CN104328110A - 基于磁珠法提取土壤微生物dna的试剂盒及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法，本发明的基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法，是利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，通过磁珠吸附土壤微生物DNA，从而快速获得土壤微生物DNA。本发明方法所用时间短，步骤少，能获得纯度高的土壤微生物DNA，无需再进一步纯化即可直接进行下游实验。
Description
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法。
背景技术
土壤除了为陆生植物提供营养源和水分之外，还是植物生长，进行光合作用、能量交换的主要场所；同时也具有微生物生长繁殖所需要的一切营养物质及各种条件，是微生物良好的生活场所，有“微生物的天然培养基”之称。
土壤是微生物的主要栖息地，是自然环境中最复杂的异质体系，这决定了土壤微环境的多样化和土壤微生物的高度多样性。每克土壤含有大约107个原核生物细胞，但仅有0.1％～10％的土壤微生物是可以培养的。在微生物学研究领域中，因为99％以上的微生物都是目前未(难)被纯培养的，过去人们对微生物世界的认识基本上都集中在不到1％的微生物上。对这些未培养微生物多样性及群落功能的研究将大大扩展我们对生命的了解，包括了解生命如何耐受极端环境、新的生物能源、生命进化以及微生物与环境之间的相互作用。
微生物环境基因组学为最大限度地挖掘微生物资源带来了前所未有的机遇，已经成为国际生命科学技术研究和开发最重要的热点和前沿。为了充分认识不可培养微生物的丰富资源，结合现代分子生物学技术的发展，已建立起了许多不需要对微生物进行独立培养的新方法和新技术。如变性梯度凝胶电泳(DGGE)法是将目标基因进行PCR扩增，通过对PCR产物进行分离和鉴定分析土壤微生物群落结构的组成信息；随机扩增多态性DNA技术(RAPD)是应用不同的随机引物在非严格的条件下进行PCR扩增，通过分析PCR产物在凝胶电泳上的条带多态性来反映样品中微生物的多样性。
关于土壤宏基因组学技术的构建已有许多研究报道，主要的突破在于需要足够高质量的DNA，因此直接从土壤环境中提取和纯化DNA是其中最关键的步骤。土壤宏基因组学技术在我国土壤及环境微生物生态学方面的研究才刚起步，对这一新技术的跟踪和应用，将会有力地促进我国土壤微生物生态学研究的发展。因此，研究一种高效提取土壤宏基因组DNA的试剂盒，对于大规模开展土壤宏基因组学研究显得十分必要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种能高效、快速的基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，包括如下步骤：
土壤样品的前处理：取0.25-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-150μlBuffer A，300-900μl无菌水，300-900μl Buffer B，涡旋震荡30-60s，加入50-150μlBuffer C，200-400μl Buffer D，涡旋震荡30-60s，8000-10000g离心2-5min，去上清得沉淀A；
所述Buffer A为pH为4-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al3+离子的溶液；
所述Buffer C为为包含2-6M的OH-离子的溶液；
所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-1M的Tris-Cl缓冲液；
土壤微生物DNA的提取：所述沉淀A加入300-400μl Buffer D，0.2-1g的0.5mm玻璃珠，300-400μl Buffer E，300-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，4℃温度条件下11000-12000g离心1-3min，取500-1000ul上清液至1.5ml离心管，加入500-1000μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30-60s，4℃温度条件下13000-16000g离心1-3min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G，震荡10-30s，放置5-10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，往含有磁珠的1.5ml离心管中加入0.5-2mlBuffer H，打匀后室温静止5-10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的1.5ml离心管中加入30-60μl Buffer I，即得土壤微生物DNA溶液；
所述Buffer E为5-15％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-5g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为4-50ml异丙醇与1-3ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为10-40ml的包含10-30mM Tris，5-10mM EDTA，100-200mM Nacl的溶液与50-100ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为7-8的6-10mM Tris溶液。
本发明的另一技术方案为提供一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、BufferE、Buffer F、Buffer G、Buffer H和Buffer I；
所述Buffer A为pH为4-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al3+离子的溶液；
所述BufferC为为包含2-6M的OH-离子的溶液；
所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer E为5-15％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-5g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为4-50ml异丙醇与1-3ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为10-40ml的包含10-30mM Tris，5-10mM EDTA，100-200mM Nacl的溶液与50-100ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为7-8的6-10mM Tris溶液。
本发明的有益效果在于：本发明的基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒及方法，是利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，通过磁珠吸附土壤微生物DNA，从而快速获得土壤微生物DNA。本发明方法所用时间短，步骤少，能获得纯度高的土壤微生物DNA，无需再进一步纯化即可直接进行下游实验。
附图说明
图1为利用本发明具体实施方式的方法对4种不同土壤样品的微生物基因组DNA提取结果图；
图2为本发明具体实施方式中4种不同土壤样品的微生物基因组16s rDNA扩增结果图。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
