CN110776558B - 一种固相合成醋酸艾替班特的方法 - Google Patents

一种固相合成醋酸艾替班特的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种固相合成醋酸艾替班特的方法。本发明提供一种纯度高、杂质含量低、合成效率高且收率高的醋酸艾替班特的制备方法，所得产品质量稳定。本发明的方法反应条件温和，对设备损害低，工艺简单，绿色环保且成本低，能够确保连续生产出高质量的产品，具有较高的应用价值，适合产业化生产。

Description

一种固相合成醋酸艾替班特的方法
技术领域
本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种固相合成醋酸艾替班特的制备方法。
背景技术
醋酸艾替班特(Firazyr)是缓激肽B2受体拮抗剂，具有如下所示的结构式:
醋酸艾替班特最初是由Sanofi开发，2001年11月Jerini公司获得醋酸艾替班特的开发权。2008年9月首次在德国和英国上市，2009年3月在欧盟上市，2011年10月在美国上市。FDA批准用于18岁及以上成年人的遗传性血管水肿(hereditary angioedema，HAE)急性发作治疗，遗传性血管水肿是由于一种称为C1抑制剂的蛋白水平低或功能障碍引起的，不可预知的手、脚、脸、喉头和腹部的发作性水肿和肿胀，导致毁容、失能或死亡。艾替班特通过抑制与HAE的栓塞局部肿胀、炎症、疼痛症状有关的缓激肽的影响而治疗急性HAE的栓塞局部肿胀。
然而，现有醋酸艾替班特的制备方法产品纯度低、杂质含量高、合成效率低、收率低，无法确保连续生产出质量稳定的产品，不适合产业化生产，应用价值低。
专利CN102532267A报道了直接固相合成艾替班特的方法，采用2-氯三苯基氯树脂为起始载体，由于此类树脂对碱很敏感，在合成过程中会有部分肽链从树枝上脱落，导致最终收率较低。此外，该路线氨基酸衍生物偶联反应需在冰浴下进行，反应条件要求较高、操作复杂，不适合产业化生产，应用价值低；同时该路线需使用HOAt(N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑)、HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯)等价格昂贵的偶联剂，使得生产成本较高。
文献J.Pept.Res.2002,59(4):139-152利用Wang(王)树脂为固相载体，Fmoc-AA-OH为起始氨基酸原料、DCC(N,N-二环己基碳二亚胺)/HOBt(1-羟基苯并三氮唑)为偶联剂合成醋酸艾替班。由于DCC在反应过程中产生的副产物DCU(1,3-二环己基脲)较难溶于有机溶剂，不易除去，给放大生产带来不便。
另外，现有技术中还存在以Boc-Arg(Tos)-Merrifield-Resin为固相载体合成醋酸艾替班特的方法，该方法合成过程中需大量使用无水氟化氢等强腐蚀性溶剂，对设备要求和损害高，同时不利于环境保护和劳动保护。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种固相合成纯度高、杂质含量低、合成效率高、反应条件温和、工艺简单、环境友好、成本低且收率高的醋酸艾替班特的制备方法。
本发明上述目的是通过如下技术方案来实现的：
Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH进行偶联反应，然后裂解得到裂解产物，裂解产物经过纯化、转盐、冻干得到醋酸艾替班特。
优选的，制备过程中使用偶联溶剂，所述偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺。
优选的，制备过程中使用脱保护溶剂为20％的哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液(V/V)。
优选的，偶联温度为27-33℃。
优选的，偶联时间为3-5小时。
优选的，裂解反应使用的裂解液三氟乙酸：三异丙基硅烷：二硫苏糖醇：茴香硫醚：水＝30～40:1:1:1:1，更优选36:1:1:1:1。
优选的，偶联试剂选自DCC/HOBt、DIC/HOBt、DIC/HOAt、HBTU/DIEA，TBTU/DIEA、DEPBT/DIEA中的组合时，尤其是包含上述组合中两种以上的组成时，产品的纯度和收率均能得到有效提升。
固相多肽合成基本过程是将目标肽C-端氨基酸的羧基以共价键的形式与固相载体(树脂)相连，再以这一氨基酸的氨基为合成起点，使其与相邻氨基酸(氨基保护)的羧基发生酰化反应，形成肽键。将含有上述两个氨基酸的树脂肽的氨基脱保护后与下一个氨基酸的羧基反应，不断重复这一过程，直至目标肽形成为止。多肽合成过程中，氨基酸的消旋是最常见的问题之一；艾替班特氨基酸序列中第6位L-Thi侧链为噻吩环具有芳香性，有可能在合成过程中发生消旋变为D-Thi，从而形成D-Thi6-艾替班特；此外，Ser在固相肽合成过程中容易发生消旋，导致D-Ser7-艾替班特产生；为减小粗品中的消旋杂质(D-Thi6-Icatibant和D-Ser7-Icatibant)，对这两位氨基酸(第6和第7位)的偶联采用DEPBT/DIEA策略。
为减小粗品中缺失杂质(Des-Gly5-Icatibant)，对该位氨基酸的偶联采用强效缩合剂HBTU/DIEA策略，同时对比不同偶联策略的偶联反应时间可知，采用HBTU/DIEA策略可以减少第1、2和3位氨基酸(D-Arg、Arg和Pro)反应时间，缩短偶联周期，这三位氨基酸的偶联策略也采用HBTU/DIEA策略。
其余位次氨基酸(Hyp、D-Tic和Oic等)由于为二级胺，在缩合过程中不容易消旋而很难产生消旋杂质，且不同偶联策略时偶联反应时间等基本一致，采用DIC/HOBt可以满足其偶联要求，故仍采用DIC/HOBt偶联策略。
优选的，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂；与Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂。
优选的，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂。
优选的，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂。
优选的，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH、、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂。
优选的，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂。
优选的，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂。
优选地，各氨基酸与偶联剂组合的摩尔比为1:2～10:2～10，优选1:2～5:2～5。
优选的，纯化工序为采用磷酸盐体系进行一次纯化。优选地，采用磷酸盐体系(流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈0.1-0.25％梯度斜率)进行纯化。转盐工艺参考专利CN107417770A。
本发明通过上述技术方案，实现了固相合成纯度高、杂质含量低、合成效率高且收率高的醋酸艾替班特的制备，所得产品质量稳定，反应条件温和，对设备损害低，工艺简单，绿色环保、环境友好且成本低，能够确保连续生产出高质量的产品，具有较高的应用价值，适合产业化生产。
具体实施方式
本发明的如下具体实施方式仅为进一步解释或说明本发明，不应被解释为对本发明的任何限制。
实施例1
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到多肽合成仪中，依次与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)、Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)进行偶联反应，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联试剂为DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间4小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度59.45％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物通过乙酸铵体系做二次纯化，乙酸体系中，流动相A：0.1M乙酸铵水溶液，流动相B：乙腈溶液，梯度斜率为0.25％，然后进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为60.25％，纯度为99.63％。
实施例2
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到多肽合成仪中，依次与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)、Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)进行偶联反应，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联试剂为HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间5小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度60.51％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物通过乙酸铵体系做二次纯化，乙酸体系中，流动相A：0.1M乙酸铵水溶液，流动相B：乙腈溶液，梯度斜率为0.25％，然后进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为64.34％，纯度为99.70％。
