CN113874363A - 蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本文提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐，其用于治疗过增殖疾病。本文公开使用式I化合物或其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐在哺乳动物细胞中进行所述障碍或有关病理学病症的体外、原位和体内诊断、预防或治疗的方法。

Description

蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂
发明背景
技术领域
本发明涉及抑制SHP2和用于治疗过增殖和肿瘤病的化合物。本发 明还涉及用本发明化合物治疗癌症或过增殖疾病的方法。
背景技术
SHP2是蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP)，其含有PTPN11基因编码的 Src同源性2(SH2)区域。SHP2有助于包括增殖、分化、细胞循环维持 和移行的多种细胞功能。SHP2对于Ras/ERK1/2途径的完全活化是必需 的，所述途径是一系列受体酪氨酸激酶类和其它信号换能器下游的癌生 物学关键信号转导级联。SHP2还已显示促进也与各种人类癌症有关的PI3K/AKT，JAK/STAT，JNK和NF-κB信号转导。SHP2是癌蛋白。 参见Frankson,Rochelle,etal."Therapeutic Targeting of Oncogenic Tyrosine Phosphatases."CancerResearch.Vol.77,No.21(2017):pp. 5701-5705。Fedele,Carmine,et al."SHP2Inhibition Prevents Adaptive Resistance to MEK inhibitors in Multiple CancerModels."Cancer Discovery.Vol.8,No.10(2018):pp.1237-49。Nichols,Robert J.,etal. "Efficacy of SHP2 phosphatase inhibition in cancers with nucleotide-cycling oncogenic RAS,RAS-GTP dependent oncogenic BRAF and NF1 loss."bioRxiv188730；doi: https://doi.org/10.1101/188730。
因此，SHP2的小分子抑制剂可以用于治疗广谱的癌症比如黑色素 瘤，幼年型单核细胞性白血病，成神经细胞瘤，费城染色体阳性慢性髓 性，费城染色体阳性急性成淋巴细胞白血病，急性髓性白血病，骨髓增 殖瘤(比如真性红细胞增多症，原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维 化)，乳腺癌，肺癌，肝癌，结直肠癌，食管癌，胃癌，头颈鳞状细胞癌， 成胶质细胞瘤，间变性大细胞淋巴瘤，甲状腺癌，斯皮茨样瘤，以及神 经纤维瘤病和努南综合征。
SHP2抑制剂是已知的，参见例如WO 2015/107493；WO 2015/107494；WO 2015/107495；WO 2016/203404；WO 2016/203405； WO 2016/203406；WO 2017/210134；WO 2017/211303；WO 2017/216706；WO 2018/013597；WO 2018/057884；WO 2018/081091； WO 2018/136264；WO 2018/136265；WO 2018/172984；和WO 2019/051469。然而，众所周知将化合物开发为获得批准的药物是困难的。 DiMasi,Joseph A."Success rates for new drugsentering clinical testing in the United States."Clinical Pharmacology&Therapeutics.Vol.58,no. 1(1995):pp.1-14。Scannell,JW,Bosley J."When QualityBeats Quantity:Decision Theory,Drug Discovery,and the ReproducibilityCrisis."PloS ONE 11(2)(2016):e0147215.doi: 10.1371/journal.pone.0147215。
发明概要
一直需要能够用于癌症和过增殖病况的新治疗剂。关键是设计和开 发新药物化合物。
更特别地，一个方面提供式I化合物：
Figure BDA0003355983310000021
或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中L1，R1， R2和R3如本文定义。
又一方面提供通过向有需要的患者给予治疗有效量的式I化合物 或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐用于治疗过增殖障碍 的方法。所述化合物能够单独给予或与至少一种其它抗过增殖或化疗药 物化合物共同给予。
又一方面提供在细胞中抑制SHP2蛋白质酪氨酸磷酸酶活性的方 法，包括以有效减弱或消除SHP2激酶活性的量用式I化合物或其立体 异构体、互变异构体或药学上可接受的盐处理细胞。
又一方面提供治疗或预防受SHP2调节的疾病或障碍的方法，包括 向需要所述治疗的哺乳动物给予有效量的式I化合物或其立体异构体、 互变异构体或药学上可接受的盐。所述疾病和障碍的实例包括但不限于 过增殖障碍比如癌症。
又一方面提供治疗或预防癌症的方法，包括向需要所述治疗的哺乳 动物单独给予或者与一种或多种具有抗癌特性的额外化合物组合给予有 效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
又一方面提供在哺乳动物中治疗过增殖疾病的方法，包括向哺乳动 物给予治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上 可接受的盐。
又一方面提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可 接受的盐制备药物的用途，所述药物用于治疗过增殖疾病。
又一方面提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可 接受的盐，用于治疗过增殖疾病。
又一方面提供药物组合物，其包含式I化合物或其立体异构体、互 变异构体或药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形 剂。
又一方面提供制备式I化合物的中间体。各式的某些化合物可以用 作该式的其它化合物的中间体。
又一方面包括本文描述的化合物的制备工艺，分离方法和纯化方 法。
发明详述
现将详细描述一些实施方式，其实例在所附的结构和式中说明。虽 然将描述枚举的实施方式，但将理解它们并不期望将本发明限制为那些 实施方式。相反地，本发明期望涵盖本发明范围内可以包括的全部备择、 变型和等价物，所述范围由权利要求定义。本领域技术人员将认识到与 本文描述的那些相似或等价的许多方法和物质，其能用于本发明的实践 中。本发明并不以任何方式局限于所描述的方法和物质。如果一个或多 个所并入的文献和相似材料与本申请不同或矛盾(包括但不限于所定义 的术语、术语用法、所描述的技术等)，则以本申请为准。
定义
短语"一个"或"一种"实体如本文所用是指一个或多个该实体；例 如，化合物是指一个或多个化合物或至少一种化合物。如此，术语"一 个"(或"一种")，"一个或多个"，和"至少一种"能够在本文中可互换地 使用。
短语"如本文定义"是指在发明详述或最宽权利要求中提供的各基 团的最宽定义。在下文提供的全部其它实施方式中，能够出现在各实施 方式中且并未明确定义的取代基保留发明详述中提供的最宽定义。
如本说明书使用，无论是在限制性用语还是在权利要求主体中，术 语"包含"和"包括"都理解为具有开放式含义。也即，该术语理解为与短 语"具有至少"或"包括至少"同义。在方法上下文中使用时，术语"包括" 意指该方法包括至少所描述的步骤，但是可以包括额外步骤。在化合物 或组合物上下文中使用时，术语"包含"意指该化合物或组合物包括至少 所描述的特征或组分，但是还可以包括额外的特征或组分。额外地，措 辞"包括"、"包涵"和"涵盖"在用于本说明书中和下述权利要求中时期望 指定所述特征、整数、组分或步骤的存在，但是它们并不阻止存在或加 入一个或多个其它特征、整数、组分、步骤或其组。
术语"独立地"在本文用来指出变量适用于任一情况，无论在相同 化合物中存在或不存在具有相同或不同定义的变量。从而，在R"出现两 次且定义为"独立地碳或氮"的化合物中，两个R"能够是碳，两个R"能 够是氮，或一个R"能够是碳而另一个是氮。
在任何变量(例如R1，R4a，Ar，X1或Het)在描绘和描述本发明中 使用或要求保护的化合物的任何部分或式中出现多于一次的情况下，其 定义的各具体值独立于其定义的每一个其它具体值。另外，取代基和/ 或变量的组合是可允许的条件是所述组合引起稳定的化合物。
术语"任选的"或"任选地"如本文所用意指随后描述的事件或状况 可以但不是必须发生，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况 和并未发生的情况。例如，"任选经取代的"意指该任选经取代的部分可 以掺入氢或取代基。
术语"约"在本文中用来指大约、在一定范围内、大致或左右。在 术语"约"与数值范围结合使用时，其通过在所述数值上下扩展边界来修 饰该范围。通常，术语"约"在本文中用来将数值修饰为所述值上下方差 20％。
如本文所用，对变量数值范围的描述期望表达的是在变量等于该范 围内任何值的情况下本发明都可以实施。从而，对于固有离散的值，变 量能够等于该数值范围内的任何整数值，包括范围端点。类似地，对于 固有连续的值，变量能够等于该数值范围的任何实数值，包括范围端点。 例如，描述为具有0至2的值的变量对于固有离散的变量能够是0、1或2，而对于固有连续的变量能够是0.0、0.1、0.01、0.001或任何其它实数 值。
式I化合物展示互变异构。互变异构体化合物能够作为两个或更多 个可相互转化的种类存在。质子移变性互变异构体由共价键合的氢原子 在两个原子之间迁移导致。互变异构体一般以平衡存在并且分离单独互 变异构体的尝试通常产生混合物，其化学和物理特性与化合物的混合物 相符。平衡的位置取决于分子内的化学特征。例如，在许多脂族醛和酮 比如乙醛中，酮基形式占优势；而在酚类中，烯醇形式占优势。常见的 质子移变性互变异构体包括酮基/烯醇
Figure BDA0003355983310000051
酰 胺/亚胺酸
Figure BDA0003355983310000052
和脒
Figure BDA0003355983310000061
互变异构体。后两者在杂芳基和杂环中特 别常见，并且本发明涵盖化合物的全部互变异构体形式。
技术人员将认识到某些式I化合物可以含有一个或多个手性中心 和因此存在两个或更多个立体异构形式。这些异构体的外消旋体，单独 异构体和一种对映体富集的混合物，以及在存在两个手性中心时的非对 映体，和特定非对映体部分富集的混合物都属于本发明范围。本发明包 括式I化合物的全部单独立体异构体(例如对映体)、外消旋混合物或部分 拆分的混合物，并且酌情包括其单独的互变异构体形式。
式I化合物可以含有碱性中心并且从形成无毒盐的酸形成适宜的 酸加成盐。无机酸盐的实例包括盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，氯化物， 溴化物，碘化物，硫酸盐，硫酸氢盐，硝酸盐，磷酸盐和磷酸氢盐。有 机酸盐的实例包括乙酸盐，富马酸盐，双羟萘酸盐，天冬氨酸盐，苯磺 酸盐，碳酸盐，碳酸氢盐，樟脑磺酸盐，D和L-乳酸盐，D和L-酒石酸 盐，乙磺酸盐，甲磺酸盐，丙二酸盐，乳清酸盐，葡庚糖酸盐，甲基硫 酸盐，硬脂酸盐，葡糖醛酸盐，2-萘磺酸盐，甲苯磺酸盐，羟苯酰苯酸 盐，烟酸盐，羟乙基磺酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，柠檬酸盐，葡糖酸 盐，琥珀酸盐，糖质酸盐，苯甲酸盐，乙磺酸盐，和双羟萘酸盐。适宜 盐的综述可参见Berge,Stephen M.,et al."Pharmaceutical salts."J. Pharm.Sci.Vol.66,No.1(1977):1-19，和Paulekuhn,G.Steffen,et al. "Trends in Active PharmaceuticalIngredient Salt Selection based on Analysis of the Orange Book Database."J.Med.Chem.Vol.50,No.26 (2007):6665-6672。
本文所用的技术和科学术语具有本发明所属领域技术人员一般理 解的含义，除非另有定义。本文参考本领域技术人员已知的各种方法和 物质。描述药理学一般原理的标准工具书包括Hardman,Joel Griffith,et al.Goodman&Gilman's The PharmacologicalBasis of Therapeutics.New York:McGraw-Hill Professional,2001。制备这些化 合物所用的原料和试剂一般可获自商业供应商比如Sigma-Aldrich(St. Louis，MO)或通过本领域技术人员已知的方法按照参考文献描述的程序 制备。在下文说明书和实例中提及的物质、试剂等可获自商业来源，除 非另有指出。一般合成程序已描述于论文比如LouisF.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis.v.1-23,New York:Wiley1967-2006ed.(也可经由Wiley
Figure BDA0003355983310000071
网站获得)；LaRock, Richard C.,Comprehensive Organic Transformations:A Guide to Functional GroupPreparations.New York:Wiley-VCH,1999；B.Trost and I.Fleming,eds.ComprehensiveOrganic Synthesis.v.1-9,Oxford: Pergamon 1991；A.R.Katritzky and C.W.Rees,eds.Comprehensive Heterocyclic Chemistry.Oxford:Pergamon 1984；A.R.Katritzkyand C. W.Rees,eds.Comprehensive Heterocyclic Chemistry II.Oxford: Pergamon1996；和Paquette,Leo A.,ed.Organic Reactions.v.1-40,New York:Wiley&Sons 1991；并且是本领域技术人员熟悉的。
术语"烷基"包括碳原子的线性或支化链残基。某些烷基部分已有 缩写，例如甲基("Me")、乙基("Et")、丙基("Pr")和丁基("Bu")，并且 用进一步缩写来指定化合物的特定异构体，例如1-丙基或n-丙基 ("n-Pr")，2-丙基或异丙基("i-Pr")，1-丁基或n-丁基("n-Bu")，2-甲基 -1-丙基或异丁基("i-Bu")，1-甲基丙基或仲丁基("s-Bu")，1,1-二甲基乙基或叔丁基("t-Bu")等。缩写有时与元素缩写和化学结构结合使用，例 如甲醇("MeOH")或乙醇("EtOH")。在某些实施方式中，烷基是C1-10烷基。在某些实施方式中，烷基是C1-6烷基。
在申请全文中使用的额外缩写可以包括例如苄基("Bn")，苯基 ("Ph")，乙酸酯("Ac")和甲磺酸酯("Ms")。
术语"BOC"或"boc"或"Boc"意指叔丁氧基羰基保护基团。
术语"烯基"和"炔基"也包括碳原子的线性或支化链残基。
术语"烷氧基"，如本文所用，意指通过氧原子附着的烷基取代基。 非限制性实例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基，戊氧基和己氧基。
术语"双环"，如本文所用，意指含有6至10个碳原子的双环一价 烃基团，其中所述的两个环是稠合的，螺稠合的或形成桥连结构。在用 来修饰杂环或杂芳基的情况下，双环基团可以含有1至4个选自氮、氧 和硫的杂原子。
术语"环烷基"，如本文所用，意指含有至少3个碳原子的环状一 价烃式-CnH(2n-1)基团。非限制性实例包括环丙基，环丁基，环戊基和 环己基。
术语"芳基"，如本文所用，意指苯基或萘基。
术语"杂环"和"杂环的"意指四至七元饱和或部分不饱和环，含有 一、二或三个选自O、N、S、S(＝O)和S(＝O)2的杂原子。在某些情况下， 这些术语可以特别进一步限制，比如"五至六元杂环"仅包括五元环和六 元环。
术语"杂芳基"意指五至六元芳族环，含有一、二、三或四个选自O、 N和S的杂原子。在某些情况下，这些术语可以特别进一步限制，比如 五至六元杂芳基，其中杂芳基含有1个或2个氮杂原子。如本领域技术 人员熟知，杂芳基环具有与其全碳相应环相比更少的芳族特征。从而， 对于本发明的意图来说，杂芳基需要仅具有一定程度的芳族特征。上述 杂芳基可以通过环碳原子附着或在化合价允许的情况下通过环氮原子附 着。
术语"卤素"，如本文所用，是指氟，氯，溴或碘。
绘入环系的键(与在明显顶点连接相反)指出该键可以连接至任何 适宜的环原子。跨过键的波浪线
Figure BDA0003355983310000081
指出附着点。
术语"治疗"或"处理"是指治疗性，预防性，缓和性或防止性的措 施。有益或希望的临床结果包括但不限于减轻症状，减弱疾病程度，稳 定(即不恶化)疾病状态，延缓或减缓疾病进展，改善或缓和疾病状态， 和缓解(部分或完全)，无论其是可检测的或不可检测的。"治疗"还能够 意指与如果不接受治疗的期望生存相比延长生存。需要治疗的那些包括已经患有病况或障碍的那些，以及具有病况或障碍倾向的那些或要预防 病况或障碍的那些。
短语"治疗有效量"或"有效量"意指本文描述的化合物的量，其在 给予需要所述治疗的哺乳动物时，足以(i)治疗或预防特定疾病、病况或 障碍，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状， 或(iii)预防或延缓本文描述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状的 发作。相应于所述量的化合物量将取决于因素比如特定化合物、病况及 其严重性，需要治疗的哺乳动物的身份(例如体重)而变化，但能够仍由 本领域技术人员常规确定。
术语"癌症"和"癌性的"是指或描述哺乳动物中的生理学条件，其 一般表征为异常或不受调节的细胞生长。"肿瘤"包含一个或多个癌性细 胞。癌症的实例包括但不限于癌瘤，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤，和白血 病或淋巴样恶性。所述癌症的更特别实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状 细胞癌)，肺癌包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌("NSCLC")，肺腺癌和肺鳞状癌，腹膜癌，肝细胞癌，胃部或胃癌包括胃肠道癌，胰腺癌，成胶 质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌，结肠癌， 直肠癌，结直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾腺癌，肾脏或肾癌，前列腺 癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌，肛门癌，阴茎癌，皮肤癌，包括黑色素 瘤，以及头颈癌。
短语"药学上可接受的"指出物质或组合物是与构成配制剂的其它 成分和/或用其处理的哺乳动物在化学上和/或毒理学上相容的。
短语"药学上可接受的盐"如本文所用是指本文描述的化合物的药 学上可接受的有机或无机盐。
本文描述的化合物也包括所述化合物的其它盐，其不一定是药学上 可接受的盐并且其可以用作制备和/或纯化本文描述的化合物的中间体 和/或用于分离本文描述的化合物的对映体。
术语"哺乳动物"意指温血动物，其患有本文描述的疾病或有发展 其的风险，并且包括但不限于豚鼠、犬、猫、大鼠、小鼠、仓鼠和灵长 类，包括人类。
SHP2抑制剂
本文提供化合物及其药物配制剂，其能够用于治疗受SHP2调节的 疾病、病况和/或障碍。
本发明涉及新类别的三嗪化合物。本发明也涉及那些化合物的制备 和制备中所用的中间体，含有化合物的组合物，和化合物的用途包括治 疗过增殖和肿瘤病比如癌。
一种实施方式提供式I化合物：
Figure BDA0003355983310000101
或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中：
L1选自直连键，S，CH2，O，NH和Se；
R1选自氢和甲基；
R2选自(a)苯基，(b)5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4 个选自氮、氧和硫的杂原子，其中1个氮杂原子可以用氧取代以形成氧 化物，(c)8-10元双环环烷基，(d)10元双环芳基，(e)9-10元双环杂环， 其中所述杂环含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，和(f)9-10元双环 杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子， 其中所述苯基、杂芳基、双环环烷基、双环芳基、双环杂环和双环杂芳 基任选用一个或多个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，氧代，任选 用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷 基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的C1-C3烷氧基， NHRa，和任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的3至6 元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、氧和硫的杂原子；
R3选自：
Figure BDA0003355983310000102
X10是CR9或O,
X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个可以是O；
R4和R5独立地选自氢和C1-C3烷基；
R6选自氢，OH和任选用OH基团取代的C1-C3烷基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或5至6元杂芳基， 其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述芳基 和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R99是氢或氘；
x是1或2；
y是0或1；和
Ra是氢或任选用1至3个选自OH、甲氧基、卤素和氰基的基团取 代的C1-C4烷基。
在某些实施方式中提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或 药学上可接受的盐，其中：
L1选自直连键，S，CH2，O，NH和Se；
R1选自氢和甲基；
R2选自(a)任选用1个或2个卤素基团取代的苯基；(b)5至6元杂 芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所 述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，任选用 1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa， 和任选用OH基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个 选自氮和氧的杂原子；(c)8-10元双环部分不饱和的环烷基；(d)9-10元 双环部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有1至3个选自氮、氧和硫的 杂原子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的基团取代；(e) 9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫 的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用1至3个选自卤素和C1-C3烷基 的基团取代；
R3选自：
Figure BDA0003355983310000121
X10是CR9或O,
X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个可以是O；
R4和R5独立地选自氢和C1-C3烷基；
R6选自氢，OH和任选用OH基团取代的C1-C3烷基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或5至6元杂芳基， 其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述芳基 和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R99是氢或氘；
x是1或2；
y是0或1；和
Ra是氢或任选用1至3个选自OH和氰基的基团取代的C1-C4烷基。
在某些实施方式中提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或 药学上可接受的盐，其中：
L1选自直连键，S，CH2，O，和NH；
R1是氢；
R2选自(a)任选用1个或2个卤素基团取代的苯基；(b)5至6元杂 芳基，其中所述杂芳基含有1个氮杂原子，其中所述杂芳基任选用1个 或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，任选用1至3个卤素基团取 代的C1-C3烷基，C3环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团 取代的6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮和氧的杂原子；(c)8-10元双环部分不饱和的环烷基；(d)9元双环部分不饱和的杂环， 其中所述杂环含有2或3个氮杂原子，其中所述杂环任选用1至3个选 自卤素和氧代的基团取代；和(e)9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳 基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用 1个选自卤素和C1-C3烷基的基团取代；
R3选自：
Figure BDA0003355983310000131
X10是CR9或O,
X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个可以是O；
R4和R5独立地选自氢和甲基；
R6是甲基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或5至6元杂芳基， 其中所述杂芳基含有1或2个选自氮和硫的杂原子，其中所述芳基和杂 芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，甲基，甲氧基和氰 基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R99是氢或氘；
x是1或2；和
Ra是氢或任选用1个选自OH和氰基的基团取代的C1-C4烷基。
在某些实施方式中提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或 药学上可接受的盐，其中：
L1选自直连键，S，CH2，O或NH；
R1选自氢和甲基；
R2选自苯基，5至6元杂芳基其中所述杂芳基含有一至四个选自氮、 氧和硫的杂原子，10元双环芳基，和9-10元双环杂芳基其中所述双环杂 芳基含有一至三个选自氮、氧和硫的杂原子,
其中所述苯基，杂芳基，双环芳基和双环杂芳基任选用选自下述的 一个或多个基团取代：卤素，氰基，任选用卤素、氰基或OH取代的C1-C3烷基，任选用卤素、氰基或OH取代的-O(C1-C3烷基)，NHRa，和任选 用卤素、氰基或OH取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2 个选自氮、氧和硫的杂原子；
R3选自：
Figure BDA0003355983310000141
X10是CR9或O；
R4和R5独立地选自氢和甲基；
R6选自氢，甲基，OH和CH2OH；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R9是氢，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基；
Ra是氢或任选用OH、甲氧基、卤素或氰基取代的C1-C3烷基；
x是1或2；
y是0或1；和
z是1或2。
在某些实施方式中：
L1选自直连键或S；
R1选自氢和甲基；
R2选自任选用卤素取代的苯基，5至6元杂芳基，其中所述杂芳基 含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或 2个选自卤素、甲基和NH2的取代基取代，和9-10元双环杂芳基，其中 所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环 杂芳基任选用卤素取代；
R3选自：
Figure BDA0003355983310000151
R4和R5是氢；
R6选自氢和甲基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
Ra是氢。
在又一实施方式中，提供式I化合物或其立体异构体或药学上可接 受的盐。
在又一实施方式中，提供式I化合物或其互变异构体或药学上可接 受的盐。
在又一实施方式中，提供式I化合物或其立体异构体或互变异构 体。
在又一实施方式中，提供式I化合物或其立体异构体。
在又一实施方式中，提供式I化合物或其互变异构体。
在又一实施方式中，提供式I化合物或其药学上可接受的盐。
在某些实施方式中，L1选自直连键，S，CH2，O、NH或Se。在 某些实施方式中，L1选自直连键和S。在某些实施方式中，L1选自S， CH2，O或NH。在某些实施方式中，L1是直连键。在某些实施方式中， L1是S。在某些实施方式中，L1是硒(Se)。
在某些实施方式中，L1选自直连键，S，CH2，O或NH。在某些 实施方式中，L1选自直连键和S。在某些实施方式中，L1选自S，CH2， O或NH。在某些实施方式中，L1是直连键。在某些实施方式中，L1是 S。
在某些实施方式中，R1选自氢和甲基。在某些实施方式中，R1是 氢。在某些实施方式中，R1是甲基。在优选的实施方式中，R1是氢。
在某些实施方式中，R2选自(a)苯基，(b)5至6元杂芳基，其中所 述杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中1个氮杂原子可 以用氧取代以形成氧化物，(c)8-10元双环环烷基，(d)10元双环芳基， (e)9-10元双环杂环，其中所述杂环含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原 子，和(f)9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、 氧和硫的杂原子，其中所述苯基、杂芳基、双环环烷基、双环芳基、双 环杂环和双环杂芳基任选用一个或多个基团取代，所述基团选自卤素， 氰基，氧代，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代 的C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基 团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、氧和硫 的杂原子。R2基团可以用一个或多个基团取代，意指化合价允许的1至 4个取代基。在某些实施方式中，R2选自(a)任选用1个或2个卤素基团 取代的苯基；(b)5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、 氧和硫的杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述 取代基选自卤素，任选用卤素取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环 含有1个或2个选自氮和氧的杂原子；(c)8-10元双环部分不饱和的环烷 基；(d)9-10元双环部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有1至3个选自 氮、氧和硫的杂原子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的 基团取代；(e)9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选 自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用1至3个选自卤素 和C1-C3烷基的基团取代。在某些实施方式中，R2选自(a)任选用1个或 2个卤素基团取代的苯基；(b)5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1 个氮杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取代 基选自卤素，任选用1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3环烷基， C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的6元杂环，其中所述杂 环含有1个或2个选自氮和氧的杂原子；(c)8-10元双环部分不饱和的环 烷基；(d)9元双环部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有2或3个氮杂 原子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的基团取代；和(e) 9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫 的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用1个选自卤素和C1-C3烷基的基 团取代。在某些实施方式中，R2选自苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，2,3- 二氯苯基，2-氨基-3-氯吡啶-4-基，2,3-二氯吡啶-4-基，3-氯-2-甲基吡啶 -4-基，3-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-基，3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基， 2,3-二甲基吡啶-4-基，2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基，2-氨基-5-氯吡啶-4-基， 3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基，3-氯-2-(三氟甲基)吡啶-4-基，6-氨基-2-(三氟甲 基)吡啶-3-基，2-氨基-3-溴吡啶-4-基，6-氨基吡啶-3-基，2-氨基-3-氟吡 啶-4-基，3-氯-2-((2-氰基-2-甲基丙基)氨基)吡啶-4-基，2-氨基-3-氯-1-氧 化吡啶-4-基，3-氯-2-((2-羟基乙基)氨基)吡啶-4-基，二环[4.2.0]辛 -1(6),2,4-三烯-2-基，2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基，3,3-二氟-2- 氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4- 基，1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基，咪 唑并[1,2-a]吡啶-3-基，1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基，1H-吲唑-3-基，1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基，咪唑并[1,2-a]嘧啶-3-基，异喹啉-5-基和1H-吲 哚-3-基。
在某些实施方式中，R2选自苯基，5至6元杂芳基其中所述杂芳基 含有一至四个选自氮、氧和硫的杂原子，10元双环芳基，和9-10元双环 杂芳基其中所述双环杂芳基含有一至三个选自氮、氧和硫的杂原子，其 中所述苯基，杂芳基，双环芳基和双环杂芳基任选用一个或多个基团取 代，所述基团选自卤素，氰基，任选用卤素、氰基或OH取代的C1-C3烷基，任选用卤素、氰基或OH取代的-O(C1-C3烷基)，NHRa，和任选 用卤素、氰基或OH取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2 个选自氮、氧和硫的杂原子。在某些实施方式中，R2选自任选用卤素取 代的苯基，5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、氧 和硫的杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取 代基选自卤素，甲基和NH2，和9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳 基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用 卤素取代。在某些实施方式中，R2选自2,3-二氯苯基，2-氨基-3-氯吡啶 -4-基，2,3-二氯吡啶-4-基，3-氯-2-甲基吡啶-4-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡 啶-4-基和5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基。
在某些实施方式中，R2是任选用一个或多个基团取代的苯基，所 述基团选自卤素，氰基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团 取代的C1-C3烷基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代 的C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、氧和硫 的杂原子。在某些实施方式中，R2是任选用卤素取代的苯基。在某些实 施方式中，R2是任选用1个或2个卤素基团取代的苯基。在某些实施方 式中，R2选自苯基，2-氯苯基，3-氯苯基和2,3-二氯苯基。
在某些实施方式中，R2是苯基，其任选用一个或多个基团取代， 所述基团选自卤素，氰基，任选用卤素、氰基或OH取代的C1-C3烷基， 任选用卤素、氰基或OH取代的-O(C1-C3烷基)，NHRa，和任选用卤素、 氰基或OH取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、 氧和硫的杂原子。在某些实施方式中，R2是任选用卤素取代的苯基。在 某些实施方式中，R2是2,3-二氯苯基。
在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1 至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中1个氮杂原子可以用氧取代以形 成氧化物，其中所述杂芳基可以任选用一个或多个基团取代，所述基团 选自卤素，氰基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的 C1-C3烷基，C3-C6环烷基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基 团取代的C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用1至3个选自卤素、氰基和 OH的基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、 氧和硫的杂原子。在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述 杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中1个氮杂原子可以 用氧取代以形成氧化物，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代， 所述取代基选自卤素，任选用1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的3至6元杂环， 其中所述杂环含有1个或2个选自氮和氧的杂原子。在某些实施方式中， R2是5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的 杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取代基选 自卤素，任选用1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环 含有1个或2个选自氮和氧的杂原子。在某些实施方式中，R2是5至6 元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其 中1个氮杂原子可以用氧取代以形成氧化物，其中所述杂芳基任选用1 个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，甲基，三氟甲基，环丙基， 甲氧基，NH2，NHCH2C(CH3)2CN，NHCH2CH2OH和4-羟基哌啶-1- 基。在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1 个氮杂原子，其中所述氮杂原子可以用氧取代以形成氧化物，其中所述 杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，任选用1 至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa， 和任选用OH基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个 选自氮和氧的杂原子。在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中 所述杂芳基含有1个氮杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代 基取代，所述取代基选自卤素，任选用1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的3 至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮和氧的杂原子。在某 些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1个氮杂原 子，其中所述氮杂原子可以用氧取代以形成氧化物，其中所述杂芳基任 选用1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，甲基，三氟甲基， 环丙基，甲氧基，NH2，NHCH2C(CH3)2CN，NHCH2CH2OH和4-羟基 哌啶-1-基。在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述杂芳基 含有1个氮杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所 述取代基选自卤素，甲基，三氟甲基，环丙基，甲氧基，NH2， NHCH2C(CH3)2CN，NHCH2CH2OH和4-羟基哌啶-1-基。在某些实施方式中，R2是吡啶，其中氮杂原子可以用氧取代以形成氧化物，其中所述 吡啶任选用1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，甲基，三氟 甲基，环丙基，甲氧基，NH2，NHCH2C(CH3)2CN，NHCH2CH2OH和 4-羟基哌啶-1-基。在某些实施方式中，R2选自2-氨基-3-氯吡啶-4-基，2,3-二氯吡啶-4-基，3-氯-2-甲基吡啶-4-基，3-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡 啶-4-基，3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基，2,3-二甲基吡啶-4-基，2-氨基-3- 环丙基吡啶-4-基，2-氨基-5-氯吡啶-4-基，3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基，3- 氯-2-(三氟甲基)吡啶-4-基，6-氨基-2-(三氟甲基)吡啶-3-基，2-氨基-3-溴 吡啶-4-基，6-氨基吡啶-3-基，2-氨基-3-氟吡啶-4-基，3-氯-2-((2-氰基-2- 甲基丙基)氨基)吡啶-4-基，2-氨基-3-氯-1-氧化吡啶-4-基和3-氯-2-((2-羟 基乙基)氨基)吡啶-4-基。