本发明最关键的构思在于：利用氢氧化铝来去除土壤中的各种杂质，再使用玻璃珠破碎土壤微生物细胞后，通过磁珠吸附土壤微生物DNA，从而快速获得土壤微生物DNA。
实施例1
一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，具体步骤如下：
(1)原料：新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤，新鲜花生根际土壤。
(2)土壤样品的前处理：用天平称取0.25-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-150μl Buffer A，300-900μl无菌水，300-900μl Buffer B，涡旋震荡30-60s；加入50-150μl Buffer C，200-400μl Buffer D，涡旋震荡30-60s；8000-10000g离心2-5min，去上清。前处理主要是去除腐殖质等土壤杂质，防治杂质对下游实验的影响。
(3)磁珠吸附土壤微生物DNA及洗脱：加入300-400μl Buffer D，0.2-1g0.5mm玻璃珠，300-400μl Buffer E，300-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，4℃11000-12000g离心1-3min。吸取500-1000μl上清至1.5ml离心管，加入500-1000μl酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，涡旋震荡30-60s，4℃13000-16000g离心1-3min。将上清转移至1.5ml离心管，加入与上清液等体积的Buffer G。震荡10-30s。室温放置5-10min，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离。吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的离心管中加入0.5-2mlBuffer H，打匀后室温静止5-10min，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离。吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的离心管中加入30-60μl Buffer I，此溶液即为土壤微生物DNA。于1-2％琼脂糖凝胶中电泳检测。
磁珠为硅基生物磁珠，粒径为0.5-2um硅基生物磁珠就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料来吸附核酸，选用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可摆脱离心等所需的手工操作流程。不同粒径大小的磁珠，其表面积大小不一，吸附效果不一。
Buffer A溶液的配置：0.5-2M Tris-Cl(pH＝4-6)；
所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al3+离子的溶液；
所述BufferC为包含2-6M的OH-离子的溶液；所述Buffer B可为Al2(SO4)3与所述BufferC可为NaOH，他们反应生成氢氧化铝吸附杂质；直接加入氢氧化铝的话，因为氢氧化铝是固状胶体，其与土壤反映不充分。先加入Al2(SO4)3溶液，并将其与土壤溶液混匀，再加入氢氧化钠溶液后与其反映，能更加充分地吸附土壤中的杂质；
Buffer D溶液的配置：0.1-1M Tris-Cl(pH＝7-9)偏碱性缓冲液使核酸更容易从细胞中游离出来；
Buffer E溶液的配置：5-15％SDS，其作用为破碎细胞壁；
Buffer F溶液的配置：称取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-5g EDTA，加入适当体积的双蒸水溶解并调节pH＝7.0-8.0，定容至100ml；
Buffer G溶液的配置：4-50ml异丙醇，1-3ml磁珠混悬液。(其中磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置)，结合液：其作用为使核酸与磁珠结合；
Buffer H溶液的配置：10-30mmol/L Tris，5-10mmol/L EDTA，100-200mmol/LNacl的溶液10-40ml与50-100ml的无水乙醇混合配置而成。其作用为洗涤杂质；
Buffer I溶液的配置：6-10mmol/L Tris，PH＝7.0-8.0，其作用为把核酸从磁珠中洗脱下来；
本实施例还公开了一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒，所述试剂盒包括上述方法中的试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、Buffer G、Buffer H和Buffer I。
实施例2
一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，具体步骤如下：
原料：新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤，新鲜花生根际土壤。
土壤样品的前处理：取0.25-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-150μlBuffer A，300-900μl无菌水，300-900μl Buffer B，涡旋震荡30-60s，加入50-150μlBuffer C，200-400μl Buffer D，涡旋震荡30-60s，8000-10000g离心2-5min，去上清得沉淀A；
所述Buffer A为pH为4-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.1-1M的Al2(SO4)3溶液；
所述Buffer C为2-5M的NaOH溶液；
所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-1M的Tris-Cl缓冲液；
土壤微生物DNA的提取：所述沉淀A加入300-400μl Buffer D，0.2-1g的0.5mm玻璃珠，300-400μl Buffer E，300-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，4℃温度条件下11000-12000g离心1-3min，取500-1000ul上清液至1.5ml离心管，加入500-1000μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30-60s，4℃温度条件下13000-16000g离心1-3min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G，震荡10-30s，放置5-10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，往含有磁珠的1.5ml离心管中加入0.5-2mlBuffer H，打匀后室温静止5-10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的1.5ml离心管中加入30-60μl Buffer I，即得土壤微生物DNA溶液；
