CN116554031A - 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法 - Google Patents

一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116554031A
CN116554031A CN202210098116.8A CN202210098116A CN116554031A CN 116554031 A CN116554031 A CN 116554031A CN 202210098116 A CN202210098116 A CN 202210098116A CN 116554031 A CN116554031 A CN 116554031A
Authority
CN
China
Prior art keywords
salvianolic acid
sodium salt
salt hydrate
crystal
acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210098116.8A
Other languages
English (en)
Inventor
叶天健
阚士东
潘永存
张志杰
黄旭阳
温昱恺
彭仁贵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Taizhou Yongjian Pharmaceutical Technology Co ltd
Original Assignee
Taizhou Yongjian Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Taizhou Yongjian Pharmaceutical Technology Co ltd filed Critical Taizhou Yongjian Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority to CN202210098116.8A priority Critical patent/CN116554031A/zh
Priority to PCT/CN2023/082444 priority patent/WO2023143633A2/zh
Publication of CN116554031A publication Critical patent/CN116554031A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/73—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids
    • C07C69/732—Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of unsaturated acids of unsaturated hydroxy carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/52—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change in the physical state, e.g. crystallisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/60—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by treatment giving rise to chemical modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种丹酚酸A钠盐水合物及其制备方法。具体地，本发明提供的丹酚酸A钠盐水合物是由丹酚酸A、丹酚酸A负离子、金属离子、和水分子形成的晶体，具有更高的稳定性和更好水溶性，而且具有较低的生产成本和较高的纯度。

Description

一种丹酚酸A钠盐水合物及其制备方法
技术领域
本发明属于化学领域，具体地说，本发明涉及一种丹酚酸A钠盐水合物及其制备方法。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高，动物性食品在饮食中的比例逐渐增大，其中的饱和脂肪酸与胆固醇形成不溶性脂蛋白，沉积于动脉血管壁逐渐形成斑块，斑块逐渐长大后形成动脉粥样硬化并逐渐堵塞血管从而引起缺血。另外，由于冷热变化、运动、情绪激动等各种原因可能会导致斑块脱落并随血流逐渐流动至毛细血管，进而堵塞毛细血管从而阻断血流，导致相应的组织和器官缺血，从而引起缺血性损伤。
抗凝血药、溶栓药、抗血小板药物、机械取栓、血管支架、搭桥手术等药物和手术手段可以抑制血栓的形成或去除血栓，复通后血液中充足的氧气，会导致再灌注部分产生自由基等“活性氧”，产生“再灌注损伤”，对机体同样有害，甚至可能会危及生命。
上述的缺血/再灌注损伤，可以发生于人体的心脑血管、肝脏、肾脏、神经系统、糖尿病人坏死的肢体部位等，对人类健康造成了极大的威胁。
丹参来源于唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza)的干燥根及根茎，其中的水溶性酚酸类化合物是主要的活性成分之一，其中包括丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸、丹参素等。研究表明丹酚酸A是丹参中活性最高的化合物(Lu,Y.；Foo,L.Y.,Polyphenolics of Salvia--a review.Phytochemistry 2002,59,(2),117-40；Liu,G.T.；Zhang,T.M.；Wang,B.E.；Wang,Y.W.,Protective action of seven natural phenoliccompounds against peroxidative damage to biomembranes.BiochemicalPharmacology 1992,43,(2),147-152；Jiang,B.；Li,D.；Deng,Y.；Teng,F.；Chen,J.；Xue,S.；Kong,X.；Luo,C.；Shen,X.；Jiang,H.；Xu,F.；Yang,W.；Yin,J.；Wang,Y.；Chen,H.；Wu,W.；Liu,X.；Guo,D.A.,Salvianolic acid A,a novel matrix metalloproteinase-9inhibitor,prevents cardiac remodeling in spontaneously hypertensiverats.PLoS One 2013,8,(3),e59621)，其活性包括抗炎、抗氧化等，体内外试验显示其对多种疾病具有很好的治疗效果。