在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1 至4个选自氮、氧和硫的杂原子，任选用一个或多个基团取代，所述基 团选自卤素，氰基，任选用卤素、氰基或OH取代的C1-C3烷基，任选 用卤素、氰基或OH取代的-O(C1-C3烷基)，NHRa，和任选用卤素、氰 基或OH取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、 氧和硫的杂原子。在某些实施方式中，R2是5至6元杂芳基，其中所述 杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述杂芳基任选用 1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，甲基和NH2。在某些实施方式中，R2选自2-氨基-3-氯吡啶-4-基，2,3-二氯吡啶-4-基，和3-氯-2- 甲基吡啶-4-基。
在某些实施方式中，R2是8-10元双环环烷基。在某些实施方式中， R2是8-10元双环部分不饱和的环烷基。在某些实施方式中，R2是二环 [4.2.0]辛-1(6),2,4-三烯-2-基。
在某些实施方式中，R2是9-10元双环杂环，其中所述杂环含有1 至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述杂环任选用一个或多个基团 取代，所述基团选自卤素和氧代。在某些实施方式中，R2是9-10元双环 部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原 子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的基团取代。在某些 实施方式中，R2是9元双环部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有2或 3个氮杂原子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的基团取 代。在某些实施方式中，R2是2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基，3,3- 二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基和2,3-二氢-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-4-基。
在某些实施方式中，R2是9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳 基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用 一个或多个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，任选用1至3个选自 卤素、氰基和OH的基团取代的C1-C3烷基，任选用1至3个选自卤素、 氰基和OH的基团取代的C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用1至3个选自 卤素、氰基和OH的基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个 或2个选自氮、氧和硫的杂原子。在某些实施方式中，R2是9-10元双环 杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子， 其中所述双环杂芳基任选用1至3个选自卤素和C1-C3烷基的基团取代。 在某些实施方式中，R2是9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有 1至3个氮杂原子，其中所述双环杂芳基任选用1个选自卤素和甲基的 基团取代。在某些实施方式中，R2选自1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，5- 氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1H- 吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基，咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基，1H-吡唑并[3,4-b]吡啶 -3-基，1H-吲唑-3-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基，咪唑并[1,2-a]嘧啶-3- 基，异喹啉-5-基和1H-吲哚-3-基。
在某些实施方式中，R2是9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳 基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，任选用一个或多个基团取代， 所述基团选自卤素，氰基，任选用卤素取代的C1-C3烷基，氰基或OH， 任选用卤素、氰基或OH取代的-O(C1-C3烷基)，NHRa，和任选用卤素、 氰基或OH取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、 氧和硫的杂原子。在某些实施方式中，R2是9-10元双环杂芳基，其中所 述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂 芳基任选用卤素取代。在某些实施方式中，R2选自1H-吡咯并[2,3-b]吡 啶-4-基和5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基。
在某些实施方式中，Ra是氢或任选用1至3个选自OH、甲氧基、 卤素和氰基的基团取代的C1-C4烷基。在某些实施方式中，Ra是氢或任 选用1至3个选自OH和氰基的基团取代的C1-C4烷基。在某些实施方 式中，Ra是氢，甲基，2-氰基-2-甲基丙基或2-羟基乙基。在某些实施方 式中，Ra是氢或甲基。
在某些实施方式中，Ra是氢或任选用OH、甲氧基、卤素或氰基取 代的C1-C3烷基。在某些实施方式中，Ra是氢或任选用OH取代的C1-C3烷基。在某些实施方式中，Ra是氢。
在某些实施方式中，R3选自：
Figure BDA0003355983310000221
其中X10是CR9或O，X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个 可以是O；R4和R5独立地选自氢和C1-C3烷基；R6选自氢，OH和任选 用OH基团取代的C1-C3烷基，或R6和R9与它们连接至的原子一起形 成6元芳基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、 氧和硫的杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取代，所 述基团选自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基；R7和R8是氢，或 R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；R99是氢或氘；x是1或2；和y是0或1。
在某些实施方式中，R3选自：
Figure BDA0003355983310000231
Figure BDA0003355983310000241
在某些实施方式中，R3选自：
Figure BDA0003355983310000242
其中X10是CR9或O；R4和R5独立地选自氢和甲基；R6选自氢， 甲基，OH和CH2OH；R7是氢，或R6和R7与它们连接至的原子一起形 成6元芳基；R7和R8是氢，或R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙 基桥从而R3是氮杂双环；x是1或2；y是0或1；和z是1或2。在某 些实施方式中，R3选自(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷 -8-基，(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基，1-氨基-1,3-二氢螺 [茚-2,4’-哌啶]-1’-基，和4-氨基-4-甲基氮杂环庚烷-1-基。
在某些实施方式中，x是1或2。在某些实施方式中，x是1。在某 些实施方式中，x是2。
在某些实施方式中，y是0或1。在某些实施方式中，y是0。在某 些实施方式中，y是1。
在某些实施方式中，z是1或2。在某些实施方式中，z是1。在某 些实施方式中，z是2。
在某些实施方式中，x是1和y是0，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000251
在某些实施方式中，x是1，y是0，和R7和R8与它们连接至的原 子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000252
在某些实施方式中，R3是(1R,3s,5S)-3-氨基-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷 -8-基。
在某些实施方式中，x是1，y是0，和R7和R8与它们连接至的原 子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000253
在某些实施方式中，x是2和y是0，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000261
在某些实施方式中，R3是4-氨基-4-甲基氮杂环庚烷-1-基。
在某些实施方式中，X10是O，和X11是CH2，从而R3具有下述结 构：
Figure BDA0003355983310000262
在某些实施方式中，z是2和X10是O，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000263
在某些实施方式中，R3是(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺 [4.5]癸烷-8-基。
在某些实施方式中，X10是CR9，和X11是O，从而R3具有下述结 构：
Figure BDA0003355983310000264
在这些实施方式中，R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳 基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、氧和硫的 杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选 自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基。
在某些实施方式中，X10是CR9，和X11是CH2，从而R3具有下述 结构：
Figure BDA0003355983310000271
在这些实施方式中，R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳 基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、氧和硫的 杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选 自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基。
在某些实施方式中，z是2和X10是CR9，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000272
在某些实施方式中，z是2，X10是CR9，和R6和R9与它们连接至 的原子一起形成6元芳基，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000273
在某些实施方式中，R3是1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4’-哌啶]-1’-基。
在某些实施方式中，R3选自：
Figure BDA0003355983310000281
在某些实施方式中，R4和R5独立地选自氢和甲基。在某些实施方 式中，R4和R5是氢。
在某些实施方式中，R6选自氢，甲基，OH和CH2OH。在某些实 施方式中，R6选自氢和甲基。在某些实施方式中，R6是甲基。在某些实 施方式中，R6是氢。
在某些实施方式中，R6选自氢，甲基，OH和CH2OH。
在某些实施方式中，X10是CR9或O。在某些实施方式中，X10是 CR9。在某些实施方式中，X10是O。
在某些实施方式中，R6选自氢，甲基，OH和CH2OH；而R9是氢。
在某些实施方式中，X10是CR9，和R6和R9与它们连接至的原子 一起形成6元芳基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选 自氮、氧和硫的杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取 代，所述基团选自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基。在某些实施 方式中，X10是CR9，和R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基 或具有1或2个选自氮和硫的杂原子的5至6元杂芳基，其中所述芳基 和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，甲基，甲氧基 和氰基。在某些实施方式中，X10是CR9，和R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或具有1或2个选自氮和硫的杂原子的5至6元杂 芳基，其中所述芳基任选用1或2个选自卤素、甲基、甲氧基和氰基的 基团取代，和所述杂芳基任选用卤素、甲基或甲氧基取代。
在某些实施方式中，X10是CR9，而R6和R9与它们连接至的原子 一起形成6元芳基，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000291
在某些实施方式中，R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥 从而R3是氮杂双环，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000292
在某些实施方式中，R7和R8是氢，或R7和R8与它们连接至的原 子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环。在某些实施方式中，R7和R8是 氢。在某些实施方式中，R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥 从而R3是氮杂双环，从而R3具有下述结构：
Figure BDA0003355983310000293
在某些实施方式中，R99是氢或氘。在优选的实施方式中，R99是氢。 在某些实施方式中，R99是氘。
在某些实施方式中提供实施例1至84的化合物。在某些实施方式 中，提供实施例1，2，4-9，11-14，16-20，22-27，29-55，58-71，73， 74，76，77，和79-84的化合物。在某些实施方式中，提供实施例1，2， 5-8，14，17-19，22-27，29-35，37-41，44-48，50-54，58，61，62，64-71，73，76，77，79，81，83和84的化合物。在某些实施方式中，提供实 施例7，17，18，30，31，32，37，38，40，45，67，69，81和84的化 合物。在某些实施方式中，提供实施例1，5-8，14，16-20，22-27，29-39， 41，44-55，57-59，61，62，64-67，69-71，73-77，81，83和84的化合 物。在某些实施方式中，提供实施例1，6-8，14，16-18，22-25，27， 30，32，34-39，41，44，45，47，48，50-55，58，61，62，65-67，70， 73，74，76，77，81，83和84的化合物。在某些实施方式中，提供实 施例6，17，18，22-25，27，30，32，34-36，39，41，44，45，48，50， 52-54，58，61，62，66，70，73，74，76，81，83和84的化合物。
在某些实施方式中提供实施例1至14的化合物。在某些实施方式 中，提供实施例1，2，4，5，6，7，8，9，11，12，13，和14的化合 物。
在某些实施方式中，提供式I化合物。在某些实施方式中，提供式 I化合物，条件是所述化合物不是实施例3，10，15，21，28，56，57， 72，75或78。在某些实施方式中，提供式I化合物，条件是所述化合物 不是实施例3，4，9-13，15，16，20，21，28，36，42，43，49，55-57，60，63，72，74，75，78，80或82。在某些实施方式中，提供式I化合 物，条件是所述化合物不是实施例1-6，8-16，19-29，33-36，39，41-44， 46-66，68，70-80，82或83。在某些实施方式中，提供式I化合物，条 件是所述化合物不是实施例2-4，9-13，15，21，28，40，42，43，56， 60，63，68，72，78-80或82。在某些实施方式中，提供式I化合物， 条件是所述化合物不是实施例2-5，9-13，15，19-21，26，28，29，31， 33，40，42，43，46，49，56，57，59，60，63，64，68，69，71，72， 75，78-80或82。在某些实施方式中，提供式I化合物，条件是所述化 合物不是实施例1-5，7-16，19-21，26，28，29，31，33，37，38，40， 42，43，46，47，49，51，55-57，59，60，63-65，67-69，71，72，75， 77-80或82。
在某些实施方式中，提供式I化合物。在某些实施方式中，提供式 I化合物，条件是所述化合物不是实施例2，3，11，12或13。在某些实 施方式中，提供式I化合物，条件是所述化合物不是实施例2，3，4，9， 10，11，12或13。
每个实施例或其药学上可接受的盐都可以单独地或在与任何数量 的本文描述的各种每一实施方式的任何组合中一起分组地要求保护的。
应认识到本文描述的某些化合物可以含有不对称或手性中心，和因 此以不同的立体异构形式存在。期望本文描述的化合物的全部立体异构 形式，包括但不限于非对映体、对映体和阻转异构体及其混合物比如外 消旋混合物，形成本发明化合物的一部分。
在任何特别手性原子的立体化学并未指定的本文显示的结构中，预 期全部立体异构体且包括为本文描述的化合物。在通过实线楔形线或短 划线指定立体化学代表特定构型的情况下，则立体异构体如此指定和定 义。
本发明包括全部药学上可接受的同位素标记的式I化合物，其中一 个或多个原子用这样的原子替换，所述原子具有相同原子数、但原子质 量或质量数不同于自然界中占优势的原子质量或质量数。
适于包含入本发明化合物中的同位素的实例包括氢同位素比如2H 和3H，碳同位素比如11C、13C和14C，氯同位素比如36Cl，氟同位素比 如18F，碘同位素比如123I和125I，氮同位素比如13N和15N，氧同位素比 如15O、17O和18O，磷同位素比如32P，和硫同位素比如35S。
某些同位素标记的式I化合物例如掺入放射性同位素的那些用于 药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚即3H和碳-14即14C对于 该意图特别有用，原因是它们易于掺入和便于检测。
用更重的同位素比如氘即2H取代可以提供更高的代谢稳定性带来 的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或降低的剂量要求。
同位素标记的式I化合物能够一般通过本领域技术人员已知的常 规技术制备或通过类似本文实施例和制剂部分描述那些的方法用适当的 同位素标记试剂代替预先使用的非标记试剂来制备。
本发明的药学上可接受的溶剂化物包括那些，其中结晶溶剂可以是 同位素取代的，例如D2O，d6-丙酮(或(CD3)2CO)，d6-DMSO(或 (CD3)2SO)。
还应认识到某些式I化合物可以用作其它式I化合物的中间体。
还应认识到本文描述的化合物可以以未溶剂化的形式以及与药学 上可接受的溶剂比如水、乙醇等溶剂化的形式存在，并且化合物期望包 涵溶剂化的形式和未溶剂化的形式两者。
本文描述的本发明化合物的各实施方式能够与本文描述的本发明 化合物的与所组合的实施方式不矛盾的一个或多个其它实施方式组合。
化合物的合成
本文描述的化合物可以通过包括类似于化学领域熟知那些的过程 的合成路线合成，特别是参照本文所含的描述。原料一般可获自商业来 源比如Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)、Alfa Aesar(Ward Hill,MA)或 TCI(Portland,OR)，或用本领域技术人员熟知的方法容易地制备(例如， 通过一般描述于Louis F.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis.v.1-23,New York:Wiley 1967-2006ed.(也可经由Wiley
Figure BDA0003355983310000322
网站获得)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin，包括增刊(也可经由Beilstein在线 数据库获得)的方法制备)。
出于示例性意图，方案1和2显示制备本文描述的化合物以及关键 中间体的一般方法。对于单独反应步骤的更详细描述，则参见下文实施 例部分。本领域技术人员将理解其它合成路线可以用来合成化合物。尽 管在下文方案描述和讨论了特定的原料和试剂，其它原料和试剂能够容 易地替代以提供各种衍生物和/或反应条件。此外，参考本公开后，通过 下文描述方法制备的许多化合物能够用本领域技术人员熟知的常规化学 进一步修饰。
Figure BDA0003355983310000321
方案1
方案1显示合成化合物1.3的一般方案。3,6-二氯-1,2,4-三嗪1.1可 以进行SNAr反应产生三嗪1.2，其中R3如本文定义。三嗪1.2可以进行 SNAr反应产生三嗪1.3，其中R3如本文定义。
Figure BDA0003355983310000331
方案2
方案1显示合成化合物1.4的一般方案。三嗪1.2可以进行Suzuki 反应产生三嗪1.4，其中R2和R3如本文定义。
分离方法
可以有利的是将反应产品彼此和/或与原料分离。各步骤或系列步 骤的希望产品通过本领域一般技术分离和/或纯化(此后分离)至所希望程 度的均匀性。一般地，所述分离牵涉多相萃取，从溶剂或溶剂混合物结 晶，蒸馏，升华或色谱法。色谱法能够牵涉任何数量的方法包括例如： 反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高、中和低压力液相色谱法方法和设备；小规模分析；模拟移动床("SMB")和制备型薄或厚层色谱法，以 及小规模薄层技术和快速色谱法。本领域技术人员将应用最有可能实现 希望分离的技术。
非对映体的混合物能够基于其物理化学差异通过本领域技术人员 熟知的方法比如通过色谱法和/或分步结晶分离为其单独的非对映体。对 映体能够分离如下：通过与适当的光学活性化合物(例如手性辅剂比如手 性醇或Mosher酰氯)反应将对映体混合物转化为非对映体混合物，分离 非对映体并将单独的非对映异构体转化(例如水解)为相应的纯对映体。 对映体还能够通过使用手性HPLC柱分离。
实质上不含其立体异构体的单个立体异构体例如对映体可以通过 用比如形成非对映体的方法用光学活性拆分剂拆分外消旋混合物获得 (Eliel,E.and Wilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York:John Wiley&Sons,Inc.,1994；Lochmuller,C.H.,et al. "Chromatographic resolution of enantiomers:Selectivereview."J. Chromatogr.Vol.113,No.3(1975):pp.283-302)。本文描述的手性化合 物的外消旋混合物可以通过任何适宜方法分开并分离，包括：(1)形成与 手性化合物离子非对映体盐和通过分步结晶或其它方法分离，(2)与手性 衍生剂形成非对映体化合物，分离非对映体，和转化为纯的立体异构体， 和(3)在手性条件下直接分离实质上纯的或富集的立体异构体。参见： Wainer,Irving W.,ed.Drug Stereochemistry:Analytical Methodsand Pharmacology.New York:Marcel Dekker,Inc.,1993。
在方法(1)下，非对映体盐能够形成如下：对映体纯的手性碱比如 番木鳖碱，奎宁，麻黄碱，士的宁，α-甲基-β-苯基乙基胺(苯丙胺)等与 携带酸性官能比如羧酸和磺酸的不对称化合物反应。非对映体盐可以通 过分步结晶或离子色谱法诱导分离。为了分离氨基化合物的旋光异构体， 加入手性羧酸或磺酸比如樟脑磺酸、酒石酸、苦杏仁酸或乳酸能够引起 非对映体盐的形成。
另选地，通过方法(2)，待拆分的底物与手性化合物的一种对映体 反应以形成非对映体对(Eliel,E.and Wilen,S.Stereochemistry of Organic Compounds.New York:John Wiley&Sons,Inc.,1994,p.322)。 非对映体化合物能够形成如下：将不对称化合物与对映体纯的手性衍生 剂比如薄荷基衍生物反应，随后分离非对映体和水解，产生纯的或富集 的对映体。确定光学纯度的方法牵涉在碱存在下制备外消旋混合物的手 性酯比如薄荷基酯例如(-)薄荷基氯甲酸酯，或Mosher酯，α-甲氧基-α-(三 氟甲基)苯基乙酸酯(JacobIII,Peyton."Resolution of (±)-5-Bromonornicotine.Synthesis of(R)-and(S)-Nornicotine of High Enantiomeric Purity."J.Org.Chem.Vol.47,No.21(1982):pp.4165-4167)，和分析1H NMR光谱中两种阻转异构对映体或非对映体的 存在。阻转异构化合物的稳定非对映体能够按照分离阻转异构萘基-异喹 啉(WO 96/15111)的方法通过正和反相色谱法分开并分离。
通过方法(3)，两种对映体的外消旋混合物能够通过色谱法用手性 固定相分离(Lough,W.J.,ed.Chiral Liquid Chromatography.New York: Chapman and Hall,1989；Okamoto,Yoshio,et al."Optical resolution of dihydropyridine enantiomers byhigh-performance liquid chromatography using phenylcarbamates ofpolysaccharides as a chiral stationary phase."J.of Chromatogr.Vol.513(1990):pp.375-378)。富集 或纯化的对映体能够通过用来区别具有不对称碳原子的其它手性分子的 方法比如旋光和圆二色性来区分。
生物学评价
本发明化合物是SHP2的抑制剂。尤其是，它们显示对SHP2的亲 和力。
可能通过许多直接和间接检测方法确定式I化合物的SHP2活性。 进行了本文描述的某些示范性化合物的SHP2抑制测试(生物学实施例 1)。用基于细胞的测试(生物学实例2)来通过测试ERK1/2磷酸化确定 SHP2抑制剂对下游信号转导的效果。
给予和药物配制剂
本文描述的化合物可以通过任何适于所治疗病况的方便途径给予。 本发明化合物通过任何适宜途径以适应所述途径的药物组合物形式给 予，并且以对希望治疗有效的剂量给予。适宜途径包括口服，肠胃外(包 括皮下、肌内、静脉内、动脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)，透皮，直肠， 鼻，局部(包括颊和舌下)，阴道，腹腔内，肺内和鼻内。
化合物可以以任何方便的给予形式给予，例如片剂，粉末，胶囊， 溶液，分散液，悬浮液，糖浆剂，喷雾剂，栓剂，凝胶，乳液，贴剂等。 所述组合物可以含有药物制剂的常规组分，例如稀释剂，载体，pH调节 剂，甜味剂，填充剂，和其它活性剂。如果希望肠胃外给药，组合物将 是无菌的且呈适于注射或输注的溶液或悬浮液形式。肠胃外给药的适宜 装置包括针(包括显微针)注射器，非针注射器和输注技术。
一般地，本发明化合物以有效治疗如本文描述的病况的量给予。本 发明化合物能够作为化合物本身给予，或另选作为药学上可接受的盐给 予。出于给药和定量意图，化合物本身或其药学上可接受的盐简单称为 本发明化合物。
典型的配制剂制备如下：将本文描述的化合物与载体、稀释剂或赋 形剂混合。适宜的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员熟知的且详 细描述于例如Ansel,HowardC.,et al.,Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems.Philadelphia:Lippincott,Williams& Wilkins,2004；Gennaro,Alfonso R.,etal.Remington:The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia:Lippincott,Williams&Wilkins, 2000；和Rowe,Raymond C.Handbook of PharmaceuticalExcipients.Chicago,Pharmaceutical Press,2005。配制剂还可以包括一种 或多种缓冲液，稳定剂，表面活性剂，润湿剂，润滑剂，乳化剂，助悬 剂，防腐剂，抗氧化剂，遮光剂，助流剂，处理助剂，着色剂，甜味剂， 芳香剂，调味剂，稀释剂和其它已知添加剂以提供药物(即本文描述的化 合物或其药物组合物)的美观展示或帮助制备药物产品(即药物)。
一种实施方式包括药物组合物，其包含式I化合物，或其立体异构 体、互变异构体或药学上可接受的盐。又一实施方式提供药物组合物， 其包含式I化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐， 以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在又一实施方式中，本发明提供药物组合物，其包含在本文描述的 任何实施方式中定义的式I化合物或其药学上可接受的盐，和与之混合 的至少一种药学上可接受的赋形剂。
在又一实施方式中，本发明包含药物组合物。所述药物组合物包含 与药学上可接受的载体一起呈现的本发明化合物。还能够存在其它药理 学活性的物质。如本文所用，"药学上可接受的载体"包括生理学相容的 任意各种溶剂，分散介质，包衣，抗细菌和抗真菌剂，等渗和吸收延缓 剂等。药学上可接受的载体的实例包括水，盐水，磷酸缓冲盐水，右旋糖，甘油，乙醇等及其组合中的一种或多种，并且可以包括组合物中的 等渗剂例如糖类，氯化钠，或多元醇比如甘露醇或山梨糖醇。还包括药 学上可接受的物质比如润湿剂或次要量的辅剂物质比如润湿或乳化剂， 防腐剂或缓冲剂，其增强抗体或抗体部分的存放期或有效性。
本发明组合物可以呈各种形式。这些包括例如液体、半固体和固体 剂型，比如液体溶液(例如可注射和可输注的溶液)，分散液或悬浮液， 片剂，丸剂，粉末，脂质体和栓剂。形式取决于期望的给药模式和治疗 应用。
典型的组合物呈可注射的或可输注的溶液形式，比如类似通常用于 抗体的人类被动免疫的那些的组合物。一种给药模式是肠胃外(例如静脉 内，皮下，腹腔内，肌内)。在又一实施方式中，抗体通过静脉内输注或 注射给予。在又一实施方式中，抗体通过肌内或皮下注射给予。
固体剂型的口服给药可以例如呈离散单元比如硬或软胶囊，丸剂， 扁囊剂，糖锭或片剂，各自含有预先确定量的至少一种本发明化合物。 在又一实施方式中，口服给药可以呈粉末或颗粒形式。在又一实施方式 中，口服剂型是舌下剂型例如糖锭。在所述固体剂型中，式I化合物通 常与一种或多种助剂组合。所述胶囊或片剂可以含有受控释放配制剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，各剂型也可以包含缓冲剂或可以用肠衣 制备。
在又一实施方式中，口服给药可以呈液体剂型。用于口服给药的液 体剂型包括例如药学上可接受的乳液，溶液，悬浮液，糖浆剂和酏剂， 含有本领域一般使用的惰性稀释剂(例如水)。所述组合物也可以包含助 剂比如润湿剂，乳化剂，助悬剂，调味剂(例如甜味剂)和/或芳香剂。
在又一实施方式中，本发明包含肠胃外剂型。"肠胃外给药"包括 例如皮下注射，静脉内注射，经腹膜内，肌内注射，胸骨内注射，和输 注。可注射的制剂(即无菌的可注射水性或油性悬浮液)可以根据本领域 已知用适宜的分散、润湿剂和/或助悬剂配制。
在又一实施方式中，本发明包含局部剂型。"局部给药"包括例如 经皮给药、比如经由透皮贴剂或电离子透入装置，眼内给药，或者鼻内 或吸入给药。用于局部给药的组合物也包括例如局部凝胶，喷雾剂，软 膏剂和霜剂。局部配制剂可以包括增强活性成分通过皮肤或其它影响区 域的吸收或穿透的化合物。在本发明化合物通过透皮装置给予的情况下， 用储库和多孔膜类型的或固体基质型的贴剂实现给药。用于该意图的典 型配制剂包括凝胶，水凝胶，洗剂，溶液，霜剂，软膏剂，撒施粉末， 敷料，泡沫，膜，皮肤贴剂，糯米纸囊剂(wafer)，植入物，海绵，纤维， 绷带和微乳剂。还可以使用脂质体。典型的载体包括醇，水，矿物油， 液体凡士林，白色凡士林，甘油，聚乙二醇和丙二醇。可以掺入的穿透 增强剂参见例如Finnin,Barrie C.和Timothy M.Morgan."Transdermal penetrationenhancers:Applications,limitations,and potential."J. Pharm.Sci.Vol.88,No.10(1999):pp.955-958。
适于向眼局部给药的配制剂包括例如滴眼剂，其中本发明化合物溶 解或悬浮在适宜的载体中。适于眼或耳给药的典型配制剂可以呈在等渗 的pH-调节无菌盐水中的微粒化悬浮液或溶液的滴剂形式。适于眼和耳 给药的其它配制剂包括软膏剂，生物可降解的(即可吸收的凝胶海绵、胶 原)和非生物可降解的(即有机硅)植入物，糯米纸囊剂，镜片和颗粒或囊 泡系统比如泡囊(niosomes)或脂质体。聚合物比如交联的聚丙烯酸，聚 乙烯醇，透明质酸，纤维质聚合物例如羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维 素或甲基纤维素，或杂多糖聚合物例如胶凝糖胶，可以与防腐剂比如苯 扎氯铵一起掺入。所述配制剂还可以通过电离子透入递送。
对于鼻内给药或吸入给药，本发明化合物从患者挤压或泵送的泵喷 雾容器以溶液或悬浮液形式，或者从加压容器或雾化器用适宜推进剂作 为气雾剂喷雾形式方便地递送。适于鼻内给药的配制剂一般地以下述形 式给予：来自干燥粉末吸入器的干燥粉末(单独，作为混合物例如与乳糖 的干燥共混物，或作为混合的组分颗粒例如与磷脂比如磷脂酰胆碱混 合)，或者来自加压容器、泵、喷雾、雾化器(优选用电流体动力学产生 细雾的雾化器)或喷洒器的气雾剂喷雾，用或不用适宜的推进剂比如 1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷。对于鼻内使用，粉末可以包 含生物粘附剂，例如脱乙酰壳多糖或环糊精。
在又一实施方式中，本发明包含直肠剂型。所述直肠剂型可以呈例 如栓剂形式。可可油是传统栓剂碱，但可以视情况使用各种备择对象。
还可以使用药物领域已知的其它载体物质和给药模式。本发明的药 物组合物可以通过药剂学的任何熟知技术比如有效的配制和给药程序来 制备。关于有效的配制和给药程序的上述考虑是本领域熟知的且描述于 标准教材当中。
本发明化合物和/或含有所述化合物的组合物的给药方案是基于各 种因素，包括患者的类型，年龄，体重，性别和医学条件；病况的严重 性；给药途径；和所用具体化合物的活性。从而，给药方案可以宽泛地 变化。在一种实施方式中，本发明化合物的总日剂量一般是约0.01至约 100mg/kg(即mg本发明化合物每kg体重)，用于治疗本文讨论指出的 病况。在又一实施方式中，本发明化合物的总日剂量是约0.1至约50 mg/kg，和在又一实施方式中是约0.5至约30mg/kg。对于体重70kg的 成人，总日剂量可以是0.1mg-2g；1mg-500mg等。并不罕见的是，本发 明化合物的给药将在一天中重复多次(一般不大于4次)。如果希望，每天多次给药一般可以用来增加总日剂量。
对于口服给药，组合物可以以含0.01，0.05，0.1，0.5，1.0，2.5， 5.0，10.0，15.0，25.0，50.0，75.0，100，125，150，175，200，250和 500毫克活性成分的片剂形式提供，用于随症状调节向患者给药。药物 一般地含有约0.01mg至约500mg的活性成分，或在又一实施方式中是 约1mg至约100mg的活性成分。对于经静脉内，在恒定速率输注期间 剂量范围可以是约0.01至约10mg/kg/分。
根据本发明的适宜受试者包括哺乳动物受试者。根据本发明的哺乳 动物包括犬，猫，牛，山羊，马，绵羊，猪，啮齿类，兔类，灵长类等， 和涵盖子宫中的哺乳动物。在一种实施方式中，人类是适宜的受试者。 人类受试者可以是任一性别且出于任何发育阶段。
使用本发明化合物的治疗方法
本发明化合物可以用于治疗宽范围的疾病，障碍或病况，包括癌症。 可以用本发明化合物治疗的其它病况包括过增殖疾病，炎性病症或疼痛。
还提供通过给予一种或多种本文描述的化合物或其立体异构体、互 变异构体或药学上可接受的盐治疗或预防疾病或病况的方法。在一种实 施方式中，提供在哺乳动物中治疗过增殖疾病的方法，包括向哺乳动物 给予治疗有效量的式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可 接受的盐。
又一实施方式提供在需要治疗的哺乳动物中治疗或预防癌症的方 法，其中所述方法包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的式I化合物或 其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
本发明也涉及在本文描述的任何实施方式中定义的包含式I化合 物或其药学上可接受的盐的药物组合物，用于治疗癌症。
又一实施方式提供在需要治疗的哺乳动物中治疗或预防疼痛的方 法，其中所述方法包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的式I化合物或 其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
又一实施方式提供在需要治疗的哺乳动物中治疗或预防炎性障碍 的方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的式I化合 物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
又一实施方式提供在细胞中抑制SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶活性的 方法，包括用式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受 的盐处理细胞。
又一实施方式提供在细胞中抑制SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶活性的 方法，包括用式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受 的盐以有效减弱或消除SHP2激酶活性的量处理细胞。
又一实施方式提供在有需要的患者中抑制SHP2蛋白酪氨酸磷酸 酶活性的方法，包括向所述患者给予式I化合物或其立体异构体、互变 异构体或药学上可接受的盐的步骤。
在又一实施方式中，本发明提供抑制SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶活性 的方法，用于治疗癌症。
又一实施方式提供在有需要的患者中治疗过增殖障碍或改善其严 重性的方法，包括向所述患者给予式I化合物或其立体异构体、互变异 构体或药学上可接受的盐。
又一实施方式提供在有需要的患者中治疗过增殖障碍或改善其严 重性的方法，包括向所述患者共同给予式I化合物或其立体异构体、互 变异构体或药学上可接受的盐以及至少一种用来治疗或改善过增殖障碍 的其它化疗剂。
又一实施方式提供在有需要的患者中治疗疼痛或改善其严重性方 法，包括向所述患者给予式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药 学上可接受的盐。
又一实施方式提供在有需要的患者中治疗炎性障碍或改善其严重 性的方法，包括向所述患者给予式I化合物或其立体异构体、互变异构 体或药学上可接受的盐。
在又一实施方式中，提供治疗或预防受SHP2调节的疾病或障碍的 方法，包括向需要治疗的哺乳动物给予有效量的式I化合物或其立体异 构体、互变异构体或药学上可接受的盐。所述疾病和障碍的实例包括但 不限于过增殖疾病，比如癌症，和疼痛或炎性疾病。
又一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学 上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗过增殖疾病。又 一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接 受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗癌症。
又一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学 上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗疼痛。
又一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学 上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗炎性疾病。
又一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学 上可接受的盐的用途，其用于治疗过增殖疾病。又一实施方式提供式I 化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的用途，用于 治疗癌症。
又一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学 上可接受的盐的用途，用于治疗疼痛。
又一实施方式提供式I化合物或其立体异构体、互变异构体或药学 上可接受的盐的用途，用于治疗炎性疾病。
本发明也包括下述实施方式：
在本文描述的任何实施方式中定义的式I化合物或其药学上可接 受的盐，用作药物；
在本文描述的任何实施方式中定义的式I化合物或其药学上可接 受的盐，用于治疗癌症；
在需要治疗的受试者中治疗指示SHP2抑制剂的疾病的方法，包括 向受试者给予治疗有效量的在本文描述的任何实施方式中定义的式I化 合物或其药学上可接受的盐；
在本文描述的任何实施方式中定义的式I化合物或其药学上可接 受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗指示SHP2的抑制剂的 疾病或病况；
在本文描述的任何实施方式中定义的式I化合物或其药学上可接 受的盐，用于治疗指示SHP2的抑制剂的疾病或病况；或
用于治疗指示SHP2的抑制剂的疾病或病况的药物组合物，其包含 在本文描述的任何实施方式中定义的式I化合物或其药学上可接受的 盐。
