CN115777749A - 一种组合物、食品组合物、天麻饼干及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种组合物、食品组合物、天麻饼干及其制备方法。该组合物包括以下质量份数的原料：天麻3～5份、茯苓10～20份、薏苡仁10～20份、黑芝麻10～20份、核桃10～20份以及大枣10～20份，该食品组合物包括第一组分和第二组分，该第二组分具体包括天麻、茯苓、薏苡仁、黑芝麻、核桃以及大枣，同时，本发明还提供一种天麻饼干及其制备方法。

Description

一种组合物、食品组合物、天麻饼干及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种组合物、食品组合物、天麻饼干及其制备方法。

背景技术

自古以来，天麻不仅可作为一种药品，还可作为一种保健食品。天麻具有特殊气味，俗称“马尿味”，直接食用常人难以接受，故而在进行天麻相关保健食品开发时，往往采取一定的措施掩盖不良的气味，据统计，现有技术中的采用天麻制备保健食品的功能主要涵盖改善睡眠、辅助降血压、增强免疫力、缓解体力疲劳、辅助调血脂、提高缺氧耐受力、抗氧化以及改善化学肝损伤等方面，而对天麻对肠道菌群调节作用鲜有报道，因而，还需对天麻的食用和保健价值进行进一步挖掘。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种组合物、食品组合物、天麻饼干及其制备方法，所述组合物、食品组合物可为天麻在保健食品中的研发提供新的思路。

为达到上述技术效果，本发明采用了以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种组合物，该组合物包括以下质量份数的原料：天麻3～5份、茯苓10～20份、薏苡仁10～20份、黑芝麻10～20份、核桃10～20份以及大枣10～20份。

第二方面，本发明还提供一种上述第一方面提供的组合物在制备具有调节人或动物肠道菌群、改善人或动物脑功能中任一功能的药品中的应用。

第三方面，本发明还提供一种上述第一方面提供的组合物在制备具有提高人或动物脑内BDNF含量、降低人或动物乙酰胆碱酯酶表达中任一功能的药品中的应用。

第四方面，本发明提供的一种食品组合物，所述食品组合物包括由天麻、茯苓、薏苡仁、黑芝麻、核桃以及大枣组成的第二组分。

优选地，所述第二组分由以下质量份数的原料组成：天麻3～5份、茯苓10～20份、薏苡仁10～20份、黑芝麻10～20份、核桃10～20份以及大枣10～20份。

进一步优选地，所述第二组分由以下质量份数的原料组成：天麻3份、茯苓10份、薏苡仁10份、黑芝麻10份、核桃10份以及大枣10份。

进一步地，所述食品组合物还包括第一组分，该第一组分包括以下质量份数的原料：低筋小麦粉26～30份、玉米淀粉11～14份、甜味剂0.4～30份以及小苏打0.3～1份。优选地，所述甜味剂为麦芽糖醇。

第五方面，本发明提供一种天麻饼干，所述天麻饼干包括第一组分和第二组分，所述第一组分包括低筋小麦粉、玉米淀粉、甜味剂以及小苏打。

进一步地，所述第一组分包括低筋小麦粉26～30份、玉米淀粉11～14份、麦芽糖醇25～30份以及小苏打0.3～1份。

优选地，所述第一组分包括低筋小麦粉28.56份、玉米淀粉12.24份、麦芽糖醇25.1份以及小苏打0.8份，且所述第一组分在所述食品组合物中的添加量为66.7%。

进一步地，所述第二组分包括天麻3份、茯苓10份、薏苡仁10份、黑芝麻10份、核桃10份以及大枣10份，且所述第二组分在所述食品组合物中的添加量为33.3%。

第六方面，本发明提供的上述第五方面提供的天麻饼干的制备方法，包括步骤：

S1：对天麻进行预处理，以制备天麻粉，同时，将大枣去核后加水制备为枣泥；

S2：将茯苓、薏苡仁分别粉碎后过筛，然后与天麻粉、粉碎后的黑芝麻末和核桃末混合，再与枣泥混合以制备为第二组分；

S3：将低筋小麦粉与玉米淀粉混合均匀后，再加入甜味剂、小苏打以及上述第二组分，调制面团使其成型，然后将其制备为天麻饼干形状进行烘烤10～15 min。

优选地，烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，烘焙时间13min。

进一步地，所述S1中的预处理包括步骤：

S01：取天新鲜天麻，将天麻纵向平行切片，切片厚度为1～10mm；

S02：对切片后的天麻进行蒸制直至透心，然后冷却备用；

S03：对蒸制后的天麻进行真空冷冻干燥；

S04：对冷冻干燥后的天麻进行粉碎、分装，以将其制备为天麻粉。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

