FR2950361A1 - Hydrolysats d'animaux marins, procede d'obtention et utilisation - Google Patents

Abstract

La présente invention se rapporte à un procédé d'obtention d'un hydrolysat de viscères d'animaux marins, à l'hydrolysat susceptible d'être obtenu par ce procédé et l'utilisation de l'hydrolysat en tant que médicament, aliment ou additif ou complément alimentaire. L'hydrolysat susceptible d'être obtenu par le procédé de la présente invention permet notamment de freiner ou stopper les processus de dégénérescence musculaire, augmenter le développement musculaire, diminuer la masse grasse au profit de la masse sèche, lutter contre des pathologies musculaires, améliorer l'absorption de nutriments au niveau intestinal, renforcer le système immunitaire, augmenter le taux d'hémoglobine et/ou d'hématocrite, diminuer la cellulite, et/ou augmenter la satiété.

Description

HYDROLYSATS D'ANIMAUX MARINS, PROCÉDÉ D'OBTENTION ET UTILISATION

DESCRIPTION 5 Domaine technique La présente invention se rapporte à un procédé d'obtention d'un hydrolysat de co-produits d'animaux marins, à l'hydrolysat susceptible d'être obtenu par ce procédé et l'utilisation de l'hydrolysat en tant que 10 médicament, aliment ou additif ou complément alimentaire. L'hydrolysat susceptible d'être obtenu par le procédé de la présente invention permet notamment de freiner ou stopper les processus de dégénérescence musculaire, augmenter le développement musculaire, diminuer la masse grasse au profit de la masse sèche, lutter contre des 15 pathologies musculaires, améliorer l'absorption de nutriments au niveau intestinal, renforcer le système immunitaire, augmenter le taux d'hémoglobine et/ou d'hématocrite, diminuer la cellulite, et/ou augmenter la satiété.

20 État de la technique Chaque année, près de cent millions de tonnes de biomasse marine, parmi les poissons, mollusques, crustacées, etc., sont exploités par l'homme à travers le monde. Or, seule moins de la moitié de ces ressources sont directement consommées par l'être humain. Il serait donc 25 intéressant de pouvoir valoriser la partie actuellement non utilisée de ces ressources, notamment dans l'alimentation humaine ou animale. À titre d'exemple, la seiche (Sepia officinalis) est un céphalopode dont la croissance est extrêmement rapide et la durée de vie assez faible. D'un point de vue nutritionnel, la chair de sèche a un ratio protéines/lipides 30 très élevé, un peu similaire à la viande maigre, ce qui en fait un aliment intéressant.

En France, la pêche de la seiche représentait un peu moins de 15000 tonnes en 2007. Ces céphalopodes sont destinés principalement à l'exportation sous forme pelée, éviscérée et congelée vers les pays méditerranéens et le Japon. La quantité de co-produits issus de la transformation des céphalopodes, comme les peaux, les têtes, les viscères, les os ou les cartilages, correspond à environ 30 à 40 % du volume de la seiche. Il est donc intéressant d'essayer de valoriser ces coproduits. De manière générale, les co-produits issus de la biomasse marine sont généralement dirigés vers l'industrie des aliments pour animaux ou la production d'huiles. La valorisation de ces co-produits est un sujet d'actualité et de nombreuses voies de valorisation restent à explorer. L'utilisation d'extrait de co-produits d'espèces marines en tant que complément alimentaire pour post-larves de crustacés ou juvéniles de mollusques et de poissons, montre un très fort potentiel dans l'accélération de leur croissance et le renforcement de leur système immunitaire. L'ensemble de ces recherches portant sur des molécules bioactives au sein d'hydrolysats des co-produits d'espèces marines montre la présence de molécules à caractère de facteur de croissance, régulateur de la digestion et immuno-modulateur, ayant un important rôle à jouer en l'aquaculture dans les années à venir. Parallèlement aux études portant sur les extraits des co-produits d'espèces marines, des recherches ont été réalisées sur les procédés d'obtention d'hydrolysats eux-mêmes.

Les procédés d'obtention d'hydrolysats de co-produits d'espèces marines décrits à ce jour ne permettent pas d'obtenir des hydrolysats qui soient utilisables en nutrition humaine. En particulier, les hydrolysats obtenus par les procédés de l'art antérieur ne sont pas utilisables en nutrition humaine car ils ne permettent pas une sécurité alimentaire suffisante pour l'être humain. De plus, les hydrolysats de l'art antérieur font appel à des substances non autorisées ou encore sont mal supportés par les personnes qui les consomment. Par ailleurs, les désagréments engendrés par la prise des hydrolysats de l'art antérieur ne sont pas compensés par un effet valorisable en nutrition humaine. Il existe donc un réel besoin de valoriser les co-produits d'espèces marines, notamment en nutrition humaine, d'où la nécessité de mettre au point un procédé d'obtention d'un hydrolysat de ces co-produits palliant les défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, et permettant de réduire les coûts et de procurer aux hydrolysats obtenus un ou plusieurs effets valorisables.

Description de l'invention La présente invention a précisément pour but de résoudre l'ensemble des problèmes précités, notamment en fournissant un procédé d'obtention d'un hydrolysat de viscères d'animaux marins.

Le procédé de la présente invention comprend les étapes suivantes : (a) mélange de co-produits d'animaux marins, (b) chauffage du mélange obtenu à l'étape (a) à une température allant de 30 à 65°C, (c) ajustement du pH du mélange obtenu à l'étape (b) à une valeur allant de 1 de 8, (d) hydrolyse enzymatique du mélange obtenu à l'étape (c) pendant une durée allant de 1 à 8 heures, (e) chauffage de l'hydrolysat obtenu à l'étape (d) à une température allant de 75 à 150°C, et (f) refroidissement de l'hydrolysat obtenu.

On entend par « animaux marins », tout type d'animaux vivant en milieu aquatique. Par exemple, les animaux marins peuvent être des animaux benthiques ou pélagiques. Par exemple les animaux benthiques sont des poissons. À titre d'exemple de poissons, les anchois, sardines, morues, requins maquereaux, thons, peuvent être cités. Les animaux pélagiques peuvent être, par exemple, des mollusques ou des crustacés. Les mollusques peuvent être, par exemple, des céphalopodes. Les céphalopodes peuvent, par exemple, être des calmars, des seiches ou des pieuvres. Les crevettes, crabes, langoustes peuvent être cités à titre d'exemple de crustacés. On entend par « co-produits », une partie ou l'ensemble des sous-produits d'animaux marins. Il s'agit généralement de l'ensemble des parties d'animaux marins qui ne sont en général pas utilisées en nutrition 1 o humaine, par exemple, des têtes, yeux, peaux, viscères de ces animaux. On entend par « mélange de co-produits d'animaux marins », un mélange d'un ou plusieurs animaux marins, identiques ou différents. On entend par « hydrolyse enzymatique », une réaction catalysée par une ou plusieurs enzymes aboutissant à la scission d'un composé issu 15 d'un ou plusieurs co-produits d'animaux marins en présence d'une molécule d'eau. Les composés peuvent être, par exemple, une protéine, un glucide, un lipide, une glycoprotéine, un glycolipide, un phospholipide, un glycérophospholipide, un acide gras, un polypeptide, un peptide, ou toute 20 autre molécule biologique ou chimique se trouvant dans lesdits coproduits. Les enzymes peuvent être des hydrolases, par exemple des estérases, peptidases, osidases, lipases ou une combinaison de celles-ci. Par exemple, les enzymes peuvent être choisies dans le groupe 25 comprenant l'aminopeptidase, la béta-glucosidase, carboxypeptidase, cholestérol estérase, amylase, protéase, chymotrypsine, désoryribonuclease, lipase, lysozyme, maltase, phosphatase alcaline, phopholipase, ribonucléase, trypsine, alcalase, lipaïne, ou une combinaison de ceux-ci. 3o Les enzymes peuvent, par exemple, être des enzymes endogènes, des enzymes exogènes, ou les deux. Lorsque l'hydrolyse enzymatique fait intervenir des enzymes endogènes uniquement, on parle alors « d'autolyse ». Les enzymes endogènes proviennent des co-produits d'animaux marins utilisés comme substrat dans le procédé de la présente invention.

