CN113712904B - 一种布地奈德柔性脂质体温敏凝胶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种布地奈德柔性脂质体温敏凝胶及其制备方法,所述布地奈德脂质体温敏凝胶由如下重量份数的组分组成:布地奈德0.01%~0.5%、脂质材料0.05%~5%、表面活性剂0.02%~1.0%、温敏材料10%~80%、生物黏附剂0.1%~5%;本发明制剂是一种能在常温下呈液态,在生理温度下迅速胶凝的直肠定向给药系统,是一种方便给药、生物利用度高、可以延长药物在体内的释放时间,减少不良反应的布地奈德直肠定向给药制剂。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及一种用于直肠定向给药的布地奈德柔性脂质体温敏凝胶及其制备方法。
背景技术
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)是一种局限于结肠的、复发与缓解交替出现的、弥漫性黏膜炎症为特征的慢性疾病。UC多与直肠炎症有关,常从直肠向近端延伸至结肠的其他区域,病因尚未明确,暂无法治愈。
UC临床症状为持续或反复发作的血性腹泻,通常伴有里急后重和直肠紧迫感的突出症状,如果治疗不及时、不充分,炎症发展可能会导致持续的肠损伤、粘膜损伤,以及感染、住院、血栓栓塞,甚至需要进行结肠切除术或增加结直肠癌的发生风险。UC相关结直肠癌是长程UC患者最严重的并发症,约占结直肠癌的1%~2%,却占到UC患者死亡原因的大约15%。我国流行病学显示,近20余年,UC就诊人数快速上升,目前大陆地区UC的患病率约为11.60/10000,且有被低估的可能。
糖皮质激素是活动期UC患者诱导治疗的重要药物。5-氨基水杨酸应答不佳的轻、中度UC,常需全身给予糖皮质激素治疗,但全身用药不良反应多,如感染、库欣综合征、骨质疏松症等。布地奈德(budesonide)是一种合成的第二代皮质类固醇类激素,在局部给药部位具有很强的抗炎作用,较其他皮质类固醇全身毒性小、副作用少。对于氨基水杨酸类药物应答不佳的轻、中度UC,考虑到不良反应,布地奈德既可作为一线药物,也可作为二线药物来诱导UC缓解。
2014年10月7日,FDA批准治疗远端UC的布地奈德直肠给药泡沫剂,2017年布地奈德泡沫剂已通过2期、3期临床试验,批准在日本上市,该临床试验中一天两次局部给予布地奈德,6周后黏膜完全愈合率为46.4%,明显高于5-氨基水杨酸组;此外临床缓解率、内镜下评分均有较好表现。然而,国内尚无相应制剂批准上市,临床多采用将吸入用布地奈德混悬液作为灌肠液进行超说明书用药,且几乎无生物黏附性,在直肠的自身蠕动下,在肠道保留时间短,局部吸收差;另一方面,布地奈德几乎不溶于水,限制了药物的局部吸收,影响药物疗效。虽然目前已经有布地奈德缓释片进入临床试验阶段,但其为全结肠给药的缓释片,在远端直肠、乙状结肠等病灶部位的药物浓度较低,难以达到理想疗效。故有必要研究一种能够在远端直肠、乙状结肠内保留时间长、局部吸收好的药物制剂,以达到定向给药、治疗UC的目的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方便给药、生物利用度高、可以延长药物在体内的释放时间,减少不良反应的布地奈德直肠定向给药制剂。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种布地奈德柔性脂质体温敏凝胶,由如下重量份数的组分组成:布地奈德0.01%~0.5%、脂质材料0.05%~5%、表面活性剂0.02%~1.0%、温敏材料10%~80%、生物黏附剂0.1%~5%。
进一步地,一种布地奈德柔性脂质体温敏凝胶及其制备方法,由如下重量份数的组分组成:布地奈德0.02%~0.3%、脂质材料0.1%~3%、表面活性剂0.02%~0.7%、温敏材料10%~60%、生物黏附剂0.2%~4%。
进一步地,所述脂质材料由大豆磷脂、卵磷脂、胆固醇一种或多种组合,优选大豆磷脂和胆固醇。
