CN102151275A

CN102151275A - 齐墩果酸的抗胰腺癌作用及其药物制剂

Info

Publication number: CN102151275A
Application number: CN2010105336222A
Authority: CN
Inventors: 林秀坤; 刘海洲; 刘明; 魏鉴腾; 张玉艳; 王翠翠
Original assignee: 林秀坤
Priority date: 2010-11-07
Filing date: 2010-11-07
Publication date: 2011-08-17

Abstract

本发明公开了齐墩果酸在抗胰腺癌方面的医药新用途，同时也公开了以齐墩果酸为制药原料制备成片剂、胶囊剂、丸剂、注射剂等临床上可接受的药物制剂。本发明的齐墩果酸药物制剂含有1%-99%的齐墩果酸和99%-1%的药用赋形剂（包括其它配伍用的药物）。本发明提供的齐墩果酸及其药物制剂具有很好的抗胰腺癌作用，表现在对体外人胰腺癌细胞具有明显的抑制活性，并对此肿瘤细胞的裸鼠移植瘤具有显著的抑瘤活性。此外，该药物制剂的活性成分为中药提取物，原料丰富且具有毒副作用小的优点。

Description

齐墩果酸的抗胰腺癌作用及其药物制剂

一、技术领域

本发明是涉及齐墩果酸（Oleanolic acid）在抗胰腺癌药物方面的应用及其药物制剂，属于中药领域。

二、背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病，抗癌药物的开发已成为本世纪新药研究的重大课题。目前，从植物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物，已成为国内外抗肿瘤药物研究的重点。我们在筛选抗肿瘤药物过程中发现齐墩果酸具有很强的抑制胰腺癌细胞和实体瘤生长的作用。

齐墩果酸（Oleanolic acid）是五环三萜类化合物，以游离体和配糖体的形式存在于多种植物中。主要提取来源木犀科植物齐墩果的叶，女贞果实；龙胆科植物青叶胆全草，川西獐牙菜；伞形科植物大星芹的叶、根；五加科植物楤木的根皮及茎皮；葫芦科植物大籽雪胆，可爱雪胆，中华雪胆的块根。齐墩果酸已报道的药用作用主要有护肝降酶、促进肝细胞再生、抗炎、强心、利尿，还具有降血糖、降血脂、镇静等作用，是开发治疗肝病和降血糖等药物的有效成分。

在本发明之前未发现以齐墩果酸为原料制备药物剂型并用于预防和治疗胰腺癌疾病的报道。齐墩果酸几乎无毒，中药资源极为丰富，是一种非常有前途的抗肿瘤药物。

齐墩果酸（Oleanolic acid）为白色结晶或结晶状粉末；无臭，无味；不溶于水，可溶于乙醇，乙醚，丙酮和氯仿；对酸碱均不稳定，属于三萜类；熔点：308°C-310°C，化学名：3β-hydroxy-olea-12-en-28-oic acid；分子式C₃₀H₄₈O₃；分子量：456.71。

化学结构式：

三、发明内容

本发明的目的之一是提供了齐墩果酸的药物制剂；

本发明的目的之二是提供了齐墩果酸的抗肿瘤新用途。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的药物制剂含有1%-99%的齐墩果酸和99%-1%的赋形剂（包括其它配用的药物），优选含有20%-80%的齐墩果酸和80%-20%的赋形剂（包括其它配用的药物），最好含有60%-70%的齐墩果酸和40%-30%的赋形剂（包括其它配用的药物）。

按药剂学方法，可以将本发明的齐墩果酸制备成多种临床药物剂型作为抗胰腺癌药物，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种。

本发明的抗胰腺癌药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明的抗肿瘤药物中的其它配伍用的药物，指的是以有效剂量的齐墩果酸为一定的药物原料，再配伍其它已允许合用的中药或化学药品。

