CN115304486A - 丹酚酸a盐水合物、其制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了丹酚酸A盐水合物、其制备方法及用途。具体地，本发明提供的丹酚酸A盐水合物是由丹酚酸A、丹酚酸A负离子、金属离子、和水分子形成的晶体，具有更高的稳定性和更好水溶性，而且具有较低的生产成本和较高的纯度。

Description

丹酚酸A盐水合物、其制备方法及用途

技术领域

本发明属于化学领域，具体地说，本发明涉及丹酚酸A盐水合物与其制备方法及用途。

背景技术

心脑血管疾病是人类健康的头号杀手。随着人们生活水平的逐渐提高，高脂、高糖、高蛋白在饮食中所占的比例逐渐增加。尤其是动物性脂肪，其在体内与胆固醇形成的以“低密度脂蛋白”为代表的一系列物质，逐渐沉积于血管内壁，引起血管堵塞、降低心脏、大脑等关键脏器的供血量，导致其氧供应不足，从而影响正常生理功能的发挥。

更严重的，因为血管狭窄、栓塞、栓塞脱落、栓塞堵塞毛细血管等导致的“缺血/再灌注”过程，会导致心肌细胞和大脑神经细胞的严重损伤，轻者会影响心脏和大脑的生理功能，引起各种心脑血管疾病，留下瘫痪、半身不遂、冠心病、心绞痛等并发症，重者可以直接导致死亡！

丹参是一种常用中药材，是全球贸易额最大的药用植物之一。丹参具有广泛的生理活性，其产品广泛的应用于药品、保健品、化妆品、功能性食品等领域。《药典》记载，丹参具有“活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈”的功效，广泛的应用于心脑血管疾病的治疗。

丹参中的主要活性成分是以丹参酮ⅡA为代表的脂溶性丹参酮类化合物，和以丹酚酸B为代表的水溶性酚酸类化合物。由于中药的用药主要以“水煎煮”的方式进行，其水溶性成分受到了更加广泛的关注。研究表明，丹酚酸A是丹参中活性最高的化合物，其具有抗炎、抗氧化、清除自由基等多种生理活性，对心脑血管疾病具有潜在的治疗作用。目前以丹参为主要活性成分的中成药，已经广泛的应用于心脑血管疾病的治疗,如：丹红注射液、复方丹参滴丸、注射用丹参多酚酸、注射用丹参多酚酸盐等。

丹酚酸A在丹参药材中含量极低，仅占0.01-0.1％左右。Kan S.等(Kan S.etc.JFood Sci 79:C499-504)的研究表明，丹参水溶性成分丹酚酸B和紫草酸，可以通过化学转化的方式生成丹酚酸A，从而增加其含量，降低其成本。CN201310487751.6公开了经过柱色谱层析、冷冻干燥的方式，制备纯度超过97％的丹酚酸A无定型冻干粉的方法。CN200810223651.1公开了制备丹酚酸A两种晶体的方法，最终产物纯度可达90％以上。CN201710055331.9公开了一种丹酚酸A结晶的制备方法，其纯度超过99.5％，稳定性显著好于丹酚酸A冻干粉，但其水溶性较差，溶解过程需要升温、超声等方式辅助，将其作为注射剂开发时存在较大劣势。并且，其制备需要以97％以上的丹酚酸A为起始物料，导致其生产成本较高，难以其作为药品大规模化商业生产的要求。

丹酚酸A无定型粉末稳定性较差，即使在室温下也很容易降解。将丹酚酸A制备成结晶，可以显著提高其稳定性。但是，由于丹酚酸A口服生物利用度非常低(口服生物利用度1.47-1.84％)(Sun,J.,et al.(2013)."Pharmacokinetic study of salvianolic acid Ain beagle dog after oral administration by a liquid chromatography-massspectrometry method:a study on bioavailability and dose proportionality."JEthnopharmacol148(2):617-623.)。考虑到心脑血管疾病发病时病人需要抢救且可能处于休克状态，静脉注射制剂是其最适宜的剂型。而由于静脉注射制剂是一种高风险剂型，需要将其制备成高纯度样品保证其安全和质量可控性，而且需要方便临床使用。

因此，本领域的技术人员致力于开发一种产物纯度高、稳定性好、水溶解性好且易于工业化生产的丹酚酸A(或以丹酚酸A为主要成分的复合物)原料，以满足其作为注射制剂原料药的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种丹酚酸A盐水合物、其制备方法及用途。

本发明的第一方面，提供了一种式I所示的丹酚酸A盐水合物，

其中，M为阳离子；0＜m≤20，0＜n≤10，0＜x≤20，0＜y≤150。

在另一优选例中，1≤m≤20，1≤n≤10，1≤x≤20，1≤y≤150。

在另一优选例中，当M为1价阳离子时，n＝x。

在另一优选例中，当M为2价阳离子时，n＝2x。

在另一优选例中，当M为3价阳离子时，n＝3x。

在另一优选例中，所述M选自下组：钠离子、钾离子、镁离子、钙离子、或铵离子。

在另一优选例中，所述式I中，M为钠离子，并且5≤m≤15，1≤n≤10，1≤x≤10，20≤y≤100。优选地，M为钠离子，并且m为11，n为5，x为5，y为56。

在另一优选例中，所述式I中，M为钾离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，1≤x≤5，1≤y≤10。优选地，M为钾离子，并且m为1，n为1，x为1，y为8。

在另一优选例中，所述式I中，M为钙离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，0.5≤x≤5，5≤y≤15。优选地，M为钙离子，并且m为1，n为1，x为0.5，y为9。

在另一优选例中，所述式I中，M为镁离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，0.5≤x≤5，5≤y≤15。优选地，M为镁离子，并且m为1，n为1，x为0.5，y为7。

在另一优选例中，所述式I中，M为铵离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，1≤x≤5，5≤y≤15。优选地，M为铵离子，并且m为2，n为2，x为2，y为11。

在另一优选例中，所述丹酚酸A盐水合物选自下组：

丹酚酸A钠盐水合物：

丹酚酸A钾盐水合物：

丹酚酸A钙盐水合物：

丹酚酸A镁盐水合物：

丹酚酸A铵盐水合物：

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的差示扫描量热法图谱(DSC)在86-96℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的差示扫描量热法图谱还在116-126℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的差示扫描量热法图谱基本如图6所示。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：16.56±0.1、17.90±0.1、19.04±0.1、25.97±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：12.00±0.1、16.18±0.1、17.07±0.1、17.54±0.1、18.87±0.1、19.89±0.1、21.04±0.1、21.57±0.1、22.66±0.1、和22.93±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：

7.12±0.1、8.49±0.1、10.72±0.1、11.39±0.1、12.00±0.1、12.26±0.1、12.74±0.1、13.68±0.1、14.03±0.1、14.28±0.1、16.18±0.1、16.56±0.1、17.07±0.1、17.54±0.1、17.90±0.1、18.87±0.1、19.04±0.1、19.57±0.1、19.89±0.1、20.15±0.1、21.04±0.1、21.57±0.1、21.89±0.1、22.30±0.1、22.66±0.1、22.93±0.1、23.68±0.1、24.29±0.1、24.71±0.1、25.04±0.1、25.62±0.1、25.97±0.1、26.44±0.1、27.19±0.1、27.63±0.1、28.16±0.1、29.56±0.1、和36.29±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物物具有基本如图4所示的X-射线粉末衍射谱图(XRPD)。

在另一优选例中，式I所示的丹酚酸A钠盐水合物通过本发明第二方面所述制备方法制备得到。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物的差示扫描量热法图谱(DSC)在95-105℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物的差示扫描量热法图谱还在142-153℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物的差示扫描量热法图谱基本如图11所示。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：18.89±0.1、24.35±0.1、24.61±0.1、和26.13±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：16.40±0.1、21.59±0.1、22.62±0.1、32.84±0.1、和36.35±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：