实施例3
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到多肽合成仪中，依次与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)、Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)进行偶联反应，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联试剂为DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间4小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度61.42％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物通过乙酸铵体系做二次纯化，乙酸体系中，流动相A：0.1M乙酸铵水溶液，流动相B：乙腈溶液，梯度斜率为0.25％，然后进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为69.01％，纯度为99.61％。
实施例4
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到多肽合成仪中，与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)偶联时选择DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)偶联时选择DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)偶联时选择HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间2小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度85.47％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为85.84％，纯度为99.95％。
实施例5
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到合成容器中，与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)偶联时选择HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)偶联时选择DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)偶联时选择DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)作为偶联试剂，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间3小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度81.74％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为80.26％，纯度为99.82％。
实施例6
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到合成容器中，与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)偶联时选择DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)偶联时选择HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)偶联时选择DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)作为偶联试剂，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间3小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度77.61％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为78.14％，纯度为99.80％。
实施例7
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到合成容器中，与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)偶联时选择DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)偶联时选择HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)偶联时选择DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间3小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度76.15％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为77.69％，纯度为99.81％。
实施例8
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到合成容器中，与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)偶联时选择DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)偶联时选择DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)偶联时选择HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间3小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度78.61％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为79.24％，纯度为99.79％。
实施例9
将Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin(19.5g)加入到合成容器中，与Fmoc-Oic-OH(6.87g)、Fmoc-D-Tic-OH(7.01g)、Fmoc-Hyp(tBu)-OH(7.19g)偶联时选择HBTU(6.66g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH(6.73g)、Fmoc-Thi-OH(6.91g)偶联时选择DIC(2.22g)/HOBt(2.38g)作为偶联试剂、与Fmoc-Gly-OH(5.22g)、Fmoc-Pro-OH(5.93g)、Fmoc-Arg(Pbf)-OH(11.39g)、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH(11.39g)偶联时选择DEPBT(5.26g)/DIEA(2.27g)作为偶联试剂，所得产物进行裂解得到裂解产物，偶联溶剂为N,N-二甲基甲酰胺，脱保护溶剂为20％哌啶N,N-二甲基甲酰胺溶液，偶联温度30℃，反应时间2.5小时，裂解配方三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚中搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，粗品纯度81.69％，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为81.57％，纯度为99.88％。
以上试验结果表明，采用本发明的合成方法所获得的醋酸艾替班特产品的纯度和收率优势明显；本发明提供的方法合成效率高，操作简单，对环境危害小。

Claims (1)

1.一种固相合成醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Hyp(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联反应，裂解，裂解产物经过纯化、转盐、冻干得到醋酸艾替班特；
其中，Fmoc-Arg(Pbf)-Wang Resin与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH和Fmoc-Hyp(tBu)-OH偶联时选择DIC/HOBt作为偶联试剂；与Fmoc-Ser(tBu)-OH和Fmoc-Thi-OH偶联时选择DEPBT/DIEA作为偶联试剂；与Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH偶联时选择HBTU/DIEA作为偶联试剂；
所述偶联反应使用的溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺，脱保护试剂选自20％哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液，所述裂解反应使用沉降溶剂，沉降溶剂选自异丙醚，所述裂解反应的裂解液为三氟乙酸、二硫苏糖醇、三异丙基硅烷、茴香硫醚和水，比例为36:1:1:1:1；
所述偶联反应的温度为30℃，所述偶联反应的时间为2小时；纯化采用磷酸盐体系进行纯化,所述磷酸盐体系包含流动相A：0.02M磷酸二氢钠缓冲液；流动相B：乙腈。
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