CN102266386B - 一种黄芩提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种黄芩提取物，所述的黄芩提取物中含有黄芩苷的重量百分含量为82％～88％。本发明还提供了该黄芩提取物的制备方法和用途。本发明黄芩提取物用于鼻腔给药，药效明确，且药效明显优于黄芩苷纯品，制备方法简便，便于大生产，为临床提供了一种新的选择。

Description

一种黄芩提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种黄芩苷提取物。

背景技术

黄芩(Radix Scutellariae)是唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi(Lamiaceae)的干燥根，在我国分布极广，黑龙江、吉林、辽宁、河南、河北、山东、四川、云南、山西、陕西、甘肃和内蒙古等省均为产地。功能与主治：清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿热、暑热胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。黄芩具有抗炎抗变态反应、抗微生物作用、解热作用、降压、利尿作用，对血脂及血糖的作用，利胆、解痉作用，镇静作用等。

目前黄芩提取物的制备方法较多，如专利申请号：200610014770.7，发明名称：双黄连滴丸及其制备方法，该方法公开了黄芩提取物的制备方法。也有提取高纯度的黄芩中活性成分黄芩苷的文献报道。由于黄芩提取物中含有大量已知或未知成分，不同方法制备得到的黄芩提取物不同，药效也可能不相同。黄芩中成分黄芩苷的含量为不得少于9.0％《中国药典》2010年版，因此，提取分离黄芩苷纯品成本高，不便于大生产用药，不能满足制剂的需求。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种黄芩提取物。本发明的另一技术方案是提供了该黄芩提取物的制备方法和用途。

本发明提供了一种黄芩提取物，所述的黄芩提取物中含有黄芩苷的重量百分含量为82％～88％。

本发明黄芩提取物是由下述方法制备：

a、取黄芩药材，加水煎煮提取，滤液浓缩成清膏，加盐酸调节pH值至1.0～2.0，60-80℃保温1h，静置，滤过，得沉淀物；

b、沉淀物加水搅匀，用20％-40％氢氧化钠调节pH至7，加入与氢氧化钠等量的乙醇，使含醇量为10-47.5％，搅匀，静置12小时，滤过，得滤液；

c、滤液用盐酸调节pH至1～2，60～80℃保温1小时，冷却至室温，静置，滤过，得沉淀；

d、沉淀用10-47.5％乙醇洗涤至pH至6～7，将沉淀减压干燥，即得黄芩提取物。

本发明还提供了一种制备黄芩提取物的方法，它包括如下步骤：

a、取黄芩药材，加水煎煮提取，滤液浓缩成清膏，加盐酸调节pH值至1.0～2.0，60-80℃保温1h，静置，滤过，得沉淀物；

b、沉淀物加水搅匀，用20％-40％氢氧化钠调节pH至7，加入与氢氧化钠等量的乙醇，使含醇量为10-47.5％，搅匀，静置12小时，滤过，得滤液；

c、滤液用盐酸调节pH至1～2，60～80℃保温1小时，冷却至室温，静置，滤过，得沉淀；

d、沉淀用10-47.5％乙醇洗涤至pH至6～7，将沉淀减压干燥，即得黄芩提取物。

其中，a、c步骤所述的保温温度为70℃。

其中，a、c步骤所述的静置时间为12小时。

其中，b步骤所述的氢氧化钠的浓度为40％。

其中，b、d步骤所述的乙醇浓度为47.5％。

本发明提供了所述的黄芩提取物在制备治疗脑缺血的药物中的用途。

本发明提供了所述的黄芩提取物在制备用于鼻腔给药的治疗脑缺血的药物中的用途。

本发明黄芩提取物用于鼻腔给药，药效明确，且药效明显优于黄芩苷纯品，制备方法简便，便于大生产，为临床提供了一种新的选择。

具体实施方式

实施例1本发明黄芩提取物提取方法

取黄芩药材，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入盐酸适量调节pH值至1.0～2.0，70℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水搅匀，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，加等量乙醇，搅拌使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0～2.0，70℃保温30分钟，静置，滤过，沉淀用47.5％乙醇洗至pH值6.0～7.0，挥尽乙醇，减压干燥，即得。

通过此方法制备得到的黄芩提取物中黄芩苷含量为82％～88％。(根据中国药典2010版一部黄芩药材项下方法测定)

实施例2本发明黄芩提取物制备成磷脂复合物的方法

称取一定量的黄芩提取物和PC含量为80的大豆卵磷脂(重量比为1∶2，w/w)，加入无水乙醇，黄芩提取物药物浓度为5.0mg/ml，在55℃恒温水浴中120转/min磁力搅拌2小时，减压回收溶剂，真空干燥，即得黄芩提取物磷脂复合物。