所述Buffer E为5-15％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-5g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为4-50ml异丙醇与1-3ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为10-40ml的包含10-30mM Tris，5-10mM EDTA，100-200mM Nacl的溶液与50-100ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为7-8的6-10mM Tris溶液。
本实施例还公开了一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒，所述试剂盒包括上述方法中的试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、Buffer G、Buffer H和Buffer I。
实施例3
本发明提供一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，该方法能通过磁珠吸附土壤微生物DNA，从而快速获得土壤微生物DNA，利用该方法能够有效地从土壤中提取出微生物DNA。具体步骤如下：
(1)原料：新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤，新鲜花生根际土壤。
(2)土壤样品的前处理：用天平称取0.5g的土壤于2ml的离心管中，加入100μl Buffer A，600μl无菌水，300μl Buffer B，涡旋震荡30s；加入100μl BufferC，300μl Buffer D，涡旋震荡30s；8000g离心2min，去上清。
(3)磁珠吸附土壤微生物DNA及洗脱：加入325μl Buffer D，0.5g 0.5mm玻璃珠，325μl Buffer E，325μl Buffer F，涡旋震荡1min，，4℃11000g离心2min。吸取750μl上清至1.5ml离心管，加入750μl酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，涡旋震荡30s，4℃16000g离心1min。将上清转移至1.5ml离心管，加入等体积的Buffer G。震荡10s。室温放置5min，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离。吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的离心管中加入1mlBuffer H，打匀后室温静止8min，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离。吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的离心管中加入50μl Buffer I，此溶液即为土壤微生物DNA。于1％琼脂糖凝胶中电泳检测。
(4)扩增土壤微生物16sr DNA基因：通过PCR的方式进行土壤微生物16srDNA基因的扩增，PCR扩增体系如下：rTaq酶0.3μl，PCR buffer 2.5μl，DNTP1μl，引物R 1μl，引物F 1μl，土壤微生物基因组DNA 1μl，灭菌水18.2μl。PCR扩增程序如下：95℃ 5min；95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 30s，35个循环；72℃ 5min。将扩增得到的产物用1％琼脂糖凝胶中电泳检测。
磁珠为硅基生物磁珠，粒径为1um
Buffer A溶液的配置：1M Tris-Cl(pH＝5.5)
Buffer B溶液的配置：0.2M Al2(SO4)3
Buffer C溶液的配置：4M NaOH
Buffer D溶液的配置：0.1M Tris-Cl(pH＝8)
Buffer E溶液的配置：325μl 10％SDS
Buffer F溶液的配置：称取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入适当体积的双蒸水溶解并调节pH＝8.0，定容至100ml
Buffer G溶液的配置：48ml异丙醇，2ml磁珠混悬液。(其中磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置)
Buffer H溶液的配置：20mmol/L Tris，8mmol/L EDTA，140mmol/L Nacl的溶液30ml与70ml的无水乙醇混合配置而成
Buffer I溶液的配置：8mmol/L Tris，PH＝8.0
本实施例还公开了一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、BufferE、Buffer F、Buffer G、Buffer H和Buffer I；
所述Buffer A为pH为5.5的1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.2M的Al2(SO4)3溶液；
所述Buffer C为4M的NaOH溶液；
所述Buffer D为pH＝8的0.1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer E为10％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506gEDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为48ml异丙醇与2ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为30ml的包含20mM Tris，8mM EDTA，140mM Nacl的溶液与70ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为8的8mM Tris溶液。
利用实施例3所述方法对新鲜水稻根际土壤，新鲜玉米根际土壤，新鲜甘蔗根际土壤，新鲜花生根际土壤进行提取土壤微生物的DNA，4种不同土壤样品的微生物基因组DNA提取结果见图1，泳道1，2，3，4分别表示新鲜水稻根际土壤微生物基因组DNA，新鲜玉米根际土壤微生物基因组DNA，新鲜甘蔗根际土壤微生物基因组DNA，新鲜花生根际土壤微生物基因组DNA。从图中可看出本方法能提取到土壤微生物基因组DNA。4种不同的土壤样品的微生物基因组的OD(260：280)值结果见表1，4种土壤微生物基因组的OD(260：280)值在1.78-1.80范围内，从表1中可看出本方法可以提取到纯度高的土壤微生物基因组DNA。
表1
| 水稻 | 玉米 | 甘蔗 | 花生 | |
| OD(260:280) | 1.79 | 1.78 | 1.78 | 1.80 |
将所获得的土壤微生物DNA进行16sr DNA基因的扩增，结果见图2，泳道1，2，3，4分别表示水稻土壤微生物基因组16s rDNA扩增结果图，玉米土壤微生物基因组16s rDNA扩增结果图，甘蔗土壤微生物基因组16s rDNA扩增结果图，花生土壤微生物基因组16s rDNA扩增结果图。从图中可看出方法提取的土壤微生物基因组DNA无需进一步纯化即可进行PCR扩增实验。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (4)
1.一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
土壤样品的前处理：取0.25-1g的土壤于2ml的离心管中，加入50-150μlBuffer A，300-900μl无菌水，300-900μl Buffer B，涡旋震荡30-60s，加入50-150μlBuffer C，200-400μl Buffer D，涡旋震荡30-60s，8000-10000g离心2-5min，去上清得沉淀A；
