CN105078993B - 一种吲唑类化合物组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种吲唑化合物组合物,由活性成分3‑{2‑[4N‑(2‑甲基‑3‑氯苯基)‑1N‑哌嗪基]乙基}‑5,6‑二甲氧基‑1H‑吲唑草酸盐和药用辅料混合而成。通过使用增溶类药用辅料增加溶解度,提高组合物的稳定性,避免贮藏条件下药物析出带来安全隐患。本发明的制备方法设计合理,工艺简单,生产成本较低,便于工业化生产。所述吲唑类化合物组合物具有良好的水溶性,具有较高的临床用药方便性,可在制备治疗脑血管病药物中的应用。

Description

一种吲唑类化合物组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及一种吲唑类化合物及其制备方法和制备药物方面的用途。主要涉及3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐组合物及其制备方法,以及3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐组合物用于制备血管内皮细胞氧化应激损伤引起的相关脑血管疾病预防和治疗药物的用途。
背景技术
脑血管病是危害人类生命与健康的常见病、多发病。具有发病率高、致残率高、死亡率高和复发率高的特点。脑血管病的发病率与年龄成正相关,随着我国人口老龄化程度加重。其发病呈上升趋势。以脑卒中为例,我国每年发病率为150/10万人,死亡率为120/10万人,存活中约有75%致残,5年复发率高达41%, 由此造成了社会和经济负担日趋加重。
据统计资料显示,脑血管病以缺血性为多见。缺血性脑损伤以后,首先发生明显的脑微血管系统缺血性改变,病灶区出现血液循环障碍,血脑屏障通透性增加及脑水肿,最后导致继发性神经元细胞死亡等重要的病理生理变化。目前,国内外许多学者已经研究发现微循环局部与整体全过程的联系,提出血管内皮细胞是脑缺血损伤致病因素的重要靶细胞(Zlokovic BV. The blood-brain barrier in health and chronic neurodegenerativedisorders. Neuron. 2008,24:178-201;高梅等,缺血性中风治疗新策略——靶向神经血管单元。《 中国临床药理学与治疗学 》2008,13:813-821)。以血管内皮作为切入点,是进一步研究脑血管疾病治疗方法的突破口所在(Zlokovic BV. The blood-brain barrier inhealth and chronic neurodegenerative disorders. Neuron. 2008, 24:178-201.)。
氧化应激(oxidative stress)是缺血性脑血管疾病重要病理反应过程。其中过氧亚硝基阴离子(Peroxynitrite, ONOO-)是心脑血管损害时氧化应激的重要信号途径,ONOO-因为其强大氧化活性使含硫基团氧化、羟基化和蛋白质酪氨酸残基硝化,可改变细胞内信号通路,从而引起血管内皮细胞凋亡(Xu J, He L, Ahmed SH et al. Oxygen-glucose deprivation induces inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosineexpression in cerebral endothelial cells. Stroke. 2000, 31: 1744-1751)。应用药物阻止ONOO-,逆转血管内皮细胞氧化应激损伤是改善脑血管内皮损伤的关键环节,对防治以血管内皮细胞氧化应激损伤为病理基础的脑血管疾病有重大实际意义。
3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐(JP09-301955)的化学式如下:
近年来的文献中已介绍过3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑盐酸盐可以调控心肌肥厚病理过程中的钙调素依赖激酶和磷酸化酶的稳态平衡(Lu YM, Shioda N, Han F, Moriguchi S, Kasahara J, Shirasaki Y, QinZH, Fukunaga K. Imbalance between CaM kinase II and calcineurin activitiesimpairs caffeine-induced calcium release in hypertrophic cardiomyocytes.Biochem Pharmacol. 2007 15;74(12):1727-37)。但目前尚未见该物质用于逆转血管内皮细胞氧化应激损伤,脑血管损伤保护作用的报道。
3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐尚无制剂产品上市。关于对动物的给药途径,3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐可作为注射剂给药,如腹腔注射、静脉注射、局部注射等,或作为口服制剂给药。关于对人类的给药途径,3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐可作为注射剂给药,如脉管内(静脉内或动脉内)给药、局部注射等,或作为口服制剂、栓剂等给药。
3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐为水难溶性药物,将其开发成组合物用于脑血管病治疗需充分考虑到该特性。
发明内容
针对上述背景技术,本发明的目的是提供一种吲唑类化合物组合物。