在某些实施方式中，过增殖疾病是癌症。在某些实施方式中，癌症 可以选自黑色素瘤，幼年型单核细胞性白血病，成神经细胞瘤，费城染 色体阳性慢性髓性，费城染色体阳性急性成淋巴细胞白血病，急性髓性 白血病，骨髓增殖瘤(比如真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原 发性骨髓纤维化)，乳腺癌，肺癌，肝癌，结直肠癌，食管癌，胃癌，头 颈鳞状细胞癌，成胶质细胞瘤，间变性大细胞淋巴瘤，甲状腺癌，和斯 皮茨样瘤。在某些实施方式中，癌症是黑色素瘤。在某些实施方式中， 癌症是幼年型单核细胞性白血病。在某些实施方式中，癌症是成神经细 胞瘤。在某些实施方式中，癌症是费城染色体阳性慢性髓性。在某些实 施方式中，癌症是费城染色体阳性急性成淋巴细胞白血病。在某些实施 方式中，癌症是急性髓性白血病。在某些实施方式中，癌症是骨髓增殖 瘤，比如真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化。 在某些实施方式中，癌症选自真性红细胞增多症，原发性血小板增多症 和原发性骨髓纤维化。在某些实施方式中，癌症是真性红细胞增多症。 在某些实施方式中，癌症是原发性血小板增多症。在某些实施方式中， 癌症是原发性骨髓纤维化。在某些实施方式中，癌症是乳腺癌。在某些 实施方式中，癌症是肺癌。在某些实施方式中，癌症是肝癌。在某些实 施方式中，癌症是结直肠癌。在某些实施方式中，癌症是食管癌。在某 些实施方式中，癌症是胃癌。在某些实施方式中，癌症是头颈鳞状细胞癌。在某些实施方式中，癌症是成胶质细胞瘤。在某些实施方式中，癌 症是间变性大细胞淋巴瘤。在某些实施方式中，癌症是甲状腺癌。在某 些实施方式中，癌症是斯皮茨样瘤。在某些实施方式中，癌症选自 NSCLC，结肠癌，食管癌，直肠癌，幼年型单核细胞性白血病("JMML")， 乳腺癌，黑色素瘤，和胰腺癌。
在某些实施方式中，疾病或障碍可以选自神经纤维瘤病和努南综合 征。在某些实施方式中，疾病或障碍是神经纤维瘤病。在某些实施方式 中，疾病或障碍是努南综合征。
在某些实施方式中，疾病或障碍是神经鞘瘤病。
在某些实施方式中，疾病或障碍包含含有编码KRASG12C变型的突 变的细胞。参见WO 2019/051084。
在某些实施方式中，过增殖疾病是疾病或障碍，其包含具有编码 NF1功能丢失("NF1LOF")变型的突变的细胞。在某些实施方式中，NF1 突变是功能丢失突变。在某些实施方式中，疾病或障碍是肿瘤，其包含 具有NF1功能丢失突变的细胞。在某些实施方式中，肿瘤是NSCLC或 黑色素瘤肿瘤。在某些实施方式中，疾病选自神经纤维瘤病类型I，神 经纤维瘤病类型II，神经鞘瘤病，和Watson综合征。
在某些实施方式中，疾病或障碍与受试者细胞中的RAS途径突变 有关，其使得所述细胞至少部分依赖通过SHP2的信号转导。在某些实 施方式中，RAS途径突变是选自KRAS突变、NRAS突变、SOS突变、 BRAF类型III突变，类型I MEKl突变，类型II MEKl突变和F1突变的RAS突变。在某些实施方式中，KRAS突变选自KRASG12A突变， KRASG12C突变，KRASG12D突变，KRASG12F突变，KRASG12l突变， KRASG12L突变，KRASG12R突变，KRASG12S突变，KRASG12V突变，和KRASG12Y突变。在某些实施方式中，KRAS突变是KRASG12A突变。在 某些实施方式中，KRAS突变是KRASG12C突变。在某些实施方式中， KRAS突变是KRASG12D突变。在某些实施方式中，KRAS突变是 KRASG12F突变。在某些实施方式中，KRAS突变是KRASG12l突变。在 某些实施方式中，KRAS突变是KRASG12L突变。在某些实施方式中， KRAS突变是KRASG12R突变。在某些实施方式中，KRAS突变是 KRASG12S突变。在某些实施方式中，KRAS突变是KRASG12V突变。在 某些实施方式中，KRAS突变是KRASG12Y突变。在某些实施方式中， BRAF类型III突变选自人类BRAF中的一种或多种下述氨基酸取代： D287H；P367R；V459L；G466V；G466E；G466A；S467L；G469E；N581S；N581I；D594N；D594G；D594A；D594H；F595L；G596D； G596R和A762E。在某些实施方式中，类型I MEKl突变选自人类MEKl 中的一种或多种下述氨基酸取代：D67N；P124L；P124S；和L177V。 在某些实施方式中，类型II MEKl突变选自人类MEKl中的一种或多种 下述氨基酸取代：AE51-Q58；AF53-Q58；E203K；L177M；C121S； F53L；K57E；Q56P；和K57N。
联合疗法
本文描述的化合物及其立体异构体、互变异构体和药学上可接受的 盐可以单独或与其它治疗剂组合用于治疗。本文描述的化合物可以与一 种或多种额外药物组合使用，例如通过作用于不同靶标蛋白质起作用的 抗过增殖(或抗癌)剂。药物组合配制剂或剂量给药方案的第二化合物优 选具有与本文描述的化合物互补的活性，从而它们相互并无不利影响。 所述分子适宜地以对期望意图有效的量存在于组合中。化合物可以在单 元式的药物组合物中一起给予或分开给予，并且在分开给予时可以同时 或以任何顺序依次进行。所述顺序给药可以是时间上密集的或时间上远 离的。
短语"一起给药"，"共同给药"，"同时给药"和"同时地给予"意指 化合物在组合中给予。
在又一实施方式中，本发明提供治疗方法，其包括将本发明化合物 与一种或多种其它药物试剂组合给予，其中所述一种或多种其它药物试 剂可以选自本文讨论的试剂。
在某些实施方式中，式I化合物与RAS途径抑制剂组合给予。在 某些实施方式中，RAS途径抑制剂是MEK抑制剂或ERK抑制剂。在 某些实施方式中，Ras途径的抑制剂选自下述的一种或多种：曲莫替尼， 贝美替尼(binimetinib)，司美替尼，考比替尼(cobimetinib)，LErafAON (NeoPharm)，ISIS 5132；威罗菲尼，哌吗色替，TAK733，R04987655 (CH4987655)；CI-1040；PD-0325901；CH5126766；MAP855；AZD6244； Refametinib(RDEA 119/BAY 86-9766)；GDC-0973/XL581；AZD8330 (ARRY-424704/ARRY-704)；R05126766；ARS-853；LY3214996； BVD523；GSK1 120212；Ulixertinib，和Abemaciclib，包括具体命名 化合物的药学上可接受的盐和所述具体命名化合物和盐的药学上可接受 的溶剂化物。在某些实施方式中，Ras途径的抑制剂选自下述的一种或 多种：曲莫替尼，贝美替尼，司美替尼和考比替尼，包括具体命名化合 物的药学上可接受的盐和所述具体命名化合物和盐的药学上可接受的溶 剂化物。在某些实施方式中，Ras途径的抑制剂是贝美替尼，包括贝美 替尼的药学上可接受的盐和药学上可接受的溶剂化物。
在某些实施方式中，Ras途径的抑制剂是B-Raf抑制剂。在某些实 施方式中，B-Raf抑制剂选自下述的一种或多种：康奈非尼(encorafenib)， 威罗菲尼和达拉非尼，包括具体命名化合物的药学上可接受的盐和所述 具体命名化合物和盐的药学上可接受的溶剂化物。在某些实施方式中，Ras途径的抑制剂是B-Raf抑制剂。在某些实施方式中，B-Raf抑制剂是康奈非尼，包括康奈非尼的药学上可接受的盐和药学上可接受的溶剂 化物。
在某些实施方式中，式I化合物与MEK抑制剂和B-Raf抑制剂组 合给予。在某些实施方式中，MEK抑制剂选自曲莫替尼，贝美替尼， 司美替尼和考比替尼，和B-Raf抑制剂选自康奈非尼，威罗菲尼和达拉 非尼，包括具体命名化合物的药学上可接受的盐和所述具体命名化合物 和盐的药学上可接受的溶剂化物。在某些实施方式中，MEK抑制剂是 贝美替尼，和B-Raf抑制剂是康奈非尼，包括具体命名化合物的药学上 可接受的盐和所述具体命名化合物和盐的药学上可接受的溶剂化物。
在某些实施方式中，式I化合物与RAS途径抑制剂组合给予。在 某些实施方式中，Ras途径的抑制剂是KRAS抑制剂。在某些实施方式 中，KRAS抑制剂选自BI 1701963和BBP-454。在某些实施方式中，Ras 途径的抑制剂是KRAS G12C抑制剂。在某些实施方式中，KRASG12C 抑制剂选自MRTX849，AMG 510，和ARS1620。
在某些实施方式中，式I化合物与ALK抑制剂组合给予。在某些 实施方式中，ALK抑制剂选自劳拉替尼(lorlatinib)，克唑替尼，色瑞替 尼(ceritinib)，阿来替尼(alectinib)和布加替尼(brigatinib)，包括具体命 名化合物的药学上可接受的盐和所述具体命名化合物和盐的药学上可接 受的溶剂化物。在某些实施方式中，ALK抑制剂是劳拉替尼，包括劳拉 替尼的药学上可接受的盐和药学上可接受的溶剂化物。
这些试剂和本发明化合物能够与药学上可接受的媒介物比如盐水， 林格溶液，右旋糖溶液等组合。特别的给药方案，即剂量、时机和重复， 将取决于特定个体和该个体的病史。
可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用的剂量和浓度对接受者无 毒，并且可以包含缓冲剂比如磷酸，柠檬酸和其它有机酸；盐比如氯化 钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(比如十八烷基二甲基 苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苄醇； 羟苯烷基酯类，比如羟苯甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3- 戊醇；和间-甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质比如血清 白蛋白，明胶或Igs；亲水聚合物比如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸比如甘 氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖， 和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂比如EDTA； 糖类比如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨糖醇；成盐平衡离子比如钠离子； 金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂比如 TWEENTM，PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
含有这些试剂和/或本发明化合物的脂质体通过本领域已知的方法 制备，比如描述于U.S.专利号4,485,045和4,544,545。具有增强的循环 时间的脂质体公开于U.S.专利号5,013,556。特别有用的脂质体能够通过 反相蒸发方法用包含磷脂酰胆碱，胆固醇和PEG-衍生化磷脂酰乙醇胺 (PEG-PE)的脂质组合物来产生。脂质体通过定义孔径尺寸的过滤器挤 出，产生希望直径的脂质体。
这些试剂和/或本发明化合物还可以包埋在例如通过团聚技术或通 过界面聚合制备的微胶囊中，分别例如羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚 -(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，存在于胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋 白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中或粗乳液中。所述技术公开于 上文所述之Remington:The Science and Practice ofPharmacy。
可以使用持续释放制剂。持续释放制剂的适宜实例包括含有本发明 抗体/化合物的固体疏水聚合物半渗透基质，所述基质呈成型制品例如膜 或微胶囊形式。持续释放基质的实例包括聚酯，水凝胶(例如聚(2-羟基乙 基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯基醇))，聚丙交酯(U.S.专利号3,773,919)， L-谷氨酸和7乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯， 可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物比如LUPRON DEPOTTM中使用的那些 (乳酸-羟基乙酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球)，蔗糖乙酸酯 异丁酸酯，和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
用于静脉内给药的配制剂必须无菌。这通过例如过滤通过无菌过滤 膜容易地实现。本发明化合物一般置于具有无菌提取接口的容器中，例 如静脉内溶液袋或具有皮下注射针可穿透的塞子的小瓶。
适宜的乳液可以用可商购的脂肪乳液比如IntralipidTM， LiposynTM，InfonutrolTM，LipofundinTM和LipiphysanTM制备。活性成 分可以溶于预混的乳液组合物中，或者其另选地可以溶于油(例如大豆 油、红花油、棉籽油、芝麻油玉米油或扁桃油)中并且在与磷脂(例如卵 磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)和水混合时形成乳液。应认识到可以加入 其它成分例如甘油或葡萄糖来调节乳液张力。适宜的乳液一般含有多至 20％例如5至20％的油。脂肪乳液能够包含0.1至1.0μm、特别是0.1 和0.5μm的脂肪微滴，和具有范围5.5至8.0的pH。
乳液组合物能够是通过将本发明化合物与IntralipidTM或其组分 (大豆油，卵磷脂，甘油和水)混合制备的那些。
用于吸入或吹入的组合物包括在药学上可接受的水性或有机溶剂 或其混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可以含有 适宜的药学上可接受的赋形剂，如上文所述。在某些实施方式中，组合 物通过口或鼻呼吸系统途径给予用于局部或全身性效果。在优选无菌的 药学上可接受的溶剂中的组合物可以通过使用气体来雾化。雾化溶液可 以从雾化装置直接呼吸或者雾化装置可以连接至面罩、塞条或间歇正压 呼吸设备。溶液、悬浮液或粉末组合物可以从以适当方式递送配制剂的 装置给予，优选口服或鼻部给予。
本发明的又一方面提供试剂盒，其包括本发明化合物或包含本发明 化合物的药物组合物。试剂盒除了本发明化合物或其药物组合物之外还 可以包括诊断剂或治疗剂。试剂盒还可以包括在诊断或治疗方法中使用 的指南。在某些实施方式中，试剂盒包括化合物或其药物组合物和诊断 剂。在其它实施方式中，试剂盒包括化合物或其药物组合物和一种或多 种治疗剂，比如Ras途径的抑制剂。
在又一实施方式中，本发明包含适用于进行本文治疗方法的试剂 盒。在一种实施方式中，试剂盒含有第一剂型，其包含数量足以进行本 发明方法的一种或多种本发明化合物。在又一实施方式中，试剂盒包含 数量足以进行本发明方法的一种或多种本发明化合物和用于所述剂量的 容器和用于所述剂量的容器。
实施例
出于示例性意图包括下述实施例。然而，应理解这些实施例并不限 制本发明并且仅意在提示实施本发明的方法。本领域技术人员将认识到 可以容易地调节所描述的化学反应来制备本文描述的许多其它化合物， 并且制备化合物的备择方法视为属于本发明范围。例如，未举例说明的 化合物的合成可以通过对本领域技术人员来说是明显的修饰成功地进 行，例如适当地保护干扰性基团、运用本领域已知的不同于所描述那些 的其它适宜试剂和/或进行反应条件的常规修饰。另选地，本文公开或本 领域已知的其它反应将视为可以用来制备本文描述的其它化合物。
在下文描述的实施例，除非另有指定全部温度按摄氏度计。试剂购 自商业供应商比如Sigma-Aldrich、Alfa Aesar或TCI并且不加进一步 纯化地使用，除非另有指定。
下文描述的反应一般完成如下：在氮或氩正压下或用干燥管(除非 另有说明)，在无水溶剂中，且反应烧瓶一般配有橡胶塞用于经由注射器 引入底物和试剂。玻璃仪器炉干和/或热干。
柱色谱法在具有硅胶柱的Biotage系统(生产商：Dyax公司)上或在 二氧化硅SepPak柱(Waters)上完成(除非另有说明)。1H NMR谱图在于 400MHz运行的Varian设备上记录。1H-NMR谱图作为CDCl3，CD3OD， D2O，(CD3)2SO，(CD3)2CO，C6D6，CD3CN溶液获得(按ppm报告)， 用四甲基硅烷(0.00ppm)或残余溶剂(CDCl3：7.26ppm；CD3OD：3.31 ppm；D2O：4.79ppm；(CD3)2SO：2.50ppm；(CD3)2CO：2.05ppm； C6D6：7.16ppm；CD3CN：1.94ppm)作为参照标准。在报告峰多重性的 情况下，使用下述缩写：s(单峰)，d(二重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)， m(多重峰)，br(宽峰)，dd(双二重峰)，dt(双三重峰)。在提供偶联常数 的情况下按Hertz(Hz)报告。
生物学实施例1
SHP2酶学测试
为全长SHP2配置荧光强度动力学测试，其监测SHP2水解磷酸 6,8-二氟-4-甲基伞形酮基酯("DiFMUP")形成的6,8-二氟-7-羟基-4-甲基 香豆素("DiFMU")的量。测试混合物组成如下：25mM K+HEPES，pH 7.4，0.01％Triton X-100，1mM DTT，50mM KCl，100μg/mL牛γ- 球蛋白，50μM DiFMUP，1μM SHP2活化肽 (LN(pY)IDLDLV(dPEG8)LST(pY)ASINFQK-酰胺)，1nM全长SHP2 (His6-标签化的SHP2(2-527)，在大肠杆菌中重组表达且室内纯化)和2％ 二甲亚砜("DMSO")(来自化合物)。化合物一般在DMSO中按10-点定 量给料范围稀释，其使用最高剂量20μM的3-倍系列稀释方案。测试在 384-孔、聚苯乙烯、低体积、未处理的黑色微量滴定板(Costar 4511)中 进行，最终体积20μL。低对照孔缺少酶。加入SHP2和活化肽的混合物 引发测试，并且在轨道摇动器上混合15秒后在环境温度、在PerkinElmerEnVision微读板器上(λEx＝355nm，λEm＝460nm)以动力学模式读数 15分钟(30秒/循环)。初始速度(t＝0的切线斜率)通过轻度非线性进度曲 线指数拟合估算，然后用下述公式转化为对照的百分比("POC")：
Figure BDA0003355983310000501
其中：
Figure BDA0003355983310000502
平均未抑制的对照
Figure BDA0003355983310000503
平均背景
用4-参数对数模型来拟合各化合物的POC数据。从拟合估算IC50并且定义为曲线通过50POC的化合物浓度。
表1含有本文公开的实施例的代表性数据。表1中报告的IC50可 以来自单次测试或多次测试的平均值。实施例1-14在上述测试中测试并 且测得具有小于10μM的IC50。实施例1，2，4，5，6，7，8，9，11， 12，13和14在上述测试中测试并且测得具有小于500μM的IC50。实施例1-14在上述测试中测试并且测得具有1μM或更低的IC50。
表1含有在上述测试中测试的实施例：
Figure BDA0003355983310000511
生物学实施例2
细胞磷酸-p44/42MAPK(Erk1/2)(Thr202/Tyr204)测试
通过下述细胞测试确定对ERK1/2(Thr202/Tyr204)磷酸化的抑制， 其包括用化合物温育细胞1小时和通过在固定细胞上的In-Cell Western 测试定量pERK信号并标准化为GAPDH信号。KYSE520细胞得自 DSMZ并在RPMI中生长，其补充有10％胎牛血清，青霉素/链霉素，2 mM的0.85％NaCl中的L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺二肽(GlutamaxTM)，非 必需氨基酸，和丙酮酸钠。细胞在96-孔板中以30,000细胞/孔铺板并且 使之在37℃/5％CO2贴壁过夜。细胞用制备为10-点1:3稀释系列(范围： 20μM-1nM)的化合物处理，最终DMSO浓度为0.5％。在1小时温育 之后，在室温下将细胞在3.7％甲醛/Dulbecco磷酸缓冲盐水("dPBS")中 固定20分钟。然后用dPBS洗涤细胞并在室温下在100％MeOH中透化 10分钟。在透化之后，在dPBS中洗涤细胞和在LI-COR阻断缓冲剂 (LI-COR Biosciences，Cat#927-40000)中温育1小时或更长。然后用对 MEK-依赖性ERK1/2磷酸化位点(在MAP激酶信号转导途径的SHP2 下游)苏氨酸202和酪氨酸204特异性的抗体(Cell Signaling Technologies；Cat#9101)，以及GAPDH(Millipore；Cat#MAB374)温 育板。pErk1/2(Thr202/Tyr204)抗体在含有0.05％聚山梨酸酯-20(吐温 -20)的LI-COR阻断缓冲剂中1:250稀释；GAPDH以1:2,500稀释。各 板在4℃温育过夜。在用PBS/0.05％吐温-20洗涤之后，将细胞与荧光标 记的二抗(抗-兔-AlexaFlour680，Invitrogen Cat#A21109；抗-小鼠 -IRDye800CW，Li-cor Bioscieces Cat#926-32210，均于1:1000稀释)温 育1小时。然后如上洗涤细胞，并用Aerius红外成像系统(LI-COR Biosciences，模型9250)分析其680nm和800nm波长的荧光。对于各孔， 将磷酰化的Erk1/2(Thr202/Tyr204)信号标准化为GAPDH信号。在 BioAssay软件中用4参数拟合从标准化值计算IC50值。表2含有本文公 开的实施例的代表性数据。表2中报告的IC50可以来自单次测试或多次 测试的平均值。
表2含有在上述测试中测试的所选实施例：
Figure BDA0003355983310000531
中间体实施例A
Figure BDA0003355983310000541
2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇
步骤A：在Ar气下，将3-巯基丙酸2-乙基己基酯(2.3mL，22mmol) 和Hunig碱(6.9mL，39mmol)加入3-氯-4-碘吡啶-2-胺(5.0g，20mmol)、 Pd(OAc)2(0.22g，0.98mmol)和xantphos(1.1g，2.0mmol)在二噁烷(65 mL，20mmol)中的混合物。在氩下将反应加热至100℃持续18小时。 反应稀释于乙酸乙酯("EtOAc")中并过滤通过硅藻土
Figure BDA0003355983310000543
浓缩滤液，提供3-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(4.3g，17mmol，88％收 率)。
步骤B：将NaOEt(7.1mL，19mmol)加入3-((2-氨基-3-氯吡啶-4- 基)硫基)丙酸甲酯(4.3g，17mmol)/四氢呋喃("THF")(87mL，17mmol) 和在室温下在N2下搅拌1小时。加入二氯甲烷("DCM")(20mL)，和将 该混合物搅拌5分钟。浓缩反应，固体与DCM研磨，过滤，和干燥。 固体用水处理(浆料)，和加入1N HCl使pH达到约6。过滤固体和用水 洗涤，提供2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇(1.4g，9.0mmol，52％收率)。1H NMR (400MHz，(CD3)2SO)δ11.4(br，1H)，7.06(d，1H，J＝6.8Hz)，6.70(br， 2H)，6.65(d，1H，J＝7.0Hz)；m/z(esi/APCI)M+1＝161.0。
中间体实施例B
Figure BDA0003355983310000542
3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-硫醇
步骤A：将3-氯-2-氟-4-碘吡啶(8.0g，31.1mmol)和甲胺(42.7mL， 85.5mmol)置于DMSO(20mL)和加热至70℃持续30分钟。加水，过滤 固体，提供粗制产品。物质通过硅胶纯化(0-5％MeOH，在含2％NH4OH 的DCM中)，提供3-氯-4-碘-N-甲基吡啶-2-胺(6.34g，23.6mmol，76％ 收率)。
步骤B：将3-氯-4-碘-N-甲基吡啶-2-胺(1g，3.7mmol)用二噁烷(5mL) 稀释，随后加入PdOAc2(41.8mg，0.19mmol)，xantphos(215.5mg， 0.37mmol)和3-巯基丙酸甲酯(453.8μL，4.10mmol)。反应置于氮下，和 加入DIEA(1301μL，7.50mmol)。反应加热至100℃和搅拌2.3小时。 让反应冷却，用乙酸乙酯稀释和过滤通过
Figure BDA0003355983310000552
用乙酸乙酯冲洗。浓 缩滤液，提供3-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(905mg， 3.471mmol，93％收率)。
将3-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(905mg，3.47 mmol)用THF(15mL)稀释，随后加入乙醇钠(1425μL，3.82mmol)。反 应置于氮下和在环境温度搅拌1小时。浓缩反应并与DCM研磨。物质 用水稀释，和将pH调节至约6。过滤混合物，用水冲洗和减压干燥，提 供3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-硫醇(400mg，2.29mmol，66.0％收率)。m/z (esi/APCI)M+1＝175.0。
中间体实施例C
Figure BDA0003355983310000551
5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇
步骤A：在Ar气下将3-巯基丙酸2-乙基己基酯(0.12mL，1.1mmol) 和Hunig碱(0.34mL，1.9mmol)加入5-氯-4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶 (0.270g，0.97mmol)，Pd(OAc)2(0.011g，0.048mmol)和xantphos(0.056 g，0.097mmol)在二噁烷(3.2mL，0.97mmol)中的混合物。在氩下将反 应加热至100℃持续18小时。反应稀释于EtOAc和过滤通过硅藻土
Figure BDA0003355983310000553
Figure BDA0003355983310000554
浓缩滤液，然后在硅胶上纯化，用10-100％EtOAc/己烷洗脱，提 供3-((5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(0.225g，0.83 mmol，85％收率)。
步骤B：将NaOEt(0.34mL，0.91mmol)加入3-((5-氯-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(0.225g，0.83mmol)/四氢呋喃("THF") (4.146mL，0.83mmol)和在室温下搅拌2小时。加入DCM(20mL)，该 混合物搅拌5分钟。浓缩反应，然后在硅胶上纯化，用0-20％MeOH/DCM (2％NH4OH)洗脱，提供5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇(0.080g，0.43mmol，52％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝185.0。
中间体实施例D
Figure BDA0003355983310000561
(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
步骤A：将1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(25g，83 mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(30g，249mmol)和Ti(OEt)4(122 mL，580mmol)加热至90℃持续18小时。加入EtOAc，随后水。滤出 固体，和分层。有机层在MgSO4上干燥，过滤和浓缩得到残余物，其通 过硅胶纯化(0-40％EtOAc/己烷)，提供(R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(16g，39mmol，47％收率)。
步骤B：将(R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(6.5g，16mmol)置于THF(10mL)和冷却至-78℃。 加入硼氢化锂(14mL，28mmol)，和让反应缓慢地温热至室温和搅拌18 小时。加水，和混合物用DCM(3X 25mL)萃取。合并萃取物和浓缩， 所得残余物通过硅胶纯化(0-5％MeOH，在含2％NH4OH的DCM中)，提供(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸 叔丁酯(3.2g，8mmol，50％收率)。
步骤C：将(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(3.1g，7.6mmol)置于DCM(50mL)和冷却至0℃。加 入三氟乙酸("TFA")(7mL)，和搅拌反应2.5小时。浓缩反应，所得残 余物分散于饱和碳酸氢盐。混合物用DCM萃取。干燥萃取物，过滤和 浓缩，提供(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺 酰胺(1.8g，5.9mmol，78％收率)。
中间体实施例E
Figure BDA0003355983310000571
(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
将(S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二盐酸盐(1.00g，3.63mmol)悬 浮于二噁烷(15mL)，和将三乙胺(1.84g，18.2mmol)加入混合物。混合 物在室温下搅拌20分钟然后加入3,6-二溴-1,2,4-三嗪(0.868g，3.63 mmol)。反应加热至50℃和搅拌2小时。在2小时之后，过滤反应，蒸 发滤液，提供残余物。残余物用40g硅胶柱色谱法纯化(MeOH/DCM混 合物2-20％)，提供(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-胺(1.19g，3.30mmol，90.9％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1 ＝400.2。
中间体实施例F
Figure BDA0003355983310000572
(R)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶 -6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：将2-氯吡啶(458mL，4.84mmol)溶于无水THF(15mL)， 和溶液在IPA/无水冰浴冷却至-70℃。将二异丙基氨基锂("LDA")(2.75 mL，5.50mmol)滴加至混合物，将反应温热至-60℃和在该温度搅拌1.5 小时。将4-甲酰基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，4.40mmol)/THF(3 mL)加入混合物和在-60℃搅拌1小时。反应用水淬灭和在EtOAc与水之间分配。分离有机层，干燥，和浓缩。所得残余物用40g硅胶柱(EtOAc/ 己烷10-80％)纯化，产生4-((2-氯吡啶-3-基)(羟基)甲基)-4-甲基哌啶-1- 羧酸叔丁酯(1.06g，3.11mmol，71％收率)。
步骤B：将4-((2-氯吡啶-3-基)(羟基)甲基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯 (1.06g，3.11mmol)溶于DCM(8mL)，将Dess-Martin高碘试剂 (periodinane)("DMP")(2.64g，6.22mmol)加入溶液。混合物在室温下 搅拌1小时，用10％亚硫酸氢钠溶液猝灭。分开有机层，用饱和碳酸氢 钠溶液和盐水洗涤，干燥和蒸发。所得残余物用硅胶快速色谱法(EtOAc/己烷10-100％)纯化，提供4-(2-氯烟酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.31 g，0.92mmol，29％收率)，是油状物。
步骤C：在压力管中将4-(2-氯烟酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯 (8.13g，24.0mmol)溶于均三甲苯(70mL)。将三环己基鏻四氟硼酸盐 (0.884g，2.40mmol)，二乙酰氧基钯(0.269g，1.20mmol)，新戊酸(0.735 g，7.20mmol)和碳酸铯(15.6g，48.0mmol)加入反应混合物。在反应混 合物中鼓泡氮气5分钟，和将管密封和在140℃加热72小时。反应冷却至室温和用EtOAc(50mL)稀释。混合物用
Figure BDA0003355983310000581
垫过滤和用EtOAc数 次洗涤。滤液减压蒸发，提供残余物。残余物用330g二氧化硅柱纯化 (EtOAc/己烷20-80％)，提供5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(2.23g，7.37mmol，31％收率)，是固体。m/z (esi/APCI)M+1＝303.1。
步骤D：将5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(2.23g，7.37mmol)悬浮于四乙氧基钛(6.98mL，51.62mmol)， 和将(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.68g，22.12mmol)加入混合物。将反 应加热至90℃和搅拌18小时。反应冷却至室温，和加入EtOAc(250mL)、 随后盐水(200mL)。激烈搅拌混合物10分钟和过滤除去沉淀。分离EtOAc层和用盐水洗涤两次，干燥和蒸发。所得残余物用120g硅胶柱 纯化(EtOAc/己烷10-100％)。收集第二洗脱峰，提供(R,Z)-5-((叔丁基亚 磺酰基)亚氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁 酯(2.8g，6.90mmol，94％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝406.2。
步骤E：在小瓶中将(R,Z)-5-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-5,7-二氢螺 [环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.15g，0.37mmol)溶于 THF(2mL)。溶液冷却至-78℃，一批加入LiBH4(0.28mL，0.55mmol) 的2M THF溶液。反应在-78℃保持1小时。反应缓慢温热至室温和搅拌 18小时。反应用饱和NH4Cl萃取随后用EtOAc(3X 10mL)淬灭。经合 并的有机层用盐水洗涤，干燥和蒸发。所得残余物用柱色谱法用24g二 氧化硅柱(EtOAc/己烷10-80％)纯化，提供作为次要产品的(R)-5-(((R)- 叔丁基亚磺酰基)氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(30mg，0.27mmol，24％收率)，是固体，和作为主要产品的 另一非对映体(S)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并 [b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(51mg，0.27mmol，35％收率)。m/z (esi/APCI)M+1＝408.2。
中间体实施例G
Figure BDA0003355983310000591
2,3-二甲基吡啶-4-硫醇
2,3-二甲基吡啶-4-硫醇根据中间体实施例A制备，在步骤A中用4- 溴-2,3-二甲基吡啶代替3-氯-4-碘吡啶-2-胺。m/z(esi/APCI)M+1＝140.1。
中间体实施例H
Figure BDA0003355983310000592
2-氨基-5-氯吡啶-4-硫醇
2-氨基-5-氯吡啶-4-硫醇根据中间体实施例A制备，在步骤A中用 4-溴-5-氯吡啶-2-胺代替3-氯-4-碘吡啶-2-胺。m/z(esi/APCI)M+1＝ 161.1。
中间体实施例I
Figure BDA0003355983310000593
3-氯-2-(三氟甲基)吡啶-4-硫醇
3-氯-2-(三氟甲基)吡啶-4-硫醇根据中间体实施例A制备，在步骤A 中用3-氯-4-碘-2-(三氟甲基)吡啶代替3-氯-4-碘吡啶-2-胺。m/z(esi/APCI) M+1＝214.0。
中间体实施例J
Figure BDA0003355983310000601
2-氨基-3-溴吡啶-4-硫醇
2-氨基-3-溴吡啶-4-硫醇根据中间体实施例A制备，在步骤A中用 3-溴-4-碘吡啶-2-胺代替3-氯-4-碘吡啶-2-胺。m/z(esi/APCI)M+1＝ 205.0。
中间体实施例K
Figure BDA0003355983310000602
3-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯
将2-氨基-3-氟-4-碘吡啶(1.1g，4.4mmol)溶于1,4-二噁烷(10mL， 4.4mmol)。将4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.26g，0.45mmol)， 和3-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(0.95g，4.1mmol)加入反应 溶液。反应置于氮下。加入N,N-二异丙基乙胺(1.5mL，8.9mmol)，所 得溶液在100℃搅拌过夜。粗制物质加载于80g硅胶柱和以0-100％EtOAc:己烷梯度纯化，提供3-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯 (0.95g，92％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝231.1。
中间体实施例L
Figure BDA0003355983310000611
3-((6-氨基-2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)丙酸甲酯
3-((6-氨基-2-(三氟甲基)吡啶-3-基)硫基)丙酸甲酯根据中间体实施例 K制备，在步骤A中用5-溴-6-三氟甲基吡啶-2-基胺代替2-氨基-3-氟-4- 碘吡啶。m/z(esi/APCI)M+1＝281。
中间体实施例M
Figure BDA0003355983310000612
3-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-硫醇钠
步骤A：将3-氯-2-氟-4-碘吡啶(2.0g，7.77mmol)和4-羟基哌啶(1.18 g，11.7mmol)的DMSO(5mL)溶液加热至75℃持续1小时。溶液冷却 至室温，用水稀释(10mL)和用EtOAc/甲基叔丁基醚("MTBE")(2/1)分 配。滤出层间形成的固体，减压干燥，提供1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)哌啶 -4-醇(1.08g，70％)。m/z(esi)M+1＝339.0。
步骤B：在20mL小瓶中，将1-(3-氯-4-碘吡啶-2-基)哌啶-4-醇(0.50 g，1.48mmol)溶于二噁烷(5mL)，然后向小瓶充氮。加入3-巯基丙酸甲 基酯(0.195g，1.62mmol)随后是Hunig碱(0.514mL，2.95mmol)。在5 分钟之后，加入Pd(OAc)2(0.017g，0.074mmol)随后xantphos(0.086g， 0.15mmol)。将小瓶封盖，超声和加热至105℃持续2.5小时。混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，和过滤通过
Figure BDA0003355983310000613
垫。将垫用EtOAc洗涤， 蒸发溶液至干，提供粘稠固体，其用于后续步骤而不加进一步纯化。m/z (esi)M+1＝331.0。
步骤C：将3-((3-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯 (0.58g，1.75mmol)溶于无水二噁烷(9mL)，和在室温下在氮下加入乙 醇钠(21％重量，在EtOH中，2.4mL，2.1mmol)。混合物搅拌3小时， 和蒸发溶剂至干。所得固体与MTBE(5mL)研磨两次。粗制物质减压干 燥，提供粗制3-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-硫醇钠(563mg)，其直接使用而不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝245.0-247.0。
中间体实施例N
Figure BDA0003355983310000621
1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇
步骤A：在氩气下将3-巯基丙酸2-乙基己基酯(0.35mL，3.27mmol) 和Hunig碱(1.035mL，5.94mmol)加入4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.73 g，2.971mmol)，Pd(OAc)2(0.033g，0.15mmol)和xantphos(0.17g， 0.30mmol)在1,4-二噁烷(14.85mL，2.97mmol)中的混合物。在氩下将 反应加热至100℃持续3小时。冷却反应，稀释于EtOAc(100mL)然后 过滤通过硅藻土
Figure BDA0003355983310000623
浓缩滤液，所得粗制产品用快速色谱法纯化， 用10至100％EtOAc/己烷梯度洗脱，产生3-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4- 基)硫基)丙酸甲酯(0.69g，2.92mmol，98％收率)，是固体。m/z(esi/APCI) M+1＝237.1。
步骤B：将NaOEt(1.14mL，3.07mmol)加入3-((1H-吡咯并[2,3-b] 吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(0.69g，2.92mmol)/THF(14.6mL，2.92mmol) 和在室温下搅拌1小时。加入DCM(20mL)，该混合物搅拌5分钟。浓 缩反应，固体与DCM(25mL)研磨，过滤和空气干燥。粗制产品用快速 色谱法纯化，用0至20％MeOH/DCM梯度和2％NH4OH添加剂洗脱， 产生1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇钠盐(0.19g，1.07mmol，37％收率)， 是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝151.1。
中间体实施例O
Figure BDA0003355983310000622
1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇
1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇根据中间体实施例N制备，在 步骤A中用4-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶代替4-溴-1-甲基-1H-吡咯并 [2,3-b]吡啶。m/z(esi/APCI)M+1＝165.1。
中间体实施例P
Figure BDA0003355983310000631
(S)-(1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯
步骤A：将(S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二盐酸盐(11.3g，41.0 mmol)的二甲基乙酰胺("DMA")(205mL，41.0mmol)溶液用氩吹扫15 分钟，随后加入N,N-二异丙基乙胺("DIEA")(28.7mL，164mmol)。该 混合物在氮下加热至60℃，在45分钟内通过加液漏斗将3,6-二溴-1,2,4- 三嗪(10.0g，41.9mmol)的DMA(10mL)溶液缓慢加入。冷却混合物， 倾于水上(1L)，和搅拌30分钟。所得固体通过过滤收集和用水洗涤(2X 250mL)。该物质通过快速色谱法纯化，用1至10％MeOH/DCM梯度 和1％NH4OH调节剂洗脱，提供(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢 螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(9.0g，25.0mmol，61％收率)。m/z(esi/APCI)M+1 ＝361.2。