所述Buffer A为pH为4-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al3+离子的溶液；
所述Buffer C为包含2-6M的OH-离子的溶液；
所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-1M的Tris-Cl缓冲液；
土壤微生物DNA的提取：所述沉淀A加入300-400μl Buffer D，0.2-1g的0.5mm玻璃珠，300-400μl Buffer E，300-400μl Buffer F，涡旋震荡1-3min，4℃温度条件下11000-12000g离心1-3min，取500-1000ul上清液至1.5ml离心管，加入500-1000μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30-60s，4℃温度条件下13000-16000g离心1-3min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G，震荡10-30s，放置5-10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，往含有磁珠的1.5ml离心管中加入0.5-2mlBuffer H，打匀后室温静止5-10min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的1.5ml离心管中加入30-60μl Buffer I，即得土壤微生物DNA溶液；
所述Buffer E为5-15％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-5g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为4-50ml异丙醇与1-3ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为10-40ml的包含10-30mM Tris，5-10mM EDTA，100-200mM Nacl的溶液与50-100ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为7-8的6-10mM Tris溶液。
2.根据权利要求1所述的基于磁珠法提取土壤微生物DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：
土壤样品的前处理：取0.5g的土壤于2ml的离心管中，加入100μl Buffer A，600μl无菌水，300μl Buffer B，涡旋震荡30s，加入100μl Buffer C，300μl BufferD，涡旋震荡30s，8000g离心2min，去上清得沉淀A；
所述Buffer A为pH为5.5的1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.1-1M的Al2(SO4)3溶液；
所述Buffer C为2-5M的NaOH溶液；
所述Buffer D为pH＝8的0.1M的Tris-Cl缓冲液；
土壤微生物DNA的提取：所述沉淀A加入325μl Buffer D，0.5g的0.5mm玻璃珠，325μl Buffer E，325μl Buffer F，涡旋震荡1min，4℃温度条件下11000g离心2min，取750ul上清液至1.5ml离心管，加入750μl的酚、氯仿和异戊醇酚的混合液，所述混合液中酚、氯仿和异戊醇的体积份数比为25:24:1，涡旋震荡30s，4℃温度条件下16000g离心1min，将上清液转移至1.5ml离心管，加入上清液等体积的Buffer G，震荡10s，放置5min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠，往含有磁珠的1.5ml离心管中加入1mlBufferH，打匀后室温静止8min，将1.5ml离心管放在磁力架上，进行磁珠分离，吸去液体，保留磁珠。往含有磁珠的1.5ml离心管中加入50μl Buffer I，即得土壤微生物DNA溶液；
所述Buffer E为10％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506gEDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为48ml异丙醇与2ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为30ml的包含20mM Tris，8mM EDTA，140mM Nacl的溶液与70ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为8的8mM Tris溶液。
3.一种基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、Buffer G、Buffer H和Buffer I；
所述Buffer A为pH为4-6的0.5-2M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.1-2M为包含0.1-2M的Al3+离子的溶液；
所述Buffer C为包含2-6M的OH-离子的溶液；
所述Buffer D为pH＝7-9的0.1-1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer E为5-15％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-5g EDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为7.0-8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为4-50ml异丙醇与1-3ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为10-40ml的包含10-30mM Tris，5-10mM EDTA，100-200mM Nacl的溶液与50-100ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为7-8的6-10mM Tris溶液。
4.根据权利要求3所述的基于磁珠法提取土壤微生物DNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：Buffer A、Buffer B、Buffer C、Buffer D、Buffer E、Buffer F、Buffer G、Buffer H和Buffer I；
所述Buffer A为pH为5.5的1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer B为0.2M的Al2(SO4)3溶液；
所述Buffer C为4M的NaOH溶液；
所述Buffer D为pH＝8的0.1M的Tris-Cl缓冲液；
所述Buffer E为10％的SDS溶液；
所述Buffer F由以下方法配制而成：取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506gEDTA，加入双蒸水溶解并调节pH为8.0，定容至100ml；
所述Buffer G为48ml异丙醇与2ml磁珠混悬液的混合液，所述磁珠混悬液由磁珠和水按照1:2体积比配置而成，所述磁珠为粒径为0.5-2um的硅基生物磁珠；
所述Buffer H为30ml的包含20mM Tris，8mM EDTA，140mM Nacl的溶液与70ml的无水乙醇混合而成；
所述Buffer I为pH为8的8mM Tris溶液。
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