首先，本发明提供了一种对“脑-肠-菌轴”具有调节作用的组合物以及食品组合物的配方和制备方法，该种组合物以及食品组合物具有调节肠道菌群，影响脑肠轴，改善脑功能的作用，具体表现为：影响小鼠海马体中BDNF、AChE表达水平。

其次，本发明以药食同源的植物原料为主要材料，不使用食用油，获得一种食品组合物，在该食品组合物的制备中，将天麻饼干制作中常用的白砂糖替换为麦芽糖醇，不仅适合普通人群食用，也适用于肥胖、高血糖等人群食用。此外，上述食品组合物还避免了如植物油以及其他动物油的使用，并且制备得到的天麻饼干外形完整，色泽均匀，口感酥脆，甜度适中，伴有黑芝麻香气，掩盖了天麻不佳的气味，组织结构有层次，孔洞细密，富含营养，为天麻在保健食品中的研发提供了新的思路。

附图说明

图1为本发明的实施例2提供的面粉总量对天麻饼干感官质量的影响；

图2为本发明的实施例2提供的烘焙温度对天麻饼干感官质量的影响；

图3为本发明的实施例2提供的烘焙时间对天麻饼干感官质量的影响；

图4为本发明的实施例2提供的麦芽糖醇添加量对天麻饼干感官质量的影响；

图5为本发明的实施例2提供的低筋小麦粉与玉米淀粉的质量比对天麻饼干感官质量的影响；

图6为本发明的实施例2提供的小苏打添加量对天麻饼干感官质量的影响

图7为本发明的实施例3提供的天麻饼干对小鼠环境因子表达水平的影响（*：p<0.05；**：p＜0.01；***：p＜0.001），其中，(7A)为各组小鼠的AChE表达水平，(7B)为各组小鼠的BDNF表达水平；

图8为本发明的实施例3提供的天麻饼干对小鼠β多样性的影响，其中，(8A)为PCoA分析，(8B)为NMDS分析；

图9为本发明的实施例3提供的天麻饼干对小鼠特征菌属的影响，其中，(9A)为CC组与CLG组，(9B)为CC组与CMG组，(9C)为CC组与CHG组；

图10为本发明的实施例3提供的CC组与CLG组特征菌属与AChE、BDNF的相关性分析；

图11为本发明的实施例3提供的CC组与CMG组特征菌属与AChE、BDNF的相关性分析；

图12为本发明的实施例3提供的CC组与CHG组特征菌属与AChE、BDNF的相关性分析。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1

本实施例提供一种天麻粉的制备方法，以提高其药效且便于储存，具体包括步骤：

S01：采用感官鉴定法，选出新鲜、大小均匀、无坏斑的天麻，天麻质量标准及等级参考GB/T 19776-2008，将筛选得到的新鲜天麻清洗、切片、装盘，取适量天麻，用水冲洗掉泥土，然后将天麻块茎纵向平行切片，要求每片厚度在1～4mm，再称重，并于室温下（24℃）存放；

S02：待水开后，根据天麻的品级选取不同的蒸煮时间，特级(＞250g，37min)、一级(200～250g，32min)、二级(150～200g，27min)三级(100～150g，20min)，每隔5min从蒸锅上取下一层蒸笼，并取出天麻，从中间横切开检查天麻是否蒸制透心，然后将蒸制好的天麻放于常温下晾干表面的水分，冷却至室温。

S03：对蒸制后的天麻进行真空冷冻干燥，具体包括：

预冻：预冻温度为-20℃（预冻温度设置为每分钟下降1～5℃），冷冻干燥包括两个步骤：

第一阶段干燥：通过恒温加热使表面冰晶升华，设置冷冻温度为-18℃，在此温度下冷冻1～2h；

第二阶段干燥：干燥温度为由-20℃上升至40℃、干燥时间为3h、真空压强为40～50 pa，直至水分减少至3%以下。

S04：对冷冻干燥后的天麻进行两次粉碎，初次粉碎至其粒径达到2～5mm，以获得粗粉，再将粗粉加入至超低温粉碎机中，以冻干品的粉体学特征为指标，最佳的粉碎粒度为80目，然后进行分装，以制备为天麻粉。

