CN114901082A - 包含键合有多元不饱和脂肪酸的磷脂的鱼卵脂质组合物 - Google Patents

Abstract

本发明课题在于，提供磷脂含量高、并且提高了磷脂中的DHA的组成比的脂质组合物。提供一种鱼卵脂质组合物，其包含二十二碳六烯酸键合磷脂，且包含30％以上的磷脂，二十二碳六烯酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上。本发明的组合物可包含醚型磷脂。本发明另外还提供一种含有选自α‑甘油磷酸胆碱、鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种的食品材料、化妆品材料、或医药品材料的制造方法，其包括由鱼卵或作为其加工品的原材料，得到包含选自α‑甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂中的至少一种的级分的工序。

Description

包含键合有多元不饱和脂肪酸的磷脂的鱼卵脂质组合物

技术领域

本发明涉及包含键合有多元不饱和脂肪酸的磷脂且由鱼卵得到的脂质组合物。

背景技术

已阐明键合有二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)等多元不饱和脂肪酸的磷脂具有与为甘油三酯(TG)型时不同的优异的功能。另外，键合有多元不饱和脂肪酸的磷脂难以大量化学合成，正在研究从天然物原料中提取。

例如专利文献1中，作为源自磷虾的磷脂的分取方法，记载了一种磷虾磷脂的分取方法，其特征在于，通过真空冷冻干燥法将生磷虾脱水后，用乙醇提取全部脂质，对得到的全部脂质，将乙醇系溶剂、丙酮系溶剂、或己烷系溶剂中任意者作为洗脱液，将硅胶作为填充剂，使用吸附柱色谱分级出磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)，利用馏分收集器将其分离。此处源自干燥磷虾的脂质中，经分析，PC为31.1％，PE为7.5％，TG为43.2％，游离脂肪酸为6.5％，其他为5.7％。另外，专利文献2中记载了在海洋或水生生物质源(marine oraquatic biomass sources)的提取物、优选磷虾(Krill)的提取物中存在各种磷脂，这样的磷脂包含PE、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、PC、及鞘磷脂。另外，关于磷虾提取物，记载了在磷脂中的构成脂肪酸中，EPA为27.35％，DHA为24.9％，另外，全部脂质中的构成脂肪酸的EPA≥25.00％，DHA≥10.00％。

另外，专利文献3-5涉及从乌贼的皮提取的磷脂，这些文献中记载了：在由乌贼的皮得到的脂质分溶解于己烷而以丙酮不溶分得到的级分中，PC为45％，PE为11％，另外，利用气相色谱求出构成脂肪酸组成，结果DHA为38％，EPA为12％，棕榈酸为29％，或者从乌贼的皮提取的磷脂的主要的组成为PC 63.1％、PE 21.2％、PS 9.1％，另外，各个构成脂肪酸中所占据的DHA中，PC为44.4％、PE为18.0％、PS为24.5％，总磷脂的构成脂肪酸中所占据的DHA为33.4％。另外，专利文献6中记载了一种对由乌贼的肉质得到的粗粉进行溶剂提取，来制造含有大量高度不饱和脂肪酸的高品质磷脂的方法，对作为实施例而得到的乌贼粗粉提取物进行了分析，结果为DHA含量33.0％、EPA含量为14.4％、磷脂含量65％，进而对磷脂进行了分析，结果为DHA含量40.0％、EPA含量13.0％、PC 65％、PE 20％，另外记载了，作为比较例，来自鲑鱼卵冷冻干燥品的提取物为：DHA含量19.0％、EPA含量15.1％、磷脂含量25％，对磷脂进行了分析，结果DHA含量25.0％、EPA含量13.0％、PC 80％、PE 10％。

进而非专利文献1涉及DHA键合磷脂的制造和其生理活性，对有可能作为工业生产用的原料的乌贼皮、鲣鱼卵、及金枪鱼卵中所含的DHA键合磷脂进行了研究。此处记载了：作为各种材料的80％乙醇提取物的分析结果，关于乌贼皮，DHA 40.3％、EPA 16.6％、PL23.5％，关于鲣鱼卵，DHA 36.4％、EPA 5.9％、PL 35.5％，关于金枪鱼卵，DHA 32.8％、EPA4.6％、PL 52.7％。另外，专利文献7中，作为制造高纯度的磷脂的方法，记载了一种方法，其包括：(a)将油脂成分和极性低的有机溶剂混合的工序；(b)将该混合物添加至硅胶的工序；及(c)将该极性低的有机溶剂添加至该硅胶而由硅胶中将磷脂洗脱的工序。此处，作为磷脂的优选的供给源，可举出鱼类和贝类，作为其具体例，可举出鲣鱼、金枪鱼、沙丁鱼等鱼类的组织，作为鱼类的组织的例子，可举出精巢及卵巢。另外，实施例中记载了由生的鲣鱼的卵巢得到高纯度的磷脂(8％、95％、或100％)。

进而专利文献8中记载了一种动态视力改善剂，其将选自DHA、DHA的盐、DHA的酯、DHA的甘油酯、由DHA衍生的磷脂、及由DHA衍生的胆碱化合物中的1种以上的化合物作为有效成分。其中报道了，DHA摄取组中，在DHA服用后，尽管静态视力基本没有变化，但可看出动态视力的改善，特别是两眼的动态视力显著得到了改善。另外，专利文献9记载了一种油脂组合物，其特征在于，含有：作为第1成分的在结构中包含长链高度不饱和脂肪酸(LCPUFA)、且可通过水解而分离出LCPUFA的LCPUFA供给化合物；和作为第2成分的磷脂，上述LCPUFA供给化合物为选自脂肪酸醇酯、甘油三酯、二甘油酯、单甘油酯、甘油糖脂、鞘脂、糖酯、及类胡萝卜素酯中的至少1种，由上述LCPUFA供给化合物供给的LCPUFA(a)包含花生四烯酸(AA)及DHA、或(b)仅包含AA，上述第1成分与上述第2成分的配混比以供给的LCPUFA的总重量相对于作为第2成分的磷脂的总重量的比成为0.5以上的方式来确定，可由第1成分的总量供给的全部脂肪酸中，AA的比率为20.5重量％以上，并且由上述LCPUFA供给化合物供给的LCPUFA包含DHA的情况下，可由第1成分的总量供给的全部脂肪酸中，DHA的比率为22.5重量％以上。另外，专利文献10中记载了一种新的DHA键合磷脂，其可生产裂殖壶菌(Schizochytrium)属F26-b株的微生物(FERM AP-20727)，且C15：0的脂肪酸以酯键键合于PC的甘油的1位，C22：6的脂肪酸以酯键键合于2位。进而专利文献11中记载了一种肌肉蛋白质增强剂，其将在构成脂肪酸中包含15质量％以上的二十二碳六烯酸的磷脂作为有效成分。此处，记载了，使用由鲑鱼卵提取的含脂质的鱼卵油(商品名：SANOMEGA PC-DHA(日油株式会社制))，作为其组成，磷脂含量为27.8％，构成磷脂的脂肪酸组成中DHA的比例为28.1％，C22∶5的脂肪酸的比例为12％，对于构成磷脂的极性基团的种类，73.7％为PC。