为实现上述目的,本发明采取以下技术方案:吲唑类化合物组合物,由活性成分3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐和药用辅料组合而成。所述药用辅料包括注射用水和增溶类药用辅料。
所述增溶类药用辅料采用乙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘露醇、聚山梨酯、泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、环糊精衍生物中的一种或多种的混合物。
所述活性成分、注射用水和增溶类药用辅料的重量百分比含量如下:3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐0.01%~0.2%,增溶类药用辅料0.1-50%,注射用水49.80%~99.89%。
所述增溶类药用辅料,在组合物中的单独用量为:乙醇10%~50%,丙二醇10%~50%,聚乙二醇10%~50%,甘露醇1%~20%,聚山梨酯0.1%~10%,泊洛沙姆0.1%~10%,聚氧乙烯蓖麻油衍生物0.1% ~10%,环糊精衍生物0.1%~10%;在组合物中多种增溶类药用辅料混合用量时:每一种增溶辅料用量不超过单独使用量,且总的增溶辅料量不超过50%。
所述聚乙二醇选自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600中的一种或多种。
所述聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80中的一种或多种。
所述泊洛沙姆选自泊洛沙姆188、泊洛沙姆407中的一种或两种。
所述聚氧乙烯蓖麻油衍生物选自聚氧乙烯(35)蓖麻油、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油中的一种或两种。
所述环糊精衍生物选自羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精中的一种或多种。
所述吲唑类化合物组合物的制备方法如下:取40~50℃注射用水,加入一定量的增溶类药用辅料,搅拌均匀,再加入重量百分比含量为0.01%~0.2%的3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐,待溶解完全后,补充注射用水至配方量的全量,用0.22μm微孔滤膜过滤,经中间体检验合格后灌装、灭菌,包装入库。
本发明的另一个目的是提供所述吲唑类化合物组合物在制备治疗脑血管药物中的应用。所述脑血管疾病是以血管内皮氧化应激损伤为病理基础的脑血管疾病,该组合物能够减少或阻断ONOO-产生及继发,逆转血管内皮细胞氧化应激损伤,用于以血管氧化应激损伤为病理基础的脑血管疾病的防治,等剂量条件下与阳性药物依达拉奉相比可显著改善神经功能障碍效果。
本发明具有以下特点:
1、所述吲唑类化合物组合物作为注射剂用于临床给药。考虑到脑血管病发作迅速,致残率、死亡率较高,且患者通常处于行动不便或昏迷状态不宜口服药物,注射剂相比于片剂、胶囊等口服剂型吸收更快,作用更迅速,不受pH、酶、食物等影响,无首过效应,将所述吲唑类化合物组合物作为注射剂用于脑血管病药物治疗更加合理高效。
2、将难溶性药物的增溶技术应用于所述吲唑类化合物组合物的增溶,对多种增溶类药用辅料的增溶效果进行了大量研究。3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐为水难溶性药物,本发明使用增溶类药用辅料可增加其溶解度,提高组合物的稳定性,避免贮藏条件下药物析出带来安全隐患。
3、充分考虑到所述吲唑类化合物组合物临床使用的安全性,该注射剂所用增溶类药用辅料及用量均符合注射剂要求。通过查阅大量相关文献,研究多种增溶类药用辅料的用途范围,筛掉虽然具有增溶作用,但表现出强毒副作用、不能用于注射液的增溶类药用辅料,如阳离子型表面活性剂和阴离子型表面活性剂。其次,根据文献报道和美国FDA批准药物非活性成分数据库确定所选增溶类药用辅料的安全用量范围,对所选增溶类药用辅料进行单一增溶和复合增溶研究。
4、所述吲唑类化合物组合物的制备工艺简单,生产成本较低,便于工业化生产,从而一定程度上降低患者用药的经济负担。
5、所述吲唑类化合物组合物具有良好的水溶性,临床上可以与0.9%氯化钠注射液或5%葡萄糖注射液配伍,获得澄明注射液,具有较高的临床用药方便性。
附图说明
图1是实验大鼠各组神经功能障碍评分比较图。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步说明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之内。
实施例1 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表1所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法:取40~50℃注射用水,加入投药量的增溶类药用辅料,搅拌均匀,再加入投药量的3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐,待溶解完全后,补充注射用水至配方量的全量,用0.22μm微孔滤膜过滤,经中间体检验合格后灌装、灭菌,包装入库。
