CN114717223A - 处理生物样本的试剂及其应用 - Google Patents
处理生物样本的试剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114717223A CN114717223A CN202210354913.8A CN202210354913A CN114717223A CN 114717223 A CN114717223 A CN 114717223A CN 202210354913 A CN202210354913 A CN 202210354913A CN 114717223 A CN114717223 A CN 114717223A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sodium
- solution
- proteinase
- ions
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 53
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 claims abstract description 45
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 32
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims abstract description 21
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims abstract description 12
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 36
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 9
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 claims description 7
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 claims description 7
- -1 polyoxypropylene Polymers 0.000 claims description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N hydrochloric acid Substances Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- BUCIWTBCUUHRHZ-UHFFFAOYSA-K potassium;disodium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[K+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O BUCIWTBCUUHRHZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- LJSOLTRJEQZSHV-UHFFFAOYSA-L potassium;sodium;hydron;hydroxide;phosphate Chemical compound [OH-].[Na+].[K+].OP(O)([O-])=O LJSOLTRJEQZSHV-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 5
- LEAHFJQFYSDGGP-UHFFFAOYSA-K trisodium;dihydrogen phosphate;hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)([O-])=O.OP([O-])([O-])=O LEAHFJQFYSDGGP-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N Lithium ion Chemical compound [Li+] HBBGRARXTFLTSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 4
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N dodecyl benzenesulfonate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 GVGUFUZHNYFZLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910001416 lithium ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229940080264 sodium dodecylbenzenesulfonate Drugs 0.000 claims description 4
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].NCC([O-])=O CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- KMZJRCPGGAQHGC-UHFFFAOYSA-N trisodium boric acid borate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OB(O)O.