步骤B：将A(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-胺(3.0g，8.33mmol)，二碳酸二叔丁酯(5.45g，25.0mmol)和N,N- 二甲基吡啶-4-胺(0.051g，0.42mmol)在二氯乙烷("DCE")中的混合物 (41.6mL，8.33mmol)在室温下搅拌2小时。将混合物加至水(250mL) 和DCM(100mL)。分开两相混合物，水相用DCM(2X 150mL)萃取。 合并有机物，用盐水洗涤(150mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。 物质经由快速色谱法纯化，用10-100％EtOAc/己烷洗脱，产生(S)-(1'-(6- 溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.75 g，1.63mmol，20％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M，M+2＝460.1， 462.1。
步骤C：在氩气下将3-巯基丙酸2-乙基己基酯(0.10mL，0.91mmol) 和Hunig碱(0.29mL，1.65mmol)加入(S)-(1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.38g，0.83mmol)， Pd(OAc)2(0.0093g，0.041mmol)和xantphos(0.048g，0.083mmol)在 二噁烷(8.25mL，0.83mmol)中的混合物。该反应混合物加热至100℃持 续1小时。冷却混合物，稀释于EtOAc(25mL)然后过滤通过硅藻土
Figure BDA0003355983310000642
Figure BDA0003355983310000643
浓缩滤液，所得粗制产品用快速色谱法纯化，用10至100％EtOAc/ 己烷梯度洗脱，产生(S)-3-((3-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)丙酸甲酯(0.41g，0.83mmol，100％收 率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝500.2。
步骤D：将NaOEt(0.62mL，1.65mmol)加入(S)-3-((3-(1-((叔丁氧 羰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)丙酸甲 酯(0.41g，0.83mmol)的THF(8.25mL，0.83mmol)溶液。该混合物在 室温下搅拌30分钟。减压浓缩反应混合物和用快速色谱法纯化，用0 至20％MeOH/EtOAc梯度洗脱，产生(S)-(1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.19g，0.45mmol， 54％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝414.2。
中间体实施例Q
Figure BDA0003355983310000641
(R)-N-((S)-1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
步骤A：将(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2- 亚磺酰胺(6.41g，20.9mmol)和3,6-二溴-1,2,4-三嗪(5.00g，20.9mmol) 在1,4-二噁烷(52.3mL，20.9mmol)中的混合物用氩吹扫15分钟。将 DIEA(4.39mL，25.1mmol)加入混合物，然后将混合物加热至60℃持 续1小时。混合物冷却至室温，倾于水上(1L)和搅拌30分钟。固体通过 过滤收集和干燥，产生(R)-N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(9.5g，20.5mmol，98％收率)。 m/z(esi/APCI)M，M+2＝464.1，466.1。
步骤B：在氩气下将3-巯基丙酸2-乙基己基酯(0.51mL，4.74mmol) 和Hunig碱(1.50mL，8.61mmol)加入(R)-N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.0g，4.31 mmol)，Pd(OAc)2(0.048g，0.22mmol)和xantphos(0.25g，0.43mmol) 在1,4-二噁烷(43.06mL，4.30mmol)中的混合物。该反应混合物加热至 100℃持续1小时。冷却混合物，稀释于EtOAc(25mL)然后过滤通过硅藻土
Figure BDA0003355983310000652
浓缩滤液，所得粗制产品用快速色谱法纯化，用10至100％ EtOAc/己烷梯度洗脱，产生3-((3-((S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)丙酸甲酯(0.88g，1.74 mmol，40％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝504.2。
步骤C：将NaOEt(0.96mL，2.58mmol)加入3-((3-((S)-1-(((R)-叔 丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫 基)丙酸甲酯(0.65g，1.29mmol)的THF(12.9mL，1.29mmol)溶液。该 混合物在室温下搅拌30分钟。混合物稀释于EtOAc(100mL)和过滤通 过硅藻土
Figure BDA0003355983310000653
浓缩滤液，所得粗制产品用快速色谱法纯化，用0至 20％MeOH/EtOAc梯度洗脱，产生(R)-N-((S)-1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.34g，0.81 mmol，63％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝418.2。
中间体实施例R
Figure BDA0003355983310000651
3,3-二氟-4-碘-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮
在-5℃在搅拌下将35％过氧化氢(2.52mL，85.22mmol)水溶液加入 2-氨基-4-碘吡啶(2.50g，11.36mmol)，溴二氟乙酸乙酯(3.64mL，28.41 mmol)，和二(环戊二烯基)铁(0.22g，1.14mmol)的DMSO(21.85mL， 11.36mmol)溶液。反应缓慢温热至室温和搅拌22小时。混合物倾至水 中(100mL)，用EtOAc(3X 50mL)从水相萃取有机物。合并之后，有机 层用水(50mL)和盐水(3X 50mL)洗涤。有机层在Na2SO4上干燥，过滤 和减压浓缩。残余物通过快速色谱法用10至100％EtOAc/己烷梯度纯 化，获得3,3-二氟-4-碘-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(0.93g，3.13 mmol，27％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝296.9。
中间体实施例S
Figure BDA0003355983310000661
(R)-3H-螺[呋喃并[2,3-b]吡啶-2,4'-哌啶]-3-胺二盐酸盐
步骤A：在-78℃将3-(1,3-二噻烷-2-基)-2-氟吡啶(1g，4.64mmol)/ THF(4.64mL)加入搅拌的LDA(4.06mL，8.13mmol)的THF(4.64mL) 溶液。反应温热至0℃和搅拌20分钟。冷却反应返回-78℃随后逐滴加 入1-boc-4-哌啶酮(0.97g，4.88mmol)/THF(4.64mL)。搅拌反应1小 时，让其温热多至0℃，搅拌6小时。混合物倾至饱和NH4Cl中。产品 用乙酸乙酯萃取三次，合并有机物，过滤通过1PS纸，真空蒸发，浓缩， 通过硅胶色谱法纯化(0-100％EA/己烷)，提供二螺[哌啶-4,2'-呋喃并 [2,3-b]吡啶-3',2”-[1,3]二噻烷]-1-羧酸叔丁酯(993mg，2.52mmol，54％ 收率)。LCMS(MM-ES+APCI，Pos)：m/z 395.1(M+H)。
步骤B：将吡啶鎓全溴化物(1.2g，3.78mmol)和四丁基溴化铵(81.1 mg，0.25mmol)加入搅拌的二螺[哌啶-4,2'-呋喃并[2,3-b]吡啶-3',2”-[1,3] 二噻烷]-1-羧酸叔丁酯(993mg，2.52mmol)和吡啶(0.2mL，2.52mmol) 的DCM-H2O 5:1混合物(16.8mL)溶液。在室温下搅拌24小时之后，反 应倾至水和DCM中。DCM层用水、盐水洗涤，过滤通过1PS纸，浓 缩和通过硅胶色谱法纯化(0-100％乙酸乙酯/己烷)，提供3-氧代-3H-螺[呋 喃并[2,3-b]吡啶-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(735mg，1.93mmol，77％收 率)。LCMS(MM-ES+APCI，Pos)：m/z205.1(M+H-Boc)。
步骤C：将(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(608.8mg，5.02mmol) 和四乙氧基钛(2.5mL，11.72mmol)加入3-氧代-3H-螺[呋喃并[2,3-b]吡 啶-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(637mg，1.67mmol)的THF(8.4mL)溶液， 和在90℃搅拌反应过夜。反应用乙酸乙酯稀释和用水洗涤。分层。水层 用乙酸乙酯萃取。经合并的有机物用水、盐水洗涤，过滤通过1PS纸和减压浓缩。物质用0-50％EtOAc/己烷作洗脱液进行色谱法，提供 (R,E)-3-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-3H-螺[呋喃并[2,3-b]吡啶-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(426mg，1.04mmol，62％收率)。LCMS (MM-ES+APCI，Pos)：m/z 408.2(M+H)。
步骤D：将(R,E)-3-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-3H-螺[呋喃并[2,3-b] 吡啶-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(426mg，1.05mmol)溶于THF(2.6mL)， 将溶液冷却至-78℃。在30分钟内经由注射器向该溶液加入1M BH3·THF 溶液(2.2mL，2.20mmol)。在-78℃搅拌反应1小时，温热至室温并搅拌 3天。反应用饱和NH4Cl猝灭和用EtOAc萃取。经合并的有机层用水、 盐水洗涤，干燥，真空蒸发和通过硅胶色谱法纯化(0-20％MeOH/DCM)， 提供(R)-3-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3H-螺[呋喃并[2,3-b]吡啶-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(180mg，0.44mmol，42％收率)。LCMS (MM-ES+APCI，Pos)：m/z 410.2(M+H)。
步骤E：将(R)-3-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3H-螺[呋喃并[2,3-b] 吡啶-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(80mg，0.20mmol)在DCM(1mL)中的混 合物用N2吹扫和在室温下经由注射器用HCl/二噁烷(0.25mL，0.98 mmol)处理。混合物在室温下搅拌2小时。混合物真空蒸发，提供(R)-3H- 螺[呋喃并[2,3-b]吡啶-2,4'-哌啶]-3-胺二盐酸盐(44mg，0.13mmol，65％ 收率)。
中间体实施例T
Figure BDA0003355983310000681
(1'S)-1',3'-二氢-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-1'-胺二盐酸盐
步骤A：将二异丙基氨基锂在THF/n-庚烷中的2M溶液(2.78mL， 5.57mmol)滴加至-70℃的(1R,5S)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3,8-二羧酸 8-(叔丁基)3-甲基酯(1g，3.71mmol)的THF(9.28mL)溶液。在-70℃搅 拌90分钟之后，缓慢加入苄基溴(0.57mL，4.83mmol)。在-70℃搅拌反 应混合物3小时。混合物仔细地用饱和水溶液NH4Cl猝灭。分开水层， 用乙酸乙酯萃取，合并的萃取物过滤通过1PS纸，浓缩和通过硅胶色谱 法纯化(0-50％乙酸乙酯/己烷)，提供(1R,3r,5S)-3-苄基-8-氮杂二环[3.2.1] 辛烷-3,8-二羧酸8-(叔丁基)3-甲基酯(1.1g，3.06mmol，82％收率)。 LCMS(MM-ES+APCI，Pos)：m/z 260.1(M+H-Boc)。
步骤B：将(1R,3r,5S)-3-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3,8-二羧酸8-(叔 丁基)3-甲基酯(1g，2.78mmol)在多磷酸(5.54mL，139mmol)中的混合 物在120℃搅拌5天。混合物用水稀释，用NaOH将pH调节至10。加 入Boc-酸酐(0.97mL，4.17mmol)，在室温下搅拌反应4小时。混合物 用乙酸乙酯萃取，合并的有机物过滤通过1PS纸，浓缩和通过硅胶色谱 法纯化(0-50％乙酸乙酯/己烷)，提供1'-氧代-1',3'-二氢-8-氮杂螺[二环 [3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-羧酸叔丁酯(650mg，1.39mmol，50％收率)。LCMS (MM-ES+APCI，Pos)：m/z 228.1(M+H-Boc)。
步骤C：将(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(721.8mg，5.95mmol) 和四乙氧基钛(2.9mL，13.90mmol)加入1'-氧代-1',3'-二氢-8-氮杂螺[二 环[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-羧酸叔丁酯(0.65g 1.98mmol)的THF(9.9mL) 溶液，和在90℃搅拌反应过夜。反应用乙酸乙酯稀释和用水洗涤，分层。 水层用乙酸乙酯萃取。经合并的有机物用水、盐水洗涤，过滤通过1PS 纸和减压浓缩。物质进行色谱法(0-50％EtOAc/己烷)，提供(Z)-1'-(((R)- 叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-1',3'-二氢-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,2'- 茚]-8-羧酸叔丁酯(307mg，0.71mmol，36％收率)。LCMS (MM-ES+APCI，Pos)：m/z 431.2(M+H)。
步骤D：将硼氢化钠(108mg，2.85mmol)加入冷却至-70℃的 (Z)-1'-(((R)-叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-1',3'-二氢-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛 烷-3,2'-茚]-8-羧酸叔丁酯(307mg，0.71mmol)的THF(0.79mL)溶液， 搅拌反应18小时并温热至室温。反应倾至水中和萃取入乙酸乙酯中。有 机物用盐水洗涤，过滤通过1PS纸和减压浓缩，提供(1'S)-1'-(((R)-叔丁 基亚磺酰基)氨基)-1',3'-二氢-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-羧酸 叔丁酯(274mg，0.63mmol，89％收率)。LCMS(MM-ES+APCI，Pos)： m/z 333.2(M+H-Boc)。
步骤E：将(1'S)-1'-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1',3'-二氢-8-氮杂螺 [二环[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-8-羧酸叔丁酯(274mg，0.63mmol)在DCM(3.2 mL)中的混合物用N2吹扫，在室温下经由注射器用4N HCl/二噁烷(0.79 mL，3.17mmol)处理。混合物在室温下搅拌90分钟。混合物真空蒸发， 残余物在MTBE中振摇，经由过滤收集固体和干燥，提供(1'S)-1',3'-二 氢-8-氮杂螺[二环[3.2.1]辛烷-3,2'-茚]-1'-胺二盐酸盐(144mg，0.48mmol，76％收率)。LCMS(MM-ES+APCI，Pos)：m/z 229.2。
中间体实施例U
Figure BDA0003355983310000691
3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺盐酸盐
步骤A：将MeI(1.65mL，26.58mmol)加入搅拌的5-溴-6-氯吡啶-3- 醇(5.0g，24.16mmol)和K2CO3(5.0g，36.25mmol)的ACN(30mL)溶 液，混合物在室温下搅拌16小时。反应混合物用EtOAc萃取。有机相 在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(0-10％ EtOAc/己烷)纯化，提供3-溴-2-氯-5-甲氧基吡啶(3.48g，65％收率)，是 固体。m/z(esi)M+1＝223.9。
步骤B：在0℃将溴化异丙基镁(19.76mL，1.3M，在THF中，25.68 mmol)滴加至搅拌的4-甲酰基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.89g，17.12 mmol)的THF(55mL)溶液和在室温下搅拌2小时。在0℃滴加3-溴-2- 氯-5-甲氧基吡啶(5.68g，25.68mmol)/THF(10mL)和在室温下搅拌30 分钟。反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭和用EtOAc萃取。有机部分 在Na2SO4上干燥，过滤，浓缩和通过硅胶柱色谱法(15-20％EtOAc/己 烷)纯化，提供4-((2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)(羟基)甲基)-4-甲基哌啶-1-羧 酸叔丁酯(2.157g，83％收率)，是粘稠固体。m/z(esi)M+1＝371.4。
步骤C：在0℃将Dess-Martin高碘试剂(1.89g，4.45mmol)加入搅 拌的4-((2-氯-5-甲氧基吡啶-3-基)(羟基)甲基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯 (1.1g，2.97mmol)的DCM(16mL)溶液和在室温下在氮气氛下搅拌3 小时。反应混合物用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭和用DCM萃取。有机相 用1N NaOH溶液，浓缩和通过硅胶柱色谱法(15-20％EtOAc/己烷)洗涤纯化，提供4-(2-氯-5-甲氧基烟酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(860mg， 78％收率)，是油状物。m/z(esi)M+1＝369.1。
步骤D：在氩下将三环己基鏻四氟硼酸盐(145mg，0.39mmol)，乙 酸钯(II)(44mg，0.19mmol)，新戊酸(121mg，1.18mmol)，碳酸铯(1.54 g，4.72mmol)和4-(2-氯-5-甲氧基烟酰基)-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.45 g，3.94mmol)/均三甲苯(20mL)加入火焰干燥的密封管中。混合物用氩 脱气10分钟和在140℃加热48小时。反应混合物冷却至室温，过滤通过
Figure BDA0003355983310000701
床和用EtOAc洗涤。有机相用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥， 过滤和浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法(0-10％EtOAc/己烷)纯化，获得 3-甲氧基-5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁 酯(0.84g，64％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝333.2。
步骤E：将(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(629mg，5.19mmol)加入 搅拌的3-甲氧基-5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(575mg，1.73mmol)的乙醇钛(IV)(2.2mL，10.38mmol)溶液， 反应在110℃搅拌4小时。让反应混合物冷却至室温，和反应混合物用 EtOAc和水稀释。所得混合物在室温下激烈搅拌15分钟然后过滤通过
Figure BDA0003355983310000702
Figure BDA0003355983310000712
垫。滤液用EtOAc萃取，用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥和过滤。 有机相浓缩，所得残余物通过硅胶柱色谱法(40-50％EtOAc/己烷)纯化， 提供(R,Z)-5-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯 并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯，是半固体(0.64g，84％收率)。m/z (esi)M+1＝437.2。
步骤F：在0℃将硼氢化钠(256mg，6.77mmol)加入搅拌的 (R,Z)-5-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(590mg，1.35mmol)的MeOH(10mL)溶 液，和搅拌反应3小时。让反应混合物升至室温。缓慢加入饱和NH4Cl 水溶液猝灭反应。蒸发MeOH，反应混合物用EtOAc萃取。有机相用 盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤和浓缩。所得残余物通过硅胶柱色 谱法(0-4％MeOH/DCM)纯化，获得5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-甲 氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.58g， 97％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝437.9。
步骤G：在0℃将二噁烷-HCl(4M；12mL)加入搅拌的5-(((R)-叔丁 基亚磺酰基)氨基)-3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(600mg，1.37mmol)的MeOH(12mL)溶液，和搅拌 反应2小时。浓缩反应混合物，粗制物质与二乙醚研磨，提供3-甲氧基 -5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺盐酸盐(418mg，99％收 率)，是固体。粗制直接使用而不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝234.3。
中间体实施例V
Figure BDA0003355983310000711
(R)-1-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯
步骤A：在0℃将NaH(60％，在矿物油中)(1.45g，36.14mmol) 加入搅拌的6-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(2.0g，12.05mmol)的二甲基甲酰 胺("DMF")溶液(40mL)，和在0-5℃将混合物搅拌30分钟。分批加入N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺盐酸盐(3.06g，13.25mmol)，和将混合 物在60℃搅拌16小时。反应用盐水溶液淬灭和用EtOAc萃取。经合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，获 得粗制物，其通过硅胶纯化(EtOAc/己烷)溶液，获得1'-苄基-6-氯螺[茚 -2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.55g，40％收率)，是油状物。m/z(esi)M+1：325.9。
步骤B：将氯甲酸1-氯乙基酯(1.55mL，14.34mmol)加入搅拌的1'- 苄基-6-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.55g，4.78mmol)的DCE(24mL) 溶液，回流反应1小时。浓缩反应，加入MeOH(24mL)和回流1小时。 MeOH蒸发至干，获得6-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.13g，粗制)，是 固体。m/z(esi)M+1：236.2。
步骤C：在0℃将三乙胺(2.66mL，19.16mmol)加入搅拌的6-氯螺[茚 -2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.13g，4.79mmol)的DCM(20mL)溶液，随后是 boc-酸酐(1.65mL，7.19mmol)，和在室温下搅拌反应1小时。反应蒸发 至干和通过硅胶柱色谱法(15-20％EtOAc/己烷)纯化，提供6-氯-1-氧代 -1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.3g，81％，2步骤收率)，是固体。m/z(esi)M+1：336.3。
步骤D：将6-氯-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(800 mg，2.38mmol)，乙醇钛(IV)(1.99mL，9.5mmol)，和(R)-(+)-2-甲基丙 烷-2-亚磺酰胺(577.5mg，4.76mmol)的THF(15mL)溶液在90℃搅拌 12小时。反应冷却至室温和用水淬灭。化合物用EtOAc萃取。经合并 的有机相用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，获 得粗制物，将其通过硅胶柱色谱法(20-25％EtOAc/己烷)纯化，获得 (R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(861mg，94％收率)，是固体。m/z(esi)M+1：438.8。
中间体实施例W
Figure BDA0003355983310000721
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：在0℃将NaH(60％矿物油分散液，1.97g，82.19mmol) 分批加入搅拌的5-甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(4.0g，27.39mmol)的DMF (80mL)溶液。混合物在0℃搅拌30分钟。将N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基) 乙-1-胺盐酸盐(8.09g，30.13mmol)分批加入反应混合物，和在室温下搅 拌反应16小时。反应用盐水稀释和用EtOAc萃取。合并有机部分和用 盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩。残余物通过硅 胶柱色谱法(25％EtOAc/己烷)纯化，提供1'-苄基-5-甲基螺[茚-2,4'-哌 啶]-1(3H)-酮(4.0g，48％收率)，是粘稠固体。m/z(esi)M+1＝305.6。
步骤B：在0℃将氯甲酸氯乙基酯(6.97g，49.11mmol)加入搅拌的 1'-苄基-5-甲基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(5.0g，16.37mmol)的DCE(100 mL)溶液和搅拌10分钟。在80℃搅拌反应混合物1小时。浓缩反应混合 物至干，加入MeOH(100mL)，在75℃搅拌1小时。减压浓缩反应混 合物，提供5-甲基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(3.5g，粗制)，是液体，其 用于后续步骤不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝215.9。
步骤C：在0℃将三乙胺(9.07mL，65.11mmol)加入搅拌的5-甲基 螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(3.5g，16.27mmol)的DCM(35mL)溶液。在 0℃加入Boc酸酐(5.61mL，24.42mmol)，和在室温下搅拌反应混合物 16小时。减压浓缩反应混合物和通过硅胶柱色谱法(10％EtOAc/己烷) 纯化，提供5-甲基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(520 mg，68％收率，2步)，是固体。m/z(esi)M+1＝316.2。
步骤D：将5-甲基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (1.9gm，6.03mmol)和(R)-(+)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.19g，18.09mmol) 加入温热的(100℃)乙醇钛(IV)(4.12g，18.09mmol)和在100℃搅拌19 小时。反应混合物倾至EtOAc和盐水中，搅拌15分钟。滤出固体，和 分离液体部分。有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(1％MeOH/DCM)纯化，提供(R,E)-1-((叔丁基-亚磺酰基)亚氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯(1.25g，49％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝418.9。
步骤E：将硼氢化钠(470mg，12.42mmol)加入于0℃的(R,E)-1-((叔 丁基亚磺酰基)亚氨基)-5-甲基-1,3-二氢-螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (1.3g，3.10mmol)的MeOH(30mL)溶液，和在室温下搅拌反应4小时。 反应混合物用冰水淬灭和用EtOAc萃取。经合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/ 己烷)纯化，提供(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(310mg，24％收率)(m/z(esi)M-1＝419.3)。
中间体实施例X
Figure BDA0003355983310000741
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯根据中间体实施例W制备，收集步骤E的第二峰。(m/z (esi)M-1＝419.3)。
中间体实施例Y
Figure BDA0003355983310000742
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：在0℃将NaH(60％，0.98g，15.06mmol)加入搅拌的4- 甲基-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(2g，13.69mmol)的DMF(25mL)溶液，和在 0℃搅拌反应30分钟。加入N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺盐酸盐，在 室温下搅拌18小时。反应用饱和NH4Cl水溶液淬灭和用乙酸乙酯萃取。 经合并的有机层用水、盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤和浓缩。 所得残余物通过Combi-Flash柱纯化(用25％乙酸乙酯/己烷洗脱)，提供 1'-苄基-4-甲基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.5g，39％)，是固体。m/z(esi) M+1＝305.8。
步骤B：将氯甲酸1-氯乙基酯(1.59mL，14.73mmol)加入搅拌的1'- 苄基-4-甲基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.5g，4.91mmol)的DCE(10mL) 溶液和回流1小时。挥发物减压浓缩，获得粗制油状物。加入甲醇和回 流1小时。减压浓缩反应，获得4-甲基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮，是粗 制物，其用于后续步骤而不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝215.7。
步骤C：将三乙胺("TEA")(3.23mL，23.22mmol)加入搅拌的4- 甲基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1g，粗制)的DCM(15mL)溶液，随后加 入boc-酸酐(2.13mL，9.28mmol)。反应在室温下搅拌18小时。减压浓 缩反应，获得粗制物，其通过Combi-Flash柱纯化(于10-15％乙酸乙酯/ 己烷洗脱)，提供4-甲基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.5g，66％，2步)，是液体。
步骤D：将Ti(OEt)4(8.77mL，41.84mmol)加入4-甲基-1-氧代-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1g，3.17mmol)和加热至90℃。加 入(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.1g，9.51mmol)，在90℃继续加热24 小时。反应倾至乙酸乙酯(50mL)中，加入饱和盐水溶液(50mL)。过滤 沉淀的固体，滤液用水、盐水洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤和浓缩，获得粗制物，其通过Combi-Flash柱纯化(于20％乙酸乙酯/己烷洗脱)， 提供(R,Z)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-4-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(800mg，60％)，是固体。m/z(esi)M+1＝418.8。
步骤E：在室温下将硼氢化钠(600mg，15.76mmol)加入搅拌的 (R,Z)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-4-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯(1.1g，2.62mmol)的甲醇(60mL)溶液和搅拌4小时。反应用 饱和NH4Cl溶液猝灭和用乙酸乙酯萃取。经合并的有机部分用水、盐水 洗涤，在无水硫酸钠上干燥，过滤和浓缩。所得残余物通过Combi-Flash 柱纯化(于25％乙酸乙酯/己烷洗脱)，提供(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(440mg，40％) (m/z(esi)M+1＝421.4)，是固体。
中间体实施例Z
Figure BDA0003355983310000761
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯，根据中间体实施例Y制备，收集第二峰。m/z(esi) M+1＝421.4。
中间体实施例AB
Figure BDA0003355983310000762
(S)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：将环戊烷-1,3-二酮(20.0g，204.08mmol)，丁-3-烯-2-酮(26.78 mL，306.12mmol)，分子筛
Figure BDA0003355983310000763
(100g)和NH4OAc(31.42g，408.16mmol) 在甲苯(800mL)中的混合物在回流下搅拌24小时。反应混合物过滤通过
Figure BDA0003355983310000764
床和浓缩，所得残余物通过硅胶柱色谱法(50％EtOAc/己烷)纯化， 提供2-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[b]吡啶-5-酮(6.0g，20％收率)，是 液体。m/z(esi)M+1＝148.3。
步骤B：在0℃将NaH(60重量％，在石蜡中)(4.0g，102.04mmol) 加入搅拌的2-甲基-6,7-二氢-5H-环戊二烯并[b]吡啶-5-酮(5.0g，34.01 mmol)的DMF(60mL)溶液和在室温下搅拌30分钟。在0℃分批加入 N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺盐酸盐(7.31g，27.21mmol)和在室温下 搅拌16小时。反应混合物用冰水淬灭和用乙酸乙酯萃取。干燥有机部分(Na2SO4)，过滤和浓缩，粗制物质通过硅胶纯化(0-15％MeOH/DCM)， 提供1'-苄基-2-甲基螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-酮(1.2g， 11％收率)，是液体。m/z(esi)M+1＝306.9。
步骤C：将甲酸铵(247.14mg，3.92mmol)和Pd/C(200mg)加入搅 拌的1'-苄基-2-甲基螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-酮(400.0 mg，1.31mmol)的乙醇(15mL)溶液，反应混合物用氩吹扫10分钟。反 应混合物在80℃回流16小时和浓缩，提供2-甲基螺[环戊二烯并[b]吡啶 -6,4'-哌啶]-5(7H)-酮，其用于后续步骤而不加进一步纯化。m/z(esi)M+1 ＝217.2。
步骤D：在0℃将三乙胺(0.72mL，5.18mmol)加入搅拌的2-甲基螺 [环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5(7H)-酮(280.0mg，1.29mmol)的DCM (10mL)溶液，随后是Boc酸酐(0.45mL，1.94mmol)，在室温下搅拌反 应混合物1小时。浓缩反应混合物和通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/己 烷)纯化，提供2-甲基-5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(200mg，48％收率，2步)，是固体。m/z(esi)M+1＝ 317.2。
步骤E：在90℃将2-甲基-5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶 -6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(400mg，1.26mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺 酰胺(460.21mg，3.80mmol)加入乙醇钛(IV)(866.20mg，3.79mmol)和 在90℃搅拌5小时。反应混合物倾倒至乙酸乙酯和盐水。在搅拌15分 钟之后，滤出沉淀固体，和分离液体部分。有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法纯化，提供 (R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯(410mg，77％收率)，是胶状液体。m/z(esi)M+1＝420.2。
步骤F：在0℃将NaBH4(185mg，4.89mmol)加入(R,E)-1-((叔丁基 亚磺酰基)亚氨基)-5-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(410 mg，0.98mmol)的MeOH(10mL)溶液和在室温下搅拌4小时。反应混 合物用冰水猝灭和用EtOAc萃取。经合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤 和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(1％MeOH-DCM)、然后制备型HPLC(Chiralpak IG(21.0x250mm)，5μn-己烷/EtOH/异丙胺 80/20/0.1，21.0mL/分，20分钟，276nm，MeOH)纯化，提供(S)-5-(((R)- 叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(40mg，10％收率)。m/z(esi)M+1＝422.4。
中间体实施例AC
Figure BDA0003355983310000781
(R)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯根据中间体实施例AB制备，在步骤F收 集第二峰。m/z(esi)M+1＝422.5。
中间体实施例AD
Figure BDA0003355983310000782
3-氯-2-((2-羟基乙基)氨基)吡啶-4-硫醇钠
步骤A：将2-氨基乙-1-醇(0.47mL，7.78mmol)加入搅拌的3-氯-2- 氟-4-碘吡啶(1.0g，3.89mmol)的DMSO(5mL)溶液和在70℃搅拌16 小时。反应混合物用水稀释和用乙酸乙酯萃取。干燥有机部分(Na2SO4) 和浓缩，所得残余物通过硅胶柱色谱法(40％EtOAc-己烷)纯化，提供 2-((3-氯-4-碘吡啶-2-基)氨基)乙-1-醇(820mg，70％收率)，是固体。m/z(esi) M+1＝298.8。
步骤B：将DIEA(0.6mL，3.35mmol)加入搅拌的2-((3-氯-4-碘吡 啶-2-基)氨基)乙-1-醇(500mg，1.67mmol)和3-巯基丙酸甲酯(0.2mL， 1.84mmol)的二噁烷(5mL)溶液和用氩脱气10分钟。加入Xantphos(48 mg，0.08mmol)和Pd(OAc)2(23mg，0.10mmol)和再脱气10分钟。在 预热油浴中在密封管中在100℃搅拌反应混合物4小时。反应混合物过 滤通过
Figure BDA0003355983310000792
垫和用乙酸乙酯洗涤。蒸发溶剂，和粗制物质通过硅胶柱 色谱法(60％EtOAc/己烷)纯化，提供3-((3-氯-2-((2-羟基乙基)氨基)吡啶 -4-基)硫基)丙酸甲酯(460mg，94％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝290.9。
步骤C：在0℃将NaOEt(21％重量，在EtOH中；1.5mL，2.06mmol) 加入搅拌的3-((3-氯-2-((2-羟基乙基)氨基)吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(500 mg，1.72mmol)的THF(10mL)溶液，在0℃搅拌30分钟。浓缩反应混 合物，粗制物与DCM研磨。过滤固体沉淀，提供3-氯-2-((2-羟基乙基) 氨基)吡啶-4-硫醇钠(350mg，90％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝205.1。