同时，本实施例还提供一种天麻饼干及其制备方法，该天麻饼干包括第一组分以及第二组分，具体而言，该第一组分包括：

低筋小麦粉26～30份（滨州中裕食品有限公司）、玉米淀粉11～14份（味好美武汉食品有限公司）、麦芽糖醇0.4～30份（山东福田药业有限公司）以及小苏打0.3～1份（安琪酵母股份有限公司）。

该第二组分包括：

天麻3～5份、茯苓10～20份、薏苡仁10～20份、黑芝麻10～20份、核桃10～20份以及大枣10～20份。

该天麻饼干通过以下方法进行制备：

S1：按照前述方法制备天麻粉，过80目筛，然后将配方量的大枣去核后加适量水共同加入至粉碎机中榨汁，以制备枣泥。

S2：按照配方量取各组分，将茯苓、薏苡仁分别粉碎后过80目筛，然后将其与天麻粉、粉碎后的黑芝麻末以及核桃末混合，从而制备得到第二组分；

S3：将低筋小麦粉、玉米淀粉、麦芽糖醇、小苏打以及上述第二组分混合，并调制面团使其成型，然后将其成型后的面团分进行分割，每份重10～10.5g，并通过印模成型，然后进行烘烤，取出冷却，即得所述天麻饼干。

实施例2

本实施例通过单因素实验对实施例1中的天麻饼干的制备工艺进行优化，其中，以A表示面粉总量，B表示麦芽糖醇添加量，C表示小苏打添加量，D表示第二组分的添加量，且下述试验过程中的感官评价试验均参考GB 7100-2015《食品安全国家标准饼干》、GB/T20980-2021《饼干质量通则》中规定的酥性饼干感官要求进行制定，具体如表1所示：

待天麻饼干烘焙完成之后，将其在室内放置12h左右，由10人组成的感官评价小组进行感官评价试验，评价人员通过对天麻饼干形态（20分）、色泽（25分）、滋味与口感（30分）、组织（20分）、杂质（5分）5个方面进行评分。感官评分人员采取盲法对天麻饼干进行评分，以平均值作为最终评价结果。

2.1面粉总量对天麻饼干感官质量的影响

将42.5%B、1.3%C、56.2%D混合后再与A组合成整体（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10，低筋小麦粉：玉米淀粉=8：2），烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，烘焙时间13min，分别设置A占总量的28.8%、32.8%、36.8%、40.8%、44.8%，研究面粉总量对天麻饼干感官质量的影响。上述预实验结果如图1所示，该实验结果表明，天麻饼干制作过程中若面粉总量过多会导致成品粉质感重，难以下咽，且使天麻饼干发硬，颜色过深，形状不均匀，影响成品口感、香味以及外观。由图1可知，当面粉总量小于40.8%时，天麻饼干苦涩味加重，表面焦糊；当面粉总量等于40.8%时，天麻饼干口感酥脆，外形美观，感官得分最高；当面粉总量大于40.8%时，天麻饼干粉质感重，口感不佳，发硬且外形不均匀。因此，确定最佳的面粉总量为40.8%。

2.2烘焙温度对天麻饼干感官质量的影响

将40.8%A、25.1%B、0.8%C、33.3%D混合（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10，低筋小麦粉：玉米淀粉=8：2），烘焙时间13min，分别选取烘焙温度上火/下火为200℃/180℃、190℃/170℃、180℃/160℃、170℃/150℃、160℃/140℃，研究烘焙温度对天麻饼干感官质量的影响。

实验结果如图2，由图2可知，当烘焙温度上火/下火小于180℃/160℃时，天麻饼干颜色较淡，口感绵软不酥脆，内部组织结构不均匀；当烘焙温度上火/下火为180℃/160℃时，天麻饼干色泽均匀，口感酥脆，伴有烘焙香气，内部组织结构有层次或呈多孔状；烘焙温度上火/下火大于180℃/160℃时，天麻饼干表面焦糊，饼体发硬，口感苦涩，伴有焦糊味。因此，确定最佳的烘焙温度为上火/下火：180℃/160℃。

2.3烘焙时间对天麻饼干感官质量的影响

将40.8%A、25.1%B、0.8%C、33.3%D混合（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10，低筋小麦粉：玉米淀粉=8：2），烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，分别选取烘焙时间为9min、11min、13min、15min、17min，研究烘焙时间对天麻饼干感官质量的影响。

