CN104293770A - 一种快速提取土壤微生物rna的试剂盒及方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法。本发明的快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法，先利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，利用RNA吸附柱对土壤微生物RNA进行吸附，从而节省了大量的提取时间，本发明方法所用时间短，步骤少，保持RNA的完整性，且更加地方便、快捷。

Description

一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法。

背景技术

土壤中的微生物种类繁多，数量极大，一克肥沃土壤中通常含有几亿到几十亿个微生物，贫瘠土壤每克也含有几百万至几千万个微生物，一般说来，土壤越肥沃，微生物种类和数量越多。另外，土壤表层或耕作层中及植物根附近微生物数量也较多。土壤中的渐生物主要有细菌、真菌、放线菌、藻类和原生动物。土壤中的微生物以细菌数量最多，细菌占土壤微生物总量的70％～90％，而且种类多。

在土壤微生物研究中，过去的研究主要集中在土壤微生物DNA的提取以及其下游反应，土壤微生物DNA的提取可以适用于所有微生物的研究，然而却无法检测到当前有活性的微生物状态，基于土壤微生物RNA的分析能更好地描述种群的代谢活性。提取纯度高河完整性好的RNA是研究微生物表达组学的重要前提。目前国内外已经有很多专门用于土壤微生物RNA提取的方法，主要分成两类，一类是依据特殊的溶液来提取RNA，另一类是根据离心柱，然而这些试剂盒大多价格较为昂贵，且需要多次试验才能成功提取到土壤微生物RNA，这给小实验室进行土壤微生物RNA研究带来很大的经济负担。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种能高效、快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种快速提取土壤微生物RNA的方法，包括如下步骤：

土壤样品的前处理：取0.1-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-200μl BufferA，300-900μl无菌水，300-600μl Buffer B，涡旋震荡30-60s，加入50-200μl BufferC，100-300μl Buffer D，涡旋震荡30-60s，8000-10000g离心1-5min，去上清得沉淀A；

所述Buffer A为pH为5-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al³⁺离子的溶液；

所述Buffer C为包含2-6M的OH^-离子的溶液；

所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-0.5M的Tris-Cl缓冲液；

土壤微生物RNA的提取：所述沉淀A加入200-400μl Buffer D，0.1-1g的0.5-1mm玻璃珠，200-400μl Buffer E，200-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，4℃温度条件下10000-12000g离心2-5min，取500-800ul上清液至1.5ml离心管，加入500-800μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30-60s，4℃温度条件下14000-16000g离心1-5min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G混匀后得样品，将样品加到RNA吸附柱上，14000-16000g离心1-5min，去掉液体，加入500-600ul去蛋白液，14000-16000g离心1-5min，去掉液体，加入500-600ul漂洗液，14000-16000g离心1min，去掉液体，再加入500-600ul漂洗液，14000-16000g离心1-5min，去掉液体，吹干后加入30-50ul洗脱液，14000-16000g离心2-5min，收集液体得RNA溶液；

所述Buffer E为10-20％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-9.0，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为50-80％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6-7的包含4-6M盐酸胍，10-30 mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为30-50％；

所述漂洗液为pH为7-8的包含10-30mM NaCL，1-3mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80-90％；

所述洗脱液为pH为6-7的5-15mM Tris-HCI溶液。

本发明的另一技术方案为提供一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、BufferF、Buffer G、去蛋白液、漂洗液和洗脱液；

所述Buffer A为pH为5-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.1-0.5M的Al₂(SO₄)₃溶液；

所述Buffer C为2-6M的NaOH溶液；

所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-0.5M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer E为10-20％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-9.0，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为50-80％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6-7的包含4-6M盐酸胍，10-30 mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为30-50％；

所述漂洗液为pH为7-8的包含10-30mM NaCL，1-3mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80-90％；

所述洗脱液为pH为6-7的5-15mM Tris-HCI溶液。

本发明的有益效果在于：本发明的快速提取土壤微生物RNA的试剂盒及方法，先利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，利用RNA吸附柱对土壤微生物RNA进行吸附，从而节省了大量的提取时间，本发明方法所用时间短，步骤少，保持RNA的完整性，且更加地方便、快捷。

附图说明

图1为利用本发明具体实施方式的方法对3种不同作物土壤的微生物RNA提取结果图；

其中泳道1，2，3分别代表水稻土壤微生物RNA、玉米土壤微生物RNA、甘蔗土壤微生物RNA。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：本发明是利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，极大地减少了提取土壤微生物RNA的操作时间和土壤微生物的流失，更加地方便、快捷的提取土壤微生物RNA。

