CN113549130B - 一种丰胸肽的液相合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种丰胸肽的液相合成方法，属于有机合成技术领域。该方法包括：Ac‑Ser(tBu)‑Val‑Val‑OH和NH2‑Val‑Arg(Pbf)‑Thr(tBu)‑OCH3缩合得到Ac‑Ser(tBu)‑Val‑Val‑Val‑Arg(Pbf)‑Thr(tBu)‑OCH3，再脱除甲酯保护基，最后通过三氟乙酸一次性脱除Pbf保护基和tBu保护基得到丰胸肽。该刚发采用全新的液相合成，将六肽链段分解为两个三个片段后再进行对接，各个片段易于纯化，后处理方法简单，方法稳定性好，最终产品不需要制备纯化，一次析出纯度达95%以上，适合大规模生产。

Description

一种丰胸肽的液相合成方法
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域，具体涉及一种丰胸肽的液相合成方法。
背景技术
乙酰六肽-38（丰胸肽）为一种乙酰化的六肽，其肽序列片段为Ac-Ser-Val-Val-Val- Arg-Thr-OH，可显著刺激使用部位脂肪合成，增大胸部或脸颊的体积，塑造完美身材。研究表明过氧化物增殖物活化受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptorγ）对于前体脂肪细胞转化为脂肪细胞有决定性作用。乙酰六肽-38（丰胸肽）刺激过氧化物增殖物活化受体γ辅激活因子-1α（（Peroxisome proliferator-activated receptor γcoactivator 1 α,PGC-1α）的表达，提高脂肪的生成速率，增加特定部位（如胸部、臀部或脸颊）脂肪组织体积，塑造完美身体曲线。
现有技术CN105250178A提供了一种用于增大乳房体积的复合物及其制备方法，其有效成分为乙酰基六肽-38占0.045%-0.055%，制得得复合物可以制备成丰胸膏，丰胸精华液等美容品，具有促进乳房的体积变大的功效，令胸部更丰满。CN106798655A提供一种具有丰胸作用的多肽组合物，包括促进脂肪组织生长的多肽（主要为乙酰基六肽-38）和具有修复功能的多肽（主要为棕榈酰三肽-1，棕榈酰五肽-3等），该组合物既可以加固乳房表面皮肤的结缔组织作用，又可以促进乳房内的脂肪组织生长，增大乳房体积。
种种情况表明，丰胸肽可以显著刺激使用部位脂肪合成，增大胸部或脸颊的体积，塑造身体曲线，但目前为止，都是直接使用市售产品制成丰胸膏或精华液，而未提供其本身的制备方法，现有技术中多肽的合成通常采用固相法。
发明内容
本发明提供了一种丰胸肽的液相合成方法，该方法包括以下步骤：
S301：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S302：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH。
S303：丰胸肽的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH通过三氟乙酸一次性脱除Pbf保护基和tBu保护基得到丰胸肽。
其中，Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备过程包括以下步骤：
S101：NH2-Ser(tBu)-OH的制备
Fmoc-Ser(tBu)-OH脱除Fmoc保护基得到NH2-Ser(tBu)-OH。
S102：Ac-Ser(tBu)-OH的制备
NH2-Ser(tBu)-OH与乙酸酐反应得到Ac-Ser(tBu)-OH。
S103：Boc-Val-Val-OCH3的制备
缬氨酸甲酯盐酸盐与Boc-Val-OH缩合得到Boc-Val-Val-OCH3。
S104：NH2-Val-Val-OCH3的制备
Boc-Val-Val-OCH3脱除Boc保护基得到NH2-Val-Val-OCH3。
S105 Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-OH与NH2-Val-Val-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
S106：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH。
具体地，步骤S101具体包括：Fmoc-Ser(tBu)-OH采用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Ser(tBu)-OH。
步骤S102具体包括：以水为溶剂，加碱（具体可以为氢氧化钠）调整pH至9-11，在30℃以下滴加乙酸酐进行乙酰化，乙酸酐加完后，继续反应，反应完成后加酸（具体可以为浓盐酸）调节pH至7-8，冷却、抽滤、洗涤、干燥和重结晶得到产品。
步骤S103具体包括：将缬氨酸甲酯盐酸盐溶于有机溶剂中，加有机碱调pH至7-9，加入Boc-Val-OH、缩合剂和催化剂，室温下进行缩合反应，反应完成后后处理得到Boc-Val-Val-OCH3。
步骤S105具体包括：将Ac-Ser(tBu)-OH和NH2-Val-Val-OCH3溶于有机溶剂中，加有机碱调pH至7-9，加入缩合剂和催化剂，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
其中，NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备包括以下步骤：
S201：Fmoc-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜反应得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3。
S202：NH2-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Thr(tBu)-OCH3。
S203：Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S204：NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S205：Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S206：NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
具体地，步骤S201具体包括：将Fmoc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇，室温下滴加氯化亚砜，滴加完成后升温至50-65℃搅拌反应，反应完成后，后蒸去甲醇和剩余的氯化亚砜得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3，Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜的摩尔比为1：1.1-1.3。