On entend par « hydrolysat », le ou les produits issus de l'étape (d) d'hydrolyse enzymatique. Avantageusement, l'étape (a) du procédé de la présente invention conduit à fournir un mélange homogène. De préférence, le mélange est effectué pendant une durée allant de 5 à 30 minutes.

L'étape (a) peut comprendre en outre une étape de broyage de viscères. Cette étape complémentaire peut intervenir par exemple lorsque les co-produits d'animaux marins sont solides, mous ou apportés sous forme congelée. L'homogénéisation du mélange a pour objectif de permettre à ce que l'étape (b) de chauffage et l'étape (c) d'ajustement du pH soient également homogènes. L'étape (a) peut comprendre en outre une étape de dilution du mélange de viscères d'animaux marins dans de l'eau, par exemple, à un ratio eau/mélange de viscères d'animaux marins allant de 0,5 à 3. L'eau peut, par exemple, être apportée à une température allant de 30 à 65 °C, par exemple, de 40 à 60 °C. Le chauffage du mélange obtenu à l'étape (a), peut être réalisé à une température allant de 40 à 60 °C, par exemple à 55°C. Selon une alternative du procédé de la présente invention, la température des mélanges obtenus aux étapes (b) et (c) peut être maintenue à une température fixe allant de 30 à 65 °C, par exemple de 40 à 60 °C, par exemple à 55 °C. Selon une autre alternative, cette température peut varier tout en restant dans une gamme allant de 30 à 65 °C.

Le mélange obtenu à l'étape (b) peut, par exemple, être ajusté à une valeur comprise allant de 2 à 6, par exemple, à une valeur allant de 3 à 4, par exemple à une valeur de 3. Par exemple, le pH peut être ajusté à l'aide d'acide phosphorique, d'acide lactique ou l'un de ses sels, d'acide malique ou l'un de ses sels, d'acide citrique ou l'un de ses sels, d'acide acétique, d'acide hydrochlorique, ou une combinaison de ceux-ci. Par exemple, le pH peut être maintenu à une valeur allant de 1 à 8, par exemple de 2 à 6, par exemple de 3 à 4, par exemple à 3, au cours d'une, plusieurs ou toutes les étapes du procédé de la présente invention successives à l'étape (b). L'étape (d) d'hydrolyse enzymatique du procédé de la présente invention, peut être réalisée pendant une durée allant de 2 à 6 heures, par exemple, de 3 à 5 heures, par exemple de 3 heures. 1 o L'étape (e) de chauffage peut être réalisée à une température allant de 80 à 125 °C, par exemple, de 85 à 110 °C, par exemple à 90°C. Cette étape peut être réalisée pendant une durée allant de 5 minutes à 2 heures, par exemple, de 10 à 30 minutes, par exemple de 15 minutes. Par exemple, l'étape (e) de chauffage peut être réalisée à une température de 15 90 °C pendant 15 minutes. À l'issue de cette étape, on obtient avantageusement un hydrolysat dans lequel tout ou partie des enzymes sont inactivées. Avantageusement, le pourcentage d'enzymes inactivées au cours de cette étape peut, par exemple, être supérieur à 90%, par exemple, supérieur à 95%, par exemple, supérieur à 99%, par exemple, 20 supérieur à 99,9%. De plus, cette étape de chauffage permet d'assurer une certaine sécurité vis à vis des risques microbiologique et parasitaire. Le procédé de la présente invention peut comprendre, en outre, une étape d'enrobage/gélation de l'hydrolysat obtenu à l'étape (e) avec des polysaccharides. Par exemple, les polysaccharides sont choisis dans le 25 groupe comprenant les dextranes, l'agarose, l'agaropectine, les alginates, les carraghénanes, les pectines ou une combinaison de ceux-ci. L'enrobage peut, par exemple, être réalisé avec une quantité de polysaccharides comprise entre 1 et 10% en poids par rapport à l'hydrolysat obtenu à l'étape (e), par exemple 5 % en poids. 30 En outre le procédé de la présente invention peut comprendre une étape de tamisage à chaud. Cette étape peut, par exemple, être réalisée à une température allant de 40 à 60 °C, par exemple à une température de 55°C. Le tamis utilisé peut être statique ou vibrant. Le seuil de coupure du tamis peut aller de 10 à 750 microns, par exemple de 25 à 200 microns, par exemple le seuil de coupure peut être de 100 microns.

Le procédé de la présente invention peut, en outre, comprendre une étape (g) de séchage, successive à l'étape (f). Avantageusement, le séchage est réalisé à une température allant de 35 à 75 °C, par exemple de 40 à 60 °C, par exemple à une température de 50 °C. L'étape (g) de séchage peut, par exemple, être réalisée sous vide. 1 o On entend par « séchage sous vide », un séchage réalisé dans un milieu où la pression est inférieure à la pression atmosphérique. Le procédé de la présente invention peut également comprendre une étape (h) de broyage de l'hydrolysat obtenu à l'étape (g). L'hydrolysat obtenu par le procédé de la présente invention peut être 15 conditionné sous différentes formes bien connues de l'homme du métier. Par exemple, il peut être conditionné sous forme de sachet, de comprimé, de capsule, gélule, dragée, ampoule, gel, boisson, bâton, gomme à mâcher, granules, granulés, pastille, poudre, suppositoire, ovule, suspensions et émulsions buvables, cataplasme, crème, pommade ou 20 sirop.

La présente invention a également pour objet un hydrolysat issu de co-produits d'animaux marins, notamment à un hydrolysat susceptible d'être obtenu par le procédé de la présente invention. 25 L'hydrolysat de la présente invention comprend une composition particulière de lipides, protéines ou acides aminés, glucides, minéraux, vitamines. Le pourcentage de lipides dans l'hydrolysat de la présente invention peut, par exemple, aller de 5 et 10 % en poids de l'hydrolysat, par exemple 30 entre 6 et 8 %, par exemple, 7 %. Les lipides sont par exemple, des acides gras saturés, des acides gras mono-insaturés, des acides gras poly- insaturés, ou une combinaison de ceux-ci. Par exemple, les acides gras peuvent être des oméga 3 (OM3) ou des oméga 6 (OM6). Par exemple, les OM3 sont l'acide éïcosapentaénoïque (EPA) ou l'acide docosahexaénoïque (DHA). Par exemple, le pourcentage de OM3 peut aller de 20 à 35 % en poids de lipides, par exemple de 25 à 32 % ; par exemple le pourcentage est de 30 % en poids de lipides. Le ratio de OM3/OM6 peut aller de 1 à 10, par exemple de 2 à 8, par exemple, le ratio OM3/OM6 peut être de 5. Le pourcentage en phospholipides peut aller ,par exemple, de 1 à 5% en poids de l'hydrolysat, par exemple, 3% en poids. 1 o Le pourcentage de protéines ou d'acides aminés peut aller de 50 à 80 % en poids d'hydrolysat, par exemple, de 65 à 70 %, par exemple 70 %. Les acides aminés peuvent, par exemple, être de l'alanine, arginine, asparagine, acide aspartique, cystéine, acide glutamine, glutamine, glycine, histidine, isoleucine, lysine, méthionine, phénylalanine, proline, 15 pyrrolysine, sélénocystéine, sérine, taurine, thréonine, tyrosine, valine. Par exemple, le pourcentage de valine peut aller de 1 à 3 % en poids de protéines ou d'acides aminés, par exemple de 1,5 à 2,5 %, par exemple 1,9 %. Par exemple, le pourcentage d'isoleucine peut aller de 1 à 3 % en poids de protéines ou d'acides aminés, par exemple de 1,5 à 2 %, par 20 exemple 1,7. Par exemple, le pourcentage de leucine peut aller de 1,5 à 4% en poids de protéines ou d'acides aminés, par exemple de 2,5 à 3 %, par exemple 2,7 %. Par exemple, le pourcentage de taurine peut aller de 1,3 à 3,5 % en poids de protéines ou d'acides aminés, par exemple de 2 à 2,7 %, par exemple, 2,3 %. 25 L'hydrolysat de la présente invention peut comprendre entre 50 et 80 0/0 en poids de protéines dont le poids moléculaire est inférieur à 4,4 kDa, par exemple 70 %. Le pourcentage de glucides peut être inférieur à 1 % en poids d'hydrolysat, par exemple, inférieur à 0,5 %, par exemple, inférieur à 0,2 30 %.

