JP2018511649A - 生体試料を保存するための安定化剤 - Google Patents
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Abstract
Description
1)式I:
(Rはアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリールホルミルアルキル、及び
からなる群から選択され、これらのそれぞれが任意選択で、アルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ及びハロゲンからなる群から選択される置換基で置換されており、
m及びnはそれぞれが独立して0、1、2又は3であり、
X−はアニオンを表す)
の少なくとも1つの化合物と、
2)以下の3つの薬剤
(1)少なくとも1つの沈殿剤、
(2)少なくとも1つの低級アルコール、及び
(3)少なくとも1つのカオトロープ
のうちの1つ、2つ又は3つと
を含む、組成物に関する。
(a)還元剤、
(b)ポリメラーゼ阻害剤、
(c)pH緩衝剤、
(d)キレート剤、及び
(e)水
から選択される1つ又は複数の薬剤をさらに含む。
(i)式Iの化合物、沈殿剤、低級アルコール、ポリメラーゼ阻害剤、及びpH緩衝剤、
(ii)式Iの化合物、カオトロープ、低級アルコール、ポリメラーゼ阻害剤、及びpH緩衝剤、
(iii)式Iの化合物、沈殿剤、低級アルコール、還元剤、及びpH緩衝剤、並びに
(iv)式Iの化合物、カオトロープ、低級アルコール、還元剤、及びpH緩衝剤
のうちの1つを含む。
からなる群から選択され、これらのそれぞれが任意選択で、C1〜10アルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ及びハロゲンからなる群から選択される置換基で置換されており、
m及びnはそれぞれが独立して0、1、2又は3である。
1)生体試料を本発明の第1の態様に従った組成物と混合するステップ、及び
2)非凍結条件下でステップ1)において得られる混合物を少なくとも1日、3日、7日、10日、20日、30日、40日、50日、60日、70日、90日又は180日間貯蔵するステップ
を含む、方法に関する。
例えば、
例えば、
のことであり、アルキル又はC1〜10アルキルの定義は上記の通りである。
は、例えば、
であり、m及びnはそれぞれが独立して0、1、2、又は3である。
1.糞便試料:新鮮な糞便試料は健康なボランティアにより提供され、同一片の糞便試料は30アリコートに分割し、それぞれのアリコートの湿重量は約0.2gであった。
実施例1において得られたそれぞれの試料から抽出したDNAについてのライブラリーを構築し(インサートサイズ≦800bp)、次に試料あたり8Mbの塩基配列決定データを用いてIon PGM及び318−v2チップを使用して、16S rDNA遺伝子のV4及びV5領域のメタゲノミクス塩基配列決定を実行し、詳細なステップは製造業者の説明書に従って実施した。
1.配列決定装置
Ion Torrent PGM(Personal Genome Machine)
2.塩基配列決定戦略
16S rDNA遺伝子のV4〜V5領域の配向塩基配列決定(逆方向:V5→V4)
3.ソフトウェア
mothur v.1.33.3(http://www.mothur.org)
4.16S rDNAデータベース
RDP(Ribosomal Database Project、http://rdp.cme.msu.edu/)
Silva(http://www.arb−silva.de/)
5.分析過程
16S rDNA遺伝子の高頻度可変性領域についての塩基配列決定技術を使用することにより、16S rDNAのV4〜V5領域のPCR産物を塩基配列決定した。塩基配列決定によって得られるフィルター処理された読取りデータは16S rDNAデータベースSilvaに整列させ、次に、整列させた読取りデータはOTUクラスタリングにかけ、種分類に関する情報はRDPデータベースアノテーションに従って得られ、続いて多様性分析などの他の分析を行った。分析過程は図3に示されている。図4は属レベルでのそれぞれの2つの試料間の相関を示している(表6−1、6−2、6−3参照)。属レベルでのそれぞれの種の相対的存在量に従って(表5−1、5−2、5−3)、それぞれの2つの試料間の相関係数を計算した。
6.結果分析