步骤S202具体包括：将Fmoc-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S203具体包括：将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和NH2-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加入缩合剂和催化剂，室温下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
步骤S204具体包括：将Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S205具体包括：将Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加有机碱调pH至7-9，加入缩合剂和催化剂进行缩合反应，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S206具体包括：Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3，用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
具体地，步骤S301具体包括：将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加入缩合剂和催化剂进行缩合反应，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
步骤S303具体包括：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH和三氟乙酸在室温下反应，反应完成后，加结晶溶剂，固液分离和干燥得到丰胸肽。其中，三氟乙酸的用量是Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH重量的3-5倍，结晶溶剂的用量是三氟乙酸重量的5-10倍；结晶溶剂选自乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚等，优选为乙醚。
其中，溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲苯等，优选为二氯甲烷。有机碱选自三甲胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或吡啶等，优选为三乙胺。缩合剂选自DCC、DIC和EDCI等中的一种或几种，优选为DCC。催化剂二甲氨基吡啶（DMAP）和1-羟基苯并三唑等中的一种或几种，优选为DMAP。缩合反应的后处理过程为：反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到目标产物。缩合反应中，另一种原料的用量为主原料摩尔量的1.00-1.05倍，缩合剂的用量为主原料摩尔量的1.1-1.5倍，催化剂的用量为主原料摩尔量的0.11-0.15倍。
具体地，脱除Fmoc保护基的后处理过程为：蒸去四氢呋喃，加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc，过滤除去Fmoc，将乙腈与水的混合溶剂蒸干得目标产物，乙腈与水质量比为0.5-2：1，混合溶剂的用量为目标产物重量的4-10倍。
具体地，脱除甲酯保护基的过程为：于水中，将原料与强碱进行脱脂反应，反应完成后加酸（优选为稀盐酸）调节pH至4-7，加萃取剂进行萃取，有机层水洗并蒸干萃取剂得到目标产物。其中，强碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂等，优选为氢氧化钠。萃取剂选自二氯甲烷或乙酸乙酯等，优选为二氯甲烷。
具体地，脱除Boc保护基的过程为：在原料中加入氯化氢的甲醇溶液，室温下反应，反应完成后蒸干氯化氢和甲醇得到目标产物，氯化氢与原料的摩尔比为2-4:1。
具体地，参见图1-11，本发明实施例提供的丰胸肽的液相合成方法，包括以下步骤：
一、Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备
S101：Fmoc-Ser(tBu)-OH采用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，反应完成后，蒸去四氢呋喃，加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc，过滤除去Fmoc，将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Ser(tBu)-OH。
S102：以水为溶剂，在NH2-Ser(tBu)-OH中加氢氧化钠调整pH至9-11，在30℃以下滴加乙酸酐进行乙酰化，乙酸酐加完后，继续反应，反应完成后加浓盐酸调节pH至7-8，冷却、抽滤、洗涤、干燥和重结晶得到Ac-Ser(tBu)-OH。
S103：将缬氨酸甲酯盐酸盐溶于有机溶剂中，加有机碱调pH至7-9，加入Boc-Val-OH、缩合剂和催化剂，室温下进行缩合反应，反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到Boc-Val-Val-OCH3。
S104：在Boc-Val-Val-OCH3中加入氯化氢的甲醇溶液，室温下反应，反应完成后蒸干氯化氢和甲醇得到NH2-Val-Val-OCH3，氯化氢与Boc-Val-Val-OCH3的摩尔比为2-4:1。
S105：将Ac-Ser(tBu)-OH和NH2-Val-Val-OCH3溶于有机溶剂中，加有机碱调pH至7-9，加入缩合剂和催化剂，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
S106：于水中，将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3与强碱进行脱脂反应，反应完成后加稀盐酸调节pH至4-7，加萃取剂进行萃取，有机层水洗并蒸干萃取剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH。
二、NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
S201：将Fmoc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇，室温下滴加氯化亚砜，滴加完成后升温至50-65℃搅拌反应，反应完成后，后蒸去甲醇和剩余的氯化亚砜得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3，Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜的摩尔比为1：1.1-1.3。