进一步地,所述表面活性剂由吐温80、十二烷基硫酸钠、胆酸钠、司盘60一种或多种组合,优选胆酸钠。
进一步地,所述温敏材料由泊洛沙姆、壳聚糖、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、枸橼酸、PLGA一种或多种组合,优选泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠。
所述生物黏附剂由瓜尔胶、黄原胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸一种或多种组合,优选瓜尔胶和聚丙烯酸。
进一步地,所述脂质材料大豆磷脂和胆固醇质量比为5:1~8:1;所述温敏材料泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠质量比为10:1~12:1;所述生物黏附剂瓜尔胶和聚丙烯酸质量比为2:1~4:1。
进一步地,所述脂质材料大豆磷脂和胆固醇质量比为6.5:1;所述温敏材料泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠质量比为11:1;所述生物黏附剂瓜尔胶和聚丙烯酸质量比为3:1。
进一步地,所述布地奈德柔性脂质体温敏凝胶制备方法如下:
(1)柔性脂质体的制备:将处方量的布地奈德、胆固醇和大豆磷脂适量于圆底烧瓶中,加入100~1000mL氯仿超声使其溶解,再加入胆酸钠水溶液,置于超声波清洗器超声10min形成稳定的W/O型乳状液;移至旋转蒸发仪在真空恒温水浴条件下,除去有机溶剂;再加入适量水继续水合30min~2h,之后于冰浴条件下探头超声10~30s,即得;
(2)柔性脂质体温敏凝胶制备:将处方量的泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠、瓜尔胶和聚丙烯酸缓慢加入(1)中,搅拌0.5h~2h均匀后,于4℃下静置溶胀24h,即得。
进一步地,所述旋转蒸发仪转速为80~200转/分钟;所述水浴温度为20~50℃;所述搅拌转速为50~200转/分钟。
本发明的有益效果在于:
(1)本发明布地奈德柔性脂质体温敏凝胶能一种能在常温下呈液态,在生理温度下迅速胶凝的直肠定向给药系统,既方便给药又可有效防止药物泄露,提高药物的粘附性和局部浓度、延长药物在体内的释放时间,减少不良反应。
(2)本发明具有脂质体和温敏凝胶双重优势,利用脂质体特殊的磷脂双分子层的膜结构可提高疏水性药物的分散度,增加药物溶解度,加入胆酸钠,让脂质体产生形变,更好的促进药物吸收、延长黏膜滞留时间;利用温敏凝胶相变特性,可以增加药物局部粘附性、延长局部作用时间。
(3)温敏凝胶的性质较为稳定,不易受环境pH值和离子强度的影响。
附图说明
图1是实施例1制备的布地奈德柔性脂质体。
图2是布地奈德柔性脂质体温敏凝胶与其他布地奈德制剂的体外释放曲线。
具体实施方式
实施例1
处方:布地奈德50mg,大豆磷脂195mg、胆固醇30mg、胆酸钠50mg、泊洛沙姆55g、羧甲基纤维素钠5g、瓜尔胶240mg、聚丙烯酸80mg。
制备工艺:
(1)柔性脂质体的制备:将处方量的布地奈德、胆固醇和大豆磷脂适量于圆底烧瓶中,加入450mL氯仿超声使其溶解,再加入胆酸钠水溶液,置于超声波清洗器超声10min形成稳定的W/O型乳状液;移至旋转蒸发仪(转速120转/分钟)在真空恒温水浴40℃条件下,除去有机溶剂;再加入适量水,继续水合1h,之后于冰浴条件下探头超声20s,即得(主药浓度为0.25mg/ml)。
(2)柔性脂质体温敏凝胶制备:将处方量的泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠、瓜尔胶和聚丙烯酸缓慢加入(1)中,搅拌(100转/分钟)1h均匀后,于4℃下静置溶胀24h,即得。
实施例2
处方:布地奈德50mg,大豆磷脂180mg、胆固醇40mg、胆酸钠40g、泊洛沙姆48g、羧甲基纤维素钠10g、瓜尔胶220mg、聚丙烯酸100mg。