属レベルでのそれぞれの2つの試料間の相関に照らして、Stool DNA安定化剤(市販の安定化剤)と一緒に貯蔵された群と比べると、配合2.37の安定化剤と一緒に貯蔵された群は対照群とより類似しており(平均で0.9829対0.9676)、属レベルでの結果と貯蔵温度又は期間の間の相関はこの群内でのほうが高い(平均で0.9937対0.9862)。安定化剤なしの負の対照群(群3)が対処群と相関関係を保つことが可能なのは−20℃の貯蔵条件でのみである(平均で0.9966)。したがって、上記結果によれば、本発明の安定化剤は生体試料(糞便)中のDNA分子の完全性及び安定性を長時間保持することが可能であり、貯蔵において先行技術の製品よりも優れた効果を有することが示されている。
新鮮な血液(全血)試料を抗凝固剤K2−EDTAを含有する遠心管に収集し、それぞれ配合1.1又は配合1.3の安定化剤(表1)と特定の比で混合した。例えば、比が2対1である場合、100μLの血液と50μLの安定化剤をマイクロ遠心管に添加し、ボルテックス下で混合した。例えば、比が4対1である場合、100μLの血液と25μLの安定化剤をボルテックス下で混合した。例えば、比が8対1である場合、100μLの血液と12.5μLの安定化剤をボルテックス下で混合した。複数の混合試料を検出時点毎に調製し、室温で貯蔵した。室温で貯蔵した100μLの血液試料を無防備対照試料(NP)として使用し、−80℃で貯蔵した100μLの血液試料を凍結対照試料として使用した。10日後、DNAはQIAamp(商標)精製ミニキット(Qiagen、Valencia、CA)を使用することにより抽出し、詳細なステップは血液試料の製造業者の説明書に従って実施した。さらに、実験はすべて2通り実施した。最後に、抽出により得られたゲノムDNAは100μLの溶出剤を用いて溶出した。溶出後、10μLの溶出液を臭化エチジウム含有0.8%アガロースゲルの試料ウェル中に充填した。120Vでの40分間の電気泳動後、紫外線(UVI)画像処理装置により写真を撮った。電気泳動図は図5に示されている。
新鮮な血液(全血)試料を抗凝固剤K2−EDTAを含有する遠心管に収集し、それぞれ配合1.1又は配合1.3の安定化剤(表1)と特定の比で混合した。室温での20日間の貯蔵後、DNA抽出を実行した。さらに、安定化剤なしで室温で貯蔵された試料(NP)及び安定化剤なしで−80℃で貯蔵された試料は対照試料として使用した。すべての試料から抽出したDNAは100μLの溶出剤を用いて溶出した。溶出後、10μLの溶出液を臭化エチジウム含有0.8%アガロースゲルの試料ウェル中に充填した。120Vでの40分間の電気泳動後、紫外線(UVI)画像処理システムにより写真を撮った。電気泳動図は図6に示されている。結果によれば、それぞれ配合1.1又は配合1.3の安定化剤と特定の比で混合され、室温で20日間貯蔵された血液試料から得られたDNAのほうが電気泳動図において明確に分離されたバンドをまだ示しており、安定化剤なしで貯蔵された試料から得られたDNAでは電気泳動のバンドは激しくにじんでいたことが示されており、DNAが激しく分解されていることを示していた。
新鮮な血液(全血)試料を抗凝固剤K2−EDTAを含有する遠心管に収集し、それぞれ配合1.1又は配合1.3の安定化剤(表1)と異なる比で混合した。さらに、安定化剤なしで室温で貯蔵された試料(NP)及び安定化剤なしで−80℃で貯蔵された試料は対照試料として使用した。次に、模擬輸送過程を実施し、そのステップは以下の通りであった。
a)室温で2日間貯蔵した;
b)45℃で2日間貯蔵した;
c)室温で3日間貯蔵した;
d)−20℃で2日間貯蔵した;
e)室温で3日間貯蔵した、及び
f)45℃で2日間貯蔵した。
ボランティアから収集した血液(全血)試料を抗凝固剤K2−EDTAを含有する真空採血管に入れ、それぞれ配合1.1〜1.4の安定化剤(表1)のうちの1つと2対1又は4対1の比で混合した。ボルテックス下での混合後、試料は室温で貯蔵した。室温で貯蔵された300μLの血液試料は無防備対照試料(NP)として使用し、−80℃で貯蔵された300μLの血液試料は凍結対照試料として使用した。室温での15日間の貯蔵後、試料は14000gの遠心力で5分間遠心分離し、上澄みを取り除いた。沈殿物をAmbion RiboPure(商標)血液キット(Ambion、Austin、TX)由来の溶解緩衝液(800μL)及び酢酸ナトリウム溶液(50μL)に十分に混合させることにより溶解させ、次にキットの説明書に従って、RNAを血液試料から抽出した。RNA抽出は、試料を解凍後−80℃で安定化剤なしで貯蔵した試料において及び室温で安定化剤なしで貯蔵した試料においても実行した。抽出されたRNAは臭化エチジウム含有1%アガロースゲルの試料ウェルに充填した。150Vで35分間の電気泳動後、紫外線(UVI)画像処理システムにより写真を撮った。電気泳動図は図10に示されている。
ヒト胚腎臓(HEK)293T細胞(ATCC、Manassas、Virginia、USA)を標準細胞培養方法により培養し、こうして得られた細胞は洗浄した。細胞はそれぞれ配合2.5又は配合2.6の安定化剤(表2)と2対1、4対1及び8対1の比で混合させ、室温で貯蔵した。さらに、安定化剤なしで等量の細胞を含有する2つの試料を対照として使用し、1つは室温で貯蔵され(NP)、もう1つは−80℃で貯蔵された。全ての試料の15日間の貯蔵後、ゲノムDNA及び全RNAはRNAqueous(商標)キット(Ambion Company、Austin、Texas)を使用することにより抽出され、詳細なステップは製造業者の説明書に従って実施した。得られた核酸試料は1.2%アガロースゲル電気泳動により検出された。RNA電気泳動図(図11)は、室温で安定化剤なしで貯蔵された試料ではRNAは完全に分解しており、独立したRNAバンドは観察されず、これとは対照的に、室温で配合2.5又は配合2.6の安定化剤と一緒に貯蔵された試料の電気泳動図では、RNAは比較的明瞭なバンド(18S及び28S rRNAの2つの主要バンドを含む)を有しており、その完全性は−80℃で安定化剤なしで貯蔵された試料中のRNAの完全性に匹敵するか、それよりもずっとよいことを示している。DNA電気泳動図(図12)は、室温で配合2.5又は配合2.6の安定化剤と一緒に貯蔵された試料の電気泳動図では、DNAはより明瞭に分離された強力なバンドを有しており、このバンドは−80℃で貯蔵された試料中のDNAのバンドと同程度に良好であり、室温で安定化剤なしで貯蔵された試料中では、DNAは激しく分解しており、バンドは激しくにじんでいたことを示している。
実験動物組織の収集のための既存の過程に従って、マウス脳組織の新鮮な試料(試料ごとに約25mg)を入手し、別々に遠心管に貯蔵し、それぞれ4つの方法で貯蔵した。1つはいかなる安定化剤もない貯蔵を指し、1つは配合2.5の安定化剤を100μL添加した貯蔵を指し、1つは配合2.6の安定化剤を100μL添加した貯蔵を指し(表2)、3つの方法により処理された試料は室温で貯蔵され、最後の1つは対照として−80℃でのいかなる安定化剤もない貯蔵を指した。全ての処理は2通り実施され、試料は一致する条件下で15日間又は24日間貯蔵した。貯蔵後、全RNAはRNAqueous(商標)キット(Ambion Company、Austin、Texas)を使用することにより前記試料のそれぞれから抽出され、詳細なステップは製造業者の説明書に従って実施された。RNA完全性は、Agilent RNA 6000ナノキット及びAgilent 2100バイオアナライザー(Agilent Technologies Inc.、Santa Clara、California)を使用することにより評価し、結果はRIN(RNA完全性)として表された。
上記の方法により調製されたヒト乳がんの試料(試料ごとに約25mg)はPAXgene(商標)組織FIX容器(50ml)に移して固定し、続いてPAXgene組織FIXを取り除いてPAXgene(商標)組織安定化剤(Qiagen、Valencia、CA)を同じ容器に添加し、次に室温で貯蔵した。又は、試料は直接収集管に移し、室温で配合1.37の安定化剤(表1)と一緒に貯蔵した、又は室温で安定化剤なしで貯蔵した(NP)、又は−80℃で安定化剤なしで貯蔵した。7日間の貯蔵後、タンパク質を上記の方法によって抽出し、タンパク質抽出物は電気泳動による分離にかけた。ニトロセルロース膜への電気泳動による転写後、アミノブラックを染色のために使用した。結果は図17に示されている。結果によれば、室温で配合1.37の安定化剤と一緒に貯蔵した試料中のタンパク質抽出物は電気泳動図では複数の明瞭なバンドを有していたことが示されている。比較すると、配合1.37の安定化剤と一緒に貯蔵した試料を表すバンドのほうが、安定化剤PAXgene(商標)組織安定化剤濃縮物と一緒に貯蔵した試料を表すバンドよりもはっきりしていて明瞭であり、室温で安定化剤なしで貯蔵された試料中のタンパク質を表す電気泳動図では、バンドは強度が弱く比較的にじんでいた。
ボランティアから収集した血液(全血)試料を抗凝固剤K2−EDTAを含有する真空採血管に添加し、それぞれ配合2.1〜2.3の安定化剤(表2)のうちの1つと2対1又は8対1の比で混合し、室温で貯蔵した、又は室温で安定化剤なしで貯蔵した(NP)、又は−80℃で安定化剤なしで貯蔵した。60日後、ゲノムDNAをQIAamp(商標)ミニDNAキットを使用することにより試料から抽出し、精製後アガロースゲル電気泳動にかけた。結果は図18に示されている。それぞれ配合2.1〜2.3の安定化剤と一緒に貯蔵した試料を表すDNAバンドは、室温で安定化剤なしで貯蔵した試料を表すDNAバンドよりもはるかに明るくはっきりと分離していたことが電気泳動図から見て取ることができる。
ボランティアから収集した血液(全血)試料をPAXgene(商標)血液RNA管に添加し、室温(RT)で3日間若しくは7日間貯蔵した、又は試料は抗凝固剤K2−EDTAを含有する真空採血管に収集し、室温(RT)で配合2.4の安定化剤と一緒に3日間若しくは7日間貯蔵した、又は室温(RT)で安定化剤なしで3日間貯蔵した、又は−80℃で安定化剤なしで7日間貯蔵した。試料収集時の発現レベルと比べた36の遺伝子の発現レベルの変化は、ΔΔCq方法により決定され(表9)、ハウスキーピング遺伝子PRL13A及びGAPDHは内部基準として使用し、実験はすべて3通り実施した。「0」時の遺伝子は同じ発現レベルを有しており、検出の特定の時点での発現レベルは対応する線形状の曲線(図21A〜F)に示された。対角線に平行な散布図における真っ直ぐな境界線は2倍ボーダーラインを表し、遺伝子を表すのに描かれている1つの点が上の境界線よりも有意に高い場合は、それは遺伝子発現レベルの上方調節と見なされ、これとは対照的に、遺伝子を表すのに描かれている1つの点が下の境界線よりも有意に低い場合は、それは遺伝子発現レベルの下方調節と見なされる。
ボランティアから収集した血液(全血)試料は抗凝固剤K2−EDTAを含有する真空採血管に添加し、室温で配合2.9〜2.20の安定化剤(表2)のうちの1つと一緒に貯蔵した、又は室温で安定化剤なしで貯蔵した(NP)、又は−80℃で安定化剤なしで貯蔵した。
ボランティアから収集した尿試料はさらなる使用のために氷上で貯蔵した。200μLの尿試料は、配合2.6〜2.8の安定化剤(表2)のうちの1つの等量と十分に混合させた。安定化剤なしの2つの対照試料を調製し、−80℃で貯蔵した1つの対照試料は凍結対照として使用し、もう一方の対照試料(NP)は安定化剤と一緒に貯蔵した試料と共に室温で暗所に置いた。処理はすべて2通り実施した。30日間の貯蔵後、ゲノムDNA及び全RNAはそれぞれ前記DNA及びRNA抽出キットを使用することにより前記試料から抽出し、詳細なステップは製造業者の説明書に従って実施した。得られた核酸試料は1.2%アガロースゲル電気泳動にかけた。DNA電気泳動図(図26)によれば、室温で安定化剤と一緒に貯蔵した試料由来のDNAは電気泳動図において明るいバンドを有し、このバンドは−80℃で貯蔵した対照試料由来のDNAのバンドに匹敵していたことが示されている。しかし、室温で安定化剤なしで貯蔵した試料では、DNAは激しく分解されており、そのバンドはぼやけており強度は非常に低かった。RNA電気泳動図(図27)によれば、室温で安定化剤なしで貯蔵した試料では、そのRNAは完全に分解されており、独立したRNAバンドは観察されなかったことが示されている。これとは対照的に、室温で安定化剤と一緒に貯蔵した試料では、RNAを表す比較的明瞭なバンドを電気泳動図において検出することが可能であり、28Sバンドと18Sバンドの強度の比は2対1に近く、得られたRNAが高品質を有していることを示していた。
ボランティアから収集した唾液試料はさらなる使用のために氷上で貯蔵した。唾液試料は十分に混合させた。200μLの唾液試料は、ネジ口付のポリプロピレンビン中で配合2.5〜2.8の安定化剤(表2)のうちの1つの等量と混合させた。安定化剤なしの2つの対照試料を調製し、−80℃で貯蔵した1つの対照試料は凍結対照として使用し、もう一方の対照試料(NP)は安定化剤と一緒に貯蔵した試料と共に室温で暗所に置いた。処理はすべて2通り実施した。30日間の貯蔵後、DNAはQIAamp精製ミニキット(Qiagen、Valencia、CA)を使用することにより300μLのそれぞれの試料から抽出し、詳細なステップは製造業者の説明書に従って実施した。最後に、抽出されたゲノムDNAは100μLのAE溶出剤を用いて溶出させ、10μLの溶出液は臭化エチジウム含有1.2%アガロースゲルの試料ウェル内に充填した。120Vでの40分間のゲル電気泳動後、紫外線(UVI)画像処理システムにより写真を撮った。電気泳動図は図28に示されている。
Claims (27)
- 生体試料中の核酸及び/又はポリペプチドの貯蔵のための組成物であって、
1)式I:
(Rはアルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリールホルミルアルキル、及び
からなる群から選択され、これらのそれぞれが任意選択で、アルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ及びハロゲンからなる群から選択される置換基で置換されており、
m及びnはそれぞれが独立して0、1、2又は3であり、
X−はアニオンを表す)
の少なくとも1つの化合物と、
2)以下の3つの薬剤
(1)少なくとも1つの沈殿剤、
(2)少なくとも1つの低級アルコール、及び
(3)少なくとも1つのカオトロープ
のうちの1つ、2つ又は3つと
を含む、組成物。 - (a)還元剤、
(b)ポリメラーゼ阻害剤、
(c)pH緩衝剤、
(d)キレート剤、及び
(e)水
から選択される1つ又は複数の薬剤をさらに含む、請求項1に記載の組成物。 - 以下の配合:
(i)請求項1に記載の式Iの化合物、沈殿剤、低級アルコール、ポリメラーゼ阻害剤、及びpH緩衝剤、
(ii)請求項1に記載の式Iの化合物、カオトロープ、低級アルコール、ポリメラーゼ阻害剤、及びpH緩衝剤、
(iii)請求項1に記載の式Iの化合物、沈殿剤、低級アルコール、還元剤、及びpH緩衝剤、並びに
(iv)請求項1に記載の式Iの化合物、カオトロープ、低級アルコール、還元剤、及びpH緩衝剤
のうちの1つを含む、請求項1又は2に記載の組成物。 - 式Iの化合物は1〜10%(w/v又はv/v)の量で含まれ、
カオトロープは2.5〜5Mの量で含まれ、
pH緩衝剤は50〜400mMの量で含まれ、
低級アルコールは20〜50%(v/v)の量で含まれ、
還元剤は5〜50mMの量で含まれ、
沈殿剤は2.5〜5Mの量で含まれ、
ポリメラーゼ阻害剤は0.1〜0.5mMの量で含まれる、請求項3に記載の組成物。 - RはC1〜10アルキル、C2〜10アルケニル、C3〜10シクロアルキル、C3〜10シクロアルケニル、アリールホルミルC1〜10アルキル、及び
からなる群から選択され、これらのそれぞれが任意選択で、C1〜10アルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ及びハロゲンからなる群から選択される置換基で置換されており、
m及びnはそれぞれが独立して0、1、2又は3である、請求項1又は2に記載の組成物。 - アニオンが、臭素イオン、塩素イオン、ヨウ素イオン、C1〜10アルキルスルホン酸、ヘキサフルオロリン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、テトラフルオロホウ酸、トリフルオロメタンスルホン酸及びビス(トリフルオロメチルスルホニル)イミドからなる群から選択される、請求項1又は2に記載の組成物。
- 式Iの化合物が、N−オクチルピリジニウムブロマイド、N−ブチルピリジニウムブロマイド、及びN−フェナシルピリジニウムブロマイドからなる群から選択される、請求項1又は2に記載の組成物。
- 沈殿剤が、塩化リチウム、水酸化リチウム、スルホサリチル酸、及び5−((4−(ジメチルアミノ)フェニル)メチレン)−2−チオキソ−4−チアゾリジノンから選択される、請求項1又は2に記載の組成物。
- 低級アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、n−ブタノール及びイソブタノールから選択される、請求項1又は2に記載の組成物。
- カオトロープが、塩酸グアニジン、チオシアン酸グアニジン、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸ナトリウム及び尿素から選択される、請求項1又は2に記載の組成物。
- キレート剤が、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール−ビス−(2−アミノエチルエーテル)−N,N,N’,N’−四酢酸(EGTA)、1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、1,2−ビス(2−アミノフェノキシ)−エタン−N,N,N’,N’−四酢酸(BAPTA)、1,4,7,10−テトラアザシクロドデカン−1,4,7,10−四酢酸(DOTA)、N−(2−ヒドロキシエチル)エチレンジアミン−N,N’,N’−三酢酸(HEDTA)、ニトリロ三酢酸(NTA)から選択される、請求項2に記載の組成物。
- 還元剤が、2−メルカプトエタノール、チオ硫酸塩、トリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩(TCEP)、ジチオスレイトール、及びジチオエリスリトールから選択される、請求項2に記載の組成物。
- pH緩衝剤が、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、スルホサリチル酸、5−スルホベンゼン−1,3−ジカルボン酸、シュウ酸、ホウ酸、N−(2−ヒドロキシエチル)ピペラジン、3−(シクロヘキシルアミノ)−1−プロパンスルホン酸(CAPS)、3−(シクロヘキシルアミノ)−2−ヒドロキシル−1−プロパンスルホン酸(CAPSO)、4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンプロパンスルホン酸(HEPPS)、N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N−2−エタンスルホン酸(HEPES)、2−モルホリノエタンスルホン酸(MES)、3−モルホリノプロパンスルホン酸(MOPS)、3−(N−モルホリノ)−2−ヒドロキシルプロパンスルホン酸(MOPSO)、ピペラジン−1,4−ビス(エタンスルホン酸)(PIPES)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−3−アミノプロパンスルホン酸(TAPS)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−3−アミノ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸(TAPSO)、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]−2−アミノエタンスルホン酸(TES)、ジグリシン、N−[トリス(ヒドロキシメチル)メチル]グリシン、トリ(ヒドロキシメチル)アミノメタン(トリス)及び2−[ビス(2−ヒドロキシエチル)アミノ]−2−(ヒドロキシメチル)−1,3−プロパンジオールから選択される、請求項2に記載の組成物。
- ポリメラーゼ阻害剤が、リファマイシン−S、リファマイシン−SV、アンチマイシン、及びエリスロマイシンのうちの1つ又は複数から選択される、請求項2に記載の組成物。
- 界面活性剤又は洗剤をさらに含む、請求項1又は2に記載の組成物。
- 界面活性剤又は洗剤が、トリトンX−100、ノニデットP40及び非イオン性洗剤Brijから選択される、請求項15に記載の組成物。
- 核酸が1つ又は複数のDNA及び/又はRNA分子を含む、請求項1又は2に記載の組成物。
- 生体試料が、DNA、RNA、全血、全血のバフィーコート、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳脊髄液、唾液、粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、胸水、心膜液、腹腔液、腹部の液体、細胞培養培地、組織培養培地、頬側細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドDNA、mRNA、tRNA、rRNA、siRNA、miRNA、hnRNA、cDNA、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖、ワクチン、細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネート又は抽出物、組織溶解物、生検標本、血液試料、組織外植片、器官培養物及び生物学的液体から選択される1つ又は複数を含む、請求項1又は2に記載の組成物。
- 請求項1〜18のいずれか一項に記載の組成物と生体試料を混合することにより得られる混合物。
- 生体試料が、DNA、RNA、全血、全血のバフィーコート、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳脊髄液、唾液、粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、胸水、心膜液、腹腔液、腹部の液体、細胞培養培地、組織培養培地、頬側細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドDNA、mRNA、tRNA、rRNA、siRNA、miRNA、hnRNA、cDNA、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖、ワクチン、細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネート又は抽出物、組織溶解物、生検標本、血液試料、組織外植片、器官培養物及び生物学的液体から選択される1つ又は複数を含む、請求項19に記載の混合物。
- 混合物が少なくとも1日、3日、7日、10日、20日、30日、40日、50日、60日、70日、90日又は180日間非凍結条件下で貯蔵される、請求項19又は20に記載の混合物。
- 非凍結条件下で生体試料中の核酸及び/又はポリペプチドを貯蔵するための、請求項1〜18のいずれか一項に記載の組成物を含むキット。
- 生体試料が、DNA、RNA、全血、全血のバフィーコート、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳脊髄液、唾液、粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、胸水、心膜液、腹腔液、腹部の液体、細胞培養培地、組織培養培地、頬側細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドDNA、mRNA、tRNA、rRNA、siRNA、miRNA、hnRNA、cDNA、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖、ワクチン、細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネート又は抽出物、組織溶解物、生検標本、血液試料、組織外植片、器官培養物及び生物学的液体から選択される1つ又は複数を含む、請求項22に記載のキット。
- 非凍結条件下で生体試料中の核酸及び/又はポリペプチドを貯蔵するための方法であって、
1)生体試料を請求項1〜18のいずれか一項に記載の組成物と混合するステップ、及び
2)非凍結条件下でステップ1)において得られる混合物を少なくとも1日、3日、7日、10日、20日、30日、40日、50日、60日、70日、90日又は180日間貯蔵するステップ
を含む、方法。 - 生体試料が、DNA、RNA、全血、全血のバフィーコート、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳脊髄液、唾液、粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、胸水、心膜液、腹腔液、腹部の液体、細胞培養培地、組織培養培地、頬側細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドDNA、mRNA、tRNA、rRNA、siRNA、miRNA、hnRNA、cDNA、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖、ワクチン、細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネート又は抽出物、組織溶解物、生検標本、血液試料、組織外植片、器官培養物及び生物学的液体から選択される1つ又は複数を含む、請求項24に記載の方法。
- 非凍結条件下で生体試料中の核酸及び/又はポリペプチドを貯蔵するための、請求項1〜18のいずれか一項に記載の組成物の使用。
- 生体試料が、DNA、RNA、全血、全血のバフィーコート、尿、糞便、血清、漿液、血漿、リンパ液、脳脊髄液、唾液、粘膜分泌物、膣分泌物、腹水、胸水、心膜液、腹腔液、腹部の液体、細胞培養培地、組織培養培地、頬側細胞、細菌、ウイルス、酵母細胞、プラスミドDNA、mRNA、tRNA、rRNA、siRNA、miRNA、hnRNA、cDNA、タンパク質、ポリペプチド、脂質、糖脂質、糖タンパク質、オリゴ糖、多糖、ワクチン、細胞、組織、細胞溶解物、ホモジネート又は抽出物、組織溶解物、生検標本、血液試料、組織外植片、器官培養物及び生物学的液体から選択される1つ又は複数を含む、請求項26に記載の使用。
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