中间体实施例AE
Figure BDA0003355983310000791
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-6-氯-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：在0℃将AlCl3(10.3g，77.14mmol)分批加入1-氯-2-甲氧 基苯(10g，70.13mmol)和3-氯丙酰氯(7.4mL，77.14mmol)的DCM(80 mL)溶液。在30分钟之后，将硫酸(240mL)缓慢倾倒入反应混合物。减 压旋蒸除去DCM，粘稠残余物在100℃搅拌2小时。冷却至20℃之后， 将粘稠反应混合物仔细倾倒入冰(500mL)中并让其静置过夜。过滤混合 物，用水洗涤(100mL)粗制产品滤饼。粗制产品溶于5％甲醇/DCM(200 mL)，用水稀释(100mL)，用5％MeOH/DCM(100mL)萃取，和用盐水 (100mL)彻底洗涤。有机部分在Na2SO4上干燥，减压浓缩和通过色谱法 在硅胶(100-200)快速色谱上纯化(洗脱液：20％乙酸乙酯/己烷)，提供6- 氯-5-甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(4.5g，32％)。m/z(esi)M+1＝197.0。
步骤B：在0℃至5℃将NaH(2.7g，68.65mmol)分批加入6-氯-5- 甲氧基-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(4.5g，22.88mmol)的DMF(40mL)溶液， 在相同温度搅拌反应混合物30分钟。然后将苄基二(2-氯乙基)胺(6.76g， 25.17mmol)分批加入溶液，混合物在室温下搅拌18小时。反应混合物 用乙酸乙酯(2X 250mL)萃取和用冷水(400mL)彻底洗涤。经合并的有 机部分在无水Na2SO4上干燥，浓缩和通过硅胶快速色谱法纯化(洗脱液： 40％乙酸乙酯/己烷)，提供1'-苄基-6-氯-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-酮(2.2g，27％)。m/z(esi)M+1＝356.0。
步骤C：将氯甲酸1-氯乙基酯(2.72mL，24.78mmol)加入搅拌的1'- 苄基-6-氯-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-酮(2.2g，6.19mmol)的 DCE(40mL)溶液和在80℃回流1小时。然后蒸发DCE，将甲醇(40mL) 加入反应混合物。在65℃回流反应1小时。减压蒸发溶剂，获得6-氯-5- 甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-酮，是粗制物，其直接用于后续步骤 而不加进一步纯化(粗制量：1.7g)。m/z(esi)M+1＝266.3。
步骤D：将TEA(1.78mL，12.83mmol)加入搅拌的6-氯-5-甲氧基 -1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-酮(1.7g，6.41mmol)的DCM(20mL)溶液直 至反应混合物pH碱性。将Boc酸酐(2.21mL，9.62mmol)加入反应混合 物和搅拌16小时。反应混合物用水稀释(30mL)和用DCM(2X 30mL) 萃取。有机部分在无水Na2SO4上干燥，浓缩和通过硅胶快速色谱法纯 化(洗脱液：40％乙酸乙酯/己烷)，提供6-氯-5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.3g，55％)。m/z(esi)M+1＝366.0。
步骤E：将乙醇钛(9.85mL，47.01mmol)加入6-氯-5-甲氧基-1-氧代 -1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.3g，3.56mmol)和在90℃加 热5分钟，随后加入(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.3g，10.68mmol)。反 应混合物在90℃加热18小时。反应用水(30mL)猝灭和用乙酸乙酯稀释 (90mL)。过滤固体残余物，分开有机部分。将经萃取的合并有机部分用 盐水洗涤(50mL)，在无水Na2SO4上干燥和减压浓缩，获得粗制物，将 其通过硅胶快速色谱法(洗脱液：40％乙酸乙酯/己烷)纯化，提供(1Z)-6- 氯-5-甲氧基-1-{[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]亚氨基}-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯，是固体(800mg，48％)。m/z(esi)M+1＝469.3。
步骤F：在0℃将NaBH4(388mg，10.28mmol)分批加入(1Z)-6-氯 -5-甲氧基-1-{[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]亚氨基}-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(800mg，1.7mmol)的MeOH(9mL)和THF(18mL) 溶液和在室温下搅拌4小时。反应混合物用NH4Cl饱和溶液(20mL)猝 灭和用乙酸乙酯(2X 20mL)萃取。有机部分在无水Na2SO4上干燥，浓 缩和进行制备型HPLC纯化。收集第一洗脱峰，提供(1S)-6-氯-5-甲氧基 -1-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基}-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸 叔丁酯。(60.3mg，7.51％)(m/z(esi)M+1＝471.5)。
中间体实施例AF
Figure BDA0003355983310000811
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-6-氯-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-6-氯-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(37.8mg，4.7％)根据中间体实施例AE制备， 收集步骤F的第二洗脱峰。(m/z(esi)M+1＝471.5)。
中间体实施例AG
Figure BDA0003355983310000812
(S)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d] 噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：在-78℃将n-BuLi(2M，在己烷中)(7.5mL，14.37mmol) 滴加至搅拌的二异丙胺("DIPA")(2.19mL，15.56mmol)的THF(10mL) 溶液和在-78℃搅拌1小时。在-78℃滴加哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4- 乙基酯(3.09g，11.97mmol)/THF(15mL)，在该温度搅拌1小时。在-78℃ 滴加2-氯-5-(氯甲基)噻唑(2.0g，11.97mmol)/THF(10mL)，在-78℃再 搅拌1小时。反应混合物用饱和NH4Cl溶液(30mL)猝灭和用EtOAc萃 取。有机部分在无水Na2SO4上干燥，过滤和浓缩，粗制物通过硅胶柱 色谱法(0-30％EtOAc/己烷)纯化，提供4-((2-氯噻唑-5-基)甲基)哌啶-1,4- 二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(1.0g，21％收率)，是液体。m/z(esi)M+1＝ 389.4。
步骤B：在-78℃将n-BuLi(19.62mL，2M，在己烷中)滴加至搅拌 的DIPA(5.78mL，41.23mmol)的THF(75mL)溶液和搅拌1小时。将 4-((2-氯噻唑-5-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(10g，25.77 mmol)的THF(75mL)溶液滴加至反应混合物和在-78℃搅拌1小时。反 应混合物用盐水(30mL)猝灭，和有机层用EtOAc萃取。减压蒸发有机 层，获得粗制物，将其通过硅胶柱色谱法(0-40％EtOAc/己烷)纯化，获 得2-氯-4-氧代-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (3.3g，37％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝343.3。
步骤C：将乙醇钛(IV)(4.32mL，20.46mmol)加入搅拌的2-氯-4- 氧代-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.4g， 4.09mmol)和(R)-(+)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.48g，12.28mmol)的溶 液，在100℃搅拌5小时。反应混合物用水稀释(30mL)和用EtOAc萃 取。有机部分在无水Na2SO4上干燥，浓缩为(R,Z)-4-((叔丁基亚磺酰基) 亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (1.1g，60％收率)，是胶状液体。m/z(esi)M+1＝445.8。
步骤D：在-50℃将硼氢化钠(0.14g，3.70mmol)加入搅拌的 (R,Z)-4-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑 -5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.1g，2.47mmol)的THF(10mL)溶液和在室 温下搅拌16小时。反应混合物用冰猝灭和浓缩至干。粗制物用EtOAc 稀释和用水和盐水洗涤。有机部分在无水Na2SO4上干燥和减压浓缩，获得粗制物，将其通过硅胶柱色谱法(0-1％MeOH/DCM)纯化。收集第 一洗脱峰，提供(S)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊 二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(400mg，36％收率)(m/z(esi) M+1＝448.4)。
中间体实施例AH
Figure BDA0003355983310000831
(R)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d] 噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d] 噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(30mg，3％收率)根据中间体实施例AG 制备，收集步骤D的第二洗脱峰(m/z(esi)M+1＝448.3)。
中间体实施例AI
Figure BDA0003355983310000832
(S)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑 -5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
将TEA(0.31mL，2.23mmol)和Pd/C(500mg)加入搅拌的 (S)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑 -5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(500mg，1.11mmol)的EtOH(20mL)溶液和 在H2气氛下(100psi)搅拌16小时。反应混合物过滤通过
Figure BDA0003355983310000834
垫和用 MeOH(50mL)洗涤。减压蒸发溶剂，粗制物质通过硅胶柱色谱法(0-4％MeOH-DCM)纯化，提供(S)-4-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4,6-二氢螺 [环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(220mg，47％收率)，是固 体。m/z(esi)M+1＝419.4。
中间体实施例AJ
Figure BDA0003355983310000833
(S)-6-甲基-(((R)-叔丁基亚磺酰基]氨基)-2-甲基-4,6-二氢螺[环戊二 烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：在室温下将硼氢化钠(6.91g，182.63mmol)分批加入2-氯 噻唑-4-羧酸乙酯(10g，52.18mmol)的乙醇(150mL)溶液。让反应混合物 在50℃搅拌2小时。反应混合物用NH4Cl水溶液猝灭，减压除去EtOH。 残余物用水稀释(200mL)和用EtOAc萃取。经合并的有机部分用盐水洗 涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，获得粗制物，将其通 过硅胶柱色谱法(5-20％EtOAc/己烷)纯化，获得(2-氯噻唑-4-基)甲醇 (5.28g，68％收率)，是液体。m/z(esi)M+1＝150.1。
步骤B：在Ar下将Et3N(36.5mL，267.38mmol)加入(2-氯噻唑-4- 基)甲醇(10g，66.85mmol)的DCM(500mL)溶液和冷却至0℃。在10 分钟内将甲磺酰氯(7.8mL，100.27mmol)缓慢加入反应。让反应在相同 温度搅拌30分钟。反应用NaHCO3溶液猝灭，分开有机部分。有机部 分用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，获得(2-氯 噻唑-4-基)甲磺酸甲酯(13.7g，90％，粗制)，其直接用于后续步骤而不 加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝228.0。
步骤C：在Ar下将DIPA(4mL，28.55mmol)的THF(12mL)溶液 冷却至-78℃。向其缓慢加入n-BuLi(2M，在己烷中)(13.2mL)。在-78℃ 让反应混合物搅拌30分钟然后在室温下进行30分钟。将LDA溶液再次 冷却至-78℃，和向其缓慢加入哌啶-1,4-二羧酸1-叔丁基4-乙基酯(6.215 g，24.16mmol)/THF(6mL)。在-78℃搅拌反应1小时。然后加入(2- 氯噻唑-4-基)甲磺酸甲酯(5g，21.96mmol)的THF(12mL)溶液，和在室 温下搅拌反应混合物30分钟。将其用盐水(100mL)猝灭和用EtOAc萃 取。经合并的有机部分在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，所 得残余物通过二氧化硅-凝胶柱色谱法(5-15％EtOAc/己烷)纯化，获得 4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(2.56g， 30％收率)，是液体。m/z(esi)M+1＝388.9。
步骤D：在Ar下将DIPA(4.7mL，33.43mmol)的THF(30mL)溶 液冷却至-78℃，随后在25分钟内加入n-BuLi(2M，在己烷中)(16.1mL)。 让混合物在-78℃搅拌30分钟然后在室温下进行10分钟。在-78℃在30 分钟内将LDA溶液缓慢加入4-((2-氯噻唑-4-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(5.0g，12.86mmol)/THF(40mL)。将其用NH4Cl 水溶液猝灭和用EtOAc萃取。经合并的有机部分在无水Na2SO4上干燥， 过滤，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(5-10％EtOAc/己烷) 纯化，获得2-氯-6-氧代-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(1.95g，44％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝343.4。
步骤E：向2-氯-6-氧代-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯(500mg，1.46mmol)的二噁烷(10mL)溶液加入K2CO3(403 mg，2.92mmol)和用Ar脱气5分钟，随后加入Pd(dppf)Cl2·DCM(357 mg，0.44mmol)和三甲基环硼氧烷(0.8mL，5.83mmol)。密封反应混合 物，在100℃加热2小时。反应过滤通过烧结漏斗和减压浓缩。所得残 余物通过硅胶柱色谱法(10-30％EtOAc/己烷)纯化，获得2-甲基-6-氧代 -4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(330mg，70％ 收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝323.1。
步骤F：将乙醇钛(IV)(2.1mL，10.24mmol)加入2-甲基-6-氧代-4,6- 二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(250mg，0.78 mmol)，在100℃加热5分钟，随后加入(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(282 mg，2.33mmol)。混合物在100℃加热16小时。反应用盐水(50mL)猝 灭和用EtOAc萃取。经合并的有机部分用盐水洗涤，在无水Na2SO4上 干燥，过滤，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(10-40％EtOAc/ 己烷)纯化，获得(R,Z)-6-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-2-甲基-4,6-二氢螺 [环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(255mg，77％收率)，是固 体。m/z(esi)M+1＝425.9。
步骤G：在0℃将硼氢化钠(251mg，6.63mmol)分批加入(R,Z)-6-((叔 丁基亚磺酰基)亚氨基)-2-甲基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4’-哌 啶]-1’-羧酸叔丁酯(470mg，1.10mmol)的THF(10mL)和甲醇(5mL)溶 液。在相同温度搅拌反应混合物30分钟。反应混合物用NH4Cl水溶液 猝灭和用EtOAc萃取。经合并的有机部分在无水Na2SO4上干燥，过滤， 和减压浓缩。所得残余物通过反相制备型HPLC纯化(5-95％ACN：水)， 获得(S)-6-甲基-(((R)-叔丁基亚磺酰基]氨基)-2-甲基-4,6-二氢螺[环戊二 烯并[d]噻唑-5,4’-哌啶]-1’-羧酸叔丁酯(120mg，25％收率)。m/z(esi)M+1 ＝428.2。
中间体实施例AK
Figure BDA0003355983310000861
(R)-6-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d] 噻唑-5,4’-哌啶]-1’-羧酸叔丁酯
步骤A：将K2CO3(403mg，2.92mmol)加入2-氯-6-氧代-4,6-二氢 螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(500mg，1.46mmol)的 二噁烷(10mL)溶液和用Ar脱气5分钟，随后加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2 (357mg，0.44mmol)和三甲基环硼氧烷(0.8mL，5.83mmol)。密封反应 混合物和在100℃加热2小时。反应过滤通过烧结漏斗和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法(10-30％EtOAc/己烷)纯化，获得2-甲基-6-氧代 -4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(330mg，70％ 收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝323.1。
步骤B：将乙醇钛(IV)(5.84mL，25.8mmol)加入2-甲基-6-氧代-4,6- 二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(630mg，1.95mmol) 和在100℃加热5分钟，随后加入(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(711mg， 5.86mmol)。混合物在100℃加热6小时。反应用盐水猝灭。固体过滤通 过烧结漏斗和用EtOAc萃取。经合并的有机部分用盐水洗涤，在无水 Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法 (10-40％EtOAc/己烷)纯化，获得(S,Z)-6-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-2- 甲基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(450mg， 54％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝425.9。
步骤C：在0℃将硼氢化钠(240mg，6.35mmol)分批加入(S,Z)-6-((叔 丁基亚磺酰基)亚氨基)-2-甲基-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(450mg，1.05mmol)的THF(9mL)和甲醇(4.5mL)溶 液。在0℃搅拌反应混合物1小时，用NH4Cl水溶液猝灭和用EtOAc 萃取。经合并的有机部分在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩。所得残余物通过反相制备型HPLC纯化(5-95％ACN：水，20mM碳酸 氢铵，16mL/min)，提供(R)-6-(((S)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-甲基-4,6- 二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(46mg，10％收率)。 m/z(esi)M+1＝428.2。
中间体实施例AL
Figure BDA0003355983310000871
(S)-6-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑 -5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：将乙醇钛(IV)(13.1mL，57.76mmol)加入2-氯-6-氧代-4,6- 二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.5g，4.38mmol) 和在100℃加热5分钟，随后加入(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.59g， 13.13mmol)。混合物在100℃加热16小时。反应用盐水猝灭(500mL)。 固体过滤通过烧结漏斗和用EtOAc洗涤。分开有机部分，含水部分用EtOAc萃取。经合并的有机部分用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥， 过滤，和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法(5-15％EtOAc/己烷)纯化， 获得(R,Z)-6-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d] 噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1050mg，54％收率)，是固体。m/z(esi) M+1＝446.1。
步骤B：在0℃在1小时内将硼氢化钠(267mg，7.05mmol)分批加 入(R,Z)-6-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻 唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(500mg，1.18mmol)的THF(10mL)和甲醇 (5mL)溶液，在0℃再搅拌1小时。反应混合物用NH4Cl水溶液猝灭和 用EtOAc萃取。经合并的有机部分在无水Na2SO4上干燥，过滤和减压 浓缩。所得残余物通过反相制备型HPLC纯化(5-95％ACN：水，10mM 碳酸氢铵，16mL/min)，获得(S)-6-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-2-氯-4,6- 二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(115mg，22％收 率)，是固体。m/z(esi)M-1＝446.2。
步骤C：将三乙胺(0.2mL，1.43mmol)加入(S)-6-(((R)-叔丁基亚磺 酰基)氨基)-2-氯-4,6-二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁 酯(320mg，0.71mmol)的甲醇(40mL)溶液和用Ar脱气10分钟，随后 加入Pd-C(10％载量，50％重量)(640mg)，同时用Ar脱气。在5分钟 之后，将反应混合物置于气球压力的氢气氛下。在18小时之后，反应过 滤通过
Figure BDA0003355983310000882
床和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法用胺二氧化硅 (10-30％EtOAc/己烷)纯化，获得(S)-6-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4,6- 二氢螺[环戊二烯并[d]噻唑-5,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(185mg，63％收 率)，是固体。m/z(esi)M+1＝414.4。
中间体实施例AM
Figure BDA0003355983310000881
(R)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-氯-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
步骤A：在0℃将H2SO4(5.76mL，105.7mmol)加入搅拌的3-溴-5- 氯皮考啉酸(5g，21.1mmol)的MeOH(50mL)溶液，将其在90℃搅拌4 小时。反应冷却至25℃，MeOH蒸发至干。残余物用2N NaHCO3溶液 中和并用EtOAc萃取。经合并的层用盐水洗涤和减压浓缩，获得3-溴-5- 氯皮考啉酸甲酯(4.8g，91％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝252.0。
步骤B：在大约30分钟内将硼氢化钠(4.37g，115.7mmol)分小批加 入冷却(0℃)的3-溴-5-氯皮考啉酸甲酯(4.8g，19.3mmol)的甲醇(70mL) 溶液。在室温下搅拌反应混合物16小时。反应混合物然后用盐水稀释， 减压蒸发MeOH。残余物用EtOAc萃取。经合并的有机层在无水Na2SO4上干燥，过滤，和蒸发，获得(3-溴-5-氯吡啶-2-基)甲醇(3.72g，88％收率)，是半固体。m/z(esi)M+1＝224.0。
步骤C：将MsCl(1.42mL，18.4mmol)滴加至-15℃(3-溴-5-氯吡啶 -2-基)甲醇(3.72g，16.7mmol)和三乙胺(4.66mL，33.4mmol)的DCM(50 mL)溶液。让所得混合物在相同温度搅拌2小时。反应混合物用水猝灭 和用EtOAc稀释，分开水层。有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干 燥，过滤，和减压浓缩，获得粗制物。粗制物通过硅胶柱色谱法(15-20％EtOAc/己烷)纯化，获得(3-溴-5-氯吡啶-2-基)甲磺酸甲酯(3.8g，76％收 率)，是半固体。m/z(esi)M+1＝302.0。
步骤D：将n-BuLi(1.72M的THF/己烷溶液，6.1mL，10.5mmol) 滴加至-70℃的DIPA(1.69mL，11.8mmol)的THF(10mL)溶液。让所 得混合物在1小时内温热至-40℃。在-70℃将哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基) 4-乙基酯(1.8g，6.9mmol)的THF(20mL)溶液加入LDA和在-70℃搅拌 1小时。然后滴加(3-溴-5-氯吡啶-2-基)甲磺酸甲酯(2.52g，8.4mmol)的 THF(10mL)溶液，混合物在-70℃搅拌1小时。反应用水猝灭。分开水 层和用EtOAc萃取。经合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干 燥，过滤，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(30-40％EtOAc/ 己烷)纯化，获得4-((3-溴-5-氯吡啶-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基) 4-乙基酯(2.35g，73％收率)，是胶状物。m/z(esi)M+1＝462.9。
步骤E：在25℃将NaOH(1.95mg，48.8mmol)加入搅拌的4-((3- 溴-5-氯吡啶-2-基)甲基)哌啶-1,4-二羧酸1-(叔丁基)4-乙基酯(4.5g，9.7 mmol)的MeOH(50mL)和水(10mL)溶液和在65℃搅拌16小时。混合 物浓缩至干，和粗制物用水溶解和用Et2O洗涤。分开水层和用2N HCl 将pH保持在7-6。化合物用EtOAc萃取。分开有机层，用盐水洗涤， 在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，获得4-((3-溴-5-氯吡啶-2- 基)甲基)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-羧酸(4.1g，97％收率)，是固体。m/z(esi) M+1＝435.3。
步骤F：在N2气氛下将NaH(60％矿物油分散液，456mg，11.4mmol) 分批加入-15℃的4-((3-溴-5-氯吡啶-2-基)甲基)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-羧 酸(4.1g，9.5mmol)的THF(23mL)溶液。在该温度搅拌15分钟之后， 将混合物冷却至-60℃。将n-BuLi(1.72M己烷溶液，7.66mL，13.2mmol) 滴加至混合物，搅拌30分钟，然后在30分钟内将温度升至-20℃。反应 混合物用水猝灭和用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩，获得粗制物。粗制物通过硅胶柱色谱法(30％ EtOAc/己烷)纯化，获得3-氯-5-氧代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.1g，34％收率)，是半固体。m/z(esi)M+1＝337.3。
步骤G：将乙醇钛(IV)(4.11mL，19.6mmol)加入搅拌的3-氯-5-氧 代-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.1g，3.3 mmol)的溶液，在95℃搅拌5分钟。加入(R)-(+)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺 (1.18g，9.8mmol)，在95℃搅拌5小时。让混合物在室温下冷却，用 EtOAc和水稀释。所得混合物在室温下激烈地搅拌15分钟然后用
Figure BDA0003355983310000901
Figure BDA0003355983310000902
垫过滤。滤液用EtOAc萃取和用盐水洗涤。有机相在无水Na2SO4上 干燥和减压浓缩，获得粗制物。粗制物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/ 己烷)纯化，获得(R,Z)-5-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-3-氯-5,7-二氢螺[环 戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(911mg，63％收率)，是半固 体。m/z(esi)M+1＝440.2。
步骤H：在0℃将硼氢化钠(391mg，10.3mmol)加入搅拌的 (R,Z)-5-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-3-氯-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶 -6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(910mg，2.1mmol)的MeOH(28.0mL)溶液， 搅拌3小时。让反应混合物温热至室温，缓慢加入饱和NH4Cl水溶液猝 灭过量的硼氢化钠和蒸发MeOH。残余物用EtOAc和水稀释。分开有 机层。经合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和 减压浓缩，获得粗制物。粗制物通过正相制备型HPLC纯化(Chiralpak IG(21.0x250mm)，5μ，己烷/乙醇：85/15)，获得(R)-5-(((R)-叔丁基亚 磺酰基)氨基)-3-氯-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔 丁酯(580mg，50％收率)(m/z(esi)M+1＝442.1)，是固体。
中间体实施例AN
Figure BDA0003355983310000911
(S)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-氯-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯
(S)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-3-氯-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯根据中间体实施例AM制备，分离步骤G 的物质和通过正相制备型HPLC纯化(Chiralpak IG(21.0x250mm)， 5μ，己烷/乙醇：85/15)获得纯物质，是粘稠固体(117mg，11％收率， m/z(esi)M+1＝442.2)。
中间体实施例AO
Figure BDA0003355983310000912
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4’-哌啶]-1’-羧酸 叔丁酯-1-d
步骤A：在0℃将NaH(60％，在矿物油中)(2.72g，68.08mmol) 加入搅拌的2,3-二氢-1H-茚-1-酮(3.0g，22.69mmol)的DMF(60mL)溶 液。在5℃搅拌反应混合物30分钟。将N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1- 胺盐酸盐(5.76g，24.96mmol)分批加入，混合物在60℃搅拌16小时。 反应用盐水猝灭，用EtOAc萃取。合并有机层和用过量水、随后盐水洗 涤，在无水Na2SO4上干燥，和减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法 (35-40％EtOAc/己烷)纯化，提供1'-苄基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(2.7g， 41％收率)，是油状物。m/z(esi)M+1＝292.5。
步骤B：将氯甲酸1-氯乙基酯(3.07mL，28.44mmol)加入搅拌的1'- 苄基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(2.76g，9.48mmol)的DCE(45mL)溶液， 将其回流1小时。蒸发DCE至干，加入甲醇(45mL)。将反应混合物再 回流1小时。反应蒸发至干，获得螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.91g，粗 制)，是半固体。m/z(esi)M+1＝202.3。
步骤C：将三乙胺(5.28mL，37.95mmol)加入搅拌的螺[茚-2,4'-哌 啶]-1(3H)-酮(1.91g，9.49mmol)的DCM(45mL)溶液，随后是boc-酸酐 (3.27mL，14.23mmol)。反应在室温下搅拌1小时。浓缩反应，和所得 残余物通过硅胶柱色谱法(15-17％EtOAC/己烷)纯化，获得1-氧代-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.47g，52％2步收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝LCMS：302.1。
步骤D：将乙醇钛(IV)(2.29mL，10.93mmol)和(R)-(+)-2-甲基-2- 丙烷亚磺酰胺(662.40mg，5.46mmol)加入搅拌的1-氧代-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(823mg，2.73mmol)的THF(5mL)溶液，反 应在90℃加热12小时。反应混合物冷却至室温和用水稀释和用EtOAc 萃取。经合并的有机相用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，和浓缩，获得 粗制物。粗制物与又一批次的1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔 丁酯(200mg)混合并通过硅胶柱色谱法(20-25％EtOAC/己烷)纯化，获得 (R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(545mg，42％，收率)。m/z(esi)M+1＝405.0。
步骤E：在-50℃将NaBD4(46.62mg，1.11mmol)加入搅拌的 (R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-6-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(300mg，0.74mmol)的THF(12mL)溶液，和在16小时内让 温度升至室温。反应用饱和NH4Cl溶液猝灭和用EtOAc萃取。有机层 用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，和浓缩。粗制物通过SFC纯化[Chiralpak IG(250x21 mm)5μ，25g/min.流动相：60％CO2+40％甲醇。ABPR： 100巴。收集第一洗脱峰，提供(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二 氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯-1-d(152mg，51％收率)。m/z(esi)M+1 ＝408.4。
中间体实施例AP
Figure BDA0003355983310000931
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸 叔丁酯-1-d
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸 叔丁酯-1-d根据中间体实施例AO制备，收集步骤D的第二洗脱峰(34 mg，11％收率)m/z(esi)M+1＝408.4。
中间体实施例AQ
Figure BDA0003355983310000932
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
在0℃将MeMgBr(3M，在醚中)(0.4mL，1.23mmol)加入搅拌的 (R,Z)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔 丁酯(100mg，0.247mmol)的THF(0.5mL)溶液和在该温度搅拌3小时。 反应用饱和NH4Cl溶液猝灭和用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗 涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩。粗制物与又一批次的 (R,Z)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔 丁酯(120mg)混合并通过正相制备型HPLC纯化(Chiralpak IG(21.0x 250mm)，5μ，己烷/EtOH/iPrNH2 80/20/0.1，1.0mL/min))。收集第二 洗脱峰，提供粘稠固体(76mg，33％收率)。m/z(esi)M+1＝421.4。
中间体实施例AR
Figure BDA0003355983310000933
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-甲基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯根据中间体实施例AQ制备，收集第一洗脱峰。m/z(esi) M+1＝421.4。
中间体实施例AS
Figure BDA0003355983310000941
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯
步骤A：在0℃将NaH(60％矿物油分散液，500mg，12.05mmol) 加入搅拌的5-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(1g，6.02mmol)的DMF(10mL) 溶液和搅拌30分钟。在0℃将N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺盐酸盐 (1.5g，6.63mmol)加入反应混合物。在室温下搅拌反应混合物16小时。 反应混合物用水猝灭和用EtOAc萃取。有机层浓缩至干，粗制物通过硅 胶柱色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化，提供1'-苄基-5-氯螺[茚-2,4'-哌 啶]-1(3H)-酮(300mg，15％，收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝325.8。
步骤B：在0℃将氯甲酸氯乙基酯(270mg，1.84mmol)加入搅拌的 1'-苄基-5-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(300mg，0.92mmol)的DCE(10 mL)溶液和搅拌10分钟。在80℃搅拌反应混合物1小时。浓缩反应混合 物至干。粗制物溶于MeOH(10mL)和在75℃再次搅拌1小时。减压浓 缩反应混合物，提供5-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮，是粘稠固体(250 mg)，其直接用于后续步骤而不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝236.1。
步骤C：在0℃将三乙胺(0.3mL，2.13mmol)加入搅拌的5-氯螺[茚 -2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(250mg,1.06mmol)的DCM(10mL)溶液。在0℃将 Boc酸酐(0.5mL，2.13mmol)加入溶液，和在室温下搅拌反应混合物16 小时。减压浓缩反应混合物和通过硅胶柱色谱法纯化(10％EtOAc/己 烷)，提供5-氯-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(130mg， 30％收率，2步)，是固体。m/z(esi)M+1＝335.3。