制备工艺:
(1)柔性脂质体的制备:将处方量的布地奈德、胆固醇和大豆磷脂适量于圆底烧瓶中,加入400mL氯仿超声使其溶解,再加入胆酸钠水溶液,置于超声波清洗器超声10min形成稳定的W/O型乳状液;移至旋转蒸发仪(转速100转/分钟)在真空恒温水浴30℃条件下,除去有机溶剂;再加入适量水,继续水合1.5h,之后于冰浴条件下探头超声20s,即得(主药浓度为0.25mg/ml)。
(2)柔性脂质体温敏凝胶制备:将处方量的泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠、瓜尔胶和聚丙烯酸缓慢加入(1)中,搅拌(120转/分钟)1h均匀后,于4℃下静置溶胀24h,即得。
实施例3
处方:布地奈德50mg,大豆磷脂190mg、胆固醇35mg、胆酸钠40mg、泊洛沙姆50g、羧甲基纤维素钠10g、瓜尔胶200mg、聚丙烯酸80mg。
制备工艺:
(1)柔性脂质体的制备:将处方量的布地奈德、胆固醇和大豆磷脂适量于圆底烧瓶中,加入400mL氯仿超声使其溶解,再加入胆酸钠水溶液,置于超声波清洗器超声10min形成稳定的W/O型乳状液;移至旋转蒸发仪(转速150转/分钟)在真空恒温水浴35℃条件下,除去有机溶剂;再加入适量水,继续水合40min,之后于冰浴条件下探头超声20s,即得(主药浓度为0.25mg/ml)。
(2)柔性脂质体温敏凝胶制备:将处方量的泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠、瓜尔胶和聚丙烯酸缓慢加入(1)中,搅拌(80转/分钟)1h均匀后,于4℃下静置溶胀24h,即得。
试验例1温敏材料种类的筛选
正常人直肠温度一般为36.5~37.5℃,为保证温敏凝胶在室温下为液态,便于给药,进入直肠后发生充分迅速的胶凝,以32℃为参考温度。
以胶凝温度为指标,固定瓜尔胶用量0.2%,固定温敏材料用量20%,筛选泊洛沙姆、壳聚糖、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、枸橼酸、PLGA对胶凝温度的影响,结果如下表:
结果表明,泊洛沙姆、羧甲基纤维素钠胶凝温度较为理想。
试验例2生物黏附剂种类的筛选
以黏度为指标,考察在25℃、30℃、35℃时温敏凝胶的黏度值,固定泊洛沙姆用量20%,固定生物黏附剂用量0.3%,考察瓜尔胶、黄原胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸对黏度的影响。
结果表明,各辅料在30-35℃均具有黏度突释情况,但瓜尔胶、聚丙烯酸黏度适中,较为理想。
试验例3筛选大豆磷脂与胆固醇质量比
固定布地奈德50mg、胆酸钠50mg、泊洛沙姆55g、羧甲基纤维素钠5g、瓜尔胶240mg、聚丙烯酸80mg用量,按实施例1方法制备,以释放度为考察指标(释放12h,具体方法见试验例4),筛选大豆磷脂与胆固醇质量比,结果如下表:
结果表明,大豆磷脂和胆固醇质量比在5:1~8:1范围内,12h释放度均能达到80%以上。但只有配比为6.5:1处方能在12h基本释放完全。
试验例4筛选泊洛沙姆与羧甲基纤维素钠质量比
固定布地奈德50mg,大豆磷脂195mg、胆固醇30mg、胆酸钠50mg、瓜尔胶240mg、聚丙烯酸80mg用量,按实施例1方法制备,以释放度为考察指标(释放12h,具体方法见试验例4),筛选泊洛沙姆与羧甲基纤维素钠质量比,结果如下表:
结果表明,泊洛沙姆与羧甲基纤维素钠质量比在10:1~12:1范围内,12h释放度均能达到80%以上。但只有配比为11:1处方能在12h基本释放完全。
试验例5筛选瓜尔胶与聚丙烯酸质量比
固定布地奈德50mg,大豆磷脂195mg、胆固醇30mg、胆酸钠50mg、泊洛沙姆55g、羧甲基纤维素钠5g用量,按实施例1方法制备,以释放度为考察指标(释放12h,具体方法见试验例4),筛选瓜尔胶与聚丙烯酸质量比,结果如下表:
结果表明,瓜尔胶与聚丙烯酸质量比在2:1~4:1范围内,12h释放度均能达到80%以上。但只有配比为3:1处方能在12h基本释放完全。
试验例6凝胶胶凝温度测定
方法:采用试管倒置法进行胶凝温度的测定。在试管中加入凝胶溶液2mL,将温度计插入试管,置于恒温水浴锅中,试管内液面低于水面,测试温度从25℃开始缓慢升温,每隔0.2℃将试管倾斜180°以观察溶液的流动情况。溶液不流动时的最低温度即为胶凝温度,重复3次取平均值。
本发明实施例1~3样品胶凝温度测定结果见下表:
试验例7凝胶的黏度测定
采用NDJ-5S数字式粘度计对脂质体凝胶黏度(25℃)进行测定,结果见下表。
试验例8体外释药性能评价
(1)释放度测定方法
色谱条件色谱柱为Agilent SB-C18(250mm×4.6mm,5μm),以72∶28的甲醇-水为流动相等度洗脱,检测波长260nm,进样量10μL,流速1mL·min-1,柱温25℃。样品处理:在各个时间点的样品中分别加入甲醇0.4mL溶解后氮吹富集,再用0.2mL甲醇复溶,涡旋2min,12000r·min-1离心15min后取上清液,即得。
(2)释药性能测定
采用Franz扩散池对布地奈德不同剂型的体外释药性能进行评价。供给池和接收池间以SD大鼠直肠隔离。向接收池中加入恒温至37.5℃的PBS(pH 7.4)释放介质17mL,将Franz扩散池置于37.5℃恒温水浴磁力搅拌器中,设定搅拌转速为400r·min-1,平衡10min后,停止搅拌,排尽气泡。取不同剂型的布地奈德各1.0mL,加入到供给池中。分别于2、4、6、8、10、12、18、24h各取样0.4mL,同时补充恒温至37.5℃的释放介质0.4mL。按上述方法进行测定。计算累积释放度。
对比例1
处方为:布地奈德0.002%、羟丙甲纤维素0.923%、泊洛沙姆407 18.308%、泊洛沙姆188 2.001%、苯扎溴铵0.02%、其余为pH 5.5水溶液(用0.029%柠檬酸,0.20%柠檬酸钠调节);采用本申请的实施例1的方法制备得到布地奈德温敏凝胶,即制备步骤:将羟丙甲纤维素、泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、苯扎溴铵加入布地奈德水溶液中(pH 5.5水溶液(用0.029%柠檬酸,0.20%柠檬酸钠调节)),其他同实施例1制备方法。
对比例2
处方为:布地奈德2%、壳聚糖1.4%、β-甘油磷酸钠23.78%、吐温80 0.025%;采用本申请的实施例1的方法制备得到布地奈德温敏凝胶,即制备步骤:将壳聚糖、β-甘油磷酸钠加入含有吐温80的布地奈德水溶液中,其他制备方法同实施例1。
对比例3
处方为:布地奈德50mg,大豆磷脂195mg、胆固醇30mg、泊洛沙姆55g、羧甲基纤维素钠5g、瓜尔胶240mg、聚丙烯酸80mg。采用本申请的实施例1的方法制备得到布地奈德脂质体温敏凝胶,即制备步骤除无加入胆酸钠步骤,其他制备方法同实施例1。(普通脂质体温敏凝胶,在实施例1基础上去掉胆酸钠)
对比例4
处方为:布地奈德50mg、泊洛沙姆55g、羧甲基纤维素钠5g、瓜尔胶240mg、聚丙烯酸80mg;采用本申请的实施例1的方法制备得到布地奈德温敏凝胶,即制备步骤:除无脂质体制备步骤外,其他制备方法同实施例1。(温敏凝胶,在实施例1基础上去掉脂质材料和胆酸钠)
对比例5
处方为:布地奈德50mg,大豆磷脂195mg、胆固醇30mg、胆酸钠50mg。采用本申请的实施例1的方法制备得到布地奈德脂质体,即制备步骤除无温敏凝胶制备步骤外,其他制备方法同实施例1。(柔性脂质体,在实施例1基础上去掉温敏凝胶材料、生物黏附剂)
对比例6
处方为:布地奈德50mg,大豆磷脂195mg、胆固醇30mg。采用本申请的实施例1的方法制备得到布地奈德脂质体,即制备步骤除无温敏凝胶制备步骤外,其他制备方法同实施例1。(普通脂质体,在实施例1基础上去掉胆酸钠、温敏凝胶材料、生物黏附剂)
将上述处方进行释放度结果对比结果见下表:
结果表明:本发明布地奈德柔性脂质体温敏凝胶实施例1能在12h基本释放完全,而不加胆酸钠凝胶处方释放度只有86%左右;普通的温敏凝胶和其他处方在24h内也均不能释放完全。说明本发明布地奈德脂质体温敏凝胶具有缓释能力,黏附性强,释药持久且完全。
试验例9小鼠体内药效评价
1、材料与试剂
昆明小鼠、葡聚糖硫酸钠(DSS)、1ml注射器若干、乙醇、生理盐水、多聚甲醛(标本固定)、冻存管、液氮。
尿粪便隐血定性检测试剂盒、MPO活性(U/g)试剂盒、TNF-α试剂盒、IL-10试剂盒、IL-4试剂盒、IL-8试剂盒。
2、动物模型的建立
小鼠常规饲养2周。正常对照组给予正常饮食。模型组给予3.5%DSS水溶液自由饮用14d,造模完成后改用1%DSS喂养。造模成功后小鼠应精神萎靡、活动减少、粪便频数增加,出现稀便、血便。选取造模成功的小鼠继续试验。
3、分组方式及给药剂量
造模成功后,除阴性对照组外,选择按疾病活动指数在7-12分的小鼠随造模完成后,将所有造模小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分分层,剔除极轻度炎症模型小鼠(以0-3分极轻度炎症,4-6分轻度炎症,7-9分中度炎症,10-12分为重度炎症分层),其余小鼠按炎症严重程度分层后再随机分为模型组、实施例1低剂量组、实施例1中剂量组、实施例1高剂量组、对比例1-6组,每组12只。
给药剂量:
阴性对照组:普通空白小鼠;
模型对照组:模型制作成功后,每天灌肠0.9%生理盐水0.2ml;
实施例1低剂量组:模型制作成功后,每天灌肠0.0125mg/ml实施例1药0.2ml;
实施例1中剂量组:模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml实施例1药0.2ml;
实施例1高剂量组:模型制作成功后,每天灌肠0.05mg/ml实施例1药0.2ml;
对比例1组:模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml对比例1药0.2ml;
对比例2组:模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml对比例2药0.2ml;
对比例3组(普通脂质体温敏凝胶组):模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml对比例3药0.2ml;
对比例4组(温敏凝胶组):模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml对比例4药0.2ml;
对比例5组(柔性脂质体组):模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml对比例5药0.2ml;
对比例6组(普通脂质体组):模型制作成功后,每天灌肠0.025mg/ml对比例6药0.2ml;
每组给药干预14天。灌肠深度3-3.5cm。
备注:实施例1低剂量组以布地奈德计相当于成人1mg/天;实施例1中剂量组、对比例1-6以布地奈德计相当于成人2mg/天;实施例1高剂量组以布地奈德计相当于成人4mg/天。
剂量换算:
成人布地奈德灌肠的剂量为每日2mg,一天一次或两次。按标准动物等效剂量折算系数法计算小鼠的等效剂量DB(mg/只):0.005mg/天。
DB=DA×(KB/KA)(其中,DB为B种动物的剂量(mg/只);DA为A种动物的剂量(mg/只);KB为B种动物的等效剂量折算系数;KA为A种动物的等效剂量折算系数)。已知20g标准小鼠的KB值为1,70kg标准体重人的KA值为388,人用剂量DA布地奈德为每日2mg,代入式计算,得到小鼠的给药剂量DB为每日0.005mg。DA美沙拉嗪为每日4g,代入计算,得到小鼠给药剂量DB为每日10mg。
4、观察治疗
4.1疾病活动指数(DAI)