Les minéraux peuvent être, par exemple, le phosphore, sodium, potassium, calcium, cuivre, fer, magnésium, iode, manganèse, sélénium, zinc ou une combinaison de ceux-ci. Par exemple, le pourcentage de phosphore peut aller de 2 à 8 % en poids d'hydrolysat, par exemple de 3 à 6 %, par exemple 4,8 %. Par exemple, le pourcentage de cuivre peut aller de 0,001 à 0,1 % en poids d'hydrolysat, par exemple de 0,05 à 0,05 %, par exemple 0,01 %. Par exemple, le pourcentage de magnésium peut aller de 0,1 à 1,5 % en poids d'hydrolysat, par exemple de 0,4 à 1 %, par exemple 0,8 %. Par exemple, la quantité de sélénium peut aller de 250 à 800 ^g pour 100 grammes d'hydrolysat, par exemple de 300 à 500 ^g, par exemple 400 ^g. Les vitamines peuvent être la vitamine A, B3, B5, B6, B12, D, E, PP, ou une combinaison de celles-ci. Par exemple, la quantité de vitamine B12 peut aller de 5 à 50 ^g pour 100 grammes d'hydrolysat, par exemple de 7 à 20 ^g, par exemple 10 ^g. L'hydrolysat selon la présente invention est digestible et tolérable par l'être humain et les animaux.

Les inventeurs ont mis en évidence que l'hydrolysat selon la présente invention présente, de manière inattendue, un grand nombre de propriétés qui sont notamment les suivantes. L'hydrolysat selon la présente invention peut permettre, par exemple, de freiner ou stopper les processus de dégénérescence musculaire, augmenter le développement musculaire, diminuer la masse grasse au profit de la masse sèche, lutter contre des pathologies musculaires, améliorer l'absorption de nutriments au niveau intestinal, renforcer le système immunitaire, augmenter le taux d'hémoglobine et/ou d'hématocrite, diminuer la cellulite, et/ou augmenter la satiété. Ainsi la présente invention a également pour objet l'utilisation de l'hydrolysat de la présente invention en tant que médicament, aliment, additif ou complément alimentaire ou toute autre forme d'administration connue de l'homme du métier pour la mise en oeuvre des effets précités. Le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire peut, par exemple, être utilisé en nutrition humaine ou animale.

Le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention, peut être utilisé aussi bien par les personnes désirant « resculpter » leur corps, c'est-à-dire défavoriser la masse grasse au profit de la masse maigre, que par les personnes cherchant un soutien nutritionnel lors de performances physiques. Le médicament, aliment ou additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut avantageusement être utilisé par des personnes désireuses de reprendre une activité sportive. On entend par « masse maigre », le poids constitué par l'ensemble des muscles, organes et viscères d'un organisme.

On entend par « masse grasse », le poids constitué par l'ensemble des réserves de graisse d'un organisme. Par ailleurs, le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut avantageusement être utilisé pour diminuer significativement le tour de taille et le tour de hanches de leurs utilisateurs. L'utilisation du médicament, aliment ou additif ou complément alimentaire selon la présente invention permet en outre de limiter le stockage des graisses dans les tissus adipeux et/ou de favoriser leur destockage. Par exemple, le médicament, aliment ou additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut être utilisé pour réduire la cellulite. Avantageusement, le médicament, aliment ou la composition selon la présente invention peut être utilisé pour augmenter le développement musculaire. En outre, le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut être utilisé pour lutter contre les pathologies musculaires. Par exemple les pathologies musculaires peuvent être les myopathies, par exemple, les dystrophies musculaires progressives, les dystrophies musculaires congénitales, les myopathies congénitales, les maladies musculaires myotoniques, les myopathies métaboliques, les dermatomyosites, les syndromes myotoniques, les myolyses ou les fibromalgies. En outre, le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut être utilisé pour freiner ou de stopper les processus de dégénérescence musculaire, notamment les processus de dégénérescence musculaire liés à rage, par exemple, la 1 o sarcopénie. De manière inattendue, les inventeurs ont pu constater que l'utilisation du médicament, aliment ou additif ou complément alimentaire selon la présente invention permet de favoriser l'oxygénation musculaire. L'augmentation de l'oxygénation musculaire est notamment due à une 15 augmentation du volume des globules rouges dans le sang, se traduisant par une augmentation du taux d'hémoglobine et de l'hématocrite. Le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention est remarquable en ce qui peut être utilisé pour renforcer le système immunitaire. Par exemple, le médicament, aliment ou 2o additif ou complément selon la présente invention peut être utilisé pour augmenter le nombre de lymphocytes ou le volume des plaques de Peyer. Par ailleurs, le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut également être utilisé pour améliorer l'absorption des nutriments au niveau intestinal. 25 Additionnellement, le médicament, l'aliment ou l'additif ou complément alimentaire selon la présente invention peut être utilisé pour augmenter la satiété. Par conséquent le consommateur est moins enclin à grignoter entre les repas, permettant ainsi le maintien du poids perdu.

D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif.

