CN115532242A - 腐殖酸吸附剂及其制备方法土壤dna提取试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种腐殖酸吸附剂及其制备方法土壤DNA提取试剂盒，腐殖酸吸附剂由蛋白质复合物、盐酸胍和水组成；其中，每1L腐殖酸吸附剂中，所述蛋白质复合物的添加量为130‑400g，所述盐酸胍添加量为1‑3mol，所述蛋白质复合物由以下质量份数的组分制成：植物蛋白粉250‑750份、硫酸铝铵45‑136份、氢氧化钠16‑24份和水1000份。本发明提供了一款土壤DNA提取试剂盒，能够提取到高质量的土壤DNA，有效减少核酸损失，获得的DNA能直接用于PCR、病毒检测等实验。

Description

腐殖酸吸附剂及其制备方法土壤DNA提取试剂盒
技术领域
本发明涉及土壤DNA提取领域，尤其是涉及一种腐殖酸吸附剂及其制备方法土壤DNA提取试剂盒。
背景技术
土壤微生物是土壤生态系统的重要组份之一，几乎所有的土壤过程都直接或间接地与土壤微生物有关。当前土壤微生物宏基因组是土壤微生物研究的有力手段，该方法灵敏度高，准确性。
使用该方法的前提是获得到一定浓度的高质量的土壤基因组DNA，而土壤DNA提取难度之一在于去除土壤中腐殖酸的影响，特别是对于富营养土壤样本，其中腐殖酸含量较高。市面上大部分土壤DNA提取试剂盒不含去除腐殖酸的试剂，导致富营养土壤样本最后提取到的土壤DNA有较深的颜色残留，从而导致DNA提取产物无法直接进行后续的后续的分子生物学实验。
目前，人们一般通过硫酸铝铵絮凝沉淀来去除土壤腐殖酸，但硫酸铝铵在吸附腐殖酸的同时也会吸附DNA，导致絮凝过程也会沉淀DNA，引起DNA的损失。
发明内容
为了去除腐殖酸同时降低核酸损失，本发明提供了一种腐殖酸吸附剂及其制备方法土壤DNA提取试剂盒，能够提取到高质量的土壤DNA，有效减少核酸损失，获得的DNA能直接用于PCR、病毒检测等实验。
第一方面，本申请提供一种腐殖酸吸附剂，采用以下技术方案：
一种腐殖酸吸附剂，由蛋白质复合物、盐酸胍和水组成；其中，每1L腐殖酸吸附剂中，所述蛋白质复合物的添加量为130-400g，所述盐酸胍添加量为1-3mol，所述蛋白质复合物由以下质量份数的组分制成：植物蛋白粉250-750份、硫酸铝铵45-136份、氢氧化钠16-24份
和水1000份。
本申请创新地合成一种蛋白质复合物，该蛋白质复合物能选择性地吸附土壤样品中的腐殖酸等抑制因子，对核酸吸收却十分小，能减少提取过程中核酸的损失，因此上述腐蚀酸吸附剂使用能同时提高核酸的纯度和得率。这是因为上述配比的硫酸铝铵与植物蛋白粉混合后，加入氢氧化钠，氢氧化钠与硫酸铝铵反应形成氢氧化铝，氢氧化铝再与植物蛋白粉充分吸附结合形成蛋白质复合物，该蛋白质复合物对腐殖酸保持较强的吸附作用，对核酸的吸附能力减弱，同时能使ξ电位迅速升高，以中和带负电的弱酸性腐殖酸胶体，达到电性中和的作用效果来混凝脱腐。
优选的，所述植物蛋白粉为大豆蛋白粉。
当植物蛋白粉为大豆蛋白粉，生成的蛋白质复合物稳定性较高，该蛋白复合物对核酸的吸附能力大幅度减弱，同时对腐殖酸保持较强的吸附能力，其作为腐殖酸吸附剂。
优选的，所述蛋白质复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，配制溶液：取植物蛋白粉和硫酸铝铵混合，加水完全溶解，得到混合溶液；
步骤2，收集沉淀：在混合溶液中加入碱金属氢氧化物，搅拌，离心，取沉淀洗涤，得到蛋白质复合物。
