CN113549130A - 一种丰胸肽的液相合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种丰胸肽的液相合成方法,属于有机合成技术领域。该方法包括:Ac‑Ser(tBu)‑Val‑Val‑OH和NH2‑Val‑Arg(Pbf)‑Thr(tBu)‑OCH3缩合得到Ac‑Ser(tBu)‑Val‑Val‑Val‑Arg(Pbf)‑Thr(tBu)‑OCH3,再脱除甲酯保护基,最后通过三氟乙酸一次性脱除Pbf保护基和tBu保护基得到丰胸肽。该刚发采用全新的液相合成,将六肽链段分解为两个三个片段后再进行对接,各个片段易于纯化,后处理方法简单,方法稳定性好,最终产品不需要制备纯化,一次析出纯度达95%以上,适合大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域,具体涉及一种丰胸肽的液相合成方法。
背景技术
乙酰六肽-38(丰胸肽)为一种乙酰化的六肽,其肽序列片段为Ac-Ser-Val-Val-Val- Arg-Thr-OH,可显著刺激使用部位脂肪合成,增大胸部或脸颊的体积,塑造完美身材。研究表明过氧化物增殖物活化受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ)对于前体脂肪细胞转化为脂肪细胞有决定性作用。乙酰六肽-38(丰胸肽)刺激过氧化物增殖物活化受体γ辅激活因子-1α((Peroxisome proliferator-activated receptor γcoactivator 1 α,PGC-1α)的表达,提高脂肪的生成速率,增加特定部位(如胸部、臀部或脸颊)脂肪组织体积,塑造完美身体曲线。
现有技术CN105250178A提供了一种用于增大乳房体积的复合物及其制备方法,其有效成分为乙酰基六肽-38占0.045%-0.055%,制得得复合物可以制备成丰胸膏,丰胸精华液等美容品,具有促进乳房的体积变大的功效,令胸部更丰满。CN106798655A提供一种具有丰胸作用的多肽组合物,包括促进脂肪组织生长的多肽(主要为乙酰基六肽-38)和具有修复功能的多肽(主要为棕榈酰三肽-1,棕榈酰五肽-3等),该组合物既可以加固乳房表面皮肤的结缔组织作用,又可以促进乳房内的脂肪组织生长,增大乳房体积。
种种情况表明,丰胸肽可以显著刺激使用部位脂肪合成,增大胸部或脸颊的体积,塑造身体曲线,但目前为止,都是直接使用市售产品制成丰胸膏或精华液,而未提供其本身的制备方法,现有技术中多肽的合成通常采用固相法。
发明内容
本发明提供了一种丰胸肽的液相合成方法,该方法包括以下步骤:
S301:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S302:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH。
S303:丰胸肽的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH通过三氟乙酸一次性脱除Pbf保护基和tBu保护基得到丰胸肽。
其中,Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备过程包括以下步骤:
S101:NH2-Ser(tBu)-OH的制备
Fmoc-Ser(tBu)-OH脱除Fmoc保护基得到NH2-Ser(tBu)-OH。
S102:Ac-Ser(tBu)-OH的制备
NH2-Ser(tBu)-OH与乙酸酐反应得到Ac-Ser(tBu)-OH。
S103:Boc-Val-Val-OCH3的制备
缬氨酸甲酯盐酸盐与Boc-Val-OH缩合得到Boc-Val-Val-OCH3。
S104:NH2-Val-Val-OCH3的制备
Boc-Val-Val-OCH3脱除Boc保护基得到NH2-Val-Val-OCH3。
S105 Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-OH与NH2-Val-Val-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
S106:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH。
具体地,步骤S101具体包括:Fmoc-Ser(tBu)-OH采用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Ser(tBu)-OH。
步骤S102具体包括:以水为溶剂,加碱(具体可以为氢氧化钠)调整pH至9-11,在30℃以下滴加乙酸酐进行乙酰化,乙酸酐加完后,继续反应,反应完成后加酸(具体可以为浓盐酸)调节pH至7-8,冷却、抽滤、洗涤、干燥和重结晶得到产品。
步骤S103具体包括:将缬氨酸甲酯盐酸盐溶于有机溶剂中,加有机碱调pH至7-9,加入Boc-Val-OH、缩合剂和催化剂,室温下进行缩合反应,反应完成后后处理得到Boc-Val-Val-OCH3。
步骤S105具体包括:将Ac-Ser(tBu)-OH和NH2-Val-Val-OCH3溶于有机溶剂中,加有机碱调pH至7-9,加入缩合剂和催化剂,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
其中,NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备包括以下步骤:
S201:Fmoc-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜反应得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3。
S202:NH2-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Thr(tBu)-OCH3。
S203:Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S204:NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S205:Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S206:NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
具体地,步骤S201具体包括:将Fmoc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇,室温下滴加氯化亚砜,滴加完成后升温至50-65℃搅拌反应,反应完成后,后蒸去甲醇和剩余的氯化亚砜得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3,Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜的摩尔比为1:1.1-1.3。