实验结果如图3，由图3可知，当烘焙时间小于13min时，天麻饼干颜色较淡，口感绵软不酥脆，内部组织结构不均匀；当烘焙时间为13min时，天麻饼干色泽均匀，口感酥脆，伴有烘焙香气，断面组织结构有层次或呈多孔状；当烘焙时间大于13min时，天麻饼干表面焦糊，饼体发硬，口感苦涩，伴有焦糊味。因此，确定最佳的烘焙时间为13min。

2.4麦芽糖醇添加量对天麻饼干感官质量的影响

将54.5%A、1.0%C、44.5%D混合后再与B组合成整体（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10，低筋小麦粉：玉米淀粉=8：2），烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，烘焙时间13min，分别设置B占总量的15.1%、20.1%、25.1%、30.1%、35.1%，分研究麦芽糖醇添加量对天麻饼干感官质量的影响。

实验结果如图4，由图4可知，当麦芽糖醇添加量小于25.1%时，天麻饼干色泽差，甜味较淡；当麦芽糖醇添加量为25.1%时，天麻饼干色泽均匀，甜味适中；当麦芽糖醇添加量大于25.1%时，天麻饼干颜色较深，口感甜腻。因此，确定最佳的麦芽糖醇添加量为25.1%。

2.5低筋小麦粉与玉米淀粉的质量比对天麻饼干感官质量的影响

将40.8%A、25.1%B、0.8%C、33.3%D混合（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10），烘焙时间13min，烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，分别选取低筋小麦粉和玉米淀粉的质量比为9：1、8：2、7：3、6：4、5：5，研究低筋小麦粉与玉米淀粉质量比对天麻饼干感官质量的影响。

实验结果如图5，由图5可知，当低筋小麦粉：玉米淀粉大于7：3时，对天麻饼干的感官品质影响不大；当低筋小麦粉：玉米淀粉为7：3时，天麻饼干色泽均匀，口感松脆，断面孔洞紧密有层次；当低筋小麦粉：玉米淀粉小于7：3时，天麻饼干色泽不均匀，口感粗糙，断面孔洞大且不均匀。因此，确定最佳的低筋小麦粉与玉米淀粉质量比为7：3。

2.6小苏打添加量对天麻饼干感官质量的影响

小苏打即碳酸氢钠，作为一种膨松剂，在受热情况下可产生二氧化碳气体，使天麻饼干内部出现气泡并迅速形成蓬松结构，令天麻饼干的口感更加松脆，富有层次感。且天麻饼干的pH值与焦糖化反应和美拉德反应的速率密切相关，pH值越大反应速率越快，使天麻饼干更容易上色。

将41.1%A、25.3%B、33.6%D混合后再与C组合成整体（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10，低筋小麦粉：玉米淀粉=8：2），烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，烘焙时间13min，分别设置C占总量的0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%，研究小苏打添加量对天麻饼干感官质量的影响。

实验结果如图6，由图6可知，当小苏打添加量小于0.8%时，天麻饼干颜色较淡，口感绵密，断面组织不均匀且无层次；当小苏打添加量为0.8%时，天麻饼干色泽均匀，口感松脆，断面组织均匀，孔洞细密有层次；当小苏打添加量大于0.8%时，天麻饼干颜色较深，断面组织不均匀，孔洞较大，伴有碱味。因此，确定最佳的小苏打添加量为0.8%。

2.7正交试验设计

在上述单因素实验的基础上，将面粉总量41.1%、麦芽糖醇添加量25.3%、第二组分添加量33.6%混合后再与小苏打添加量组合成整体（其中天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10），以低筋小麦粉与玉米淀粉质量比（a）、小苏打添加量（b）、烘烤时间(c)、烘烤温度（d）4个因素的适宜水平，设计L₉（3⁴）正交试验，对天麻饼干的配方和工艺进行试验，确定制备工艺的最优组合，正交设计表见表2。

正交试验结果见表3：

由表3可知：影响天麻饼干品质因子的顺序依次为a＞d＞b＞c，即低筋小麦粉与玉米淀粉质量比＞烘焙温度＞小苏打添加量＞烘烤时间。各因素最佳水平组合为a₁b₁c₁d₂，而正交试验中的最优组合为a₃b₃c₂d₁，经过3组平行验证试验，a₁b₁c₁d₂的感官评分均值为88.3，a₃b₃c₂d₁的感官评分均值为81.3。因此，选择a₁b₁c₁d₂作为最佳组合，即低筋小麦粉：玉米淀粉=7：3，小苏打添加量为0.8%，烘烤时间为13min，烘焙温度为上火/下火：180℃/160℃。