然而，由于其强大的抗氧化作用，丹酚酸A的稳定性极差，在存放过程中极容易因氧化、水解等作用降解，难以满足其作为一种药物开发的需求。另外，由于丹参水溶性成分结构相近、性质类似，且具有较强的水溶性，导致其纯化非常困难，低成本、高效的高纯度丹酚酸A样品制备工艺一直是一个难题。
中国专利文献CN200810223651.1公开了一种90％丹酚酸A的制备工艺。然而，90％的纯度较难支持其作为化药新药的开发(由于在一般剂量范围，化药要求对含量超过0.1％的杂质定性研究，超过0.15％的杂质进行安全研究，所以可能会涉及大量的质量、杂质及安全性研究，显著增加药物安全风险，大幅增加研发难度及成本)，尤其是作为一种注射剂开发时存在难以克服的困难。
中国专利文献CN 201310487751.6制备得到了丹酚酸A冻干粉，纯度可以超过97％，且能够放大至工业生产规模。但是该产品是一种无定型冻干粉，在此种状态下的丹酚酸A稳定性较差，长期存放时需要放置于-20℃以下才能保持长期稳定，在实际的生产、储运和使用过程中会显著增加难度及各项成本。
中国专利文献CN 201710055331.9开发了一种丹酚酸A结晶的制备方法，其纯度可达99.5％以上，并且结晶状态下的稳定性也显著提高。但是，该结晶的水溶解性较差，且需要较长的时间才能溶解，难以满足临床上作为一种注射制剂使用的要求(需要快速溶解于水溶液中)。
由于丹酚酸A的口服生物利用度极低(比格犬的口服生物利用度仅1.47-1.84％)(Sun,J.,et al.(2013)."Pharmacokinetic study of salvianolic acid A in beagledog after oral administration by a liquid chromatography-mass spectrometrymethod:a study on bioavailability and dose proportionality."J.Ethnopharmaco.l148(2):617-623.)，为了保证有效性，其新药开发需要以非口服制剂为主。由于心脑血管疾病发病急，静脉注射制剂是其首选的剂型。
因此，本领域的技术人员致力于开发一种纯度高、稳定性强、水溶性好、易于制备的，且满足药物开发(尤其是静脉注射剂药物)的丹酚酸A原料药及其生产工艺，用于缺血性心脑血管疾病以及机体组织、器官氧化应激损伤性疾病的预防与治疗。
发明内容
本发明的目的在于提供一种丹酚酸A钠盐水合物、其制备方法及用途。
本发明的第一方面，提供了一种式I所示的丹酚酸A钠盐水合物，
所述丹酚酸A钠盐水合物分子式为C26H22O10·C26H21O10·Na·8(H2O)。
在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：12.00±0.1、18.86±0.1、19.02±0.1、和22.28±0.1。
在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：16.66±0.1、17.78±0.1、21.88±0.1、24.22±0.1、25.50±0.1、和25.80±0.1。
在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：
6.76±0.1、6.98±0.1、7.12±0.1、8.50±0.1、10.80±0.1、11.38±0.1、12.00±0.1、12.28±0.1、12.68±0.1、13.70±0.1、13.98±0.1、14.30±0.1、16.26±0.1、16.66±0.1、17.02±0.1、17.48±0.1、17.78±0.1、18.12±0.1、18.38±0.1、18.86±0.1、19.02±0.1、19.42±0.1、19.92±0.1、20.18±0.1、20.88±0.1、21.52±0.1、21.72±0.1、21.88±0.1、22.08±0.1、22.28±0.1、22.74±0.1、23.10±0.1、23.58±0.1、23.92±0.1、24.22±0.1、24.76±0.1、24.98±0.1、25.20±0.1、25.50±0.1、25.80±0.1、26.32±0.1、27.04±0.1、27.78±0.1、27.96±0.1、28.22±0.1、29.16±0.1、29.64±0.1、30.36±0.1、30.54±0.1、31.34±0.1、31.64±0.1、31.86±0.1、32.28±0.1、32.54±0.1、32.80±0.1、33.56±0.1、34.44±0.1、35.34±0.1、35.98±0.1、36.24±0.1、36.52±0.1、37.96±0.1、38.30±0.1、38.60±0.1、39.14±0.1、41.10±0.1、43.80±0.1、和45.04±0.1。。
在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物物具有基本如图4所示的X-射线粉末衍射谱图(XRPD)。
在另一优选例中，式I所示的丹酚酸A钠盐水合物通过本发明第三方面所述制备方法制备得到。
本发明的第二方面，提供了一种丹酚酸A钠盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为： α＝γ＝90.0°,β＝117.5±0.1°。
在另一优选例中，晶胞参数为：α＝γ＝90.00°，β＝117.480°。优选地，晶胞体积/>晶胞内不对称单位数Z＝4。
在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物晶体的绝对构型为：