7.11±0.1、12.06±0.1、12.90±0.1、13.48±0.1、13.87±0.1、14.37±0.1、16.40±0.1、16.61±0.1、17.86±0.1、18.23±0.1、18.89±0.1、19.24±0.1、21.59±0.1、22.12±0.1、22.62±0.1、23.78±0.1、24.35±0.1、24.61±0.1、25.26±0.1、25.55±0.1、26.13±0.1、28.58±0.1、29.62±0.1、30.02±0.1、30.45±0.1、31.35±0.1、32.45±0.1、32.84±0.1、33.17±0.1、33.98±0.1、35.22±0.1、36.35±0.1、43.06±0.1、和44.00±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物物具有基本如图9所示的X-射线粉末衍射谱图(XRPD)。

在另一优选例中，式I所示的丹酚酸A钾盐水合物通过本发明第二方面所述制备方法制备得到。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物的差示扫描量热法图谱(DSC)在90-100℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物的差示扫描量热法图谱基本如图17所示。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：18.92±0.1、22.59±0.1、24.35±0.1、和27.49±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：16.49±0.1、21.47±0.1、23.74±0.1、25.70±0.1、和26.10±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：

6.79±0.1、7.14±0.1、8.58±0.1、10.77±0.1、11.78±0.1、12.30±0.1、12.85±0.1、13.66±0.1、14.13±0.1、14.29±0.1、16.14±0.1、16.49±0.1、17.22±0.1、17.84±0.1、18.02±0.1、18.92±0.1、19.85±0.1、20.19±0.1、21.10±0.1、21.47±0.1、21.89±0.1、22.59±0.1、22.87±0.1、23.74±0.1、24.35±0.1、24.71±0.1、25.02±0.1、25.70±0.1、26.10±0.1、26.42±0.1、27.08±0.1、27.49±0.1、28.32±0.1、29.48±0.1、30.41±0.1、30.97±0.1、31.26±0.1、32.03±0.1、32.52±0.1、33.07±0.1、33.69±0.1、34.02±0.1、34.55±0.1、36.11±0.1、38.28±0.1、40.00±0.1、40.45±0.1、41.17±0.1、41.83±0.1、43.77±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物物具有基本如图16所示的X-射线粉末衍射谱图(XRPD)。

在另一优选例中，式I所示的丹酚酸A钙盐水合物通过本发明第二方面所述制备方法制备得到。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物的差示扫描量热法图谱(DSC)在100-115℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物的差示扫描量热法图谱基本如图23所示。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：21.65±0.1、24.18±0.1、24.49±0.1、25.32±0.1、25.91±0.1、和27.89±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：16.28±0.1、17.88±0.1、19.18±0.1、22.50±0.1、和22.93±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：

6.80±0.1、7.24±0.1、8.74±0.1、10.54±0.1、11.02±0.1、11.43±0.1、11.98±0.1、12.49±0.1、12.85±0.1、13.36±0.1、13.93±0.1、14.40±0.1、16.28±0.1、16.77±0.1、17.88±0.1、18.08±0.1、18.65±0.1、18.84±0.1、19.18±0.1、19.66±0.1、20.42±0.1、21.29±0.1、21.65±0.1、21.88±0.1、22.28±0.1、22.50±0.1、22.93±0.1、23.80±0.1、24.18±0.1、24.49±0.1、24.98±0.1、25.32±0.1、25.91±0.1、26.60±0.1、27.43±0.1、27.89±0.1、28.40±0.1、28.99±0.1、29.46±0.1、30.19±0.1、30.86±0.1、31.38±0.1、32.72±0.1、33.27±0.1、33.82±0.1、34.77±0.1、35.09±0.1、36.41±0.1、38.01±0.1、40.00±0.1、和44.03±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物物具有基本如图21所示的X-射线粉末衍射谱图(XRPD)。

在另一优选例中，式I所示的丹酚酸A镁盐水合物通过本发明第二方面所述制备方法制备得到。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物的差示扫描量热法图谱(DSC)在91-101℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物的差示扫描量热法图谱(DSC)在132-142℃有特征吸热峰。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物的差示扫描量热法图谱基本如图30所示。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：14.21±0.1、18.83±0.1、21.33±0.1、24.25±0.1、24.53±0.1、和25.97±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：13.34±0.1、13.64±0.1、16.30±0.1、17.90±0.1、18.06±0.1、19.08±0.1、和21.83±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：

6.67±0.1、6.95±0.1、7.10±0.1、10.62±0.1、11.66±0.1、11.96±0.1、12.18±0.1、12.79±0.1、13.34±0.1、13.64±0.1、14.21±0.1、16.30±0.1、17.15±0.1、17.90±0.1、18.06±0.1、18.83±0.1、19.08±0.1、19.61±0.1、20.15±0.1、21.33±0.1、21.83±0.1、22.44±0.1、22.95±0.1、23.43±0.1、23.64±0.1、24.25±0.1、24.53±0.1、25.06±0.1、25.50±0.1、25.97±0.1、26.37±0.1、26.86±0.1、27.41±0.1、28.14±0.1、29.34±0.1、30.71±0.1、31.20±0.1、32.66±0.1、33.63±0.1、36.11±0.1、38.17±0.1、和43.61±0.1。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物物具有基本如图28所示的X-射线粉末衍射谱图(XRPD)。

在另一优选例中，式I所示的丹酚酸A铵盐水合物通过本发明第二方面所述制备方法制备得到。

本发明的第二方面，提供了一种丹酚酸A盐水合物晶体，所述丹酚酸A盐水合物晶体选自下组：

丹酚酸A钠盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝91.6°；

丹酚酸A钾盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝115.16°；

丹酚酸A镁盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝116.1°；

丹酚酸A钙盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝115.7°；和

丹酚酸A铵盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝96.9°。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物晶体的绝对构型为：

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物晶体的绝对构型为：

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物晶体的绝对构型为：

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物晶体的相对构型为：

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物晶体的绝对构型为：

在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为C2空间群。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钾盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为C2空间群。

在另一优选例中，所述丹酚酸A钙盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为C2空间群。

在另一优选例中，所述丹酚酸A镁盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为C2空间群。

在另一优选例中，所述丹酚酸A铵盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为P2空间群。

本发明的第三方面，提供了一种式I所示的丹酚酸A盐水合物的制备方法，所述方法包括步骤：

(1)将丹酚酸A原料溶于具有第一温度的含水溶剂中，获得丹酚酸A溶液；

(2)向步骤(1)获得的丹酚酸A溶液中加入碱性化合物，使部分丹酚酸A和碱性化合物进行成盐反应；

(3)对步骤(2)成盐反应后的溶液降温至第二温度进行析晶，从而获得所述丹酚酸A盐水合物；

其中，所述第一温度为40-80℃；所述第二温度为0-20℃。

在另一优选例中，所述第一温度为45-70℃；优选地为约50℃。

在另一优选例中，所述步骤(1)中所得丹酚酸A溶液中，丹酚酸A的质量浓度为约5％-20％；优选地为约5％-15％。

在另一优选例中，所述步骤(2)中使约5％-80％(w/w)的丹酚酸A和碱性化合物进行成盐反应；优选地，使约10％-60％(w/w)的丹酚酸A和碱性化合物进行成盐反应；更优选地，使约15％-50％(w/w)的丹酚酸A和碱性化合物进行成盐反应。

在另一优选例中，所述步骤(2)中降温速率为0.1℃/min-1℃/min；优选地降温速率为0.1℃/min-0.5℃/min；更优选地降温速率为0.1℃/min-0.3℃/min。

在另一优选例中，所述第二温度为0-20℃；优选地，所述第二温度为1-15℃；更优选地，所述第二温度为4-10℃。

在另一优选例中，所述步骤(2)中降温析晶过程中，不停搅拌。

在另一优选例中，所述步骤(2)中降温至第二温度后，析晶5-48h；优选地，析晶8-36h；更优选地，析晶12-24h。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤，对获得的所述丹酚酸A盐水合物进行真空干燥处理。优选地，真空干燥处理温度为10-30℃。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤，对获得的所述丹酚酸A盐水合物进行重结晶处理；优选地，所述重结晶步骤包括：