步骤S202具体包括:将Fmoc-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S203具体包括:将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和NH2-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加入缩合剂和催化剂,室温下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
步骤S204具体包括:将Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S205具体包括:将Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加有机碱调pH至7-9,加入缩合剂和催化剂进行缩合反应,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S206具体包括:Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3,用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
具体地,步骤S301具体包括:将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加入缩合剂和催化剂进行缩合反应,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S303具体包括:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH和三氟乙酸在室温下反应,反应完成后,加结晶溶剂,固液分离和干燥得到丰胸肽。其中,三氟乙酸的用量是Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH重量的3-5倍,结晶溶剂的用量是三氟乙酸重量的5-10倍;结晶溶剂选自乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚等,优选为乙醚。
其中,溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲苯等,优选为二氯甲烷。有机碱选自三甲胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或吡啶等,优选为三乙胺。缩合剂选自DCC、DIC和EDCI等中的一种或几种,优选为DCC。催化剂二甲氨基吡啶(DMAP)和1-羟基苯并三唑等中的一种或几种,优选为DMAP。缩合反应的后处理过程为:反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到目标产物。缩合反应中,另一种原料的用量为主原料摩尔量的1.00-1.05倍,缩合剂的用量为主原料摩尔量的1.1-1.5倍,催化剂的用量为主原料摩尔量的0.11-0.15倍。
具体地,脱除Fmoc保护基的后处理过程为:蒸去四氢呋喃,加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc,过滤除去Fmoc,将乙腈与水的混合溶剂蒸干得目标产物,乙腈与水质量比为0.5-2:1,混合溶剂的用量为目标产物重量的4-10倍。
具体地,脱除甲酯保护基的过程为:于水中,将原料与强碱进行脱脂反应,反应完成后加酸(优选为稀盐酸)调节pH至4-7,加萃取剂进行萃取,有机层水洗并蒸干萃取剂得到目标产物。其中,强碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂等,优选为氢氧化钠。萃取剂选自二氯甲烷或乙酸乙酯等,优选为二氯甲烷。
具体地,脱除Boc保护基的过程为:在原料中加入氯化氢的甲醇溶液,室温下反应,反应完成后蒸干氯化氢和甲醇得到目标产物,氯化氢与原料的摩尔比为2-4:1。
具体地,参见图1-11,本发明实施例提供的丰胸肽的液相合成方法,包括以下步骤:
一、Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备
S101:Fmoc-Ser(tBu)-OH采用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,反应完成后,蒸去四氢呋喃,加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc,过滤除去Fmoc,将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Ser(tBu)-OH。
S102:以水为溶剂,在NH2-Ser(tBu)-OH中加氢氧化钠调整pH至9-11,在30℃以下滴加乙酸酐进行乙酰化,乙酸酐加完后,继续反应,反应完成后加浓盐酸调节pH至7-8,冷却、抽滤、洗涤、干燥和重结晶得到Ac-Ser(tBu)-OH。
S103:将缬氨酸甲酯盐酸盐溶于有机溶剂中,加有机碱调pH至7-9,加入Boc-Val-OH、缩合剂和催化剂,室温下进行缩合反应,反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到Boc-Val-Val-OCH3。
S104:在Boc-Val-Val-OCH3中加入氯化氢的甲醇溶液,室温下反应,反应完成后蒸干氯化氢和甲醇得到NH2-Val-Val-OCH3,氯化氢与Boc-Val-Val-OCH3的摩尔比为2-4:1。
S105:将Ac-Ser(tBu)-OH和NH2-Val-Val-OCH3溶于有机溶剂中,加有机碱调pH至7-9,加入缩合剂和催化剂,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
S106:于水中,将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3与强碱进行脱脂反应,反应完成后加稀盐酸调节pH至4-7,加萃取剂进行萃取,有机层水洗并蒸干萃取剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH。
二、NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
S201:将Fmoc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇,室温下滴加氯化亚砜,滴加完成后升温至50-65℃搅拌反应,反应完成后,后蒸去甲醇和剩余的氯化亚砜得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3,Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜的摩尔比为1:1.1-1.3。