S202：将Fmoc-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，反应完成后，蒸去四氢呋喃，加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc，过滤除去Fmoc，将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Thr(tBu)-OCH3。
S203：将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和NH2-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加入缩合剂和催化剂，室温下进行缩合反应，反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S204：将Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，反应完成后，蒸去四氢呋喃，加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc，过滤除去Fmoc，将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S205：将Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加有机碱调pH至7-9，加入缩合剂和催化剂进行缩合反应，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S206：Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，反应完成后，蒸去四氢呋喃，加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc，过滤除去Fmoc，将乙腈与水的混合溶剂蒸干得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
三、丰胸肽的制备
S301：将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加入缩合剂和催化剂进行缩合反应，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
S302：于水中，将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3与强碱进行脱脂反应，反应完成后加盐酸调节pH至4-7，加萃取剂进行萃取，有机层水洗并蒸干萃取剂得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH。
S303：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH和三氟乙酸在室温下反应，反应完成后，加结晶溶剂，固液分离和干燥得到丰胸肽，三氟乙酸的用量是Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH重量的3-5倍，结晶溶剂的用量是三氟乙酸重量的5-10倍，结晶溶剂选自乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚等。
该方法采用全新的液相合成，将六肽链段分解为两个三个片段后再进行对接，各个片段易于纯化，后处理方法简单，方法稳定性好，最终产品不需要制备纯化，一次析出纯度达95%以上，适合大规模生产。对于不同的氨基酸采用相应的基团进行保护，后再采用需要的顺序进行脱除，单步反应的收率与纯度较高，重复性好。
附图说明
图1是步骤S101的反应式；
图2是步骤S102的反应式；
图3是步骤S103和步骤S104的反应式；
图4是步骤S105和步骤S106的反应式；
图5是步骤S201的反应式；
图6是步骤S202的反应式；
图7是步骤S203的反应式；
图8是步骤S204的反应式；
图9是步骤S205的反应式；
图10是步骤S206的反应式；
图11是步骤S301的产物；
图12是步骤S303的产物。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明实施方式作进一步地详细描述。
本发明实施例提供了一种丰胸肽的液相合成方法，该方法包括以下步骤：
(1)NH2-Ser(tBu)-OH（分子量161）的制备：
三口瓶中，搅拌下依次加入四氢呋喃150克，Fmoc-Ser(tBu)-OH191.5克（分子量383)克，哌啶400克，室温搅拌2小时，蒸去溶剂，残余物中加入1：1乙腈与水的混合溶剂1500克，过滤，弃掉滤渣，滤液旋干得75.5克，收率93.8%。
(2)Ac-Ser(tBu)-OH（分子量203）的制备：
NH2-Ser(tBu)-OH 64.4克悬浮于200克水中，加氢氧化钠调pH至10，同时滴加81.6克的乙酸酐和10mol/L氢氧化钠溶液进行酰化，使混合液保持在9-11之间，控制温度在30℃以下，滴加完毕后继续搅拌半小时，加入盐酸调节pH至7-8，冷冻过夜后抽滤，滤渣分别用200克冷水和200克冷丙酮各洗涤一次，干燥得66.4克粗品，粗品使用350克的甲醇与水的混合溶剂重结晶得到58.5克淡黄色粉末产物，收率72%。
(3)Boc-Val-Val-OCH3（分子量330）的制备：
三口瓶中依次加入50.3克缬氨酸甲酯盐酸盐，65.1克Boc-Val-OH，加入450克二氯甲烷溶解，加三乙胺调节PH至8，另外加入DMAP 4.4克，搅拌下分批加入DCC 74.2克，加完后继续搅拌反应5小时，过滤掉不溶物有，有机层加水150克洗涤两次，旋干溶剂得94克产物，收率95%。
(4)NH2-Val-Val-OCH3盐酸盐（分子量267.5）的制备：
94克Boc-Val-Val-OCH3中加入20%氯化氢的甲醇溶液200克，30℃下搅拌3小时，蒸去甲醇和剩余得氯化氢得淡黄色粉末74.7克，收率98%。
(5)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3(分子量416)的制备：
三口瓶中依次加入40.6克Ac-Ser(tBu)-OH，53.5克NH2-Val-Val-OCH3盐酸盐，加入600克二氯甲烷溶解，加入25克三乙胺调pH至8，另外加入DMAP 3.2克，搅拌下分批加入DCC53.6克，加完后继续搅拌反应6小时，过滤掉不溶物，有机层加水200克洗涤两次，旋干溶剂得74.9克产物，收率90%。
(6)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH（分子量402）的制备：
三口瓶中加入41.6克Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3，加入8克氢氧化钠溶于80克的水，另外加入120克二氯甲烷，室温下搅拌4小时，反应完毕后使用稀盐酸调pH至6-7，有机层水洗两次，蒸去有机溶剂得目标产物35.3克，收率88%。
(7)Fmoc-Thr(tBu)-OCH3（分子量411.5）的制备：