步骤D：将5-氯-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(700 mg，2.09mmol)和(R)-(+)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(760.0mg，6.26mmol) 加入温热的(100℃)乙醇钛(IV)(1.43g，6.26mmol)和在100℃搅拌16小 时。反应混合物倾至EtOAc和盐水中。混合物搅拌15分钟，和滤出沉 淀的固体。分开液体部分。有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥 和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(1％MeOH/DCM)纯化，提 供(R,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯(600mg，41％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝439.2。
步骤E：将硼氢化钠(217mg，5.70mmol)加入冰冷的(R,E)-1-((叔丁 基亚磺酰基)亚氨基)-5-氯-1,3-二氢-螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(500 mg，1.14mmol)的MeOH(15mL)溶液和在室温下搅拌4小时。反应混 合物用冰水猝灭和用EtOAc萃取。经合并的有机层在无水Na2SO4上干 燥，过滤，和减压浓缩。所得残余物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc/己烷)纯化，提供(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(195mg，39％收率)(m/z(esi)M-1＝439.2)，是固体。
中间体实施例AT
Figure BDA0003355983310000951
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯根据中间体实施例AS制备，收集步骤E的第二洗脱峰，是 固体(255mg，23％收率)(m/z(esi)M+1＝441.4)。
中间体实施例AU
Figure BDA0003355983310000961
(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'- 羧酸叔丁酯
步骤A：在冰冷条件下将NaH(60％矿物油分散液，2.16g，90.0mmol) 分批加入搅拌的4-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(5.0g，30.0mmol)的DMF(10 mL)溶液和搅拌30分钟。将N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺盐酸盐缓 慢加入反应混合物和在室温下搅拌16小时。反应用水猝灭，和有机层用 EtOAc萃取。经合并的有机层用冷水和盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，和过滤。有机层蒸发至干。所得残余物通过二氧化硅-凝胶柱色谱法 (10％EtOAc/己烷)纯化，获得1'-苄基-4-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(2.9 g，30％收率)，是胶状物。m/z(esi)M+1＝326.0。
步骤B：将氯甲酸氯乙基酯(2.78mL，25.84mmol)加入搅拌的1'- 苄基-4-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(2.8g，8.61mmol)的DCE(10mL) 溶液，回流反应混合物2小时。溶剂蒸发至干，反应混合物溶于MeOH (5mL)和在80℃再加热1小时。反应蒸发至干，获得粗制反应混合物4- 氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮盐酸盐(3.2g，粗制)，其用于后续步骤而不 加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝235.7。
步骤C：在冰冷条件下将粗制4-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮盐酸盐 (3.2g，11.76mmol)溶于DCM(5mL)，和滴加三乙胺(6.68mL，47.83 mmol)。将Boc酸酐(2.63mL，11.47mmol)加入反应混合物和在室温下 继续搅拌16小时。向反应混合物加水，用DCM萃取。经合并的有机层 用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压蒸发，获得粗制物， 将其通过硅胶柱色谱法(5％EtOAc/己烷)纯化，获得4-氯-1-氧代-1,3-二 氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.6g，50％收率，2步)，是固体。m/z (esi)M+1＝336.2。
步骤D：将R-(+)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(705mg，5.82mmol)加入 4-氯-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.5g，4.47mmol)的 温热(100℃)乙醇钛(IV)(4.0mL,19.08mmol)溶液，所得混合物在100℃ 加热16小时。与EtOAc(15mL)和H2O(15mL)搅拌反应混合物20分 钟和过滤通过
Figure BDA0003355983310000972
垫。分开有机层，水部分用EtOAc萃取。经合并的有机层减压蒸发，粗制反应混合物通过硅胶柱色谱法(20％EtOAc/己烷) 纯化，提供(S,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(870mg，44％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝438.8。
步骤E：在0℃将硼氢化钠(368mg，9.7mmol)分批加入搅拌的 (S,E)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧 酸叔丁酯(850mg，1.94mmol)的MeOH(5mL)溶液和在室温下搅拌4 小时。反应蒸发至干，加水至反应混合物。混合物用EtOAc萃取。经合 并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤，和减压浓缩。 所得残余物通过手性制备型HPLC纯化(Chiralpak IC 4.6x250mm，5μ， DCM/EtOH/iPrNH2 50/50/0.1，1.0mL/min)，获得(S)-1-(((R)-叔丁基亚 磺酰基)氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯，(231mg， 27％收率；m/z(esi)M+1＝441.2)，是粘稠固体。
中间体实施例AV
Figure BDA0003355983310000971
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯
(R)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯根据中间体实施例AU制备，收集步骤E的第二洗脱 峰，是粘稠固体(295mg，34％收率)(m/z(esi)M+1＝441.2)。
中间体实施例AW
Figure BDA0003355983310000981
1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈二盐酸盐
步骤A：在0℃将NaH(60％重量，在石蜡中)(3.61g，90.36mmol) 加入搅拌的5-氯-2,3-二氢-1H-茚-1-酮(5.0g，30.12mmol)的DMF(50mL) 溶液和在室温下搅拌30分钟。在0℃分批加入N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基) 乙-1-胺(8.89g，33.13mmol)和在室温下再搅拌5小时。反应混合物用冰 水淬灭和用乙酸乙酯萃取。干燥有机部分(Na2SO4)，过滤，浓缩和粗制物通过硅胶柱色谱法(25％EtOAc-己烷)纯化，提供1'-苄基-5-氯螺[茚 -2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(2g，20％收率)，是液体。m/z(esi)M+1＝325.9。
步骤B：在0℃将氯甲酸1-氯乙基酯(3.49g，24.61mmol)加入搅拌 的1'-苄基-5-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(2.0g，6.15mmol)的DCE(20 mL)溶液和搅拌10分钟。在80℃搅拌反应混合物16小时。浓缩反应混 合物，将粗制物质溶于MeOH(20mL)和在80℃搅拌1小时。浓缩反应 混合物，提供5-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮盐酸盐(1.45g，粗制)，是胶 状液体，其用于后续步骤而不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝236.1。
步骤C：在0℃将三乙胺(3.43mL，24.68mmol)和boc酸酐(2.12mL， 9.25mmol)加入搅拌的5-氯螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮盐酸盐(1.45g，6.17 mmol)的DCM(15mL)溶液，在室温下搅拌反应混合物16小时。浓缩 反应混合物和通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc-己烷)纯化，提供5-氯-1- 氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(400mg，19％收率，2步)， 是固体。m/z(esi)M+1＝336.3。
步骤D：将Zn(CN)2(982.0mg，8.35mmol)和锌粉(55.0mg，0.83 mmol)加入搅拌的5-氯-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (1.4g，4.14mmol)的DMF(10mL)溶液和搅拌10分钟。反应混合物用 氩脱气，然后加入2-(二叔丁基膦)-1,1'-联萘(trixiephos)(383.0mg，0.41 mmol)，随后Pd(OAc)2(232.0mg，0.41mmol)，和在120℃搅拌反应混 合物16小时。反应混合物用水稀释和用乙酸乙酯萃取。干燥有机部分(Na2SO4)，过滤和浓缩，和粗制物质通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc-己 烷)纯化，提供5-氰基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (250mg，18％收率)，是粘稠固体。m/z(esi)M+1＝326.3。
步骤E：将(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(204.5mg，1.68mmol)加入 搅拌的5-氰基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(500mg， 1.53mmol)的乙醇钛(IV)溶液(1.62mL，7.66mmol)和在90℃搅拌1小时。 反应混合物倾倒至EtOAc和盐水，搅拌15分钟。滤出沉淀固体。有机 层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩，提供1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨 基)-5-氰基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(600mg，粗制)，是胶 状液体，其用于后续步骤不加进一步纯化。m/z(esi)M+1＝430.3。
步骤F：在-10℃将NaBH4(105.8mg，2.79mmol)加入搅拌的1-(((R)- 叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氰基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (600.0mg，1.39mmol)的MeOH(10mL)溶液和在室温下搅拌2小时。 浓缩反应混合物，用乙酸乙酯稀释和用水洗涤。有机层干燥(Na2SO4)， 过滤，浓缩和通过硅胶柱色谱法(40％EtOAc-己烷)纯化，提供1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氰基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (430mg，71％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝432.1。
步骤G：在0℃将4M HCl二噁烷溶液(3mL)加入搅拌的1-(((R)-叔 丁基亚磺酰基)氨基)-5-氰基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯 (430.0mg，0.99mmol)的MeOH(3mL)溶液和在0℃搅拌2小时。浓缩 反应混合物，和粗制物与二乙醚研磨，提供3-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-6-腈二盐酸盐(250mg，84％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝228.4。
中间体实施例AX
Figure BDA0003355983310000991
(R)-N-((S)-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-3-基)-2-甲基丙烷-2- 亚磺酰胺2,2,2-三氟乙酸盐
步骤A：在氩下将氢化钠60％矿物油分散液(0.74g，18mmol)分批 加入6-甲氧基-1-茚满酮(1g，6.2mmol)的DMF(6.9mL，6.2mmol)溶液。 混合物在室温下搅拌10分钟。加入N-苄基-2-氯-N-(2-氯乙基)乙-1-胺(1.6 g，6.8mmol)，混合物继续搅拌过夜。反应倾至水中和用EtOAc分配。 经合并的有机物用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，和减压浓缩。所得残 余物通过硅胶色谱法(0％-10％DCM：MeOH(2％NH4OH))纯化，提供 1'-苄基-6-甲氧基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.6g，5mmol，81％收率)。 m/z(esi)M+1＝322.2。
步骤B：将A1'-苄基-6-甲氧基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(1.6g，5 mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.2g，5.5mmol)的EtOH(25mL，5mmol)和 THF(25mL，5mmol)溶液用N2吹扫5分钟。将钯(Degussa型，10重 量％，50％H2O)(1.3g，1.2mmol)加入该溶液，立即封盖和用N2吹扫 额外5分钟。溶液然后在1atm H2压下搅拌。混合物在环境温度搅拌1 小时。混合物用MeOH稀释和过滤通过填充的
Figure BDA0003355983310001001
减压浓缩滤液， 提供粗制6-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.12 g，3.38mmol，68％收率)。m/z(esi)M+1＝232.2。
步骤C：将(R)-(+)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(1.2g，10.14mmol)和四 乙氧基钛(5.4g，23.66mmol)加入6-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.12g，3.34mmol)的THF(16.9mL，3.34mmol) 溶液，和反应在90℃搅拌过夜。加入EtOAc随后水。滤出固体，和分 层。干燥有机层，过滤和浓缩。所得残余物通过正相色谱法(0％-100％ 己烷：EtOAc)纯化，提供(R,Z)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-6-甲氧基 -1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.79g，1.83mmol，54％收率)。 m/z(esi)M+1＝435.2。
步骤D：将(R,Z)-1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)-6-甲氧基-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.79g，1.83mmol)置于THF(15mL)和冷 却至0℃。加入NaBH4(0.1g，2.74mmol)，让反应缓慢地温热至室温和 搅拌18小时。加水，和混合物用DCM(3X25mL)萃取。合并萃取物和 浓缩。所得残余物通过硅胶纯化(0-5％MeOH，在含2％NH4OH的DCM 中)。收集第一洗脱峰，提供(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-6-甲氧基 -1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.343g，0.79mmol，43％收率)。 m/z(esi)M+1＝437.3。
步骤E：将TFA(303μL，3.93)加入(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨 基)-6-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(343mg，0.79 mmol)的DCM(1.57mL，0.79mmol)溶液，和在室温下搅拌反应1小时。 减压浓缩反应，作为粗制(R)-N-((S)-5-甲氧基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-3- 基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(354mg，0.79mmol，100％ 收率)继续进行。m/z(esi)M+1＝337.2。
实施例1
Figure BDA0003355983310001011
(3S,4S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基 -2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺
步骤A：将(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺二盐酸盐 (320mg，1.3mmol)用二噁烷(6mL)稀释，随后加入DIEA(815μL，4.67 mmol)和3,6-二氯-1,2,4-三嗪(200mg，1.33mmol)。反应加热至50℃和 搅拌3小时。让反应冷却和用DCM/IPA和10％碳酸钠稀释。分层，水 层用DCM/IPA萃取两次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。 物质在硅胶上纯化，用1-10％甲醇/DCM(1％NH4OH)洗脱，提供 (3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺 (290mg，1.02mmol，76.6％收率)。
将(3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷 -4-胺(30mg，0.11mmol)和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇(20mg，0.13mmol) 用二噁烷稀释，随后加入DIEA(55μL，0.32mmol)。反应置于氮下和加 热至100℃。在搅拌4小时之后，反应用DCM/IPA和10％碳酸钠稀释。 物质用DCM/IPA再萃取两次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用10％甲醇/DCM(1％NH4OH)洗脱。物质 在C-18硅胶上再次纯化，用5-95％ACN/水(0.1％TFA)洗脱。纯级分用 DCM/IPA和饱和碳酸氢钠稀释。分层，有机物在MgSO4上干燥，过滤 和浓缩，提供(3S,4S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(6mg，0.015mmol，14％收 率)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.2(s，1H)，7.75(d，1H，J＝5.5Hz)， 6.12(d，1H，5.5Hz)4.9(br，2H)，4.18-4.40(m，3H)，3.84(d，1H，J ＝8.6Hz)，3.6-3.8(m，3H)，3.02(d，1H，J＝4.7Hz)，1.4-1.95(m，6H)； m/z(esi/APCI)M+1＝408.2。
实施例2
Figure BDA0003355983310001021
(3S,4S)-8-(6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂 螺[4.5]癸烷-4-胺
步骤A：将(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺二盐酸盐 (320mg，1.3mmol)用二噁烷(6mL)稀释，随后加入DIEA(815μL，4.67 mmol)和3,6-二氯-1,2,4-三嗪(200mg，1.3mmol)。反应加热至50℃和搅 拌3小时。让反应冷却和用DCM/IPA和10％碳酸钠稀释。分层，水层 用DCM/IPA萃取两次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。 物质在硅胶上纯化，用1-10％甲醇/DCM(1％NH4OH)洗脱，提供 (3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺 (290mg，1.0mmol，76.6％收率)。
步骤B：将(3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺 [4.5]癸烷-4-胺(30mg，0.11mmol)，(2,3-二氯苯基)取代硼酸(30mg，0.16 mmol)和四(Tetrakis)(3.7mg，0.0032mmol)用二噁烷(1.0mL)稀释，随 后加入Na2CO3(132μL，0.26mmol)。反应用氩吹扫，密封和加热至95℃ 持续4小时。让反应冷却，用乙酸乙酯和水稀释。分层，乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用10％甲醇/DCM(1％ NH4OH)洗脱，提供(3S,4S)-8-(6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基 -2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(10mg，0.025mmol，24％收率)。1H NMR (400MHz，CDCl3)δ8.51(s，1H)，7.61(dd，1H，J＝7.83，1.57Hz)， 7.54(dd，1H，J＝7.83，1.57Hz)，7.33(t，1H)，4.18-4.40(m，3H)， 3.84(d，1H，J＝9.0Hz)，3.55-3.75(m，3H)，3.05(d，1H，J＝4.7Hz)， 1.4-1.95(m，6H)；m/z(esi/APCI)M+1＝394.1。
实施例3
Figure BDA0003355983310001031
(1R,3s,5S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-8-氮 杂二环[3.2.1]辛烷-3-胺
步骤A：将((1R,3s,5S)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯 (226mg，1.00mmol)用二噁烷(5mL)稀释，随后加入DIEA(611μL，3.50 mmol)和3,6-二氯-1,2,4-三嗪(150mg，1.00mmol)。反应加热至50℃和 搅拌3小时。让反应冷却，用DCM/IPA和10％碳酸钠稀释。分层，水 层用DCM/IPA萃取两次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。 物质在硅胶上纯化，用10-50％乙酸乙酯/己烷洗脱，提供((1R,3s,5S)-8-(6- 氯-1,2,4-三嗪-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(235 mg，0.692mmol，69.1％收率)。
步骤B：将((1R,3s,5S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛 烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.088mmol)和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇 (14mg，0.088mmol)用二噁烷稀释，随后加入DIEA(46μL，0.26mmol)。 反应置于氮下和加热至90℃。在搅拌4小时之后，反应用DCM/IPA和 10％碳酸钠稀释。物质用DCM/IPA再萃取两次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用1-10％甲醇/DCM(1％ NH4OH)洗脱，提供((1R,3s,5S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4- 三嗪-3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(25mg，0.054 mmol，61％收率)。
步骤C：将((1R,3s,5S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(25mg，0.054mmol) 用DCM(1mL)稀释，随后加入TFA(1mL)。在搅拌2小时之后，浓缩 反应。物质在C-18硅胶上纯化，用5-95％ACN/水(0.1％TFA)洗脱。纯 级分用DCM/IPA和饱和碳酸氢钠稀释。分层，有机物在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上再次纯化，用10％甲醇/DCM(1％NH4OH) 洗脱，提供(1R,3s,5S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-胺(3mg，0.0082mmol，15％收率)。1H NMR (400MHz，CDCl3)δ8.2(s，1H)，7.76(d，1H，J＝5.48Hz)，6.17(d， 1H，J＝5.48Hz)，5.10(br，1H)，4.92(br，2H)，4.74(br，1H)，3.37 (m，1H)，1.2-2.2(m，10H)；m/z(esi/APCI)M+1＝364.1。
实施例4
Figure BDA0003355983310001041
(3S,4S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基-1,2,4-三嗪-3- 基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺
步骤A：将(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺二盐酸盐 (175mg，0.720mmol)用二噁烷(4mL)稀释，随后加入DIEA(377μL， 2.16mmol)和3,6-二氯-5-甲基-1,2,4-三嗪(118mg，0.720mmol)。反应用 氮吹扫，密封和加热至120℃。在搅拌12小时之后，让反应冷却，用 DCM(25％IPA)和10％碳酸钠稀释。分层，水层用DCM/IPA再萃取两 次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化， 用1-10％甲醇/DCM洗脱，提供(3S,4S)-8-(6-氯-5-甲基-1,2,4-三嗪-3- 基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(125mg，0.420mmol，58.3％ 收率)。
步骤B：将(3S,4S)-8-(6-氯-5-甲基-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8- 氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(23mg，0.077mmol)和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇(15 mg，0.093mmol)用二噁烷稀释，随后加入DIEA(40μL，0.23mmol)。 反应置于氮下和加热至100℃。在搅拌4小时之后，反应用DCM/IPA 和10％碳酸钠稀释。分层，有机物在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物 质在硅胶上纯化，用10％甲醇/DCM(1％NH4OH)洗脱，提供 (3S,4S)-8-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-5-甲基-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲 基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(2.5mg，0.0059mmol，7.7％收率)。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34(dd，1H，J＝7.8，1.6Hz)，7.09(t， 1H，J＝7.8Hz)，7.02(dd，1H，J＝7.8，1.6Hz)，4.1-4.3(m，3H)，3.82 (d，1H，J＝8.6Hz)，3.70(d，1H，J＝8.6Hz)，3.6(m，2H)，3.04(d， 1H，J＝4.7Hz)，2.22(s，3H)，1.55-1.91(m，6H)，1.2(d，3H，J＝6.3 Hz)；m/z(esi/APCI)M+1＝422.2。
实施例5
Figure BDA0003355983310001061
(3S,4S)-8-(6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂 -8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺
步骤A：将(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺二盐酸盐 (175mg，0.720mmol)用二噁烷(4mL)稀释，随后加入DIEA(377μL， 2.16mmol)和3,6-二氯-5-甲基-1,2,4-三嗪(118mg，0.720mmol)。反应用 氮吹扫，密封和加热至120℃。在搅拌12小时之后，让反应冷却和用 DCM(25％IPA)和10％碳酸钠稀释。分层，水层用DCM/IPA再萃取两 次。合并有机物，在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化， 用1-10％甲醇/DCM洗脱，提供(3S,4S)-8-(6-氯-5-甲基-1,2,4-三嗪-3- 基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(125mg，0.420mmol，58.3％ 收率)。
步骤B：将(3S,4S)-8-(6-氯-5-甲基-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8- 氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(100mg，0.336mmol)，(2,3-二氯苯基)取代硼酸 (96.1mg，0.504mmol)和四(Tetrakis)(11.6mg，0.0101mmol)用二噁烷 (1.5mL)稀释，随后加入Na2CO3(420μL，0.840mmol)。反应用氩吹扫， 密封和加热至130℃持续4小时。让反应冷却和用乙酸乙酯和水稀释。 分层，乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用 10％甲醇/DCM(1％NH4OH)洗脱，提供(3S,4S)-8-(6-(2,3-二氯苯基)-5- 甲基-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(32mg， 0.0784mmol，23.3％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.56(m，1H)， 7.31(m，2H)，4.33(m，2H)，4.21(m，1H)，3.86(d，1H，J＝8.9Hz)， 3.73(d，1H，J＝8.9Hz)，3.5-3.7(m，2H)，3.04(d，1H，J＝4.7Hz)， 2.22(s，3H)，1.55-1.91(m，6H)，1.25(d，3H，J＝6.65Hz)；m/z(esi/APCI) M+1＝408.1。
实施例6
Figure BDA0003355983310001071
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2- 亚磺酰胺(163mg，0.53mmol)用二噁烷(2mL)稀释，随后加入DIEA (326μL，1.9mmol)。在搅拌5分钟之后，加入3,6-二氯-1,2,4-三嗪(80mg， 0.53mmol)。反应加热至50℃和搅拌3小时。让反应冷却和用DCM/IPA 和10％碳酸钠稀释。分层，水层用DCM/IPA萃取两次。合并有机物， 在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用1-10％甲醇/DCM (1％NH4OH)洗脱，提供(R)-N-((S)-1'-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(25mg，0.060mmol，11％ 收率)。
步骤B：将(R)-N-((S)-1'-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(55mg，0.13mmol)和2-氨基-3-氯吡 啶-4-硫醇钠(48mg，0.26mmol)用NMP(437μL，0.13mmol)稀释，随后 加入DIEA(46μL，0.26mmol)。反应用氩吹扫，密封和加热至110℃。 在搅拌12小时之后，让反应冷却和用乙酸乙酯稀释和用水和盐水洗涤。 乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用100％ 乙酸乙酯洗脱，提供(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4- 三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(55 mg，0.10mmol，77％收率)。
步骤C：将(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20mg， 0.037mmol)用二噁烷(1mL)稀释，随后加入HCl(92μL，0.37mmol)。 在搅拌30分钟之后，反应用DCM和饱和碳酸氢钠水溶液稀释。在搅拌 混合物10分钟之后，分层，DCM在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质 在硅胶上纯化，用20％甲醇/乙酸乙酯洗脱，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯 吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(15mg， 0.034mmol，93％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.2(s，1H)，7.76 (d，1H，J＝5.2Hz)，7.2-7.35(m，4H)，6.15(d，1H，J＝5.2Hz)，4.92 (br，2H)，4.78(br，1H)，4.01(s，1H)，3.37(m，2H)，3.14(d，1H， J＝15.6Hz)，2.78(d，1H，J＝15.6)，1.3-1.91(m，7H)；m/z(esi/APCI) M+1＝440.1。
表3的下述化合物根据上述程序用适当的原料和中间体制备。
表3
Figure BDA0003355983310001081
Figure BDA0003355983310001091
Figure BDA0003355983310001101
实施例15
Figure BDA0003355983310001102
(S)-1'-(6-(2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
在具聚四氟乙烯盖的小瓶中，将Pd2(dba)3(13mg，0.014mmol)， xantphos(16mg，0.028mmol)，碳酸铯(113mg，0.35mmol)，2,3-二氢 -1H-吡咯并[3,2-c]吡啶(22mg，0.18mmol)和(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(50mg，0.14mmol)与二噁烷(3mL)一 起混合。将小瓶排空和反填充Ar三次。小瓶然后加热至90℃持续18小 时。反应用DCM(5mL)稀释，混合物过滤通过
Figure BDA0003355983310001103
垫。蒸发滤液， 残余物用12g硅胶柱纯化(MeOH/DCM混合物2-20％)，提供 (S)-1'-(6-(2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二 氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(9mg，0.023mmol，16％收率)，是固体。m/z (esi/APCI)M+1＝360.0；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(s，2H)， 8.17(s，1H)，7.64(s，1H)，7.33(d，J＝5.5Hz，1H)，7.23(s，3H)， 4.62-4.49(m，2H)，4.18(t，J＝8.7Hz，2H)，4.00(s，1H)，3.39-3.24 (m，4H)，3.13(d，J＝15.6Hz，1H)，2.76(d，J＝15.6Hz，1H)，1.87 (td，J＝12.5，4.3Hz，1H)，1.81-1.71(m，1H)，1.48-1.33(m，3H)。
实施例16
Figure BDA0003355983310001111
(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺三盐酸盐
步骤A：将(R)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯 并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.193g，0.474mmol)溶于DCM(3 mL)，然后加入2,2,2-三氟乙酸(0.270g，2.37mmol)。在搅拌1小时之后， 蒸发反应，剩余的TFA盐用于后续步骤而不加进一步纯化。
步骤B：将(R)-N-((R)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5- 基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.07g，0.23mmol)作为TFA盐溶于二噁烷 (4mL)，将TEA(0.16mL，1.1mmol)加入溶液。加入3,6-二氯-1,2,4-三 嗪(0.032g，0.22mmol)，将混合物加热至50℃持续3小时。将2-氨基-3- 氯吡啶-4-硫醇钠(0.050g，0.27mmol)加入反应混合物，将混合物加热至 90℃持续18小时。反应冷却至室温，用水(10mL)猝灭和用EtOAc(3X 15mL)萃取。经合并的有机层用盐水洗涤，干燥和蒸发，提供残余物。 残余物用24g硅胶柱纯化(MeOH/DCM混合物2-20％)，提供 (R)-N-((R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢 螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.081g， 0.15mmol，65％收率)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝545.2。
步骤C：将(R)-N-((R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚 磺酰胺(0.081g，0.15mmol)溶于DCM(2mL)，将HCl/二噁烷(4M)(0.5 mL)加入混合物。在室温下搅拌反应30分钟，然后将醚(5mL)加入混合 物。过滤产品和用醚洗涤三次，提供(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺三盐 酸盐(0.057g，0.13mmol，87％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝441.1；1H NMR(400MHz，(CD3)2SO))δ8.73(s，1H)，8.57-8.52(m，2H)，8.08 (d，J＝7.4Hz，1H)，7.75(d，J＝6.3Hz，1H)，7.44-7.38(m，1H)， 6.20(d，J＝6.2Hz，1H)，4.50(s，1H)，3.15(d，J＝17.1Hz，2H)， 1.86(d，J＝11.8Hz，2H)，1.62(d，J＝12.5Hz，2H)，1.07(t，J＝7.0 Hz，1H)。
实施例17
Figure BDA0003355983310001121
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
将(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.100g，0.227mmol)溶于DCM(3mL)，将4M HCl/ 二噁烷(1mL)加入溶液。混合物在室温下搅拌1小时，加入Et2O(10mL)。 过滤形成的固体和干燥。将(S)-5-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二盐酸 盐(30mg，0.097mmol)悬浮于二噁烷(3mL)，将三乙胺(29mg，0.29mmol) 加入混合物。混合物在室温下搅拌30分钟然后加入3,6-二溴-1,2,4-三嗪(23mg，0.097mmol)。反应加热至50℃和搅拌1小时。加入2-氨基-3- 氯吡啶-4-硫醇钠(18mg，0.097mmol)，将反应加热至90℃持续18小时。 反应冷却至室温，用水(10mL)猝灭，混合物用DCM/IPA混合物(3X 10 mL)萃取。经合并的有机层用盐水洗涤(1X 10mL)，干燥和蒸发，提供 残余物。残余物用12g硅胶柱纯化(MeOH/DCM混合物2-20％)，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5-氯-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-胺(15mg，0.032mmol，33％收率)。m/z(esi/APCI)M+1 ＝475.2。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.20(s，1H)，7.76(s，1H)，7.22 (s，2H)，6.13(s，1H)，4.91(s，2H)，4.74(s，2H)，3.97(s，1H)，3.35(d，J＝12.1Hz，2H)，3.12(d，J＝16.2Hz，1H)，2.75(d，J＝16.1 Hz，1H)，1.87(d，J＝12.4Hz，1H)，1.76(d，J＝11.5Hz，1H)，1.67 (d，J＝13.0Hz，1H)，1.39(d，J＝12.5Hz，2H)。