实施例3本发明黄芩提取物不同乙醇浓度对纯化效果的影响试验

实验方法：取500g黄芩药材，加水煎煮提取，将提取液80℃减压浓缩至0.8g/ml的浓度，加入盐酸调节pH至1～2，70℃保温1小时，静置12小时，滤过，加适量水洗涤沉淀，将沉淀加10倍量水分散均匀，用20％氢氧化钠调节pH至7，将此溶液等分成10份，其中5份分别加入不同量的乙醇(使含醇量达到10、20、30、40、47.5％)进行醇沉以除去非黄酮类杂质和无机杂质，而后取上清液用盐酸调节pH至1～2，70℃保温1小时，室温静置12小时，得到沉淀，沉淀用相应浓度乙醇洗涤至pH至7，沉淀减压干燥，即得最终样品。

含量测定供试品制备：精密称取各组沉淀约30mg，置于50ml量瓶中，加约40ml甲醇超声20min，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液2ml用甲醇定容至25ml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。结果见下表。黄芩苷对照品储备液(0.0511mg/ml)面积分别为25.5816、25.4954，平均面积为25.5385。

表1不同乙醇含量纯化考察结果

本发明工艺中pH7.0，再加入等量95％的乙醇。在研究过程中，先后考察了介入不同乙醇量，使药液中含乙醇量分别达到10％、20％、30％、40％、47.5％，结果加入乙醇后使含醇量为10～30％范围内时，提取物中黄芩苷的含量在62％～68％之间，黄芩苷较为接近，考虑到收率和生产成本等因素，最终确定以10％含醇量所得产物作为目标产物；而40％和47.5％含醇量的提取物黄芩苷含量在82％～88％之间，最终确定以加入等量乙醇(含醇量为47.5％)所的产物作为目标产物。

实施例4本发明黄芩提取物的制备方法与专利申请号：200610014770.7所述的黄芩提取物的制备方法的区别：

按专利申请号：200610014770.7所述的方法制备的黄芩提取物，具体方法如下：

取黄芩药材，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入盐酸适量调节pH值至1.0～2.0，70℃保温，静置，滤过，沉淀加适量水搅匀，用40％氢氧化钠溶液调节pH值至7.0，搅拌使溶解，加适量乙醇使含醇量达到10％，静置，滤过，滤液用盐酸调节pH值至1.0～2.0，70℃保温30分钟，静置，滤过，沉淀用10％乙醇洗至pH值6.0～7.0，挥尽乙醇，减压干燥，即得。

通过此方法制备得到的黄芩提取物中黄芩苷含量为58％～66％。

(根据中国药典2010版一部黄芩药材项下方法测定)

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明黄芩提取物给药途径筛选试验

一、实验材料

1、实验动物

SD大鼠，SPF级，体重250±50g，由达硕生物科技有限公司提供。

2、实验器材与主要试药

水浴锅、电子天平、眼科镊、手术剪、止血钳、缝合针线、不同规格尼龙线、水合氯醛、TTC、PBS缓冲液、黄芩提取物磷脂复合物(自制)

二、试验方法及内容

1、试药的配制

pH＝5.8磷酸盐缓冲液的配置：称取磷酸二氢钾0.834g与磷酸氢二钾0.087g，加水使溶解成100ml；

pH＝7.4磷酸盐缓冲液的配置：称取磷酸二氢钾1.7g与氢氧化钠0.395g，加水使溶解成250ml；

黄芩提取物磷脂复合物混悬液制备：取实施例2制备的黄芩提取物磷脂复合物适量于研钵中，以磷酸盐缓冲液(PH＝5.8)对药物进行溶解混悬，制备成相应浓度；

实施例1制备的黄芩提取物(黄芩提取物中黄芩苷含量为85％)，以蒸馏水溶解(调节pH约6.0)成溶液；

TTC染色剂的配制：称取TTC染色剂2g，用磷酸盐缓冲液(PH＝7.4)定容至100ml

2、试验方法

试验动物分组：

多年实践表明，静脉给药时治疗突发性疾病最有效地方式。然而，静脉给药由于血脑屏障(BBB)的存在，药物很难到达脑内，而且静脉给药需要一定的医疗条件，加大患者的身体和精神伤害。鼻腔给药由于鼻脑通路的存在，可避开血脑屏障，药物能快速到达脑内，对于脑内疾病的治疗有较好的效果，且与静脉给药相比，没有安全隐患，更容易被患者所接受。本次试验主要是将鼻腔给药与常用的灌胃给药、注射给药进行对比，优选出适合模型药物给药的较佳给药途径。