实施例1

一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，具体步骤如下：

(1)原料：新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤。

(2)土壤样品的前处理：用天平称取0.1-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-200μl Buffer A，300-600μl无菌水，300-600μl Buffer B，涡旋震荡30-60s；加入50-200μl Buffer C，100-500μl Buffer D，涡旋震荡30-60s；8000-10000g离心1-5min，去上清。前处理主要是去除腐殖质等土壤杂质，防治杂质对下游实验的影响。

(3)土壤微生物RNA的提取：加入200-400μl Buffer D，0.1-1g 0.5-1mm玻璃珠，200-400μl Buffer E，200-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，，4℃10000-12000g离心2-5min。吸取500-800ul上清至1.5ml离心管，加入500-800μl酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，涡旋震荡30-60s，4℃14000-16000g离心1-5min。将上清转移至1.5ml离心管，加入等体积的Buffer G，混匀后将样品加到RNA吸附柱上，14000-16000g离心1-5min，倒掉液体，加入500-600ul去蛋白液，14000-16000g离心1-5min，倒掉液体，加入500-600ul漂洗液，14000-16000g离心1min，倒掉液体，再加入500-600ul漂洗液，14000-16000g离心1-5min，倒掉液体，吹干后加入30-50ul洗脱液，14000-16000g离心2-5min，收集液体。用琼脂糖凝胶电泳检测成功。

加入酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)的目的是为了初步去除蛋白等大分子杂质，让核酸溶于水相，便于提取。RNA吸附柱可以特异性吸附RNA，土壤微生物RNA被吸附柱吸附，便于提取和纯化。加入去蛋白液的目的是为了进一步去除残留的蛋白杂质。漂洗液漂洗两次是为了去除其他残留的杂质，以便获得更纯的RNA.其中所述RNA吸附柱为硅胶膜RNA吸附柱，购自北京天恩泽公司。

Buffer A溶液的配置：0.5-2M Tris-Cl(pH＝5-6)；

所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al3+离子的溶液；

所述Buffer C为包含2-6M的OH^-离子的溶液；所述Buffer B可为Al₂(SO₄)₃与所述Buffer C可为NaOH，他们反应生成氢氧化铝吸附杂质；直接加入氢氧化铝的话，因为氢氧化铝是固状胶体，其与土壤反映不充分。先加入Al₂(SO₄)₃溶液，并将其与土壤溶液混匀，再加入氢氧化钠溶液后与其反映，能更加充分地吸附土壤中的杂质；

Buffer D溶液的配置：0.1-0.5M Tris-Cl(pH＝7-9)，其作用为偏碱性缓冲液使核酸更容易从细胞中游离出来；

Buffer E溶液的配置：10-20％SDS，其作用为破碎细胞壁；

Buffer F溶液的配置：称取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入适当体积的双蒸水溶解并调节pH＝7.0-9.0，定容至100ml；

Buffer G：50-80％重量比乙醇，其作用为沉淀剂、沉淀核酸RNA；

去蛋白液溶液配制：4-6M盐酸胍，10-30 mM Tris-HCI，pH＝6-7，使用前加入乙醇，乙醇浓度为30-50％，其作用为进一步去除残留的蛋白杂质；

漂洗液溶液配制：10-30mM NaCL，1-3mM Tris-HCI，80-90％重量比乙醇，pH＝7-8，其作用为去除其他杂质；

洗脱液溶液配制：5-15mM Tris-HCI，pH＝8-9，其作用为将核酸RNA从吸附柱中洗脱下来。

一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，所述试剂盒包括上述试剂：BufferA、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、Buffer G、去蛋白液、漂洗液和洗脱液。

实施例2

一种快速提取土壤微生物RNA的方法，包括如下步骤：

土壤样品的前处理：取0.1g的土壤于2ml的离心管中，加入50μl Buffer A，300μl无菌水，30μl Buffer B，涡旋震荡30s，加入50μl Buffer C，100μl Buffer D，涡旋震荡30s，8000g离心1min，去上清得沉淀A；

所述Buffer A为pH为5的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.1M的Al₂(SO₄)₃溶液；