实施例18
Figure BDA0003355983310001131
(S)-1'-(6-((2-氨基-5-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将(R)-N-((S)-1'-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(.10g，0.24mmol)和2-氨基-5-氯吡 啶-4-硫醇钠(0.088g，0.48mmol)分散于N,N-二甲基乙酰胺(1.2mL，0.24 mmol)。加入三乙胺(0.13mL，0.96mmol)，所得溶液在100℃搅拌96 小时。将粗制物质加载于40g硅胶柱上，用0-10％MeOH：DCM+ NH4OH梯度分离，提供(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-5-氯吡啶-4-基)硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺 酰胺(0.066g，0.12mmol，48％)。m/z(esi/APCI)M+1＝544.2。
步骤B：将(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-5-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.028g， 0.051mmol)分散于二氯甲烷(0.51mL，0.051mmol)。加入盐酸溶液 (4.0M，在1,4-二噁烷中)(0.10mL，0.404mmol)，所得溶液在室温下搅 拌30分钟。粗制反应减压过滤，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-5-氯吡啶-4-基) 硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.015g，0.034 mmol，68％收率)，是固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.52(s， 1H)，7.86(s，1H)，7.31(s，1H)，7.19(d，2H，J＝8.2Hz)，6.15(s， 2H)，5.86(s，1H)，5.76(s，1H)，4.64(br，3H)，3.88(s，1H)，3.14(d， 1H，J＝15.7Hz)，2.68(d，1H，J＝14.9)，1.76(m，4H)，1.20(m，3H)； m/z(esi/APCI)M+1＝440.2。
实施例19
Figure BDA0003355983310001141
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二 氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将4-溴-3-环丙基吡啶-2-胺(0.013g，0.061mmol)，三(二亚 苄基丙酮)二钯(0)(0.0044g，0.0048mmol)，4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二 甲基呫吨(0.0035g，0.0061mmol)，和(S)-(1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯(0.025g，0.061mmol)溶于 1,4-二噁烷(0.30mL，0.061mmol)。加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.022 mL，0.12mmol)，所得溶液在100℃搅拌4小时。将粗制物质加载于60g C-18柱和用5-95％MeCN：H2O+0.1％TFA梯度分离。浓缩级分， 再悬浮于DCM，用饱和NaHCO3洗涤和在Na2SO4上干燥。过滤溶液和 浓缩，提供(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.0089g， 0.016mmol，27％)，是固体。m/z(esi/APCI)M+1＝550.2。
步骤B：将(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫基)-1,2,4- 三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺 (0.0080g，0.015mmol)分散于二氯甲烷(0.10mL，0.015mmol)。加入盐 酸(4.0N，在二噁烷中)(0.018mL，0.073mmol)，溶液在室温下搅拌30 分钟。减压过滤粗制反应混合物。沉淀溶于MeOH和浓缩，然后再悬浮 于DCM。溶液用饱和Na2HCO3随后水洗涤。有机物在Na2SO4上干燥和浓缩，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.0054g，0.011mmol，76％收率)，是 固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.46(s，1H)，7.60(s，1H)，7.31 (d，1H，J＝6.3Hz)，7.18(m，2H)，5.81(s，1H)，5.75(d，2H，J＝2.2 Hz)，4.57(br，2H)，3.87(s，1H)，3.87(m，3H)，3.13(m，1H)，2.67 (m，1H)，1.71(m，5H)，1.20(m，2H)，0.85(m，2H)，0.58(m，2H)； m/z(esi/APCI)M+1＝446.2。
实施例20
Figure BDA0003355983310001151
(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将(1R)-1-(3,3-二甲基-1-氧化-1,2-硫杂氮丙啶-2-基)-1,3-二氢 螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.2g，3.2mmol)溶于二氯甲烷(8.0mL， 3.2mmol)。加入盐酸溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，7.9mL，32mmol)， 所得溶液在室温下搅拌2小时。过滤粗制反应，沉淀用醚洗涤，提供 (R)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.82g，3.0mmol，94％)，是固体。 m/z(esi/APCI)M+1＝203.2。
步骤B：将(R)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.494g，2.44mmol) 和3,6-二溴-1,2,4-三嗪(.58g，2.4mmol)溶于1,4-二噁烷(9.8mL，2.4 mmol)。加入三乙胺(1.0mL，7.3mmol)，所得溶液在50℃搅拌1.5小时。 反应用3:1DCM：IPA溶液(25mL)稀释和用2MNaCO3(15mL)洗涤。 有机物与水层分开。合并有机层，用水和饱和NaHCO3洗涤。粗制物质 在Na2SO4上干燥和浓缩，提供(R)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-胺。m/z(esi/APCI)M+1＝362.2。
步骤C：将(R)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1- 胺(0.88g，2.4mmol)分散于N,N-二甲基乙酰胺(9.8mL，2.4mmol)。加 入2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(0.450g，2.4mmol)，随后三乙胺盐酸盐(0.34 g，2.5mmol)。所得溶液在80℃搅拌12小时。粗制反应用3:1IPA：DCM 稀释。有机物用2M Na2CO3和饱和NaHCO3洗涤。合并有机物，在Na2SO4上干燥和浓缩。将粗制物质加载于80g硅胶柱和用0-10％MeOH：EtOAc 洗脱，提供(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.14g，0.33mmol，13.5％收率)，是固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.48(s，1H)，7.70(s，1H)，7.31(d，1H， J＝6.2Hz)，7.18(m，2H)，6.42(s，1H)，5.93(d，1H，J＝5.3Hz)，4.54 (br，2H)，3.88(s，1H)，3.39(m，1H)，3.13(d，1H，J＝15.6Hz)，2.67 (d，1H，J＝15.6)，1.85(m，5H)，1.59(d，1H，J＝13.2Hz)，1.20(m， 3H)；m/z(esi/APCI)M+1＝440.1。
实施例21
Figure BDA0003355983310001161
(3S,4S)-8-(6-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基 -2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺
将(3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷 -4-胺(0.026g，0.090mmol)和3-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯 (0.023g，0.099mmol)溶于N,N-二甲基乙酰胺(0.50mL，0.10mmol)。 加入叔丁醇钾(0.090mL，0.090mmol)，所得溶液在80℃搅拌过夜。将 粗制反应加载于40g硅胶柱和用0-8％MeOH：DCM+NH4OH梯度分 离，提供(3S,4S)-8-(6-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3- 甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(0.0092g，0.024mmol，26.0％收率)， 是固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.23(s，1H)，7.92(m，1H)， 7.57(m，1H)，6.67(s，2H)，5.73(s，2H)，3.99(m，1H)，3.64(d，3H， J＝8.4Hz)，2.88(d，2H，J＝5.0Hz)，1.96(s，2H)，1.54(m，4H)，1.15 (m，1H)，1.05(d，2H，J＝6.2Hz)；m/z(esi/APCI)M+1＝393.2。
实施例22
Figure BDA0003355983310001171
(S)-1'-(6-((6-氨基吡啶-3-基)氧基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将(S)-N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.10g，0.22mmol)，2-氨基-5-羟基 吡啶HCl(0.033g，0.23mmol)，和碳酸铯(0.22g，0.66mmol)溶于(甲基 亚磺酰基)甲烷(2.0mL，0.22mmol)。所得溶液在100℃搅拌过夜。将粗 制物质加载于40g硅胶柱和用10％MeOH：EtOAc+NH4OH等度法分 离，提供(R)-N-((S)-1'-(6-((6-氨基吡啶-3-基)氧基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.015g，0.030mmol， 14％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝494.2。
步骤B：将(R)-N-((S)-1'-(6-((6-氨基吡啶-3-基)氧基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.015g， 0.030mmol)溶于二氯甲烷(0.10mL，0.030mmol)。加入盐酸(4.0N，在 二噁烷中，0.076mL，0.30mmol)，和在室温下搅拌反应1小时。减压 过滤粗制反应，提供沉淀。用MeOH将沉淀洗入分开的滤瓶。将粗制物质加载于4g硅胶柱和用10％MeOH：EtOAc+NH4OH等度梯度分离， 提供(S)-1'-(6-((6-氨基吡啶-3-基)氧基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1-胺(0.0050g，0.013mmol，42％收率)，是固体。1H NMR(400 MHz，(CD3)2SO)δ8.37(s，1H)，7.80(m，1H)，7.30(m，2H)，7.17(m， 2H)，6.46(d，1H，J＝8.8Hz)，5.87(s，2H)，4.33(m，1H)，3.87(m， 1H)，3.20(m，1H)，3.08(d，2H，J＝16.0Hz)，2.65(m，1H)，1.96(s， 2H)，1.73(m，1H)，1.62(m，1H)，1.47(m，1H)，1.21(s，1H)，1.15 (m，2H)；m/z(esi/APCI)M+1＝390.2。
实施例23
Figure BDA0003355983310001181
(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3H-螺[苯并 呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺
步骤A：将(R)-N-((R)-1'-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3H-螺[苯并呋喃 -2,4'-哌啶]-3-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.037g，0.088mmol)和2-氨基 -3-氯吡啶-4-硫醇钠(0.034g，0.18mmol)稀释于N,N-二甲基乙酰胺(0.44 mL，0.088mmol)。加入三乙胺(0.049mL，0.35mmol)，所得溶液在100℃ 搅拌过夜。将粗制物质加载于40g硅胶柱和用0-10％MeOH：EtOAc 梯度分离，提供(R)-N-((R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。m/z(esi/APCI)M+1＝546.1。
步骤B：将(R)-N-((R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.039g， 0.071mmol)分散于1,4-二噁烷(0.71mL，0.071mmol)。加入盐酸(4.0M， 在1,4-二噁烷中，0.14mL，0.57mmol)，所得溶液在室温下搅拌30分 钟。反应用饱和Na2SO4(2.0mL)猝灭直至溶液pH为9，用EtOAc萃取。 将粗制反应加载于24g硅胶柱和用0-10％MeOH：EtOAc+NH4OH梯 度分离，提供(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-3H-螺[苯并呋喃-2,4'-哌啶]-3-胺(0.0077g，0.017mmol，24％收率)， 是油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22(s，1H)，7.71(d，1H， J＝4.4Hz)，7.34(d，1H，J＝7.3Hz)，7.23(m，1H)，6.94(m，1H)，6.84 (d，1H，J＝8.0Hz)，6.14(d，1H，J＝5.4Hz)，4.80(br，2H)，4.14(s， 1H)，3.01(s，1H)，2.49(s，1H)，2.00(m，4H)，1.81(m，1H)，1.26(m， 3H)；m/z(esi/APCI)M+1＝442.1。
实施例24
Figure BDA0003355983310001191
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺
步骤A：将(S)-5-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-5,7-二氢螺[环戊二烯 并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(0.20g，0.49mmol)分散于二氯甲烷(2.5mL，0.49mmol)。加入三氟乙酸(0.38mL，4.9mmol)，所得溶液在 室温下搅拌1小时。浓缩反应，提供(R)-N-((S)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.15g，0.49mmol，99％ 收率)，是玻璃状固体。m/z(esi/APCI)M+1＝308.2。
步骤B：将(R)-N-((S)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5- 基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.15g，0.49mmol)和3,6-二氯-1,2,4-三嗪 (0.084g，0.56mmol)溶于1,4-二噁烷(1.5mL，0.375mmol)。加入三乙 胺(0.21mL，1.47mmol)，所得溶液在100℃搅拌过夜。将粗制物质加载 于40g硅胶柱和用50-100％EtOAc/己烷梯度分离，提供(R)-N-((S)-1'-(6- 氯-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲 基丙烷-2-亚磺酰胺(0.099g，0.23mmol，47％收率)，是固体。m/z (esi/APCI)M+1＝421.2。
步骤C：将(R)-N-((S)-1'-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯 并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.099g，0.23mmol) 和2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(0.10g，0.56mmol)分散于N,N-二甲基乙酰 胺(1.2mL，0.23mmol)。加入三乙胺(0.13mL，0.94mmol)，所得溶液 在100℃搅拌12小时。将粗制反应加载于40g硅胶柱和用0-10％MeOH： EtOAc梯度分离，提供(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2- 甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.027g，0.050mmol，21％收率)，是固体。m/z (esi/APCI)M+1＝545.1。
步骤D：将(R)-N-((S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙烷-2-亚 磺酰胺(0.027g，0.05mmol)分散于1,4-二噁烷(0.50mL，0.05mmol)。 加入盐酸溶液(4.0M，在1,4-二噁烷中，0.099mL，0.40mmol)，所得溶 液在室温下搅拌15分钟。反应用饱和Na2HCO3猝灭，所希望的产品用 EtOAc萃取。有机物在Na2SO4上干燥，浓缩和加载于24g硅胶柱和用 0-20％MeOH：EtOAc+NH4OH梯度分离，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯 吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌 啶]-5-胺(0.0073g，0.017mmol，33％收率)。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO) δ8.45(s，1H)，8.20(s，1H)，7.77(d，1H，J＝5.2Hz)，7.65(d，1H， J＝7.5Hz)，7.15(m，1H)，6.15(d，1H，J＝5.3Hz)，4.91(s，3H)，4.79 (br，2H)，4.06(s，1H)，3.35(m，2H)，3.26(d，1H，J＝16.3)，2.93(d， 1H，J＝16.3Hz)，1.86(m，2H)，1.70(m,1H)，1.43(d，1H，J＝13.2Hz)， 1.25(s，1H)；m/z(esi/APCI)M+1＝441.2。
实施例25
Figure BDA0003355983310001211
(S)-4-((3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)-3,3-二氟-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮
步骤A：在室温下在搅拌下将DIEA(0.030mL，0.17mmol)加入3,3- 二氟-4-碘-1,3-二氢-2H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-酮(0.028g，0.093mmol)， (S)-(1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸 叔丁酯(0.035g，0.085mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.0039g，0.0042 mmol)和4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(0.0049g，0.0085mmol)在 1,4-二噁烷(0.85mL，0.085mmol)中的混合物。混合物用氩脱气5分钟， 随后将其加热至100℃持续1小时。减压浓缩反应然后用快速色谱法纯 化，用0至20％MeOH/EtOAc梯度和2％NH4OH添加剂洗脱，产生 (S)-(1'-(6-((3,3-二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯(假 定定量收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝582.2。
步骤B：将(S)-(1'-(6-((3,3-二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b] 吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲 酸叔丁酯悬浮于5mL DCM并加入TFA(5mL)，同时在室温下搅拌15 分钟。减压浓缩混合物和再悬浮于25mL的3:1DCM：IPA混合物。加 入饱和NaHCO3(25mL)，搅拌5分钟。分层，然后用DCM：IPA(2X15mL)从水层萃取更多有机物。合并有机层和用盐水洗涤(25mL)，在 Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，产生(S)-4-((3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)-3,3-二氟-1,3-二氢-2H-吡咯并 [2,3-b]吡啶-2-酮(0.023g，0.048mmol，57％收率)，是固体。1H NMR(400 MHz，(CD3)2SO)δ8.54(s，1H)，8.09(d，J＝5.7Hz，1H)，7.33(m，1H)，7.24-7.16(m，4H)，6.56(d，J＝5.9Hz，1H)，4.55(br，2H)， 3.94(s，1H)，3.41(br，2H)，3.14(d，J＝15.5Hz，1H)，2.72(d，J＝ 15.85Hz，1H)，1.86-1.66(m，2H)，1.60(d，J＝13.5Hz，1H)，1.24 (m，2H)。m/z(esi/APCI)M+1＝482.1。
实施例26
Figure BDA0003355983310001221
(S)-1'-(6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
将3-碘-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(0.015g，0.061mmol)，(S)-(1'-(6-巯 基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)氨基甲酸叔丁酯 (0.025g，0.061mmol)，碳酸钾(0.015g，0.091mmol)和碘化铜(I)(0.0031 mL，0.091mmol)在DMF(0.61mL，0.061mmol)中的混合物加热至75℃ 持续1小时。反应冷却至室温然后用EtOAc(25mL)和水(25mL)猝灭。该两相混合物在GF/F纸上过滤，然后分层。有机相用盐水洗涤(25mL)， 在Na2SO4上干燥，过滤然后减压浓缩。所得残余物再悬浮于DCM(5mL) 并加入TFA(5mL)，同时在室温下搅拌15分钟。减压浓缩混合物，再 悬浮于DCM：IPA(3:1)(25mL)。加入饱和NaHCO3(25mL)，在室温 下搅拌5分钟。分开两相混合物，用DCM：IPA(2X 15mL)从水层萃 取剩余的有机物。合并所得有机层和用盐水洗涤(25mL)，在Na2SO4上 干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质用快速色谱法纯化，用0至20％ MeOH/EtOAc梯度和2％NH4OH添加剂洗脱，产生(S)-1'-(6-((1H-吡咯 并[2,3-b]吡啶-3-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺 (0.011g，0.025mmol，41％收率)，是固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO) δ12.28(s，1H)，8.30(dd，J＝4.7，1.6Hz，1H)，8.18(br，2H)，8.10 (s，1H)，7.94(d，J＝2.7Hz，1H)，7.90(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)， 7.46(d，J＝7.2Hz，1H)，7.36-7.24(m，4H)，7.15(dd，J＝7.8，4.7 Hz，1H)，4.45-4.31(m，3H)，3.24(t，J＝12.9Hz，2H)，3.15(d，J ＝16.0Hz，1H)，2.97(d，J＝16.2Hz，1H)，1.71-1.56(m，2H)，1.47 (d，J＝13.3Hz，2H)。m/z(esi/APCI)M+1＝430.2。
实施例27
Figure BDA0003355983310001231
(S)-1'-(6-((1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
将1-boc-3-碘-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.027g，0.079mmol)， (R)-N-((S)-1'-(6-巯基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2- 甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.030g，0.072mmol)，碳酸钾(0.015g，0.11mmol) 和碘化铜(I)(0.0037mL，0.11mmol)在DMF(0.72mL，0.072mmol)中 的混合物加热至100℃持续16小时。反应冷却至室温和用EtOAc(25mL) 和水(25mL)猝灭。该两相混合物在GF/F纸上过滤，分层。有机相用盐 水洗涤(25mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物再悬 浮于1,4-二噁烷(5mL)并加入4N HCl/二噁烷(5mL)，同时在室温下搅拌 15分钟。将其减压浓缩和再悬浮于DCM：IPA(3:1)(25mL)。加入饱和 NaHCO3(25mL)，该混合物在室温下搅拌5分钟。分开两相混合物，用 DCM：IPA(2X 15mL)从水层萃取剩余的有机物。合并所得有机层和用 盐水洗涤(25mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质用制 备型HPLC纯化，用5至95％ACN/水梯度和0.1％TFA调节剂洗脱。 产品级分用饱和NaHCO3(25mL)游离碱化。分开所得的两相混合物， 用DCM：IPA(2X 15mL)从水层萃取剩余的有机物。合并所得的有机 层和用盐水洗涤(25mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，产生 (S)-1'-(6-((1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.011g，0.025mmol，41％收率)，是固体。1H NMR (400MHz，(CD3)2SO)δ8.59(dd，J＝4.5，1.6Hz，1H)，8.36(s，1H)， 8.12(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.30(d，J＝6.3Hz，1H)，7.27(dd， J＝8.2，4.5Hz，1H)，7.21-7.14(m，3H)，4.42(t，J＝14.3Hz，2H)， 3.87(s，1H)，3.24(m，2H)，3.08(d，J＝15.8Hz，1H)，2.65(d，J＝15.8Hz，1H)，1.73(td，J＝12.3，4.5Hz，1H)，1.62(td，J＝12.7， 4.3Hz，1H)，1.51(d，J＝13.3Hz，1H)，1.13(d，J＝13.7Hz，1H)。 m/z(esi/APCI)M+1＝431.2。
实施例28
Figure BDA0003355983310001241
(S)-1'-(6-(异喹啉-5-基氧基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将5-羟基异喹啉(0.031g，0.22mmol)，(R)-N-((S)-1'-(6-溴 -1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺 (0.050g，0.11mmol)和碳酸铯(0.11g，0.32mmol)的DMSO(1.1mL， 0.11mmol)溶液加热至100℃持续72小时。冷却反应混合物和加水(25 mL)和EtOAc(25mL)。分开两相，水相用EtOAc(2X 25mL)萃取。合 并有机物，用盐水洗涤(50mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。 将其再悬浮于DCM(2mL)和用快速色谱法纯化，用20至100％EtOAc/ 己烷梯度洗脱，获得(R)-N-((S)-1'-(6-(异喹啉-5-基氧基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(假定定量收 率)。m/z(esi/APCI)M+1＝529.2。
步骤B：将(R)-N-((S)-1'-(6-(异喹啉-5-基氧基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺悬浮于1,4-二噁烷(5 mL)，加入4NHCl/1,4-二噁烷(1mL)，同时在室温下搅拌30分钟。减 压浓缩反应然后再悬浮于DCM(15mL)。粗制产品用饱和NaHCO3(15 mL)游离碱化，在室温下搅拌10分钟。分开所得的两相混合物，用DCM (2X 15mL)萃取剩余的有机物。合并有机层，用盐水洗涤(10mL)，在 Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质用制备型HPLC纯化，用5 至95％ACN/水梯度和0.1％TFA调节剂洗脱。产品级分用饱和NaHCO3 (25mL)游离碱化，然后加入DCM(25mL)。分开所得的两相混合物， 用DCM(2X 15mL)从水层萃取剩余的有机物。合并所得的有机层和用 盐水洗涤(25mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，产生(S)-1'-(6-(异 喹啉-5-基氧基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.0013g， 0.0031mmol，3％的2步收率)，是固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO) δ9.22(s，1H)，9.16(s，1H)，8.45(d，J＝5.9Hz，1H)，8.24(d，J＝ 5.9Hz，1H)，8.12(d，J＝9.0Hz，1H)，7.64(d，J＝8.8Hz，1H)， 7.39(t，J＝4.3Hz，1H)，7.29-7.21(m，4H)，4.69(m，2H)，4.04(s， 1H)，3.46(m，2H)，3.22(d，J＝15.6Hz，1H)，2.91(d，J＝15.5Hz，1H)，1.93-1.78(m，2H)，1.66(d，J＝13.1Hz，1H)，1.52(d，J＝13.9 Hz，1H)。m/z(esi/APCI)M+1＝425.2。
实施例29
Figure BDA0003355983310001261
(3S,4S)-3-甲基-8-(6-((1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺
步骤A：在室温下将DIEA(0.77mL，4.32mmol)加入3,6-二氯-1,2,4- 三嗪(0.19g，1.23mmol)和(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4- 胺二盐酸盐(0.30g，1.23mmol)的1,4-二噁烷(6.2mL，1.23mmol)溶液。 该混合物加热至50℃和搅拌4小时。让反应冷却和用3:1DCM：IPA(25 mL)和1M碳酸钠(25mL)稀释。分层，水层中的额外有机物用DCM：IPA(3X 15mL)萃取。合并有机层，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓 缩。所得残余物通过快速色谱法纯化，用0至15％MeOH/DCM梯度和 1％NH4OH调节剂洗脱，产生(3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2- 氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(0.25g，0.88mmol，71％收率)，是固体。 m/z(esi/APCI)M+1＝284.1。
步骤B：将1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇，钠盐(0.035g，0.19 mmol)，(3S,4S)-8-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸 烷-4-胺(0.035g，0.12mmol)和DIEA(0.065mL，0.37mmol)置于DMA (1.23mL，0.12mmol)，将混合物加热至100℃持续16小时。冷却混合 物和通过快速色谱法用0至20％MeOH/DCM梯度和2％NH4OH添加 剂纯化。减压浓缩产品级分并进一步用制备型HPLC纯化，用5至95％ ACN/水梯度和0.1％TFA调节剂洗脱。产品级分用饱和NaHCO3(25mL) 游离碱化，然后加入3:1DCM：IPA(25mL)。分开所得的两相混合物， 用DCM：IPA(2X 15mL)从水层萃取剩余的有机物。合并所得的有机 层和用盐水洗涤(25mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，产生 (3S,4S)-3-甲基-8-(6-((1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三 嗪-3-基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-胺(0.013g，0.032mmol，26％收率)， 是固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.42(s，1H)，8.11(d，J＝5.1Hz， 1H)，7.55(d，J＝3.5Hz，1H)，6.75(d，J＝5.1Hz，1H)，6.35(d，J ＝3.3Hz，1H)，4.06(m，3H)，3.80(s，3H)，3.68(d，J＝8.4Hz，1H)， 3.60(m，2H)，3.48(d，J＝8.4Hz，1H)，2.92(d，J＝5.3Hz，1H)， 1.76(m，1H)，1.66(m，1H)，1.58-1.45(m，2H)，1.07(d，J＝6.5Hz， 3H)。m/z(esi/APCI)M+1＝412.2。
实施例30
Figure BDA0003355983310001271
(S)-1'-(6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-硫醇(0.043g，0.29mmol)，Hunig 碱(0.17mL，0.95mmol)，和N-((S)-1'-(6-氯-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.080g，0.19mmol)置于 DMA(1.90mL，0.19mmol)，将混合物加热至70℃持续16小时。冷却 反应混合物和直接通过快速色谱法纯化，用0至20％MeOH/DCM梯度 和2％NH4OH作为添加剂洗脱，产生(S)-N-((S)-1'-(6-((1H-吡咯并[2,3-b] 吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基 丙烷-2-亚磺酰胺。假定定量收率。m/z(esi/APCI)M+1＝534.2。
步骤B：将(S)-N-((S)-1'-(6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基)硫基)-1,2,4- 三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺悬浮 于1,4-二噁烷(5mL)，加入4N HCl/1,4-二噁烷(5mL)，同时在室温下 搅拌30分钟。将其减压浓缩和再悬浮于3:1DCM：IPA(25mL)。粗制 产品用饱和NaHCO3(15mL)游离碱化，在室温下搅拌10分钟。分开所 得的两相混合物，剩余的有机物用更多DCM：IPA(2X 15mL)萃取。 合并有机层和用盐水洗涤(10mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。 粗制物质用制备型HPLC纯化，用5至95％ACN/水梯度和0.1％TFA 调节剂洗脱。产品级分用饱和NaHCO3(25mL)游离碱化，和加入DCM： IPA(25mL)。分开所得的两相混合物，用DCM：IPA(2X 15mL)从水 层萃取剩余的有机物。合并所得的有机层和用盐水洗涤(25mL)，在 Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩，产生(S)-1'-(6-((1H-吡咯并[2,3-b]吡啶 -4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(0.015g， 0.035mmol，19％收率)，是固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ11.87(s，1H)，8.45(s，1H)，8.09(d，J＝5.1Hz，1H)，7.51(t，J＝2.9Hz，1 H)，7.31(d，J＝6.1，1H)，7.22-7.14(m，3H)，6.73(d，J＝8.7Hz， 1H)，6.36(dd，J＝3.3，1.4Hz，1H)，4.64-4.42(br，2H)，3.87(s， 1H)，3.34(m，2H)，3.12(d，J＝15.5Hz，1H)，2.66(d，J＝15.8Hz， 1H)，1.80(td，J＝12.5，3.7Hz，1H)，1.69(td，J＝12.3，4.1Hz，1H)， 1.58(d，J＝13.1Hz，1H)，1.17(d，J＝13.1Hz，1H)。m/z(esi/APCI) M+1＝430.2。
实施例31
Figure BDA0003355983310001281
(S)-1'-(6-(2-氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(50mg，0.11mmol)，(2-氯苯基)取代硼 酸(20mg，0.13mmol)和四(Tetrakis)(12mg，0.011mmol)溶于二噁烷(1 mL)，随后加入Na2CO3(135μL，0.27mmol)。反应用氩吹扫，密封和 加热至90℃。在搅拌12小时之后，冷却反应并用乙酸乙酯和水稀释。分层。乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。残余物在硅胶上纯化， 用20-70％乙酸乙酯/己烷洗脱，提供N-((S)-1'-(6-(2-氯苯基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20mg，0.040 mmol，37％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝496.2。
步骤B：将N-((S)-1'-(6-(2-氯苯基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20mg，0.040mmol)用DCM (500μL)和HCl(101μL的4M溶液，0.4mmol)稀释。在搅拌1小时之后， 浓缩反应。残余物用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠稀释。混合物搅拌10分钟 并置于分液漏斗中。分层。乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用10％甲醇/乙酸乙酯洗脱，提供(S)-1'-(6-(2-氯苯 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(9.5mg，0.024mmol， 60％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.55(s，1H)，7.75(dd，J＝7.04， 2.3Hz，1H)，7.48(dd，J＝7.82，1.57Hz，1H)，7.38(m，3H)，7.23 (m，3H)，4.74(s，2H)，4.03(s，1H)，3.38(m，2H)，3.15(d，J＝15.65 Hz，1H)，2.79(d，J＝15.65Hz，1H)，1.84(m，4H)，1.66(m，1H)， 1.42(m，1H)。m/z(esi/APCI)M+1＝392.1。
实施例32
Figure BDA0003355983310001291
(S)-1'-(6-(苯硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(50mg，0.11mmol)用DMSO(300μL) 稀释，随后加入苯硫酚(24mg，0.22mmol)和Cs2CO3(88mg，0.27mmol)。 反应置于氮下和加热至100℃。在搅拌1小时之后，冷却反应，用乙酸 乙酯和水稀释。分层。乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在 硅胶上纯化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脱，提供2-甲基-N-((S)-1'-(6-(苯硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)丙烷-2-亚磺酰胺(25 mg，0.051mmol，47％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝494.1。