[O-]B([O-])[O-] KMZJRCPGGAQHGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NJZIKTWBSMYDMG-UHFFFAOYSA-N 1,3-diazinane-2,4,6-trione hydrochloride Chemical compound Cl.N1C(=O)NC(=O)CC1=O NJZIKTWBSMYDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZVUNTIMPQCQCAQ-UHFFFAOYSA-N 2-dodecanoyloxyethyl dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCCOC(=O)CCCCCCCCCCC ZVUNTIMPQCQCAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N Nonylphenol Natural products CCCCCCCCCC1=CC=C(O)C=C1 IGFHQQFPSIBGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- CAMHHLOGFDZBBG-UHFFFAOYSA-N epoxidized methyl oleate Natural products CCCCCCCCC1OC1CCCCCCCC(=O)OC CAMHHLOGFDZBBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N nonylphenol Chemical compound CCCCCCCCCC1=CC=CC=C1O SNQQPOLDUKLAAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HPEUJPJOZXNMSJ-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid methyl ester Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC HPEUJPJOZXNMSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 claims description 2
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 claims description 2
- XUXNAKZDHHEHPC-UHFFFAOYSA-M sodium bromate Chemical compound [Na+].[O-]Br(=O)=O XUXNAKZDHHEHPC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940057950 sodium laureth sulfate Drugs 0.000 claims description 2
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- RCFHIRKHOLAAFY-UHFFFAOYSA-N 1,3-diazinane-2,4,6-trione;sodium;hydrochloride Chemical compound [Na].Cl.O=C1CC(=O)NC(=O)N1 RCFHIRKHOLAAFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GCAJDUHNFZFJNX-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxypropyl octadecanoate;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO GCAJDUHNFZFJNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- DUIOKRXOKLLURE-UHFFFAOYSA-N 2-octylphenol Chemical compound CCCCCCCCC1=CC=CC=C1O DUIOKRXOKLLURE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 claims 1
- OJLOUXPPKZRTHK-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol;sodium Chemical compound [Na].CCCCCCCCCCCCO OJLOUXPPKZRTHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 claims 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims 1
- 229940083575 sodium dodecyl sulfate Drugs 0.000 claims 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 15
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 abstract description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000000816 effect on animals Effects 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 238000001821 nucleic acid purification Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 6
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 239000012456 homogeneous solution Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 235000003332 Ilex aquifolium Nutrition 0.000 description 1
- 235000002296 Ilex sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002294 Ilex volkensiana Nutrition 0.000 description 1
- WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N Manganese(2+) Chemical compound [Mn+2] WAEMQWOKJMHJLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- SMVRDGHCVNAOIN-UHFFFAOYSA-L disodium;1-dodecoxydodecane;sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC SMVRDGHCVNAOIN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000012520 frozen sample Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012487 rinsing solution Substances 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IWIUXJGIDSGWDN-UQKRIMTDSA-M sodium;(2s)-2-(dodecanoylamino)pentanedioate;hydron Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC(O)=O IWIUXJGIDSGWDN-UQKRIMTDSA-M 0.000 description 1
- GLQSUZNOPZLDOL-UHFFFAOYSA-M sodium;2,3-dihydroxypropyl sulfate;octadecanoic acid Chemical compound [Na+].OCC(O)COS([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O GLQSUZNOPZLDOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OTNVGWMVOULBFZ-UHFFFAOYSA-N sodium;hydrochloride Chemical compound [Na].Cl OTNVGWMVOULBFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种处理生物样本的试剂,其组成包括:裂解液和蛋白酶K溶液,所述裂解液包括缓冲剂、蛋白变性剂、表面活性剂以及金属离子,所述蛋白酶K溶液包括蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液,所述蛋白酶K的浓度为1‑30mg/mL。该试剂对于动物组织具有优异的处理效果,尤其是较难处理的动物组织,例如肺、肝脏等。更重要的,组织样本使用本发明提供的试剂处理完毕后,经加热和稀释处理后即可直接进行PCR扩增,无需进行核酸富集步骤,大大节约了实验时间和试剂成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种处理生物样本的试剂及其应用,属于分子生物学技术领域。
背景技术
生物样本的处理是进行分子生物学实验的重要技术手段。在分子生物学的研究中,所涉及的生物样本种类非常多,其中动物组织样本是较为常见的样本类型。动物组织样本经过裂解处理后,可以释放出样本中的核酸,经过核酸纯化的步骤后即可进行下游实验。然而,动物组织的裂解相对困难,尤其是肺、肝脏等组织,在未经组织研磨破碎的情况下,消化裂解所需的时间较长。组织消化裂解主要依靠蛋白酶K的作用,蛋白酶K可以降解蛋白,使组织裂解得以顺利进行。通常的裂解液需要在加热条件下使用以增强蛋白酶K的效率,但是在加热过程中也会使蛋白酶K的活性逐渐降低,导致在长时间加热的情况下无法彻底裂解动物组织。此外,对于使用核酸进行PCR扩增的实验,通常需要先纯化核酸,再进行PCR扩增,如果能避免核酸纯化的步骤,也可以大大节约实验时间。本发明针对上述问题,提供了一种效果良好的生物样本处理试剂,对于动物组织样本,尤其是较难裂解的动物组织样本,无需进行研磨破碎处理,就可以达到良好的裂解效果,并且裂解后的组织样本经加热和稀释处理后,可以直接进行PCR扩增或核酸富集操作。
发明内容
本发明的目的是提供一种处理生物样本的试剂。
本发明采用的技术方案为:
一种处理生物样本的试剂,包括:裂解液和蛋白酶K溶液,所述裂解液包括缓冲剂、蛋白变性剂、表面活性剂以及金属离子,所述蛋白酶K溶液包括蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液,所述蛋白酶K的浓度为1-30mg/mL,优选的,蛋白酶K浓度为10-30mg/mL,更为优选的,蛋白酶K浓度为20-30mg/mL。
优选的,所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷-盐酸、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、硼酸-硼酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠、巴比妥钠-盐酸或甘氨酸-氢氧化钠中的一种或数种,缓冲剂的浓度为1mM-100mM,试剂的pH值为7.0-9.0。
更优选的,所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷-盐酸、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠中的一种或数种,缓冲剂的浓度为5mM-70mM,更优选的浓度为10mM-50mM,缓冲液的pH值为7.5-8.5,更优选的,试剂的pH值为8.0。
优选的,所述蛋白变性剂为盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、碘化钠、高氯酸钠、溴酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠或月桂醇醚硫酸钠中的一种或数种,浓度为0.1M-5M。
更优选的,所述蛋白变性剂为盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、十二烷基硫酸钠中的一种或数种,浓度为0.2M-4.5M,更优选的浓度为0.25M-4M。
优选的,所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂醇醚硫酸钠、N-月桂酰肌氨酸钠、N-月桂酰谷氨酸钠、椰油酰胺烷醇硫酸钠、硬脂酸甲酯磺酸钠、十六烷基二苯基醚单磺酸钠、单硬脂酸甘油硫酸酯钠盐、N-月桂酰基谷氨酸二酯、壬基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙二醇双月桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚中的一种或数种的混合物,浓度为0.05%-5%(m/V),优选的浓度为0.1%-4%(m/V),更优选的浓度为0.2-3%(m/V)。