所述Buffer C为2M的NaOH溶液；

所述Buffer D为pH＝7的0.1M的Tris-Cl缓冲液；

土壤微生物RNA的提取：所述沉淀A加入200μl Buffer D，0.1g的0.5-1mm玻璃珠，200μl Buffer E，200μl Buffer F，涡旋震荡1min，4℃温度条件下10000g离心2-5min，取50ul上清液至1.5ml离心管，加入500μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30s，4℃温度条件下14000g离心1min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G混匀后得样品，将样品加到RNA吸附柱上，14000g离心1min，去掉液体，加入500ul去蛋白液，14000g离心1min，去掉液体，加入500漂洗液，14000g离心1min，去掉液体，再加入500ul漂洗液，14000g离心1min，去掉液体，吹干后加入30ul洗脱液，14000g离心2-5min，收集液体得RNA溶液，用琼脂糖凝胶电泳检测成功。

所述Buffer E为10-20％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-9.0，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为50-80％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6-7的包含4-6M盐酸胍，10-30 mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为30-50％；

所述漂洗液为pH为7-8的包含10-30mM NaCL，1-3mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80-90％；

所述洗脱液为pH为6-7的5-15mM Tris-HCI溶液。

本实施例还公开了一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，所述试剂盒包括上述试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、BufferG、去蛋白液、漂洗液和洗脱液。

实施例3

一种快速提取土壤微生物RNA的方法，具体步骤如下：

(1)原料：新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤。

(2)土壤样品的前处理：用天平分别称取不同的土壤样品0.5g于2ml的离心管中，每个样品3个重复，加入100μl Buffer A，690μl无菌水，210μl BufferB，涡旋震荡30s；加入100μl Buffer C，300μl Buffer D，涡旋震荡30s；8000g离心2min，去上清。

(3)土壤微生物基因RNA的提取：加入325μl Buffer D，0.5g 0.5mm玻璃珠，325μl Buffer E，325μl Buffer F，涡旋震荡1min，，4℃11000g离心2min。吸取750ul上清至1.5ml离心管，加入750μl酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，涡旋震荡30s，4℃16000g离心1min。将上清转移至1.5ml离心管，加入等体积的Buffer G，将同一个样品的3管溶液混匀后分次到RNA吸附柱上，15000g离心1min，倒掉液体，加入500ul去蛋白液，15000g离心1min，倒掉液体，加入500ul漂洗液，15000g离心1min，倒掉液体，再加入500ul漂洗液，15000g离心1min，倒掉液体，吹干后加入50ul DEPC水，15000g离心2min，收集液体。通过凝胶电泳检测。

其中所述RNA吸附柱为硅胶膜RNA吸附柱，购自北京天恩泽公司。

Buffer A溶液的配置：1M Tris-Cl(pH＝5.5)；

Buffer B溶液的配置：0.2M Al2(SO4)3；

Buffer C溶液的配置：4M NaOH；

Buffer D溶液的配置：0.1M Tris-Cl(pH＝8)；

Buffer E溶液的配置：10％SDS；

Buffer F溶液的配置：称取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入适当体积的双蒸水溶解并调节pH＝8.0，定容至100ml；

Buffer G：70％重量比乙醇；

去蛋白液溶液配制：5M盐酸胍，20 mM Tris-HCI，pH6.6，使用前加入乙醇，乙醇浓度为38％。

漂洗液溶液配制：20mM NaCL，2mM Tris-HCI，pH7.5，80％重量比乙醇

洗脱液溶液配制：10mM Tris-HCI，pH 8.5。

本实施例还公开了一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、BufferG、去蛋白液、漂洗液和洗脱液；

所述Buffer A为pH为5.5的1M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.2M的Al₂(SO₄)₃溶液；

所述Buffer C为4M的NaOH溶液；

所述Buffer D为pH＝8的0.1-0.5M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer E为10％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2.41g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为8，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为70％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6.6的包含5M盐酸胍，20mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为38％；

所述漂洗液为pH为7.5的包含20mM NaCL，2mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80％；

所述洗脱液为pH为8.5的10mM Tris-HCI溶液。

利用实施例3所述方法对新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤进行RNA提取后进行琼脂糖凝胶电泳检测，检测结果见图1，泳道1，2，3分别代表水稻土壤微生物RNA、玉米土壤微生物RNA、甘蔗土壤微生物RNA。从图中可看出本试剂盒能快速获得土壤微生物RNA。

利用实施例3所述方法对新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤进行RNA提取，土壤微生物RNA溶度和纯度见表1，RNA的溶度范围在0.31-0.39μg/μl，RNA的OD(260:280)范围在1.79-1.83，利用本发明方法能提取到高纯度的土壤微生物RNA。

表1

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (4)

1.一种快速提取土壤微生物RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

土壤样品的前处理：取0.1-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-200μl BufferA，300-900μl无菌水，300-600μl Buffer B，涡旋震荡30-60s，加入50-200μl BufferC，100-300μl Buffer D，涡旋震荡30-60s，8000-10000g离心1-5min，去上清得沉淀A；