另一方面，已知作为醚型磷脂的一种的缩醛磷脂在生物体内存在于脑髓鞘、心脏、骨骼肌，近年来着眼于其与疾病的关联等。报道了母鸡为缩醛磷脂的有用的供给源(非专利文献2)，另外，报道了由磷虾得到含有1-烷基醚型磷脂的级分(专利文献12)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平2-215351号公报(日本特许第2909508号)

专利文献2：国际公开WO03/011873号公报(美国专利8030348号公报)

专利文献3：日本特开平6-321970号公报(日本特许第3531876号)

专利文献4：日本特开平9-77782号公报(日本特许第3558423号)

专利文献5：日本特开平10-17475号公报(日本特许第3664814号)

专利文献6：日本特开2000-60432号公报

专利文献7：日本特开2008-38011号公报

专利文献8：日本特开平10-287563号公报(日本特许第4028020号)

专利文献9：国际公开WO2005/054415号公报(日本特许第4773827号)

专利文献10：日本特开2007-143479号公报(日本特许第4344827号)

专利文献11：日本特开2010-105946号公报

专利文献12：日本特开2017-155025号公报

非专利文献

非专利文献1：Oleoscience第2卷第2号、67-74页

非专利文献2：日本畜产学会报，2014,85(2)，153-161.

发明内容

发明要解决的问题

高度不饱和脂肪酸中，DHA已知有特别多的生理活性。因此，若有磷脂含量高、并且包含大量键合有DHA的磷脂的组合物，则能够以组合物的形式以更少的量摄取有效的成分而较为理想。

用于解决问题的方案

本发明提供以下。

[1]一种鱼卵脂质组合物，其包含二十二碳六烯酸(DHA)键合磷脂，

所述鱼卵脂质组合物包含26％以上的磷脂，

二十二碳六烯酸(DHA)在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上。

[2]根据1所述的鱼卵脂质组合物，其包含选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种。

[3]根据1或2所述的组合物，其中，磷脂包含74％以上的磷脂酰胆碱。

[4]根据1～3中任一项所述的组合物，其中，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，二十碳五烯酸(EPA)在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为5％～25％。

[5]根据1～4中任一项所述的组合物，其中，100g中包含3500mg以上的棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱。

[6]根据1～5中任一项所述的组合物，其中，100g中包含250mg的醚型磷脂，并且包含选自DHA键合醚型磷脂及EPA键合醚型磷脂中的至少一种。

[7]根据1～6中任一项所述的组合物，其用于利用选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂及醚型磷脂中的至少一种作为功能性成分。

[8]根据1～6中任一项所述的组合物，其用于选自提高皮肤的保湿功能、改善代谢综合征、改善脂质代谢、改善糖代谢、及提高认知功能中的任一者。

[9]一种含有选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂及醚型磷脂中的至少一种的食品材料、医药品材料、或化妆品材料的制造方法，其包括以下的工序：

由鱼卵或作为其加工品的原材料，得到包含选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂及醚型磷脂中的至少一种的级分的工序。

[10]根据9所述的制造方法，其中，原材料为带膜鲑鱼卵、鲑鱼卵、鲱鱼卵、鳕鱼卵、带膜鲑鱼卵提取物、鲑鱼卵提取物、鲱鱼卵提取物、鳕鱼卵提取物、鱼卵油、或鱼卵油纯化物。

[11]根据9或10所述的制造方法，其中，食品材料、医药品材料、或化妆品材料包含26％以上的磷脂。

[12]根据9～11中任一项所述的制造方法，其中，食品材料、医药品材料、或化妆品材料包含DHA键合磷脂，

DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，且EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为5％以上。

本发明另外提供以下。

[1]一种鱼卵脂质组合物，其包含二十二碳六烯酸(DHA)键合磷脂，

所述鱼卵脂质组合物包含30％以上的磷脂，

二十二碳六烯酸(DHA)在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上。

[2]根据1或2所述的鱼卵脂质组合物，其包含选自鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种。

[3]根据1或2所述的组合物，其中，磷脂包含74％以上的磷脂酰胆碱(PC)。

[4]根据1～3中任一项所述的组合物，其中，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，二十碳五烯酸(EPA)在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为6％～25％。

[5]根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其中，100g中包含700～1500mg的棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱。

[6]根据1～5中任一项所述的组合物，其用于利用选自鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种作为功能性成分。

[7]根据1～5中任一项所述的组合物，其用于选自提高皮肤的保湿功能、改善代谢综合征、改善脂质代谢、改善糖代谢、及提高认知功能中的任一者。

[8]一种含有选自鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种的食品材料、医药品材料、或化妆品材料的制造方法，其包括以下的工序：

由鱼卵或作为其加工品的原材料，得到包含选自鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种的级分的工序。

[9]根据8所述的制造方法，其中，原材料为带膜鲑鱼卵、鲑鱼卵、带膜鲑鱼卵提取物、鲑鱼卵提取物、鱼卵油、或鱼卵油纯化物。

[10]根据8或9所述的制造方法，其中，食品材料、医药品材料、或化妆品材料包含30％以上的磷脂。

[11]根据8～10中任一项所述的制造方法，其中，食品材料、医药品材料、或化妆品材料包含DHA键合磷脂，

DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，且EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为6％以上。

发明的效果

由本发明提供的组合物由于脂质中的有效成分的量多，因此能够以组合物的形式以更少的量摄取有效的成分。

本发明的组合物中含有选自鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种。

通过本发明，提供含有选自鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种的、新的食品材料、化妆品材料、或医药品材料的制造方法。

具体实施方式

<组合物>

本发明涉及提高磷脂的含量、并且提高了磷脂中的DHA的组成比的、包含DHA键合磷脂的鱼卵脂质组合物。

(磷脂)

磷脂是指以磷酸的形式具有磷的脂质，有甘油磷脂和鞘氨醇磷脂。甘油磷脂的代表性的例子为磷脂酰胆碱(PC)、α-甘油磷酸胆碱(α-GPC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、1-溶血磷脂酰胆碱(LPC-1)、2-溶血磷脂酰胆碱(LPC-2)、2-溶血磷脂酰乙醇胺(LPE-2)，鞘氨醇磷脂的代表性的例子为鞘磷脂(SM)、二氢鞘磷脂(DHSM)。

