CN114574445A - 永生化狗干细胞或其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及永生化狗干细胞或其用途，具体地，涉及通过向狗干细胞转导包含人乳头瘤病毒的E6及E7基因的慢病毒载体并分化来得到的永生化狗干细胞及其用途。具体地，本发明的永生化狗干细胞通过向狗干细胞转导人乳头瘤病毒的E6及E7基因，可以在不反复采集干细胞的情况下，获得具有相同特性及功效的狗干细胞，上述永生化狗干细胞及作为上述干细胞的培养液的富含外泌体的培养液(ERCM)表现出抑制过敏反应引起的全身性休克反应、缓解特应性皮炎引起的瘙痒及抑制组氨的增加、改善类风湿关节炎的临床症状等优秀的效果，可以有效用于包括这些疾病在内的多种炎症性疾病的治疗中。
Description
技术领域
本发明涉及永生化狗干细胞或其用途，具体地，涉及通过向狗干 细胞转导包含人乳头瘤病毒的E6及E7基因的慢病毒载体并分化来得 到的永生化狗干细胞及其用途。
背景技术
近来，皮肤疾病在城市人群和宠物中的发病急剧增加。由此，不 仅是感染性皮肤病，由微尘等环境污染物质和干燥的气候、花粉、居 家地毯中栖息的螨虫等直接诱发接触性皮肤疾病，或者暴露于诱发免 疫过敏反应的多种过敏原(allergen)的倾向在增加。尤其是宠物，由 于在外面的土或草坪上打滚、相互追逐打闹、暴露于垃圾桶等环境污 染物质的机会多，因此经常发生皮肤炎。而且在宠物中，犬类的寿命 约为10年～15年，到了10岁以上的时候，会因感染病、皮肤炎、关 节炎、呼吸系统疾病等之类的炎症疾病而受痛苦。
关节炎分为退行性骨关节炎(osteoarthritis，OA)和类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis，RA)。骨关节炎是随着年龄的增长，关节软骨由 于负荷而退行性地磨损，从而使骨表面相互碰撞而诱发疼痛，骨头向 侧面生长而形成骨赘(osteophyte)而诱发运动障碍的疾病。相反地， 类风湿关节炎是炎症细胞向关节腔浸润，使炎症性滑膜(synovialmembrane)增生，形成关节翳(pannus)，从而诱发严重的肿胀和疼痛， 因关节头的变形及融合而诱发运动障碍。这样的炎症反应会扩大为侵 犯关节以外的其他器官的全身性慢性炎症性疾病。类风湿关节炎的病 因尚不明确，但据报道，类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病，遗传 及环境因素导致的免疫细胞的偏向性分化是其病因。
因此，为了治疗特应性皮炎或类风湿关节炎之类的炎症性疾病， 广泛使用作为一氧化氮合酶(NOS，nitric oxide synthase)抑制剂的皮 质类固醇(corticosteroids)和作为环氧化酶2(COX-II)抑制剂的非 甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatorydrug，NSAID)。但是，长 期使用皮质类固醇不仅效果会下降，还会引起抑制免疫功能的严重副 作用，而非甾体抗炎药虽然暂时缓解疼痛和炎症，但在根本性的治疗 中作用有限，还会引起胃溃疡等二次副作用。
另一方面，近来随着干细胞(stem cell)能够用于多种疾病的治疗 的潜在功能被认知，利用干细胞的多种治疗剂的开发正如火如荼地进 行着。然而，利用干细胞的细胞治疗剂具有须通过从患者身上反复采 集来增殖的难点。因此，若可以建立通过将一次采集的干细胞永生化 来继续使用的干细胞株(stem cell line)，就不用反复采集干细胞而节省手术费用，可以持续地保持干细胞的特性，可以解决反复培养时干细 胞的增殖能力下降的问题。
用于细胞移植的干细胞大体分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎 干细胞起源于内细胞(inner cell)，可以分化为体内的所有细胞，但能 够发展为肿瘤细胞，因此若要用于治疗剂还有很多技术问题要解决。 相反，成体干细胞可以在成熟的个体中获得，具有可以无肿瘤风险地 使用的优点。成体干细胞可以从骨髓、脐带血、脂肪组织等处获得。
发明内容
本发明的目的在于，提供永生化狗干细胞或上述狗干细胞的培养 液。
本发明的另一目的在于，提供永生化狗干细胞或上述狗干细胞的 培养液的用途。
为了实现上述目的，本发明提供转导有人乳头瘤病毒(HPV)的 E6及E7基因的永生化狗干细胞。
并且，本发明提供通过培养上述永生化狗干细胞来获得的富含外 泌体的培养液(exosome-rich conditioned medium，ERCM)。
并且，本发明提供用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学组合物， 包含选自由本发明的永生化狗干细胞及富含外泌体的培养液组成的组 中的一种以上作为有效成分。
并且，本发明提供饲料添加剂，包含选自由本发明的永生化狗干 细胞及富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上作为有效成分。
并且，本发明提供在除人类外的动物中预防、改善或治疗炎症性 疾病的方法，包括向除人类以外的动物给药选自由本发明的永生化狗 干细胞及富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上的步骤。
进而，本发明提供选自由本发明的永生化狗干细胞及富含外泌体 的培养液组成的组中的一种以上在制备用于预防或治疗炎症性疾病的 兽医学药剂中的用途。