优选的,所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物,浓度为1mM-50mM,优选的浓度为2mM-40mM,更优选的浓度为3mM-30mM。
优选的,所述蛋白酶K缓冲液为三羟基氨基甲烷-盐酸、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、硼酸-硼酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠、巴比妥钠-盐酸或甘氨酸-氢氧化钠的一种或数种,浓度为1mM-100mM,优选的浓度为5mM-70mM,更优选的浓度为10mM-50mM,蛋白酶K缓冲液的pH值为7.0-9.0,优选的pH值为7.5-8.5,更优选的pH值为8.0。
优选的,所述蛋白酶K溶液还包括金属离子,所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物,浓度为1mM-50mM,优选的浓度为2mM-40mM,更优选的浓度为3mM-30mM。
优选的,所述蛋白酶K溶液还包括甘油,甘油浓度为0.1%-50%(m/V),优选的浓度为0.2%-30%(m/V),更为优选的浓度为0.5%-20%(m/V)。
本发明还公开了上述的处理生物样本的试剂在裂解生物样本中的应用。
优选的,其步骤为:取生物样本,加入至离心管中,加入裂解液和蛋白酶K溶液,摇晃混匀后离心,加热使样本裂解,加热过程中过一段时间充分混匀一次。
优选的,加热温度为37-65℃。
优选的,裂解完成后,将样本加热处理,然后用水稀释,稀释后的溶液作为模板进行PCR扩增。
优选的,加热温度为70-90℃,加热时间为10-30分钟。
优选的,加热温度为75-80℃,加热时间为15-20分钟。
优选的,稀释倍数为2-100倍。
优选的,稀释倍数为20-50倍。
裂解完全的样本经加热和稀释处理后,可以直接进行PCR扩增。所述的加热处理可以降解蛋白变性剂,降低蛋白变性剂对于PCR扩增的抑制,同时可以灭活蛋白酶K。所述的稀释处理可以降低样本裂解液中PCR抑制物的浓度,并降低核酸的浓度,使其更有利于PCR扩增。所述的稀释处理的稀释倍数为2-100倍,优选的,所述的稀释倍数为20-50倍。
裂解的完全的样本还可以直接进行核酸富集操作。所述的核酸是指DNA,尤其是基因组DNA,所述的核酸富集操作包括手动法和自动化法,所述的核酸富集操作需要使用配套的提取试剂,提取试剂可以来自商品化的提取试剂盒。
本发明涉及的生物样本主要指动物组织样本,所述动物组织样本包括肌肉、血液、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺、肠、脑、鼠尾等样本,对于培养的细胞也具有良好的效果。所述的动物组织样本,可以不进行研磨破碎处理,直接使用本发明提供的试剂即可完成样本裂解。所述的动物组织样本,可以是新鲜的样本,也可以是冻存样本,或者石蜡包埋的动物组织样本。对于石蜡包埋的动物组织样本,需要先进行脱蜡处理,然后使用本发明提供的试剂进行裂解。
本发明的有益效果:
本发明的裂解液具有良好的动物组织消化和裂解的效果,蛋白酶K溶液中的表面活性剂和金属离子具有保持蛋白酶K稳定的作用,尤其是在长时间加热的条件下具有显著的效果。得益于以上效果,本发明试剂可以高效且持久的进行生物样本的裂解,尤其在加热条件下可以保持较好的裂解性能,对于较难裂解的动物组织样本,无需研磨破碎即可进行裂解。裂解后的动物组织样本,经加热和稀释处理后,可以直接进行PCR扩增或核酸富集操作。所述的加热处理可以降解蛋白变性剂,并且灭活蛋白酶K。所述的稀释处理可以降低PCR抑制物的浓度,降低核酸浓度,使其更有利于PCR扩增。
附图说明
图1为实施例6的荧光定量PCR测试结果图。
图2为实施例6的琼脂糖凝胶电泳图,M为DNA Marker(翌圣生物,10507),1-5分别为样本裂解液稀释5倍、20倍、50倍、100倍、250倍后的扩增产物。
图3为实施例7的琼脂糖凝胶电泳图,M为DNA Marker(翌圣生物,10507),1-7分别为每份猪肝脏组织提取得到的核酸。
下面结合附图对本发明的具体实施方式做进一步说明。
具体实施方式
通过以下详细说明结合附图可以进一步理解本发明的特点和优点。所提供的实施例仅是对本发明方法的说明,而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。
实施例1:
裂解液的配制:取4M尿素溶液25mL,十二烷基硫酸钠0.5g,月桂醇聚氧乙烯醚1g,加入至100mL容量瓶中,用20mM pH 8.0的Tris溶液定容至100mL,充分摇匀使试剂彻底溶解至均匀溶液,即得到裂解液。
实施例2:
蛋白酶K溶液的配制:取20mg蛋白酶K冻干粉,50mM氯化钙溶液100μL,100μL甘油,0.1%(m/V)月桂醇聚氧乙烯醚溶液100μL,上述试剂混合后加入20mM pH 8.0的Tris溶液定容至1mL,即得蛋白酶K溶液。
实施例3:
取小鼠肝脏组织15mg,加入至1.5mL离心管中,继续加入150μL裂解液,15μL蛋白酶K溶液,充分摇匀后短暂离心,置于63℃金属浴中加热处理,加热过程中每隔一段时间充分摇匀一次。样本经加热处理约2小时后即完全裂解,形成透明均匀的溶液。
实施例4
取猪肺组织20mg,加入至1.5mL离心管中,继续加入180μL裂解液,20μL蛋白酶K溶液,充分摇匀后短暂离心,置于63℃金属浴中加热处理,加热过程中每隔一段时间充分摇匀一次。样本经加热处理约3小时后即完全裂解,形成透明均匀的溶液。
实施例5
取鼠尾尖约2mm,加入至1.5mL离心管中,继续加入100μL裂解液,20μL蛋白酶K溶液,充分摇匀后短暂离心,置于60℃金属浴中加热处理,加热过程中每隔一段时间充分摇匀一次。样本经加热处理约2小时后即完全裂解,有毛发残留,经短暂离心后,上清液为透明均匀溶液。
实施例6
取猪肾组织15mg,加入至1.5mL离心管中,继续加入130μL裂解液,20μL蛋白酶K溶液,充分摇匀后短暂离心,置于63℃金属浴中加热处理,加热过程中每隔一段时间充分摇匀一次。样本经加热处理约2小时后即完全裂解,形成透明均匀的溶液。将裂解完全后的溶液置于80℃加热处理15分钟,加热结束后取裂解后的样本溶液,用纯水分别稀释5倍,20倍,50倍,100倍,250倍,将稀释后的溶液作为模板进行PCR扩增。所述的模板用量为5μL,所述的PCR反应体系为20μL,PCR试剂来自翌圣(货号11184),使用sTERT4引物。反应结束后,将扩增产物进行凝胶电泳。
反应体系:
反应程序:
实验结果:样本裂解液稀释20倍和稀释50倍作为模板,荧光定量PCR测试的Ct值基本相同,但稀释50倍的荧光增峰更高。裂解液稀释5倍后无法正常扩增,裂解液稀释100倍和250倍的Ct值有所延后(图1)。将上述荧光定量PCR产物进行凝胶电泳,其结果如图2所示,其中M为Marker,1号为稀释5倍样本,2号为稀释20倍样本,3号为稀释50倍样本,4号为稀释100倍样本,5号为稀释250倍样本。
实施例7
取7份15mg的猪肝脏组织,分别加入至1.5mL离心管中,每份加入180μL裂解液,20μL蛋白酶K溶液,充分摇匀后短暂离心,置于63℃金属浴中加热处理,加热过程中每隔一段时间充分摇匀一次。样本经加热处理约2小时后即完全裂解,形成透明均匀的溶液。向裂解完全的样本溶液中分别加入400μL结合液(自配),充分混合均匀后转移至核酸纯化柱中(来自翌圣试剂盒),静置2分钟后8000rpm离心1分钟,弃去废液;继续向核酸纯化柱中加入700μL漂洗液(自配),静置2分钟后8000rpm离心1分钟,弃去废液;继续向核酸纯化柱中加入700μL洗涤液(自配),静置2分钟后8000rpm离心1分钟,弃去废液;重复上一步骤一次,12000rpm离心2分钟除去核酸纯化柱中残留的洗涤液;将核酸纯化柱晾干约3分钟,向核酸纯化柱膜中滴加70μL洗脱液,置于60℃金属浴中加热5分钟,然后10000rpm离心1分钟得到纯化后的核酸溶液。所得的核酸溶液进行琼脂糖凝胶电泳,结果如图3所示。
给本领域技术人员提供上述实施例,以完全公开和描述如何实施和使用所主张的实施方案,而不是用于限制本文公开的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的修饰将在所附权利要求的范围内。
Claims (16)
1.根据权利要求1所述的处理生物样本的试剂,其组成包括:裂解液和蛋白酶K溶液,所述裂解液包括缓冲剂、蛋白变性剂、表面活性剂以及金属离子,所述蛋白酶K溶液包括蛋白酶K和蛋白酶K缓冲液,所述蛋白酶K的浓度为1-30mg/mL。
2.根据权利要求1所述的裂解液,其特征在于:所述缓冲剂为三羟基氨基甲烷-盐酸、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、硼酸-硼酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠、巴比妥钠-盐酸或甘氨酸-氢氧化钠中的一种或数种,缓冲剂的浓度为1mM-100mM,所述裂解液的pH值为7.0-9.0。
3.根据权利要求1所述的裂解液,其特征在于:所述蛋白变性剂为盐酸胍、硫氰酸胍、尿素、硫脲、碘化钠、高氯酸钠、溴酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠或月桂醇醚硫酸钠中的一种或数种,浓度为0.1M-5M。
4.根据权利要求1所述的裂解液,其特征在于:所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基磺酸钠、月桂醇醚硫酸钠、N-月桂酰肌氨酸钠、N-月桂酰谷氨酸钠、椰油酰胺烷醇硫酸钠、硬脂酸甲酯磺酸钠、十六烷基二苯基醚单磺酸钠、单硬脂酸甘油硫酸酯钠盐、N-月桂酰基谷氨酸二酯、壬基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯山梨醇酐单棕榈酸酯、脂肪醇聚氧乙烯醚、聚乙二醇双月桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯甘油醚中的一种或数种的混合物,浓度为0.05%-5%m/V。
5.根据权利要求1所述的裂解液,其特征在于:所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物,浓度为1mM-50mM。
6.根据权利要求1所述的处理生物样本的试剂,其特征在于:所述蛋白酶K缓冲液为三羟基氨基甲烷-盐酸、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、硼酸-硼酸钠、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾、磷酸二氢钾-氢氧化钠、巴比妥钠-盐酸或甘氨酸-氢氧化钠中的一种或数种,浓度为1mM-100mM,蛋白酶K缓冲液的pH值为7.0-9.0。
7.根据权利要求1所述的蛋白酶K溶液,其特征在于:所述蛋白酶K溶液还包括金属离子,所述金属离子为钠离子、锂离子、钙离子、镁离子、锰离子、锌离子中的一种或数种的混合物,浓度为1mM-50mM。
8.根据权利要求1所述的蛋白酶K溶液,其特征在于:所述蛋白酶K溶液还包括甘油,甘油浓度为0.1%-50%m/V。
9.权利要求1-8中任一项所述的处理生物样本的试剂在裂解生物样本中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于在步骤为:取生物样本5-30mg,加入至EP管中,加入180μL裂解液和20μL蛋白酶K溶液,摇晃混匀后离心,加热使样本裂解。
11.根据权利要去10所述的应用,其特征在于:加热温度为37-65℃。
12.根据权利要求10所述的应用,其特征在于:裂解完成后,将样本加热处理,然后用水稀释,稀释后的溶液作为模板进行PCR扩增。
13.根据权利要求12所述的应用,其特征在于:加热温度为70-90℃,加热时间为10-30分钟。
14.根据权利要求12所述的应用,其特征在于:加热温度为75-80℃,加热时间为15-20分钟。
15.根据权利要求12所述的应用,其特征在于:稀释倍数为2-100倍。
16.根据权利要求12所述的应用,其特征在于:稀释倍数为20-50倍。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210354913.8A CN114717223A (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 处理生物样本的试剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210354913.8A CN114717223A (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 处理生物样本的试剂及其应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114717223A true CN114717223A (zh) | 2022-07-08 |
Family
ID=82241058