DHA键合磷脂是指构成脂肪酸(有时也称为键合脂肪酸。)的至少一者为DHA的磷脂。

本发明的组合物中可提高磷脂的含量。本发明的组合物的磷脂的含量例如为26％以上，可以为30％以上，优选为35％以上，更优选为37.5％以上，进一步优选为40％以上。本发明的组合物中的磷脂含量的上限没有特别限定，若磷脂含量变高则粘度变高，若粘度为一定以上，则在制造方面不易处理，因此例如为50％以下，优选为48％以下，更优选为46％以下，进一步优选为45％以下。

需要说明的是，关于本发明中组合物中所含的成分的含量用％表示时，除了特别记载的情况以外，是基于重量。

本发明的组合物包含选自α-GPC、SM及DHSM中的至少一种，在优选的方式中，包含SM及DHSM。α-GPC、SM及DHSM的含量没有特别限定。组合物中的α-GPC的含量例如为0.050％以上，优选为0.070％以上，更优选为0.10％以上，进一步优选为0.15％以上。另外，组合物中的α-GPC的含量例如为0.60％以下，可以为0.40％以下，优选为0.38％以下，更优选为0.35％以下，进一步优选为0.30％以下。组合物中的SM的含量例如为0.8％以上，优选为0.9％以上，更优选为1.0％以上，进一步优选为1.1％以上。另外，组合物中的SM的含量例如为2.3％以下，优选为2.2％以下，更优选为2.1％以下，进一步优选为2.0％以下。组合物中的DHSM的含量例如为0.050％以上，优选为0.070％以上，更优选为0.10％以上，进一步优选为0.15％以上。另外，组合物中的DHSM的含量例如为0.40％以下，优选为0.38％以下，更优选为0.35％以下，进一步优选为0.30％以下。

以往，已有关于由以鱼卵为原料的脂质构成的组合物的研究(前述专利文献11、及非专利文献1等)，但本申请首次公开在鱼卵脂质组合物中含有α-GPC、SM、DHSM。

α-GPC、SM及DHSM以外的本发明的组合物中所含的磷脂没有特别限定，优选PC、PE、PI、LPC-2等多。组合物中的PC的含量例如为24％～45％，优选为26％～43％，更优选为28％～41％，进一步优选为30％～39％。组合物中的PE的含量例如为0.90％～2.3％，优选为1.1％～2.2％，更优选为1.3％～2.1％，进一步优选为1.5％～2.0％。组合物中的PI的含量例如为0.80％～1.8％，优选为0.90％～1.7％，更优选为1.0％～1.6％，进一步优选为1.1％～1.5％。组合物中的LPC-2的含量例如为0.60％～1.8％，优选为0.70％～1.7％，更优选为0.8％～1.6％，进一步优选为1.0％～1.5％。

在本发明的组合物中，以磷脂中的含量而言，也含有较多PC。磷脂中的PC的含量例如为74％以上，优选为80％以上，更优选为83％以上，进一步优选为85％以上。另外，为95％以下，优选为94％以下，更优选为93％以下，进一步优选为92％以下。在提高了磷脂含量的组合物中，磷脂中的PC的含量更多。因此，在优选的方式中，组合物中的磷脂的含量为35％以上，此时磷脂中的PC的含量为83％以上，更优选为85％以上，进一步优选为87％。

(脂肪酸组成)

在本发明的组合物中，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比较高。己知鱼卵以磷脂的形态、并且以TG的形态包含DHA。具体而言，本发明的组合物的DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比例如为15％以上，优选为18％以上，更优选为22％以上，进一步优选为24％以上。本发明的组合物中的DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的上限没有特别限定，例如为46％以下，优选为40％以下，更优选为35％以下，进一步优选为30％以下。

需要说明的是，关于本发明中特定的脂肪酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比用％表示时，除了特别记载的情况以外，基于通过气相色谱法分析脂肪酸组成时的图谱的面积。

本发明的组合物的EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比较低，例如为25％以下，优选为23％以下，更优选为21％以下，进一步优选为19％以下。本发明的组合物中的EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的下限没有特别限定，例如为5.0％以上，可以为6.0％以上，优选为8.0％以上，更优选为10％以上，进一步优选为12％以上。

本发明的组合物的脂质的构成脂肪酸包含肉豆蔻酸(C14：0)。其组成比例如为1.2％以上，可以为1.5％以上，优选为2.0％以上，更优选为2.5％以上，进一步优选为3.0％以上。本发明的组合物中的肉豆蔻酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的上限没有特别限定，例如为10％以下，优选为8.0％以下，更优选为6.0％以下，进一步优选为5.0％以下。

本发明的组合物的脂质的构成脂肪酸包含棕榈酸(C16：0)。其组成比较低，例如为25％以下，优选为22％以下，更优选为20％以下，进一步优选为18％以下。本发明的组合物中的棕榈酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的下限没有特别限定，例如为8.0％以上，优选为10％以上，更优选为12％以上，进一步优选为14％以上。

本发明的组合物的脂质的构成脂肪酸包含硬脂酸(C18：0)。其组成比例如为1.3％以上，优选为2.2％以上，更优选为3.0％以上，进一步优选为3.5％以上。本发明的组合物中的硬脂酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的上限没有特别限定，例如为10％以下，优选为8.0％以下，更优选为6.0％以下，进一步优选为5.0％以下。

本发明的组合物的脂质的构成脂肪酸包含油酸(C18：1、n9c)。其组成比例如为9.0％以上，可以为12％以上，优选为13％以上，更优选为14％以上，进一步优选为15％以上。本发明的组合物中的油酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的上限没有特别限定，例如为28％以下，可以为25％以下，优选为23％以下，更优选为20％以下，进一步优选为19％以下。

本发明的组合物的脂质的构成脂肪酸包含二十碳烯酸(C20∶1)。其组成比例如为1.3％以上，可以为1.5％以上，优选为2.0％以上，更优选为2.5％以上，进一步优选为3.3％以上。本发明的组合物中的二十碳烯酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的上限没有特别限定，例如为10％以下，优选为8.0％以下，更优选为6.0％以下，进一步优选为5.0％以下。

本发明的组合物的脂质的构成脂肪酸包含二十二碳五烯酸(DPA)(C22∶5)。其组成比例如为0.50％以上，优选为2.0％以上，更优选为2.5％以上，进一步优选为3.5％以上。本发明的组合物中的DPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比的上限没有特别限定，例如为10％以下，优选为8.0％以下，更优选为6.0％以下，进一步优选为5.0％以下。

在优选的方式中，组合物为包含DHA键合磷脂的脂质组合物，包含30％以上的磷脂，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为6％～25％，且棕榈酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为20％以下。在更优选的方式中，进而肉豆蔻酸的组成比为3.7％以下，或DPA的组成比为5.5％以下。DPA的组成比进一步优选为5.0％以下。

