CN117099962A - 发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的新应用 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及食品微生物技术领域，具体公开了发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的新应用。本申请发现发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001具有抑制缺锌导致的血锌含量降低，提升发锌含量和免疫球蛋白G(IgG)含量的作用，可有效改善缺锌引起的厌食症状、体重下降以及肝组织损伤，为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001提供了一种新的用途。结合药物敏感性测试、溶血性测试、小鼠致病性测试表型试验测试结果以及毒力基因和耐药基因分析，从多维度证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001是一株安全的菌株。

Description

发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的新应用
技术领域
本申请涉及食品微生物技术领域，尤其是涉及一种发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的新应用。
背景技术
发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)，曾用名为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)，广泛存在于各种发酵食品中，可促进产品的风味更加独特。益生作用的研究主要集中在胆固醇的降解或消除能力、有害菌的抗菌能力、免疫调节、抗氧化能力等方面；亦有药敏性、溶血性以及细胞毒性等表型试验显示具有一定的安全性。
目前对于发酵粘液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)的研究仅停留在药敏性、溶血性、细胞毒性等表型试验结果上，未结合基因层面的耐药基因分析、毒力基因分析等综合判断其安全性。经研究，益生菌安全性与基因有很大关系，药敏性、溶血性和细胞毒性仅是从不同表型试验评价其安全性，未能全面体现菌株安全性，因此，现有发酵粘液乳杆菌的安全性研究不够充分。
锌为人体必需的微量元素之一，具有重要的生理功能，能够促进机体正常发育、维持正常食欲、增强机体免疫力、促进伤口和创伤的愈合等。人体缺锌会导致锌作用的生理功能难以充分发挥，严重时会出现生长发育迟缓、食欲不振、身体免疫功能下降等，给机体带来巨大伤害，锌在机体无法合成，只能依靠食物和膳食补充，在发生缺锌症状时，也多采用口服锌剂进行补充，治疗周期长达3-12个月，且在未补充至充足时，缺锌导致的损伤会一直存在。
目前多数研究往往侧重于极端锌缺乏(即膳食锌完全缺乏)，少有人知道中度缺锌(如通常由膳食锌摄入量不足引起的边缘缺锌)对机体的危害，以及如何改善边缘缺锌症状。边缘性锌营养缺乏也称临界性锌营养缺乏，它是指与正常供应相近的轻度的锌营养缺乏，锌缺乏初起无特异症状,不易被重视，不易被辨认，危害极大。
目前还未有研究发现发酵粘液乳杆菌在改善缺锌层面，尤其是边缘性缺锌的开发与研究。另外，益生菌的安全特性和益生特性在属种水平上都有差异，同种不同株的益生菌菌株，其安全性能和功效性能以及在作用机制上也存在差异，研究具新用途的益生菌仍是目前研究的难点。
发明内容
本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种发酵粘液乳杆菌在制备改善缺锌损伤食品中的应用。
为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：
第一方面，本申请提供了一种发酵粘液乳杆菌在制备改善缺锌损伤食品中的应用，所述发酵粘液乳杆菌为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，所述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001已于2022年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:62335。
本申请发现发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001具有抑制缺锌导致的血锌含量降低，提升发锌含量和免疫球蛋白G(IgG)含量的作用，可有效改善缺锌引起的厌食症状、体重下降以及肝组织损伤，为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001提供了一种新的用途。
将发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001置于MRS培养基中培养，37℃厌氧培养24h，菌落白色，圆形，表面湿润，不透明，边缘整齐；菌体呈杆状，0.7-0.8μm×0.9-2.6μm，单个或成对排列，革兰氏阳性。
结合药物敏感性测试、溶血性测试、小鼠致病性测试表型试验测试结果以及毒力基因和耐药基因分析可知，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001溶血反应为阴性，无致病性；对氨苄西林(AMP)、庆大霉素(GM)、卡那霉素(KM)、链霉素(SM)、红霉素(ERY)、克林霉素(CM)敏感，对四环素(TE)、氯霉素(CHL)有耐药性，但基因组分析未发现毒力基因和可转移耐药基因，是一株非常安全的菌株。并且发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001无质粒，无耐药性基因，可实现产业化，活菌数可达2000亿CFU/g。
作为本申请所述应用的优选实施方式，所述缺锌损伤包括边缘性缺锌损伤。
作为本申请所述应用的优选实施方式，所述缺锌损伤的症状包括血锌含量降低，毛发锌含量降低，免疫球蛋白G降低，厌食和体重下降。
作为本申请所述应用的优选实施方式，将所述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001制备成制剂，对缺锌损伤动物进行干预。