因此，最终确定该最佳组分配比以及制备工艺为：

第二组分由天麻：茯苓：薏苡仁：黑芝麻：核桃：大枣=3：10：10：10：10：10组成，面粉由低筋小麦粉：玉米淀粉=7：3组成，原料中麦芽糖醇添加量25.1%，低筋小麦粉和玉米淀粉的比例为7:3且添加总量为40.8%，第二组分添加量33.3%，小苏打添加量0.8%，烘焙温度上火/下火为180℃/160℃，烘焙时间13min。

2.8理化指标及营养成分指标测定结果

按照上述最佳组分配比以及制备工艺制备天麻饼干，并对其理化指标及营养成分指标进行测定，实验方法及测试结果如下：

2.8.1水分测定

参照GB 5009.3-2016《食品安全国家标准 食品中水分的测定》中规定的第一法进行测定。

2.8.2碱度测定

参照GB/T 20980-2021《饼干质量通则》中规定的方法进行测定。

2.8.3能量测定

参照GB 28050-2011《食品安全国家标准 预包装食品营养标签通则》中规定的方法进行测定。

2.8.4蛋白质含量测定

参照GB 5009.5-2016《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》中规定的第一法进行测定。

2.8.5脂肪含量测定

参照GB 5009.6-2016《食品安全国家标准 食品中脂肪的测定》中规定的第一法进行测定。

2.8.6碳水化合物含量测定

参照GB 28050-2011《食品安全国家标准 预包装食品营养标签通则》中规定的方法进行测定。

2.8.7钠含量测定

参照GB 5009.91-2017《食品安全国家标准 食品中钾、钠

的测定》中规定的第三法进行测定。

2.8.8总黄酮含量测定

参照NY/T 1295-2007《荞麦及其制品中总黄酮含量的测定》中规定的方法进行测定。

测试结果：按照最佳组分配比以及制备工艺制备得到的天麻饼干水分为3.99%，碱度为0.14%，能量为1782kJ/100g，蛋白质含量为7.31g/100g，脂肪含量为9.1g/100g，碳水化合物含量为77.7g/100g，钠含量为162mg/100g，总黄酮含量为0.31%。

2.9结论

本试验下制作的天麻饼干外形完整，色泽均匀，口感酥脆，甜度适中，伴有黑芝麻香气，掩盖了天麻不佳的气味，组织结构有层次，孔洞细密，富含营养，为天麻在保健食品中的研发提供了新的思路。此外，本试验中将白砂糖替换为麦芽糖醇，不仅适合普通人群食用，也适用于肥胖、高血糖等人群食用。

实施例3

本实施例以C57BL/6小鼠作为实验材料，并以上述最佳组分配比以及制备工艺制备天麻饼干，并对制备得到的天麻饼干的药效学进行验证，包括：

3.1 实验动物及饲喂

实验使用SPF级C57BL/6小鼠40只，6周龄，雄性，于湖南斯莱克景达实验动物有限公司购买，饲喂采用Co60辐照实验鼠生长繁殖饲料进行饲喂（湖南中医药大学实验动物中心提供）。

3.2 实验方法

将研制的天麻饼干磨成粉，称取天麻饼干粉于洁净的烧杯中，溶于纯净水，制备成低、中、高剂量的三种天麻饼干混悬液，常温备用。

将40只C57BL/6小鼠在适宜环境（室温23～25℃，相对湿度50%～70%，清洁安静）适应性饲养4d后，随机分成空白对照组（CC，10只）、天麻饼干低剂量组（CLG，10只）、天麻饼干中剂量组（CMG，10只）、天麻饼干高剂量组（CHG，10只），编号后分笼饲养，5只/笼。

空白对照组灌胃纯净水，天麻饼干低、中、高剂量组分别灌胃2.295g/(kg·d)、4.595g/(kg·d)、6.890g/(kg·d)的天麻饼干混悬液，持续42d。

