CN102138967A - 香青兰总黄酮在制备防治脑血管疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了香青兰总黄酮在制备防治脑血管疾病药物方面的应用。本发明通过药理实验证明，香青兰总黄酮具有抗脑血栓、抗脑缺血、抗脑缺氧、抗血管性痴呆等作用。香青兰总黄酮防治脑血管疾病效果显著，有望成为脑血管疾病防治药物。

Description

香青兰总黄酮在制备防治脑血管疾病药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑血管疾病药物中的应用，特别涉及香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑血栓、脑缺血、脑缺氧或血管性痴呆疾病药物中的应用。

背景技术

脑血管疾病是指由各种血管源性脑病变所引起的脑功能障碍，它与心脏病、癌症一起构成了人类三大死因。脑血管疾病患病率高、致死率高、致残率高、复发率高，其中50％～70％的幸存患者遗留下了严重的残疾，生活需要照顾，给社会和家庭造成了沉重的负担。因此，加强对脑血管疾病的预防和治疗，对提高人类健康水平和生活质量有着积极的作用(张立柱，池元英.脑血管疾病的致病因素及预防[J].吉林医学信息，2007，24(3-4)：41-42)。

香青兰(Dracocephalum moldavica L.)系唇形科一年生草本植物，高30～110cm，分布于华北、东北、西北地区，其中以新疆和内蒙古栽培较多。香青兰以全草干燥地上部分入药。维吾尔医将香青兰用于治疗冠心病、血液质旺盛、心绞痛、寒神经性头痛、寒性感冒、气管炎、动脉硬化、心肌缺血等疾病。香青兰总黄酮为香青兰中活性物质。研究表明，香青兰总黄酮具有抗氧化、抗心肌缺血、降血脂、保肝、抗炎、抗病毒、抗菌等药理作用，但目前尚无有关香青兰总黄酮防治脑血管疾病文献报道(阿布力米提，艾来提，穆赫塔尔，等.香青兰中黄酮类化合物的研究[J].食品科学，2007，28(8)：384-386；张丽，贺金华，王新堂.香青兰中总黄酮的纯化与含量测定[J].新疆中医药，2009，27(2)：67-69；冯长根，李琼.香青兰化学成分与药理活性研究综述[J].中成药，2003，25(2)：154-156；魏改芹，邢建国，何承辉，等.HPD100大孔吸附树脂分离纯化香青兰中木犀草素的研究[J].中成药，2008，30(11)：1608-1611；娄红祥，任冬梅，王亚俊.一种香青兰总黄酮提取物及其制备方法与应用[P].公开号：CN101537039)。

发明内容

本发明提供了香青兰总黄酮的新用途，即香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑血管疾病药物中的应用，包括但不局限于脑血栓、脑缺血、脑缺氧、血管性痴呆等脑血管疾病。

本发明提供了一种包含香青兰总黄酮及常规药用载体的药物组合物，其特征是所述药物组合物是采用常规制剂工艺制备而成的口服或非口服途径方式给药的制剂。

本发明提供了预防或治疗脑血管疾病的方法，包括向脑血管疾病患者给予香青兰总黄酮或前面所述药物组合物。

本发明提供的香青兰总黄酮可以长期应用，具有明显的预防或改善脑损伤的功效，无明显副作用，价格便宜。

具体实施方式

脑血管疾病是指脑部动脉或支配脑的颈部动脉发生病变，从而引起颅内血液循环障碍，脑组织受损的一系列疾病。脑血管疾病按其进程，可分为急性脑血管疾病和慢性脑血管疾病两种。急性脑血管病包括脑缺血、脑血栓形成、脑栓塞、高血压脑病、脑出血和蛛网膜下腔出血等；慢性脑血管病包括脑动脉硬化、脑血管性痴呆、脑动脉盗血综合征、帕金森病等。

本发明提供了香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑血管疾病的药物中的应用，包括但不限于脑缺血、脑缺氧、脑血栓、记忆功能障碍等脑血管疾病。

本发明所述的香青兰总黄酮可以根据临床需要，加入相应药用载体，以片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂、霜剂、软膏、凝胶剂、喷雾剂、口嚼剂或贴剂等制剂形式存在。