本发明的齐墩果酸药物制剂具有抗胰腺癌作用，是通过以下的药效学试验得到证实的。

试验例1 考察了齐墩果酸对体外胰腺癌细胞的抑制作用

细胞：人胰腺癌细胞（PANC-1）。为中科院海洋所海洋药物实验室提供。

药品及试剂：齐墩果酸（Oleanolic acid）中科院海洋所海洋药物实验室提供，白色粉末；5-氟脲嘧啶（5-FU）江苏南通精华制药有限公司产品，批号为100402； MTT（SIGMA，USA）；DMSO（SIGMA，USA）；胰蛋白酶（SIGMA，USA）；RPMI1640（GIBCO，Invitragen Co.，USA）；DMEM（GIBCO，Invitragen Co.，USA）；优级胎牛血清（GIBCO，Invitragen Co.，USA）；特级胎牛血清Fetal Bovine Serum（Hyclone）。

仪器：超低温冰箱（Nature，USA），细胞培养箱（SANYO，Japan），倒置显微镜（NIKON，Japan），酶标仪（Bio-Tek Instruments，Inooski，VT，USA），PH计（Thermo orion，USA），超净工作台（FLC-哈尔滨东联仪器厂）。

实验方法MTT法：将肿瘤细胞株按照常规方法培养传代，收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度5×10⁴个/ml左右。将细胞悬液加入96孔培养板中，每个孔加入180 μl。置于37℃恒温培养箱中培养24 h后。分别将齐墩果酸和5-FU用细胞培养基配成不同浓度的溶液，实验组加入各浓度齐墩果酸（以5-FU作为阳性对照组）20 μl/孔，每组各设4个平行孔，并设空白孔（细胞培养基）以调零。在培养箱37℃，培养48 h后，用移液枪将96孔板中液体洗净后每孔加入MTT（1 mg/ml）30 μl，置CO₂培养箱37℃ 培养4 h，弃去上清，每孔加入DMSO 150 μl，置摇床摇匀30 min，用酶标仪在492 nm下检测，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC₅₀。

试验结果表明，经SPSS软件统计，不同浓度的齐墩果酸对用于试验的人胰腺癌细胞（PANC-1）有不同程度的抑制作用，并且呈一定的剂量依赖关系，不同浓度的齐墩果酸对胰腺癌细胞的抑制率、IC₅₀值详见表1。

表1 不同浓度的齐墩果酸对胰腺癌细胞的抑制率

试验例2 齐墩果酸对胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑瘤作用

实验动物：BALB/c裸鼠购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，动物许可证编号：SYXK(沪)2010-0047，共20只，7~9周龄，体重20~22 g，均为雄鼠。动物饲养及实验为无特殊病原菌级屏障系统，饲养于青岛大学医学院实验动物中心。

肿瘤细胞接种：取对数生长期的人胰腺癌细胞（PANC-1）制成瘤细胞悬液（1×10⁷个/ml），植入BALB/c雄性裸鼠腋部皮下（约0.3 ml/只），接种后定期观察小鼠精神、饮食及排便等情况。传代一次后，将肿瘤组织无菌取出并切成大小相同2 mm³的小块，用套管针接种在裸鼠腋部皮下。

试验分组及方法：游标卡尺测量肿瘤结节的长径（a）、短径（b），按公式V=a×b²×0.52计算肿瘤体积，当皮下移植瘤长到100 mm³后，挑选肿瘤大小一致的裸鼠，将裸鼠称重用随机数字表法分成3组，分别为阴性对照组、阳性对照组、齐墩果酸组，每组5只裸鼠。分别将齐墩果酸和5-FU用细胞培养基配成不同浓度的溶液，药物浓度及具体分组如下：（1）阴性对照组：腹腔注射0.2 ml生理盐水；（2）阳性药物对照组：腹腔注射30 mg/kg的5-FU；（3）齐墩果酸组：30 mg/kg腹腔注射。每3天注射一次，连续注射10次，于末次给药24 h 后，取出瘤块，测定瘤重，最后计算平均肿瘤抑制率。采用SPSS软件统计，试验数据以（平均数±标准差）表示，P小于0.01为统计学差异显著性意义标准。试验结果见表2。