本发明的永生化狗干细胞通过向狗干细胞转导人乳头瘤病毒的E6 及E7基因，可以在不反复采集干细胞的情况下，获得具有相同特性及 功效的狗干细胞，上述永生化狗干细胞及作为上述干细胞的培养液的 富含外泌体的培养液(ERCM)表现出抑制过敏反应引起的全身性休克 反应、缓解特应性皮炎引起的瘙痒及抑制组氨的增加、改善类风湿关 节炎的临床症状等优秀的效果，可以有效用于包括这些疾病在内的多 种炎症性疾病的治疗中。
本发明的永生化狗干细胞已于保藏日2020年11月26日以保藏编 号KCTC14389BP，生物材料分类命名：DC-im-cADMSC保藏于保藏地 址为韩国全罗北道井邑市Ipsin-gil181，邮编56212的韩国典型培养物 保藏中心。
附图说明
图1为示出为了狗干细胞的永生化而用来转导人乳头瘤病毒的E6 及E7的载体的示意图。
图2为示出永生化狗干细胞的方法的示意图。
图3为示出通过显微镜观察(A)，逆转录-聚合酶链式反应 (RT-PCR)(B)及荧光显色(C)的方法来确认永生化狗干细胞的结果的 图。
图4为示出在正常氧浓度和低氧浓度下培养永生化狗干细胞时的 存活率变化的曲线图。
图5为通过有关CD9指标的逆转录-聚合酶链式反应来确认正常的 培养液(CM)及富含外泌体的培养液(ERCM)内外泌体含量的结果。
图6为确认永生化硅狗干细胞对特应性皮炎引起的瘙痒症的抑制 效果的结果曲线图。
图7为确认永生化狗干细胞对特应性皮炎引起的血液内组氨增加 的抑制效果的结果曲线图。
图8为确认永生化狗干细胞对特应性皮炎引起的皮肤病变的缓解 效果的结果曲线图。
图9为通过肉眼确认永生化狗干细胞对类风湿关节炎引起的症状 的缓解效果的结果曲线图。
图10为确认永生化狗干细胞对类风湿关节炎引起的组织病理学 异常的缓解效果的结果曲线图。
图11为通过显微镜确认永生化狗干细胞对类风湿关节炎引起的关 节炎症状的缓解效果的结果曲线图。
具体实施方式
以下，详细说明本发明。
本发明提供转导有人乳头瘤病毒的E6及E7基因的永生化狗干细 胞。
在本说明书中使用的术语“干细胞”是未分化为特定细胞的细胞， 可以根据需要分化为神经、皮肤、血液、肌肉、骨、软骨等构成身体 的所有种类的细胞的能力的细胞。上述干细胞可以包括本技术领域中 公知的所有种类的干细胞，例如，可以为间充质干细胞。并且，上述 干细胞可以包括所有源自任意能够获得干细胞的组织中的干细胞。在 本发明的一实施例中，上述干细胞可以为源自脂肪的脂肪干细胞。
上述狗干细胞可以为通过转导人乳头瘤病毒的E6及E7基因而永 生化的。上述E6及E7基因可以包括本技术领域中公知的所有E6及 E7基因。具体地，上述E6及E7基因可以由编码分别由序列1及序列 3所示的氨基酸序列的碱基序列构成，更具体地，上述E6及E7基因可以分别由序列2及序列4所示的碱基序列构成。上述E6及E7基因 可以通过促进端粒酶逆转录酶(hTERT)的启动子及端粒酶(telomerase) 的激活来诱导狗干细胞的永生化。
上述E6及E7基因可以通过本技术领域中公知的方法向干细胞内 转导。具体地，上述转导可以通过使用常规方法将表达E6及E7基因 的表达载体向干细胞内导入来执行。上述转导可以通过普通技术人员 使用适当的方法来执行，可以根据需要使用变形的方法执行。在本发 明的一实施例中，上述E6及E7基因可以通过插入病毒载体来向干细 胞内转导。
例如，上述病毒载体可以为慢病毒载体或逆转录病毒载体。上述 慢病毒载体可以在细胞分裂时出现的核膜的分解(disintegration)过程 中将目标基因插入基因组中。另一方面，慢病毒载体可以主动地通过 核膜，因此不仅可以将目标基因插入分裂的细胞，还可以在非分裂的 细胞中转导目标基因。
上述病毒载体可以为目标基因的传递而准备为病毒粒子。除包含 目标基因的病毒载体以外，上述病毒粒子还可以包含生产重组病毒所 需的蛋白质。
本发明的永生化狗干细胞已于2020年11月26日以保藏编号 KCTC14389BP保藏于韩国典型培养物保藏中心。
并且，本发明提供通过培养上述永生化狗屁干细胞来获得的富含 外泌体的培养液。
在本说明书中使用的术语“外泌体(exosomes)”作为精巧的内 含核糖核酸(RNA)及蛋白质运输物质的小尺寸(30nm～150nm)的 小膜泡，是指从各种细胞分泌的膜结构的小囊体。
上述富含外泌体的培养液可以为通过培养具有如上所述的特征的 永生化狗干细胞来获得的培养液。可以通过本技术领域中公知的方法 培养永生化狗干细胞来获得上述培养液。例如，上述培养液可以利用 包含肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的培养基在低氧浓度下培养。可以由普 通技术人员添加适量的上述肿瘤坏死因子-α。另一方面，上述低氧浓度 可以为1％至5％的低氧浓度。
并且，本发明提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学组合 物，包含选自由本发明的永生化狗干细胞及富含外泌体的培养液组成 的组中的一种以上作为有效成分。
本发明的兽医学组合物所包含永生化狗干细胞及富含外泌体的培 养液可以具有如上所述特征。例如，上述永生化狗干细胞可以转导有 人乳头瘤病毒的E6及E7基因。并且，上述永生化狗干细胞可以为以 保藏编号KCTC14389BP保藏的干细胞。
另一方面，上述富含外泌体的培养液可以为培养本发明的永生化 狗干细胞的培养液。上述培养液可以利用包含肿瘤坏死因子-α的培养 基在低氧浓度下培养。
上述兽医学组合物可以为预防或治疗本技术领域中公知的除人类 以外的所有动物的炎症性疾病而使用。例如，上述兽医学组合物能够 以犬科动物为对象。