(a)将丹酚酸A盐水合物溶于具有第一温度的含水溶剂中，获得丹酚酸A盐溶液；

(b)对步骤(a)的溶液降温至第二温度进行析晶，从而获得所述丹酚酸A盐水合物精制品；

其中，所述第一温度为40-80℃；所述第二温度为0-20℃。

在另一优选例中，所述第一温度为45-70℃；优选地为约50℃。

在另一优选例中，所述步骤(a)中所得溶液中，丹酚酸A的质量浓度为约5％-20％；优选地为约5％-15％。

在另一优选例中，所述步骤(b)中降温速率为0.1℃/min-1℃/min；优选地降温速率为0.1℃/min-0.5℃/min；更优选地降温速率为0.1℃/min-0.3℃/min。

在另一优选例中，所述第二温度为0-20℃；优选地，所述第二温度为1-15℃；更优选地，所述第二温度为4-10℃。

在另一优选例中，所述步骤(b)中降温析晶过程中，不停搅拌。

在另一优选例中，所述步骤(b)中降温至第二温度后，析晶5-48h；优选地，析晶8-36h；更优选地，析晶12-24h。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤，对获得的所述丹酚酸A盐水合物精制品进行真空干燥处理。优选地，真空干燥处理温度为10-30℃。

在另一优选例中，所述碱性化合物选自：含钠碱性化合物、含钾碱性化合物、含钙碱性化合物、含镁碱性化合物、和含铵碱性化合。

在另一优选例中，所述含钠碱性化合物选自：氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、苹果酸钠、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、和乙酸钠。

在另一优选例中，所述含钾碱性化合物选自：氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、苹果酸钾、柠檬酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、和乙酸钾。

在另一优选例中，所述含钙碱性化合物选自：碳酸钙、碳酸氢钙、氧化钙、氢氧化钙、葡萄糖酸钙、和乙酸钙。

在另一优选例中，所述含镁碱性化合物选自：氢氧化镁、氧化镁、碳酸镁、碳酸氢镁、碱式碳酸镁、苹果酸镁、柠檬酸镁、和乙酸镁。

在另一优选例中，所述含铵碱性化合物选自：氨气、氨水、碳酸铵、和碳酸氢铵。

在另一优选例中，所述方法中，丹酚酸A原料的HPLC纯度≥70％；优选地，丹酚酸A原料的HPLC纯度≥80％；或者，丹酚酸A原料的HPLC纯度在约75％-95％之间。

在另一优选例中，所述含水溶剂中水的质量分数≥70％；优选地≥80％；更优选地≥90％。

在另一优选例中，所述含水溶剂选自：水、乙醇水溶液、丙酮水溶液等。

在另一优选例中，所述步骤(2)中，所述碱性化合物为弱酸盐，优选为强碱弱酸盐。

在另一优选例中，所述步骤(2)中，所述盐的阴离子选自：碳酸根离子、碳酸氢根离子、硅酸根离子、偏铝酸根离子、醋酸根离子等；和/或，所述盐的阳离子选自：钠离子、钾离子、镁离子、锂离子、铵离子、钙离子。

在另一优选例中，所述步骤(2)中，丹酚酸A和碱性化合物的摩尔比为1－3：3-1；优选为：1－3：1-2；最优选地为2：1。

本发明的第四方面，提供了一种本发明第一方面所述丹酚酸A盐水合物或本发明第二方面所述的丹酚酸A盐水合物晶体的用途，用于制备治疗或预防疾病的药物组合物，所述疾病选自：心脑血管疾病、免疫系统疾病、高脂血症、糖尿病并发症等。

本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，包含：

本发明第一方面所述的丹酚酸A盐水合物或本发明第二方面所述的丹酚酸A盐水合物晶体；以及药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述药物组合物由本发明第一方面所述的丹酚酸A盐水合物和药学上可接受的载体构成。

在另一优选例中，所述药物组合物为注射剂。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1是丹酚酸A钠盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图2A(不对称单位的立体结构椭球图)和图2B(单个主体分子的立体结构椭球图)是丹酚酸A钠盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图。

图3是丹酚酸A钠盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图。

图4是丹酚酸A钠盐水合物的粉末衍射图谱。

图5是丹酚酸A钠盐水合物的粉末衍射2θ值列表。

图6是丹酚酸A钠盐水合物的DSC图谱。

图7是丹酚酸A钾盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图8A是本发明得到的丹酚酸A钾盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图8B是本发明得到的丹酚酸A钾盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图9是本发明得到的丹酚酸A钾盐水合物的粉末衍射图谱

图10是本发明得到的丹酚酸A钾盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图11是本发明得到的丹酚酸A钾盐水合物的DSC图谱

图12是丹酚酸A钙盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图13A(不对称单元的立体结构椭球图)和图13B(显示钙配位情况的立体结构椭球图)是本发明得到的丹酚酸A钙盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图14是本发明得到的丹酚酸A钙盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图15是本发明得到的丹酚酸A钙盐水合物的粉末衍射图谱

图16是本发明得到的丹酚酸A钙盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图17是本发明得到的丹酚酸A钙盐水合物的DSC图谱

图18是本发明得到的丹酚酸A镁盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图19是本发明得到的丹酚酸A镁盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图20是本发明得到的丹酚酸A镁盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图21是本发明得到的丹酚酸A镁盐水合物的粉末衍射图谱

图22是本发明得到的丹酚酸A镁盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图23是本发明得到的丹酚酸A镁盐水合物的DSC图谱

图24是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图25(不对称单位的立体结构球棍图)和图26(单个主体分子的立体结构椭球图)是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图27是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图28是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的粉末衍射图谱

图29是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图30是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的DSC图谱

图31是发明实施过程中丹酚酸A粗品(A)、柱色谱后丹酚酸A样品(B)、一次结晶后丹酚酸A钠盐水合物(C)和重结晶后丹酚酸A钠盐水合物(D)的HPLC图谱(纯度以丹酚酸A计算)

图32A是本发明方法制得的丹酚酸A钠盐水合物单晶的显微照片(10×目镜+4×物镜)；图32B是根据专利文献CN201910643821.X方法制得的丹酚酸A钠盐复合物结晶性粉末的显微照片(10×目镜+4×物镜)。

具体实施方式

经过广泛而深入的研究，本发明人意外制得一种丹酚酸A、丹酚酸A负离子、金属离子(分别为钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、铵离子)、水分子组成的复合物。经过X射线单晶衍射、X射线粉末衍射、差式扫描量热法(DSC)、热重分析法(TGA)等确定了该类复合物晶体的晶型、结晶水等特性，证明了本发明制备得到的丹酚酸A盐水合物，是一种新的物质，具有新的晶型，其纯度超过99％。本发明还公开了该类新晶型的制备方法，以纯度约80％的丹酚酸A为起始原料制备本发明的丹酚酸A盐水合物，该丹酚酸A盐水合物能够应用于缺血性脑血管疾病和缺血性心血管疾病的治疗。而且该丹酚酸A盐水合物具有生产成本低、产物纯度高、稳定性好、水溶性好的特点。

在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。

除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。

虽然在本发明的实施或测试中可以使用与本发明中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处例举优选的方法和材料。

具体地，本发明制备了一种由丹酚酸A、丹酚酸A负离子、金属离子(分别为钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、铵根离子)、水分子组成的复合物(纯净物)，得到了其单晶体，并以市场上的常见阳性药物为对照，研究了该复合物对于缺血性脑血管疾病和缺血性心血管疾病的治疗作用。

与无定型丹酚酸A冻干粉对比，该系列结晶复合物具有纯度高、稳定性好、生产成本低等特点。与已报道的丹酚酸A结晶对比，该系列结晶复合物表现为单晶、且具有水溶性好、生产成本低的特点，更适用于将其开发成静脉注射制剂。与阳性药物丁苯酞氯化钠注射液、注射用丹参多酚酸、注射用丹参多酚酸盐对比，该系列结晶复合物具有显著降低脑/心肌梗死面积、显著降低模型动物死亡率、显著改善脑缺血/心肌缺血模型动物肢体功能恢复的效果。该系列结晶复合物可应用于缺血性心脏病和缺血性脑血管疾病的治疗，作为相关药物注射制剂原料药(API)使用。

可以采用如下多种方式和仪器对本发明的丹酚酸A盐水合物性质进行研究，例如采用X射线单晶衍射、X射线粉末衍射、示差扫描量热分析、热重分析法(TGA)进行分析。这些分析方法可以为本领域常规的方法。