采用本申请的发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对缺锌动物进行干预，可以有效提高缺锌动物中血锌含量、发锌含量和免疫球蛋白G含量，进而发现该菌株具有改善缺锌损伤方向的新功能。
作为本申请所述应用的优选实施方式，所述干预的时间为7～31天。
作为本申请所述应用的优选实施方式，所述制剂是发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001进行发酵培养、离心浓缩、冻干粉碎制得。
作为本申请所述应用的优选实施方式，所述制剂中发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001活菌数至少为2×1011CFU/g。
第二方面，本申请提供了上述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001在制备提高血锌含量、发锌含量和免疫球蛋白G含量以及改善厌食和体重下降食品中的应用。
发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可以改善缺锌导致的血锌含量降低，提升发锌含量和免疫球蛋白G(IgG)含量，可有效改善缺锌引起的厌食症状、体重下降以及肝组织损伤。
作为本申请所述应用的优选实施方式，所述食品包括饮料、片剂、口服液、酸奶、发酵果冻。
第三方面，本申请提供了一种改善缺锌损伤的食品，所述食品包括发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，所述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001已于2022年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:62335；所述缺锌损伤疾病包括厌食或肝损伤。
与现有技术相比，本申请具有以下有益效果：
本申请提供了一种发酵粘液乳杆菌在制备改善缺锌损伤食品中的应用，本申请发现发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001具有抑制缺锌导致的血锌含量降低，提升发锌含量和免疫球蛋白G(IgG)含量的作用，可有效改善缺锌引起的厌食症状、体重下降以及肝组织损伤，为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001提供了一种新的用途。结合药物敏感性测试、溶血性测试、小鼠致病性测试表型试验测试结果以及毒力基因和耐药基因分析，从多维度证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001是一株安全的菌株。
附图说明
图1为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001宏观形态图；
图2为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001微观形态图；
图3为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001生理生化特征结果图；
图4为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001与其他菌株的序列比对结果图；
图5为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001与相关种的16S rDNA序列系统发育树；
图6为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001基因组圈图；
图7为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001溶血性测试图；
图8为实施例4中各组SD大鼠血锌含量结果图；
图9为实施例4中各组SD大鼠毛发锌含量结果图；
图10为实施例4中各组SD大鼠每周摄食量结果图；
图11为实施例4中各组SD大鼠总摄食量结果图；
图12为实施例4中各组SD大鼠体重增重量结果图；
图13为实施例4中各组SD大鼠IgG含量结果图；
图14为实施例4中正常组大鼠肝组织病理变化光镜观察结果(HE，100×)；
图15为实施例4中模型组大鼠肝组织病理变化光镜观察结果(HE，100×)；
图16为实施例4中实验组大鼠肝组织病理变化光镜观察结果(HE，100×)。
具体实施方式
为更好的说明本申请的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本申请作进一步说明。
在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的保藏信息
本实施例提供了一种发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，其于2022年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:62335，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所。发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001记载于专利CN116173078A中。
实施例2、发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的性能研究
1、菌种鉴定：
按照《FMIC-QO01-001-2015微生物学检测细菌多相鉴定检测方法》对发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001进行鉴定。
1)形态学观察：
将发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001置于MRS培养基中培养，37℃厌氧培养24h，菌落白色，圆形，表面湿润，不透明，边缘整齐，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001宏观形态如图1所示；菌体呈杆状，0.7-0.8μm×0.9-2.6μm，单个或成对排列，革兰氏阳性，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001微观形态如图2所示。
2)生理生化鉴定，通过评价不同碳源培养基中的生长情况，辅助鉴定菌种，结果如图3所示；
3)通过细菌16s rDNA基因序列测序，进行菌种鉴定。
①序列分析：发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
②序列比对：与以NCBI数据库为基础的专业数据库(Update 2021.08.23)进行序列比对，结果如图4所示。
③系统发育学分析：采用MEGA软件，邻位连接法构建系统发育树，进行1000次的相似度重复计算，具体分析结果见图5，图中发育树节点只显示Bootsrap值大于50％数值，上标的“T”表示模式菌株，。
综合形态学特征、生理生化特性、16S rDNA分析，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001被鉴定为发酵粘液乳杆菌，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2、全基因组测序：结合二代+三代高通量基因测序技术，检测发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的全基因序列及绘制全基因组图谱。
将冷冻保存的发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001接种至MRS培养基中，37℃培养24h，传代2次后，取对数生长末期的菌体培养物置于无菌EP离心管内离心，经8000rpm离心5min(4℃)后收集菌体，弃上清，液氮速冻，待菌体冻透，邮寄至检测机构开展二代和三代基因测序。
通过二代+三代全基因组测序对发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001进行测序，二代采用DNBSEQ测序平台，三代采用Nanopore测序平台，完成全基因组完成图组装。结果显示，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001基因组DNA为环状，无质粒，基因组大小为2.07Mb，GC含量为51.67％，共检测到15个核糖体RNA(rRNA)基因、56个转运RNA(tRNA)和2049个编码序列(CDS)，全基因组图谱见图6。
3、发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001表型以及基因组安全性评价
1)发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001药物敏感性测试：
按照《EFSA 5206Guidance on the characterization of miroorganisms usedas feed additives or as production or ganisms-2.2》测试发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001药敏性，测试结果表1。
如表1所示，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对氨苄西林(AMP)、庆大霉素(GM)、卡那霉素(KM)、链霉素(SM)、红霉素(ERY)、克林霉素(CM)敏感，对四环素(TE)、氯霉素(CHL)有耐药性，具体结果见表1。
表1发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001 MIC值及药敏性测试结果
抗菌药物 MIC值(μg/ML) 药敏性
氨苄西林(AMP) 0.19 敏感
庆大霉素(GM) 0.19 敏感
卡那霉素(KM) 12 敏感
链霉素(SM) 6 敏感
红霉素(ERY) 0.016 敏感
克林霉素(CM) 0.064 敏感
四环素(TE) 16 耐药
氯霉素(CHL) 8 耐药
2)发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001溶血性测试：
按照《SH-QO01-008-2019微生物学检测微生物菌种溶血检测方法》测试发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的溶血性，溶血反应为阴性，具体结果见图7。
3)发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001小鼠致病性测试：
参考《保健食品原料用细菌致病性检验方法-保健食品原料用菌种安全性检验与评价技术指导原则(2020年版)附录A》进行测试。
(1)小鼠细菌致病性试验(腹腔注射)试验结果见表2。
如表2所示，给两种性别的小鼠腹腔注射1次发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，每只小鼠注射菌量为1.03×107CFU/mL，在观察的21d期间，动物状态正常，无中毒体征和死亡等异常情况。
表2发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001小鼠细菌致病性(腹腔注射)试验结果
(2)小鼠细菌致病性(经口灌胃)试验结果见表3。如表3所示，给两种性别的小鼠灌胃3次发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，灌胃菌量分别为2.54×108CFU/mL与1.25×109CFU/mL，在观察的21d期间，动物状态正常，无中毒体征和死亡等异常情况。
表3发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001小鼠细菌致病性(经口灌胃)试验结果
小鼠细菌致病性试验结果表明，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对两种性别的小鼠经口灌胃与腹腔注射后观察的21d期间，对动物一般健康情况、体重均无不良影响，无中毒体征和死亡等异常情况，可判定该菌株无致病性。
4)发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001毒力基因和耐药基因分析：