表2齐墩果酸对PANC-1裸鼠移植瘤的抑制作用试验结果（`X ±SD）

注：与对照组比较，**P<0.01 *P<0.05

由表2可见，齐墩果酸治疗组与5-FU治疗组的裸鼠移植瘤较对照组均受到了不同程度的抑制，齐墩果酸组以30 mg/kg给药的抑瘤效果优于阳性药物对照组（5-FU）30 mg/kg给药，此外，齐墩果酸组对裸鼠体重的影响很小，初步表明齐墩果酸无明显毒副作用。

上述离体试验和整体试验表明，齐墩果酸对离体和整体人胰腺癌细胞（PANC-1）均具有明显的抑制作用，且无明显毒副作用，提示齐墩果酸是一种很有前景的抗胰腺癌药物。

四、具体实施方式

实施例1 片剂的制备

齐墩果酸 1000 g，药用淀粉 100 g，混合均匀，用适量乙醇作为粘合剂制粒，干燥，经整粒机整粒，压片，每片0.30 g，口服，每次1-2片，每日两次。

实施例2 胶囊剂的制备

齐墩果酸 1000 g，药用淀粉 100 g，混合均匀，用适量乙醇作为粘合剂制粒，干燥，过120目筛整粒，装0#胶囊，每粒0.300 g，每次口服1-2粒，每日两次。

实施例3 滴丸剂的制备

聚乙二醇₄₀₀₀ 400 g，在水浴上熔化，加入齐墩果酸原料250 g，搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90 °C下滴入冷却过的液体石蜡中（温度±4 °C），滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，再加入少量滑石粉，混匀，得齐墩果酸滴丸 10000粒。口服，一次四粒，一日三次，饭后服用。

实施例4 颗粒剂的制备

齐墩果酸原料100 g，淀粉1000 g，糖粉500 g，混合均匀，用适量乙醇制粒，干燥、整粒、分装即得。口服，一次5 g，一日两次。

实施例5 微囊片的制备

分别称取硬脂酸12 g和18 ml牛至油作为复方囊材，称取齐墩果酸80 g作为囊心物，以压缩空气通过喷雾冻结法成囊，囊径为10-100 μm。然后将微囊与微晶纤维素混匀，加12%乙基纤维素醇溶液混合制成囊材，通过18目尼龙筛制成颗粒，于50℃以下烘干，再放置干燥器内24小时，加1%-3%硬脂酸镁压片，得齐墩果酸微囊片，片重为0.4 g，口服，一次1-2片，一日两次。

实施例6 注射剂的制备

齐墩果酸 40 g，丙二醇 50 ml，聚乙二醇400 100 ml，注射用水600 ml，混合，水浴加热30分钟，加苯甲醇90 ml，再用注射用水加至1800 ml，在超声波中处理10分钟，再在水浴上加热30分钟，调pH值为5.5-6.5，过滤，灌封，灭菌即得。每支3 ml，肌肉注射，一次3 ml，一日两次。

Claims

1.一种用于治疗胰腺癌的药物制剂，其特征在于含有治疗有效剂量的齐墩果酸和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与齐墩果酸组方的其它药物。

2.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于含有1%-99%的齐墩果酸和99%-1%的药用赋形剂或其它可组方的药物。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于含有20%-80%的齐墩果酸和80%-20%的药用赋形剂或其它可组方的药物。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于含有60%-70%的齐墩果酸和40%-30%的药用赋形剂或其它可组方的药物。

5.根据权利要求1所述的药物制剂，其特征在于所说的药物是口服制剂或非肠道给药的剂型。

6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种。

7.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的任何一种。

8.齐墩果酸在制备抗胰腺癌药物中的应用。

9.根据权利要求8的用途，其特征在于所说的抗胰腺癌是指抑制人胰腺癌细胞（PANC-1）及其裸鼠移植性肿瘤的生长。