三口瓶中加入Fmoc-Thr(tBu)-OH 39.8克，甲醇150克，室温下滴加氯化亚砜14.3克，滴加完毕后升温至60℃继续反应4小时，蒸去甲醇和剩余氯化亚砜，得产物41.1克，收率100%。
(8)NH2-Thr(tBu)-OCH3（分子量175.5）的制备：
三口瓶中，搅拌下依次加入四氢呋喃320克，Fmoc-Thr(tBu)-OCH3 41.1克，哌啶80克，室温搅拌2小时，蒸去溶剂，残余物中加入1：1乙腈与水的混合溶剂200克，过滤，弃掉滤渣，滤液旋干得19克，收率99.3%。
(9)Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3（分子量806.5）的制备：
三口瓶中依次加入19克NH2-Thr(tBu)-OCH3，64.9克Fmoc-Arg(Pbf)-OH加入400克二氯甲烷溶解，另外加入DMAP 1.46克，搅拌下分批加入DCC24.7克，加完后继续搅拌反应5小时，过滤掉不溶物有，有机层加水150克洗涤两次，旋干溶剂得78.9克产物，收率94%。
(10)NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3（分子量584.5）的制备：
三口瓶中，搅拌下依次加入四氢呋喃320克，Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3 78.9克，哌啶80克，室温搅拌2小时，蒸去溶剂，残余物中加入1：1乙腈与水的混合溶剂400克，过滤，弃掉滤渣，滤液旋干得52.9克，收率91%。
(11)Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3（分子量905.5）的制备：
三口瓶中依次加入52.9克NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3，30.6克Fmoc-Val-OH,加入450克二氯甲烷溶解，另外加入DMAP 1.46克，搅拌下分批加入DCC 24.7克，加完后继续搅拌反应5小时，过滤掉不溶物有，有机层加水150克洗涤两次，旋干溶剂得77克产物，收率94%。
(12)NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3（分子量683.5）的制备：
三口瓶中Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3 77克，加入哌啶的四氢呋喃溶液（20%浓度）100克，室温搅拌2小时，浓缩得到56.9克油状物备用，收率98%。
(13)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3（分子量1067.5）的制备：
在反应瓶中，依次加入Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH 20.1克和NH2-Val- Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3 34.2克，加入250克二氯甲烷溶解，另外加入DMAP 0.91克，搅拌下分批加入DCC 15.5克，加完后继续搅拌反应6小时，过滤掉不溶物有，有机层加水150克洗涤两次，蒸去二氯甲烷得产物45.3克，收率84.9%。
(14)Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH（分子量1053.5）的制备：
三口瓶中加入40.2克Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3，加入6克氢氧化钠溶于100克的水，另外加入120克二氯甲烷，室温下搅拌4小时，反应完毕后使用稀盐酸调pH至6-7，有机层水洗两次，蒸去有机溶剂得目标产物35.7克，收率90%。
(15)Ac-Ser-Val-Val-Val-Arg-Thr-OH丰胸肽（分子量814）的制备：
三口瓶中加入Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH 30克，加入三氟乙酸120克，室温搅拌5小时，搅拌下加入冰冻乙醚800克，析出大量白色粉末，过滤，40℃以下烘干得到白色粉末19.7克，收率85%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，所述方法包括：
S301：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
将Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH和NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加入缩合剂和催化剂进行缩合反应，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
S302：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH；
S303：丰胸肽的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH和三氟乙酸在室温下反应，反应完成后，加结晶溶剂，固液分离和干燥得到丰胸肽，所述三氟乙酸的用量是Ac-Ser(tBu)-Val-Val-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OH重量的3-5倍，所述结晶溶剂的用量是三氟乙酸重量的5-10倍，所述结晶溶剂选自乙醚、异丙醚或甲基叔丁基醚。
2.根据权利要求1所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，所述Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备过程包括以下步骤：
S101：NH2-Ser(tBu)-OH的制备
Fmoc-Ser(tBu)-OH脱除Fmoc保护基得到NH2-Ser(tBu)-OH；
S102：Ac-Ser(tBu)-OH的制备
NH2-Ser(tBu)-OH与乙酸酐反应得到Ac-Ser(tBu)-OH；
S103：Boc-Val-Val-OCH3的制备
缬氨酸甲酯盐酸盐与Boc-Val-OH缩合得到Boc-Val-Val-OCH3；
S104：NH2-Val-Val-OCH3的制备
Boc-Val-Val-OCH3脱除Boc保护基得到NH2-Val-Val-OCH3；
S105 Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3的制备
Ac-Ser(tBu)-OH与NH2-Val-Val-OCH3缩合得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3；
S106：Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH的制备
Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3脱除甲酯保护基得到Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OH。
3.根据权利要求2所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，
步骤S101具体包括：Fmoc-Ser(tBu)-OH采用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Ser(tBu)-OH；
步骤S102具体包括：以水为溶剂，加碱调整pH至9-11，在30℃以下滴加乙酸酐进行乙酰化，乙酸酐加完后，继续反应，反应完成后加酸调节pH至7-8，冷却、抽滤、洗涤、干燥和重结晶得到产品；
步骤S103具体包括：将缬氨酸甲酯盐酸盐溶于有机溶剂中，加有机碱调pH至7-9，加入Boc-Val-OH、缩合剂和催化剂，室温下进行缩合反应，反应完成后后处理得到Boc-Val-Val-OCH3；
步骤S105具体包括：将Ac-Ser(tBu)-OH和NH2-Val-Val-OCH3溶于有机溶剂中，加有机碱调pH至7-9，加入缩合剂和催化剂，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Ac-Ser(tBu)-Val-Val-OCH3。
4.根据权利要求1所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，所述NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备包括以下步骤：
S201：Fmoc-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜反应得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3；
S202：NH2-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Thr(tBu)-OCH3；
S203：Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-OH和Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
S204：NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
S205：Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3缩合得到Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
S206：NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3的制备
Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3脱除Fmoc保护基得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
5.根据权利要求4所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，
步骤S201具体包括：将Fmoc-Thr(tBu)-OH溶于甲醇，室温下滴加氯化亚砜，滴加完成后升温至50-65℃搅拌反应，反应完成后，后蒸去甲醇和剩余的氯化亚砜得到Fmoc-Thr(tBu)-OCH3，所述Fmoc-Thr(tBu)-OH与氯化亚砜的摩尔比为1：1.1-1.3；
步骤S202具体包括：将Fmoc-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Thr(tBu)-OCH3；
步骤S203具体包括：将Fmoc-Arg(Pbf)-OH和NH2-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加入缩合剂和催化剂，室温下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
步骤S204具体包括：将Fmoc-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
步骤S205具体包括：将Fmoc-Val-OH和NH2-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3溶于有机溶剂，加有机碱调pH至7-9，加入缩合剂和催化剂进行缩合反应，于15-30℃下进行缩合反应，反应完成后，后处理得Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3；
步骤S206具体包括：Fmoc-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3，用体积分数为15%-20%的哌啶的四氢呋喃溶液脱除Fmoc保护基，经后处理得到NH2-Val-Arg(Pbf)-Thr(tBu)-OCH3。
6.根据权利要求3或5所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，所述溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯或甲苯，所述有机碱选自三甲胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或吡啶，所述缩合剂选自DCC、DIC和EDCI中的一种或几种，所述催化剂二甲氨基吡啶和1-羟基苯并三唑中的一种或几种；所述缩合反应的后处理过程为：反应完成后，过滤除掉不溶物，有机层加水洗涤多次直至中性，蒸去溶剂得到目标产物。
7.根据权利要求5所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，脱除Fmoc保护基的后处理过程为：蒸去四氢呋喃，加入乙腈与水的混合溶剂析出副产物Fmoc，过滤除去Fmoc，将乙腈与水的混合溶剂蒸干得目标产物，乙腈与水质量比为0.5-2：1，混合溶剂的用量为目标产物重量的4-10倍。
8.根据权利要求1或2所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，脱除甲酯保护基的过程为：于水中，将原料与强碱进行脱脂反应，反应完成后加酸调节pH至4-7，加萃取剂进行萃取，有机层水洗并蒸干萃取剂得到目标产物，所述强碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂，所述萃取剂选自二氯甲烷或乙酸乙酯。
9.根据权利要求2所述的丰胸肽的液相合成方法，其特征在于，脱除Boc保护基的过程为：在原料中加入氯化氢的甲醇溶液，室温下反应，反应完成后蒸干氯化氢和甲醇得到目标产物，所述氯化氢与原料的摩尔比为2-4:1。
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