例如X射线单晶衍射分析可以采用BrukerSMART APEX-II单晶X射线衍射仪，测试条件：CuKα辐射，石墨单色器，单导管直径Φ＝0.50mm，晶体与CCD探测器距离d＝60.3mm，管压40kV，管流30mA，扫描方式：

/ω扫描。

经X射线单晶衍射分析，获得了本发明的丹酚酸A盐水合物的单晶特征，及结构类型。

具体地，测得丹酚酸A钠盐水合物晶体的绝对构型为：

测得丹酚酸A钾盐水合物晶体的绝对构型为：

测得丹酚酸A钙盐水合物晶体的绝对构型为：

测得丹酚酸A镁盐水合物晶体的相对构型为：

测得丹酚酸A铵盐水合物晶体的绝对构型为：

测试的各丹酚酸A盐水合物晶体的晶胞参数如下：

丹酚酸A钠盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，C2空间群，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝91.6°；

丹酚酸A钾盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，C2空间群，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝115.16°；

丹酚酸A镁盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，C2空间群，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝116.1°；

丹酚酸A钙盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，C2空间群，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝115.7°；和

丹酚酸A铵盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，P2空间群，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝96.9°。

本发明所述测定晶型的X射线粉末衍射的方法在本领域中是已知的。本发明的具体检测条件可参考本发明各晶体的X射线粉末衍射图谱。结果表明，本发明的各晶体在X-射线粉末衍射(XRPD)图中具有特定的特征峰。

某一化合物能否结合溶剂成为溶剂合物或结合几分子溶剂，并没有规律可循。分子结构相同但晶型不同时，有可能具有不同的生物利用度、溶解度、溶解速率、化学物理稳定性、熔点、颜色、可滤性、密度和流动性。有些多晶型物由于形状或吸湿性而难于制成制剂。X射线粉末射线衍射谱图是晶型鉴定的必要方式，但不是唯一方式。水合物晶型，由于水与化合物结合的方式不同，可能导致其X射线粉末射线衍射谱图相似，但其他的表征数据不同，如DSC谱图。同一药物，不同的晶型或不同的溶剂合物，会表现出稳定性、流动性、吸湿性、溶解性、可压缩性的不同，都会对药物的应用有重要的影响，从而大大影响药物的生物利用度及使用便捷性。

例如，专利文献CN201910643821.X和CN201710067693.X中描述了一种丹酚酸A盐复合物，其结构中包含丹酚酸A分子、丹酚酸A负离子、和阳离子，但是不含结晶水，测试其水溶性为“略溶”。为了对比该专利文献所述“丹酚酸A盐复合物”与本发明所述“丹酚酸A盐水合物”的差别，参考其方法，制备了丹酚酸A钠盐复合物，图32A和图32B可见本发明丹酚酸A钠盐水合物单晶与丹酚酸A钠盐复合物的显微照片。由图可见，本发明所制备的丹酚酸A钠盐水合物为清晰可见的“单晶”，而丹酚酸A钠盐复合物为“结晶性粉末”，未见明显的“单晶”。本发明制备的丹酚酸A钠盐水合物与对比专利的丹酚酸A钠盐复合物的差异如下：

前者为单晶、纯净物、化学组成稳定，水溶解性好；

后者为结晶性粉末、混合物、理论上并不能保证其化学组成的稳定性(如丹酚酸A分子与丹酚酸A钠的比例)，水溶解性较差；

根据医药注册法规，注射剂原料药最基本的特征为组成成分固定，且为纯净物。本发明制备的丹酚酸A钠盐水合物单晶相比较对比专利的丹酚酸A钠盐复合物结晶性粉末，作为注射剂原料药使用时，具有显著的优势。

同理，本发明所制备的丹酚酸A钾、钙、镁、铵盐水合物结晶(单晶)与对比专利所述的丹酚酸A盐复合物结晶性粉末相比，亦有类似的优势。

本发明还提供了一种丹酚酸A的结晶工艺，通过该结晶工艺，得到了一种丹酚酸A盐水合物的新晶型。同干燥工艺得到的无定型固体粉末相比，该结晶具有纯度高、生产成本低、更加稳定的优点，能够满足注射剂新药原料药的生产需求。与文献报道的丹酚酸A晶体相比，本发明得到的丹酚酸A盐水合物结晶，具有产物纯度高、生产成本低、产物水溶性好等优势，适用于丹酚酸A注射制剂的开发。

活性成分

如本文所用，术语“活性成分”或“活性化合物”指本发明的丹酚酸A盐水合物。

本发明公开了一系列丹酚酸A盐水合物结晶及其制备方法(如丹酚酸A钠盐水合物、丹酚酸A钾盐水合物、丹酚酸A钙盐水合物、丹酚酸A镁盐水合物、丹酚酸A铵盐水合物)。丹参药材参考《中国药典》(一部)(2020版)中“丹参水提物的制备”的制法制备丹参水提物。后者经过反应制备丹酚酸A粗品，再经过树脂柱层析后，得到纯度≥80％的丹酚酸A样品。再将该样品经过结晶、重结晶的过程，制备得到高纯度丹酚酸A盐水合物结晶。该结晶由丹酚酸A、丹酚酸A负离子、阳离子、和水分子组成。该一系列复合物皆为新的纯净物质，并具有全新的晶型，相比起无定型丹酚酸A粉末，其具有稳定性好、溶解性好的特点，相比较丹酚酸A结晶，其具有水溶性好的特点。本发明制备的丹酚酸A盐水合物更适用于静脉注射剂的开发，其应用于缺血性脑卒中和缺血性心血管疾病的治疗，效果显著好于阳性药物丁苯酞氯化钠注射液和注射用丹参多酚酸盐。

药物组合物和施用方法

由于丹酚酸A可用于治疗以下疾病：心血管疾病(如缺血性心脏病、脑卒中)、高脂血症、糖尿病及其并发症等等。因此，本发明的丹酚酸A盐水合物可以用于治疗或预防上述疾病。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明的丹酚酸A盐水合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：丹酚酸A盐水合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明的晶型物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明的晶型物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个注射剂量或一个胶囊或药片。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效或者稳定性等。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、崩解剂、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明的丹酚酸A盐水合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。优选地，采用注射方式给药，如静脉注射。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。本发明的丹酚酸A盐水合物由于其优异的溶解性，因此特别适用于注射给药。

用于局部给药的本发明的晶型物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明的丹酚酸A盐水合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明的晶型物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选10～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的主要优点在于：

(1)本发明首次制备得到的丹酚酸A盐水合物结晶，与丹酚酸A冻干粉末相比，稳定性更强，更耐高温、高湿、强光照射等；

(2)本发明制备得到的丹酚酸A盐水合物结晶水溶性更好，且具有显著更快地溶解速率，适合作为注射剂使用。

(3)本发明提供的制备丹酚酸A结晶的方法，可以采用低纯度的丹酚酸A原料(约80％即可)为起始原料进行结晶，因此极大的降低了丹酚酸A结晶制备的成本。

(4)本发明提供的制备丹酚酸A结晶的方法，产物纯度高，收率大，方便工业生产。

下面结合具体实施例，进一步详陈本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。

实施例1制备纯度≥80％的丹酚酸A样品

步骤一：制备丹酚酸A粗品

称取丹参总酚酸提取物1000g(其中丹酚酸B含量约50g，迷迭香酸含量约5g)，溶解于2000mL水中，调节pH 5.0，加热回流(100℃)反应24h，HPLC检测，一般的，每1000g丹参提取物可制得含丹酚酸A约20g的粗品溶液。

步骤二：柱色谱法纯化丹酚酸A

选用大孔吸附树脂HZ816(华东理工大学华震生物科技科技有限公司)1000mL，将步骤一得到的丹酚酸A粗品溶液，调节pH 3.0，流经树脂后，再用6000mL水洗脱树脂柱；然后采用50％的乙醇溶液洗脱树脂柱，并分步收集流出液，500mL/瓶，HPLC检测各样品，收集HPLC纯度≥50％的样品溶液，合并，一般情况下可得含丹酚酸A约19.5g的丹酚酸A溶液。