上述炎症性疾病可以包括出人类以外的哺乳动物发生的所有已知 的炎症性疾病。具体地，上述炎症性疾病可以包括特应性皮炎、皮肤 炎、脑炎、炎症性肠炎、慢性阻塞性肺疾病、败血症性休克、肺纤维 化、未分化脊柱关节炎、未分化关节病症、关节炎、炎症性骨溶解、 慢性病毒或细菌感染引起的慢性炎症疾病、结肠炎、炎症性肠病、1型 糖尿病、类风湿关节炎、应性关节炎(Reactive Arthritis)、骨关节炎、 退行性骨关节炎、银屑病、皮痹、骨质疏松症、动脉粥样硬化症、心 肌炎、心内膜炎、心包炎、囊肿性纤维化、桥本氏甲状腺病、格雷夫 斯病、麻风病、梅毒、莱姆病(Lyme)、包柔氏螺旋体病(Borreliosis)、 神经包柔氏螺旋体病、结核、结节病(Sarcoidosis)、狼疮、盘状狼疮、 冻疮样狼疮、狼疮性肾炎、系统性红斑狼疮、黄斑变性、葡萄膜炎、 肠易激综合征、克罗恩病、干燥综合征、纤维肌痛、慢性疲劳综合征、 慢性疲劳免疫不全综合征、肌痛性脑脊髓炎、肌萎缩侧索硬化、帕金 森病、多发性硬化症或过敏反应引起的全身性休克。在本发明的一实 施例中，上述炎症性疾病可以为特应性皮肤炎或类风湿关节炎或或过 敏反应引起的全身性休克。
本发明的用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学组合物可以根据使 用目的通过常规方法分别剂型化为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬 浮剂、乳液、糖浆、气雾剂等口服剂型以及灭菌注射溶液的形态等多 种形态来使用，可以通过包括口服给药或者静脉内、腹腔内、皮下、 直肠、局部给药等的多种途径给药。
本发明的兽医学组合物中可以包含的适当的载体、赋形剂及稀释 剂例如可以包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、 赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、 硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、 羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、矿物油等。
本发明的兽医学组合物还可以包含填充剂、抗凝剂、润滑剂、湿 润剂、香料、乳化剂、防腐剂等。
并且，本发明提供一种饲料添加剂，包含选自由本发明的永生化 狗干细胞及富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上作为有效成 分。
本发明的饲料添加剂所包含的永生化狗干细胞及富含外泌体的培 养液可以具有如上所述的特征。例如，上述永生化狗干细胞可以转导 有人乳头瘤病毒的E6及E7基因。并且，上述永生化狗干细胞可以为 以保藏编号KCTC14389BP保藏的干细胞。
另一方面，上述富含外泌体的培养液可以为培养本发明的永生化 狗干细胞的培养液。上述培养液可以利用包含肿瘤坏死因子-α的培养 基在低氧浓度下培养。
上述兽饲料添加剂可以为预防或治疗本技术领域中公知的除人类 以外的所有动物的炎症性疾病而使用。例如，上述除人类以外的动物 可以为犬科动物。例如，上述饲料添加剂可以具有抗炎活性。
上述饲料添加剂还可以包含单胃动物可接受的载体。具体地，上 述饲料添加剂可以直接包含本发明的永生化狗干细胞以及富含外泌体 的培养液，或者还可以在其中包含公知的载体、稳定剂等。并且，还 可以根据需要添加维生素、氨基酸类、矿物质之类的各种养分、抗氧 化剂及其他添加剂等。上述饲料添加剂可以制备为粉体、颗粒、丸剂、 悬浮液等之类的适当的形态。并且，上述饲料添加剂可以单独或与其 他饲料混合来提供。
并且，本发明提供在除人类外的动物中预防、改善或治疗炎症性 疾病的方法，包括向除人类以外的动物给药选自由本发明的永生化狗 干细胞及富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上的步骤。
在本发明的在除人类外的动物中预防、改善或治疗炎症性疾病的 方法中使用的永生化狗干细胞及富含外泌体的培养液具有如上所述的 特征。例如，上述永生化狗干细胞可以转导有人乳头瘤病毒的E6及 E7基因。并且，上述永生化狗干细胞可以为以保藏编号KCTC14389BP 保藏的干细胞。
另一方面，上述富含外泌体的培养液可以为培养本发明的永生化 狗干细胞的培养液。上述培养液可以利用包含肿瘤坏死因子-α的培养 基在低氧浓度下培养。
上述除人类之外的哺乳动物可以为犬科动物。
上述炎症性疾病可以具有如上所述的特征。
上述给药可以将本发明的永生化狗干细胞或富含外泌体的培养液 作为单独的治疗剂给药，或者与其他治疗剂并用来给药，可以与现有 的其他药剂依次或同时给药，可以给药一次或分为多次给药。考虑所 有上述要素后给药以无副作用为前提的以最小的量获取最大效果的量 至关重要，这可以很容易地通过普通技术人员决定。具体地，上述给 药的药学上有效量可以根据个体的年龄、性别、体重的不同而不同， 通常，干细胞能够以一千个～两亿个细胞的量，富含外泌体的培养液 能够以每千克体重1mg至50mg的量以每天或隔天的方式给药，也能 够以一天数次的方式给药。但上述给药量可根据给药途径、疾病的严 重程度、性别、体重、年龄等而增减，因此，不论以何种方法给药都 不能限制本发明的范围。
上述给药可以根据所要实现的目的方法来以口服或非口服的方式 给药。非口服给药可以包括腹腔内、直肠内、皮下、静脉、肌肉内或 胸部内注射方式。