通过先将植物蛋白粉和硫酸铝铵充分混合，接着加入碱金属氢氧化物,碱金属氢氧化物先与硫酸铝铵反应生成氢氧化铝絮状沉淀,氢氧化铝絮状沉淀与植物蛋白粉之间吸附结合,得到蛋白复合物。此外，二价的碱土金属离子与DNA会产生沉淀，本申请使用碱金属氢氧化物，碱金属离子不易与DNA结合产生沉淀，能够有效避免腐殖酸吸附剂使用后吸附更多的核酸。
优选的，所述步骤2中，搅拌时间至少30min。
通过搅拌至少30min，氢氧化铝充分生成，并且氢氧化铝与植物蛋白粉之间充分结合，得到的蛋白质复合物对核酸吸附能力更低，从而减少提取过程土壤样品中DNA损失。
优选的，所述腐殖酸吸附剂中，盐酸胍的浓度为2-3mol/L。
盐酸胍不但具有防腐作用，而且还有利于提高蛋白质复合物的稳定性，当盐酸胍的加入量为2mol/L时，蛋白质复合物吸附选择性吸收腐殖酸的效果处于最佳范围。当盐酸胍浓度过大或者过小时，蛋白质复合物吸附选择性吸收腐殖酸的效果变差。
第二方面，本申请提供一种腐殖酸吸附剂的制备方法，采用以下技术方案：
一种腐殖酸吸附剂的制备方法，取盐酸胍和蛋白质复合物混合，加水搅拌至混合均匀，得到腐殖酸吸附剂。
通过上述制备方法具有工艺简单、操作方便，适合工业化生产的优势，且能让盐酸胍与蛋白质复合物充分混合，有利于提高蛋白质复合物的稳定性，
一种土壤DNA提取试剂盒，包括研磨管、裂解液、Buffer PS、腐殖酸吸附剂、磁珠、Buffer GDP、乙醇溶液和洗脱液。
研磨管，其主要组分为直径0.05-4mm的玻璃珠及氧化锆珠混合物。配制方法：将<0.1mm、0.2-0.6mm、3.5-4mm等多种不同直径的研磨珠按一定重量比例混合至样品管中。
裂解液包括Buffer SOL和Buffer SDS；Buffer SOL主要组分包括：0.05-0.25mol/L磷酸二氢钠、0.2-2mol/L氯化钠、0.01-0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠。配制方法：分别称量磷酸氢钠17.5-89.5g、氯化钠11.7-116.8g和乙二胺四乙酸二钠3.7-37g，加纯水搅拌至完全溶解，采用5M NaOH溶液调pH至8.0，加入纯水定容至1L。
Buffer SDS主要组分包括：10-20％十二烷基硫酸钠。配制方法：称量十二烷基硫酸钠100-200g，加纯水搅拌至完全溶解，加入纯水定容至1L。
Buffer PS，其主要组分包括：乙酸钾1～4mol/L，盐酸8-20％(v/v)。配制方法：称量乙酸钾98-392g，加纯水搅拌至完全溶解，加入盐酸80-200ml，再加入纯水定容至1L。
磁珠为表面覆盖二氧化硅的磁珠，如我司市售MagPure Particle B磁珠。
Buffer GDP主要组分包括：4-6mol/L异硫氰酸胍、0.1-0.5mol/L乙酸钠。配制方法：称量异硫氰酸胍472-709g和乙酸钠13.6-68g，加纯水搅拌至完全溶解，加入乙酸调pH至4.0-6.0，加入纯水定容至1L。
乙醇溶液为乙醇水溶液，例如75％乙醇。
洗脱液，其主要组分包括Tris·HCl。配制方法：称量Tris 1.2g，加纯水搅拌至完全溶解，加入盐酸调pH至8.5，加入纯水定容至1L。
第三方面，本申请提供一种土壤DNA提取试剂盒的提取方法，采用以下技术方案：
一种土壤DNA提取试剂盒的提取方法，包括以下步骤：
步骤1，土壤样品经裂解液裂解，接着70-90℃水浴，离心，得到第一上清液；
步骤2，接着取第一上清液与Buffer PS混合，涡旋混匀，
步骤3，加入腐殖酸吸附剂混合，涡旋混匀，离心，得到第二上清液；