树脂再生后，再次重复该柱层析过程，收集HPLC纯度≥80％的样品溶液，合并，一般情况下可得含丹酚酸A约16g的丹酚酸A溶液。

采用本方法制备得到的HPLC纯度≥80％的丹酚酸A样品，用于后续结晶法制备不同丹酚酸A盐水合物的起始原料。

实施例2制备丹酚酸A钠盐水合物结晶

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含约16g丹酚酸A)至浓度15％，水浴加热至50℃，缓慢加入碳酸钠粉末约532mg，待两者反应完全后(反应约15分钟，可使其中31％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钠盐)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.1℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A钠盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水于50℃溶解，配置成质量浓度为15％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶24h，析出丹酚酸A钠盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A钠盐水合物结晶”11.563g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.6％。

将上述制得的“丹酚酸A钠盐水合物”，用于进行X射线单晶衍射、X射线粉末衍射、DSC、TGA分析及溶解性、稳定性等测定，以及抗脑缺血、心肌缺血等药效学试验使用。

图1是丹酚酸A钠盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图2A(不对称单位的立体结构椭球图)和图2B(单个主体分子的立体结构椭球图)是丹酚酸A钠盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图。

图3是丹酚酸A钠盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图。

图4是丹酚酸A钠盐水合物的粉末衍射图谱。

图5是丹酚酸A钠盐水合物的粉末衍射2θ值列表。

图6是丹酚酸A钠盐水合物的DSC图谱。

经X射线单晶衍射，可以确定丹酚酸A钠盐水合物的绝对构型为：

TGA检测结果表明，晶体中结晶水含量与单晶衍射检测结果一致。

实施例3制备丹酚酸A钾盐水合物结晶

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)至浓度10％，水浴加热至50℃，缓慢加入碳酸钾粉末约1117mg，待两者反应完全后(反应约10分钟，可使其中50％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钾盐)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.3℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A钾盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水于50℃溶解，配置成浓度10％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶36h，析出丹酚酸A钾盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A钾盐水合物结晶”11.212g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.5％，保存待用。

图7是丹酚酸A钾盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图8A是丹酚酸A钾盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图8B是丹酚酸A钾盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图9是丹酚酸A钾盐水合物的粉末衍射图谱

图10是丹酚酸A钾盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图11是丹酚酸A钾盐水合物的DSC图谱

经X射线单晶衍射，可以确定丹酚酸A钾盐水合物晶体的绝对构型为：

TGA检测结果表明，晶体中结晶水含量与单晶衍射检测结果一致。

实施例4制备丹酚酸A钙盐水合物结晶

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)至浓度15％，水浴50℃，缓慢加入碳酸钙粉末约810mg，待两者反应完全后(反应约20分钟，可使其中50％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钙盐)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.15℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶24h，得丹酚酸A钙盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水于50℃溶解，配置成浓度18％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.5℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶24h，得丹酚酸A钙盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A钙盐水合物结晶”14.003g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.5％，保存待用。

图12是丹酚酸A钙盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图13A(不对称单元的立体结构椭球图)和图13B(显示钙配位情况的立体结构椭球图)是丹酚酸A钙盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图14是丹酚酸A钙盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图15是丹酚酸A钙盐水合物的粉末衍射图谱

图16是丹酚酸A钙盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图17是丹酚酸A钙盐水合物的DSC图谱。

经X射线单晶衍射，可以确定丹酚酸A钙盐水合物晶体的绝对构型为：

TGA检测结果表明，晶体中结晶水含量与单晶衍射检测结果一致。

实施例5制备丹酚酸A镁盐水合物结晶

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度10％，水浴50℃，缓慢加入氢氧化镁粉末约470mg，待两者反应完全后(反应约10分钟，可使其中50％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A镁盐)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶24h，得丹酚酸A镁盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水于50℃溶解，配置成浓度10％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.5℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶24h，得丹酚酸A镁盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A镁盐水合物结晶”2.256g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.5％，保存待用。

图18是丹酚酸A镁盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图19是丹酚酸A镁盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图20是丹酚酸A镁盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图21是丹酚酸A镁盐水合物的粉末衍射图谱

图22是丹酚酸A镁盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图23是丹酚酸A镁盐水合物的DSC图谱

经X射线单晶衍射，可以确定丹酚酸A镁盐水合物晶体的相对构型为：

TGA检测结果表明，晶体中结晶水含量与单晶衍射检测结果一致。

实施例6制备丹酚酸A铵盐水合物结晶

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度15％，水浴50℃，缓慢加入碳酸铵粉末约777mg，待两者反应完全后(反应约15分钟，可使其中50％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A铵盐)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.4℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶20h，得丹酚酸A铵盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水于60℃溶解，配置成浓度15％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液降温至20℃，降温速率为0.4℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌析晶24h，得丹酚酸A铵盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A铵盐水合物结晶”6.681g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.6％，保存待用。

图24是丹酚酸A铵盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据

图25(不对称单位的立体结构球棍图)和图26(单个主体分子的立体结构椭球图)是丹酚酸A铵盐水合物的X射线单晶衍射得到的立体结构椭球图

图27是丹酚酸A铵盐水合物的延b轴方向的晶胞堆积投影图

图28是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的粉末衍射图谱

图29是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的粉末衍射2θ值列表

图30是本发明得到的丹酚酸A铵盐水合物的DSC图谱

经X射线单晶衍射，可以确定丹酚酸A铵盐水合物晶体的绝对构型为：

TGA检测结果表明，晶体中结晶水含量与单晶衍射检测结果一致。

实施例7

丹酚酸A盐(钠、钾、钙、镁、铵)水合物、丹酚酸A结晶及丹酚酸A冻干粉末的高温、高湿、强光照射影响因素试验。

影响因素试验是药物稳定性考察的重要方法，可以在较短时间内对药物稳定性有初步的了解，对后续的新药开发具有重要的意义，所有的原料药与制剂都要进行影响因素试验。

本实施例中采用的丹酚酸A盐(钠、钾、钙、镁、铵)水合物，采用本发明相应实施例中的方法制备。

丹酚酸A结晶，采用专利文献CN201710055331.9中记载的丹酚酸A结晶的制备方法制备(叶天健等，一种丹酚酸A的晶型及其制备方法)。

丹酚酸A冻干粉末，采用专利文献CN201310487751.6中记载的丹酚酸A的制备方法制备(阚士东，一种丹酚酸A的制备方法)

本实施例参考《中国药典》2020版四部第457页中所述的试验方法，简述如下：

将供试品置于适当的开口容器中(如称量瓶或培养皿)，摊成厚度≤5mm的薄层，进行如下试验：

高温试验：供试品开口置于洁净容器中，60℃温度下放置10天后取样HPLC检测，并与0天时的样品对比。

高湿试验：供试品开口置于恒湿密闭容器中，在25℃条件下分别于相对湿度90±5％条件下放置10天后取样HPLC检测，并记录样品放置前后的重量，以考察样品的吸湿情况。(选择KNO₃饱和溶液共同放置于密闭容器中营造高湿环境：25℃时相对湿度92.5％)，并与0天时的样品对比。

强光照射试验：供试品开口放置于装有日光灯的光照箱内，于照度4500lx±500lx条件下照射10天后取样HPLC检测，留意供试品外观变化，并与0天时的样品对比。

丹酚酸A(盐钠、钾、钙、镁、铵)水合物、丹酚酸A结晶及丹酚酸A冻干粉末影响因素试验结果见表1。

表1高温、高湿、强光照射影响因素试验前后的产品质量统计表

结果表明，在高温、光照、高湿影响因素试验中，丹酚酸A几种盐水合物和丹酚酸A结晶的稳定性和形态特征远好于冻干粉。初始时两者的纯度基本一致(99.5％-99.6％对比99.4％)，经过高温试验后，丹酚酸A几种盐水合物和丹酚酸A结晶纯度降低皆≤0.5％，后者则降低至74.7％；光照试验后，丹酚酸A几种盐水合物和丹酚酸A结晶纯度降低皆≤0.2％，而后者降低了8.5％；高湿试验中，10天后丹酚酸A几种盐水合物和丹酚酸A结晶纯度降低皆≤0.1％，而后者由于吸湿严重，由初始的淡黄色粉末，变为黄色油滴状，明显已经不合格(因此，未进行HPLC分析)。