本发明所述的香青兰总黄酮可根据临床需要，采用口服或非口服方式用药，优选口服给药方式。

本发明所述的香青兰总黄酮制剂采用口服方式用药时，人用剂量优选1-1000mg/人/日，其中更优选为10-500mg/人/日，最优选为50-100mg/人/日。

本发明所述的香青兰总黄酮是从唇形科植物香青兰中提取分离获得或人工方式合成，可采用任何已公开文献或专利方法提取制备(张丽，贺金华，王新堂.香青兰中总黄酮的纯化与含量测定[J].新疆中医药，2009，27(2)：67-69；魏改芹，邢建国，何承辉，等.HPD100大孔吸附树脂分离纯化香青兰中木犀草素的研究[J].中成药，2008，30(11)：1608-1611；娄红祥，任冬梅，王亚俊.一种香青兰总黄酮提取物及其制备方法与应用[P].公开号：CN101537039；刑建国，何承辉，魏改芹，等.香青兰提取物和香青兰滴丸及其生产方法[P]：公开号：CN101219161)。采用各种不同方法制备的香青兰总黄酮对本发明的用途没有影响。

以下结合实验例对本发明进行说明，但本发明并不受限于该实施例。

实施例1香青兰总黄酮抗脑血栓研究

1.材料和方法

1.1实验动物：健康成年雄性Wistar大鼠，SPF/VAF级，体重250～300g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2007-0001。实验前在北京联合大学应用文理保健食品功能检测中心SPF级实验动物房适应环境一周。

1.2试剂：香青兰总黄酮：新疆维吾尔自治区药物研究所提供；脑心通胶囊：咸阳步长制药有限公司。

1.3仪器：AR-2140型万分之一电子天平：梅特勒-托利多仪器有限公司。

1.4实验动物分组及给药

取雄性Wistar大鼠，随机分为5组：模型组，香青兰总黄酮(40、20、10m g/kg)组，脑心通胶囊(324mg/kg)组，每组24只，术前灌胃给药14d，每天1次。模型组灌胃给予溶剂生理盐水作为对照。

1.5血栓形成实验

用10％水合氯醛(350mg/kg，ip)麻醉大鼠。将动物体温维持在37℃。让动物仰卧固定，沿颈部中线切开皮肤及皮下组织。手术显微镜下分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。两端进行插管，形成大鼠颈动静脉旁路15min后，取出4号丝线，在滤纸上除去浮血后称重，即得到血栓湿重。将称重后血栓置于烘干箱中，在60℃，干燥4h后取出称重，即为血栓干重。

1.6统计学处理

实验结果均以

表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比较，样本均数间比较采用t检验。^*表示P＜0.05，表明给药组与模型组比较有显著性差异；^**表示P＜0.01，表明给药组与模型组比较有极显著性差异。

2.结果

2.1香青兰总黄酮对大鼠颈动静脉血栓重量的影响

表1香青兰总黄酮对大鼠颈动静脉血栓重量的影响

注：与模型组比较，^*表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

与模型组相比较，香青兰总黄酮高、中剂量组对血栓重量的抑制作用具有显著性差异，表明香青兰总黄酮对大鼠颈动静脉旁路血栓形成具有一定的抑制作用。

实施例2香青兰总黄酮抗脑缺血研究

1.材料和方法

1.1实验动物：健康成年雄性Wistar大鼠，SPF/VAF级，体重250～300g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2007-0001。实验前在北京联合大学应用文理保健食品功能检测中心SPF级实验动物房适应环境一周。

1.2试剂：香青兰总黄酮：新疆维吾尔自治区药物研究所提供；脑心通胶囊：咸阳步长制药有限公司；水合氯醛：天津市光复精细化工研究所；红四氮唑：Sigma公司；MDA、MPO、SOD、考马斯亮蓝试剂盒：南京建成生物工程研究所。

1.3仪器：AR-2140型万分之一电子天平：梅特勒-托利多仪器有限公司；电热恒温水浴锅：北京市长风仪器仪表公司；TGL 16M离心机：湖南凯达科学仪器有限公司；MH-2微量振荡器：江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司；DY89-II型电动玻璃匀浆机：宁波新芝生物科技股份有限公司；WG-2003台式烘干箱：惠阳南方电气实验设备厂；酶标仪：美国Thermo公司。

1.4动物分组及给药

取雄性Wistar大鼠，随机分为6组：假手术组，模型组，香青兰总黄酮(40、20、10mg/kg)组，脑心通胶囊(324mg/kg)组，每组24只，灌胃给药，每天1次。第5d给药后1h，

实施手术。

1.5Wistar大鼠局灶性脑缺血模型的制作

大鼠以水合氯醛350mg/kg，腹腔注射麻醉，仰卧固定，颈正中切口，依次暴露并分离左侧颈总动脉(Common carotid artery，CCA)，颈内动脉(Internal carotid artery，ICA)、颈外动脉(External carotid artery，ECA)。用动脉夹夹闭颈总动脉和颈内动脉，结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉上开一小口，将头端圆钝并经多聚赖氨酸处理的鱼线插入颈内动脉，插入长度以分叉处计约为18～20mm。结扎颈内动脉和颈总动脉，固定鱼线，缝合皮肤(鱼线预留少许于体外)。缺血2h后，固定大鼠，将鱼线抽拉出至颈内、颈外动脉分叉处，实现再灌注。假手术组仅分离三叉口，不闭塞大脑中动脉。