步骤4，再取第二上清液加入Buffer GDP和磁珠涡旋混和均匀，静置，弃掉溶液，得到DNA复合磁珠；
步骤5，DNA复合磁珠依次经Buffer GDP、乙醇水溶液洗涤；
步骤6，再经洗脱或重悬溶解DNA复合磁珠上的DNA，得到DNA提取液。
土壤样品裂解液处理后，DNA/RNA从细胞内、细胞器以及蛋白复合体(核糖体、核小体)中释放到试剂中，得到第一上清液，接着经Buffer PS和腐殖酸吸附剂共同吸附腐殖酸等抑制因子，离心去除吸附沉淀，加入Buffer GDP和磁珠后，Buffer GDP能促进DNA/RNA与磁珠结合，DNA/RNA被吸附至磁珠表面，而大部分蛋白质以及其他杂质则不被吸附，在磁场的作用下，磁珠被分离收集，蛋白质及其他杂质随废液去除，经Buffer GDP和经乙醇溶液洗涤去除盐分及其他残余杂质，用灭菌水或TE Buffer进行重悬使DNA从磁珠表面脱落，或采用洗脱液洗脱使DNA从磁珠表面脱落，得到的DNA回收率和纯度高，可直接用于PCR、病毒检测等实验。
具体地，步骤1中，土壤样品的质量与Buffer SOL的体积之比为5g：0.8-1ml，土壤样品的质量与Buffer SDS的体积之比为5g:80-100μl。
步骤2中，土壤样品的质量与Buffer SDS的体积之比为5g：150-250μl。
步骤3中，土壤样品的质量与腐殖酸吸附剂的体积之比为5g：100-200μl。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请创新地合成了蛋白质复合物，硫酸铝铵与大豆蛋白粉之间吸附结合，生成的蛋白质复合物对腐殖酸具有较强的吸附作用，但对核酸的吸附能力大幅度减弱，因此蛋白质复合物作为土壤DMA提取过程中的腐殖酸吸附剂使用，尤其针对腐殖酸含量较高的土壤，能选择性吸附土壤样品中的腐殖酸等抑制因子，有利于提取DNA的纯度和得率。
2、通过土壤DNA提取试剂盒中各试剂按照一定顺序进行提取操作，能有效去除土壤中的其他杂质，同时充分提取DNA，减少杂质去除过程中DNA损失，得到的DNA可直接用于PCR、病毒检测等实验。
附图说明
图1中，1为60％参照溶液的泳道，2、3为采用水获得的提取液的的泳道，4、5为采用实施例1获得的提取液的泳道，6、7为采用实施例3获得的提取液的泳道，8、9为采用实施例4获得的提取液的泳道，10为80％参照溶液的泳道。
图2中，1为60％参照溶液的泳道，2为采用水获得的提取液的的泳道，3、4、5为采用实施例3获得的提取液的泳道，6为采用对比例1获得的提取液的泳道，7为采用对比例2获得的提取液的泳道，8为采用对比例3获得的提取液的泳道，9为采用对比例4获得的提取液的泳道，10为80％参照溶液的泳道。
图3中，1为采用水获得的提取液的的泳道，2、3为采用实施例5获得的提取液的泳道，4、5为采用实施例6获得的提取液的泳道，6为80％参照溶液的泳道。
图4中，1为60％参照溶液的泳道，2、3为采用水获得的提取液的的泳道，4、5为采用实施例5获得的提取液的泳道，6、7为采用实施例6获得的提取液的泳道，8为80％参照溶液的泳道。
图5中，从左往右数，第1、2管为采用水获得的DNA提取液，第3、4管为实施例5获得的DNA提取液，第5、6管为采用传统腐殖酸吸附剂获得的提取液。
图6中，1为80％参照溶液的泳道，2、3为采用水获得的提取液的的泳道，4、5为采用实施例5获得的提取液的泳道，6、7为采用传统腐殖酸吸附剂获得的提取液的泳道。
具体实施方式
实施例1
一种腐殖酸吸附剂，主要由蛋白质复合物、盐酸胍和水组成。