Brève description des figures 0 La figure 1 représente l'empreinte peptidique d'un extrait d'hydrolysat selon la présente invention (extrait 1), analysé par spectrométrie de masse sur une gamme de 0 à 80000 Daltons (Da) en mode linéaire. L'axe des abscisses représente la masse sur charge (« m/z » ou Dalton par coulomb). L'axe des ordonnées représente l'intensité mesurée en unité arbitraire (a.u.). 0 La figure 2 représente l'empreinte peptidique d'un extrait d'hydrolysat selon la présente invention (extrait 1), analysé par spectrométrie de masse sur une gamme de 500 à 3200 Daltons (Da) en mode réflectron. L'axe des abscisses représente la masse sur charge (« m/z » ou Dalton par coulomb). L'axe des ordonnées représente l'intensité mesurée en unité arbitraire (a.u.). 0 La figure 3 représente l'empreinte peptidique d'un extrait d'hydrolysat selon la présente invention (extrait 2), analysé par spectrométrie de masse sur une gamme de 500 à 4500 Daltons (Da) en mode réflectron. L'axe des abscisses représente la masse sur charge (« m/z » ou Dalton par coulomb). L'axe des ordonnées représente l'intensité mesurée en unité arbitraire (a.u.). 0 Les figures 4A, 4B et 4C représentent des photographies réalisées au microscope optique du contenu en vacuoles lipidiques de cellules 3T3-L1 différenciées en adipocytes et mises en présence de : o TNF alpha à des concentrations respectives (de la gauche vers la droite) de 0 nM, 5nM et 50 nM, o des hydrolysats HObis, H161, H162, H163, H301, H302 et H303 à des concentrations respectives (de la gauche vers la droite) de 0,5 ^g/ml, 5 ^g/ml, 50s/ml et 250 ^g/ml. 0 La figure 5 représente des photographies réalisées au microscope optique de cellules musculaires C2C12 induites à se différencier en myotubes en présence de : o testostérone (Testo.) à des concentrations respectives (de la gauche vers la droite) de 0 nM, 10nM et 1000 nM, o des hydrolysats HObis, H162, H163, H601 et H602 à des concentrations respectives (de la gauche vers la droite) de 0,5 ^g/ml, 5 ^g/ml et 50^g/ml.

EXEMPLES

Dans ces exemples, le Tris (trishydroxyméthylaminométhane ou 2-amino-2-hydroxyméthyl-1,3-propanediol) provient de Sigma Aldrich (Saint Quentin Fallavier, France), les cellules 3T3-L1 et C2C12 proviennent de ATCC (Manassas, USA).

Exemple I : Mise en oeuvre d'un procédé d'obtention d'un hydrolysat de viscère de seiches Exemple de réalisation A On met 250 kilogrammes de viscères de seiche fraîches dans un réacteur thermostaté à double paroi et agitateur à pâles. On y ajoute 1 volume d'eau à 65°C, puis on homogénéise le mélange pendant 10 minutes. On monte la température du mélange à 55°C puis on ajuste le pH de celui-ci à 6, à l'aide d'acide phosphorique 75%. L'incubation se déroule sous agitation, à 55°C pendant 2 heures puis on ajoute de l'alcalase 2,4L à raison d'un rapport enzyme/substrat de 1,5%. L'hydrolyse se poursuit pendant 1 heure puis le mélange est monté à une température de 90°C. Un plateau technique de 15 minutes à cette température est réalisé puis l'hydrolysat est tamisé sur filtre 100 mon, séché sous vide en étuve et broyé à 300 D-n à l'aide d'un broyeur à vis.

Exemple de réalisation B On procède au broyage de 250 kilogrammes de viscères de seiche congelées afin d'obtenir des morceaux de 1 cm. Le broyat est introduit dans un réacteur thermostaté à double paroi et agitateur à pâles. On y ajoute 1 volume d'eau à 65°C, puis on homogénéise le mélange pendant 10 minutes. On monte la température du mélange à 55°C. L'incubation se 1 o déroule sous agitation, à 55°C pendant 3 jours. Le mélange est ensuite monté à une température de 90°C. Un plateau technique de 15 minutes à cette température est réalisé puis 7,5 kg d'alginates sont ajoutés dans le réacteur. Le mélange est homogénéisé pendant 20 minutes puis l'hydrolysat est tamisé sur filtre 100 mon, séché sous vide en étuve et broyé 15 à 300 D-n à l'aide d'un broyeur à vis.

Le tableau 1 ci-dessous présente des caractéristiques du procédé d'obtention d'hydrolysats susceptibles d'être obtenus par le procédé de la présente invention. Tableau 1: Exemples d'hydrolysat susceptibles d'être obtenus par le procédé de la présente invention N° Type d'hydrolyse pH Durée d'eaue Enzyme échantillon H 161 Autolyse 3 3h 1 - H 162 Autolyse 3 3h 1 - H 163 Autolyse 3 4h 1 - H 301 Hydrolyse 6 3h 1 lipaïne H 302 Hydrolyse 6 3h 1 lipaïne H 303 Hydrolyse 6 4h 1 lipaïne H 39 Autolyse puis 6 2h+1 h 1 alcalase hydrolyse H 52 Hydrolyse 6 3h 1 lipaïne H 53 Hydrolyse puis 3 3h+2h 1 lipaïne autolyse H 57 Hydrolyse puis 3 3h+2h 2 alcalase 20 autolyse H 58 Hydrolyse 6 3h 2 alcalase H 601 Hydrolyse 6 3h 2 lipaïne H 602 Hydrolyse 6 4h 2 lipaïne H 61 Hydrolyse puis 3 3h+2h 2 lipaïne autolyse H 63 Autolyse 3 3 jours 1 - Dans ce tableau, « H » signifie « hydrolysat ». Le volume d'eau est exprimé en volume d'eau par rapport au volume de matière première. Par exemple, la valeur « 1 » signifie qu'on ajoute un volume d'eau pour un volume de co-produits. La valeur « 2 » signifie qu'on ajoute deux volumes d'eau pour un volume de co-produits.

Exemple 2 : Exemple d'un hydrolysat obtenu par le procédé de la présente invention Le tableau 2 ci-dessous présente un exemple de la composition d'hydrolysat obtenu par le procédé de la présente invention. Dans ce tableau, le pourcentage est un pourcentage en poids du composé dans l'hydrolysat.

Tableau 2: Exemple d'un hydrolysat obtenu par le procédé de la presente invention Composés Quantité présente dans l'hydrolysat LIPIDES Totaux 7,3% Phospholipides 2,3% Saturés 2,39% Monoinsaturés 2,11 % Polyinsaturés 2,81 % EPA 0,84% DHA 0,99% Total OM3 2,56% Total OM6 0,45% Cholestérol total 0,04% PROTEINES Total 69,7% ACIDES AMINES Tryptophane 0,41 % Taurine 2,29% Acide aspartique 3,59% Thréonine 1,86% Sérine 1,66% Acide glutamique 4,78% Proline 1,63% Glycine 2,11% Alanine 2,04% Cystéine 0,55% Valine 1,90% Méthionine 0,86% Isoleucine 1,74% Leucine 2,73% Tyrosine 1,19% Phénylalanine 1,55% Histidine 0,86% Lysine 2,49% Arginine 1,84% GLUCIDES Totaux < 0,2% MINERAUX Phosphore 4,77% Sodium 1,91% Potassium 0,76% Calcium 1,02% Cuivre 0,0126% Fer 0,0092% Magnésium 0,81% Iode < 10 mg/kg Manganèse 0,0005% Sélénium 397 ^g /100 g Zinc 0,012% VITAMINES Vit E 0,00235% Vit B3 0,00342% Vit B5 0,00099% Vit B6 0,00012% Vit B12 10,4 ^g /100g CONTAMINANTS HAP < 1 ^g/kg Dioxines <2 ng/kg Plomb <0,6 mg/kg Acide domoïque < 0,3 mg/kg Mercure <0,2 mg/kg VALEUR ENERGETIQUE - 346 Kcal /100g Exemple 3: Caractérisation d'un hydrolysat peptidique par spectrométrie de masse 1 ù Préparation des échantillons Un hydrolysat selon la présente invention se présentant sous forme de poudre a été testé.