综上，本发明制备得到的丹酚酸A盐水合物结晶，其稳定性显著好于冻干粉，更适用于新药开发的原料药使用。

实施例8丹酚酸A(钠、钾、钙、镁、铵)盐水合物、丹酚酸A结晶、丹酚酸A冻干粉水溶解性对比研究

丹酚酸A口服生物利用度非常低，注射剂是其商业开发的首选剂型。由于其主要适应症为心脑血管疾病，病人急性发病期一般采用静脉注射的方式用药，因此产品水溶性及溶解速度非常重要，将直接影响医生和患者在临床使用时的选择，进而影响到药品的销售及市场。

溶解度测定的方法参照《中国药典》(2020版四部)中所描述的方法(为了将其开发成静脉注射制剂，仅研究其在水中的溶解度)，如下：

将上述几种样品，分别粉碎，过5号药典筛。分别称取样品，加入不同体积的纯水，按照药典所描述的实验方法及判断标准(称取研成细粉的供试品，于25℃±2℃一定容量的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒时，即视为完全溶解)，溶解性能分为极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解。记述几种样品的溶解性，如下：

丹酚酸A冻干粉：

“极易溶解”判断：0.12g样品于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g样品于1mL水中，5min溶解；

“溶解”判断：0.12g样品于3mL水中，瞬间溶解(≤10s)。

结论及讨论：丹酚酸冻干粉的水溶解性为“易溶”。0.12g、

丹酚酸A结晶：

“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，30min不溶；

“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，5min不溶，10min不溶，15min不溶，20min不溶，25min不溶，30min溶解。

结论及讨论：丹酚酸A结晶的水溶解性为“溶解”。结合临床使用情况，0.12g样品于3mL水中25min溶解，难以满足临床需求。

丹酚酸A钠盐水合物：

“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，5min溶解；

“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，瞬间溶解(≤10s)。

结论及讨论：丹酚酸A钠盐水合物的水溶解性为“易溶”。结合临床使用情况，0.12g药品于3mL水溶瞬间溶解，能够满足其临床需求。

丹酚酸A钾盐水合物：

“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，5min不溶，10min不溶，15min不溶，20min溶解；

“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，5min溶解。

结论及讨论：丹酚酸A钾盐水合物的水溶解性为“易溶”。结合临床使用情况，0.12g药品于3mL需5min才能溶解，基本能够满足其临床需求。

丹酚酸A钙盐水合物：

“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，30min不溶；

“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，5min不溶，10min不溶，15min不溶，20min溶解。

结论及讨论：丹酚酸A钙盐水合物的水溶解性为“溶解”。结合临床使用情况，0.12g样品于3mL水中20min溶解，基本能够满足临床需求。

丹酚酸A镁盐水合物：

“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，5min溶解；

“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，瞬间溶解(≤10s)。

结论及讨论：丹酚酸A镁盐水合物的水溶解性为“易溶”。结合临床使用情况，0.12g药品于3mL水溶瞬间溶解，能够满足其临床需求。

丹酚酸A铵盐水合物：

“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；

“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，5min不溶，10min不溶，15min溶解；

“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，5min溶解。

结论及讨论：丹酚酸A铵盐水合物的水溶解性为“易溶”。结合临床使用情况，0.12g药品于3mL需5min才能溶解，基本能够满足其临床需求。

根据初步的药效学试验，丹酚酸A的临床应用制剂量约50-100mg/支。结合上述溶解性试验，单纯从溶解性方面考虑，丹酚酸A钠盐水合物与丹酚酸A镁盐水合物完全能够满足临床需求。丹酚酸A钾盐水合物、丹酚酸A铵盐水合物、丹酚酸A钙盐水合物基本能够满足临床需求。而丹酚酸A结晶直接使用时难以满足其作为静脉注射制剂的临床需求。

实施例9丹酚酸A盐水合物与阳性药物在缺血性脑中风模型动物中对大脑梗死面积的影响

本实施例中，选择市场上的畅销药物作为阳性药，对比丹酚酸A盐水合物结晶与阳性药物对脑中风模型动物大脑梗死面积的影响。阳性药物选择丁苯酞氯化钠注射液和注射用丹参多酚酸。其中前者为《中国缺血性脑卒中诊疗指南》(2018版)中推荐的缺血性脑卒中治疗药物，后者为以丹酚酸B为代表的丹参水溶性酚酸类化合物注射制剂，文献报道其亦具有较好的活性。

本试验选用SD大鼠，构建缺血性脑卒中试验动物模型，方法如下：

缺血不灌注模型：大鼠中动脉栓塞-电凝法

SD大鼠称重，用15％的水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，左侧侧卧固定在大鼠手术台，左侧颞顶部及面部剃毛，用75％乙醇消毒后在左眼和左耳之间，切开皮肤，钝性分离颞肌和咬肌，暴露颞骨翼板，于手术显微镜下，在颞骨和颞鳞骨结合靠近口侧1mm处用颅骨钻研磨出2mm×2mm的骨窗，用撬棒撬开颅骨。此时，透过硬脑膜即可见一条较直且分支较少的血管，即为大脑中动脉。用双极电凝镊在嗅束内1mm至大脑下静脉之间处烧灼，将血流彻底阻断后止血，依次缝合颞肌和皮肤，然后尾静脉注射给药。待大鼠苏醒后，放回笼中继续饲养24h。

缺血再灌注模型：大鼠中动脉栓塞-线栓法

大鼠称重后用15％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧固定在大鼠手术台上，颈部剃毛，75％乙醇消毒，手术剪纵向剪开皮肤，手术分离暴露一侧颈总动脉，沿颈总动脉上行分离并结扎颈外动脉和翼突颚动脉，在颈总动脉的近心端放置动脉夹阻断血流，于远心端用眼科手术剪剪一个小口，插入栓线，缓缓推入栓线(约20mm)至前脑动脉再往回抽出约2mm即至大脑中动脉口，结扎栓线和血管，缝合皮肤。脑组织缺血后，尾静脉注射给药一次，放回笼中饲养。

丹酚酸A钠盐水合物及阳性药物在缺血性脑中风模型动物中对大脑梗死面积的影响结果见表2。

表2本发明所得到的丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物在缺血性脑中风模型动物中对脑梗死面积的影响

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001vs溶媒对照组

丁苯酞是公认的治疗缺血性脑卒中的有效药物，被《中国缺血性脑卒中诊治指南》(2018版)所推荐，2020年的销售额超过60亿元人民币。结果显示，丹酚酸A钠盐水合物和阳性药物丁苯酞，在缺血再灌注和缺血不灌注模型中，相比较不用药的“溶媒对照组”都可以显著降低模型动物的脑梗死面积。

其中，丹酚酸A钠盐水合物在剂量为10mg/kg时，达到最大治疗效果(治疗天花板)，而丁苯酞在3mg/kg剂量时，达到最大治疗效果(治疗天花板)。且无论是在缺血再灌注还是缺血不灌注模型，丹酚酸A钠盐水合物的最大疗效，皆显著高于丁苯酞。

该结果表明，在低于3mg/kg剂量时，丁苯酞的效价强度高于丹酚酸A钠盐水合物，但其最大治疗效果显著低于后者。在实际应用中，最大疗效的意义显著大于效价强度。

综上，丹酚酸A钠盐水合物用于治疗缺血性脑卒中，无论是缺血再灌注模型还是缺血不灌注模型，都显著好于不用药对照组，也显著好于阳性药物丁苯酞。

实施例10丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物在缺血性心脏病模型动物中对心肌梗死面积的影响

本实施例中，选择市场上的畅销药物作为阳性药，对比丹酚酸A盐水合物结晶与阳性药物对缺血性心脏病模型动物心肌梗死面积的影响。

阳性药物选择注射用丹参多酚酸盐(绿谷制药)，其主要成分为丹酚酸B镁盐为主的(含量85％)丹参水溶性酚酸类化合物，是目前市场上最畅销的心肌缺血药物之一，有大量的文献报道其活性。