S202:将Fmoc-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,反应完成后,蒸去四氢呋喃,加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc,过滤除去Fmoc,将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Thr(tBu)-OCH3。
S203:将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和NH2-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加入缩合剂和催化剂,室温下进行缩合反应,反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S204:将Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,反应完成后,蒸去四氢呋喃,加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc,过滤除去Fmoc,将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S205:将Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加有机碱调pH至7-9,加入缩合剂和催化剂进行缩合反应,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S206:Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,反应完成后,蒸去四氢呋喃,加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc,过滤除去Fmoc,将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
三、丰胸肽的制备
S301:将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加入缩合剂和催化剂进行缩合反应,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S302:于水中,将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3与强碱进行脱脂反应,反应完成后加盐酸调节pH至4-7,加萃取剂进行萃取,有机层水洗并蒸干萃取剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH。
S303:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH和三氟乙酸在室温下反应,反应完成后,加结晶溶剂,固液分离和干燥得到丰胸肽,三氟乙酸的用量是Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH重量的3-5倍,结晶溶剂的用量是三氟乙酸重量的5-10倍,结晶溶剂选自乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚等。
该方法采用全新的液相合成,将六肽链段分解为两个三个片段后再进行对接,各个片段易于纯化,后处理方法简单,方法稳定性好,最终产品不需要制备纯化,一次析出纯度达95%以上,适合大规模生产。对于不同的氨基酸采用相应的基团进行保护,后再采用需要的顺序进行脱除,单步反应的收率与纯度较高,重复性好。
附图说明
图1是步骤S101的反应式;
图2是步骤S102的反应式;
图3是步骤S103和步骤S104的反应式;
图4是步骤S105和步骤S106的反应式;
图5是步骤S201的反应式;
图6是步骤S202的反应式;
图7是步骤S203的反应式;
图8是步骤S204的反应式;
图9是步骤S205的反应式;
图10是步骤S206的反应式;
图11是步骤S301的产物;
图12是步骤S303的产物。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面对本发明实施方式作进一步地详细描述。
本发明实施例提供了一种丰胸肽的液相合成方法,该方法包括以下步骤:
(1)NH2-Ser(tBu)-OH(分子量161)的制备:
三口瓶中,搅拌下依次加入四氢呋喃150克,Fmoc-Ser(tBu)-OH191.5克(分子量383)克,哌啶400克,室温搅拌2小时,蒸去溶剂,残余物中加入1:1乙腈与水的混合溶剂1500克,过滤,弃掉滤渣,滤液旋干得75.5克,收率93.8%。
(2)Ac-Ser(tBu)-OH(分子量203)的制备:
NH2-Ser(tBu)-OH 64.4克悬浮于200克水中,加氢氧化钠调pH至10,同时滴加81.6克的乙酸酐和10mol/L氢氧化钠溶液进行酰化,使混合液保持在9-11之间,控制温度在30℃以下,滴加完毕后继续搅拌半小时,加入盐酸调节pH至7-8,冷冻过夜后抽滤,滤渣分别用200克冷水和200克冷丙酮各洗涤一次,干燥得66.4克粗品,粗品使用350克的甲醇与水的混合溶剂重结晶得到58.5克淡黄色粉末产物,收率72%。
(3)Boc-Val-Val-OCH3(分子量330)的制备:
三口瓶中依次加入50.3克缬氨酸甲酯盐酸盐,65.1克Boc-Val-OH,加入450克二氯甲烷溶解,加三乙胺调节PH至8,另外加入DMAP 4.4克,搅拌下分批加入DCC 74.2克,加完后继续搅拌反应5小时,过滤掉不溶物有,有机层加水150克洗涤两次,旋干溶剂得94克产物,收率95%。
(4)NH2-Val-Val-OCH3盐酸盐(分子量267.5)的制备:
94克Boc-Val-Val-OCH3中加入20%氯化氢的甲醇溶液200克,30℃下搅拌3小时,蒸去甲醇和剩余得氯化氢得淡黄色粉末74.7克,收率98%。
(5)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3(分子量416)的制备:
三口瓶中依次加入40.6克Ac-Ser(tBu)-OH,53.5克NH2-Val-Val-OCH3盐酸盐,加入600克二氯甲烷溶解,加入25克三乙胺调pH至8,另外加入DMAP 3.2克,搅拌下分批加入DCC53.6克,加完后继续搅拌反应6小时,过滤掉不溶物,有机层加水200克洗涤两次,旋干溶剂得74.9克产物,收率90%。
(6)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH(分子量402)的制备:
三口瓶中加入41.6克Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3,加入8克氢氧化钠溶于80克的水,另外加入120克二氯甲烷,室温下搅拌4小时,反应完毕后使用稀盐酸调pH至6-7,有机层水洗两次,蒸去有机溶剂得目标产物35.3克,收率88%。
(7)Fmoc-Thr(tBu)-OCH3(分子量411.5)的制备:
三口瓶中加入Fmoc-Thr(tBu)-OH 39.8克,甲醇150克,室温下滴加氯化亚砜14.3克,滴加完毕后升温至60℃继续反应4小时,蒸去甲醇和剩余氯化亚砜,得产物41.1克,收率100%。
(8)NH2-Thr(tBu)-OCH3(分子量175.5)的制备:
三口瓶中,搅拌下依次加入四氢呋喃320克,Fmoc-Thr(tBu)-OCH3 41.1克,哌啶80克,室温搅拌2小时,蒸去溶剂,残余物中加入1:1乙腈与水的混合溶剂200克,过滤,弃掉滤渣,滤液旋干得19克,收率99.3%。
(9)Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3(分子量806.5)的制备:
三口瓶中依次加入19克NH2-Thr(tBu)-OCH3,64.9克Fmoc-Arg(Pbf)-OH加入400克二氯甲烷溶解,另外加入DMAP 1.46克,搅拌下分批加入DCC24.7克,加完后继续搅拌反应5小时,过滤掉不溶物有,有机层加水150克洗涤两次,旋干溶剂得78.9克产物,收率94%。
(10)NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3(分子量584.5)的制备:
三口瓶中,搅拌下依次加入四氢呋喃320克,Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3 78.9克,哌啶80克,室温搅拌2小时,蒸去溶剂,残余物中加入1:1乙腈与水的混合溶剂400克,过滤,弃掉滤渣,滤液旋干得52.9克,收率91%。
(11)Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3(分子量905.5)的制备:
三口瓶中依次加入52.9克NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3,30.6克Fmoc-Val-OH,加入450克二氯甲烷溶解,另外加入DMAP 1.46克,搅拌下分批加入DCC 24.7克,加完后继续搅拌反应5小时,过滤掉不溶物有,有机层加水150克洗涤两次,旋干溶剂得77克产物,收率94%。
(12)NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3(分子量683.5)的制备:
三口瓶中Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3 77克,加入哌啶的四氢呋喃溶液(20%浓度)100克,室温搅拌2小时,浓缩得到56.9克油状物备用,收率98%。
(13)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3(分子量1067.5)的制备:
在反应瓶中,依次加入Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH 20.1克和NH2-Val- Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3 34.2克,加入250克二氯甲烷溶解,另外加入DMAP 0.91克,搅拌下分批加入DCC 15.5克,加完后继续搅拌反应6小时,过滤掉不溶物有,有机层加水150克洗涤两次,蒸去二氯甲烷得产物45.3克,收率84.9%。
(14)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH(分子量1053.5)的制备:
三口瓶中加入40.2克Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3,加入6克氢氧化钠溶于100克的水,另外加入120克二氯甲烷,室温下搅拌4小时,反应完毕后使用稀盐酸调pH至6-7,有机层水洗两次,蒸去有机溶剂得目标产物35.7克,收率90%。
(15)Ac-Ser-Val-Val-Val-Arg-Thr-OH丰胸肽(分子量814)的制备:
三口瓶中加入Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH 30克,加入三氟乙酸120克,室温搅拌5小时,搅拌下加入冰冻乙醚800克,析出大量白色粉末,过滤,40℃以下烘干得到白色粉末19.7克,收率85%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,所述方法包括:
S301:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
S302:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH;
S303:丰胸肽的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH通过三氟乙酸一次性脱除Pbf保护基和tBu保护基得到丰胸肽。
2.根据权利要求1所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,所述Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备过程包括以下步骤:
S101:NH2-Ser(tBu)-OH的制备
Fmoc-Ser(tBu)-OH脱除Fmoc保护基得到NH2-Ser(tBu)-OH;
S102:Ac-Ser(tBu)-OH的制备
NH2-Ser(tBu)-OH与乙酸酐反应得到Ac-Ser(tBu)-OH;
S103:Boc-Val-Val-OCH3的制备
缬氨酸甲酯盐酸盐与Boc-Val-OH缩合得到Boc-Val-Val-OCH3;
S104:NH2-Val-Val-OCH3的制备
Boc-Val-Val-OCH3脱除Boc保护基得到NH2-Val-Val-OCH3;
S105 Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-OH与NH2-Val-Val-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3;
S106:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH。
3.根据权利要求2所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,
步骤S101具体包括:Fmoc-Ser(tBu)-OH采用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Ser(tBu)-OH;
步骤S102具体包括:以水为溶剂,加碱调整pH至9-11,在30℃以下滴加乙酸酐进行乙酰化,乙酸酐加完后,继续反应,反应完成后加酸调节pH至7-8,冷却、抽滤、洗涤、干燥和重结晶得到产品;
步骤S103具体包括:将缬氨酸甲酯盐酸盐溶于有机溶剂中,加有机碱调pH至7-9,加入Boc-Val-OH、缩合剂和催化剂,室温下进行缩合反应,反应完成后后处理得到Boc-Val-Val-OCH3;