Un premier extrait (extrait 1) est réalisé de la manière suivante. On mélange un échantillon de 100 mg d'hydrolysat selon la présente invention avec 1 mL de Tris à 20 mmoles/L à pH 7,4. Le mélange est ensuite incubé 1 heure à 4°C sous agitation, puis centrifugé 20 minutes à 4°C à 15000g (ultracentrifugeuse J2-21, Beckman Coulter, Roissy, France) puis 1 heure à 4°C à 105000g (ultracentrifugeuse Sorvall OTD50B, Dupont, Les Ulis, France). Un dosage BCA est réalisé. La concentration en protéine mesurée est de 5 ^g/mL, correspondant à une extraction de 2,25 mg de protéines. 1 o Une série d'autres extraits est préparée de la manière suivante. On mélange respectivement des échantillons de 10, 20, 50 et 100 mg d'hydrolysat selon la présente invention avec 1 mL d'eau milliQ (eau ultra-pure). Quatre cycles de congélation à -80°C et de décongélation sont réalisés. Le mélange est ensuite centrifugé 20 minutes à 4°C à 15000g 15 (ultracentrifugeuse J2-21, Beckman Coulter, Roissy, France) puis 1 heure à 4°C à 105000g (ultracentrifugeuse Sorvall OTD50B, Dupont, Les Ulis, France). Un dosage BCA est réalisé. Les concentrations en protéine mesurées vont de 0,9 à 6,1 ^g/mL, et correspondent à une extraction de 0,72 mg, 1,6 mg, 3,6 mg et 4,8 mg de protéines respectivement pour 10, 20 20, 50 et 100 mg d'échantillons. L'extrait 2 correspond à l'extrait obtenu à parti de 50 mg d'hydrolysat pour lequel une concentration de 4,5 ^g/mL de protéine a été mesurée.

2 û Analyse par spectrométrie de masse 25 Les extraits 1 et 2 ont été déposés distinctement par micro-dessalages et dépôts manuels sur cible MTP Anchor 600/384 S/N 11188 en présence de matrice HCCA (acide alpha-Cyano-4-hydroxycinnamique). L'analyse par spectrométrie de masse est réalisée sur MALDITOF/TOF (Ultraflex, Brucker Daltonics, Leipzig, Allemagne). L'acquisition 30 et l'exploitation d'empruntes peptidiques sont réalisées via la suite logicielle FlexControl (marque de commerce) et FlexAnalysis (marque de commerce) de Bruker Daltonics. La calibration des spectres est effectuée à partir des calibrants : Peptide calibration Standard (#206195, Bruker Daltonics). Les empreintes peptidiques des extraits 1 et 2 sont représentées par les figures 1 à 3. L'analyse par spectrométrie de masse sur une large gamme de masse (i.e., 0-80000 Da, voir figure 1) permet de révéler la présence d'entités peptidiques réparties exclusivement sur une gamme 1000 û 4000 Da. Une analyse plus détaillée en mode réflectron (haute résolution) sur la gamme 0-4500 Da permet d'affiner la distribution aux masses 500 à 3200 Da (voir figure 2). L'empreinte peptidique est particulièrement difficile à obtenir, le spectre résultant tend à montrer la présence d'un mélange très complexe de peptides.

L'analyse de l'extrait 2 par empreinte peptidique conduit à un résultat similaire de l'analyse de l'extrait 1. Le spectre est toujours complexe.

3 û Préparation d'un nouvel échantillon Un nouvel extrait (extrait 3) est réalisé de la manière suivante. On mélange un échantillon de 20 mg d'hydrolysat selon la présente invention avec 950 ^L d'eau milliQ. Cinq cycles de congélation à l'azote liquide pendant 2 minutes par cycle et de décongélation au bain marie à 37 °C pendant 5 minutes par cycle sont réalisés. Le mélange est ensuite centrifugé 20 minutes à 4°C à 15000g (ultracentrifugeuse J2-21, Beckman Coulter, Roissy, France) puis 1 heure à 4°C à 105000g (ultracentrifugeuse Sorvall OTD50B, Dupont, Les Ulis, France). Un dosage BCA est réalisé. La concentration en protéine mesurée est de 2 ^g/mL, correspondant à une extraction de 1,19 mg de protéines. Le rendement d'extraction est similaire à celui obtenu avec les cycles 3 o de congélation/décongélation -80°C/20°C. Les analyses suivantes sont réalisées à partir de l'extrait 3. 4 û Analyse par nanoLC-MS/MS et 100 pmoles de l'extrait 3 sur gradient 75 min sont analysés par spectrométrie de masse sur système nanoLC-MS/Trappe d'ion (Ultimate 3000, Dionex et Esquire HCT Ultra Ion Trap, Bruker Daltonics). 5 L'acquisition et l'exploitation de fragmentations peptidiques sont de type CID (« Collision Induced Dissociation »). L'analyse de l'extrait 3 par LC-MS/MS a donné lieu à la fragmentation de plus de 2501 peptides. Ce chiffre très important traduit la grande complexité de l'échantillon.

Exemple 4 : Activité d'hydrolysats sur la lipolyse L'efficacité sur la lipolyse de plusieurs échantillons d'hydrolysat a été testée en suivant l'évolution de la taille de vacuoles lipidiques de cellules 3T3-L1 différenciées en adipocytes en fonction de la concentration en hydrolysat. Pour cela, on effectue une analyse morphométrique des vacuoles à différentes concentrations de plusieurs hydrolysats obtenus par le procédé de la présente invention (H 161, H 162, H 163, H 301, H 302 et H 303) pendant une durée de 72 heures. Le solvant utilisé pour diluer le TNF alpha ou les hydrolysats lors de cette expérimentation est l'eau. Le milieu de culture utilisé pour les cellules 3T3-L1 est du milieu DMEM (Invitrogen, Cergy-Pontoise, France). L'analyse morphométrique des vacuoles à différentes concentrations de TNF alpha sert de témoin positif.

Les analyses morphométriques des vacuoles à différentes concentrations d'un hydrolysat inactif (H Obis) ou en absence de TNF alpha ou d'hydrolysat servent de témoins négatifs. L'hydrolysat inactif est obtenu à partir d'une matière première broyée et lavée 3 fois dans 4 volumes d'un mélange eau + 5% sodium dodécyl sulfate (Sigma Aldrich, Saint Quentin Fallavier, France). Le broyat est ensuite séché sous vide et réduit en poudre. 5 Les résultats sont présentés dans le tableau 3 suivant. Tableau 3 : Effet du TNF alpha et des hydrolysats HObis, H161, H162, H163, H301, H302 et H303 sur la taille moyenne des vacuoles lipidiques. Concentration 0 5 50 - (nM) TNF Taille moyenne 4,81 2,47 1,25 - alpha (^m) % par rapport à 100 51,3 26,1 - TNF alpha = 0 nM Concentration 0,5 5 50 250 (^g/mL) H Obis Taille moyenne enne 4,64 4,67 4,59 4,66 % par rapport à 96,5 97,1 95,4 96,9 TNF alpha = 0 nM Concentration 0,5 5 50 250 (^g/mL) H 161 Taille moyenne enne 4,71 4,14 3,61 3,32 % par rapport à 93,4 82,1 71,6 65,9 TNF alpha = 0 nM Concentration 0,5 5 50 250 (^g/mL) H 162 Taille moyenne enne 4,62 4,07 3,69 3,55 % par rapport à 91,6 80,7 73,3 70,5 TNF alpha = 0 nM Concentration 0,5 5 50 250 (^g/mL) H 163 Taille moyenne enne 4,82 4,01 3,56 3,05 % par rapport à 95,5 79,5 70,6 60,6 TNF alpha = 0 nM Concentration 0,5 5 50 250 (^g/mL) H 301 Taille moyenne enne 4,78 4,16 3,34 3,08 % par rapport à 94'9 82,5 66,2 61,1 TNF alpha = 0 nM H 302 Concentration 0,5 5 50 250 Taille moyenne 4,67 3,60 2,92 2,42 (^m) % par rapport à 92,6 71,4 58,0 48,1 TNF alpha = 0 nM Concentration 0,5 5 50 250 (^g/mL) H 303 Taille moyenne 4,54 3,31 2,82 2,18 (^m) % par rapport à 90,1 65,7 56,0 43,3 TNF alpha = 0 nM Cette expérimentation démontre que les hydrolysats testés permettent de diminuer de 17,5 à 34,3 % la taille de vacuoles lipidiques dès 5 ^g/mL d'hydrolysat. À 50 ^g/mL d'hydrolysat, la taille des vacuoles est diminuée de 26,7 à 44 %. À 250 ^g/mL d'hydrolysat, la réduction de la taille des vacuoles atteint même des valeurs allant de 29,5 à 56,7 %.