1.6神经功能缺陷评分

模型组及各用药组大鼠作神经功能缺陷评分，评分标准为：0分：正常，无神经损伤症状；1分：不能完全伸展对侧前爪；2分：提尾后向外侧转圈；3分：行走时向对侧倾倒；4分：不能自发行走或意识丧失。

1.7脑梗死范围测定

采用TTC染色法测定脑梗死范围。将动物断头后迅速取出完整大脑，冠状切成2mm的脑片，于2％TTC溶液中(以磷酸缓冲盐溶液配制)37℃水浴中孵育30min。梗死组织呈白色，而周围正常组织呈玫瑰红色。然后在10％的中性甲醛溶液中固定。对每脑片正反两面进行扫描，用图像分析软件积分求出梗死区和非梗死区面积。

1.8脑组织MDA含量、MPO及SOD活性测定

大鼠在脑缺血2h再灌注22h后断头处死，在冰盘上快速取脑。称重，按1∶9(W/V)加入冰冷生理盐水，制成10％的脑组织匀浆。将匀浆液以3000r/min离心10min，取上清夜，在-70℃超低温冰箱保存待测。按试剂盒说明书测定MDA含量、MPO活性以及SOD活性。蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法。

1.9统计学处理

实验结果均以表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比较，样本均数间比较采用t检验。^*表示P＜0.05，表明给药组与模型组比较有显著性差异；^**表示P＜0.01，表明给药组与模型组比较有极显著性差异。

2结果

2.1香青兰总黄酮对大鼠神经功能缺陷、脑梗死范围的影响

表2香青兰总黄酮对大鼠神经功能缺陷、脑梗死范围的影响

与模型组相比较，^*表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

表2中数据显示，模型组与假手术组相比较，神经功能缺陷评分、脑梗死范围明显增加，香青兰总黄酮呈浓度依赖性地下调神经功能缺陷评分，减小脑梗死范围，表明香青兰总黄酮具有抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用。

2.2香青兰总黄酮对大鼠脑组织MPO、SOD活性及MDA含量的影响

表3香青兰总黄酮对大鼠脑组织MPO、SOD活性及MDA含量的影响

与模型组比较，^*表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

如表3所示，香青兰总黄酮能显著抑制大鼠缺血再灌注后脑组织SOD活性下降趋势，同时，能有效地降低MPO活性和MDA含量，表明其通过抗炎、抗氧化发挥抗脑缺血作用。实施例3香青兰总黄酮抗脑缺氧研究

1.材料和方法

1.1实验动物：健康成年雄性ICR小鼠，SPF/VAF级，体重18～22g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号：SCXK(京)2007-0001。实验前在北京联合大学应用文理保健食品功能检测中心SPF级实验动物房适应环境一周。

1.2试剂：香青兰总黄酮：新疆维吾尔自治区药物研究所提供；脑心通胶囊：咸阳步长制药有限公司；亚硝酸钠，西安化学试剂厂。

1.3仪器：AR-2140型万分之一电子天平：梅特勒-托利多仪器有限公司。

1.4急性脑缺血缺氧实验

取禁食12h，受试ICR小鼠40只，随机分为模型组，香青兰总黄酮(40、20、10mg/kg)组，脑心通胶囊(324mg/kg)组，，每组8只。小鼠腹腔注射给药2h后，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表计时，纪录各组动物断头后至呼吸停止后的时间及张口呼吸次数。

1.5亚硝酸钠中毒存活实验

取禁食12h，受试ICR小鼠40只，随机分为模型组，香青兰总黄酮(40、20、10mg/kg)组，脑心通胶囊(324mg/kg)组，每组8只。小鼠腹腔注射给药2h后，各组小鼠按240mg/kg剂量腹腔注射亚硝酸钠(浓度为24mg/ml)，以呼吸停止为指标，分别记录小鼠存活时间。

1.6统计学处理

实验结果均以

表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比较，样本均数间比较采用t检验。^*表示P＜0.05，表明给药组与模型组比较有显著性差异；^**表示P＜0.01，表明给药组与模型组比较有极显著性差异。