在另一优选例中，所述丹酚酸A钠盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为C2空间群。
本发明的第三方面，提供了一种丹酚酸A钠盐水合物的制备方法，所述方法包括步骤：
(1)制备具有第一温度的丹酚酸A溶液；
(2)向步骤(1)获得的丹酚酸A溶液中加入钠盐，搅拌使得所述钠盐溶解；
(3)对步骤(2)的溶液降温至第二温度进行析晶，从而获得所述丹酚酸A钠盐水合物；
其中，所述第一温度为40-80℃；所述第二温度为0-20℃。
在另一优选例中，所述第一温度为40-60℃；优选地为约50-60℃。
在另一优选例中，所述步骤(2)加入的钠盐为含钠的强碱强酸盐(钠的强酸盐)，如氯化钠、硫酸钠、硫酸氢钠、溴化钠、磷酸二氢钠等。
在另一优选例中，所述步骤(1)中所得丹酚酸A溶液中，丹酚酸A的质量浓度≥5％；更优的，≥10％；最优的，≥20％。
在另一优选例中，所述步骤(1)中所得丹酚酸A溶液中，丹酚酸A的质量浓度为约5％-20％；优选地为约5％-15％。
在另一优选例中，所述步骤(3)中降温速率为0.1℃/min-3℃/min；优选地降温速率为0.1℃/min-2℃/min；更优选地降温速率为0.1℃/min-0.3℃/min。
在另一优选例中，所述步骤(3)中先以1-2℃/min的速度降温至约20℃，保持该温度至出现结晶浑浊后，进一步以0.1-1℃/min的速度降温至0-4℃并保温。
在另一优选例中，所述第二温度为0-20℃；优选地，所述第二温度为1-15℃；更优选地，所述第二温度为4-10℃。
在另一优选例中，所述步骤(2)中降温析晶过程中，不停搅拌。
在另一优选例中，所述步骤(2)中降温至第二温度后，析晶5-48h；优选地，析晶8-36h；更优选地，析晶8-24h。
在另一优选例中，所述方法还包括步骤，对获得的所述丹酚酸A钠盐水合物进行真空干燥处理。优选地，真空干燥处理温度为10-30℃。
在另一优选例中，所述方法还包括步骤，对获得的所述丹酚酸A钠盐水合物进行重结晶处理；优选地，所述重结晶步骤包括：
(a)将丹酚酸A钠盐水合物溶于具有第一温度的含水溶剂中，获得丹酚酸A盐溶液；
(b)对步骤(a)的溶液降温至第二温度进行析晶，从而获得所述丹酚酸A钠盐水合物精制品；
其中，所述第一温度为40-80℃；所述第二温度为0-20℃。
在另一优选例中，所述第一温度为45-70℃；优选地为约50℃。
在另一优选例中，所述步骤(a)中所得溶液中，丹酚酸A的质量浓度为约5％-20％；优选地为约5％-15％。
在另一优选例中，所述步骤(b)中降温速率为0.1℃/min-1℃/min；优选地降温速率为0.1℃/min-0.5℃/min；更优选地降温速率为0.1℃/min-0.3℃/min。
在另一优选例中，所述第二温度为0-20℃；优选地，所述第二温度为1-15℃；更优选地，所述第二温度为4-10℃。
在另一优选例中，所述步骤(b)中降温析晶过程中，不停搅拌。
在另一优选例中，所述步骤(b)中降温至第二温度后，析晶5-48h；优选地，析晶8-36h；更优选地，析晶12-24h。
在另一优选例中，所述方法还包括步骤，对获得的所述丹酚酸A钠盐水合物精制品进行真空干燥处理。优选地，真空干燥处理温度为10-30℃。
在另一优选例中，所述方法中，丹酚酸A原料的HPLC纯度≥70％；优选地，丹酚酸A原料的HPLC纯度≥80％；或者，丹酚酸A原料的HPLC纯度在约75％-95％之间。
在另一优选例中，所述含水溶剂中水的质量分数≥70％；优选地≥80％；更优选地≥90％。
在另一优选例中，所述含水溶剂选自：水、乙醇水溶液、丙酮水溶液等。
在另一优选例中，所述步骤(2)中，丹酚酸A和钠盐的摩尔比为1－3：3-1；优选为：1－3：1-2；最优选地为2：1。
本发明的第四方面，提供了本发明第一方面所述丹酚酸A钠盐水合物或本发明第二方面所述的丹酚酸A钠盐水合物晶体的用途，用于制备治疗或预防疾病的药物组合物，所述疾病选自：心脑血管疾病、氧化应激损伤、免疫系统疾病、高脂血症、糖尿病并发症等。
所述疾病为缺血性心脑血管疾病、器官或组织(例如心脑血管、肝、肾、神经系统等)因氧化应激损伤导致的相关疾病(如缺血/再灌注导致的上述器官或组织的相关损伤)。
本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，包含：
本发明第一方面所述的丹酚酸A钠盐水合物或本发明第二方面所述的丹酚酸A钠盐水合物晶体；以及药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述药物组合物由本发明第一方面所述的丹酚酸A钠盐水合物和药学上可接受的载体构成。
在另一优选例中，所述药物组合物为注射剂。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1是丹酚酸A钠盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据；
图2是丹酚酸A钠盐水合物单晶不对称单位的立体结构椭球图；
图3是丹酚酸A钠盐水合物单晶沿b方向的晶胞堆积投影图；
图4是丹酚酸A钠盐水合物结晶的粉末衍射图；
图5是丹酚酸A钠盐水合物的粉末衍射2θ值列表；
图6是本发明制备的丹酚酸A钠盐水合物单晶显微照片(10×目镜+4×物镜)；
图7是根据专利文献CN201910643821.X方法制得的丹酚酸A钠盐复合物结晶性粉末的显微照片(10×目镜+4×物镜)；
图8显示丹酚酸A钠盐水合物结晶对过氧化氢导致的HepG2细胞损伤的保护作用。
具体实施方式
经过广泛而深入的研究，本发明人意外制得一种丹酚酸A、丹酚酸A负离子、钠离子、水分子组成的复合物。经过X射线单晶衍射、X射线粉末衍射等确定了该类复合物晶体的晶型、结晶水等特性，证明了本发明制备得到的丹酚酸A钠盐水合物，是一种新的物质，具有新的晶型，其纯度超过99％。本发明还公开了该类新晶型的制备方法，以纯度约80％的丹酚酸A为起始原料制备本发明的丹酚酸A钠盐水合物，该丹酚酸A钠盐水合物能够应用于缺血性脑血管疾病和缺血性心血管疾病的治疗。而且该丹酚酸A钠盐水合物具有生产成本低、产物纯度高、稳定性好、水溶性好的特点。
在描述本发明之前，应当理解本发明不限于所述的具体方法和实验条件，因为这类方法和条件可以变动。还应当理解本文所用的术语其目的仅在于描述具体实施方案，并且不意图是限制性的，本发明的范围将仅由所附的权利要求书限制。