进而，本发明提供选自由本发明的永生化狗干细胞及富含外泌体 的培养液组成的组中的一种以上在制备用于预防或治疗炎症性疾病的 兽医学药剂中的用途。
用在本发明的用途中的永生化狗干细胞及富含外泌体的培养液具 有如上所述的特征。例如，上述永生化狗干细胞可以转导有人乳头瘤 病毒的E6及E7基因。并且，上述永生化狗干细胞可以为以保藏编号 KCTC14389BP保藏的干细胞。
另一方面，上述富含外泌体的培养液可以为培养本发明的永生化 狗干细胞的培养液。上述培养液可以利用包含肿瘤坏死因子-α的培养 基在低氧浓度下培养。
上述兽医学药剂能够以除人类以外的动物为对象，具体地，能够 以犬科动物为对象。
上述炎症性疾病可以具有如上所述的特点。
以下，通过下述实施例详细说明本发明，但下述实施例仅用于例 示本发明，而不是要通过这些实施例限制本发明。任何具有与本发明 的发明要求保护范围中记载的技术思想实质上相同的结构并实现相同 的作用效果的都包括在本发明的技术范围内。
实施例1：狗干细胞的永生化
通过如下方式转导人乳头瘤病毒的E6及E7基因来诱导狗干细胞 的永生化。
1-1.E6及E7基因的导入
从年龄为2岁的健康的哈多利系博美犬种的狗采集脂肪组织，根 据已在参考文献中公开的方法分离及培养脂肪干细胞。另一方面，利 用图1所示的表达人乳头瘤病毒16的E6基因(序列2)及E7基因(序 列4)的慢病毒载体(abm公司，加拿大)，使用常规方法生产慢病毒。 将准备好的脂肪干细胞在60mm2的培养皿中培养至70％后，加入1ml 的培养基、2ml的慢病毒以及5μg/ml的聚凝胺(Sigma-Aldrich公司) 后继续培养。8小时后，去除培养液后，以与上述相同的条件再加入慢 病毒后再培养3天(图2)。培养结束后，去除该培养液，再加入普通 的培养基后来培养细胞从而制备了永生化狗干细胞。使用显微镜观察 制备的永生化狗干细胞的形态，结果如图3的(A)部分所示。
如图3的(A)部分所示，当与未导入E6及E7基因的细胞进行 比较时，在永生化狗干细胞中观察到细微的形态变化。具体地，确认 到永生化狗干细胞的细胞长度略短，由于细胞的分裂周期缩短，因此 生长速度变快。
1-2.确认狗干细胞的永生化-(1)
使用逆转录-聚合酶链式反应方法确认在实施例1-1中制备的永生 化狗干细胞的永生化。
具体地，将上述制备的永生化狗干细胞培养一周后，使用trizol (Thermo FisherScientific公司，美国)从培养的细胞中提取全部核糖 核酸。以2μg的核糖核酸为模板，使用Oligo dT引物及TOP scriptTM逆 转录酶合成互补脱氧核糖核酸(cDNA)。利用合成的互补脱氧核糖核 酸，使用下述表1所示的引物来执行逆转录-聚合酶链式反应，从而确 认人乳头瘤病毒的E6及E7基因的导入。在此情况下，逆转录-聚合酶 链式反应使用10μl的2×的酶混合物(enzyme mastermix)、10μl的 RNase-free蒸馏水、1μl的正向及反向引物以及1μl的用作模板的互补 脱氧核糖核酸的混合物，在下述表2所示的条件下进行。其结果，图3 的(B)部分示出确认E6及E7基因的表达的结果，将β-肌动蛋白 (β-actin)基因用作对照组。
表1
表2
如图3的(B)部分所示，在转导人乳头瘤病毒的E6及E7基因 的永生化狗干细胞中确认到上述基因的表达。
1-3.确认狗干细胞的永生化-(2)
通过免疫染色法确认实施例1-1中制备的永生化狗干细胞的永生 化。将上述制备的永生化够干细胞分株在4孔腔室载玻片(4well chamber slide)，在37℃及5％的CO2的条件下培养并稳定化。使用4％ 的多聚甲醛处理稳定化的细胞使其固定，加入0.25％的聚乙二醇辛基 苯基醚(Triton X-100)反应20分钟来增加其渗透性。之后，加入1％ 的牛血清白蛋白(BSA，bovine serum albumin)进行2小时的预处理后， 加入初级抗体在4℃的温度下反应过夜。使用磷酸盐缓冲溶液(PBS) 洗涤反应结束的细胞，使用二级抗体处理后，使用常规方法进行细胞 核染色。在此情况下，抗体使用下述表3所示的抗体。其结果，使用 荧光显微镜(Eclipse Ti-S，Nikon公司，东京，日本)以600倍的比例 观察的结果如图3的(C)部分所示。
表3
如图3的(C)部分所示，通过荧光显色确认到永生化的狗干细胞 中的人乳头瘤病毒的E6及E7蛋白质的表达。
实施例2：确认永生化狗干细胞的存活率
通过如下方式确认上述制备的永生化狗干细胞的存活率。
具体地，分别在正常氧浓度(20％)及低氧浓度(3％)下培养永 生化狗干细胞2天并以常规方法确认存活率的变化，其结果如图4所 示。在此情况下，将未导入E6及E7基因的狗脂肪干细胞用作对照组。
如图4所示，作为对照组细胞的非永生化干细胞在正常氧浓度下， 两天内增殖将近2倍(188％)，但在低氧浓度下大部分凋亡(17％)。 相反，永生化干细胞在正常氧浓度下增殖了2倍以上(225％)，显出 更快的增殖速度，在低氧浓度下，也显出152％的增殖率。因此，通过 上述内容确认到本发明的永生化狗干细胞在正常或低氧浓度下都显著 显出非常快的增殖率。
实施例3：分析永生化狗干细胞的培养液内的外泌体含量
通过如下方式确认了所制备的上述永生化狗干细胞的培养液内的 外泌体含量。
具体地，在21％的氧浓度下培养永生化狗干细胞，或者使用肿瘤 坏死因子-α处理后在3％的氧浓度下培养永生化狗干细胞。之后，取培 养液使用逆转录-聚合酶链式反应分析来确认了外泌体含量，其结果如 图5所示。