其中，蛋白质复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，配制溶液：取250g大豆蛋白粉和136g硫酸铝铵混合，加纯水完全溶解并定容至1L，得到混合溶液；
步骤2，收集沉淀：取上述混合溶液，边搅拌边加入16g氢氧化钠，再搅拌30min，3000rpm离心2分钟收集沉淀，用纯水清洗2次，再3000rpm离心2分钟收集沉淀，得到蛋白质复合物。
一种腐殖酸吸附剂的制备方法，取130g蛋白质复合物，加入盐酸胍1mol(95.5g)，接着加纯水定容至1L。
实施例2
一种腐殖酸吸附剂，与实施例1的区别在于：蛋白质复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，配制溶液：取750g大豆蛋白粉和45g硫酸铝铵混合，加纯水完全溶解定容至1L，得到混合溶液；
步骤2，收集沉淀：取上述混合溶液，边搅拌边加入24g氢氧化钠，再搅拌30min，3000rpm离心2分钟收集沉淀，用纯水清洗2次，再3000rpm离心2分钟收集沉淀，得到蛋白质复合物。
一种腐殖酸吸附剂的制备方法，取130g蛋白质复合物，加入盐酸胍296.5g，加纯水定容至1L。
实施例3
一种腐殖酸吸附剂，与实施例1的区别在于：盐酸胍加入2mol(191.06g)。
实验4
一种腐殖酸吸附剂，与实施例1的区别在于：盐酸胍加入3mol(286.5g)。
实施例5
一种腐殖酸吸附剂，与实施例3的区别在于：大豆蛋白粉的加入量为380g。
实施例6
一种腐殖酸吸附剂，与实施例3的区别在于：大豆蛋白粉的加入量为500g。
对比例1
一种腐殖酸吸附剂，与实施例3的区别在于：蛋白质复合物制备过程中，不添加大豆蛋白粉。
对比例2
一种腐殖酸吸附剂，与实施例3的区别在于：蛋白质复合物制备过程中，不添加大豆蛋白粉，盐酸胍加入3mol。
对比例3
一种腐殖酸吸附剂，与实施例3的区别在于：蛋白质复合物制备过程中，不添加大豆蛋白粉，盐酸胍加入4mol。
对比例4
一种腐殖酸吸附剂，与实施例3的区别在于：蛋白质复合物制备过程中，不添加大豆蛋白粉，盐酸胍加入6mol。
应用例1
一种土壤DNA提取试剂盒，包括研磨管、裂解液、Buffer PS、腐殖酸吸附剂、磁珠、Buffer GDP、75％乙醇、洗脱液。
研磨管的配制方法如下：将<0.1mm、0.2-0.6mm、3.5-4mm多种不同直径的研磨珠按1:1:1混合至样品管中。
裂解液包括Buffer SOL、Buffer SDS，Buffer SOL主要组分包括：0.05-0.25mol/L磷酸二氢钠、0.2-2mol/L氯化钠、0.01-0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠。以下实验采用的Buffer SOL的配制方法如下：分别称量磷酸二氢钠17.5g、氯化钠11.7g和乙二胺四乙酸二钠3.7g，加纯水搅拌至完全溶解，采用5M NaOH溶液调pH至8.0，并加入纯水定容至1L。
Buffer SDS为质量百分比为10-20％十二烷基硫酸钠水溶液，以下实验采用质量百分比为15％的室温十二烷基硫酸钠水溶液，配制方法如下：称量十二烷基硫酸钠150g，加纯水搅拌至完全溶解，接着加入纯水定容至1L。
Buffer PS为1～4mol/L的乙酸钾，8-20％盐酸(v/v)。以下实验采用2mol/L的乙酸钾，12％盐酸(v/v)，配制方法：称量乙酸钾196g，加纯水搅拌至完全溶解，加入盐酸120ml，再加入纯水定容至1L。