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
虽然在本发明的实施或测试中可以使用与本发明中所述相似或等价的任何方法和材料，本文在此处例举优选的方法和材料。
具体地，本发明制备了一种由丹酚酸A、丹酚酸A负离子、钠离子、水分子组成的复合物(纯净物)，得到了其单晶体，并以市场上的常见阳性药物为对照，研究了该复合物对于缺血性脑血管疾病和缺血性心血管疾病的治疗作用。
与无定型丹酚酸A冻干粉对比，该系列结晶复合物具有纯度高、稳定性好、生产成本低等特点。与已报道的丹酚酸A结晶对比，该系列结晶复合物表现为单晶、且具有水溶性好、生产成本低的特点，更适用于将其开发成静脉注射制剂。与阳性药物丁苯酞氯化钠注射液、注射用丹参多酚酸、注射用丹参多酚酸盐对比，该系列结晶复合物具有显著降低脑/心肌梗死面积、显著降低模型动物死亡率、显著改善脑缺血/心肌缺血模型动物肢体功能恢复的效果。该系列结晶复合物可应用于缺血性心脏病和缺血性脑血管疾病的治疗，作为相关药物注射制剂原料药(API)使用。
可以采用如下多种方式和仪器对本发明的丹酚酸A钠盐水合物性质进行研究，例如采用X射线单晶衍射、X射线粉末衍射、示差扫描量热分析、热重分析法(TGA)进行分析。这些分析方法可以为本领域常规的方法。
例如X射线单晶衍射分析可以采用Bruker D8 Venture单晶X射线衍射仪，测试条件：CuKα辐射，扫描。
经X射线单晶衍射分析，获得了本发明的丹酚酸A钠盐水合物的单晶特征，及结构类型。
具体地，测得丹酚酸A钠盐水合物晶体的绝对构型为：
所述丹酚酸A钠盐水合物晶体，对其采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，C2空间群，晶胞参数为： α＝γ＝90.0°,β＝117.5°。
本发明所述测定晶型的X射线粉末衍射的方法在本领域中是已知的。本发明的具体检测条件可参考本发明各晶体的X射线粉末衍射图谱。结果表明，本发明的各晶体在X-射线粉末衍射(XRPD)图中具有特定的特征峰。
某一化合物能否结合溶剂成为溶剂合物或结合几分子溶剂，并没有规律可循。分子结构相同但晶型不同时，有可能具有不同的生物利用度、溶解度、溶解速率、化学物理稳定性、熔点、颜色、可滤性、密度和流动性。有些多晶型物由于形状或吸湿性而难于制成制剂。X射线粉末射线衍射谱图是晶型鉴定的必要方式，但不是唯一方式。水合物晶型，由于水与化合物结合的方式不同，可能导致其X射线粉末射线衍射谱图相似，但其他的表征数据不同，如DSC谱图。同一药物，不同的晶型或不同的溶剂合物，会表现出稳定性、流动性、吸湿性、溶解性、可压缩性的不同，都会对药物的应用有重要的影响，从而大大影响药物的生物利用度及使用便捷性。
例如，专利文献CN201910643821.X和CN201710067693.X中描述了一种丹酚酸A盐复合物，其结构中包含丹酚酸A分子、丹酚酸A负离子、和阳离子，但是不含结晶水，测试其水溶性为“略溶”。为了对比该专利文献所述“丹酚酸A盐复合物”与本发明所述“丹酚酸A钠盐水合物”的差别，参考其方法，制备了丹酚酸A钠盐复合物，图6和图7可见本发明丹酚酸A钠盐水合物单晶与丹酚酸A钠盐复合物的显微照片。由图可见，本发明所制备的丹酚酸A钠盐水合物为清晰可见的“单晶”，而丹酚酸A钠盐复合物为“结晶性粉末”，未见明显的“单晶”。本发明制备的丹酚酸A钠盐水合物与对比专利的丹酚酸A钠盐复合物的差异如下：
前者为单晶、纯净物、化学组成稳定，水溶解性好；
后者为结晶性粉末、混合物、理论上并不能保证其化学组成的稳定性(如丹酚酸A分子与丹酚酸A钠的比例)，水溶解性较差；
根据医药注册法规，注射剂原料药最基本的特征为组成成分固定，且为纯净物。本发明制备的丹酚酸A钠盐水合物单晶相比较对比专利的丹酚酸A钠盐复合物结晶性粉末，作为注射剂原料药使用时，具有显著的优势。
本发明还提供了一种丹酚酸A的结晶工艺，通过该结晶工艺，得到了一种丹酚酸A钠盐水合物的新晶型。同干燥工艺得到的无定型固体粉末相比，该结晶具有纯度高、生产成本低、更加稳定的优点，能够满足注射剂新药原料药的生产需求。与文献报道的丹酚酸A晶体相比，本发明得到的丹酚酸A钠盐水合物结晶，具有产物纯度高、生产成本低、产物水溶性好等优势，适用于丹酚酸A注射制剂的开发。
活性成分
如本文所用，术语“活性成分”或“活性化合物”指本发明的丹酚酸A钠盐水合物。
本发明公开了一种丹酚酸A钠盐水合物结晶及其制备方法。
丹参药材参考《中国药典》(一部)(2020版)中“丹参水提物的制备”的制法制备丹参水提物。后者经过反应制备丹酚酸A粗品，再经过树脂柱层析后，得到纯度≥80％的丹酚酸A样品。再将该样品经过结晶、重结晶的过程，制备得到高纯度丹酚酸A钠盐水合物结晶。该结晶由丹酚酸A、丹酚酸A负离子、阳离子、和水分子组成。该一系列复合物皆为新的纯净物质，并具有全新的晶型，相比起无定型丹酚酸A粉末，其具有稳定性好、溶解性好的特点，相比较丹酚酸A结晶，其具有水溶性好的特点。本发明制备的丹酚酸A钠盐水合物更适用于静脉注射剂的开发，其应用于缺血性脑卒中和缺血性心血管疾病的治疗，效果显著好于阳性药物丁苯酞氯化钠注射液和注射用丹参多酚酸盐。
药物组合物和施用方法
由于丹酚酸A可用于治疗以下疾病：心血管疾病(如缺血性心脏病、脑卒中)、高脂血症、糖尿病及其并发症等等。因此，本发明的丹酚酸A钠盐水合物可以用于治疗或预防上述疾病。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明的丹酚酸A钠盐水合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：丹酚酸A钠盐水合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明的晶型物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明的晶型物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个注射剂量或一个胶囊或药片。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效或者稳定性等。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、崩解剂、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明的丹酚酸A钠盐水合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。优选地，采用注射方式给药，如静脉注射。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。本发明的丹酚酸A钠盐水合物由于其优异的溶解性，因此特别适用于注射给药。