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210354913.8A Pending CN114717223A (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 处理生物样本的试剂及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114717223A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116004608A (zh) * | 2022-08-01 | 2023-04-25 | 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 | 一种核酸快速提取方法及组合物 |
Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20160135887A (ko) * | 2015-05-18 | 2016-11-29 | 바이오퀘스트(주) | 세포 파쇄용 화합물의 억제를 극복한 핵산 증폭 방법 및 키트 |
CN109371008A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-02-22 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 一种核酸提取扩增检测试剂盒及其检测方法 |
CN110387369A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-10-29 | 深圳市华晨阳科技有限公司 | 一种能够满足微量核酸生物样本提取纯化要求的试剂盒及其使用方法 |
CN111154750A (zh) * | 2020-01-13 | 2020-05-15 | 苏州行知康众生物科技有限公司 | 一种针对性富集血浆目标游离dna的方法 |
CN113444771A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-09-28 | 翌圣生物科技(上海)有限公司 | 适合dna或rna病毒直接扩增的裂解剂、试剂盒及其在病毒pcr检测中的应用 |
CN113462683A (zh) * | 2021-07-22 | 2021-10-01 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 适用于多种样本核酸提取的无醇清洗液及核酸提取试剂盒 |
CN113584019A (zh) * | 2021-09-06 | 2021-11-02 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 从ffpe样本中快速提取核酸的试剂、试剂盒及其应用 |
CN113881663A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-04 | 苏州缔因安生物科技有限公司 | 一种基于超声波的核酸提取方法 |
CN114107289A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-01 | 江苏康为世纪生物科技股份有限公司 | 粪便样本的核酸提取试剂盒、制备方法及提取方法 |
CN114317522A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-04-12 | 力因精准医疗产品(上海)有限公司 | 全血液dna提取试剂盒及核酸提取方法 |
CN116024305A (zh) * | 2023-02-08 | 2023-04-28 | 上海英基生物科技有限公司 | 生物组织裂解液和直接pcr扩增试剂盒及其应用 |
-
2022
- 2022-03-29 CN CN202210354913.8A patent/CN114717223A/zh active Pending
Patent Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20160135887A (ko) * | 2015-05-18 | 2016-11-29 | 바이오퀘스트(주) | 세포 파쇄용 화합물의 억제를 극복한 핵산 증폭 방법 및 키트 |
CN109371008A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-02-22 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 一种核酸提取扩增检测试剂盒及其检测方法 |
CN110387369A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-10-29 | 深圳市华晨阳科技有限公司 | 一种能够满足微量核酸生物样本提取纯化要求的试剂盒及其使用方法 |
CN111154750A (zh) * | 2020-01-13 | 2020-05-15 | 苏州行知康众生物科技有限公司 | 一种针对性富集血浆目标游离dna的方法 |
CN113444771A (zh) * | 2021-05-20 | 2021-09-28 | 翌圣生物科技(上海)有限公司 | 适合dna或rna病毒直接扩增的裂解剂、试剂盒及其在病毒pcr检测中的应用 |
CN113462683A (zh) * | 2021-07-22 | 2021-10-01 | 上海思路迪生物医学科技有限公司 | 适用于多种样本核酸提取的无醇清洗液及核酸提取试剂盒 |
CN113584019A (zh) * | 2021-09-06 | 2021-11-02 | 郑州安图生物工程股份有限公司 | 从ffpe样本中快速提取核酸的试剂、试剂盒及其应用 |
CN113881663A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-04 | 苏州缔因安生物科技有限公司 | 一种基于超声波的核酸提取方法 |
CN114317522A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-04-12 | 力因精准医疗产品(上海)有限公司 | 全血液dna提取试剂盒及核酸提取方法 |
CN114107289A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-01 | 江苏康为世纪生物科技股份有限公司 | 粪便样本的核酸提取试剂盒、制备方法及提取方法 |
CN116024305A (zh) * | 2023-02-08 | 2023-04-28 | 上海英基生物科技有限公司 | 生物组织裂解液和直接pcr扩增试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
C. BISWAS等: "A method of direct PCR without DNA extraction for rapid detection of begomoviruses infecting jute and mesta", LETTERS IN APPLIED MICROBIOLOGY, vol. 58, pages 350 - 355 * |
DANIEL GOLDENBERGER等: "A simple "Universal" DNA extraction procedure using SDS and proteinase K is compatible with direct PCR amplification", PCR METHODS ANDAPPLLCOTIONS, vol. 04, pages 368 - 370 * |
THITIKA KITPIPIT等: "Forensic animal DNA analysis using economical two-step direct PCR", FORENSIC SCI MED PATHOL, vol. 10, pages 102 - 38 * |
张瑚敏, 杨朝国: "PCR检测结核分枝杆菌DNA中不同细菌裂解方法结果观察", 四川省卫生管理干部学院学报, no. 04, pages 203 - 204 * |
潘亭亭等: "高通量自动化磁珠提取血凝块DNA的方法研究", 中国卫生标准管理, vol. 11, no. 12, pages 132 - 136 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116004608A (zh) * | 2022-08-01 | 2023-04-25 | 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 | 一种核酸快速提取方法及组合物 |
CN116004608B (zh) * | 2022-08-01 | 2023-09-12 | 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 | 一种核酸快速提取方法及组合物 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112760318B (zh) | 一种用于稳定核酸分子的试剂组合物及其应用 | |
Evers et al. | The effect of formaldehyde fixation on RNA: optimization of formaldehyde adduct removal | |
EP2322613B2 (en) | Reagents and methods for isolation of purified RNA | |
CN110982876B (zh) | 病毒核酸检测的预处理方法、预处理液、试剂盒及其用途 | |
JP2018511649A (ja) | 生体試料を保存するための安定化剤 | |
JP2014502495A (ja) | 乾燥試料から遺伝材料を電気溶出する方法 | |
CN114717223A (zh) | 处理生物样本的试剂及其应用 | |
CN107743521B (zh) | 核酸的分离 | |
CN113025609B (zh) | 核酸提取用乳化剂、含有该乳化剂的裂解结合液和核酸提取试剂盒及其应用 | |
KR101777168B1 (ko) | 별도의 세포 용해 과정 없이 핵산을 추출하기 위한 검체 수송 배지 조성물 및 이의 용도 | |
US10160965B2 (en) | Method and materials for nucleic acids extraction and purification | |
US20100291658A1 (en) | Process for separating nonproteinaneous biomolecules, in particular nucleic acids, from proteinaneous samples | |
CN106566893B (zh) | 一种检测猪肉中病毒的方法和试剂盒 | |
US20230140574A1 (en) | Nucleic acid purification from fixed biological samples | |
AU2018277094A1 (en) | DNA stabilization of RNA | |
US20220162592A1 (en) | Duplex-specific nuclease depletion for purification of nucleic acid samples | |
JP3125633B2 (ja) | 遺伝子分析用試料としてのパラフィン包埋組織標本の処理方法及び処理用キット | |
US10144951B2 (en) | Method and materials to deplete impurities for extraction and purification of nucleic acids from stool | |
CN114350653B (zh) | 一种动物组织裂解与直接pcr扩增的方法 | |
CN103695414B (zh) | 一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总rna的方法 | |
JP3922420B2 (ja) | 改良されたリボ核酸の単離方法 | |
KR20120059252A (ko) | 전혈을 이용한 직접 pcr 조성물 제조방법및 이를 이용한 키트 | |
Felipe et al. | Optimization of RNA Extraction Protocol for Rat Skeletal Muscle Samples | |
Cummings | Efficacy of a multimolecular extraction from formalin-fixed paraffin-embedded tissue | |
CN116103279A (zh) | 一种裂解剂、组合物的用途、核酸释放方法和裂解红细胞方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |