CN114686402A - 乳酸乳球菌乳酸亚种hfy14及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14及其应用，属于生物技术领域，该乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactissubsp.lactis)命名为HFY14，保藏编号CGMCC No.16647，该菌株分离自自然发酵酸奶中，并且通过动物实验、组织病理学观察等实验验证了使用该菌株的活菌液灌胃降植烷诱导的狼疮性肾炎小鼠能够使其肾功能异常得到明显改善，效果接近于药物泼尼松。本发明为乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14的后续开发利用以及其作为益生菌改善肾病肾功能的应用提供了理论基础，该菌株具备对狼疮性肾炎进行长期干预改善肾功能的应用潜质。

Description

乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14及其在制备药物中的应用。

背景技术

青藏高原的地理环境特殊，具有海拔高、气温低、日照强的特点，这些地理因素促进了青藏高原形成了大片草场，自古以来就是天然的畜牧业发达的地区。青藏高原上居住的藏族牧民自古便有饲养牦牛的传统，通过畜牧业除了获得牦牛肉外，还形成了食用牦牛乳和发酵牦牛乳获得酸乳的习惯。现代科学研究分析发现牦牛乳含有的营养物质优于普通牛乳，富含蛋白质和微量元素，由牦牛乳经过自然发酵得到的牦牛酸乳得益于青藏高原的地理环境和藏族牧民的生活习惯，形成了特殊的风味和营养组成，还包括富含相当数量未经鉴定和开发的微生物资源。现在已有从自然发酵牦牛酸乳中分离的微生物应用在酸奶发酵制作和益生菌产品开发中，酸奶和益生菌产品均具有肠道调节、减脂和等保健功效。研究还发现地处青藏高原的四川红原地区牧民也保持食用自然发酵牦牛乳的习惯，且当地发酵酸奶中含有的微生物不仅种类丰富，还具有良好的抗性，是潜在的益生菌发掘资源。

狼疮性肾炎是一种是免疫失调引发的肾炎，严重的肾脏疾病出现后常常导致狼疮性肾炎，进而引起肾小球出现严重的炎症。狼疮性肾炎发生后会引起机体一系列病变，除了肾小球炎症外，还会出现淋巴结出现增生，严重时机体免疫失调，出现肾脏硬化，代谢及排毒失调，从而危及生命。机体免疫系统中B细胞及T细胞被过度激活也是狼疮性肾炎的主要表现，从而使体内的T细胞出现分化，影响正常的免疫系统工作。有研究显示益生菌干预下能够保持T细胞在机体中的平衡，发挥益生菌干预肾炎的作用。益生菌自身的肽聚糖和脂磷壁酸等成分能够激活和加强免疫系统，提高机体免疫力；同时益生菌还能分泌出刺激免疫系统的活性物质，也能发挥提高免疫力的作用，机体免疫力提高后，炎症引起的体内毒性物质被加速排出，促进了肾脏病变的恢复。乳酸乳球菌乳酸亚种作为益生菌常用于食品技术领域，其在药物制备，尤其是在预防和/或治疗狼疮性肾炎药物的制备方面鲜有研究。

发明内容

本发明的目的是提供乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14及其在制备药物，尤其是在制备预防和/或治疗狼疮性肾炎的药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.Lactis)HFY14，其已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.16647，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2018年10月29日。

本发明还提供一种根据所述乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14在制备预防和/或治疗狼疮性肾炎的药物中的应用。

本发明还提供一种根据所述乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14在制备改善肾功能的药物中的应用。

本发明还提供一种根据所述乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14在制备提高集体免疫力的药物中的应用。

本发明还提供一种药物，包括所述乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14以及药学上可接受的辅料。

进一步地，所述药物用于提高免疫器官指数、保持血清中免疫因子的正常水平以及保持肾功能指标正常水平。

进一步地，所述药物用于降低血清中dsDNA阳性率以及上调IL-4的表达和下调IL-1β、TGF-β的表达。

进一步地，所述免疫因子包括IL-2、IL-12、IFN-γ、TGF-β和IgG。

进一步地，所述肾功能指标包括SCr、BUN、TC、TG、TP和ALB。

本发明公开了以下技术效果：

本发明从四川红原高原藏族牧民自然发酵酸奶中分离出了一株菌——乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14，并且通过动物实验验证了该菌株能够提高由降植烷诱导的狼疮性肾炎小鼠的免疫器官指数；抑制小鼠血清中IL-2、IL-12、IFN-γ、TGF-β和IgG水平的变化，从而改善小鼠的免疫失调；控制小鼠肾脏组织中IL-4、TGF-β和IL-1β的异常表达，从而改善小鼠肾功能，同时乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14还能够降低dsDNA抗体的阳性率，效果接近于药物泼尼松。因此，乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14对狼疮性肾炎小鼠的免疫功能起到了明显的调节作用，由此可进一步改善狼疮性肾炎的肾功能异常，具备对狼疮性肾炎进行长期干预改善肾功能的应用潜质。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为乳酸杆菌菌落形态；

图2为乳酸杆菌细胞形态；

图3为15株乳酸菌PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳图；M，D2000 DNAMarker；0，阴性对照组；1-15代表编号为1-15的菌株，其中14为HFY14菌株；

图4为小鼠免疫器官指数，其中(A)为小鼠胸腺器官指数，(B)为小鼠脾脏器官指数；

图5为小鼠血清中免疫因子水平，其中(A)为IL-2细胞因子水平，(B)为IL-12细胞因子水平，(C)为IFN-γ细胞因子水平，(D)为TGF-β细胞因子水平，(E)为IgG细胞因子水平；

图6为小鼠血清指标水平，其中(A)为SCr指标水平，(B)为BUN指标水平，(C)为TC指标水平，(D)为TG指标水平，(E)为TP指标水平，(F)为ALB指标水平；

图7为小鼠肾脏组织的H&E染色病理观察；

图8为小鼠肾组织中的IL-4、TGF-β和IL-1β相对mRNA表达强度；

图9为小鼠肾组织中的IL-4、TGF-β和IL-1β蛋白质凝胶电泳结果，其中由左到右泳道依次表示正常组、模型组、HFY14-L、HFY14-H、泼尼松组；

图10为小鼠肾组织中的IL-4、TGF-β和IL-1β相对蛋白质表达强度。

具体实施方式

现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。

应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。

除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。

在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。

关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。

实施例1菌株的分离与鉴定

一、实验材料

采自四川省阿坝藏族羌族自治州红原县地区的牧民家中的传统自然发酵牦牛酸奶，无菌勺子充分搅匀酸奶后，用无菌注射器吸取50mL到已灭菌的离心管中，装入低温食品采样箱内带回实验室冷冻保藏于-80℃的超低温冰箱中备用。

二、实验方法

1乳酸菌的分离纯化

分别取1mL酸奶样品，用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释至10^-6CFU/mL，获得菌液，然后取10^-4CFU/mL、10^-5CFU/mL、10^-6CFU/mL 3个梯度的菌液100μL进行平板涂布，37℃培养24-48h，观察并记录菌落形态。挑取平板上不同形态的菌落进行划线分离，经37℃培养48h后，再次挑取平板上不同形态的单菌落进行划线分离，如此重复多次，直至得到形态一致的纯的单菌落。

2.乳酸菌的初步鉴定

挑取平板上的纯菌落接种于5mL MRS液体培养基中，37℃培养24h。取上述含菌培养基1mL于无菌离心管中，4000r/min离心10min后弃去上层培养基，菌体沉淀重悬于无菌生理盐水并进行革兰氏染色镜检，革兰氏染色镜检为阳性的初步鉴定为乳酸菌。在100倍油镜下，乳酸菌菌株细胞形态如图1所示，细胞形态有长杆、短杆、球状，且不存在出芽生殖。形态学观察显示乳酸菌菌落颜色多为白色或乳白色，形状为圆形，边缘整齐，表面湿润光滑(图2)。

3.乳酸菌DNA提取

将已纯的疑似目标菌株接种于MRS肉汤中，37℃培养18-24h后，采用细菌基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取。将提取完成的DNA做好编号，共15个，放于-20℃冰柜保藏备用。

4.基因组DNAPCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测

提取完的DNA进行PCR扩增，其中上游引物27F(5'－AGA GTT TGA TCC TGGCTCAG－3'(SEQ ID NO.2))1μL、下游引物1495R(5'－CTACGG CTACCTTGT TAC GA－3'(SEQ IDNO.3))1μL，2×Taq plus Buffer 12.5μL、模板DNA 1μL，用无菌ddH₂O将体系补足至25μL。并以无菌超纯水替代模板DNA作为阴性对照。扩增条件为：94℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃1min，共29个循环，最后72℃延伸5min。

然后取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，琼脂糖浓度为1.2％，电泳条件为110V，45min。凝胶检测结果见图3，以无菌超纯水作为阴性对照的泳道无条带，表明PCR扩增过程中未受到污染。1-15泳道特异性扩增片段长度约为1500bp，符合预期扩增片段长度。

将检测成功的PCR产物送往北京擎科生物技术有限公司进行测序，测序结果如SEQID NO.1所示。

测序成功的序列使用NCBI中的BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)程序进行比对分析。如表1所示，15株乳酸菌中植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)8株，发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)6株，乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)1株，且它们与Gene Bank数据库中已知乳酸菌的同源性均达99％以上。该菌株命名为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.Lactis)HFY14，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16647，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2018年10月29日。

表1 15株菌的16S rDNA序列分析结果

5.乳酸菌体外抗性筛选

5.1乳酸菌耐受0.3％胆盐的能力

在MRS-THIO培养基(含0.2％巯基乙酸钠的MRS肉汤)中添加猪胆盐使其浓度为0.3％，121℃灭菌15min，将活化好的5mL菌种以2％(v/v)的接种量分别接入不含胆盐(0.0％)的MRS-THIO培养基和含0.3％胆盐的MRS-THIO培养基中，以空白培养基(未接菌的MRS-THIO培养基)为对照，37℃培养24h后，分别测定上述不同浓度培养基的OD_600nm值，按公式(1)计算菌株对胆盐的耐受力：

5.2人工胃液耐受性试验

人工胃液的配制：人工胃液由0.2％NaCl和0.35％胃蛋白酶组成，按照对应的质量体积比分别称取试验所需NaCl和胃蛋白酶进行配制，用1mol/L的HCl将配制好的人工胃液pH调整为3.0，再用0.22μm的滤膜过滤除菌备用。

在超净工作台中吸取5mL培养好的含菌培养基于10mL无菌离心管中，经4000r/min离心10min，弃去上层培养基并收集菌体，加入等体积(5mL)无菌生理盐水混匀制成菌悬液，然后取1mL菌悬液与9mL pH 3.0的人工胃液混匀，此时取1mL上述混合液作为人工胃液处理0h的样品，剩余9mL混合液置于恒温水浴摇床(37℃，150r/min)中培养3h。0h和3h的样品分别经10倍梯度稀释，选择合适梯度采用平板涂布的方法测定活菌数，在MRS固体培养基上37℃培养48h，按公式(2)计算存活率(％)。

乳酸杆菌体外抗性结果见表2，由表2可知，有1株乳酸菌在pH 3.0人工胃液中的存活率超过了90％，4株存活率达80％多，3株存活率达60％多；15株乳酸菌在0.3％胆盐均能生长，其中HFY04和HFY09的生长效率均较高，分别达到了83.45％和67.76％，表明这两株菌具有较强的耐受胆盐能力。

表2 15株乳酸菌在pH 3.0人工胃液及0.3％胆盐中的存活率

实施例2动物实验验证

1.材料与试剂

六周龄的SPF级C57BL/J6小鼠，雌雄各半，共计50只，体重为23±2g，购于重庆恩斯维尔生物科技有限公司。本研究中的实验经重庆市功能性食品协同创新中动物实验伦理委员会批准，批准号为2021050008B。

质量分数≥98％的降植烷(美国Sigma公司)；质量分数≥97％泼尼松(≥97％)(北京百灵威科技有限公司)；白介素2(IL-2)、IL-12、干扰素γ(IFN-γ)、免疫球蛋白G(IgG)、转化生长因子-β(TGF-β)ELISA试剂盒(武汉赛培生物科技有限公司)；血清肌酐(SCr)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)测定试剂盒(武汉赛培生物科技有限公司)；TRIzol试剂、SYBR Green PCR Mastermix、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；qPCR上下游引物、一抗、二抗(美国Thermo FisherScientific公司)；其余试剂为国药集团化学试剂有限公司分析纯试剂。

2.仪器与设备

BX43显微镜(日本奥林巴斯公司)；UV-2600i紫外可见分光光度计、StoponePlus定量PCR仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；5500Multi化学发光凝胶成像系统(上海天能科技有限公司)。

3.试验方法

以下结果均为统计学分析结果，具体为对待检测的指标进行三次的平行测定，得到的实验结果以平均值进行表示，结果同时显示标准偏差(平均值±标准偏差)。然后使用单因素方差分析方法对所测指标值是否在P<0.05上具有显著性差异进行分析。

3.1动物实验

C57BL/J6小鼠在控温(20±1℃)控湿(30％～40％)环境下适应性喂养1周。实验小鼠被随机分为正常组、模型组、HFY14低浓度作用(HFY14-L或LLSLHFY14-L)组、HFY14高浓度作用(HFY14-H或LLSLHFY14-H)组和泼尼松组(药物阳性组)，每组10只小鼠，雌雄各半。适应性喂养结束后对正常组小鼠实施腹腔注射0.5mL的生理盐水溶液，同时对其余各组小鼠实施腹腔注射0.5mL降植烷。注射降植烷后第2天开始，HFY14-L和HFY14-H组小鼠每日按10⁸和10⁹CFU/kg剂量灌胃HFY14活菌溶液0.2ml，泼尼松组小鼠每日按10mg/kg剂量灌胃泼尼松溶液0.2ml，正常组和模型组小鼠每日灌胃0.2mL的蒸馏水，各组灌胃样品12周。12周后采用毛细管眼眶取血对小鼠实施采血，然后断颈处死小鼠并称重，解剖小鼠取内脏待用。

3.2小鼠免疫器官指数

胸腺和脾脏是机体免疫系统的重要器官，免疫性疾病发病小鼠的胸腺和脾脏指数都会出现显著的下降，解剖小鼠取出小鼠的胸腺器官和脾脏器官称重，对胸腺器官和脾脏器官进行器官指数计算，计算公式为：

小鼠的胸腺和脾脏器官指结果见图4，正常组小鼠胸腺和脾脏器官指数最高，模型组小器官指数最低。相比模型组小鼠，HFY14-L、HFY14-H和泼尼松均能够使胸腺和脾脏器官指数提高，HFY14-H和泼尼松提高的程度高于HFY14-L。HFY14和泼尼松干预后狼疮性肾炎小鼠因免疫失调得到抑制使胸腺和脾脏指数开始提高，特别是HFY14-H的效果接近药物泼尼松的作用，使器官指数趋于正常状态。

3.3血清中IL-2、IL-12、IFN-γ、TGF-β和IgG细胞因子测定

将采血收集到的小鼠血液在4℃下进行离心分离(1500rpm、10min)，分离得到上层血清，然后按ELISA试剂盒的方法对血清IL-2、IL-12、IFN-γ、IgG和TGF-β细胞因子水平进行测定，测定结果见图5。

诱导狼疮性肾炎的模型组小鼠血清中的IL-2和IL-12细胞因子水平最低(P<0.05)，而IFN-γ、TGF-β和IgG水平最高。HFY14能够使狼疮性肾炎小鼠血清中的IL-2、IL-12水平升高和使TGF-β、IFN-γ、IgG水平降低，且效果呈现计量依赖性，高浓度的HFY14(HFY14-H)效果接近药物泼尼松，能使以上的血清水平趋于正常组水平。

3.4血清中SCr、BUN、TC、TG、TP和ALB指标测定

以3.3中的方法分离出小鼠血清，按测定试剂盒方法对小鼠血清的SCr、BUN、TC、TG和ALB水平进行测定，测定结果见图6。

正常组小鼠血清中TP和ALB水平最高，模型组小鼠的TP和ALB水平最低(图6)。而正常组小鼠血清中的SCr、BUN、TC和TG水平最低，模型组小鼠血清中以上水平最高。HFY14-H组小鼠血清中的TP和ALB水平高于正常组和泼尼松组，低于模型组和LLSLHFY14-L组；而HFY14-H组的SCr、BUN、TC和TG水平低于正常组和泼尼松组，高于模型组和HFY14-L组。

3.5抗dsDNA抗体测定

注射降植烷后第2天开始每两周采用眼眶取血法对小鼠进行采血，以3.3方法分离出小鼠血清，采用微滴度板和间接免疫荧光试验对抗dsDNA抗体进行检测，测得的降植烷作用后第2、4、6、8、10和12周狼疮性肾炎小鼠血清的dsDNA阳性率结果见表3。

表3狼疮性肾炎小鼠血清的dsDNA阳性率

采血第4周开始，模型组所有小鼠均呈阳性，提示狼疮性肾炎动物模型诱导成功(表3)。HFY14和泼尼松抑制了小鼠狼疮性肾炎的阳性率，其中HFY14-H和泼尼松能够使阳性率更低。实验结果提示HFY14和泼尼松干预了小鼠狼疮性肾的发病可能，高浓度的HFY14接近泼尼松的效果。

3.6组织切片观察

解剖小鼠取出小鼠的右肾，然后用质量分数为10％的福尔马林进行固定。48h脱水处理后，用石蜡包埋肾脏组织，再将包埋的组织进行切片，最后用H&E染料对切片染色后用显微镜观察组织的病理学变化(图7)。显微镜下观察到正常组小鼠肾组织中细胞结构完整且肾小球形态正常，但是观察模型组小鼠发现肾组织中的肾小球出现包括破裂等形态的变化，同时肾脏细胞间还出现炎性浸润，总体呈现出严重的肾组织病变。泼尼松可以明显的减轻肾脏组织的病变，高浓度的HFY14(HFY14-H)也能够起到与泼尼松接近的效果。

3.7小鼠肾脏中IL-4、TGF-β和IL-1β的mRNA和蛋白表达

取0.1g小鼠的左肾组织，然后加入0.9mL生理盐水，接着进行匀浆。然后加入1.0mL的RNAzol对组织中的RNA进行提取。对RNA提取液的OD_260nm/OD_280nm进行测定，然后计算提取的RNA纯度和浓度，再将RNA提取液的浓度调整为1μg/μL后进行反转录得到cDNA。接着将1μL的cDNA、10μL的SYBR Green PCR Master Mix、7μL的无菌蒸馏水、1μL的上游引物和1μL的下游引物进行混合。最后得到的混合反应液定量PCR仪中进行反应(40个循环：95℃、60s；95℃、15s；然后55℃、30s；72℃、35s；95℃、30s；55℃、35s)，反应后用2^-ΔΔCt法对相关基因进行计算和定量分析，以β-actin作为内参进行实验，实验中用到的引物序列见表4。

表4实验中使用的引物序列

取0.5g小鼠的左肾组织加入1mL的RIPA和10μL的PMSF进行裂解，然后在4℃下离心分离(12000rpm、4min)用以除去中间蛋白层溶液，然后用BCA蛋白定量试剂盒对蛋白进行定量并将蛋白稀释到50μg/mL。按体积比为4:1的比例将稀释的蛋白液与缓冲液混合后在100℃下保温5min，接着将混合液加入预制胶中进行垂直凝胶电泳，持续50min后开始PVDF转膜。转膜完成后用含5wt％脱脂牛乳(TBST为溶剂)对PVDF膜进行1h封闭，封闭完成后用TBST溶液洗膜。处理后的PVDF膜在25℃下浸泡在按体积比为1:500稀释的一抗下进行孵育2h，再在按体积比为1:1000稀释的二抗下进行孵育1h。最后用Supersignal West Pico PLUS对PVDF膜进行填充后置于成像系统中观察，见图9。

IL-4、TGF-β和IL-1β的相对mPNA表达强度见图8，蛋白质表达结果见图10，模型组小鼠肾组织中的IL-1β和TGF-βmRNA和蛋白表达最强，但IL-4的mRNA和蛋白表达最弱(P<0.05)，正常组小鼠肾组织的IL-4、TGF-β和IL-1β表达呈现出与模型组相反的趋势。相比模型组，HFY14能够上调狼疮性肾炎小鼠肾脏组织的IL-4的表达和下调IL-1β、TGF-β表达，且HFY14-H能够使狼疮性肾炎小鼠肾脏组织的IL-4、TGF-β和IL-1β接近泼尼松组小鼠。

以上试验表明HFY14的干预能够保持血清中免疫因子水平趋于正常水平，改善小鼠的免疫失调；调节肾功能异常后的异常血清水平，同时降低dsDNA抗体的阳性率，改善小鼠肾功能；同时HFY14能够显著控制小鼠肾脏中IL-4、TGF-β和IL-1β的mRNA和蛋白表达异常，最终通过提高机体免疫力发挥作用机理，从而改善狼疮性肾炎。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

序列表

<110> 重庆第二师范学院

<120> 乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14及其应用

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1404

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gcgccctcct tgcggttagg caacctactt cgggtactcc caactcccgt ggtgtgacgg 60

gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcggcgt gctgatccgc gattactagc 120

gattccgact tcatgtaggc gagttgcagc ctacaatccg aactgagaat ggttttaaga 180

gattagctaa acatcactgt ctcgcgactc gttgtaccat ccattgtagc acgtgtgtag 240

cccaggtcat aaggggcatg atgatttgac gtcatcccca ccttcctccg gtttatcacc 300

ggcagtctcg ttagagtgcc caacttaatg atggcaacta acaatagggg ttgcgctcgt 360

tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga caaccatgca ccacctgtat 420

cccgtgtccc gaaggaactt cctatctcta ggaatagcac gagtatgtca agacctggta 480

aggttcttcg cgttgcttcg aattaaacca catgctccac cgcttgtgcg ggcccccgtc 540

aattcctttg agtttcaacc ttgcggtcgt actccccagg cggagtgctt attgcgttag 600

ctgcgataca gagaacttat agctccctac atctagcact catcgtttac ggcgtggact 660

accagggtat ctaatcctgt ttgctcccca cgctttcgag cctcagtgtc agttacaggc 720

cagagagccg ctttcgccac cggtgttcct ccatatatct acgcatttca ccgctacaca 780

tggaattcca ctctcctctc ctgcactcaa gtctaccagt ttccaatgca tacaatggtt 840

gagccactgc cttttacacc agacttaata aaccacctgc gctcgcttta cgcccaataa 900

atccggacaa cgctcgggac ctacgtatta ccgcggctgc tggcacgtag ttagccgtcc 960

ctttctgggt agttaccgtc acttgatgag ctttccactc tcaccaacgt tcttctctac 1020

caacagagtt ttacgatccg aaaaccttct tcactcacgc ggcgttgctc ggtcagactt 1080

tcgtccattg ccgaagattc cctactgctg cctcccgtag gagtttgggc cgtgtctcag 1140

tcccaatgtg gccgatcacc ctctcaggtc ggctatgtat catcgccttg gtgagccttt 1200

acctcaccaa ctagctaata caacgcggga tcatctttga gtgatgcaat tgcatctttc 1260

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cccccgctca aaggcagatt ccccacgcgt tactcacccg ttcgctgctc atccagtcgg 1380

tacaagtacc aaccttcagc gctc 1404

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctacggctac cttgttacga 20

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gaaatgccac cttttgacag tg 22

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

tggatgctct catcaggaca g 21

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ggtctcaacc cccagctagt 20

<210> 7

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gccgatgatc tctctcaagt gat 23

<210> 8

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cttcaatacg tcagacattc ggg 23

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

gtaacgccag gaattgttgc ta 22

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

catgtacgtt gctatccagg c 21

<210> 11

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

ctccttaatg tcacgcacga t 21

Claims (9)

1.一种乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)HFY14，其已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.16647，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2018年10月29日。

2.一种根据权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14在制备预防和/或治疗狼疮性肾炎的药物中的应用。

3.一种根据权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14在制备改善肾功能的药物中的应用。

4.一种根据权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14在制备提高机体免疫力的药物中的应用。

5.一种药物，其特征在于，包括权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸亚种HFY14以及药学上可接受的辅料。

6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述药物用于提高免疫器官指数、保持血清中免疫因子的正常水平以及保持肾功能指标正常水平。

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物用于降低血清中dsDNA阳性率以及上调IL-4的表达和下调IL-1β、TGF-β的表达。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述免疫因子包括IL-2、IL-12、IFN-γ、TGF-β和IgG。

9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肾功能指标包括SCr、BUN、TC、TG、TP和ALB。

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