3.3 实验结果

3.3.1 天麻饼干对小鼠海马体中BDNF、AChE的影响

乙酰胆碱是目前研究最为广泛的神经递质，而乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）则是分解乙酰胆碱的主要酶类，抑制AChE表达可起到改善记忆的作用。脑源性神经营养因子（brain-derivedneurotrophic factor，BDNF）在神经元存活、分化和突触可塑性中发挥着关键作用，能影响学习与记忆能力，在神经退行性疾病相关认知改变方面有潜在的治疗作用。

本实施例采用酶联免疫吸附测定法测定AChE含量，具体操作按照试剂盒说明书进行。

实验结果如图7所示，该实验结果显示：

如图7A所示，与CC组相比，各天麻饼干组的AChE含量均降低，其中CLG组存在显著差异（P＜0.001），通过比较不同组别小鼠海马体中AChE含量得出：CLG组＜CMG组＜CHG组＜CC组。

如图7B所示，与CC组相比，各天麻饼干组的BDNF含量均升高，且均有显著差异（P＜0.001，P＜0.01，P＜0.05），通过比较不同组别小鼠海马体中BDNF含量得出：CC组＜CHG组＜CMG组＜CLG组。

3.3.2 观察天麻饼干对小鼠肠道菌群的影响

采用颈椎脱臼法处死小鼠后，立即放于超净工作台上，取小肠段作为检测样本。用灭菌镊子将食糜内容物挤出，分别单独装入1.5mL灭菌ep管编号后迅速用液氮冻存，随后转入-80℃冰箱保存，用于16S rRNA基因高通量测序。

3.3.2.1 天麻饼干对小鼠Beta多样性的影响

对各组小鼠肠黏膜样本进行总DNA提取，提取方法根据DNA提取试剂盒（MNNucleoSpin96 Soi）进行。使用Nanodrop测定提取的DNA的浓度，并通过1.8%琼脂糖凝胶电泳检测提取DNA的纯度。选用16S rRNA基因的V3+V4高可变区作为PCR扩增区域，使用16S通用引物（338F/806R）对合格的DNA进行扩增：上游引物338F（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3'）和下游引物806R（5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）。扩增10μL体系包括：Vn F（10μmol/L）0.3μL，Vn R（10μmol/L）0.3μL，KOD FX NeoBuffer 5μL，dNTP (2 mmol/L each) 2μL，KOD FXNeo 0.2μL，加ddH₂O至10μL。扩增反应条件：95℃预变性5min，然后进行25个循环：95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸40s，最后72℃延伸7min，4℃终止反应。

PCR产物根据电泳定量（ImageJ 软件）结果，按照质量比1：1进行混样。混样后，采用 OMEGA DNA 纯化试剂盒进行过柱纯化。1.8%的琼脂糖凝胶，120V 40min 电泳后，切目的片段，并采用Monarch DNA 胶回收试剂盒回收。

使用SPSS 25.00软件进行统计分析，各组所得数据以均值±标准差（mean±SD）表示。统计分析采用单因素方差分析（ANOVA），然后进行LSD事后检验来确定组间差异。检验水平被设定为α=0.05。当P<0.05时，结果统计有显著差异；当P<0.01时，结果统计有极显著差异。

实验结果如图8所示，本研究基于Bray-Curtis距离算法评估beta多样性，不同组别间的微生物群落组成差异显著（P=0.037），这也得到了Anosim的证实。两类群在坐标轴上的距离越近，两类群在相应维度上的群落组成越相似。PCoA分析结果显示（图8A），横坐标PCoA1贡献率为39.16%，纵坐标PCoA2贡献率为15.75%。CC组样品分别与CLG组样品、CMG组样品、CHG组样品有部分重叠，并呈现出成组内聚集现象。显然，相比CC组，CLG组、CMG组、CHG组肠道内容物菌群的群落结构发生了明显的变化但又存在一定的相似。NMDS分析（图8B）与PCoA分析结果一致。

3.3.2.2 天麻饼干对小鼠特征菌属的影响

为进一步验证天麻饼干对小鼠肠道菌群的调节作用，采用LEfSe分析以线性判断分析（LDA）分值＞2为筛选标准，进行多个分组之间的比较，来确定组间有显著差异的特征菌属。