在另一优选的方式中，组合物为包含DHA键合磷脂的脂质组合物，包含30％以上的磷脂，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比大于EPA的组成比。在更优选的方式中，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为6％～25％。在更优选的方式中，进而肉豆蔻酸的组成比为3.7％以下，或DPA的组成比为5.5％以下。DPA的组成比进一步优选为5.0％以下。

本发明的组合物中，也可以包含C14∶1(肉豆蔻烯酸)、C15∶1(十五碳烯酸)、C17∶1(十七碳烯酸)、C22∶1(二十二碳烯酸)、C24∶1(二十四碳烯酸)、C18∶2n-6(亚油酸)、C18∶3n-3(α-亚麻酸)、C18∶3n-6(γ-亚麻酸)、C20∶2n-6(二十碳二烯酸)、C20∶3n-6(二十碳三烯酸)、C20∶4n-6(花生四烯酸)、C22∶2(二十二碳二烯酸)等作为其他构成脂肪酸。

(DHA键合磷脂)

本发明的组合物中含有大量键合有DHA的磷脂。详细而言，本发明的组合物中的每100g磷脂的DHA的重量例如为10g以上，优选为12g以上，更优选为14g以上，进一步优选为16g以上。本发明的组合物中的每100g磷脂的DHA的重量的上限没有特别限定，例如为30g以下，优选为25g以下，更优选为22g以下，进一步优选为20g以下。另一方面，本发明的组合物中的每100g中性脂质的DHA的重量例如为8.0g以上，优选为10g以上，更优选为12g以上，进一步优选为14g以上。本发明的组合物中的每100g中性脂质的DHA的重量的上限没有特别限定，例如为20g以下，优选为18g以下，更优选为17g以下，进一步优选为16g以下。

需要说明的是，脂质中所含的每100g中性脂质或磷脂的构成脂肪酸的重量能够通过使用硅胶柱由作为对象的脂质得到中性脂质级分、极性磷脂级分，并对得到的级分按照常规方法测定构成脂肪酸量来求出。

在优选的方式中，组合物中的每100g磷脂的DHA的重量比每100g中性脂质的DHA的重量大。

本发明的组合物中的每100g磷脂的EPA的重量例如为5.0g以上，优选为6.0g以上，更优选为7.0g以上，进一步优选为8.0g以上。本发明的组合物中的每100g磷脂的EPA的重量的上限没有特别限定，例如为12g以下，优选为12g以下，更优选为11g以下，进一步优选为10g以下。另一方面，本发明的组合物中的每100g中性脂质的EPA的重量例如为10g以上，优选为11g以上，更优选为12g以上，进一步优选为13g以上。本发明的组合物中的每100g中性脂质的EPA的重量的上限没有特别限定，例如为18g以下，优选为16g以下，更优选为15g以下，进一步优选为14g以下。

在优选的方式中，组合物中的每100g磷脂的EPA的重量比每100g中性脂质的EPA的重量小。

(棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱等)

本发明的组合物中所含的DHA键合磷脂的一种为棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱(PDPC)。PDPC是指，在磷脂酰胆碱(38∶6)中，C-1及C-2的酰基中任一者为十六烷酰基(16∶0)且另一者为二十二碳六烯酰基(22∶6)。本发明的组合物100g中的含量例如为550mg以上，优选为700mg以上，更优选为800mg以上，进一步优选为1,000mg以上，进一步优选为3,500mg以上，进一步优选为3,800mg以上，进一步优选为6,000mg以上，进一步优选为10,000mg以上。本发明的组合物100g中的PDPC的上限没有特别限定，例如为50,000mg以下，优选为30,000mg以下，更优选为12,000mg以下，为1500mg以下，优选为1400mg以下，更优选为1300mg以下，进一步优选为1200mg以下。

本发明的组合物中所含的磷脂中的PDPC的组成比例如为12.0％以上，优选为16.0％以上，更优选为19.0％以上，进一步优选为22.0％以上。本发明的组合物中所含的磷脂中的PDPC的组成比的上限没有特别限定，例如为45.0％以下，优选为40.0％以下，更优选为35.0％以下，进一步优选为30.0％以下。

本发明的组合物中所含的DHA键合磷脂的另一种为硬酯酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱(SDPC)。SDPC是指，在磷脂酰胆碱(40∶6)中，C-1及C-2的酰基中的任一者为硬酯酰基(18∶0)且另一者为二十二碳六烯酰基(22∶6)。本发明的组合物100g中的含量例如为700mg以上，优选为1000mg以上，更优选为2000mg以上，进一步优选为2500mg以上。本发明的组合物100g中的SDPC的上限没有特别限定，例如为6000mg以下，优选为5000mg以下，更优选为4000mg以下，进一步优选为3000mg以下。

本发明的组合物中所含的磷脂中的SDPC的组成比例如为3.0％以上，优选为6.0％以上，更优选为7.0％以上，进一步优选为8.0％以上。本发明的组合物中所含的磷脂中的SDPC的组成比的上限没有特别限定，例如为20.0％以下，优选为17.0％以下，更优选为13.0％以下，进一步优选为10.0％以下。

需要说明的是，每100g组合物的PDPC及SDPC的含量能够根据需要用市售的标准品制作标准曲线并通过液相色谱质谱(Liquid Chromatography/Mass Spectrometry：LC/MS/MS)法来求出。另外，关于本发明的组合物，表示磷脂中的特定的磷脂的组成比时，除了特别记载的情况以外，为以磷脂总体计算PC(16：0，16：0)、PC(16：0，18：0)、PC(18：1，16：0)、PC(18：0，18：0)、PC(18：1，18：0)、PC(18：1，18：1)、PC(16：0，20：4)、PC(20：5，16：0)、PC(18：0，20：4)、PC(20：4，18：1)、PC(20：5，18：0)、PC(20：5，18：1)、PC(22：6，16：0)、PC(20：5，20：5)、PC(22：6，18：0)、PC(22：6，18：1)、PC(20：5，20∶4)、PC(20：4，22：6)、PC(20：5，22：6)、及PC(22：6，22：6)的总量的值。

(醚型磷脂)

本发明的组合物中所含的磷脂之一为醚型磷脂。醚型磷脂是指具有基于醚键的烃链的磷脂，特别是，将在sn-1位具有基于乙烯基醚键的烃链、且在sn-2位键合有脂肪酸的甘油磷脂称为缩醛磷脂。对于缩醛磷脂，已知血液或淋巴液中的缩醛磷脂随着年龄增长而减少、阿尔茨海默症患者脑的缩醛磷脂减少、缩醛磷脂抑制LDL胆固醇的氧化等缩醛磷脂与年龄增加、氧化压力所牵涉的疾病有关(Oleoscience，2，27-36(2002)、Oleoscience，5,405-415(2005))。