本试验选用SD大鼠，其模型构建方法如下：

缺血不灌注模型：

大鼠禁食12h，称重后用15％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉。左侧胸壁剃毛消毒后于胸骨左侧3-4根肋骨间横切口切开皮肤，用止血钳钝性分离各肌层并刺破胸膜，再用两把止血钳横行夹住胸骨，在两钳之间剪断胸骨，插入牵引器撑开肋骨，剪开心包膜暴露心脏，在前室间沟可见心大静脉，以此为标志，在左心耳下离根部约2-3mm用2×6带线圆针6-0号医用棉纶单丝线绕过动脉深面，在肺动脉圆锥旁沟出针，深约1mm，宽约2mm。把丝线两端从一直径2mm聚乙烯管中传出备用。稳定10min后，把一棉签棒插入PE管，拉紧丝线用棉签棒将PE管向前推，直至阻断冠状动脉血流，完成缺血模型构建。

心肌缺血后，大鼠尾静脉给药一次，24h处死大鼠，检测其心肌梗死面积。

缺血再灌注模型：

缺血再灌注模型的构建，前期同缺血不灌注模型，心肌缺血后，将棉签棒从PE管中拔出，即可实现再灌注。再灌注后，大鼠静脉给药一次，24h后处死大鼠，检测其心肌梗死面积。

丹酚酸A钠盐水合物及阳性药物在缺血性心脏病模型动物中对心肌梗死面积的影响结果见表3。

表3本发明所得到的丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物在缺血性心脏病模型动物中对心肌梗死面积大小的影响

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001vs溶媒对照组

丹参多酚酸盐是同样来源于丹参的酚酸类化合物，是一种有效的缺血性心血管疾病治疗药物。结果显示，丹酚酸A钠盐水合物、丹参多酚酸盐，在缺血再灌注模型和缺血不灌注模型中，与不用药的“溶媒对照组”相比，皆能显著降低试验动物的心肌梗死面积。

其中丹酚酸A钠盐水合物的最大效应剂量皆为为10mg/kg，丹参多酚酸盐的最大效应剂量为40mg/kg。前者的最大治疗效果(疗效天花板)显著好于后者。

实施例11丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物对动物体内血栓形成的影响

本实施例中，选择市场上的畅销药物作为阳性药，对比丹酚酸A盐水合物结晶与阳性药物对动物体内血栓形成的影响。

阳性药物选择丁苯酞氯化钠注射液(石药集团)。

本实施例选用SD大鼠作为试验动物，具体试验方法如下：

实验前量取6cm长的4号手术丝线若干，将所有丝线称量后求出单根丝线的重量。准备长约10cm的硅胶管，管内放置一根长6cm的4号手术丝线，硅胶管两端连接长8cm的聚乙烯塑料管，结扎固定后向管内充满50u/ml肝素盐水，备用。

大鼠随机分为5组，每组10只。大鼠称重后用15％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉后根据体重尾静脉注射给药，给药体积为1ml/kg。

给药10min后开始手术，大鼠仰卧位固定于鼠板上，牵出舌头以防发生舌后坠引起窒息。颈部剃毛，用75％酒精消毒，纵向剪开颈部皮肤，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉，将备制好的聚乙烯管一端先插入左侧颈外静脉，另一端插入右侧颈总动脉，打开动脉夹，血液从右侧颈总动脉流经管道返回左侧颈外静脉。开放15min后阻断血流，迅速取出丝线称重，总重量减去丝线干重量即是血栓湿重。

丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物对动物体内血栓形成的影响结果见表4。

表4本发明所得到的丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物对动物体内血栓形成的影响

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001vs溶媒对照组

#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001丹酚酸A钠盐水合物组vs丁苯酞组

结果显示，相比较不用药的“溶媒对照组”，丹酚酸A钠盐水合物和阳性药物丁苯酞，皆可以显著抑制血栓形成，具体表现在血栓湿重显著降低，且呈现一定的剂量效应关系。

相比之下，丹酚酸A钠盐水合物抑制血栓形成的能力，好于阳性药物丁苯酞，这与其降低心肌梗死面积和脑梗死面积方面的效果是一致的。

实施例12丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物对缺血性脑中风和缺血性心脏病模型动物血液中炎症因子的影响

本实施例中，选择市场上的畅销药物作为阳性药，对比丹酚酸A盐水合物结晶与阳性药物对缺血性脑中风和缺血性心脏病模型动物血液炎症因子的影响。

缺血性心脏病模型阳性药物选择注射用丹参多酚酸盐(绿谷制药)和缺血性脑中风模型阳性药物选择丁苯酞氯化钠注射液(石药集团)。

本实施例选用SD大鼠作为试验动物，具体试验方法分别参照实施例13、14中“缺血再灌注模型”的构建方法。造模完成并相应给予药物(或对照)60min后，经股动脉采血3ml，置离心机3000转速，离心10min留取血清，-80℃保存待测MDA、SOD、IL-1β和TNF-α。

丹酚酸A盐水合物结晶与阳性药物对动物血液炎症因子的影响结果见表5、表6。

表5本发明所得到的丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物对缺血性脑中风(缺血再灌注)模型动物血液中炎症因子的影响

*p<0.05，**p<0.01vs溶媒对照组

结果表明，丹酚酸A钠盐水合物，能够显著降低脑缺血大鼠血液中的炎症因子含量，增加SOD活性，效果好于不用药组和阳性药物丁苯酞组，这可能是其产生治疗作用的原因之一。

表6本发明所得到的丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物对缺血性心脏病(缺血再灌注)模型动物血液中炎症因子的影响

*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001vs溶媒对照组

结果表明，丹酚酸A钠盐水合物和阳性药物丹参多酚酸盐，都可以降低心肌缺血模型动物血液中的炎症因子浓度，增加SOD活性，其中丹酚酸A钠盐水合物的效果较丹参多酚酸盐更好。这可能是它们产生治疗效果的原因之一。

实施例13制备丹酚酸A钠盐水合物结晶(探索碱性钠化合物加入量)

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度20％，水浴50℃，缓慢加入碳酸钠粉末约343mg，待两者反应完全后(反应约15分钟，可使其中20％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钠盐)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A钠盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水50℃溶解，配置成浓度20％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌并等待24h，得丹酚酸A钠盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A钠盐水合物结晶”7.112g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.5％。

采用类似的方法，更改加入碳酸钠粉末的量1373mg(反应约20分钟，可使其中80％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钠盐)。最终可得产品“丹酚酸A钠盐水合物结晶”4.256g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度为99.5％。

综合本实施例结果，加入碱性钠化合物的量，使其中20-80％丹酚酸A反应完毕，都可以制备纯度高达99.5％的丹酚酸A钠盐水合物结晶，差别在于其得率略有不同。

另外，可以看到，采用的碱性钠化合物，实际提供的是钠离子，只要能保证该碱性钠化合物与丹酚酸A能够起反应即可。因此，采用的碱性钠化合物，除了本发明中使用的碳酸钠外，氢氧化钠、碳酸氢钠、苹果酸钠、磷酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙酸钠等弱酸与钠形成的强碱弱酸盐，都能够用于制备本发明中所述的丹酚酸A钠盐水合物结晶。

实施例14制备丹酚酸A钾盐水合物结晶(探索碱性钾化合物加入量)

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度20％，水浴50℃，缓慢加入碳酸钾粉末约447mg，待两者反应完全后(反应约25分钟，可使其中20％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钾盐)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A钾盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水50℃溶解，配置成浓度20％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌并等待24h，得丹酚酸A钾盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A钾盐水合物结晶”5.508g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.6％。

采用类似的方法，更改加入碳酸钾粉末的量1788mg(反应约20分钟，可使其中80％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钾盐)。最终可得产品“丹酚酸A钾盐水合物结晶”3.221g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度为99.5％。

综合本实施例结果，加入碱性钾化合物的量，使其中20-80％丹酚酸A反应完毕，都可以制备纯度高达99.5％的丹酚酸A钾盐水合物结晶，差别在于其得率稍有不同。

另外，可以看到，采用的碱性钾化合物，实际提供的是钾离子，只要能保证该碱性钾化合物与丹酚酸A能够起反应即可。因此，采用的碱性钾化合物，除了本发明中使用的碳酸钾外，氢氧化钾、碳酸氢钾、苹果酸钾、柠檬酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、乙酸钾等弱酸与钾形成的强碱弱酸盐，都能够应用于本发明中，用于制备本发明所述的丹酚酸A钾盐水合物结晶。

实施例15制备丹酚酸A钙盐水合物结晶(探索碱性钙化合物加入量)

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度20％，水浴50℃，缓慢加入碳酸钙粉末约324mg，待两者反应完全后(反应约15分钟，可使其中20％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钙盐)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A钙盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水50℃溶解，配置成浓度20％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌并等待24h，得丹酚酸A钙盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A钙盐水合物结晶”7.158g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.7％。

采用类似的方法，更改加入碳酸钙粉末的量1296mg(反应约20分钟，可使其中80％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A钙盐)。最终可得产品“丹酚酸A钙盐水合物结晶”5.501g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度为99.5％。

综合本实施例结果，加入碱性钙化合物的量，使其中20-80％丹酚酸A反应完毕，都可以制备纯度高达99.5％的丹酚酸A钙盐水合物结晶，差别在于其得率有所不同。

另外，可以看到，采用的碱性钙化合物，实际提供的是钙离子，只要能保证该碱性钙化合物与丹酚酸A能够起反应即可。因此，采用的碱性钙化合物，除了本发明中使用的碳酸钙外，碳酸氢钙、氧化钙、氢氧化钙、葡萄糖酸钙、乙酸钙等弱酸与钙形成的盐，都可以应用于本发明中，用于制备本发明所描述的丹酚酸A钙盐水合物结晶

实施例16制备丹酚酸A镁盐水合物结晶(探索碱性镁化合物加入量)

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度20％，水浴50℃，缓慢加入氢氧化镁粉末约188mg，待两者反应完全后(反应约15分钟，可使其中20％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A镁盐)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A镁盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水50℃溶解，配置成浓度20％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌并等待24h，得丹酚酸A镁盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A镁盐水合物结晶”1.105g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.6％。

采用类似的方法，更改加入氢氧化镁粉末的量751mg(反应约20分钟，可使其中80％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A镁盐)。最终可得产品“丹酚酸A镁盐水合物结晶”0.522g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度为99.5％。

综合本实施例结果，加入碱性镁化合物的量，使其中20-80％丹酚酸A反应完毕，都可以制备纯度高达99.5％的丹酚酸A镁盐水合物结晶，差别在于其得率有所不同。

另外，可以看到，采用的碱性镁化合物，实际提供的是镁离子，只要能保证该碱性镁化合物与丹酚酸A能够起反应即可。因此，采用的碱性镁化合物，除了本发明中使用的氢氧化镁外，化镁、碳酸镁、碳酸氢镁、碱式碳酸镁、苹果酸镁、柠檬酸镁、乙酸镁等弱酸与镁形成的盐，都可应用于本发明中，制备本发明所述的丹酚酸A镁盐水合物结晶。

实施例17制备丹酚酸A铵盐水合物结晶(探索碱性铵(氨)化合物加入量)

将纯度≥80％的丹酚酸A溶液浓缩(内含16g丹酚酸A)，至浓度20％，水浴50℃，缓慢加入碳酸铵粉末约311mg，待两者反应完全后(反应约20分钟，可使其中20％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A铵盐)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，不断搅拌24h，得丹酚酸A铵盐水合物(沉淀)。

过滤沉淀，加入水50℃溶解，配置成浓度20％的溶液(以丹酚酸A计)，将溶液缓慢降温至20℃，降温速率为0.2℃/min，其间不停搅拌，然后进一步降温至5℃，搅拌并等待24h，得丹酚酸A铵盐水合物(重结晶产物)。

过滤沉淀，并将其平铺至厚度≤5mm，放置于以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内，抽真空，25℃干燥12h，得产品“丹酚酸A铵盐水合物结晶”2.229g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.5％。

采用类似的方法，更改加入碳酸铵粉末的量1.244mg(反应约10分钟，可使其中80％的丹酚酸A反应生成丹酚酸A铵盐)。最终可得产品“丹酚酸A铵盐水合物结晶”1.688g，以丹酚酸A计，其HPLC纯度为99.5％。

综合本实施例结果，加入碱性铵(氨)化合物的量，使其中20-80％丹酚酸A反应完毕，都可以制备纯度高达99.5％的丹酚酸A铵盐水合物结晶，差别在于其得率有所不同。

另外，可以看到，采用的碱性铵(氨)化合物，实际提供的是铵根离子，只要能保证该碱性铵(氨)化合物与丹酚酸A能够起反应即可。因此，采用的碱性氨(氨)化合物，除了本发明中使用的碳酸铵外，氨气、氨水、碳酸氢铵等能够提供铵根离子，且能够与丹酚酸A起反应的化合物，都可以用于本发明，制备本发明所述的丹酚酸A铵盐水合物结晶。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种式I所示的丹酚酸A盐水合物，

其中，M为阳离子；0＜m≤20，0＜n≤10，0＜x≤20，0＜y≤150。

2.如权利要求1所述的丹酚酸A盐水合物，其特征在于，所述M选自下组：钠离子、钾离子、镁离子、钙离子、和铵离子。

3.如权利要求1所述的丹酚酸A盐水合物，其特征在于，所述式I中，M为钠离子，并且5≤m≤15，1≤n≤10，1≤x≤10，20≤y≤100；优选地，M为钠离子，并且m为11，n为5，x为5，y为56；或者

所述式I中，M为钾离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，1≤x≤5，1≤y≤10；优选地，M为钾离子，并且m为1，n为1，x为1，y为8；或者

所述式I中，M为钙离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，0.5≤x≤5，5≤y≤15；优选地，M为钙离子，并且m为1，n为1，x为0.5，y为9；或者

所述式I中，M为镁离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，0.5≤x≤5，5≤y≤15；优选地，M为镁离子，并且m为1，n为1，x为0.5，y为7；或者

所述式I中，M为铵离子，并且1≤m≤5，1≤n≤5，1≤x≤5，5≤y≤15；优选地，M为铵离子，并且m为2，n为2，x为2，y为11。

4.如权利要求1所述的丹酚酸A盐水合物，其特征在于，所述丹酚酸A盐水合物选自下组：

丹酚酸A钠盐水合物：

丹酚酸A钾盐水合物：

丹酚酸A钙盐水合物：

丹酚酸A镁盐水合物：

丹酚酸A铵盐水合物：

5.一种丹酚酸A盐水合物晶体，其特征在于，所述丹酚酸A盐水合物晶体选自下组：

丹酚酸A钠盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝91.6°；

丹酚酸A钾盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝115.16°；

丹酚酸A镁盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝116.1°；

丹酚酸A钙盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝115.7°；和

丹酚酸A铵盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为：

α＝γ＝90.0°,β＝96.9°。

6.一种丹酚酸A盐水合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)将丹酚酸A原料溶于具有第一温度的含水溶剂中，获得丹酚酸A溶液；

(2)向步骤(1)获得的丹酚酸A溶液中加入碱性化合物，使部分丹酚酸A和碱性化合物进行成盐反应；

(3)对步骤(2)成盐反应后的溶液降温至第二温度进行析晶，从而获得所述丹酚酸A盐水合物；

其中，所述第一温度为40-80℃；所述第二温度为0-20℃。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中所得丹酚酸A溶液中，丹酚酸A的质量浓度为约5％-20％；优选地为约5％-15％。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中降温速率为0.1℃/min-1℃/min；优选地降温速率为0.1℃/min-0.5℃/min；更优选地降温速率为0.1℃/min-0.3℃/min。

9.一种权利要求1所述丹酚酸A盐水合物或权利要求5所述的丹酚酸A盐水合物晶体的用途，用于制备治疗或预防疾病的药物组合物，所述疾病选自：心脑血管疾病、免疫系统疾病、高脂血症、糖尿病并发症等。

10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：

权利要求1所述的丹酚酸A盐水合物或权利要求5所述的丹酚酸A盐水合物晶体；以及药学上可接受的载体。

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