如图5所示，相比于在21％的正常氧浓度下培养永生化狗干细胞 的情况，在低氧浓度下使用肿瘤坏死因子-α处理并培养的情况(ERCM) 下，CD9的表达显著高。
由此确认，可以通过使用肿瘤坏死因子-α处理永生化狗干细胞来 制备富含外泌体的培养液。
实验例1：永生化狗干细胞的全身性休克抑制效果
通过如下方式确认上述制备的永生化狗干细胞是否显出对诱导过 敏反应的化合物48/80引起的全身性休克(active systemic anaphylaxis，ASA)的治疗效果。
具体地，将小鼠分为9个组，分别向腹腔内注射如表4所示的正 常的狗干细胞、永生化狗干细胞、正常培养液或富含外泌体的培养液。 注射30分钟后，向腹腔内注射致死量的化合物48/80(8mg/5ml/ kg)，在60分钟内确认了动物的死亡率。其结果，各组小鼠的死亡率 如下述表4所示。
表4
如表4所示，给药永生化狗干细胞或其富含外泌体的培养液的小 鼠的死亡率显著减少了。具体地，给药永生化狗干细胞的小鼠的死亡 率低于给药正常狗干细胞的小鼠，死亡率根据永生化狗干细胞的给药 量而依赖性地减少。尤其，相比于给药永生化狗干细胞，在给药富含 外泌体的培养液的情况下，表现出更优秀的效果。另一方面，在什么 都没给药的对照组中，给药化合物48/80后60分钟内所有的小鼠都 死亡了。
因此，通过上述结果确认到永生化狗干细胞与富含外泌体的培养 液可以有效用于过敏诱导的全身性休克的治疗。
实验例2：永生化狗干细胞的特应症治疗效果
通过瘙痒症抑制程度、血清组胺浓度以及皮肤组织观察确认了上 述制备的永生化狗干细胞的特应症治疗效果。
2-1.确认瘙痒症抑制
首先，将小鼠分为3×104个细胞(cells)的正常狗干细胞 (cADMSC)处理组、3×104个细胞的永生化狗干细胞(im-cADMSC) 处理组、100μl的正常培养液处理组、100μl的富含外泌体的培养液处 理组、化合物48/80(50μg/50μl/site)处理组以及无处理组等6个 组，分别以上述的方式皮下注射。之后，在30分钟之内确认挠痒的次 数，其结果如图6所示。
如图6所示，在化合物48/80处理组中，小鼠在30分钟内挠 痒78次，然而，在永生化狗干细胞处理组中显出28次的挠痒次数， 可知瘙痒症得到了缓解。这相比于正常狗干细胞处理组是显著的。另 一方面，还确认到富含外泌体的培养液处理组比正常培养液处理组具有更优秀的瘙痒症抑制效果。
2-2.确认组氨增加抑制
从上述实验例2-1的6个组的小鼠采集血液后，通过常规方法确 认血清组氨浓度，其结果如图7所示。
如图7所示，因给药化合物48/80而增加的血清组氨的浓度，通 过给药永生化狗干细胞而显著降低了。这比起给药正常狗干细胞的组 也更为优秀，富含外泌体的培养液也与正常培养液相比显出更显著的 效果。
2-3.观察皮肤组织
从上述实验例2-1的6个组的小鼠中采集皮肤组织后，通过常规 方法制备切片，对皮肤病变进行打分(scoring)的结果如图8所示。
如图8所示，因给药化合物48/80而诱发特应性皮肤炎的小鼠显 出非常严重的皮肤病变，这说明通过给药永生化狗干细胞得到缓解。 上述效果比起给药正常狗干细胞的组也更为优秀，富含外泌体的培养 液也与正常培养液相比显出更显著的效果。
因此，通过上述结果确认到本发明永生化狗干细胞及富含外泌体 的培养液可以有效用于特应性皮肤炎的治疗。
实验例3：永生化狗干细胞的类风湿关节炎治疗效果
使用永生化狗干细胞或富含外泌体的培养液处理诱发类风湿关节 炎的小鼠动物模型，通过肉眼或显微镜观察了类风湿关节炎的治疗效 果。
3-1.永生化狗干细胞的给药
向9周龄的雄性DBA 1J小鼠分两次给药牛II型胶原蛋白(bovine type IIcollagen)来诱发关节炎。具体地，混合等量的牛II型胶原蛋白 与弗氏完全佐剂(FCA，Freund′s complete adjuvant)制备200μl的乳化 液(200μg)，并向小鼠尾部根部皮内给药。给药21日后，以相同的 方法向与第一次给药部位稍微间隔的位置皮内给药100μl的乳化液 (200μg)。第二天，分别向小鼠的腹腔内注射1×105个细胞的永生化 狗干细胞、1×105个细胞的正常狗干细胞、100μl的正常培养液或100μl 的富含外泌体的培养液。
3-2.肉眼观察
在第二次给药牛II型胶原蛋白后的第21天开始，每隔两天直到第 45天，通过肉眼观察小鼠，或者通过关节炎指数(0分：正常；1分： 爪和足踝有局部的轻微红肿；2分：蔓延到爪和足踝以上的轻微红肿； 3分：蔓延到爪和足踝以上的中等红肿；4分：蔓延(或融合)到整个 腿部的严重红肿)来记录是否发生炎症以及症状的程度，通过合计四 肢的分数来评价了关节炎的程度。评价结果如图9所示。
如图9所示，在第一次给药牛II型胶原蛋白后的第23天，确认了 关节的浮肿，此后关节炎指数持续上升，1周后平均为2.7分，2周后 平均分约为4.2分，在最终的第45天达到约6.3分。尤其，在给药日 后的第35天，发现有小鼠在出现严重红肿症状同时伴有关节的变形及 因融合而导致的关节强直(ankylosis)。另一方面，给药永生化狗干细 胞的小鼠的关节炎指数明显降低，与给药牛II型胶原蛋白的对照组相 比，表现出50％～65％的抑制率。在最终的第45天也停留在平均2.8 分，未发现有严重的浮肿或关节强直的小鼠。上述效果比起给药正常 狗干细胞的组也更为优秀，富含外泌体的培养液也与正常培养液相比 显出更显著的效果。
3-3.显微镜观察