磁珠，为表面覆盖二氧化硅的磁珠，本申请我司市售单分散二氧化硅磁珠(MagPure Particles B)。
Buffer GDP主要组分为：4-6mol/L异硫氰酸胍、0.1-0.5mol/L乙酸钠。以下实验的Buffer GDP采用5mol/L异硫氰酸胍、0.3mol/L乙酸钠，配制方法为：称量异硫氰酸胍590.8g和乙酸钠40.824g，加纯水搅拌至完全溶解，调pH至5，加入纯水定容至1L。
洗脱液主要组分为：Tris·HCl。以下实验的的洗脱液采用10mmol Tris·HCl，配制方法为：称量Tris 1.2g，加纯水搅拌至完全溶解，加入盐酸调pH至8.5，加入纯水定容至1L。
实验1
DL2000 marker吸附性测试
测试样品：20ul DL2000 marker(市售，捷瑞)+30ul灭菌水。
测试对象：实施例1-6和对比例1-4的腐殖酸吸附剂以及灭菌水。
测试的实验步骤如下：
步骤1，在2ml研磨管中，加入测试样品和0.8ml Buffer SOL，涡旋混合10分钟，再加入80μl Buffer SDS至样品中，涡旋0.8min，混合均匀，70℃水浴8min，12,000xg离心1min，转移上清液至1.5mL离心管中，得到第一上清液；
步骤2，加入150μl Buffer PS至第一上清液中,涡旋15s，混合均匀。
步骤3，取步骤2得到混合液，加入100ul腐殖酸吸附剂，涡旋混匀15s，12,000xg离心5min，转移上清液至新的2ml离心管，得到第二上清液。
步骤4，接着将25μl单分散二氧化硅磁珠(MagPure Particles B)和第二上清液等倍体积的Buffer GDP加入2ml离心管中，与第二上清液一起涡旋15秒，混合均匀，室温静置5min，再重复一次，将DNA复合磁珠转移至磁力架上吸附2min，倒弃溶液，得到DNA复合磁珠，再次加入450μl Buffer GDP，涡旋12s重悬磁珠，转移至磁力架上吸附0.5min，倒弃溶液；
步骤5，加入850μl 75％乙醇，涡旋15s重悬磁珠，转移至磁力架上吸附0.5min，倒弃溶液，重复操作一次；
步骤6，离心收集离心管管壁上液滴，转移至磁力架上，倒弃残液，步骤7，对DNA复合磁珠空气干燥15min，接着加入50μl洗脱液，涡旋打散磁珠，55℃振荡温育10min使DNA复合磁珠上的DNA溶解，转移至磁力架上吸附1.5min，收集溶液，把溶液转移至新的离心管中，得到DNA提取液。
步骤3中，腐殖酸吸附剂分别取各实施例以及对比例制备的腐殖酸吸附剂进行测试，作为实验组，并采用水替代腐殖酸吸附剂加入作为空白对照组。
并进行以下测试：1-1、参照溶液设置：理论上10ul DNA提取液中含4ul DL2000marker，设置60％参照溶液由2.4μl(即4ul*60％)DL2000和7.6μl水组成，80％参照溶液由3.2μl(即4ul*80％)DL2000和6.8μl水组成。
取60％参照溶液、80％参照溶液以及10ul本实验采用实施例1、3-4的腐殖酸吸附剂、水提取后的DNA提取液跑电泳，得到电泳图图1。
取60％参照溶液、80％参照溶液以及10ul本实验采用实施例3、对比例1-4、水提取后的DNA提取液跑电泳，得到电泳图图2。
取80％参照溶液以及10ul本实验采用实施例5-6、水提取后的DNA提取液跑电泳，得到电泳图图3。
1-2、取2ul提取后的DNA，用紫外分光光度计进行测试OD值。
实验1-2结果详见表1。
表1
Figure BDA0003895757950000081