所述Buffer A为pH为5-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al³⁺离子的溶液；

所述Buffer C为包含2-6M的OH-离子的溶液；

所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-0.5M的Tris-Cl缓冲液；

土壤微生物RNA的提取：所述沉淀A加入200-400μl Buffer D，0.1-1g的0.5-1mm玻璃珠，200-400μl Buffer E，200-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，4℃温度条件下10000-12000g离心2-5min，取500-800ul上清液至1.5ml离心管，加入500-800μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30-60s，4℃温度条件下14000-16000g离心1-5min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G混匀后得样品，将样品加到RNA吸附柱上，14000-16000g离心1-5min，去掉液体，加入500-600ul去蛋白液，14000-16000g离心1-5min，去掉液体，加入500-600ul漂洗液，14000-16000g离心1min，去掉液体，再加入500-600ul漂洗液，14000-16000g离心1-5min，去掉液体，吹干后加入30-50ul洗脱液，14000-16000g离心2-5min，收集液体得RNA溶液；

所述Buffer E为10-20％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-9.0，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为50-80％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6-7的包含4-6M盐酸胍，10-30mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为30-50％；

所述漂洗液为pH为7-8的包含10-30mM NaCL，1-3mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80-90％；

所述洗脱液为pH为6-7的5-15mM Tris-HCI溶液。

2.根据权利要求1所述的快速提取土壤微生物RNA的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

土壤样品的前处理：取0.5g的土壤于2ml的离心管中，加入100μl Buffer A，690μl无菌水，210μl Buffer B，涡旋震荡30s，加入100μl Buffer C，300μl BufferD，涡旋震荡30s，8000g离心2min，去上清得沉淀A；

所述Buffer A为pH为5.5的1M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.2M的Al₂(SO₄)₃溶液；

所述Buffer C为4M的NaOH溶液；

所述Buffer D为pH＝8的0.1M的Tris-Cl缓冲液；

土壤微生物RNA的提取：所述沉淀A加入325μl Buffer D，0.5g的0.5-1mm玻璃珠，325μl Buffer E，325μl Buffer F，涡旋震荡1min，4℃温度条件下11000g离心2min，取7500ul上清液至1.5ml离心管，加入750μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30s，4℃温度条件下16000g离心1min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G混匀后得样品，将样品加到RNA吸附柱上，12000g离心1min，去掉液体，加入500ul去蛋白液，14000g离心1min，去掉液体，加入500ul漂洗液，14000g离心1min，去掉液体，再加入500ul漂洗液，14000g离心1min，去掉液体，吹干后加入50ul洗脱液，14000g离心2min，收集液体得RNA溶液；

所述Buffer E为10％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2.41g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为8，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为70％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6.6的包含5M盐酸胍，20mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为38％；

所述漂洗液为pH为7.5的包含20mM NaCL，2mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80％；

所述洗脱液为pH为8.5的10mM Tris-HCI溶液。

3.一种快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、BufferG、去蛋白液、漂洗液和洗脱液；

所述Buffer A为pH为5-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al³⁺离子的溶液；

所述Buffer C为包含2-6M的OH-离子的溶液；

所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-0.5M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer E为10-20％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-9.0，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为50-80％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6-7的包含4-6M盐酸胍，10-30mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为30-50％；

所述漂洗液为pH为7-8的包含10-30mM NaCL，1-3mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80-90％；

所述洗脱液为pH为6-7的5-15mM Tris-HCI溶液。

4.根据权利要求3所述的快速提取土壤微生物RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、BufferE、Buffer F、Buffer G、去蛋白液、漂洗液和洗脱液；

所述Buffer A为pH为5.5的1M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer B为0.2M的Al₂(SO₄)₃溶液；

所述Buffer C为4M的NaOH溶液；

所述Buffer D为pH＝8的0.1-0.5M的Tris-Cl缓冲液；

所述Buffer E为10％的SDS溶液；

所述Buffer F的配制方法为：取2.41g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为8，定容至100ml；

所述Buffer G为溶质重量百分数为70％的乙醇溶液；

所述去蛋白液为pH为6.6的包含5M盐酸胍，20mM Tris-HCI的溶液，所述蛋白液中乙醇的重量百分数为38％；

所述漂洗液为pH为7.5的包含20mM NaCL，2mM Tris-HCI的溶液，所述漂洗液中乙醇的重量百分数为80％；

所述洗脱液为pH为8.5的10mM Tris-HCI溶液。