用于局部给药的本发明的晶型物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明的丹酚酸A钠盐水合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明的晶型物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选10～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点在于：
(1)本发明制备得到的丹酚酸A钠盐水合物结晶，与丹酚酸A冻干粉末相比，稳定性更强，更耐高温、高湿、强光照射等；
(2)本发明制备得到的丹酚酸A钠盐水合物结晶水溶性更好，且具有显著更快地溶解速率，适合作为注射剂使用。
(3)本发明提供的制备丹酚酸A结晶的方法，可以采用低纯度的丹酚酸A原料(约80％即可)为起始原料进行结晶，因此极大的降低了丹酚酸A结晶制备的成本。
(4)本发明提供的制备丹酚酸A结晶的方法，产物纯度高，收率大，方便工业生产。
下面结合具体实施例，进一步详陈本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
实施例1丹酚酸A钠盐水合物结晶的制备
称取丹参药材25kg，参照《中国药典》(2020版一部)第415页中“丹参水提物”的制备方法，制备丹参水提物，产物进一步参考中国专利文献CN201310487751.6)中所述的方法，制备得到纯度≥80％的丹酚酸A产品(溶液)，并计算产物中丹酚酸A的量(实际测得HPLC纯度≥90％，丹酚酸A约220g)。
丹酚酸A溶液中加入定量的氯化钠固体(丹酚酸A1/2物质的量)，溶解后60℃浓缩至20％(以丹酚酸A计)。以约1℃/min的降温速度降温至20℃，期间不断搅拌。继续搅拌至溶液出现浑浊，再进一步以0.5℃/min的降温速度将整个体系降温至4℃，继续搅拌析晶8h。
析晶后过滤，获得的晶体在以五氧化二磷为干燥剂的干燥器内室温真空干燥，得到丹酚酸A钠盐结晶粉末(约150g)，以丹酚酸A计，其HPLC纯度99.6％。。选取≥0.5mm粒径的结晶颗粒用于进行X射线单晶衍射分析与X射线粉末衍射分析。
图1是丹酚酸A钠盐水合物的X射线单晶衍射晶体数据；
图2是丹酚酸A钠盐水合物单晶不对称单位的立体结构椭球图；
图3是丹酚酸A钠盐水合物单晶沿b方向的晶胞堆积投影图；
图4是丹酚酸A钠盐水合物结晶的粉末衍射图；
图5是丹酚酸A钠盐水合物的粉末衍射2θ值列表；
图6是本实施例制备的丹酚酸A钠盐水合物单晶显微照片(10×目镜+4×物镜)。
图7是根据专利文献CN201910643821.X方法制得的丹酚酸A钠盐复合物结晶性粉末的显微照片(10×目镜+4×物镜)。
经X射线单晶衍射，可以确定丹酚酸A钠盐水合物的绝对构型为：
TGA检测结果表明，晶体中结晶水含量与单晶衍射检测结果一致。
实施例2丹酚酸A钠盐水合物结晶与丹酚酸A结晶、丹酚酸A冻干粉的稳定性对比
稳定性是判断一种化合物是否具有成药性的关键特征之一，只有化合物具有一定的稳定性，才能在整个货架期(一般不少于2年)内保持稳定，不会降解成其他杂质从而增加药物的安全风险，降低药物的疗效。
一般化合物会随着温度、光照强度、湿度等的增加，导致稳定性逐渐降低，或者理化性质明显改变从而导致药品本身不合格。虽然降低药品的储藏温度、包装条件等，可以相对增加其稳定性，但是此过程会显著增加药物的成本，以及生产、储运、使用过程中的难度，显著降低药物的商业价值。
最准确的稳定性试验需要模拟药品在使用过程中的真实存储环境(如25℃条件下恒温、恒湿、避光保存)，但也可以通过更苛刻的条件，“加速”待测化合物的降解过程，来预测产品的稳定性，其中常用的方法包括“影响因素试验”。
本次试验采用实施例1制备得到的丹酚酸A钠盐水合物结晶，丹酚酸A结晶(制备方法参考中国专利文献：201710055331.9)及丹酚酸A冻干粉(制备方法参考中国专利文献：201310487751.6)，对比研究三者的稳定性。
本实施例参考《中国药典》2020版四部第457页中所述的试验方法，简述如下：
将供试品置于适当的开口容器中(如称量瓶或培养皿)，摊成厚度≤5mm的薄层，进行如下试验：
高温试验：供试品开口置于洁净容器中，60℃温度下放置10天后取样HPLC检测，并与0天时的样品对比。
高湿试验：供试品开口置于恒湿密闭容器中，在25℃条件下分别于相对湿度90±5％条件下放置10天后取样HPLC检测，并记录样品放置前后的重量，以考察样品的吸湿情况。(选择KNO3饱和溶液共同放置于密闭容器中营造高湿环境：25℃时相对湿度92.5％)，并与0天时的样品对比。
强光照射试验：供试品开口放置于装有日光灯的光照箱内，于照度4500lx±500lx条件下照射10天后取样HPLC检测，留意供试品外观变化，并与0天时的样品对比。
丹酚酸A钠盐水合物结晶、丹酚酸A结晶及丹酚酸A冻干粉末影响因素试验结果见表1。
表1.高温、高湿、强光照射影响因素试验前后的产品质量统计表
由本实施例结果可知，丹酚酸A钠盐水合物结晶与丹酚酸A结晶，都具有较好的稳定性，经过高温、强光照试验后产物降解非常少，且在高湿试验是产品不易吸潮，仍然保持较好的外观状态及较高的纯度，适合于作为新药的原料药开发。相比之下，丹酚酸A冻干粉在高温和强光照条件下皆不稳定，降解严重，在高湿条件下吸潮严重，已呈油滴状，外观判断已经不合格，故未进行进一步HPLC检测。
本次实施例结果，与结晶稳定性一般强于无定型态的常识相符，表明结晶的成药性显著好于无定型态。
实施例3丹酚酸A钠盐水合物结晶与丹酚酸A结晶、丹酚酸A冻干粉的水溶性对比
丹酚酸A的口服生物利用度非常低，并且其作为缺血性心脑血管疾病治疗药物，用于病人急性发作期时，静脉注射制剂是其首选的剂型。由于静脉注射制剂几乎只能采用水作为溶剂，因此样品的水溶性对于化合物的成药性非常重要。