在第一次给药牛II型胶原蛋白的第45天解剖上述小鼠。具体地， 通过吸入乙醚麻醉小鼠后，从后腔静脉采集血液，切除后腿。使用10％ 的福尔马林溶液固定切除的后腿1周后，再将其进行1周的脱钙后， 使用常规方法制备组织切片。通过苏木精-伊红染色法(H&E)染色制 备组织切片。使用光学显微镜确认切片的组织病理学异常的结果如图 10所示，以关节炎指数(0分：无异常；1分：微弱的局部炎症细胞浸 润(＜20％)；2分：中等的炎症细胞浸润(20％-30％)；3分：严重 的炎症细胞浸润(30％-50％)，但未形成关节翳(pannus)；4分：严 重的炎症细胞浸润(＞50％)，形成关节翳)来对其程度进行打分的 结果如图11所示。
如图10所示，未做任何处理的无处理组的小鼠的关节在关节腔及 周围组织中没有任何炎症反应，关节的骨关节面也保持光滑的原形。 相反，在给药牛II型胶原蛋白的小鼠中，观察到关切腔内外严重的炎 症细胞浸润，同时观察到因形成关节翳而导致的关节骨的变形及融合。 但是，上述关节炎引起的症状通过永生化狗干细胞的处理而得到缓解。 具体地，处理永生化狗干细胞的小鼠的关节内外的炎症反应得到相当 程度的缓解，尤其是几乎没有关节头的变形。并且，只在一部分动物 中确认了局部的炎症，关节的整体结构基本都得以保存。这比起给药 正常狗干细胞的情况更为优秀，富含外泌体的培养液也与正常培养液 相比显出更显著的效果。
另一方面，如图11所示，在通过牛II型胶原蛋白诱发关节炎的组 中，关节炎指数评价结果为平均2.78分，而给药永生化狗干细胞的情 况下，炎症和关节变形大大缓解，分数确认为0.44分。这比给药正常 狗干细胞的情况(1.11分)更为优秀，富含外泌体的培养液也与正常 培养液相比显出更显著的效果。
因此，通过上述结果确认，本发明的永生化狗干细胞及富含外泌 体的培养液可以有效用于类风湿关节炎的治疗。
Claims (12)
1.一种永生化狗干细胞，其特征在于，转导有人乳头瘤病毒的E6及E7基因。
2.根据权利要求1所述的永生化狗干细胞，其特征在于，上述E6及E7基因分别由编码序列1及序列3所示的氨基酸序列的碱基序列构成。
3.根据权利要求1所述的永生化狗干细胞，其特征在于，上述干细胞为脂肪干细胞。
4.根据权利要求1所述的永生化狗干细胞，其特征在于，上述永生化狗干细胞以保藏编号KCTC14389BP保藏。
5.一种富含外泌体的培养液，其特征在于，通过培养权利要求1所述的永生化狗干细胞来获得。
6.根据权利要求5所述的富含外泌体的培养液，其特征在于，上述富含外泌体的培养液利用包含肿瘤坏死因子-α的培养基在低氧浓度下培养。
7.一种用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学组合物，其特征在于，包含选自由权利要求1所述的永生化狗干细胞及权利要求5所述的富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上作为有效成分。
8.根据权利要求7所述的用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学组合物，其特征在于，上述兽医学组合物以犬科动物为对象。
9.根据权利要求7所述的用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学组合物，其特征在于，上述炎症性疾病为特应性皮炎、皮肤炎、脑炎、炎症性肠炎、慢性阻塞性肺疾病、败血症性休克、肺纤维化、未分化脊柱关节炎、未分化关节病症、关节炎、炎症性骨溶解、慢性病毒或细菌感染引起的慢性炎症疾病、结肠炎、炎症性肠病、1型糖尿病、类风湿关节炎、反应性关节炎、骨关节炎、银屑病、皮痹、骨质疏松症、动脉粥样硬化症、心肌炎、心内膜炎、心包炎、囊肿性纤维化、桥本氏甲状腺病、格雷夫斯病、麻风病、梅毒、莱姆病、包柔氏螺旋体病、神经包柔氏螺旋体病、结核、结节病、狼疮、盘状狼疮、冻疮样狼疮、狼疮性肾炎、系统性红斑狼疮、黄斑变性、葡萄膜炎、肠易激综合征、克罗恩病、干燥综合征、纤维肌痛、慢性疲劳综合征、慢性疲劳免疫不全综合征、肌痛性脑脊髓炎、肌萎缩侧索硬化、帕金森病、多发性硬化症或过敏反应引起的全身性休克。
10.一种饲料添加剂，其特征在于，包含选自由权利要求1所述的永生化狗干细胞及权利要求5所述的富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上作为有效成分。
11.一种在除人类外的动物中预防、改善或治疗炎症性疾病的方法，其特征在于，包括向除人类以外的动物给药选自由权利要求1所述的永生化狗干细胞及权利要求5所述的富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上的步骤。
12.一种选自由权利要求1所述的永生化狗干细胞及权利要求5所述的富含外泌体的培养液组成的组中的一种以上在制备用于预防或治疗炎症性疾病的兽医学药剂中的用途。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1103615A1 (en) * | 1999-11-25 | 2001-05-30 | Universite De Geneve | Vectors capable of immortalizing non-dividing cells and cells immortalized with said vectors |
| US6458593B1 (en) * | 1999-01-21 | 2002-10-01 | Vitro Diagnostics, Inc. | Immortalized cell lines and methods of making the same |