实施例2 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表2所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例3 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表3所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例4 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表4所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例5 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表5所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例6 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表6所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例7 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表7所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例8 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表8所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例9 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表9所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例10 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表10所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例11 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表11所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例12 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表12所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例13 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表13所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例14 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表14所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例15 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表15所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例16 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表16所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例17 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表17所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例18 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表18所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例19 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表19所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例20 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表20所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例21 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表21所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例22 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表22所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例23 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表23所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例24 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表24所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例25 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表25所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例26 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表26所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例27 吲唑类化合物组合物的制备
⑴ 吲唑类化合物组合物的各组分配比表如表27所示(制成100ml)。
⑵ 吲唑类化合物组合物的制备方法与实施例1相同。
实施例28 吲唑类化合物组合物对缺血性脑损伤大鼠的神经功能障碍改善作用
线栓法大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型建立
10%水合氯醛每100 g 0.38ml尾静脉注射麻醉,仰卧固定,常规备皮消毒,颈正中切口,从肌群间向深部分离暴露右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA),细致分离避免损伤迷走神经、颈内动脉(ICA),翼腭动脉不予分离,CC攻ECA近心端分别挂线结扎,微动脉夹暂时夹闭CCA远心端,眼科剪45°在CCA远端上剪一小口,将制备好的线栓沿切口插入,将预先置于CCA上的挂线适度系住防止出血,后移去微动脉夹,用眼科镊缓慢推进线栓,视线栓头端通过CCA分叉进入ICA时将栓线弧度调整为右下方向,遇阻力停止,插入深度自CCA分叉处约16~18 mm(根据动物体重而定)即可通过MCA起始端至大脑前动脉近端闭塞血管,将先前的挂线扎紧固定栓线。然后缝合肌肉皮肤,栓线尾端外露部分标记。缺血达到90 min后小心外拉栓线约1 cm使其球端回至CCA内,即形成再灌注。假手术组只是尼龙鱼线插入仅10 mm,其余步骤同手术组。在缺血期间及再灌注后1 h保持体温在(37±0.5)℃,间隔抽吸气道分泌物以保护呼吸道通畅。各组动物于再灌注24 h后用于指标的检测。
实验动物分组及给药剂量
根据动物的体重随机分配设立MCAO模型组,阳性对照组,吲唑草酸盐低剂量组(见表28),吲唑草酸盐中剂量组(见表28),吲唑草酸盐高剂量组(给药容量 1.0ml/kg)进行受试药物活性评价。连续给药3天,其中阳性对照组尾静脉注射阳性药注射液1mg/kg(给药容量1.0ml/kg),吲唑草酸盐低、中、高剂量组分别尾静脉注射相应剂量的实施例4制备的吲唑草酸盐溶液。
由图1可知,各组均有不同程度的神经功能障碍现象,表示MCAO的模型建立均成功。而通过各组与MCAO组神经功能障碍评分的比较,发现:(1)阳性对照组神经功能障碍有明显改善(*p<0.05);(2)吲唑草酸盐低、中、高剂量组神经功能障碍较模型组均有明显改善(*p<0.05;**p<0.01)。与阳性对照组相比,吲唑草酸盐在0.25和0.5mg/kg的剂量下就体现出神经功能障碍改善效果,而1mg/kg的吲唑草酸盐组相比于阳性对照具有更显著的神经功能障碍改善效果(#p<0.05)。
实施例29 3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐对缺氧低糖氧化条件下血管内皮细胞过氧亚硝基阴离子产生的影响
药品与试剂
高糖DMEM、高糖DMEM培养基购于美国GIBICO公司,胎牛血清、新生小牛血清购于杭州四季青生物工程材料研究所。nitrotyrosine鼠抗一抗(Upstate Biotechnology),鼠二抗 (Amersham Bioscience),其它试剂均为国产和进口分析纯试剂。试验所使用的细胞培养用人脐静脉内皮EA.hy926细胞系为永生化细胞株。
细胞培养
人脐静脉内皮EA.hy 926细胞用高糖DMEM培养液(含10% 灭活国产胎牛血清)在37 ℃ 、饱和空气湿度、含5% CO2 的培养箱内常规传代培养,细胞在培养瓶中呈单层贴壁生长。细胞长至融合,倒去培养液,PBS清洗2-3次,0.25% 胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液。
体外低糖缺氧模型构建
将单细胞悬液移入96孔板,3×l03 cells/well、37℃ 、5% CO2培养箱内培养,细胞完全融合时加入不同处理:空白对照组在正常条件下培养;OGD组和OGD合并3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐用药组(10-5µM-10-3µM),每孔用预热至37℃的HBSS(NaCl 8.00g, KCl 0.20g, CaCl2 0.14g, MgSO4.7H2O0.20g, Na2HPO4. H2O 0.06g, KH2PO4 0.06g, NaHCO3 0.35g)清洗三次,并换入相同培养基,以上每组每种剂量设平行3孔,先放入缺氧密闭箱通入混合气体(含95% N2,5% CO2)约5min,然后将密闭箱放入孵箱处理6 h,然后收集细胞进行蛋白定量。
免疫印迹法定量检测3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐对血管内皮OGD损伤后过氧亚硝基阴离子表达的影响:
血管内皮OGD损伤后nitrotyrosine蛋白(特异性识别过氧亚硝基阴离子水平)表达变化定量检测,蛋白标本电泳、转膜、5% 脱脂奶粉室温封闭45分钟。滴加nitrotyrosine鼠抗一抗(1:500),4℃过夜。10mM PBS洗3次各5分钟。滴加鼠抗二抗(1:2000)室温120分钟。10mM PBS洗3次各5分钟,ECL化学发光法显影。对免疫印迹的条带进行定量分析。
实验结果
3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐(10-5µg/µl -10-3µg/µl)在OGD模型制作前1 h 加入培养基直至实验结束。实验结果显示3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐相比OGD模型组可以更有效降低OGD 6 小时后人脐静脉内皮EA.hy 926细胞过氧亚硝基阴离子产生量,呈明显剂量依赖性(*P<0.05 或 **P<0.01),见表29。