本发明的组合物中，若进一步限定，则包含选自DHA键合醚型磷脂及EPA键合醚型磷脂中的任一者。

本发明的组合物100g中的醚型磷脂的含量(包含多种醚型磷脂的情况下为其总量)例如为50mg以上，优选为100mg以上，更优选为250mg以上，进一步优选为300mg以上。本发明的组合物100g中的醚型磷脂的含量(包含多种醚型磷脂的情况下为其总量)的上限没有特别限定，例如为1300mg以下，优选为1200mg以下，更优选为1100mg以下，进一步优选为1000mg以下。

需要说明的是，每100g组合物的醚型磷脂的含量(包含多种醚型磷脂的情况下为其总量)能够根据需要用市售的标准品制作标准曲线并通过液相色谱质谱(LiquidChromatography/Mass Spectrometry：LC/MS/MS)法来求出。此时，通过用能够选择性地将磷脂的sn-1位的酯键分解的酶(例如，磷脂酶A1)进行前处理，能够将PC、PE分解而测定醚型磷脂(参照非专利文献2)。

本申请首次公开在鱼卵脂质组合物中包含醚型磷脂。另外，本申请首次公开在鱼卵脂质组合物中包含选自DHA键合醚型磷脂及EPA键合醚型磷脂中的任一者。

(脂质以外的成分)

本发明的组合物可以包含脂质以外的成分。作为脂质以外的成分，为蛋白质、虾青素、钠、钾、磷等无机物。需要说明的是，脂质是指在非极性溶剂中可溶的、源自生物的物质，其包含单纯脂质、复合脂质、衍生脂质(脂肪酸、萜类、类固醇、类胡萝卜素等)。

本发明的组合物中的脂质以外的成分的含量例如为10.0％以下，优选为8.0％以下，更优选为7.5％以下，进一步优选为7.0％以下。

本发明的组合物可以包含虾青素。本发明的组合物100g中的其含量例如为0.7mg以上，优选为1.0mg以上，更优选为1.2mg以上，进一步优选为1.5mg以上。本发明的组合物100g中的虾青素的含量的上限没有特别限定，例如为23mg以下，优选为20mg以下，更优选为10mg％以下，进一步优选为5.0mg以下。

(原料)

由脂质构成的本发明的组合物由鱼卵制备。鱼的种类没有特别限定，优选为鲑科、鲱科、或鳕科的鱼。鲑科中包含太平洋鲑属、大西洋鲑属、红点鲑属、哲罗鲑属，更优选为太平洋鲑属或大西洋鲑属的鱼。作为太平洋鲑属的鱼的例子，可举出白鲑鱼、银大麻哈鱼(银鲑、银鲑鱼)、粉红鲑(驼背大麻哈鱼)、樱鲑、山女鳟、台湾樱花钩吻鲑、降海型石川鲑鱼、陆封型石川鲑鱼、琵琶鳟(雨之鱼)、虹鳟(硬头鳟)、王鲑(帝王鲑)、红鲑鱼、姬鳟、国鳟。作为大西洋鲑属的鱼的例子，可举出大西洋鲑(安大略鲑)、褐鳟。鲱科包含鲱亚科、西鲱亚科、

鱼亚科、多棱圆鲱(Ehiravinae)亚科，优选为鲱亚科、鲱属的鱼。作为鲱属的鱼的例子，可举出鲱、大西洋鲱。鳕科包含鳕鱼属(Gadus(鳕鱼)属)、蓝鳕属(Micromesistius(蓝鳕)属)、大眼鳕属(Gadiculus属)、长臀鳕属(Trisopterus属)、小鳕属(Microgadus属)、细身宽突鳕属、牙鳕属(Merlangius属)、黑线鳕属(Melanogrammus属)、青鳕属(Pollachius属)、北鳕属(Boreogadus属)、极鳕属(Arctogadus属)，优选为鳕鱼属的鱼。作为鳕鱼属的鱼的例子，可举出黄线狭鳕、大头鳕、太平洋鳕、格陵兰鳕鱼。鱼卵可以为天然物，也可以为养殖物。

本发明中提及鱼卵时，除了特别记载的情况以外，加工的程度不受限。因此，关于本发明，提及鱼卵脂质组合物时，也包括将鱼卵提取物、鱼卵油、鱼卵油纯化物、它们的任一者的干燥物等作为原料的脂质组合物。

在特别优选的方式中，本发明的组合物由带膜鲑鱼卵、鲑鱼卵、鲱鱼卵、鳕鱼卵、或它们的任一者的加工品制备。

本发明的组合物以鱼卵为原料，因此显然与以乌贼的皮、乌贼的肉、磷虾等为原料的脂质组合物的脂质组成不同。

<制造方法>

如前所述，本申请首次公开在鱼卵脂质组合物中包含α-GPC、SM、DHSM、及醚型磷脂。因此，本发明提供含有选自SM及DHSM中的至少一种的、食品材料、医药品材料、或化妆品材料的制造方法。该制造方法包括下述的工序。

由鱼卵或作为其加工品的原材料，得到包含选自α-GPC、SM、DHSM及醚型磷脂中的至少一种的级分的工序。

另外，本发明提供富含PDPC的、食品材料、医药品材料、或化妆品材料的制造方法。该制造方法包括下述的工序。

由鱼卵或作为其加工品的原材料得到包含PDPC的级分的工序。

富含是指，每100g材料，包含PDPC至少550mg以上，优选700mg以上，更优选800mg以上，进一步优选1000mg以上。

关于作为原材料的鱼卵，如以上所说明。在优选的方式中，原材料为带膜鲑鱼卵、鲑鱼卵、鲱鱼卵、鳕鱼卵、带膜鲑鱼卵提取物、鲑鱼卵提取物、鲱鱼卵提取物、鳕鱼卵提取物、鱼卵油、或鱼卵油纯化物。通过该方法制造的食品材料可以为上面说明的提高磷脂的含量、并且提高了磷脂中的DHA的组成比的、包含DHA键合磷脂的鱼卵脂质组合物。在优选的方式中，食品材料包含DHA键合磷脂，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，且EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为5％以上。

本发明的制造方法中的、由鱼卵或作为其加工品的原材料得到包含选自SM及DHSM中的至少一种的级分的工序，能够利用由天然物提取磷脂的现有技术。作为现有技术，除了前述专利文献1～11及非专利文献1中记载的方法以外，还可以举出日本特开昭64-50890号公报、日本特开平1-199588号公报、日本特开平7-95875号公报、日本特公平7-595869号公报、日本特开平11-123052号公报、日本特开2006-96674号公报中记载的方法等。只要为本领域技术人员，则能够将这些公知的方法根据原材料进行适宜改变而应用于本发明。