故将试验动物分为鼻腔原料组，磷脂复合物灌胃组，磷脂复合物鼻腔组、磷脂复合物腹腔组以及模型组五个组别，每组动物15只，动物分组见表2。黄芩提取物制备成磷脂复合物以后，可提高其膜透过性，提高其生物利用度，并有可能增强其药理作用，故本次试验中，将实施例2制备的黄芩提取物制备成磷脂复合物来进行实验。

表2给药途径筛选动物分组

3、试验及给药方法

按照每种给药方式每次给药相同的原则，预防药五天，每天分别于早上9:0，中午15:00，晚上21:00给药，每天给药三次；第六天进行线栓法模型的制作，手术当天于术前、术后2h、4h分别给药，术后使其存活48h，照预防给药方法给药；处死动物，取出其脑组织，用TTC染色测定其梗死率，利用SPSS对各组数据进行单因素方差分析，优选较佳给药途径。

4、血管内栓线阻断法建立大鼠局灶性脑缺血模型

大鼠用10％水合氯醛(35mg/kg)腹腔注射麻醉。仰卧位固定，碘伏擦拭消毒，腹侧颈正中线切口皮肤。沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，见到颈动脉鞘后可上拉钩。分离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)。在CCA远心端和近心端及ECA处挂线备用。用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将拴线插入到ICA。然后用绕在CCA远心端的细线轻轻系牢拴线。用眼科镊轻推拴线，这时从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18mm时，轻柔地紧紧系牢CCA远心端的细线。常规缝合伤口。假手术组只进行麻醉和血管分离术，不结扎血管和导入栓线。2小时后将栓先向外拔出5mm，再灌注。

5、脑梗死率的测定

脑梗死率的测定采用红四氮唑(TTC)染色法。大鼠于再灌注48小时断头取脑，去除嗅球、延髓和小脑，在4℃的生理盐水条件下，去除组织中的脂肪，血丝等杂质，并拭干水分，准确称取全脑重，于-4℃冰箱中冷冻24小时左右，间隔2mm连续做5-6个脑冠状切片，加入2％TTC溶液，浸没切片，置于37℃烘箱中孵育30min，每隔5-10min翻动脑片，使均匀接触染色液。TTC被线粒体过氧化氢酶还原，可使正常脑组织染色呈红色，梗死组织呈白色。用眼科镊分离苍白区(梗死区)和非苍白区(正常区)，分别准确称取重量，计算梗死百分比，即梗死率＝苍白区重量/(苍白区重量+非苍白区重量)×100％。

三、试验结果

根据上述试验方法，最终测得各组梗死率见表3。从表上分析看出，鼻腔原料组，复合物灌胃组对于缺血性脑损伤基本没有治疗作用，而复合物鼻腔组、复合物腹腔组对于改善缺血性脑损伤有一定的作用，然而在实验过程中由于腹腔注射的实验动物有一定量的死亡，同时考虑到近年来中药注射剂的安全问题，最终选择鼻腔给药为较佳给药方式。

表3给药途径筛选试验结果

试验例2不同浓度黄芩提取物药效对比试验

一、实验材料

1、实验动物

SD大鼠，SPF级，体重250±50g，由达硕生物科技有限公司提供

2、实验器材与主要试药

水浴锅、电子天平、眼科镊、手术剪、止血钳、缝合针线、不同规格尼龙线、水合氯醛、TTC、PBS缓冲液、黄芩提取物磷脂复合物(自制)

二、试验方法及内容

1、试验动物分组

将专利申请号：200610014770.7所述的方法制备的黄芩提取物(测定其中黄芩苷含量为62％)、本发明实施例1制备的黄芩提取物(黄芩苷含量为85％)及市售黄芩苷(纯度95％以上)进行对比；本次试验是将各种提取物指标成磷脂复合物以后，以各种浓度的磷脂复合物进行的药效筛选，因为线栓法模型存在一定的死亡率，每组动物聚15只，试验动物具体分组情况见表4。

表4提取物浓度筛选试验动物分组

2、试验及给药方法

按照每种给药方式每次给药相同的原则，预防药五天，每天分别于早上9:0，中午15:00，晚上21:00给相应药物，每天给药三次；第六天进行线栓法模型的制作，手术当天于术前、术后2h、4h分别给药，术后使其存活48h，照预防给药方法给药；处死动物，取出其脑组织，用TTC染色测定其梗死率，利用SPSS对各组数据进行单因素方差分析，优选较佳提取物浓度。