本实施例采用实施例1制备得到的丹酚酸A钠盐水合物结晶，丹酚酸A结晶(制备方法参考中国专利文献：201710055331.9)及丹酚酸A冻干粉(制备方法参考中国专利文献：201310487751.6)，对比研究产品的水溶性，探索其作为静脉滴注用原料药的可行性。
溶解度测定的方法参照《中国药典》(2020版四部)中所描述的方法(为了将其开发成静脉注射制剂，仅研究其在水中的溶解度)，如下：
将上述几种样品，分别粉碎，过5号药典筛。分别称取样品，加入不同体积的纯水，按照药典所描述的实验方法及判断标准(称取研成细粉的供试品，于25℃±2℃一定容量的溶剂中，每隔5分钟强力振摇30秒；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒时，即视为完全溶解)，溶解性能分为极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解。记述几种样品的溶解性，如下：
丹酚酸A冻干粉：
“极易溶解”判断：0.12g样品于0.1mL水中，30min不溶；
“易溶”判断：0.12g样品于1mL水中，5min溶解；
“溶解”判断：0.12g样品于3mL水中，瞬间溶解(≤10s)。
结论：丹酚酸冻干粉的水溶解性为“易溶”。
丹酚酸A结晶：
“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；
“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，30min不溶；
“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，5min不溶，10min不溶，15min不溶，20min不溶，25min不溶，30min溶解。
结论：丹酚酸A结晶的水溶解性为“溶解”。结合临床使用情况，0.12g样品于3mL水中25-30min溶解，难以满足临床需求。
丹酚酸A钠盐水合物结晶：
“极易溶解”判断：0.12g结晶于0.1mL水中，30min不溶；
“易溶”判断：0.12g结晶于1mL水中，5min溶解；
“溶解”判断：0.12g结晶于3mL水中，瞬间溶解(≤10s)。
结论及讨论：丹酚酸A钠盐水合物的水溶解性为“易溶”。结合临床使用情况，0.12g药品于3mL水溶瞬间溶解，能够满足其临床需求。
本实施例的结构表明，丹酚酸A冻干粉和丹酚酸A钠盐结晶水合物，都具有较好的水溶性，适合于作为静脉注射制剂开发。丹酚酸A结晶的水溶解性较差，难以直接作为静脉注射制剂开发，若将其开发成静脉注射制剂，需要在制剂生产工业和处方工艺中做更多的改进才行。
丹酚酸A冻干粉和丹酚酸A钠盐水合物结晶具有较好的水溶性，前者可能是因为冻干粉为疏松多孔的结构，有利于水进去内部加速溶解速度；而后者可能是因为水合物本身含有水分子位于丹酚酸A分子的周围，且其中存在钠盐，使其更容易快速溶解于水中。
实施例4丹酚酸A钠盐水合物对氧化应激造成的肝细胞损伤的保护作用
本实施例计划采用HepG2肝细胞，研究丹酚酸A钠盐水合物结晶对由H2O2氧化应激造成的细胞损伤的保护作用。试验采用H2O2制造氧化胁迫，MTT法测定细胞凋亡的情况，具体方法参考文献(张业尼等，过氧化氢诱导HepG2细胞氧化应激模型的建立.食品研究与开发，2018,39(05):160-164)。
丹酚酸A钠盐水合物结晶对过氧化氢导致的HepG2的作用见图8。
结果显示，经过H2O2处理后，相比较未接受处理的CK组，HepG2细胞的活力显著降低(至约20％)。体系中加入丹酚酸A钠盐水合物后，细胞的活力逐渐增加，并且随着添加浓度的增加，呈现一定的药物-剂量效应(2.5-100mg/kg)，且呈现显著的差异。在100mg/kg剂量时，丹酚酸A的保护效力几乎达到了最大值(至约85％)，不再随剂量的增加而提高。
实施例5丹酚酸A钠盐水合物结晶在缺血性心血管疾病中对心肌的保护作用
本实施例中，选择市场上的畅销药物作为阳性药，对比丹酚酸A钠盐水合物结晶与阳性药物对缺血性心脏病模型动物心肌梗死面积的影响。
本实施例中的丹酚酸A钠盐水合物结晶采用实施例1中的方法制备。阳性药物选择注射用丹参多酚酸盐(绿谷制药)，其主要成分为丹酚酸B镁盐为主的(含量85％)丹参水溶性酚酸类化合物，是目前市场上最畅销的心肌缺血药物之一，有大量的文献报道其活性。
本试验选用SD大鼠，其模型构建方法如下：
缺血不灌注模型：
大鼠禁食12h，称重后用15％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉。左侧胸壁剃毛消毒后于胸骨左侧3-4根肋骨间横切口切开皮肤，用止血钳钝性分离各肌层并刺破胸膜，再用两把止血钳横行夹住胸骨，在两钳之间剪断胸骨，插入牵引器撑开肋骨，剪开心包膜暴露心脏，在前室间沟可见心大静脉，以此为标志，在左心耳下离根部约2-3mm用2×6带线圆针6-0号医用棉纶单丝线绕过动脉深面，在肺动脉圆锥旁沟出针，深约1mm，宽约2mm。把丝线两端从一直径2mm聚乙烯管中传出备用。稳定10min后，把一棉签棒插入PE管，拉紧丝线用棉签棒将PE管向前推，直至阻断冠状动脉血流，完成缺血模型构建。
心肌缺血后，大鼠尾静脉给药一次，24h处死大鼠，检测其心肌梗死面积。
缺血再灌注模型：
缺血再灌注模型的构建，前期同缺血不灌注模型，心肌缺血后，将棉签棒从PE管中拔出，即可实现再灌注。再灌注后，大鼠静脉给药一次，24h后处死大鼠，检测其心肌梗死面积。
丹酚酸A钠盐水合物及阳性药物在缺血性心脏病模型动物中对心肌梗死面积的影响结果见表2。
表2丹酚酸A钠盐水合物结晶与阳性药物在心肌缺血模型中对心脏的保护作用
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001vs溶媒对照组
丹参多酚酸盐来源于丹参水溶性成分，属于中药大品种，是市场上最畅销的心血管疾病治疗药物之一，其中丹酚酸B镁盐含量超过85％以上。动物试验和临床人体试验都显示了其在心血管疾病领域较好的治疗效果，本实施例的结果亦支持该观点。
本实施例中丹酚酸A钠盐水合物结晶和丹参多酚酸盐皆对缺血大鼠的心肌产生了较好的保护效果，其中前者产生最大治疗效果时药物剂量为10mg/kg，后者为60mg/kg，且前者的药物最大效应亦好于后者，显示其可能具有更低的用药剂量和更好的治疗效果。