磷脂从鱼卵或作为其加工品的原材料中的提取具体而言能够通过将原材料和极性低的有机溶剂混合来实施。极性低的溶剂的例子可举出选自60％～99％含水乙醇、乙醇、己烷、异丙醇、乙酸乙酯、丙酮、醚、氯仿、甲醇中的1种或2种以上的有机溶剂，但不限定于这些。基于有机溶剂的提取温度为0～90℃，优选为30～70℃。已知通过操控含水乙醇的水分含量，能够增加得到的提取物中的磷脂的含量(参照前述非专利文献1)。另外，磷脂从鱼卵或作为其加工品的原材料的提取也能够通过使用二氧化碳的超临界流体萃取法来实施。

<用途>

本发明的组合物能够用于基于DHA键合磷脂的功能的各种用途。作为DHA键合磷脂的功能，已知有抑制过敏、提高肝功能、提高红血球变形功能、抑制脑中风、美白、提高认知功能等。另外，有报道以PDPC为代表的DHA键合磷脂会影响HL-60人前骨髓性白血病细胞的分化和增殖(J.Jpn.Oil Chem.Soc.46(4)，1997)。

本发明的组合物也能够用于基于DHA的功能的各种用途。作为DHA的功能，已知有抑制血小板凝集、降低血中中性脂肪值、降低血中胆固醇、提高脑功能、维持记忆力、改善睡眠质量等。

在优选的方式中，本发明的组合物能够用于改善代谢综合征、改善脂质代谢、改善糖代谢、及提高认知功能。代谢综合征是指，内脏肥胖与高血压、高血糖、或脂质代谢异常组合，从而容易罹患心脏病、脑中风等的病状，男性的腰围为85cm以上，女性的腰围为90cm以上，并且血压、血糖、及脂质这3者中的2者以上偏离基准值的情况下被诊断为该病状。偏离基准值是指，对于血压而言为收缩期(最大)血压≥130mmHg、和/或舒张期(最小)血压≥85mmHg，对于血糖而言为空腹时血糖≥110mg/dL，对于脂质而言为高甘油三酯血症、即血液中的甘油三酯≥150mg/dL，和/或低HDL胆固醇血症、即血中的HDL<40mg/dL。提高认知功能的对象包括阿尔茨海默症的患者。

本发明的组合物另外也能够用于基于SM或DHSM的功能的各种用途。作为SM等鞘脂的骨架部分的神经酰胺是表皮层的细胞间脂质的主要成分，对皮肤的屏障功能、保湿功能是重要的。因此，本发明的组合物能够用于皮肤的屏障功能、保湿功能。

<其他>

(形态)

本发明的组合物能够制成一般食品、保健功能食品、医药品、准医药品的形态。这些形态除了特别记载的情况以外，不仅供人使用，也包含供人以外的动物使用。保健功能食品包含特定保健用食品、营养功能食品、功能性标示食品。食品除了特别记载的情况以外，不仅包含固体成分的食品，还包含液态的食品，例如饮料、饮剂、流质食品、及汤。食品包含特别用途食品、营养辅助食品、健康辅助食品、营养补充剂(例如，胶囊、片剂等各种剂型者)、美容食品(例如，减肥食品)等健康食品全部。

(对象)

本发明的组合物适于使对象摄取、或对其给药磷脂、DHA。这样的对象包含婴幼儿、儿童、成人(15岁以上)、中高年者、高龄者(65岁以上)、患病中及愈后者、孕妇、产妇、男性、女性。

(给药路径等)

本发明的组合物适于口服摄取或给药。

(用量)

本发明的组合物的摄取量/给药量能够设为每天100mg～10000mg，优选为300mg～5000mg，更优选为500mg～2500mg。根据日本厚生劳动省的“日本人的进食摄取基准(2015年版)”，对于n-3系脂肪酸的进食摄取基准，15岁以上的男性以2.1～2.4g/天、15岁以上的女性以1.6～2.0g/天、孕妇及哺乳期女性以1.8g/天为基准量。本发明的组合物也能够在该范围内使用。

本发明的组合物可以采用一天1次的给药/摄取，也可以采用一天多次给药、例如每餐给药的3次给药。组合物由于使用源自食用经验丰富的鱼卵的有效成分，因此适于长期的摄取。因此可以反复、或长期摄取，例如能够持续给药/摄取3天以上，优选1周以上，更优选4周以上，特别优选1个月以上。

(其他成分、添加剂)

本发明的组合物除了包含源自鱼卵的脂质以外，还可以包含作为食品或医药品可允许的其他有效成分、营养成分。这样的成分的例子为维生素(例如，维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、生物素、叶酸、泛酸及烟酸类)、矿物质(例如，铜、锌、铁、钴、锰)、氨基酸类(例如，赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)、糖质(葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、海藻糖、赤藓糖醇、麦芽糖醇、帕拉金糖、木糖醇、糊精)、食物纤维、蛋白质、脂质等。

另外，组合物还可以包含作为食品或医药允许的添加物。这样的添加物的例子为抗氧化剂、稳定剂、稳定化剂、着色剂、保存剂、惰性载体(固体、液体载体)、赋形剂、表面活性剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、涂布剂、缓冲剂、pH调节剂、乳化剂、甜味料、香料、酸味料、天然物。

(其他)

本发明的组合物能够标示包含磷脂、DHA、及DHA键合磷脂、以及这些成分的功能、能够用于这些成分的摄取的意旨，另外，能够标示建议摄取的特定的对象(例如，注意中性脂肪者、想要摄取DHA者等)。标示能够采用直接或间接式。直接标示的例子为记载于制品本身、包装、容器、标签、吊牌等有形物，间接标示的例子包含基于传单、手册、展示会、店面、网站、书籍、新闻、杂志、电视、收音机、邮件、电子邮件、声音等场所或手段的广告/宣传活动。

实施例

以下，通过实施例更详细地对本发明进行说明，但本发明不限定于以下的实施例。

<由带膜鲑鱼卵、鲱鱼卵、鳕鱼卵制造组合物>

将经冷冻粉碎的生带膜鲑鱼卵(15kg)加入至含水乙醇(150L)进行提取，通过过滤滤除残渣。另外，将残渣放回至提取器，再次加入乙醇(75L)进行提取。将得到的滤液在减压下将溶剂蒸馏去除，制造包含红色油状物质的约30％的磷脂的组合物(30PL)(实施例1)、包含约40％的磷脂的组合物(40PL)(实施例2-1、及实施例2-2)。另外，同样，以鲱鱼卵、源自养殖鲑鱼的带膜鲑鱼卵、鳕鱼卵为原料，制造包含磷脂的组合物。