如图9所示，CC组和CLG组之间的物种差异性结果如图9A。其中，Parasutterella、unclassified_Prevotellaceae、Bacillus和Parvibacter为CC组中富集的特征菌属；Bifidobaterium、Facklamia、unclassified_Atopobiaceae和Staphylococcus为CLG组中富集的特征物种。CC组和CMG组之间的物种差异性结果如图9B。其中，Parasutterella、Helicobacter、Faecalibaculum和Parvibacter为CC组中富集的特征菌属；Lachnospiracea_NK4A136_group、Tyzzerella、unclassified_Atopobiaceae、Staphylococcus和Adlercreutzia为CMG组中富集的特征菌属。CC组和CHG组之间的物种差异性结果如图9C。其中，Cetobacterium、Bacillus和Parvibacter为CC组中富集的特征菌属；Dubosiella、unclassified_Atopobiaceae、Adlercreutzia和Tyzzerella为CHG组中富集的特征菌属。

3.3.2.2 特征菌属与AChE、BDNF的相关性分析

为进一步分析天麻饼干对小鼠肠道菌群与环境因子相关性的影响，我们采用Spearman法对各组间特征菌属与AChE、BDNF进行关联分析，结果如图10所示。

比较CC组和CLG组，通过关联热图（图10）发现Parvibacter与BDNF呈显著负相关；Parasutterella与BDNF呈显著负相关的同时与AChE呈显著正相关；以上均为CC组的特征菌属。unclassified_Atopobiaceae与AChE呈显著负相关；Facklamia和Staphylococcus与BDNF呈显著正相关的同时与AChE呈显著负相关；以上均为CLG组的特征菌属。

比较CC组和CMG组，通过关联热图（图11）发现Parasutterella、Helicobacter、Faecalibaculum和Parvibacter与BDNF呈显著负相关，以上均为CC组的特征菌属。Adlercreutzia与AChE呈显著负相关；Staphylococcus、Tyzzerella和unclassified_Atopobiaceae与BDNF呈显著正相关；以上均为CMG组的特征菌属。

比较CC组和CHG组，通过关联热图（图12）发现Parvibacter与BDNF呈显著负相关，以上为CC组的特征菌属。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。

Claims (9)

1.一种组合物，其特征在于，包括以下质量份数的原料：天麻3～5份、茯苓10～20份、薏苡仁10～20份、黑芝麻10～20份、核桃10～20份以及大枣10～20份。

2.如权利要求1所述的一种组合物在制备具有调节人或动物肠道菌群、改善人或动物脑功能中任一功能的药品中的应用。

3.如权利要求1所述的一种组合物在制备具有提高人或动物脑内BDNF含量、降低人或动物乙酰胆碱酯酶表达中任一功能的药品中的应用。

4.一种食品组合物，其特征在于，包括由天麻、茯苓、薏苡仁、黑芝麻、核桃以及大枣组成的第二组分。

5.如权利要求4所述的一种食品组合物，其特征在于：所述食品组合物为天麻饼干，且所述食品组合物还包括第一组分，所述第一组分包括低筋小麦粉、玉米淀粉、甜味剂以及小苏打。

6.如权利要求5所述的一种食品组合物，其特征在于，第一组分包括以下质量份数的原料：低筋小麦粉26～30份、玉米淀粉11～14份、甜味剂0.4～30份以及小苏打0.3～1份。

7.一种天麻饼干，其特征在于，由以下质量份数的原料制成：低筋小麦粉26～30份、玉米淀粉11～14份、麦芽糖醇25～30份、小苏打0.3～1份、天麻3～5份、茯苓10～20份、薏苡仁10～20份、黑芝麻10～20份、核桃10～20份以及大枣10～20份。

8.如权利要求7所述的一种天麻饼干的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1：对天麻进行预处理，以制备天麻粉，同时，将大枣去核后加水制备为枣泥；

S2：将茯苓、薏苡仁分别粉碎后过筛，然后与天麻粉、粉碎后的黑芝麻末和核桃末混合，再与枣泥混合以制备为第二组分；

S3：将低筋小麦粉与玉米淀粉混合均匀后，再加入甜味剂、小苏打以及上述第二组分，调制面团使其成型，然后将其制备为天麻饼干形状进行烘烤。

9.如权利要求8所述的一种天麻饼干的制备方法，其特征在于，所述预处理包括步骤：

S01：取天新鲜天麻，将天麻纵向平行切片，切片厚度为1～10mm；

S02：对切片后的天麻进行蒸制直至透心，然后冷却备用；

S03：对蒸制后的天麻进行真空冷冻干燥；

S04：对冷冻干燥后的天麻进行粉碎、分装，以将其制备为天麻粉。

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