表1中DL2000 marker的各项数值为没有经过提取处理前的DL2000 marker测试结果，对比表1中各实施例以及对比例的数据，水作为空白对照组，本身不具有吸附核酸的效果，添加有大豆蛋白粉的实施例1测出的核酸浓度相较于不添加大豆蛋白粉的对比例1-4的明显较高，表明添加大豆蛋白粉是降低腐殖酸吸附剂吸附核酸的关键。
实施例1、3、4分别加入1M、2M、3M浓度的盐酸胍，实施例3的核酸浓度最高，证明腐殖酸吸附剂中，盐酸胍浓度会影响蛋白质复合物的稳定性，从而影响蛋白质复合物选择性吸收效果，盐酸胍浓度为2M浓度时，回收核酸的效果最好。
实验2
腐殖酸吸附性测试
测试样品：20ul DL2000 marker(市售，捷瑞)+20ul腐殖酸+10ul灭菌水。
测试对象：实施例5-6和灭菌水。
测试方法：采用腐殖酸吸附性的测试样品代替实验1DL2000 marker吸附性测试的测试样品，其余按照实验1的“测试的实验步骤”进行DNA提取。实验结果见表2。
进行以下测试：
2-1、60％参照溶液和80％参照溶液与DL2000 marker吸附性测试实验中的一样。
取60％参照溶液、80％参照溶液以及10ul本实验采用实施例5-6、水提取后的DNA提取液跑电泳，得到电泳图图4。
2-2、取2ul提取后的DNA，用紫外分光光度计进行测试OD值，实验结果见表2。
表2
Figure BDA0003895757950000091
由表2的数据结合图4可以看出，DNA提取过程中，用水代替腐殖酸吸附剂，测得的A260/280的值与理想值A260/280比值1.8相比明显偏低，结合图4可以看出核酸存在降解现象。当加入实施例5或者实施例6的腐殖酸吸附剂，能吸附上述腐殖酸样品中的大部分颜色，且实施例6制备的腐殖酸吸附剂吸附的核酸产量较高，且核酸回收的产量达到80％左右。
实验3
土壤DNA吸附性测试测试样品：0.5ul土壤样品，土壤来源：广州市玉树工业园，花坛下5cm左右的土壤。
测试对象：水、实施例5腐殖酸吸附剂、传统腐殖酸吸附剂作腐殖酸吸附剂。
传统腐殖酸吸附剂的制作方法如下：
步骤1，配制溶液：取136g硫酸铝铵混合，加纯水完全溶解并定容至1L，得到硫酸铝铵溶液；
步骤2，收集沉淀：取硫酸铝铵溶液，边搅拌边加入16g氢氧化钠，再搅拌30min，3000rpm离心2分钟收集沉淀，得到氢氧化铝絮状沉淀。
测试方法：采用实验3的测试样品替代实验1的测试样品，其余按照实验3的“测试的实验步骤”进行DNA提取。
并进行以下检测：3-1、80％参照溶液与DL2000 marker吸附性测试实验中的一样。
取80％参照溶液以及10ul本实验采用实施例5、水、传统腐殖酸吸附剂作腐殖酸吸附剂提取后的DNA提取液跑电泳，得到电泳图图6。
3-2、取2ul提取后的DNA提取液，用紫外分光光度计进行测试OD值，实验结果见表3。
3-3、步骤3中，分别添加水、实施例5的腐殖酸吸附剂、传统腐殖酸吸附剂后的上清对比图详见图5。
表3
Figure BDA0003895757950000101
从表3的数据可以看出，土壤DNA提取过程中，仅加入水，不加入腐殖酸吸附剂，与A260/280理想值1.8相比，仅加入水测得的A260/280值偏低，证明该实验提取得到的核酸杂质较多，纯度偏低。实施例5制备的腐殖酸吸附剂加入后，核酸浓度和产量与仅加入水的较为接近，证明本申请制备的腐殖酸吸附剂对土壤中核酸的吸附较低，且实施例5的A260/A280的值与A260/280的理想值1.8较为接近，实施例5提取的核酸纯度较高，传统吸附剂对核酸的吸附能力较强，导致核酸产量出现明显降低的情况，而且提取得到的核酸纯度也偏低。