疾病活动指数(Disease activity index,DAI)通过对小鼠体重、新鲜粪便粘稠度、便血程度三方面考察评估小鼠肠炎症状程度,即DAI=小鼠体重下降率+粪便粘稠度+便血得分,DAI具体评分标准及计算见下表(疾病活动指数(DAI)评分表、大便隐血情况评分表)。小鼠大便隐血情况严格按照尿粪便隐血定性检测试剂盒说明书(邻联甲苯胺法)、判定小鼠新鲜粪便隐血程度血便,具体操作为:滴加试剂一(邻联甲苯胺溶液)2-3滴于白瓷板上,滴加试剂二(过氧化氢)1-2滴,如不变色,立即挑取粪便少许与上述试剂混合,观察结果。
疾病活动指数(DAI)评分表
观察指标 | 0分 | 1分 | 2分 | 3分 | 4分 |
体质量 | 不下降 | 下降1-5% | 下降6-10% | 下降11-15% | 下降>15% |
大便性状 | 正常 | 轻度松软 | 松散但不粘肛周 | 稀便 | 水样便(肉眼血便) |
大便隐血 | 阴性 | 阳性(+) | 阳性(2+) | 阳性(3+) | 阳性(4+) |
大便隐血情况评分表
显色情况 | 隐血情况 |
2min内不显色 | 阴性(-) |
10s后由浅蓝色渐变为蓝色 | 阳性(+) |
初显浅蓝色,逐渐呈蓝褐色 | 阳性(2+) |
立即呈蓝褐色 | 阳性(3+) |
立即呈蓝黑褐色 | 阳性(4+) |
于给药第1天、给药第7天、第14天收集小鼠粪便,观察各组小鼠一般情况(包括活动、毛发、饮食量、体重改变情况)、大便性状,按试剂盒方法测定小鼠大便隐血情况,并按照上述方法计算DAI评分,记录统计入下表。在给药第1天,模型组与治疗组均无明显差异。在治疗7天后,实施例1低剂量组、中剂量组、高剂量组较模型组DAI评分显著降低(p<0.05),而各对比例组未能显著减低DAI评分;与对比例4、5、6组比较,实施例1中剂量组显著降低DAI评分(p<0.05),即实施例能够更快改善DAI评分。在治疗14天后,实施例1中剂量组能够进一步降低DAI评分,且与模型对照组有显著差异(p<0.05);另一方面,较对比例1、2、3、4、5、6组,实施例1中剂量组降低DAI评分的程度更明显(p<0.05),即给予相同剂量的布地奈德时,实施例1较对比例1、2、3、4、5、6能显著改善DAI评分。
各组小鼠分别在给药1、7、14天后的DAI评分
注:*与模型组比p<0.05;△与实施例1中剂量比p<0.05
4.2结肠长度及结肠黏膜损伤指数
给药14天后,于第15天统一麻醉小鼠(前一天禁食不禁水),仰卧位固定于动物手术台,剪取全结肠后平展于白瓷板上,测量结肠长度。肉眼观察结肠病变情况和结肠黏膜损伤情况,并进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分(冰上操作),具体评分标准见下表。
结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分
记录并统计结肠长度、结肠指数及CMDI评分,并列入下表。与模型对照组比较,实施例1低剂量组、实施例1中剂量组、实施例1高剂量组、对比例1-4组结肠长度显著增加(p<0.05);相较与对比例2、4、5、6组,实施例1中剂量结肠长度显著增加。与模型对照组比较,实施例1低剂量组,实施例1中剂量组、实施例1高剂量组、对比例3、5、6组CMDI评分显著降低;相较于对比例1、2、3、4、5、6组,实施例1中剂量组CMDI评分显著降低,即在布地奈德相同剂量下,实施例1较对比例1-6组能更好的改善DSS所致溃疡性结肠炎小鼠黏膜的愈合情况。
各组小鼠的结肠长度及CMDI评分
注:*与模型组比p<0.05;△与实施例1中剂量比p<0.05
4.3组织病理学观察及评分(HE染色)