步骤S105具体包括:将Ac-Ser(tBu)-OH和NH2-Val-Val-OCH3溶于有机溶剂中,加有机碱调pH至7-9,加入缩合剂和催化剂,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
4.根据权利要求1所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,所述NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备包括以下步骤:
S201:Fmoc-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜反应得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3;
S202:NH2-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Thr(tBu)-OCH3;
S203:Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
S204:NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
S205:Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
S206:NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
5.根据权利要求4所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,
步骤S201具体包括:将Fmoc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇,室温下滴加氯化亚砜,滴加完成后升温至50-65℃搅拌反应,反应完成后,后蒸去甲醇和剩余的氯化亚砜得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3,所述Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜的摩尔比为1:1.1-1.3;
步骤S202具体包括:将Fmoc-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Thr(tBu)-OCH3;
步骤S203具体包括:将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和NH2-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加入缩合剂和催化剂,室温下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
步骤S204具体包括:将Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
步骤S205具体包括:将Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加有机碱调pH至7-9,加入缩合剂和催化剂进行缩合反应,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
步骤S206具体包括:Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3,用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基,经后处理得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
6.根据权利要求1所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,
步骤S301具体包括:将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂,加入缩合剂和催化剂进行缩合反应,于15-30℃下进行缩合反应,反应完成后,后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3;
步骤S303具体包括:Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH和三氟乙酸在室温下反应,反应完成后,加结晶溶剂,固液分离和干燥得到丰胸肽,所述三氟乙酸的用量是Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH重量的3-5倍,所述结晶溶剂的用量是三氟乙酸重量的5-10倍,所述结晶溶剂选自乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚。
7.根据权利要求3、5或6所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,所述溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲苯,所述有机碱选自三甲胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或吡啶,所述缩合剂选自DCC、DIC和EDCI中的一种或几种,所述催化剂二甲氨基吡啶和1-羟基苯并三唑中的一种或几种;所述缩合反应的后处理过程为:反应完成后,过滤除掉不溶物,有机层加水洗涤多次直至中性,蒸去溶剂得到目标产物。
8.根据权利要求5或6所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,脱除Fmoc保护基的后处理过程为:蒸去四氢呋喃,加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc,过滤除去Fmoc,将乙腈与水的混合溶剂蒸干得目标产物,乙腈与水质量比为0.5-2:1,混合溶剂的用量为目标产物重量的4-10倍。
9.根据权利要求1或2所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,脱除甲酯保护基的过程为:于水中,将原料与强碱进行脱脂反应,反应完成后加酸调节pH至4-7,加萃取剂进行萃取,有机层水洗并蒸干萃取剂得到目标产物,所述强碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂,所述萃取剂选自二氯甲烷或乙酸乙酯。
10.根据权利要求2所述的丰胸肽的液相合成方法,其特征在于,脱除Boc保护基的过程为:在原料中加入氯化氢的甲醇溶液,室温下反应,反应完成后蒸干氯化氢和甲醇得到目标产物,所述氯化氢与原料的摩尔比为2-4:1。
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