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种腐殖酸吸附剂，其特征在于：由蛋白质复合物、盐酸胍和水组成；其中，每1L腐殖酸吸附剂中，所述蛋白质复合物的添加量为130-400g，所述盐酸胍添加量为1-3mol，所述蛋白质复合物由以下质量份数的组分制成：植物蛋白粉250-750份、硫酸铝铵45-136份、氢氧化钠16-24份和水1000份。
2.根据权利要求1所述的一种腐殖酸吸附剂，其特征在于：所述植物蛋白粉为大豆蛋白粉。
3.根据权利要求1所述的一种腐殖酸吸附剂，其特征在于：所述蛋白质复合物的制备方法，所述蛋白质复合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，配制溶液：取植物蛋白粉和硫酸铝铵混合，加水完全溶解，得到混合溶液；
步骤2，收集沉淀：在混合溶液中加入碱金属氢氧化物，搅拌，离心，取沉淀洗涤，得到蛋白质复合物。
4.根据权利要求2所述的一种腐殖酸吸附剂，其特征在于：所述步骤2中，搅拌时间至少30min。
5.根据权利要求1-4任一所述的一种腐殖酸吸附剂，其特征在于：所述腐殖酸吸附剂中，盐酸胍的浓度为2-3mol/L。
6.一种如权利要求1-5任一所述的腐殖酸吸附剂的制备方法，其特征在于：取盐酸胍和蛋白质复合物混合，加水搅拌至混合均匀，得到腐殖酸吸附剂。
7.一种土壤DNA提取试剂盒，其特征在于：包括研磨管、裂解液、Buffer PS、权利要求1-5任一所述的腐殖酸吸附剂、磁珠、Buffer GDP、乙醇溶液和洗脱液。
8.根据权利要求7所述的一种土壤DNA提取试剂盒，其特征在于：裂解液包括BufferSOL和Buffer SDS；
所述研磨管的主要组分为直径0.05-4mm的玻璃珠及氧化锆珠混合物；
所述Buffer SOL主要组分为0.05-0.25mol/L磷酸二氢钠、0.2-2mol/L氯化钠、0.01-0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠；
所述Buffer SDS主要组分为10-20%十二烷基硫酸钠；
所述Buffer PS主要组分为乙酸钾1~4mol/L，盐酸8-20%（v/v）；
所述磁珠为表面覆盖二氧化硅的磁珠；
所述Buffer GDP主要组分为4-6mol/L异硫氰酸胍、0.1-0.5mol/L乙酸钠；
所述乙醇溶液为乙醇水溶液；
所述洗脱液的主要组分为Tris•HCl溶液。
9.一种土壤DNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1，土壤样品经裂解液裂解，接着70-90℃水浴，离心，得到第一上清液；
步骤2，接着取第一上清液与Buffer PS混合，涡旋混匀，
步骤3，加入权利要求1-5任一所述的腐殖酸吸附剂混合，涡旋混匀，离心，得到第二上清液；
步骤4，再取第二上清液加入Buffer GDP和磁珠涡旋混和均匀，静置，弃掉溶液，得到DNA复合磁珠；
步骤5，DNA复合磁珠依次经Buffer GDP、乙醇水溶液洗涤；
步骤6，再经洗脱或重悬溶解DNA复合磁珠上的DNA，得到DNA提取液。
10.根据权利要求9所述的一种土壤DNA提取试剂盒的提取方法，其特征在于：土壤样品的质量与腐殖酸吸附剂的体积之比为5g：100-200µl。
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