将上述测得的全基因组序列与目前国内外主流的毒力基因数据库(VFDB)进行比对，分析基因组中的毒力基因。
发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001与毒力基因数据库序列比对结果见表4，与毒力基因DNA序列最高一致性(Identity)为71.7％，根据目前普遍采用的序列一致性高于85％作为潜在风险基因判断标准，没有符合标准的潜在毒力基因。因此，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001基因组不存在毒力基因。
表4发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001与毒力基因数据库序列比对结果
将全基因组序列与目前国内外主流的耐药基因数据库(包括CARD、ecoh、megares、plasmidfinder、ResFinder、Argannot、NCBI)中存储的序列进行比对，挖掘基因组中耐药基因，对比结果见表5。同时，为了明确耐药基因是否具有转移的风险，本申请人分析了耐药基因是否位于前噬菌体或染色体的转座子结构上。
表5发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001与数据库抗生素耐药性基因序列比对结果
(1)万古霉素耐药基因分析：
通过对发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001全基因组数据比对分析，基因组含有vanZ基因(GL001169)，vanZ基因的存在有助于增强万古霉素耐药性，但不是耐药表达必需的基因，位置处于染色体上(菌株不含质粒)，通过查找全基因组并未发现其它万古霉素耐药基因。据文献报道，乳杆菌属的一些菌对万古霉素表现出固有耐药性，这种耐药性是固有的、不可诱导的、不会发生转移。分析结果表明，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001菌株对万古霉素的耐药为固有耐药，不会通过质粒或转座子在不同菌株间进行传递，不存在转移风险。
(2)四环素耐药基因分析：
试验测试表明，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对四环素有一定抗性，但通过与抗生素抗性基因数据库进行比对，并未发现有四环素抗性基因。但发掘到两个磷霉素抗性基因(GL000228，GL001251)和一个林可霉素抗性基因，通过与nr数据库比对，三个基因产物都被注释为多重非特异性药物外排系统(MFS)，暗示它们可能参与了多种抗生素分子的外排。其中，GL000228注释为“Multidrug-efflux transporter,MFS”，与其最相似的蛋白为SJM46593.1(95.38％identity，82％coverage)。将SJM46593.1蛋白进行一轮PSI-BLAST，发现比对结果中有一个蛋白为Tetracycline resistance protein,class B(NRO16516.1，66.67％identity,91％coverage)，即四环素抗性蛋白TetB(属于外排泵)。表明GL000228基因编码的蛋白与TetB有同源性。将GL000228基因编码的蛋白与NRO16516.1比对，Identity为66.36％，coverage为90％。因此，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的四环素抗性可能来自于GL000228基因所编码的蛋白。
(3)其它耐药基因的转移风险分析：
为了探讨发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的基因组中的耐药基因(GL000957、GL000228、GL001251和GL001233)是否具有转移风险，本申请人基于文献中的移动遗传元件数据库，使用diamond软件(version：v2.0.15.153)的blastx比对，调查耐药基因上下游各5kb序列，发现上述基因的上下游没有转座子，或单侧有转座子，因此上述基因不在转座子上。此外，本申请人也将上述基因的上下游10kb的基因提取出来与NR库进行注释，依据注释信息，发现有三个基因的上下游没有转座子，或单边有转座子。只有GL001251基因上下游均有插入序列(insertion sequence；IS)，但其一致性小于40％，不符合复合转座子两臂IS组件相同或相似的特征，再次表明上述基因不在转座子上。同时，测试菌株基因组中不含质粒和前噬菌体序列等其他可移动元件，因此，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001基因组中的耐药基因不具备可转移的分子基础，没有转移风险。综上所述，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001菌株不存在可转移的耐药基因，没有耐药基因转移的风险。
结合药物敏感性测试、溶血性测试、小鼠致病性测试表型试验测试结果以及毒力基因和耐药基因分析可知，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001溶血反应为阴性，无致病性，虽对对四环素(TE)、氯霉素(CHL)有耐药性，但基因组分析未发现毒力基因和可转移耐药基因，综上，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001是一株安全的菌株，符合人体安全性需求。
实施例3、发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的菌粉制备
本实施例制备一种发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001的菌粉，具体步骤如下：
1、种子活化：使用MRS培养基配制体积为15mL的一级培养基、体积为500mL的二级培养基，调整pH(6.50±0.02)，121℃灭菌15min备用。
1)一级种子扩增：超净工作台内在酒精灯火焰旁将种子冻存管接种于1支装有15mL培养基的试管中。(37±1℃)条件下，需氧培养(24±0.5)h；培养24h观察菌体形态是否正常，测定其pH至(4.44±0.01)，OD600至(3.81±0.001)，扩增成功。
2)二级种子扩增：取一级种子液，确认试管中培养基由透明液体变为悬浊液且试管底部有沉淀积累，在超净工作台内酒精灯火焰旁将一级种子液10mL接种于装有500ml培养基的锥形瓶中，接种量2％(V/V)。(37±1)℃条件需氧下培养(24±0.5)h；培养24h观察菌体形态是否正常，测定其pH至(4.38±0.01)，OD600至(3.89±0.001)时，扩增成功。
2、发酵：
将二级种子液(400mL)接种至装有20L种子培养基的50L种子罐中。接种后，使用氨水调整初始pH至(6.50±0.02)，无菌空气保持罐压0.02～0.03MPa，设置搅拌转速100rpm/min，(37±0.2)℃需氧发酵10-12h，当种子液pH值至(4.50±0.05)、OD600至(8.09±0.01)时进行移种。
接种前对移种管道再进行灭菌(121℃，15min)，灭菌结束后温度降至(37±0.2)℃并恒温；按照接种量5％(V/V)通过压力差将所需的三级种子液移入发酵罐中完成接种，记录发酵罐内培养物总体积。
接种结束后加入氨水调整发酵液初始pH至(6.50±0.02)，无菌空气保压0.02～0.03MPa，设置搅拌速度100rpm/min，开始发酵。培养条件：培养温度(37±0.2)℃，使用氨水控制pH值恒定(5.50±0.02)。
发酵过程中，当发酵液OD600值达到(13.00±1.00)时，并且连续两个取样点OD(间隔1h)值差异不显著(p＜0.05)判断为发酵终点即发酵结束，发酵结束后通过冷却水对发酵罐内培养物进行降温并开始离心。
3、离心浓缩：
启动离心机，待离心机稳定运行3～5min后，物料进入离心机进行离心分离(转速14000rpm/min)。
4、干燥粉碎：
将离心浓缩的菌泥冷冻干燥，干燥后的菌粉粉碎至40目，即可获得发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001菌粉。生产完检测水分含量、水分活度和活菌数，结果见表6。
表6发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001菌粉生产结果
综上，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可开展产业化，为实现菌株用途提供了可行性。
实施例4、发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对缺锌动物的干预作用
为开发发酵粘液乳杆菌的新功能，本实施例研究发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对边缘性缺锌症状的干预作用。通过评价发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对缺锌SD大鼠的血锌、毛发锌含量、厌食症状和体重下降的改善作用，开发该菌株新的益生菌功能。
具体方案，包括以下步骤：
50g～60g SPF级21d鼠龄的刚断奶雄性SD大鼠24只(实验前均已称重并标号)，分别均分并设置正常对照组、模型组以及发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组(如表7)，每组8只，动物经适应性饲养7天后，正常对照组使用正常的含锌饲料进行喂养38d，每日1次，喂养同时灌胃生理盐水，灌胃量为10mL/kg(大鼠体重)；模型组使用低锌饲料进行喂养31d，随后采用缺锌饲料喂养7d，每日1次，喂养同时灌胃生理盐水，灌胃量为10mL/kg(大鼠体重)；发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组使用低锌饲料进行喂养31d，随后采用缺锌饲料喂养7d，每日1次，喂养同时灌胃发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001(7×108CFU/每只鼠)。所述正常含锌饲料、低锌饲料及缺锌饲料除锌含量不同外，其他成分完全相同；正常含锌饲料的锌含量为56mg/kg；低锌饲料的锌含量为10mg/kg；缺锌饲料的锌含量为3mg/kg，以上饲料均购置小黍有泰(北京)生物科技有限公司[许可证号：SCXK(京)2018-0006]。
表7实验SD大鼠分组情况
检测指标：摄食量，体重增重；第39天杀鼠，检测血锌含量、毛发锌含量、免疫球蛋白IgG含量以及肝组织。
结果如下：
1)血锌：如图8所示，与正常组相比(1.60mg/L)，模型组的血锌含量显著下降至1.15mg/L(p＜0.001)。与模型组相比，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组可显著抑制血锌含量降低(p＜0.001)，可恢复至1.65mg/L，接近正常组水平(P(正常组与实验组)＝0.301))，证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可抑制缺锌饮食带来的血锌含量降低。
2)毛发锌：
如图9所示，与正常组相比(161.41mg/kg)，模型组的毛发锌含量未出现下降(163.32mg/kg)。但相对于正常组和模型组，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组可显著提高毛发锌含量至187.38mg/kg(p＜0.001)。证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可增加毛发锌含量，说明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对缺锌引起的毛发锌含量降低有潜在的缓解作用。
3)摄食量：
如图10和图11所示，为期38天的喂养中，与正常组相比，模型组每周摄食量和总摄食量均显著降低。其中正常组总摄食量为882.63g/只，模型组总摄食量显著下降至703.49g/只(p＜0.001)。与模型组相比，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组可显著提高摄食量，总摄食量高达800.08g(p＜0.001)。证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001能显著改善SD大鼠缺锌引起的厌食现象。
4)体重增重量：