Ces résultats, illustrés par les figures 4A à 4C montrent que les hydrolysats testés permettent de diminuer significativement la taille des 1 o vacuoles lipidiques, suggérant des applications intéressantes des hydrolysats sur la masse grasse (action sur la cellulite, perte de poids, rééquilibre physiologique, etc.).

Exemple 5 : Effets d'hydrolysats sur l'hypertrophie musculaire 15 L'effet sur l'hypertrophie musculaire de plusieurs échantillons d'hydrolysat a été testé en suivant l'évolution de la taille de cellules C2C12 induites à se différencier en myotubes en fonction de la concentration en hydrolysat. Pour cela, on effectue une analyse morphométrique des myotubes 20 après incubation avec différentes concentrations de plusieurs hydrolysats obtenus par le procédé de la présente invention (H 161, H 162, H 163, H 601 et H 602) pendant 6 jours. Le solvant utilisé pour diluer la testostérone ou les hydrolysats lors de cette expérimentation est l'eau. Le milieu de culture utilisé pour les cellules C2C12 est du milieu DMEM (Invitrogen, Cergy-Pontoise, France). L'analyse morphométrique des myotubes à différentes concentrations de testostérone sert de témoin positif.

Les analyses morphométriques des myotubes à différentes concentrations d'un hydrolysat inactif (H Obis) ou en absence de testostérone ou d'hydrolysat servent de témoins négatifs. L'hydrolysat inactif est obtenu de la même façon que précédemment. Les résultats sont présentés dans le tableau 5 suivant.

Tableau 4 : Effet de la testostérone et des hydrolysats HObis, H162, H163, H6O1 et H6O2 sur le diamètre des myotubes et sur le pourcentage de mvotubes avant un diamètre supérieur à 29 ^m. Concentration 0 10 1000 (nM) Diamètre 27 7 36,7 38,5 (^m) Testostérone % de myotube à un diamètre > 35,0 65,0 70,0 29 ^m % par rapport à testostérone = 0 100 132 139 nM Concentration 0,5 5 50 (^g/mL) Diamètre 27 9 27 1 27,3 (^m) H Obis % de myotube à un diamètre > 40,0 26,0 32,0 29 ^m % par rapport à testostérone = 0 101 98 99 nM H 162 Concentration 0 5 5 50 (^g/mL) ' Diamètre 31,7 34,2 38,8 (^m) % de myotube à un diamètre > 50,0 70,0 83,0 29 ^m % par rapport à 115 124 140 testostérone = 0 nM Concentration 0,5 5 50 (^g/mL) Diamètre 29,6 33,0 38,2 (^m) H 163 % de myotube à un diamètre > 48,0 62,0 68,0 29 ^m % par rapport à 107 119 138 testostérone = 0 nM Concentration 0,5 5 50 (^g/mL) Diamètre 29,4 33,7 35,8 (^m) H 601 % de myotube à un diamètre > 49,0 64,0 74,0 29 ^m % par rapport à 106 122 129 testostérone = 0 nM Concentration 0,5 5 50 (^g/mL) Diamètre 28,7 36,2 36,9 (^m) H 602 % de myotube à un diamètre > 32,0 71,0 70,0 29 ^m % par rapport à 104 131 133 testostérone = 0 nM Cette expérimentation démontre que les hydrolysats testés permettent d'augmenter le diamètre des myotubes de 4 à 15 % dès 0,5 ^g/mL d'hydrolysat. À 5 ^g/mL d'hydrolysat, le diamètre des myotubes augmente de 19 à 31 %. À 50 ^g/mL d'hydrolysat, le diamètre des myotubes augmente même de 29 à 40 %. De plus, le nombre de myotubes impactés est également plus important avec les hydrolysats.

Ces résultats, illustrés par la figure 5, montrent que les hydrolysats testés permettent d'augmenter significativement le diamètre de myotubes ainsi que le pourcentage de myotubes impactés par cette hypertrophie, suggérant des applications intéressantes des hydrolysats sur la masse maigre et la physiologie musculaire.

Exemple 6 : Évaluation de la tolérance de « SEAPIAX (marque déposée) » administré dans la nourriture et de ses effets physiologique chez le rat 1 ù Objectif général de l'évaluation L'objectif de cette expérimentation était d'évaluer la tolérance à une composition « SEAPIAX (marque déposée) » (composition comprenant comme seule matière active l'hydrolysat H162 décrit plus haut) et d'évaluer les effets immunologiques de celle-ci. 2 ù Matériels et méthode 2.1 ù Points généraux Les manipulations des animaux ont été conduites de façon à réduire le stress des animaux au minimum. Toutes les expérimentations ont été réalisées conformément aux exigences du Ministère de l'Agriculture français pour les expérimentations sur les animaux de laboratoires (décret 87-848). Les animaux n'avaient subi aucune expérimentation avant la présente étude. 2.2 ù Animaux et environnement Vingt rats Wistar, dix mâles et dix femelles, âgés de huit semaines ont été utilisés. Ces rats proviennent du centre d'élevage René Janvier, France. Les cages utilisées sont de type E, en polycarbonate, de 45 cm de profondeur, 30 cm de large et 20 cm de haut. Ces cages provenaient de Iffa Credo, L'Arbresle, France. Le nombre d'animaux par cage est de deux ou trois. La litière utilisée est une litière d `épicéa de type B8/20 provenant de Safe, France.

La température de la pièce est de 22 °C +/- 1,5°C. L'hygrométrie est de 50% +/- 25%. La luminosité est de 50 Lux provenant d'une lampe à incandescence allumée de 8 heures à 20 heures. La nourriture contenant «SEAPIAX (marque déposée) » était préparée par Safe, Route St Brie, Augy, France. Elle était fournie sans 1 o restriction. L'eau était de l'eau du robinet, elle aussi fournie sans restriction.

2.3 ù Traitement « SEAPIAX (marque déposée) » était fourni aux rats via l'alimentation 15 durant toute la durée l'expérimentation, c'est-à-dire un mois. Le groupe contrôle reçoit comme aliment de l'A04 provenant de Safe, France. Les animaux testés ont reçu comme aliment des extrudés spécialement préparés pour l'étude, comprenant l'aliment A04 enrichi à hauteur de 3% en « SEAPIAX (marque déposée) ». Le dosage 20 approximatif de « SEAPIAX (marque déposée) » est de 0,75 g/rat/jour, soit 2,5 g/kg/jour pour des rats de 300g. À l'arrivé dans le laboratoire, les animaux ont aléatoirement été placés dans les cages de façon à avoir un sous-groupe de 5 rats mâles testés, un sous-groupe de 5 rats femelles testés, un sous-groupe de 5 rats 25 mâles contrôle et un sous-groupe de 5 rats femelles contrôle.