步骤B：将2-甲基-N-((S)-1'-(6-(苯硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-基)丙烷-2-亚磺酰胺(25mg，0.051mmol)用DCM(500μL) 和HCl(127μL of 4M溶液，0.51mmol)稀释。在搅拌1小时之后，浓缩 反应。残余物用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠稀释。混合物搅拌10分钟并置 于分液漏斗中。分层。乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在 硅胶上纯化，用10％甲醇/乙酸乙酯洗脱，提供(S)-1'-(6-(苯硫基)-1,2,4- 三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(11mg，0.028mmol，56％收 率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05(s，1H)，7.47(m，2H)，7.32(m， 4H)，7.22(m，3H)，4.62(s，2H)，3.98(s，1H)，3.30(m，2H)，3.11 (d，J＝15.65Hz，1H)，2.75(d，J＝15.65Hz，1H)，1.35-1.85(m，6H)， m/z(esi/APCI)M+1＝390.2。
实施例33
Figure BDA0003355983310001301
(S)-1'-(6-苄基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20mg，0.043mmol)和四(Tetrakis)(5.0 mg，0.0043mmol)用溴化苄基锌(II)(129μL，0.065mmol)稀释。反应用 氩吹扫，密封和加热至70℃和搅拌12小时。冷却反应，用乙酸乙酯和 饱和碳酸氢钠稀释。分层，乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物 质在硅胶上纯化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脱，提供N-((S)-1'-(6-苄基 -1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺 (5mg，0.011mmol，24％收率)。m/z(esi/APCI)M+1＝476.2。
步骤B：将N-((S)-1'-(6-苄基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8mg，0.017mmol)用DCM(100μL)和 HCl(42μL，0.17mmol)稀释。在搅拌1小时之后，浓缩反应。残余物用 乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠稀释。混合物搅拌10分钟并置于分液漏斗中。 分层，乙酸乙酯在MgSO4上干燥，过滤和浓缩。物质在硅胶上纯化，用 10％甲醇/乙酸乙酯洗脱，提供(S)-1'-(6-苄基-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1-胺(5mg，0.013mmol，80％收率)。1H NMR(400MHz， CDCl3)δ7.97(s，1H)，7.20-7.35(m，9H)，4.61(s，2H)，4.15(s，2H)， 3.98(s，1H)，3.28(m，2H)，3.11(d，J＝15.65Hz，1H)，2.75(d，J＝ 15.65Hz，1H)，1.50-1.85(m，5H)，1.34(m，1H)。m/z(esi/APCI)M+1 ＝372.2。
实施例34
Figure BDA0003355983310001311
(S)-2-氨基-4-((3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪 -6-基)硫基)-3-氯吡啶1-氧化物
将(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢 螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(100mg，0.23mmol)置于MeOH(36.4mL，0.23 mmol)，加入间-氯过氧苯甲酸("间-CPBA")(84.0mg，0.34mmol)和在 室温下搅拌18小时。浓缩反应至约10mL，加入饱和碳酸氢盐和用DCM 萃取。合并萃取物和浓缩。所得残余物通过反相色谱法(5-70％ACN：水和0.1％TFA)纯化。物质分散于10％MeOH/DCM。加入饱和碳酸氢 盐，分层。干燥有机层，过滤和浓缩，提供(S)-2-氨基-4-((3-(1-氨基-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)-3-氯吡啶1-氧化物(3.6 mg，0.0079mmol，3％收率)。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.47(s， 1H)，7.99(d，1H，J＝7.3Hz)，7.31(d，1H，J＝5.5Hz)，7.26-7.11(m，5H)，6.21(d，1H，J＝7.3Hz)，4.54(br，2H)，4.09(m，2H)，3.87(s， 1H)，3.12(d，1H，J＝14.6Hz)，2.68(s，1H)，1.86-1.54(m，3H)，1.19 (m，1H)；m/z(esi/APCI)M+1＝456.1。
实施例35
Figure BDA0003355983310001321
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将(S)-1-(((R)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(100mg，0.227mmol)溶于CH2Cl2(0.1mL)， 然后加入4N HCl/二噁烷(0.5mL)和在室温下搅拌30分钟。加入Et2O(3 mL)进一步沉淀固体和过滤。粘稠固体在真空炉中干燥和不加进一步表 征地使用。
步骤B：将(S)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺二盐酸盐(35mg，0.113mmol)悬浮于二噁烷(1mL)。将3,6-二溴-1,2,4-三嗪(27.0mg，0.113 mmol)加入悬浮液，随后是三乙胺(78.8μL，0.565mmol)。反应加热至 50℃持续30分钟。反应用氮吹扫。加入3-氨基-2-氯苯硫醇钠(20.5mg， 0.113mmol)，将反应加热至90℃持续2小时。浓缩反应和在硅胶(0-10％ MeOH/EtOAc和1％NH4OH)上纯化，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-4-氯-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(25.1mg，0.053mmol，47％收率)，是固体。1H(400MHz，CDCl3)δ8.22(s，1H)， 7.73(d，J＝5.5Hz，1H)，7.26-7.18(m，3H)，6.13(d，J＝5.5Hz，1H)， 4.75(br s，2H)，4.04(s，1H0，3.45-3.34(m，2H)，3.20(d，J＝16.2Hz， 1H)，2.81(d，J＝16.2Hz，1H)，2.10-2.00(m，2H)，1.93-1.84(m，1H)， 1.83-1.74(m，1H)，1.73-1.66(m，1H)，1.47-1.41(m，1H)。m/z(esi/APCI) M+1＝474.1。
实施例36
Figure BDA0003355983310001331
(S)-3-((4-((3-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)氨基)-2,2-二甲基丙烷腈
步骤A：将3-氨基-2,2-二甲基丙烷腈(115mg，1.16mmol)加入搅拌 的3-氯-2-氟-4-碘吡啶(250mg，0.97mmol)的DMSO(2.5mL)溶液和在 120℃搅拌16小时。反应混合物用水稀释和用EtOAc萃取。干燥有机部 分，浓缩，所得残余物通过硅胶柱色谱法(30％EtOAc-己烷)纯化，提供 3-((3-氯-4-碘吡啶-2-基)氨基)-2,2-二甲基丙烷腈(250mg，77％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝335.7。
步骤B：将DIEA(0.26mL，1.49mmol)加入搅拌的3-((3-氯-4-碘吡 啶-2-基)氨基)-2,2-二甲基丙烷腈(250mg，0.74mmol)和3-巯基丙酸甲酯 (0.09mL，0.82mmol)的二噁烷(5mL)溶液和用氩脱气10分钟。加入 Xantphos(22mg，0.03mmol)和Pd(OAc)2(10mg，0.04mmol)，再脱 气10分钟。在预热油浴中在100℃搅拌反应混合物4小时。反应混合物 过滤通过
Figure BDA0003355983310001341
垫和用EtOAc洗涤。蒸发溶剂，粗制物质通过硅胶柱色 谱法(50％EtOAc-己烷)纯化，提供3-((3-氯-2-((2-氰基-2-甲基丙基)氨基) 吡啶-4-基)硫基)丙酸甲酯(230mg，94％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝ 327.9。
步骤C：在0℃将NaOEt(21％重量，在EtOH中)(0.25mL，0.77 mmol)加入搅拌的3-((3-氯-2-((2-氰基-2-甲基丙基)氨基)吡啶-4-基)硫基) 丙酸酯(210mg，0.64mmol)的THF(5mL)溶液和在0℃搅拌30分钟。 在25℃浓缩反应，加入二乙醚(10mL)。过滤所得固体，提供3-氯-2-((2- 氰基-2-甲基丙基)氨基)吡啶-4-硫醇钠(130mg，90％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝242.1。
步骤D：将3-氯-2-((2-氰基-2-甲基丙基)氨基)吡啶-4-硫醇钠(132.34 mg，0.5mmol)加入搅拌的(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1-胺(60.0mg，0.1mmol)的n-丁醇(1.5mL)溶液和在密封管中 在120℃搅拌16小时。浓缩反应，和粗制物质通过反相制备型HPLC纯 化(30-95％ACN：水(0.1％NH3))，获得(S)-3-((4-((3-(1-氨基-1,3-二氢螺 [茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1,2,4-三嗪-6-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)氨基)-2,2-二 甲基丙烷腈(8mg，0.017mmol，9％收率)，是固体。1H NMR(400MHz， 甲醇-d4)δ8.37(s，1H)，7.76(d，J＝5.5Hz，1H)，7.40-7.33(m，1H)， 7.25-7.16(m，3H)，6.05(d，J＝5.5Hz，1H)，4.69(s，2H)，3.98(s， 1H)，1.40-1.22(m，7H)，3.72(s，2H)，3.51-3.35(m，2H)，3.20(d，J ＝15.7Hz，1H)，2.84(d，J＝15.8Hz，1H)，1.97-1.70(m，2H)，1.65(d， J＝13.3Hz，1H)，1.46(d，J＝13.4Hz，1H)，1.36(s，6H)；m/z(esi)M+1 ＝521.5。
实施例37
Figure BDA0003355983310001351
(S)-1'-(6-(二环[4.2.0]辛-1(6),2,4-三烯-2-基硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：在-78℃在氩下将t-BuLi(56mL，96mmol，1.7M，在戊 烷中)滴加至搅拌的1-氟-2-(2-碘乙基)苯(6.0g，24.0mmol)的戊烷(60mL) 和Et2O(20mL)溶液。在-78℃搅拌反应混合物额外30分钟，向其加入 无水THF(12.0mL)。除去冷却浴，搅拌反应混合物额外15分钟。通过 溶于Et2O(60mL)加I2(7.31g，28.8mmol)。在加入前，将I2醚溶液用 氩脱气5分钟。反应混合物用NH4Cl猝灭和用Et2O萃取。经合并的有 机层干燥(Na2SO4)和蒸发，提供2-碘二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯(6.6g，粗 制)，其用于后续步骤。m/z(gc-ms)M＝230。
步骤B：将DIEA(4.24mL，24.35mmol)加入搅拌的2-碘二环[4.2.0] 辛-1,3,5-三烯(6.6g，粗制)和3-巯基丙酸甲酯(1.48mL，13.39mmol)的 二噁烷(25mL)溶液和用氩脱气10分钟。加入Xantphos(352mg，0.61 mmol)和Pd(OAc)2(164mg，0.73mmol)和再脱气10分钟。在预热的油 浴中在密封管中在100℃搅拌反应混合物4小时。反应混合物过滤通过
Figure BDA0003355983310001352
垫和用乙酸乙酯洗涤。蒸发溶剂，粗制物通过硅胶柱色谱法(5％ MeOH/DCM)纯化，提供3-(二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-基硫基)丙酸甲酯 (2.5g，46％收率，2步)，是固体。m/z(esi)M+1＝223。
步骤C：在-78℃将NaOEt(1.7mL，5.40mmol，21％重量，在EtOH 中)加入搅拌的3-(二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-基硫基)丙酸甲酯(1g，4.50 mmol)的THF(15mL)溶液和在相同温度搅拌30分钟。浓缩反应混合物， 粗制物与醚研磨。过滤固体，提供二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-硫醇钠(520 mg，73％收率)，是固体。m/z(esi)M-Na＝134.9。
步骤D：将二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-硫醇钠(88mg，0.56mmol) 加入搅拌的(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺 (100mg，0.28mmol)的丁醇(5mL)溶液和在100℃搅拌4小时。浓缩反 应混合物和通过反相制备型HPLC纯化(50-90％ACN：0.1％ NH4OH/H2O)，提供(S)-1'-(6-(二环[4.2.0]辛-1(6),2,4-三烯-2-基硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺(30mg，26％收率)， 是固体。1HNMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.36(s，1H)，7.30(d，J＝6.5 Hz，1H)，7.23-7.09(m，5H)，7.00(d，J＝7.1Hz，1H)，4.49(s，2H)， 3.86(s，1H)，3.40-3.34(m，1H)，3.29-3.21(m，1H)，3.16-3.03(m， 3H)，2.82(t，J＝4.2Hz，2H)，2.66(d，J＝15.3Hz，1H)，2.16-1.83(m， 2H)，1.77(t，J＝11.6Hz，1H)，1.66(t，J＝11.6Hz，1H)，1.55(d，J ＝13.0Hz，1H)，1.14(d，J＝13.1Hz，1H)。m/z(esi)M+1＝416.2。
实施例38
Figure BDA0003355983310001361
(S)-1'-(6-(二环[4.2.0]辛-1(6),2,4-三烯-2-基硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺
步骤A：在室温下将三乙胺(0.30mL，2.12mmol)加入搅拌的(S)-5,7- 二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺二盐酸盐(117mg，0.42mmol) 的1,4二噁烷(2.8mL)溶液和搅拌20分钟。加入3,6-二溴-1,2,4-三嗪(100 mg，0.42mmol)，在室温下搅拌2小时和在50℃加热1小时。蒸发溶剂 和通过硅胶色谱法纯化(3％MeOH-DCM)，提供(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(75mg，49％收率)， 是固体。m/z(esi)M+1＝360.8。
步骤B：将二环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯-2-硫醇钠(63.2mg，0.4mmol) 加入搅拌的(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶 -6,4'-哌啶]-5-胺(72mg，0.2mmol)的n-丁醇(4mL)溶液和在100℃搅拌4 小时。蒸发反应混合物，粗制反应混合物溶于DMSO和通过反相制备型 HPLC纯化(30-70％ACN：水(0.1％NH3))，获得(S)-1'-(6-(二环[4.2.0] 辛-1(6),2,4-三烯-2-基硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b] 吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(19.3mg，24％收率)，是固体。1H NMR(400MHz， (CD3)2SO)δ8.37(s，1H)，8.32(d，J＝5.0Hz，1H)，7.65(d，J＝7.5Hz， 1H)，7.23-7.09(m，3H)，7.01(d，J＝7.1Hz，1H)，4.50(s，2H)，3.91 (s，1H)，3.44-3.36(m，1H)，3.30-3.23(m，1H)，3.20-3.02(m，3H)， 2.86-2.73(m，3H)，2.18-2.13(m，2H)，1.85-1.62(m，2H)，1.58(d，J ＝13.3Hz，1H)，1.17(d，J＝13.6Hz，1H)。m/z(esi)M+1＝417.2。
实施例39
Figure BDA0003355983310001371
(S)-1'-(6-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7- 二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺
步骤A：在室温下将TEA(0.15mL，1.06mmol)加入搅拌的(S)-5,7- 二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺盐酸盐(58.47mg，0.21mmol) 的1,4-二噁烷(1.4mL)溶液和搅拌20分钟。加入3,6-二溴-1,2,4-三嗪(50 mg，0.21mmol)，在室温下搅拌2小时然后在50℃加热1小时。蒸发溶 剂，用硅胶柱色谱法(7-14％MeOH/DCM)纯化，获得(S)-1'-(6-溴-1,2,4- 三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(70mg，91％ 收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝362.9。
步骤B：将3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-硫醇(72.5mg，0.42mmol)加入 搅拌的(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'- 哌啶]-5-胺(50mg，0.14mmol)的n-BuOH(5mL)溶液和加热至90℃持 续16小时。反应用反相制备型HPLC(20-50％ACN：水(0.1％NH3))纯 化，获得(S)-1'-(6-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3- 基)-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(13mg，21％收率)， 是粘稠固体。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.38(s，2H)，7.85(d，J＝ 7.6Hz，1H)，7.74(d，J＝5.6Hz，1H)，7.30(t，J＝6.3Hz，1H)，5.98 (d，J＝5.4Hz，1H)，4.79-4.67(m，2H)，4.15(s，1H)，3.47-3.42(m， 2H)，3.02(d，J＝16.7Hz，1H)，2.94(s，3H)，1.98-1.76(m，2H)，1.69(d，J＝13.6Hz，1H)，1.52(d，J＝13.4Hz，1H)。m/z(esi)M+1＝455.4。
实施例40
Figure BDA0003355983310001381
(S)-1'-(6-(苯基硒烷基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-胺
步骤A：将NaBH4(163mg，4.3mmol)加入搅拌的二苯基二硒(161 mg，0.5mmol)的PEG-400(5mL)溶液，反应混合物在70℃加热1小时。 反应冷却至室温，加入N-((S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚 -2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(200mg，0.43mmol)。反应再 次在70℃在氮气氛下加热16小时。反应冷却至室温，倾至水中，用乙 酸乙酯(3X 150mL)萃取，在无水Na2SO4上干燥，和减压浓缩。所得残 余物通过柱色谱法在硅胶上用70％乙酸乙酯/己烷纯化，提供2-甲基-N-((S)-1'-(6-(苯基硒烷基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1- 基)丙烷-2-亚磺酰胺(100mg，43％)，是固体。MS(m/z)＝542.2(M+H)。
步骤B：将4N HCl/二噁烷(1mL)加入搅拌的2-甲基-N-((S)-1'-(6-(苯 基硒烷基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)丙烷-2-亚磺酰 胺(50mg，0.09mmol)的MeOH(1mL)溶液，在室温下搅拌反应混合物 30分钟。减压浓缩反应混合物，粗制物用二乙醚洗涤，减压干燥和通过 在环境温度操作和流速20mL/分的制备型HPLC纯化(Xbridge C18(50 x19mm，5μ)。流动相：A＝20mM碳酸氢铵/水，B＝乙腈；梯度特征： 流动相初始组成为80％A和20％B，然后在12分钟内达到20％A和 80％B，然后在13分钟内达到5％A和95％B，在该组成保持多至15 分钟)，提供(S)-1'-(6-(苯基硒烷基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'- 哌啶]-1-胺(15mg，37％)，是固体。1H NMR(400MHz，(CD3)2SO)δ8.36(s，1H)，7.52(dd，J＝3.1，6.5Hz，2H)，7.39-7.26(m，4H)，7.23-7.10 (m，3H)，4.46(t，J＝13.9Hz，2H)，3.84(s，1H)，3.42-3.33(m，1H)， 3.24(d，J＝12.8Hz，1H)，3.10(d，J＝15.6Hz，1H)，2.64(d，J＝15.7 Hz，1H)，1.82-1.70(m，2H)，1.69-1.58(m，2H)，1.54(d，J＝13.4Hz，1H)，1.13(d，J＝14.2Hz，1H)；MS(m/z)＝438.4(M+H)。
实施例41
Figure BDA0003355983310001391
(S)-1-氨基-1'-(6-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈
步骤A：在0℃将三乙胺(0.26mL，1.88mmol)加入搅拌的3,6-二溴 -1,2,4-三嗪(180mg，0.75mmol)的二噁烷(5mL)溶液和搅拌5分钟。在0℃滴加1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈盐酸盐(224mg，0.75mmol) /二噁烷(1mL)和搅拌1小时。反应混合物用水稀释和用EtOAc萃取。 有机部分在无水Na2SO4上干燥，过滤，减压浓缩和通过硅胶柱色谱法 纯化(10％MeOH/DCM)，提供(S)-1-氨基-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3- 二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈(200mg，69％收率)，是固体。m/z(esi)M+1＝ 385.2。
步骤B：将3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-硫醇钠(92mg，0.46mmol)加 入搅拌的(S)-1-氨基-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌 啶]-5-腈(90mg，0.23mmol)的n-丁醇(5mL)溶液和在微波中在120℃搅 拌1小时。浓缩反应混合物，所得残余物通过反相制备型HPLC纯化 (40-75％ACN：水(0.1％NH3))，提供外消旋产品，对其进行手性分离 (chiralpak OJ-H(250x20mm)5μ，流速：25g/分，流动相：60％CO2+ 40％(0.5％异丙胺/甲醇)，ABPR：120巴，温度：35℃)。收集第一洗脱 峰，提供(S)-1-氨基-1'-(6-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪 -3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈(10mg，9％收率)。1H NMR(400 MHz，(CD3)2SO)δ8.48(s，1H)，7.80(d，J＝5.3Hz，1H)，7.67(d，J＝ 6.9Hz，2H)，7.50(d，J＝7.7Hz，1H)，6.66(d，J＝4.8Hz，1H)，5.93 (d，J＝5.3Hz，1H)，4.57(s，2H)，3.93(s，1H)，3.20(d，J＝15.9Hz， 1H)，2.85(d，J＝4.5Hz，3H)，2.72(d，J＝16.0Hz，1H)，2.15-1.90 (m，2H)，1.90-1.76(m，2H)，1.64(t，J＝14.3Hz，2H)，1.11(d，J＝13.8Hz，1H)，m/z(esi)M+1＝479.1。
实施例42
Figure BDA0003355983310001401
(R)-1-氨基-1'-(6-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈
(R)-1-氨基-1'-(6-((3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-5-腈(10mg，9％收率)根据实施例41制备， 收集步骤B的第二洗脱峰。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ8.38(s，1H)， 7.76(d，J＝5.6Hz，1H)，7.61(d，J＝6.3Hz，2H)，7.55(d，J＝8.0Hz， 1H)，6.00(d，J＝5.6Hz，1H)，3.49-3.34(m，3H)，3.31-3.17(m，2H)， 2.97(s，3H)，2.88(d，J＝16.1Hz，1H)，2.02-1.88(m，1H)，1.86-1.73 (m，1H)，1.69(d，J＝13.3Hz，1H)，1.38(d，J＝14.0Hz，1H)，1.30 (s，2H)，0.91(d，J＝7.2Hz，1H)，m/z(esi)M+1＝479.1。
实施例43
Figure BDA0003355983310001411
(R)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基 -5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺
步骤A：将三乙胺(0.74mL，5.0mmol)加入搅拌的3-甲氧基-5,7-二 氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺盐酸盐(418mg，1.37mmol)的二 噁烷(10mL)溶液和在室温下搅拌20分钟。加入3,6-二溴-1,2,4-三嗪(249 mg，1.05mmol)和在室温下搅拌2小时。反应在50℃加热1小时。溶剂 浓缩至干和用Et2O洗涤，提供1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基-5,7- 二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(410mg，粗制)，是固体。粗 制物用于后续步骤而不纯化。m/z(esi)M+1＝391.1。
步骤B：将2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(93mg，0.511mmol)加入搅 拌的1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶 -6,4'-哌啶]-5-胺(100mg，0.256mmol)的n-丁醇(2.0mL)溶液和在120℃ 搅拌3小时。反应混合物冷却至室温，加入2-氨基-3-氯吡啶-4-硫醇钠(93 mg，0.51mmol)和在120℃搅拌16小时。减压浓缩反应和用Et2O洗涤。 粗制物与又一批(S)-1'-(6-溴-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊 二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(100mg)混合，通过手性HPLC纯化 (Chiralpak IG(21.0x250mm)，5μ，DCM/EtOH/异丙胺40/60/0.1，9.0 mL/分)。收集第一洗脱峰，提供(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫 基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基-5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌 啶]-5-胺(12mg，5％的3步收率)，是固体。1H NMR(400MHz，甲醇-d4) δ8.42(s，1H)，8.24(d，J＝2.8Hz，1H)，7.66(d，J＝5.5Hz，1H)，7.53 (s，1H)，6.04(d，J＝5.5Hz，1H)，4.77-4.66(m，2H)，4.46(s，1H)， 3.91(s，3H)，3.50-3.39(m，2H)，3.28-3.12(m，2H)，1.95-1.60(m，4H)。
实施例44
Figure BDA0003355983310001421
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基 -5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺
(S)-1'-(6-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)硫基)-1,2,4-三嗪-3-基)-3-甲氧基 -5,7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-胺(5mg，5％的2步收率) 根据实施例43制备，收集第二洗脱峰，是固体。1H NMR(400MHz， 甲醇-d4)δ8.40(s，1H)，8.16(s，1H)，7.66(d，J＝5.4Hz，1H)，7.50(s， 1H)，6.04(d，J＝5.5Hz，1H)，4.84-4.64(m，2H)，4.30(s，1H)，3.89 (s，3H)，3.44(t，J＝12.7Hz，2H)，3.26-3.17(m，1H)，3.06(d，J＝16.5 Hz，1H)，1.94-1.75(m，2H)，1.76-1.58(m，2H)；m/z(esi)M+1＝471.1。
表4的下述化合物根据上述程序用适当的原料和中间体制备。
表4
Figure BDA0003355983310001431
Figure BDA0003355983310001441
Figure BDA0003355983310001451
Figure BDA0003355983310001461
Figure BDA0003355983310001471
Figure BDA0003355983310001481
Figure BDA0003355983310001491
Figure BDA0003355983310001501
Figure BDA0003355983310001511
应理解所枚举的实施方式并不期望的将本发明限制于那些实施方 式。相反，本发明期望涵盖全部备择对象、变型和等价物，其可以包括 在权利要求所定义的本发明范围内。从而，前文描述仅视为示例本发明 的原理。

Claims (25)

1.选自式I的化合物：
Figure FDA0003355983300000011
或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中：
L1选自直连键，S，CH2，O，NH和Se；
R1选自氢和甲基；
R2选自(a)苯基，(b)5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中1个氮杂原子可以用氧取代以形成氧化物，(c)8-10元双环环烷基，(d)10元双环芳基，(e)9-10元双环杂环，其中所述杂环含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，和(f)9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述苯基、杂芳基、双环环烷基、双环芳基、双环杂环和双环杂芳基任选用一个或多个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，氧代，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用1至3个选自卤素、氰基和OH的基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮、氧和硫的杂原子；
R3选自：
Figure FDA0003355983300000012
X10是CR9或O，
X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个可以是O；
R4和R5独立地选自氢和C1-C3烷基；
R6选自氢，OH和任选用OH基团取代的C1-C3烷基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R99是氢或氘；
x是1或2；
y是0或1；和
Ra是氢或任选用1至3个选自OH、甲氧基、卤素和氰基的基团取代的C1-C4烷基。
2.权利要求1的化合物，其中
L1选自直连键，S，CH2，O，NH和Se；
R1选自氢和甲基；
R2选自(a)任选用1个或2个卤素基团取代的苯基；(b)5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1至4个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，任选用1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3-C6环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的3至6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮和氧的杂原子；(c)8-10元双环部分不饱和的环烷基；(d)9-10元双环部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的基团取代；(e)9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用1至3个选自卤素和C1-C3烷基的基团取代；
R3选自：
Figure FDA0003355983300000031
X10是CR9或O，
X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个可以是O；
R4和R5独立地选自氢和C1-C3烷基；
R6选自氢，OH和任选用OH基团取代的C1-C3烷基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，氰基，C1-C3烷基和C1-C3烷氧基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R99是氢或氘；
x是1或2；
y是0或1；和
Ra是氢或任选用1至3个选自OH和CN的基团取代的C1-C4烷基，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
3.权利要求1或2的化合物，其中：
L1选自直连键，S，CH2，O，和NH；
R1是氢；
R2选自(a)任选用1个或2个卤素基团取代的苯基；(b)5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1个氮杂原子，其中所述杂芳基任选用1个或2个取代基取代，所述取代基选自卤素，任选用1至3个卤素基团取代的C1-C3烷基，C3环烷基，C1-C3烷氧基，NHRa，和任选用OH基团取代的6元杂环，其中所述杂环含有1个或2个选自氮和氧的杂原子；(c)8-10元双环部分不饱和的环烷基；(d)9元双环部分不饱和的杂环，其中所述杂环含有2或3个氮杂原子，其中所述杂环任选用1至3个选自卤素和氧代的基团取代；和(e)9-10元双环杂芳基，其中所述双环杂芳基含有1至3个选自氮、氧和硫的杂原子，其中所述双环杂芳基任选用1个选自卤素和C1-C3烷基的基团取代；
R3选自：
Figure FDA0003355983300000041
X10是CR9或O，
X11是CH2或O，其中X10和X11中仅一个可以是O；
R4和R5独立地选自氢和甲基；
R6是甲基，或
R6和R9与它们连接至的原子一起形成6元芳基或5至6元杂芳基，其中所述杂芳基含有1或2个选自氮和硫的杂原子，其中所述芳基和杂芳基任选用1或2个基团取代，所述基团选自卤素，甲基，甲氧基和氰基；
R7和R8是氢，或
R7和R8与它们连接至的原子一起形成乙基桥从而R3是氮杂双环；
R99是氢或氘；
x是1或2；和
Ra是氢或C1-C4烷基任选用1个选自OH和氰基的基团取代，
或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
4.权利要求1至3中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中L1选自直连键和S。
5.权利要求1至4中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中R1是氢。
6.权利要求1至5中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中R2选自苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，2,3-二氯苯基，2-氨基-3-氯吡啶-4-基，2,3-二氯吡啶-4-基，3-氯-2-甲基吡啶-4-基，3-氯-2-(4-羟基哌啶-1-基)吡啶-4-基，3-氯-2-(甲基氨基)吡啶-4-基，2,3-二甲基吡啶-4-基，2-氨基-3-环丙基吡啶-4-基，2-氨基-5-氯吡啶-4-基，3-氯-2-甲氧基吡啶-4-基，3-氯-2-(三氟甲基)吡啶-4-基，6-氨基-2-(三氟甲基)吡啶-3-基，2-氨基-3-溴吡啶-4-基，6-氨基吡啶-3-基，2-氨基-3-氟吡啶-4-基，3-氯-2-((2-氰基-2-甲基丙基)氨基)吡啶-4-基，2-氨基-3-氯-1-氧化吡啶-4-基，3-氯-2-((2-羟基乙基)氨基)吡啶-4-基，二环[4.2.0]辛-1(6),2,4-三烯-2-基，2,3-二氢-1H-吡咯并[3,2-c]吡啶-1-基，3,3-二氟-2-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，2,3-二氢-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-4-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基，咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基，1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基，1H-吲唑-3-基，1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基，咪唑并[1,2-a]嘧啶-3-基，异喹啉-5-基和1H-吲哚-3-基。
7.权利要求1至6中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中R3选自：
Figure FDA0003355983300000051
Figure FDA0003355983300000061
8.权利要求1的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自实施例1至84。
9.权利要求8的化合物，或其互变异构体或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
Figure FDA0003355983300000071
Figure FDA0003355983300000081
10.化合物：
Figure FDA0003355983300000082
及其互变异构体和药学上可接受的盐。
11.化合物：
Figure FDA0003355983300000083
及其互变异构体和药学上可接受的盐。
12.化合物：
Figure FDA0003355983300000091
及其互变异构体和药学上可接受的盐。
13.药物组合物，包含权利要求1至12中任一项的化合物，或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
14.药物组合物，包含权利要求1至13中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
15.权利要求1至12中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗过增殖疾病。
16.权利要求1至12中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，用作药物。
17.权利要求1至12中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，用于治疗中。
18.权利要求1至12中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐，用于治疗过增殖疾病。
19.在细胞中抑制SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶活性的方法，包括用权利要求1至12的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐处理细胞。
20.在有需要的患者中抑制SHP2蛋白酪氨酸磷酸酶活性的方法，包括向患者给予根据权利要求1至12的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐的步骤。
21.在有需要的患者中治疗过增殖障碍或改善其严重性的方法，包括向患者给予根据权利要求1至12的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐。
22.权利要求21的方法，其中所述过增殖疾病选自黑色素瘤，幼年型单核细胞性白血病，成神经细胞瘤，费城染色体阳性慢性髓性，费城染色体阳性急性成淋巴细胞白血病，急性髓性白血病，骨髓增殖瘤(比如真性红细胞增多症，原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化)，乳腺癌，肺癌，肝癌，结直肠癌，食管癌，胃癌，头颈鳞状细胞癌，成胶质细胞瘤，间变性大细胞淋巴瘤，甲状腺癌，和斯皮茨样瘤。
23.权利要求21的方法，其中所述过增殖疾病选自神经纤维瘤病和努南综合征。
24.权利要求19至23中任一项的方法，其中权利要求1至12中任一项的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐与至少一种用来治疗或改善过增殖障碍的其它化疗剂共同给予。
25.权利要求24的方法，其中其它化疗剂选自曲莫替尼，贝美替尼，司美替尼，考比替尼，康奈非尼，威罗菲尼，达拉非尼，劳拉替尼，克唑替尼，色瑞替尼，阿来替尼和布加替尼。
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