<组合物的分析>

1.材料/方法

按以下的方法对得到的组合物进行分析。

(用于磷脂含量测定的JFRL法)

将试样(200mg)在含有0.5％EDTA2Na的10％胆酸钠水溶液(pH6.9)中进行稀释以使试样浓度成为1.5％，作为测定溶液。另外，内标使用磷酸丝氨酸(traceable referencematerial，可追踪的参考物质)。NMR的测定条件如下述。

NMR装置：JNM-ECA 500(日本电子株式会社)

31P共振频率：202MHz，等待时间：20秒，数据采集时间：4.0秒，脉冲核90°

累积次数：2048次，测定温度：30℃

(用于脂肪酸测定的气相色谱法)

在螺旋盖试验管中精确称量试样100mg，加入0.5M氢氧化钠溶液1.5mL，进行氮封入后，用100℃的块型加热器进行9分钟加热。从块型加热器中取出试验管，放冷后，加入三氟化硼甲醇络合物溶液(Sigma，B1252-100ML)(2mL)，进行氮封入后，用100℃的块型加热器进行7分钟加热。从块型加热器中取出试验管，放冷后，加入己烷3mL，涡旋搅动3分钟。加入蒸馏水3mL，用手剧烈搅拌30秒钟后，静置于试验管架上，分离为水层和己烷层。用硫酸钠进行脱水后，供于气相色谱仪(P1us/GC-2010：岛津制作所)。

[表1]

(比较品)

另外，为了比较，使用以下的现行品。

市售品A(Krill oil、AkerBiomarine制Lot.160512)

市售品B(Krill oil AkerBiomarine制Lot.170818)

市售品C(SANOMEGA DHA-PC日油制Lot.160512)

2.结果

(组成)

[表2]

实施例1(30PL)

磷脂含量	31.2％
		DHA(组成比)	26.5％
EPA(组成比)	13.8％

[表3]

实施例2-1(40PL)

磷脂含量	41.3％
		DHA(组成比)	27.0％
EPA(组成比)	17.1％

[表4]

实施例2-2(40PL)

磷脂含量	41.7％
		DHA(组成比)	27.2％
EPA(组成比)	13.6％

(磷脂级别的分析)

[表5]

(脂肪酸组成(总体)组成比％)

对于组成比，以通过自动积分取得的面积值中仅排除溶剂峰而算出的面积的比例的形式来求出。将结果示于下表。

[表6]

<键合有DHA的脂质的分析>

将试样溶解于(约700mg)氯仿(4mL)，施加于硅胶柱(SepPakVacl2cc(2g)SilicaCartridge(MERCK))。依次通入氯仿(30mL)、氯仿-甲醇(9∶1)(50mL)，将洗脱的溶液作为中性脂质级分(NL级分)。接下来，通入甲醇(60mL)并将洗脱的溶液作为极性磷脂级分(PL级分)。将NL级分、PL级分分别浓缩，按照规定的方法测定DHA、EPA含量(每100g的重量)。

将结果示于下表。

[表7]

<棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱的分析>

用LC-MS/MS对DHA键合磷脂中的棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱(PC38∶6(PC-16∶0-22∶6))进行定量。

(标准溶液的制备)

使用Avanti公司制1-棕榈酰基-2-二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(25mg/2.5mL氯仿溶液，Lot：850461C-25MG-J-053)。称量原液(104.0mg)，在其中加入含有0.1％甲酸+5mM甲酸铵的甲醇(900uL)(1000ppm溶液)。接下来，在1000ppm溶液(100uL)中加入含有0.1％甲酸+5mM甲酸铵的甲醇(900uL)，制备100ppm溶液。重复同样的操作，分别制备10000ppb，1000ppb，100ppb溶液。将得到的稀释液作为外标样品。

(分析样品制备)

精确称量样品(5-10mg)，用全量移液管加入氯仿(5-10mL)(1000ppm溶液)。接下来，精确称量1000ppm溶液(0.1g)，加入含有0.1％甲酸+5mM甲酸铵的甲醇(900uL)(100ppm溶液)。进而，对100ppm溶液(100uL)加入含有0.1％甲酸+5mM甲酸铵的甲醇(900uL)(10ppm溶液)。将得到的稀释液作为分析样品。

(LC基本条件)

流速：0.35ml/min

柱温箱温度(Column Oven Temp)：50℃

进样体积(Injection Volume)：1uL

柱(Column)：Triart C18(2.1×150mm，粒径3μm)YMC公司

(梯度条件)

·流动相A：含有0.1％甲酸+10mM甲酸铵的60％乙腈

·流动相B：含有0.1％甲酸+10mM甲酸铵的2-丙醇∶乙腈＝9∶1

[表8]

(MS条件)

质谱仪：QTRAP6500+(SCIEX)

极性(Polarity)：负性(Negative)、帘气(Curtain Gas)：20.0[psi]、离子喷雾电压(IonSpray Voltage)：-5500.0[V]

温度(Temperature)：350.0℃、离子源气体(Ion Source Gas)1：40.0、离子源气体(Ion Source Gas)2：50.0

CAD：11.0、EP：-10.0

Q1：850.56，Q3：255.233，327.233，DP电压(DP voltage)：-50，CE电压(CEvoltage)：-46，CXP电压(CXP voltage)：-13

定量中使用保持时间9.78分钟、Q1：850.56、Q3327.233。

将定量结果示于下表。

[表9]

<醚磷脂级分的分析>

醚磷脂级分的定量分析

(分析样品的前处理)

将试样溶解于(约150mg)氯仿-甲醇(9∶1)(500μL)，施加于硅胶柱(Bond Elut(5g)(Agilent))。将洗脱的溶液作为中性脂质级分(NL级分)。接下来，通入氯仿∶甲醇∶水(65∶25∶4)(100mL)并将洗脱的溶液作为极性磷脂级分(PL级分)。将PL级分分别浓缩、冷冻干燥。

将PL级分(约10mg)溶解于乙醇(150μL)，接下来在磷脂酶A1水溶液(MitsubishiChemical Foods，9000U，0.1mol/L柠檬酸钠/盐酸缓冲液，pH 4.4，3mL)中进行水解(反应温度50℃，30小时)。对反应液加入氯仿-甲醇(1∶1)(6.66mL)，搅拌后进行离心分离(3500rpm×15min)，采集下层。用无水硫酸钠脱水后，通过浓缩干固及真空干固得到提取油。需要说明的是，本酶分解条件以三明等人的方法作为参考来实施(非专利文献2)。

(分析样品的制备)

PL级分的前处理按照前项的方法来实施。对表1的提取油加入甲醇(1.4～3.9g)进行稀释，得到1000ppm甲醇溶液。对该溶液(100μL)加入甲醇(900μL)。使该稀释液通入膜滤器(0.20μm，DISMIC-13HP)，作为测定样品。

(标准曲线用标准液的制备)

使用Avanti公司制1-(1Z-十八碳烯基)-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(1mg/mL氯仿溶液，Lot：852467C-5MG-D-021)。在原液(100μL)中加入甲醇(900μL)(100ppm溶液)。接下来，在100ppm溶液(500μL)中加入甲醇(500μL)制备50ppm溶液。进而在100ppm溶液(150μL)中加入甲醇(1350μL)制备10ppm溶液。在50ppm溶液(100μL)中加入甲醇(900μL)制备5ppm溶液。在10ppm溶液(200μL)中加入甲醇(800μE)制备2ppm溶液。将得到的稀释液作为外标样品。

(LC基本条件)

流速：0.30ml/min

柱温箱温度(Column Oven Temp)：50℃

进样体积(Injection Volume)：10μL

柱(Column)：ACQUITY UPLC BEH Amide 1.7um 2.1x100mm Column(Waters公司)

(梯度条件)

·流动相A：含有2mM乙酸铵水∶乙腈＝5∶95

·流动相B：含有2mM乙酸铵水∶乙腈＝50∶50

[表10]

梯度条件

时间(min)	Aconc(％)	Bconc(％)
			0.00	99	1
6.00	94	6
			10.00	75	25
11.00	2	98
			13.00	0	100
20.00	0	100
			21.00	99	1
35.00	99	1

(带电粒子检测器的设定条件)

·带电粒子检测器：Corona Veo RS(ThermoFisher)

·过滤器常数：5.0sec

·功率函数(power function)：1.00

·电流范围：100pA

·干燥管温度：35℃

(定量结果)

将定量结果示于下表。

[表11]

醚磷脂级分的定量结果

醚磷脂级分的定性分析

通过LC-MS测定，对该醚磷脂级分中所含的化合物进行定性。

(分析样品的制备)

相对于酶分解后的提取油1重量加入1000倍容积的甲醇进行稀释，得到1000ppm甲醇溶液。对该溶液(100μL)加入含有0.1％甲酸及5mM甲酸铵的甲醇(900μL)。将该稀释液通入膜滤器(0.20μm，DISMIC-13HP)，作为测定样品。

(LC基本条件)

流速：0.30mL/min

柱温箱温度(Column Oven Temp)：50℃

进样体积(Injection Volume)：10μL

柱(Column)：ACQUITY UPLC BEH Amide 1.7um 2.1x100mm Column(Waters公司)

(梯度条件)

·流动相A：含有2mM乙酸铵水∶乙腈＝5∶95

·流动相B：含有2mM乙酸铵水∶乙腈＝50∶50

[表12]

梯度条件

时间(min)	Aconc(％)	Bconc(％)
			0.00	99	1
6.00	94	6
			10.00	75	25
11.00	2	98
			13.00	0	100
20.00	0	100
			21.00	99	1
35.00	99	1

(MS的设定条件)

质谱仪：Q-Exactive(Thermo Fisher)

<通用(General)>

极性(Polarity)：负性(Negative)

默认充电状态(Default charge state)：2

<全MS(Full MS)>

分辨率(Resolution)：70,000

AGC目标(AGC target)：3e6

最大IT(Maximum IT)：100ms

扫描范围(Scan Range)：200到2000m/z

<dd-MS2/dd-SIM>

分辨率(Resolution)：17,500

AGC目标(AGC target)：1e5

最大IT(Maximum IT)：50ms

循环计数(Loop count)：5

TopN：5

隔离窗(Isolation window)：4.0m/z

步进NCE(Stepped NCE)：25，35，45

(定性方法)

利用上述质谱仪中得到的数据的专用解析软件即Free Style(Thermo Fisher)及Lipid Search(Ver 4.2.23，三井情报株式会社)进行解析。

(脂质搜索(Lipid Search)的设定参数)

·搜索类型(Search type)：产品(product)

·前体允许量(Precursor Tolerance)：5.0ppm

·产品公差(Product Tolerance)：8.0ppm

·m得分阈值(m-Score threshold)：2.0

·加合物(Adducts)：-H，+COOH

(定性结果)

作为代表例，记载关于带膜鲑鱼卵油40PL的解析。

根据脂质搜索(Lipid Search)的解析结果，可看出，主要包含PC(14：0e_20∶5)、PC(14∶0e_22∶6)、PC(14∶1e_22∶6)、PC(16∶1e_22∶6)、PC(18∶1e_22∶6)。即，是以键合有DHA、EPA为特征的醚磷脂。已知这些醚磷脂(缩醛磷脂等)通常对认知功能改善有效果。

Claims (12)

1.一种鱼卵脂质组合物，其包含二十二碳六烯酸键合磷脂，

所述鱼卵脂质组合物包含26％以上的磷脂，

二十二碳六烯酸在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，

所述二十二碳六烯酸为DHA。

2.根据权利要求1所述的鱼卵脂质组合物，其包含选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂及二氢鞘磷脂中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，磷脂包含74％以上的磷脂酰胆碱。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其中，DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，二十碳五烯酸即EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为5％～25％。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的组合物，其100g中包含3500mg以上的棕榈酰基二十二碳六烯酰基磷脂酰胆碱。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的组合物，其100g中包含250mg的醚型磷脂，并且包含选自DHA键合醚型磷脂及EPA键合醚型磷脂中的至少一种。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的组合物，其用于利用选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂及醚型磷脂中的至少一种作为功能性成分。

8.根据权利要求1～6中任一项所述的组合物，其用于选自提高皮肤的保湿功能、改善代谢综合征、改善脂质代谢、改善糖代谢、及提高认知功能中的任一者。

9.一种含有选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂及醚型磷脂中的至少一种的食品材料、医药品材料、或化妆品材料的制造方法，其包括以下的工序：

由鱼卵或作为其加工品的原材料，得到包含选自α-甘油磷酸胆碱、鞘磷脂、二氢鞘磷脂及醚型磷脂中的至少一种的级分的工序。

10.根据权利要求9所述的制造方法，其中，原材料为带膜鲑鱼卵、鲑鱼卵、鲱鱼卵、鳕鱼卵、带膜鲑鱼卵提取物、鲑鱼卵提取物、鲱鱼卵提取物、鳕鱼卵提取物、鱼卵油、或鱼卵油纯化物。

11.根据权利要求9或10所述的制造方法，其中，食品材料、医药品材料或化妆品材料包含26％以上的磷脂。

12.根据权利要求9～11中任一项所述的制造方法，其中，食品材料、医药品材料或化妆品材料包含DHA键合磷脂，

DHA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为15％以上，且EPA在脂质的构成脂肪酸中所占的组成比为5％以上。