 8 | 235.7650±28.0020 |
| 5，5’-NO-DIM | 8 | 236.5097±23.5027 |
| N-Me-I3C | 8 | 239.7756±25.5434 |
| N，N’-Me-DIM | 8 | 237.8735±24.4579 |
| N-MOE-I3C | 8 | 235.3754±22.6534 |
| N，N’-MOE-DIM | 8 | 236.7259±23.5629 |
| 2-C5-I3C | 8 | 239.6780±24.0251 |
| 2，2’-C5-DIM | 8 | 236.1242±21.4530 |
| 2-MOE-I3C | 8 | 238.3731±22.4642 |
| 2，2’-MOE-DIM | 8 | 235.3753±24.0236 |
| 1Bu-2Me-I3C | 8 | 236.3143±26.4526 |
| 1，1’Bu-2，2’Me-DIM | 8 | 234.8474±21.4853 |
| 4-Br-I3C | 8 | 236.3763±23.5023 |
| 4，4’-Br-DIM | 8 | 239.3723±23.0254 |
| 老年对照组 | 8 | 200.3453±21.3453 |
| 青年对照组 | 8 | 228.9484±23.8573 |
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。从表2可以看出，药物治疗组脑组织SOD水平明显升高，与模型对照组相比具有显著性差异(P＜0.01)。
表3：I3C、DIM及其衍生物对SAM-P/8小鼠脑组织MDA水平的影响
| 组别 | 例数(只) | MDA(Nu/ml) |
| 模型对照组 | 8 | 95.2302±9.8932 |
| I3C | 8 | 33.9502±8.4055 |
| DIM | 8 | 34.7642±5.3441 |
| 5-Cl-I3C | 8 | 36.1643±7.5640 |
| 5，5’-Cl-DIM | 8 | 32.6596±8.7854 |
| 5-C5-I3C | 8 | 35.5697±5.6748 |
| 5，5’-C5-DIM | 8 | 34.6302±4.4362 |
| 5-MOE-I3C | 8 | 33.6406±5.6755 |
| 5，5’-MOE-DIM | 8 | 35.5462±8.4653 |
| 5-NO-I3C | 8 | 34.5023±6.7615 |
| 5，5’-NO-DIM | 8 | 33.9762±6.7689 |
| N-Me-I3C | 8 | 32.5805±5.6590 |
| N，N’-Me-DIM | 8 | 36.6812±8.4509 |
| N-MOE-I3C | 8 | 33.5506±7.4873 |
| N，N’-MOE-DIM | 8 | 35.3965±4.6478 |
| 2-C5-I3C | 8 | 36.6566±8.6075 |
| 2，2’-C5-DIM | 8 | 31.9652±10.4754 |
| 2-MOE-I3C | 8 | 34.6062±8.4076 |
| 2，2’-MOE-DIM | 8 | 36.5878±6.4885 |
| 1Bu-2Me-I3C | 8 | 34.7665±6.6483 |
| 1，1’Bu-2，2’Me-DIM | 8 | 36.6896±8.6795 |
| 4-Br-I3C | 8 | 35.9652±11.6754 |
| 4，4’-Br-DIM | 8 | 34.6062±8.4076 |
| 老年对照组 | 8 | 81.6182±7.0391 |
| 青年对照组 | 8 | 17.8492±4.8372 |
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。从表3可以看出，药物治疗组脑组织MDA水平明显降低，与模型对照组相比具有显著性差异(P＜0.01)。
表4：I3C、DIM及其衍生物对SAM-P/8小鼠CHE水平的影响
| 组别 | 例数(只) | CHE(Nu/ml) |
| 模型对照组 | 8 | 67.8471±10.6533 |
| I3C | 8 | 46.4423±7.3412 |
| DIM | 8 | 45.6421±8.6342 |
| 5-Cl-I3C | 8 | 44.6523±5.4534 |
| 5，5’-Cl-DIM | 8 | 47.4423±4.7349 |
| 5-C5-I3C | 8 | 45.8723±3.3165 |
| 5，5’-C5-DIM | 8 | 42.4926±7.9834 |
| 5-MOE-I3C | 8 | 46.7435±2.4610 |
| 5，5’-MOE-DIM | 8 | 45.4427±9.5412 |
| 5-NO-I3C | 8 | 43.5621±7.0413 |
| 5，5’-NO-DIM | 8 | 45.5124±8.3415 |
| N-Me-I3C | 8 | 45.5950±7.5404 |
| N，N’-Me-DIM | 8 | 41.6751±2.4041 |
| N-MOE-I3C | 8 | 45.2355±9.5624 |
| N，N’-MOE-DIM | 8 | 43.8750±3.2154 |
| 2-C5-I3C | 8 | 45.8451±9.2250 |
| 2，2’-C5-DIM | 8 | 41.2565±7.9542 |
| 2-MOE-I3C | 8 | 43.0853±3.4615 |
| 2，2’-MOE-DIM | 8 | 45.7556±8.3497 |
| 1Bu-2Me-I3C | 8 | 42.4584±1.5478 |
| 1，1’Bu-2，2’Me-DIM | 8 | 43.6456±5.7680 |
| 4-Br-I3C | 8 | 45.0967±2.5456 |
| 4，4’-Br-DIM | 8 | 41.3563±1.5567 |
| 老年对照组 | 8 | 58.8372±1.2937 |
| 青年对照组 | 8 | 56.7382±7.0832 |
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。从表4可以看出，药物治疗组脑组织的胆碱酯酶(CHE)活性均明显降低，与模型对照组比较具有显著性差异(P＜0.01)。
表5：本发明对SAM-P/8小鼠脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力的影响
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。从表5可以看出，药物治疗组脑组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力水平明显上升，与模型对照组相比，具有显著性差异(P＜0.01)。
Claims (8)
1.具有下述结构式（Ⅰ）的吲哚-3-甲醇在制备治疗老年痴呆药物中的应用，
其中，R1为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R2为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R5为氢或卤素取代基或硝基；R4、R6、R7均为氢。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述结构式（Ⅰ）中，R5为卤素取代基或硝基，R1、R2、R4、R6、R7均为氢。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述结构式（Ⅰ）中，R1为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7均为氢。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述结构式（Ⅰ）中，R2为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7均为氢。
5.具有下述结构式（Ⅱ）的二吲哚甲烷在制备治疗老年痴呆药物中的应用，
其中，R1和R1’为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R2和R2’为氢或C1-C10烷基或C1-C10烷氧基；R5和R5’为氢或卤素取代基或硝基；R4、R6、R7、R4’、R6’、R7’均为氢。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述结构式（Ⅱ）中，R5和R5’同时为卤素取代基或硝基，R1、R2、R4、R6、R7、R1’、R2’、R4’、R6’、R7’均为氢。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述结构式（Ⅱ）中，R1和R1’同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R2、R4、R5、R6、R7、R2’、R4’、 R5’、R6’、R7’均为氢。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述结构式（Ⅱ）中，R2和R2’同时为C1-C10烷基或C1-C10烷氧基，R1、R4、R5、R6、R7、R1’、R4’、R5’、R6’、R7’均为氢。
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