2.4ù Collecte des échantillons sanguins Les animaux ont été anesthésiés avec de l'isoflurane. Le sang a été collecté au niveau du sinus rétro-orbital et placé dans deux tubes dont un 30 contenait de l'EDTA (pour une analyse sanguine) et l'autre du lithium d'héparine (pour un dosage métabolique).

Le tube pour le dosage métabolique a été centrifugé à 3000g pendant 10 minutes à 4 °C. Le plasma a ensuite été prélevé et stocké à -80 °C. Le tube pour l'analyse sanguine a été stocké à température ambiante et analysé dans les trois heures.

2.5ù Données analytiques Les résultats sont exprimés en moyenne +/- une écart-type. Ils ont été analysés par ANOVA à deux voies et par un test de Student. Une différence est considérée comme significative dès que p < 0,05.

3 ù Résultats Les résultats obtenus portant sur le taux de lymphocytes sont présentés dans les tableau 7 suivant.

15 Tableau 5 : Mesure du taux de Ivmphocvtes Sexe Groupe Taux de lymphocytes (%) Mâles Contrôle 88,8 +1- 1,0 «SEAPIAX 91,1 +1- 1,0 (marque déposée) » Femelles Contrôle 88,7 -FI- 0,3 « SEAPIAX 90,7 +/- 0,8 (marque déposée) » De manière intéressante, il a été constaté, uniquement chez les animaux consommant des extrudés SEAPIAX (marque déposée), des plaques de Peyer très développées. Il est à noter que ces mêmes animaux 20 ne présentaient pas d'infections ou d'inflammations intestinales.

Dans le tableau 5, les groupes « SEAPIAX (marque déposée) » correspondent aux groupes de rats ayant reçu la composition « SEAPIAX (marque déposée) » dans leur alimentation. Les groupes « Contrôle » 10 correspondent aux groupes de rats dont l'alimentation ne contient pas de composition « SEAPIAX (marque déposée) ». Ces résultats montrent que «SEAPIAX (marque déposée) » permet d'augmenter significativement le taux de lymphocytes dans le sang et qu'il stimule le développement des plaques de Peyer. Des applications comme immunostimulant sont donc également envisagées pour la composition « SEAPIAX (marque déposée) ».

Exemple 7: Évaluation de la tolérance perçue et de l'effet de « SEAPIAX (marque déposée) » sur le remodelage corporel et l'évolution du rapport masse grasse/masse maigre chez l'Homme 1 ù Objectif général de l'évaluation Une évaluation contrôlée et randomisée d'une durée de trois mois a été réalisée auprès de femmes ayant une légère surcharge pondérale.

L'objectif de cette évaluation était de déterminer la tolérance du produit à l'essai et son efficacité sur une panoplie d'expérimentations.

2 ù Matériels et méthode 2.1 ù Produit à l'essai Le composé à l'essai, se présentant sous forme de comprimé, était dénommé « SEAPIAX (marque déposée) » et comprenait 1000 mg d'un hydrolysat de seiche (Sepia officinalis) correspondant à la référence H162 dont le procédé d'obtention est décrit plus haut (Tableau 1) ; 280 mg d'excipients permettant la bonne compression de l'hydrolysat ainsi que le pelliculage du comprimé : phosphate de calcium, carbonate de magnésium, poudre de citron, silice, mono/di/triglycérides d'acides gras, hydroxypropylmethylcellulose, cellulose microcristalline, acide stéarique, chlorophylle. Ces comprimés ont été pris avec un grand verre d'eau vingt minutes avant chaque repas. Les produits étaient distribués par le médecin dans des emballages neutres et codés. Les volontaires sont répartis en deux groupes de même effectif après affectation par randomisation.

2.2 ù Volontaires 2.2.1 ù Critères d'inclusion - Personne ayant donné un consentement libre, éclairé et exprimé par écrit - Personne coopérante, avertie de la nécessité et de la durée des contrôles - Femme âgée de 20 à 50 ans - Personne ayant une surcharge pondérale, soit un Indice de Masse 1 o Corporelle (IMC=poids en kg / (taille en mètre)2) compris entre 25 et 30 - Personne ayant un poids stable depuis au moins 3 mois - Personne ayant un rythme alimentaire régulier (3 repas par jour)

2.2.2 ù Critères de non inclusion 15 - Personne qui présentait des antécédents connus d'allergies alimentaires - Personne enceinte ou susceptible de l'être pendant l'étude - Personne en période d'allaitement ou ayant accouché dans les 3 mois précédant l'étude - Femme ménopausée 20 - Personne atteinte d'une maladie grave ou évolutive - Personne en période de sevrage ou ayant arrêté le tabac depuis moins de 3 mois - Personne ayant un traitement susceptible d'influencer les paramètres mesurés 25 2.2.3 ù Traitements associés En cas de présence d'une pathologie associée, non gênante pour la poursuite de l'étude, le traitement devait être poursuivi durant l'étude, si possible sans changement de posologie. 30 3 û Tolérance 56 femmes sont réparties en deux groupes. 30 femmes constituent le groupe 1, les 26 autres le groupe 2. Les femmes du groupe 1 prennent 6 comprimés de «SEAPIAX (marque déposée) » par jour pendant 3 mois. Celles du groupe 2 prennent 9 comprimés par jour pendant 3 mois. Des recueils d'information sont effectués au quarante-deuxième jour (J42) et au quatre-vingt-quatrième jour (J84). Au cours de l'expérience, 4 femmes du groupe 1 et 3 femmes du 1 o groupe 2 ne se sont pas présentées à J84. Pour les deux groupes, plus de 95 % des femmes ont toléré le produit à l'essai. « SEAPIAX (marque déposée) » peut donc être considéré comme étant très bien toléré par les utilisateurs. 15 4 û Évolution du pourcentage de masse grasse Le pourcentage de masse grasse a été déterminé par impédancemétrie (Bodystat 1500 et balance Tanita, modèle TBF-300GS). femmes exerçant une activité sportive régulière avant et durant 20 l'expérimentation ont pris 6 comprimés de « SEAPIAX (marque déposée) » par jour pendant 3 mois. Les mesures ont été réalisées le jour du début de l'étude (JO), à J42 et à J84. Les résultats sont présentés dans le tableau 6 suivant. Tableau 6 : Evolution du pourcentage de masse grasse (%) Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 35,29 J42 35,66 p=0,262 +0,37 J84 34,46 p=0,053 -0,83 p=0,003 -1,20 Le pourcentage de masse grasse a diminué significativement après 84 jours. 25 La même expérience a été réalisée sur un groupe de 11 femmes ayant pris 9 comprimés par jour et ayant exercé moins d'une heure d'activité sportive par jour avant et durant l'expérimentation.

Les résultats sont présentés dans le tableau 7 suivant. Tableau 7 : Evolution du pourcentage de masse grasse (%) Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 36,99 J42 36,53 p=0,11 -0,46 J84 36,32 p=0,037 -0,67 p=0,496 -0,21 Le pourcentage de masse grasse a également diminué 10 significativement après 84 jours pour ce groupe de femmes.