实施例6丹酚酸A钠盐水合物结晶在缺血性脑血管疾病中对大脑的保护作用
本实施例中，选择市场上的畅销药物作为阳性药，对比丹酚酸A钠盐水合物结晶与阳性药物对脑中风模型动物大脑梗死面积的影响。阳性药物选择丁苯酞氯化钠注射液，为《中国缺血性脑卒中诊疗指南》(2018版)中推荐的缺血性脑卒中治疗药物。
本试验选用SD大鼠，构建缺血性脑卒中试验动物模型，方法如下：
缺血不灌注模型：大鼠中动脉栓塞-电凝法
SD大鼠称重，用15％的水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，左侧侧卧固定在大鼠手术台，左侧颞顶部及面部剃毛，用75％乙醇消毒后在左眼和左耳之间，切开皮肤，钝性分离颞肌和咬肌，暴露颞骨翼板，于手术显微镜下，在颞骨和颞鳞骨结合靠近口侧1mm处用颅骨钻研磨出2mm×2mm的骨窗，用撬棒撬开颅骨。此时，透过硬脑膜即可见一条较直且分支较少的血管，即为大脑中动脉。用双极电凝镊在嗅束内1mm至大脑下静脉之间处烧灼，将血流彻底阻断后止血，依次缝合颞肌和皮肤，然后尾静脉注射给药。待大鼠苏醒后，放回笼中继续饲养24h。
缺血再灌注模型：大鼠中动脉栓塞-线栓法
大鼠称重后用15％水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧固定在大鼠手术台上，颈部剃毛，75％乙醇消毒，手术剪纵向剪开皮肤，手术分离暴露一侧颈总动脉，沿颈总动脉上行分离并结扎颈外动脉和翼突颚动脉，在颈总动脉的近心端放置动脉夹阻断血流，于远心端用眼科手术剪剪一个小口，插入栓线，缓缓推入栓线(约20mm)至前脑动脉再往回抽出约2mm即至大脑中动脉口，结扎栓线和血管，缝合皮肤。脑组织缺血后，尾静脉注射给药一次，放回笼中饲养。
丹酚酸A钠盐水合物结晶及阳性药物在缺血性脑中风模型动物中对大脑梗死面积的影响结果见表3。
表3丹酚酸A钠盐水合物与阳性药物在缺血性脑中风模型动物中对脑梗死面积的影响
*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001vs溶媒对照组
丁苯酞是市场上畅销的缺血性脑卒中治疗药物，被《中国缺血性脑卒中诊疗指南》(2018版)所推荐，其疗效得到业界公认，本实施例的结果亦支持其在其中的治疗作用。
本实施例的结果表明，丹酚酸A钠盐结晶和丁苯酞在缺血再灌注和缺血不灌注两个模型中，都具有较好的治疗缺血性脑卒中的作用。丹酚酸A在10mg/kg时达到最大治疗效应，而丁苯酞在3mg/kg时达到最大治疗效应，其中前者的最大效应显著好于后者。
实施例7丹酚酸A钠盐水合物对脑缺血再灌注大鼠血清MDA、SOD、IL-1β和TNF-α的影响
本实施例选择实施例6中大鼠血清，采用试剂盒检测其中与炎症、氧化等相关的细胞因子水平。试剂盒分类如下：
大鼠丙二醛(MDA)酶联免疫试剂盒：上海信裕生物科技有限公司，规格：96T；大鼠超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫试剂盒：上海信裕生物科技有限公司，规格：96T；大鼠白介素1β(IL-1β)酶联免疫试剂盒：上海信裕生物科技有限公司，规格：96T；大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)酶联免疫试剂盒：上海信裕生物科技有限公司，规格：96T。
检测结果如表4：
表4丹酚酸A钠盐水合物与丁苯酞对大鼠血清中MDA、SOD、IL-1β、TNF-α含量的影响
*p<0.05，**p<0.01vs溶媒对照组
本次检测结果表明，丹酚酸A具有增加SOD，降低MDA、IL-1β、TNF-α等活性，这表现为抗氧化、抗炎活性。与溶媒对照组相比，其在高剂量时具有显著差异。在最大效应剂量时，阳性药物丁苯酞不具有显著抗炎、抗氧化活性，表明其治疗机理与上述因素无关。
缺血再灌注损伤是机体中常见的损伤之一，其中再灌注过程中新鲜氧气的加入，使得机体容易产生高活性自由基，其进攻细胞膜、线粒体等关键细胞器，引起细胞坏死、凋亡等，进而导致相应器官的损伤。
缺血再灌注损伤广泛发生于机体各种部位，除了心脑血管外、肝脏、肾脏、神经系统、肺、器官移植等过程中皆可能发生，丹酚酸A钠盐水合物较强的抗炎、抗氧化活性，表明其极有可能可以应用与上述疾病的预防与治疗。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种式I所示的丹酚酸A钠盐水合物，
2.如权利要求1所述的丹酚酸A钠盐水合物，其特征在于，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱在以下2θ值处具有特征峰：12.00±0.1、18.86±0.1、19.02±0.1、和22.28±0.1。
3.如权利要求2所述的丹酚酸A钠盐水合物，其特征在于，所述丹酚酸A钠盐水合物的粉末X-射线衍射图谱还包括在以下2θ值处的特征峰：16.66±0.1、17.78±0.1、21.88±0.1、24.22±0.1、25.50±0.1、和25.80±0.1。
4.一种丹酚酸A钠盐水合物晶体，其特征在于，对所述丹酚酸A钠盐水合物晶体采用X-射线单晶衍射测定为单斜晶系，晶胞参数为： α＝γ＝90.0°,β＝117.5±0.1°。
5.如权利要求4所述的丹酚酸A钠盐水合物晶体，其特征在于，所述丹酚酸A钠盐水合物晶体的绝对构型为：
6.如权利要求4所述的丹酚酸A钠盐水合物晶体，其特征在于，所述丹酚酸A钠盐水合物晶体对其采用X-射线单晶衍射测定为C2空间群。
7.一种丹酚酸A钠盐水合物的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：
(1)制备具有第一温度的丹酚酸A溶液；
(2)向步骤(1)获得的丹酚酸A溶液中加入钠盐，搅拌使得所述钠盐溶解；
(3)对步骤(2)的溶液降温至第二温度进行析晶，从而获得所述丹酚酸A钠盐水合物；
其中，所述第一温度为40-80℃；所述第二温度为0-20℃。
8.权利要求1所述丹酚酸A钠盐水合物或权利要求4所述的丹酚酸A钠盐水合物晶体的用途，用于制备治疗或预防疾病的药物组合物，所述疾病选自：心脑血管疾病、器官或组织的氧化应激损伤、免疫系统疾病、高脂血症、糖尿病并发症等。
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：