如图12所示，喂养38天后各组大鼠的体重增重量，与正常组相比(320.98g)，模型组的体重增重量显著下降(289.68g，p＜0.01)。相对于模型组，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组体重增重升高趋势明显，达304.15g，接近正常组(P(正常组与发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组)＝0.121)，证明该发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组可缓解缺锌引起的体重下降现象。
5)免疫球蛋白G(IgG)含量：
如图13所示，与正常组相比(0.67pg/ml)，模型组IgG含量出现下降现象(0.58pg/ml)。但相对于正常组和模型组，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组可显著提高IgG含量至1.3pg/ml(p＜0.001)。证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可增加IgG含量，说明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001对缺锌引起的免疫力降低有潜在的缓解作用。
6)对缺锌大鼠肝组织病理形态的影响：
如图14，正常组大鼠，肝脏结构正常，未见肝细胞变性、坏死，未见出血及炎性细胞浸润；如图15，模型组大鼠：肝脏可见肝细胞弥漫性水样变性甚至气球样变性；如图16，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001组肝细胞水肿程度有所缓解，证明发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可有效缓解缺锌导致的肝损伤。
综上，本申请的发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001具有抑制血锌含量降低，提升发锌含量和免疫球蛋白G(IgG)含量，可有效改善缺锌引起的厌食症状、体重下降以及肝组织损伤；结合药物敏感性测试、溶血性测试、小鼠致病性测试表型试验测试结果以及毒力基因和耐药基因分析可知，发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001溶血反应为阴性，无致病性，虽对四环素(TE)、氯霉素(CHL)有耐药性，但基因组分析未发现可转移耐药基因和毒力基因，是一株非常安全的菌株。并且本申请的发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001可实现产业化，菌粉活菌数不低于2000亿CFU/g。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本申请的技术方案而非对本申请保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本申请作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本申请的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本申请技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种发酵粘液乳杆菌在制备改善缺锌损伤食品中的应用，其特征在于，所述发酵粘液乳杆菌为发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，所述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001已于2022年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:62335。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述缺锌损伤包括边缘性缺锌损伤。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述缺锌损伤的症状包括血锌含量降低，毛发锌含量降低，免疫球蛋白G降低，厌食和体重下降。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，将所述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001制备成制剂，对缺锌损伤动物进行干预。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述干预的时间为7～31天。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述制剂是发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001进行发酵培养、离心浓缩、冻干粉碎制得。
7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述制剂中发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001活菌数至少为2×1011CFU/g。
8.如权利要求1所述的发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001在制备提高血锌含量、发锌含量和免疫球蛋白G含量以及改善厌食和体重下降食品中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述食品包括饮料、片剂、口服液、酸奶、发酵果冻、胶囊等。
10.一种改善缺锌损伤的食品，其特征在于，所述食品包括发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001，所述发酵粘液乳杆菌LFPerfectus001已于2022年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No:62335。
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