5 û Évolution de la quantité de masse grasse La quantité de masse grasse a été déterminée par impédancemétrie (Bodystat 1500 et balance Tanita, modèle TBF-300GS). 15 16 femmes exerçant une activité sportive régulière avant et durant l'expérimentation ont pris 6 comprimés de « SEAPIAX (marque déposée) » par jour pendant 3 mois. Les mesures ont été réalisées le jour du début de l'étude (JO), à J42 et à J84. Les résultats sont présentés dans le tableau 8 suivant. 20 Tableau 8 : Évolution de la quantité de masse cirasse (k Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 25,53 J42 25,70 p=0,486 +0,17 J84 24,71 p=0,027 -0,82 p=0,007 -0,99 La quantité de masse grasse a diminué significativement après 84 jours. 25 La même expérience a été réalisée sur un groupe de 11 femmes ayant pris 9 comprimés par jour et ayant exercé moins d'une heure d'activité sportive par jour avant et durant l'expérimentation. Les résultats sont présentés dans le tableau 9 suivant. Tableau 9 : Évolution de la quantité de masse cirasse (k Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 27,47 J42 27,02 p=0,084 -0,45 J84 26,80 p=0,041 -0,67 p=0,295 -0,22 La quantité de masse grasse a également diminué significativement après 84 jours pour ce groupe de femmes. 10

6 û Évolution de la mesure centimétrique du tour de taille 26 femmes ont pris 6 comprimés de «SEAPIAX (marque déposée) » par jour pendant 3 mois. Les mesures ont été réalisées le jour du début de 15 l'étude (JO), à J42 et à J84. Les résultats sont présentés dans le tableau 10 suivant.

Tableau 10 : Évolution du tour de taille (cm Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 88,39 J42 88,00 p=0,144 -0,39 J84 87,58 p=0,026 -0,81 p=0,094 -0,42 20 Le tour de taille a diminué significativement après 84 jours de consommation du produit à l'essai.

La même expérience a été réalisée avec 23 femmes prenant 9 comprimés de « SEAPIAX (marque déposée) » par jour. 25 Les résultats sont présentés dans le tableau 11 suivant.5 Tableau 11 : Évolution du tour de taille (cm Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 90,96 J42 90,48 p=0,126 -0,48 J84 89,96 p=0,018 -1,00 p=0,124 -0,52 Le tour de taille a également diminué significativement après 84 jours de consommation du produit à l'essai pour ce groupe de femmes. 5 7 ù Évolution de la mesure centimétrique du tour de hanche 26 femmes ont pris 6 comprimés de «SEAPIAX (marque déposée) » par jour pendant 3 mois. Les mesures ont été réalisées le jour du début de l'étude (JO), à J42 et à J84. 1 o Les résultats sont présentés dans le tableau 12 suivant. i aoieau 1 : tvolution au tour de nancne (cm) Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 96,04 J42 95,50 p=0,050 -0,54 J84 95,29 p=0,037 -0,75 p=0,384 -0,21 15 Le tour de taille a diminué significativement dès le quarante-deuxième jour de consommation du produit à l'essai. Ce résultat est confirmé après 84 jours.

La même expérience a été réalisée avec 23 femmes prenant 9 20 comprimés de « SEAPIAX (marque déposée) » par jour. Les résultats sont présentés dans le tableau 13 suivant.

Tableau 13 : Évolution du tour de taille (cm Moyenne p/JO ^Moyen/JO p/J42 ^Moyen/J42 JO 98,35 J42 97,44 p=0,083 -0,91 J84 97,37 p=0,006 -0,98 p=0,873 -0,07 Le tour de taille a également diminué significativement après 84 jours de consommation du produit à l'essai pour ce groupe de femmes.

8 û Évaluation subjective de l'efficacité de « SEAPIAX (marque 5 déposée)» 49 femmes ayant consommé 6 (groupe 1) ou 9 (groupe 2) comprimés par jour pendant trois mois ont donné leur avis sur l'efficacité perçue de « SEAPIAX (marque déposée) ».

10 8.1 û Efficacité perçue sur la diminution des envies de grignotage et la satiété Dès 42 jours de consommation du produit à l'essai, l'efficacité a été perçue de manière très importante sur la diminution des envies de grignotage et la sensation de satiété dans les deux groupes avec un taux 15 d'efficacité perçue respectivement de 80 et 79%. Après 84 jours, ces taux s'élevaient à 83% pour la diminution des envies de grignotage et 74% sur la sensation de satiété.

8.2 û Efficacité perçue sur le bien-être 20 Après 84 jours, 78% des femmes du groupe 2 ont perçu l'efficacité du produit à l'essai sur la vitalité, le dynamisme, la tonicité et sur le confort digestif. Dans le groupe 1, 77% des femmes ont perçu l'efficacité du produit à l'essai sur la vitalité, le dynamisme, la tonicité et 64% sur la force 25 musculaire.

8.3 û Efficacité perçue sur la peau, les cheveux et les ongles À J84, l'efficacité perçue pour l'hydratation de la peau était de 73%, et de 68% pour la force des cheveux et la solidité des ongles. 30 L'ensemble des expérimentations décrites ci-dessus démontrent que l'hydrolysat selon la présente invention possède des propriétés très intéressantes qui pourraient être mises en application pour freiner ou stopper les processus de dégénérescence musculaire, augmenter le développement musculaire, diminuer la masse grasse au profit de la masse sèche, lutter contre des pathologies musculaires, améliorer l'absorption de nutriments au niveau intestinal, renforcer le système immunitaire, augmenter le taux d'hémoglobine et/ou d'hématocrite, diminuer la cellulite, et/ou augmenter la satiété.

La présente invention forme donc un outil remarquable, notamment pour les utilisations précitées.

Claims (12)

1. REVENDICATIONS1. Procédé d'obtention d'un hydrolysat de viscères d'animaux marins comprenant les étapes suivantes : (a) mélange de co-produits d'animaux marins, (b) chauffage du mélange obtenu à l'étape (a) à une température allant de 30 à 65°C, (c) ajustement du pH du mélange obtenu à l'étape (b) à une valeur allant de 1 à 8, (d) hydrolyse enzymatique du mélange obtenu à l'étape (c) pendant une durée allant de 1 à 8 heures, (e) chauffage de l'hydrolysat obtenu à l'étape (d) à une température allant de 75 à 150°C, et (f) refroidissement de l'hydrolysat obtenu.
2. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel les animaux marins sont des céphalopodes.
3. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'étape (a) comprend en outre une étape de dilution du mélange de viscères d'animaux marins avec de l'eau.
4. 4. Procédé selon la revendication 3, dans lequel la dilution est opérée à un ratio eau/mélange de viscères d'animaux marins allant de 0,5 à 3.
5. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel le pH est ajusté à une valeur allant de 2 à6.
6. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel l'étape d'hydrolyse (d) est réalisée pendant une durée de 3 heures.
7. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, comprenant en outre une étape d'enrobage/gélation de l'hydrolysat obtenu à l'étape (e) avec des polysaccharides.
8. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, comprenant en outre une étape (g) de séchage, successive à l'étape (f).
9. 9. Hydrolysat susceptible d'être obtenu par le procédé selon 10 l'une quelconque des revendications 1 à 8.
10. 10. Hydrolysat selon la revendication 9, comprenant 70 % en poids de protéines dont le poids moléculaire est inférieur à 4,4 kDa. 15
11. 11. Hydrolysat selon la revendication 9 ou 10, comprenant en outre 2,3 % de taurine.
12. 12. Utilisation de l'hydrolysat selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, pour la fabrication d'un médicament, aliment ou 20 additif ou complément alimentaire destiné à freiner ou stopper les processus de dégénérescence musculaire, augmenter le développement musculaire, diminuer la masse grasse au profit de la masse sèche, lutter contre des pathologies musculaires, améliorer l'absorption de nutriments au niveau intestinal, renforcer le système immunitaire, augmenter le taux 25 d'hémoglobine et/ou d'hématocrite, diminuer la cellulite, et/ou augmenter la satiété.5