| WO2003060108A1 (en) * | 2002-01-17 | 2003-07-24 | Københavns Universitet | A suprabasal breast cell line with stem cell properties |
| WO2009015628A1 (de) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Justus-Liebig-Universität Giessen | Immortalisierte keratinozyten-zelllinie und verfahren zur messung von protektiven mitteln |
| JP2010046019A (ja) * | 2008-08-21 | 2010-03-04 | Toyama Univ | ヒト羊膜由来間葉系細胞及びこれを用いた糖尿病治療薬 |
| WO2013147082A1 (ja) * | 2012-03-28 | 2013-10-03 | 株式会社クオリーメン | 不死化幹細胞及びその産生物を有効成分とする医薬組成物並びに医薬製剤 |
| US20140178422A1 (en) * | 2012-12-21 | 2014-06-26 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Primary mesenchymal stem cells as a vaccine platform |
| KR20160061945A (ko) * | 2016-05-18 | 2016-06-01 | (주)아이셀뱅크 | 아토피 피부염 개선, 주름 개선 및 미백활성을 갖는 불멸화 세포주 및 이의 용도 |
| WO2017078176A1 (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 株式会社Ｑｕａｒｒｙｍｅｎ＆Ｃｏ． | 不死化幹細胞、及びその作製方法 |
| KR20180131158A (ko) * | 2017-05-31 | 2018-12-10 | 충북대학교 산학협력단 | 줄기세포로부터 엑소좀 분비를 촉진시키는 방법 및 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물 |
| KR20190066885A (ko) * | 2017-12-06 | 2019-06-14 | 주식회사 디자인셀 | 줄기세포 유래 엑소좀 함유 배양액을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR20190098052A (ko) * | 2018-02-13 | 2019-08-21 | 주식회사 엑소코바이오 | 지방줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 궤양성 대장염의 개선 용도 |
| CN113563452A (zh) * | 2021-07-15 | 2021-10-29 | 北京戴域生物技术有限公司 | 一种生物活性肽及其与脂肪干细胞外泌体在皮肤增殖修复中的应用 |
| WO2022119060A1 (ko) * | 2020-12-02 | 2022-06-09 | 충북대학교 산학협력단 | 불멸화 개 줄기세포 또는 이의 용도 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016210730A (ja) * | 2015-05-08 | 2016-12-15 | 上田 実 | 医薬組成物及びその製造方法並びに医薬品 |
-
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Patent Citations (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6458593B1 (en) * | 1999-01-21 | 2002-10-01 | Vitro Diagnostics, Inc. | Immortalized cell lines and methods of making the same |
| EP1103615A1 (en) * | 1999-11-25 | 2001-05-30 | Universite De Geneve | Vectors capable of immortalizing non-dividing cells and cells immortalized with said vectors |
| WO2003060108A1 (en) * | 2002-01-17 | 2003-07-24 | Københavns Universitet | A suprabasal breast cell line with stem cell properties |
| WO2009015628A1 (de) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Justus-Liebig-Universität Giessen | Immortalisierte keratinozyten-zelllinie und verfahren zur messung von protektiven mitteln |
| JP2010046019A (ja) * | 2008-08-21 | 2010-03-04 | Toyama Univ | ヒト羊膜由来間葉系細胞及びこれを用いた糖尿病治療薬 |
| CN110079503A (zh) * | 2012-03-28 | 2019-08-02 | 石匠株式会社 | 永生化干细胞、其制备方法、及以其生成物为有效成分的药物组合物和药物制剂 |
| WO2013147082A1 (ja) * | 2012-03-28 | 2013-10-03 | 株式会社クオリーメン | 不死化幹細胞及びその産生物を有効成分とする医薬組成物並びに医薬製剤 |
| CN104321426A (zh) * | 2012-03-28 | 2015-01-28 | 石匠株式会社 | 永生化干细胞以及以其生成物为有效成分的药物组合物和药物制剂 |
| US20140178422A1 (en) * | 2012-12-21 | 2014-06-26 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Primary mesenchymal stem cells as a vaccine platform |
| WO2017078176A1 (ja) * | 2015-11-05 | 2017-05-11 | 株式会社Ｑｕａｒｒｙｍｅｎ＆Ｃｏ． | 不死化幹細胞、及びその作製方法 |
| CN108368501A (zh) * | 2015-11-05 | 2018-08-03 | 石匠株式会社 | 永生化干细胞及其制作方法 |
| KR20160061945A (ko) * | 2016-05-18 | 2016-06-01 | (주)아이셀뱅크 | 아토피 피부염 개선, 주름 개선 및 미백활성을 갖는 불멸화 세포주 및 이의 용도 |
| KR20180131158A (ko) * | 2017-05-31 | 2018-12-10 | 충북대학교 산학협력단 | 줄기세포로부터 엑소좀 분비를 촉진시키는 방법 및 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 기능성 화장료 조성물 |
| KR20190066885A (ko) * | 2017-12-06 | 2019-06-14 | 주식회사 디자인셀 | 줄기세포 유래 엑소좀 함유 배양액을 유효성분으로 포함하는 관절염의 예방 또는 치료용 조성물 |
| CN112601533A (zh) * | 2017-12-06 | 2021-04-02 | 设计细胞股份有限公司 | 将含有源自干细胞的外泌体的培养液作为有效成分包含的关节炎预防或治疗用组合物 |
| KR20190098052A (ko) * | 2018-02-13 | 2019-08-21 | 주식회사 엑소코바이오 | 지방줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 궤양성 대장염의 개선 용도 |
| WO2022119060A1 (ko) * | 2020-12-02 | 2022-06-09 | 충북대학교 산학협력단 | 불멸화 개 줄기세포 또는 이의 용도 |
| CN113563452A (zh) * | 2021-07-15 | 2021-10-29 | 北京戴域生物技术有限公司 | 一种生物活性肽及其与脂肪干细胞外泌体在皮肤增殖修复中的应用 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| JIA FANG等: "Immortalization of canine adipose-derived mesenchymal stem cells and their seminiferous tubule transplantation", J CELL BIOCHEM., vol. 119, pages 3663 * |
| KUKI MOTO, I .等: "Human papillomavirus type 1 6 K1 784 DNA, complete genome", GENEBANK DATABASE, pages 456608 * |
| YAMAGUCHI , M. 等: "Human papillomavirus type 1 6 SW064 genomic DNA, complete genome", GENEBANK DATABASE, pages 5111 * |
| 庄金秋;梅建国;王文秀;沈志强;: "细胞永生化技术及其应用研究进展", 生命科学研究, no. 04, pages 363 - 368 * |
| 甄蕾;刘宏伟;: "端粒、端粒酶与细胞永生化", 口腔颌面外科杂志, no. 04, pages 285 - 287 * |
| 蔡原;邓呈亮;: "脂肪干细胞无细胞提取液的治疗用途：皮肤老化、创面愈合、瘢痕恢复乃至神经再生", 中国组织工程研究, no. 13, 27 October 2020 (2020-10-27), pages 2097 - 2102 * |
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| Publication number | Publication date |
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