2结果

2.1香青兰总黄酮对小鼠急性脑缺血缺氧时间的影响

表4香青兰总黄酮对小鼠急性脑缺血缺氧时间的影响

与阴性对照组比较，^*表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

2.2香青兰总黄酮对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

表5香青兰总黄酮对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

与阴性对照组比较，^*表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

香青兰总黄酮能显著延长断头所引起的全脑缺血小鼠的张口呼吸时间及亚硝酸钠致死小鼠存活时间，增加小鼠断头后的呼吸次数，表明香青兰总黄酮能降低大脑耗氧量，提高脑组织对氧的利用率。

实施例4香青兰总黄酮抗血管性痴呆研究

1.材料和方法

1.1实验动物：健康成年雄性ICR小鼠，清洁级，体重18～22g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验前在北京联合大学北京联合大学应用文理保健食品功能检测中心SPF级实验动物房适应环境一周。

1.2试剂：香青兰总黄酮：新疆维吾尔自治区药物研究所提供；脑心通胶囊：咸阳步长制药有限公司

1.3仪器：水迷宫：安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司；小鼠避暗仪：中国医学科学院药物研究所。

1.4建立血管性痴呆模型

ICR小鼠术前24h禁食，自由饮水。用4％水合氯醛(400mg/kg，ip)麻醉。将麻醉后的小鼠仰卧固定，颈部备皮，消毒皮肤，沿颈部中线切开皮肤，分离左、右侧颈总动脉，用动脉夹夹闭血管，阻断双侧颈总动脉血流30min。撤掉动脉夹再灌注，缝合皮肤。假手术组不予夹闭血管，其余步骤同上。再灌注2h后，小鼠清醒状态下灌胃给药，给药剂量同上，连续灌胃25d。

1.5小鼠水迷宫实验

实验前，给水迷宫中注水，水深没过站台2cm水温23～25℃。在训练的第1d小鼠被置于站台上10s，使其熟悉安全岛，然后将小鼠按顺序头朝水槽依次从4个象限放入水中，计时2min，小鼠找到站台并在其上停留10s后，计时自动停止。第5d去掉站台，小鼠的游泳起点为远离站台的2个象限点，纪录2min内小鼠站台的潜伏期并纪录穿台次数。

1.6小鼠避暗实验

将小鼠放入明室背向暗室，当小鼠走入暗室四足接触铜栅时会受到电击，其正常反应为马上退出暗室。第1天适应训练时，记录小鼠在3min内进入暗室的次数及第1次进入暗箱的时间；适应训练后，开通电源装置，将小鼠放入明室并背向暗室，小鼠进入暗室接触铜栅受到电击，小鼠立即取出。24h后再次实验，观察3min内小鼠首次进入暗箱的时间即潜伏期，小鼠进入暗箱的次数即错误次数。

1.7统计学处理

实验结果均以

表示，采用单因素方差分析进行组间显著性比较，样本均数间比较采用t检验。^*表示P＜0.05，表明给药组与模型组比较有显著性差异；^**表示P＜0.01，表明给药组与模型组比较有极显著性差异。

2.结果

2.1香青兰总黄酮对小鼠水迷宫实验逃避潜伏期和穿台次数的影响

表6香青兰总黄酮对小鼠水迷宫实验逃避潜伏期和穿台次数的影响

与模型组比较，^*表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

表6中数据显示模型组小鼠水迷宫逃避潜伏期时间增加，穿台次数减少，学习记忆功能严重受损。香青兰总黄酮呈剂量依赖性减少水迷宫逃避潜伏期时间，增加穿台次数，与模型组比较具有显著性差异。

2.2香青兰总黄酮对小鼠避暗实验避暗潜伏期和穿箱次数的影响

表7香青兰总黄酮对小鼠避暗实验避暗潜伏期和穿箱次数的影响

与模型组比较，w表示P＜0.05  ^**表示P＜0.01

如表7所示，与假手术组相比，模型组小鼠被动避暗潜伏期显著缩短，避暗穿箱次数明显增加。香青兰总黄酮高、中剂量组显著增加小鼠被动避暗潜伏期，减少避暗穿箱次数。

Claims (9)

1.香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑血管疾病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征是香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑血栓疾病药物中的应用。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征是香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑缺血疾病药物中的应用。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征是香青兰总黄酮在制备预防或治疗脑缺氧疾病药物中的应用。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征是香青兰总黄酮在制备预防或治疗血管性痴呆疾病药物中的应用。

6.一种药物组合物，其特征是所述药物组合物包含香青兰总黄酮及常规药用载体。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物是采用常规制剂工艺制备而成的口服或非口服途径方式给药的制剂。

8.一种预防或治疗脑血管疾病的方法，包括向脑血管疾病患者给予香青兰总黄酮。

9.一种预防或治疗脑血管疾病的方法，包括向脑血管疾病患者给予权利要求6或7所述的药物组合物。