给药14天后,取溃疡、充血水肿明显处约1cm的结肠末端,将取好的用于病理观察的结肠组织于4%的多聚甲醛溶液中固定72h,常规石蜡包埋,制成蜡块标本,按5μm厚度进行病理切片;装片后统一置于二甲苯中脱蜡15s,然后按下述步骤进行各级乙醇脱氷:二甲苯(I)15min,二甲苯(Ⅱ)10min,无水乙醇、95%乙醇(I)、95%乙醇(Ⅱ)、80%乙醇各5秒,蒸馏水洗2min;脱水完毕后行苏木素染色4min,蒸馏水洗三遍;盐酸乙醇分化2s,蒸馏水返蓝2min;伊红(HE)染色3min,蒸馏水洗三遍;梯度乙醇脱水:80%乙醇、95%乙醇(I)、95%乙醇(Ⅱ)、无水乙醇各5s;透明;二甲苯(I)、二甲苯(Ⅱ)各5s;取出所有片子,使用中性树胶封片后风干;于显微镜下观察结肠黏膜组织炎症损化程度,并依照Cooper等评分方法对粘膜损害及病变范围进行综合评分。镜下观察结肠黏膜病理改变,按Cooper等的方法行组织病理学评分,评分标准见下表。
结肠组织损伤评分表
统计分析病理评分,结果列入下表。与模型对照组比较,各个给药组均显著降低病理评分。相较于对比例1-6组,实施例1中剂量组对病理评分的降低更显著(p<0.05)。
结肠组织病理损伤评分结果
注:*与模型组比p<0.05;△与实施例1中剂量比p<0.05
综上所述,本发明实施例1中剂量组和高剂量组具有更优抗溃疡性结肠炎作用。
所属领域的普通技术人员应当理解:以上任何实施例的讨论仅为示例性的,并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子;在本公开的思路下,以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合,步骤可以以任意顺序实现,并存在如上所述的本申请中一个或多个实施例的不同方面的许多其它变化,为了简明它们没有在细节中提供。
本申请中一个或多个实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此,凡在本申请中一个或多个实施例的精神和原则之内,所做的任何省略、修改、等同替换、改进等,均应包含在本公开的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种布地奈德柔性脂质体温敏凝胶,其特征在于,所述布地奈德脂质体温敏凝胶是由如下重量份数的组分制成的:布地奈德0.01%~0.5%、脂质材料0.05%~5%、表面活性剂0.02%~1.0%、温敏材料10%~80%、生物黏附剂0.1%~5%,所述脂质材料为大豆磷脂和胆固醇,所述表面活性剂为胆酸钠,所述温敏材料为泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠,所述生物黏附剂为瓜尔胶和聚丙烯酸,所述脂质材料大豆磷脂和胆固醇质量比为5:1~8:1;所述温敏材料泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠质量比为10:1~12:1;所述生物黏附剂瓜尔胶和聚丙烯酸质量比为2:1~4:1,该布地奈德柔性脂质体温敏凝胶的制备方法如下:
(1)柔性脂质体的制备:将处方量的布地奈德、胆固醇和大豆磷脂适量于圆底烧瓶中,加入100~1000mL氯仿超声使其溶解,再加入胆酸钠水溶液,置于超声波清洗器超声10min形成稳定的 W/O型乳状液;移至旋转蒸发仪在真空恒温水浴条件下,除去有机溶剂;再加入适量水继续水合30min~2h,之后于冰浴条件下探头超声10~30s,即得;
(2)柔性脂质体温敏凝胶制备:将处方量的泊洛沙姆和羧甲基纤维素钠、瓜尔胶和聚丙烯酸缓慢加入(1)中,搅拌0.5h~2h均匀后,于4℃下静置溶胀24h,即得。
2.如权利要求1所述的布地奈德柔性脂质体温敏凝胶,其特征在于,所述布地奈德脂质体温敏凝胶是由如下重量份数的组分制成的:布地奈德0.02%~0.3%、脂质材料0.1%~3%、表面活性剂0.02%~0.7%、温敏材料10%~60%、生物黏附剂0.2%~4%。
3.如权利要求1或2所述的布地奈德柔性脂质体温敏凝胶,其特征在于所述旋转蒸发仪转速为80~200转/分钟;所述水浴温度为20~50℃。
4.如权利要求3所述的布地奈德柔性脂质体温敏凝胶,其特征在于,所述搅拌转速为50~200转/分钟。
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