权利要求1所述的丹酚酸A钠盐水合物或权利要求3所述的丹酚酸A钠盐水合物晶体；以及药学上可接受的载体。
10.如权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为注射剂。
CN202210098116.8A 2022-01-27 2022-01-27 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法 Pending CN116554031A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210098116.8A CN116554031A (zh) 2022-01-27 2022-01-27 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法
PCT/CN2023/082444 WO2023143633A2 (zh) 2022-01-27 2023-03-20 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210098116.8A CN116554031A (zh) 2022-01-27 2022-01-27 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116554031A true CN116554031A (zh) 2023-08-08

Family

ID=87470828

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210098116.8A Pending CN116554031A (zh) 2022-01-27 2022-01-27 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN116554031A (zh)
WO (1) WO2023143633A2 (zh)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101712618B (zh) * 2008-10-06 2014-07-23 中国医学科学院药物研究所 丹酚酸A的β晶型物质、制法以及药物组合物与用途
CN108341747B (zh) * 2017-01-24 2021-06-18 浙江永宁药业股份有限公司 一种丹酚酸a的晶型及其制备方法
CN110403928A (zh) * 2019-07-17 2019-11-05 正大青春宝药业有限公司 一种丹酚酸a盐复合物及其制备方法和应用
CN113827587A (zh) * 2020-06-24 2021-12-24 中国医学科学院药物研究所 丹酚酸a在制备预防血栓性脑缺血的药物中的应用
CN115304486A (zh) * 2021-05-06 2022-11-08 台州永健医药科技有限公司 丹酚酸a盐水合物、其制备方法及用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023143633A2 (zh) 2023-08-03
WO2023143633A3 (zh) 2023-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2004292351B2 (en) Pharmaceutical composition for the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases
JP6133415B2 (ja) 水酸基ベニバナ黄色素ａナトリウムの製造方法及び用途
CN1762967B (zh) 甘草次酸衍生物、制备方法及其用途
WO2022233310A1 (zh) 丹酚酸a盐水合物、其制备方法及用途
CN101423537A (zh) 灯盏乙素酯及其医疗用途
CN116554031A (zh) 一种丹酚酸a钠盐水合物及其制备方法
ZA200603160B (en) Use of agomelatine in obtaining medicaments intended for the treatment of bipolar disorders
KR101788658B1 (ko) 신규 히드록시 홍화황색소 a의 의약용 정제염
WO2022247860A1 (zh) 一种羟基红花黄色素a的新晶型及其制备方法
JP2008506684A (ja) 「抗ガン性野生チョウセンニンジンの精製エキス調整法及びそのガン融合製剤」
CN1788753B (zh) 一种丹皮总苷提取物及其制备方法和用途
CN112220847A (zh) 鲜柚子肉水提物粉末,其制备,抗血栓作用及应用
CN101019878B (zh) 一种含有丹参丹酚酸a的注射药物组合物及其制备方法
CN101176772B (zh) 一种由蒲黄与红花制成的药物组合物
US9624254B2 (en) Hydroxysafflor yellow pharmaceutical salts
CN101176770B (zh) 银杏叶与蒲黄的药用组合物
CN104523734B (zh) 一种治疗脑梗塞或/和冠心病心绞痛的药物组合物及其制备方法和用途
CN110314153A (zh) 二苯乙烯类化合物治疗缺血性疾病和对抗炎症反应的用途
CN113214206A (zh) 橙皮素与甜菜碱共晶物b及制备方法和其组合物与用途
CN100446771C (zh) 一种药用组合物
CN117899176A (zh) 一种治疗冠心病心绞痛的中药组合物及其制备方法
WO2018232805A1 (zh) 葛根素衍生物及其制备方法和在预防、治疗心脑血管疾病或糖尿病及其并发症中的用途
CN101255149A (zh) 7、4’-二(琥珀酸单酯)氧乙氧基-葛根黄豆苷元及其医药新用途
MXPA06003219A (en) Pharmaceutical composition for the treatment of angiocardiopathy
CN104997836A (zh) 一种治疗心脑血管疾病的葛根人参中药制剂及制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication