JP5579333B2 - 性機能改善剤 - Google Patents
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Description
1.マウンティング潜伏期間:交配試験開始後、第1回目のマウンティングが行われるまでに要する時間;
2.交尾(射精)潜伏期間:交配試験開始後、第1回目の交尾が行われるまでに要する時間;
3.マウンティング回数:試験時間中に行われるマウンティングの回数;
4.交尾回数:試験時間中に行われる交尾の回数;
5.マウンティング回数と交尾回数の割合(交尾率):交尾回数をマウティング回数で割る;
6.睾丸(+副睾丸)、及び精嚢(+前立腺)の重量;
7.精子数、運動精子率、前進精子率、前進移動速度、及び直線地点移動速度等の精子状態に関する評価;
8.精子中の性ホルモン濃度。
・被験動物の結果が、Controlを上回り、且つBaseを有意差を持って上回る場合、性機能の強壮的効果があると判断する;
・被験動物の結果が、Controlと有意差がない又はControl以下となる場合、性機能改善効果がないと判断する。
ラクダ、ラマ、アジアゾウ、アルパカ、トナカイ(カリブー)、ゼブウ(コブウシ)、スイギュウ、ヤク、モルモット、ウサギ(ラビット)、ミンク、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、シチメンチョウ、バリケン、ウズラ、ダチョウ、ドバト、キジ、ウミウ、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、フェレット、リス、サル等、魚類:タイ、マグロ、ブリ、カンパチ、ヒラマサ、アジ、サバ、スズキ、ウナギ、カレイ、ヒラメ、フグ、サケ、マス、ナマズ、ハタ、バラマンディ、コビア等であり、これらの動物の飼料又は餌として本発明の性機能改善剤を適用することもできる。
2009年2月から11月に南極海にて漁獲したナンキョクオキアミ(10t)を漁獲直後に採肉機(バーダー社製、型式BAADER605)にて圧搾し、圧搾液(3t)を得た。この圧搾液を800kgずつステンレスタンクに収納し、140℃の水蒸気を直接投入することにより加熱した。約60分の加熱において85℃達温を確認して加熱を停止した。タンク底部のバルブを開放し、目合い2mmメッシュを通過する液状成分を自然落下により除去し、固形分(熱凝固物)は同量の水をシャワリングすることにより洗浄した後、アルミ製のトレイに12kgずつ収納してコンタクトフリーザにより急速冷凍した。得られた凝固物の総重量は2.25tであった。
カラム:DB−WAX(J&W Scientific、型番:122−7032)
キャリアガス:ヘリウム
検出器:水素イオン化検出器
分析結果を以下に示す(表3)。
L−セリン(200g)を酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.6、400ml)に入れ、放線菌由来のホスホリパーゼD(4000unit/g、2g)を加えた後、40℃で攪拌してセリンを完全に溶解させた。当該溶解液を、アスタキサンチン(340ppm)、及びPC(35重量%)を含有するオキアミ由来のリン脂質(100g)が溶解された酢酸エチル(500ml)と混合し、200rpmで攪拌しながら40℃で24時間反応させた。
L−セリン(200g)を酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.6、400ml)に入れ、放線菌由来のホスホリパーゼD(4,000unit/g、2g)を加えた後、40℃で攪拌してセリンを完全に溶解させた。当該溶解液に、アスタキサンチン(450ppm)、及びPC(55重量%)を含有するオキアミ由来のリン脂質(100g)を酢酸エチル(500ml)に溶解させた溶液を混合した後、200rpmで攪拌しながら40℃で24時間反応させた。
アスタキサンチン(340ppm)、及びPC(35重量%)を含有するオキアミ由来のリン脂質(150g)をアセトンで洗浄することによって中性脂質を除去した。沈殿物を濃縮することによって得られたリン脂質(50g)を酢酸エチル(500ml)中に溶解させた。
実施例1〜4に記載の方法を用いて調製したPC含有組成物及びPS含有組成物を、退勢したオスの高齢マウスに経口で連続投与し、性機能の改善効果を評価した。
特定病原体未感染(SPF)のインプリンティングコントロール領域(imprinting control region、ICR)マウスを使用した。10ヶ月齢のオスのマウスを退勢したマウスとして、3ヶ月齢のオスのマウスを正常マウスとして飼育を開始し、5週間の飼育の後に交配実験に使用した。3ヶ月齢のメスのマウスを各群のオスと交配させるために使用した。
相対湿度: 40〜70%;
照明時間: 12時間;
飼料: SPF級飼料、自由摂取;
飲料水: 滅菌水、自由摂取。
PC含有組成物及びPS含有組成物をそれぞれMCT(中鎖脂肪酸トリグリセリド)で希釈し、2mg/ml、20mg/ml、及び200mg/mlの溶液を調製した。
試験サンプルを、ゾンデを用いてオスのマウスに経口投与した。投与回数は一日一回、投与期間は5週間で試験サンプルを投与した。試験サンプルの投与量は、PCL及びPSLについては(10mg/kg)、PCM及びPSMについては(100mg/kg)、PCH及びPSHについては(1,000mg/kg)とした。正常比較群及び高齢比較群においては、PC又はPSの代わりに生理食塩水を投与した。その投与量は、正常比較群のマウスに対しては0.15ml/匹(マウスの体重を約30gと推定)、高齢比較群のマウスに対しては0.20ml/匹(マウスの体重を約40gと推定)とした。
交配試験の開始48時間前に、安息香酸エストラジオール(Estradiol Benzoate)(20mM/匹)、4時間前にプロゲステロン(Progesterone)(500mM/匹)を交配用のメスのマウスに注射した。
1.マウンティング潜伏期間;
2.交尾(射精)潜伏期間;
3.マウンティング回数;
4.交尾回数;
5.マウンティング回数と交尾回数の割合(交尾率)
6.睾丸(+副睾丸)、及び精嚢(+前立腺)の重量;
(5)結果
本実験において上記の評価項目の全てにおいて高齢比較群(Control)と正常比較群(Base)の間では明確な有意差が確認された。
全ての投与群において、オスの高齢動物のマウンティング潜伏時間は、同じく高齢の比較群(Control)に比べて大幅に短縮され、その程度は若い正常比較群(Base)のマウンティング潜伏時間に近づくことが示された。特に、PSH、PSL、PCH及びPCM群においては顕著な改善効果が示された。
一方、オスの高齢動物の交尾潜伏時間と交尾回数を測定したところ、同じく高齢の比較群(Control)に比べて、PCとPSの投与により交尾潜伏時間の短縮傾向が観察された。そして、PSM、PCH及びPCL投与群においては顕著な交尾(回数)の改善効果が確認された(図4)。なお、このオスの高齢動物に対する交尾の改善効果は若い正常比較群(Base)に匹敵していることが分かった。
全ての投与群において、オスの高齢動物の交尾率は、同じく高齢の比較群(Control)に比べて大幅に増加し、その程度は若い正常比較群(Base)の交尾率に近づくことが示された。低投与群及び高投与群においては、PS投与群よりPC投与群の方がより確実な改善効果を示した。
オスの高齢動物の生殖器官の重量を測定したところ、同じく高齢の比較群(Control)に比べて、睾丸(+副睾丸)の重量は殆ど変わっていなかったが、精嚢(+前立腺)の重量はPCとPSの投与より顕著に増加されたことが確認できた。
(1)試験動物
SPF動物(Specific Pathogen Free animal)であるICRマウスを試験に使用した。11ヶ月齢のオスのマウスを対照マウス(control mice)及び各群として使用するために飼育した。3ヶ月齢のオスのマウスを正常マウスとして飼育した。3ヶ月齢のメスのマウスを各群のオスと交配させるために使用した。
マウスは、以下に示す条件で単独飼育した。
相対湿度: 40〜70%;
人工光: 12時間毎に明暗;
飼料: SPF級飼料;
飲料水: 滅菌水。
購入したマウスを3日間馴化させた後、マウスの体重に基づき、ランダムに以下のように群分けした(表7)。
以下のサンプルを各動物群に使用した。
比較群(control group):生理食塩水
(5)試験サンプルの調製
K−PCをそれぞれMCTで希釈し、2mg/ml、20mg/ml、及び200mg/mlの溶液を調製した。これらのサンプルを試験サンプルとして使用した。
試験サンプルを、一日一回、ゾンデを用いてオスのマウスに経口投与した。
試験サンプルを、低投与群に対して10mg/kg、中投与群に対して100mg/kg、及び高投与群に対して1000mg/kgで動物に投与した。すなわち、投与量は個々の動物の体重に依存する。生理食塩水を正常比較群の動物及び高齢比較群の動物に投与した。その投与量は、正常比較群の動物に対しては0.15ml/匹(マウスの体重を約30gと推定)、高齢比較群の動物に対しては0.20ml/匹(マウスの体重を約40gと推定)とした。
交配試験の開始48時間前に、安息香酸エストラジオール(Estradiol Benzoate)(20μM/匹)、4時間前にプロゲステロン(Progesterone)(500μM/匹)を交配用のメスのマウスに注射した。
交配試験において、以下の項目を評価した:
マウンティング潜伏期間(交配試験の開始後、最初のマウンティングが行われるのに要する時間);
交尾(射精)潜伏期間(交配試験開始後、最初の交尾が行われるのに要する時間);
マウンティング回数(試験時間(20分)の間に行われるマウンティング回数);
交尾回数(試験時間(20分)の間に行われる交尾回数);
マウンティング回数と交尾回数の割合(交尾率)(マウンティング回数で除された交尾回数);
睾丸(+副睾丸)、及び精嚢(+前立腺)の重量、及び重量比;
精巣(睾丸)の組織における曲精細管の病理学的観察。
試験群ごとに摘出された曲精細管の状態を精巣(睾丸)の病理切片を用いて観察した。高齢マウスにおける精子形成が縮小することが観察され(図8(B))、K−PCの投与により退縮が改善されることが観察された(図8(C)〜(E))。
(1)試験動物
SPF動物(Specific Pathogen Free animal)であるICRマウスを試験に使用した。11ヶ月齢のオスのマウスを対照マウス(control mice)及び各群として使用するために飼育した。3ヶ月齢のオスのマウスを正常マウスとして飼育した。3ヶ月齢のメスのマウスを各群のオスと交配させるために使用した。
マウスは、以下に示す条件で単独飼育した。
相対湿度: 40〜70%;
人工光: 12時間毎に明暗;
飼料: SPF級飼料;
飲料水: 滅菌水。
購入したマウスを3日間馴化させた後、マウスの体重に基づき、ランダムに以下のように群分けした(表8)。
以下のサンプルを各動物群に使用した。
比較群(control group):生理食塩水
K−PCをMCTで希釈し、2mg/ml、20mg/ml、及び200mg/mlの溶液を調製した。これらのサンプルを試験サンプルとして使用した。
試験サンプルを、一日一回、ゾンデを用いてオスのマウスに経口投与した。
試験サンプルを、低投与群に対して10mg/kg、及び中投与群に対して100mg/kgで動物に投与した。すなわち、投与量は個々の動物の体重に依存する。サンプルごとの容量は5ml/kgであった。
交配試験の開始48時間前に、安息香酸エストラジオール(Estradiol Benzoate)(20μM/匹)、4時間前にプロゲステロン(Progesterone)(500μM/匹)を交配用のメスのマウスに注射した。
交配試験において、以下の項目を評価した:
マウンティング潜伏期間(交配試験の開始後、最初のマウンティングが行われるのに要する時間);
交尾(射精)潜伏期間(交配試験開始後、最初の交尾が行われるのに要する時間);
マウンティング回数(試験時間(30分)の間に行われるマウンティング回数);
交尾回数(試験時間(30分)の間に行われる交尾回数);
マウンティング回数と交尾回数の割合(交尾率)(マウンティング回数で除された交尾回数);
精巣、精巣上体、及び前立腺の重量;
精子数、運動精子率、前進精子率、前進移動速度(VAP)、及び直線地点移動速度(VSL)の測定。
この試験により、以下の結果が得られた。
本発明の性機能改善剤をマウスに投与した後、血清中の性フェロモン濃度を測定した。
試験完了後の各投与群に関して、血清中のInhibin B及び卵胞刺激ホルモン(Follicle-Stimulating Hormone)の濃度を計測した。Inhibin B(InB)濃度を、市販の計測キット(Beijing Sino−uk Institute of Biological Technology(北京、中国))を使用し、説明書に基づいて計測した。卵胞刺激ホルモン(FSH)濃度を、卵胞刺激ホルモンラジオイムノアッセイ(RIA)キット((Beijing Sino−uk Institute of Biological Technology(北京、中国))を使用し、説明書に基づいて計測した。
結果は、異なる投与群ごとの間で差異が存在しないことを明確に示した。
本発明の性機能改善剤をマウスに投与後、マウスの生殖機能を評価した。魚油(F−Oil)、大豆リン脂質(S−PC)、及びMCT(control)を高齢マウスに経口で連続投与し、生殖機能の改善効果を評価した。
特定病原体未感染(SPF)のインプリンティングコントロール領域(imprinting control region、ICR)マウスを使用した。
12ヶ月齢のオスのマウスを退勢したマウスとして使用するために飼育した。4週間の飼育後、生殖機能を評価するためにマウスを使用した。
相対湿度: 40〜70%;
照明時間: 12時間;
飼料: SPF級飼料、自由摂取;
飲料水: 滅菌水、自由摂取。
魚油(脂質としてトリグリセリド 99.0%(W/W)、トコフェロール 1.0%(w/w)、EPA 28.8%(w/w)及びDHA 14.7%(w/w)を含む水 0.0%(w/w))、及び大豆リン脂質(和光純薬工業株式会社より購入した大豆由来のレシチン、製品番号:120−00832)をそれぞれMCTで希釈し、20mg/mlの溶液を調製した。
試験サンプルを、ゾンデを用いてオスのマウスに経口投与した。投与回数は一日一回、投与期間は4週間で試験サンプルを投与した。試験サンプルを、各動物の体重に基づいて5mg/kgで投与し、100mg/kg(中投与群)とした。
交配試験後24時間以内に、試験動物を安楽死させ、睾丸、副睾丸、及び前立腺などの生殖機能に関わる器官を摘出した。これらの器官の重量を計測した。動物から摘出した精巣上体部の一つを、受精能獲得培地(Medium 199)において37℃で分裂させた。5分間培養後、精子の原液を得た。精子の原液をTOX IVOS(Hamilton Thorne Research)にさらし、精子生存率、運動精子率、及び前進精子率などの精子状態についての評価に関連する項目を測定した。
1.睾丸、副睾丸、及び前立腺の重量;
2.精子数、運動精子率、及び前進精子率。
(5−1)精子数(図17)
F−Oil群、S−PC群、及びF+S群における精子数はすべて対照群(control group、cont.)に比べて増加した。S−PC群、及びF+S群における精子数は対照群に比べて顕著に増加した。S−PC群の精子数が最も高かった。
S−PC群、及びF+S群における運動精子率は対照群に比べて増加した。特に、S−PC群の運動精子率は顕著に増加した。
S−PC群、及びF+S群における前進精子率は対照群に比べて増加した。特に、S−PC群の前進精子率は顕著に増加した。
F−Oil群、S−PC群、及びF+S群における睾丸の重量はすべて対照群に比べて顕著に増加した。
F−Oil群、S−PC群、及びF+S群における副睾丸の重量はすべて対照群に比べて顕著に増加した。S−PC群、及びF+S群における副睾丸は対照群に比べて顕著に増加した。
Claims (7)
- n−3系高度不飽和脂肪酸を構成脂肪酸として含むリン脂質を1〜5000mg/50kg体重/日で投与するように、有効成分として含有する、減退した性機能の回復に使用するための性機能改善剤(ただし、飲食品として使用する場合を除く)。
- n−3系高度不飽和脂肪酸がエイコサペンタエン酸又はドコサヘキサエン酸である、請求項1に記載の性機能改善剤。
- リン脂質がホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジルイノシトールからなる群から選ばれる、請求項1又は2に記載の性機能改善剤。
- オキアミ油を有効成分として使用する、請求項1〜3のいずれか1項に記載の性機能改善剤。
- 精製されたオキアミ油を有効成分として使用する、請求項4に記載の性機能改善剤。
- オキアミ油がオキアミの熱凝固物を経て精製されたオキアミ油である、請求項5に記載の性機能改善剤。
- オキアミ油を1〜5000mg/50kg体重/日で対象に投与するための、請求項4〜6のいずれか1項に記載の性機能改善剤。
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