表29是不同浓度的3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐对OGD6小时条件后过氧亚硝基阴离子产生的影响(均数 ± 标准差,n=6)。表中吲唑草酸盐即3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐。
实施例30 吲唑类化合物组合物对缺血性脑损伤大鼠的神经功能障碍改善作用
线栓法大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型建立
10%水合氯醛每100 g 0.38ml尾静脉注射麻醉,仰卧固定,常规备皮消毒,颈正中切口,从肌群间向深部分离暴露右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA),细致分离避免损伤迷走神经、颈内动脉(ICA),翼腭动脉不予分离,CC攻ECA近心端分别挂线结扎,微动脉夹暂时夹闭CCA远心端,眼科剪45°在CCA远端上剪一小口,将制备好的线栓沿切口插入,将预先置于CCA上的挂线适度系住防止出血,后移去微动脉夹,用眼科镊缓慢推进线栓,视线栓头端通过CCA分叉进入ICA时将栓线弧度调整为右下方向,遇阻力停止,插入深度自CCA分叉处约16~18 mm(根据动物体重而定)即可通过MCA起始端至大脑前动脉近端闭塞血管,将先前的挂线扎紧固定栓线。然后缝合肌肉皮肤,栓线尾端外露部分标记。缺血达到90 min后小心外拉栓线约1 cm使其球端回至CCA内,即形成再灌注。假手术组只是尼龙鱼线插入仅10 mm,其余步骤同手术组。在缺血期间及再灌注后1 h保持体温在(37±0.5)℃,间隔抽吸气道分泌物以保护呼吸道通畅。各组动物于再灌注24 h后用于指标的检测。
实验动物分组及给药剂量
根据动物的体重随机分配设立MCAO模型组,阳性对照组,吲唑草酸盐低剂量组(表30),吲唑草酸盐中剂量组(表30),吲唑草酸盐高剂量组(给药容量 1.0ml/kg)进行受试药物活性评价。连续给药3天,其中阳性对照组尾静脉注射阳性药注射液1mg/kg(给药容量1.0ml/kg),吲唑草酸盐低、中、高剂量组分别尾静脉注射相应剂量的实施例23制备的吲唑草酸盐溶液。
神经功能障碍评分
参考 longa 评分法,在缺血再灌注24 h对各组大鼠进行神经功能障碍评分。评分标准如下:0分:无神经功能缺损症状; 1分为不能完全伸展对侧前爪;2分为向外侧转圈;3分为向对侧倾倒;4分为不能自发行走,意识丧失。
参见表31可知,各组均有不同程度的神经功能障碍现象,表示MCAO的模型建立均成功。而通过各组与MCAO组神经功能障碍评分的比较,发现:1)阳性对照组神经功能障碍有明显改善(*p<0.05);2)吲唑草酸盐低、中、高剂量组神经功能障碍较模型组均有明显改善(*p<0.05;**p<0.01)。与阳性对照组相比,吲唑草酸盐在0.25和0.5mg/kg的剂量下就体现出神经功能障碍改善效果,而1mg/kg的吲唑草酸盐组相比于阳性对照具有更显著的神经功能障碍改善效果(#p<0.05)。

Claims (2)

1.一种吲唑类化合物组合物,其特征在于,由活性成分3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐和增溶类药用辅料、注射用水组合而成;所述活性成分、增溶类药用辅料和注射用水的重量百分比含量为:3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐0.01%~0.2%,增溶类药用辅料0.1-50%,注射用水49.80%~99.89%;
所述的增溶类药用辅料选用乙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘露醇、聚山梨酯、泊洛沙姆、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、环糊精衍生物中的一种或多种的混合物;
所述增溶类药用辅料,在组合物中的单独用量为:乙醇10%~50%,丙二醇10%~50%,聚乙二醇10%~50%,甘露醇1%~20%,聚山梨酯0.1%~10%,泊洛沙姆0.1%~10%,聚氧乙烯蓖麻油衍生物0.1% ~10%,环糊精衍生物0.1%~10%;在组合物中多种混合使用量为:每一种增溶辅料用量不超过单独使用量,且总的增溶辅料量不超过50%;
所述吲唑类化合物组合物通过以下制备步骤实现:取40~50℃注射用水,加入增溶类药用辅料,搅拌均匀,再加入重量百分比含量为0.01%~0.2%的3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基) -1N-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-1H-吲唑草酸盐,待溶解完全后,补充注射用水至配方量的全量,用0.22μm微孔滤膜过滤,经中间体检验合格后灌装、灭菌,包装入库;
其中所述聚山梨酯选自聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80中的一种或多种;
所述泊洛沙姆选自泊洛沙姆188、泊洛沙姆407中的一种或两种;
所述聚氧乙烯蓖麻油衍生物选自聚氧乙烯(35)蓖麻油、聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油中的一种或两种;所述环糊精衍生物选自羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊精中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的一种吲唑类化合物组合物在制备治疗脑血管病药物中的应用,其特征在于,所述脑血管病是指缺血性脑损伤引起的脑血管疾病。
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