三、试验结果

根据上述试验方法，最终测得各组梗死率见表5。从表上分析看出，85％黄芩苷含量组相对于其他组对于缺血性脑损伤有较好的治疗效果。中药每味药本身就是一个复杂的系统，各成分之间就存在着一定的协同作用，黄芩总黄酮是治疗缺血性脑损伤的主要成分，但并不是说黄芩苷纯度越高其疗效就越好，总黄酮所含的其他黄酮成分可能本身就会对缺血性脑损伤有一定的疗效，或者这些成分可增强黄芩苷的疗效，所以黄芩苷含量较低的提取物反而有较好的治疗效果。

表5不同提取物浓度筛选试验结果

试验例3本发明黄芩提取物有效剂量筛选试验

一、实验材料

1、实验动物

SD大鼠，SPF级，体重250±50g，由达硕生物科技有限公司提供

2、实验器材与主要试药

水浴锅、电子天平、眼科镊、手术剪、止血钳、缝合针线、不同规格尼龙线、水合氯醛、TTC、PBS缓冲液、黄芩提取物磷脂复合物(按实施例1方法制备)

二、试验方法及内容

1、试验动物分组

本次试验在给药途径筛选及不同浓度黄芩提取物筛选的基础上的基础上，将实验动物分为了高、中、低三个剂量组，实施例2制备的黄芩提取物磷脂复合物浓度分别为60mg/ml、40mg/ml、20mg/ml，每组动物15只，试验动物情况见表6；给药时，每次给药体积相同。

表6有效剂量探索试验动物分组

2、试验及给药方法

按照每种给药方式每次给药相同的原则，预防药五天，每天分别于早上9:0，中午15:00，晚上21:00给相应药物，每天给药三次；第六天进行线栓法模型的制作，手术当天于术前、术后2h、4h分别给药，术后使其存活48h，照预防给药方法给药；处死动物，取出其脑组织，用TTC染色测定其梗死率，利用SPSS对各组数据进行单因素方差分析，探索有效剂量。

3、试验结果

根据上述试验方法，最终测得各组梗死率见表7，对该表数据进行统计学分析，发现各组之间均无统计学上的显著性差异。从数据分析可以看出，高剂量组对于缺血性脑损伤有较好的治疗效果，但是三个剂量组之间不存在明显的量效关系。

表7有效剂量探索试验结果

综上，根据上述试验结果，在注射、口服以及鼻腔给药中，鼻腔给药及腹腔注射给药对于线栓法复制的脑缺血模型有较佳的治疗效果，同时考虑到用药的安全，最终选择鼻腔给药为其较佳给药途径；不同浓度黄芩提取物筛选结果表明，本发明黄芩苷提取物(含量为85％)相对于其他组对于缺血性脑损伤有较好的治疗效果，可能是因为黄芩总黄酮所含的其他黄酮成分本身就会对缺血性脑损伤有一定的疗效，或者这些成分可增强黄芩苷的疗效，所以与黄芩苷纯品相比，本发明黄芩提取物中黄芩苷含量较低，反而有较好的治疗效果；有效剂量探索结果表明，高剂量组对于缺血性脑损伤有较好的治疗效果。

本发明黄芩提取物具有较为特定的黄芩苷含量范围，在黄芩苷重量百分含量为82％～88％范围内，治疗效果明显好于更高含量或更低含量的提取物，且制备工艺简便，成本低，为临床提供了一种新的药物选择。

Claims (1)

1.黄芩提取物在制备治疗脑缺血的药物中的用途，其中，所述的黄芩提取物中含有黄芩苷的重量百分含量为82%~88%；它是由下述方法制备而成：

a、取黄芩药材，加水煎煮提取，滤液浓缩成清膏，加盐酸调节pH值至1.0~2.0，70℃保温1h，静置12小时，滤过，得沉淀物；

b、沉淀物加水搅匀，用40%氢氧化钠调节pH至7，加入与氢氧化钠等量的乙醇，使含醇量为40-47.5%，搅匀，静置12小时，滤过，得滤液；

c、滤液用盐酸调节pH至1~2，70℃保温1小时，冷却至室温，静置12小时，滤过，得沉淀；

d、沉淀用40-47.5%乙醇洗涤至pH至6~7，将沉淀减压干燥，即得黄芩提取物。

2.权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物用于鼻腔给药的药物。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：b步骤所述的含醇量为47.5%。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：d步骤所述的乙醇浓度为47.5%。