CN113135987B - 一类来源于Caprin1的活性肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明设计了一类来源于Caprin1的活性肽，能够竞争性与G3BP1蛋白结合，特异性地阻断Caprin1与G3BP1蛋白相互作用，抑制应激颗粒的生成，进而治疗与SGs生成有关的疾病，例如肿瘤或神经退行性疾病。

Description

一类来源于Caprin1的活性肽及其应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一类来源于Caprin1的活性肽，可以与Caprin1竞争性结合G3BP1/2，抑制应激颗粒的组装，产生相应的生物效应。

背景技术

细胞内有很多富含RNA与蛋白质的无膜结构，被称为核糖核蛋白体(ribonucleoprotein，RNP)。这些RNP颗粒是由数千个分子组成的独立的细胞器，在细胞中普遍存在。真核细胞在应对如内质网应激、热休克、缺氧以及砷酸盐等胁迫刺激时，会在细胞质中形成呈聚集状颗粒的mRNA-蛋白质复合体，即应激颗粒(stress granules,SGs)。

SGs的形成具有重要的生理意义，包括通过调控mRNA翻译以及抑制细胞凋亡相关信号通路等机制，将逆境压力对细胞造成的损伤最小化，并促进细胞对逆境条件的适应以及在逆境条件下的存活。研究表明，SGs与多种疾病的发生关联紧密,包括多种类型的肿瘤、神经退行性疾病以及病毒感染相关疾病等。肿瘤细胞利用SGs促进了逆境条件下的存活从而参与肿瘤抗药性的产生，而一些神经退行性疾病中蛋白聚集体的形成也与异常SGs密切相关。

SGs的组装形成依赖于核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP)之间的多种相互作用，包括RNA结合蛋白之间的蛋白-蛋白互作、蛋白-RNA互作以及RNA-RNA互作。其中蛋白-蛋白互作对SGs的形成产生一定的影响。在应激条件下，SGs核心蛋白G3BP1和G3BP2会通过自身相互作用促进SGs的形成。SGs蛋白Caprin1和USP10通过竞争性结合G3BP1/2调控SGs的动态过程：G3BP1/2与Caprin1的结合促进了SGs的组装，而G3BP1/2与USP10的结合促进了SGs的解聚。

Caprin1(Cell cycle associated protein 1，细胞周期相关蛋白1)在休止期的正常细胞发生活化和/或细胞分裂时表达，并在细胞内与RNA形成细胞内应激颗粒而参与mRNA的运输、翻译的控制等的活动。研究表明，Caprin1与多种恶性肿瘤有关，如骨肉瘤、乳腺癌和结肠癌等。目前已有研究将Caprin1作为某些恶性肿瘤临床诊断的生物标志物。因此Caprin1有望成为肿瘤治疗的有效靶标。研究发现一种酪氨酸化合物Tylophorine通过靶向含有Caprin1、G3BP1等SGs蛋白以及c-Myc、cyclin D2等mRNA的RNP复合物，抑制RNP组分的功能，从而发挥其抗癌活性。然而，以上小分子化合物通过抑制SGs蛋白产生的抗癌活性是否依赖于SGs的抑制，也有待进一步研究来揭示。

目前，将SGs的组装过程中重要的核心蛋白作为靶点，开发新的活性物质用于与SGs相关疾病的治疗，受到人们越来越多研究的关注。

发明内容

基于现有技术SGs核心蛋白G3BP1和G3BP2能够通过自身相互作用促进SGs的形成的研究发现，本发明设计了一类来源于Caprin1的活性肽，通过竞争性与G3BP1蛋白结合，特异性地阻断Caprin1与G3BP1蛋白互作，以期获得SGs抑制剂(stress granules inhibitorypeptides,SIPs)。

本发明具体技术方案如下：

一类来源于Caprin1的活性肽，其特征在于其80％或以上的序列包含如SEQ IDNo：1所示的氨基酸序列。

优选的，所述来源于Caprin1的活性肽选自SEQ ID No：1-4任一项所示的氨基酸序列。

上述来源于Caprin1的活性肽中，SEQ ID No：1所示的序列源于Caprin1氨基酸序列的第361-385位，SEQ ID No：2所示的序列源于Caprin1氨基酸序列的第351-390位，SEQID No：3所示的序列源于Caprin1氨基酸序列的第351-385位，SEQ ID No：4所示的序列源于Caprin1氨基酸序列的第361-390位。

本发明另一发明目的在于提供表达来源于Caprin1的活性肽的基因。

具体的，上述基因序列如SEQ ID No：5-8所示。

本发明另一发明目的在于提供本发明所述来源于Caprin1的活性肽或表达来源于Caprin1的活性肽的基因在制备应激颗粒抑制剂中的应用。

优选的，所述应激颗粒抑制剂为治疗与SGs生成有关的疾病的药物。

所述疾病包括但不限于肿瘤或神经退行性疾病。

所述肿瘤包括但不限于头颈癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、肝癌、胃癌、直肠癌、肾癌、膀胱癌、子宫内膜癌、宫颈癌和睾丸癌等。

进一步的，所述肿瘤为对抗肿瘤药物产生耐药性的肿瘤。所述抗肿瘤药物可以为奥沙利铂(Oxaliplatin)、硼替佐米(Bortezomib)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、多西他赛(Docetaxel)、卡巴他赛(Cabazitaxel)和索拉非尼(Sorafenib)等。

所述神经退行性疾病包括急性神经退行性疾病和慢性神经退行性疾病，前者主要包括但不限于括脑缺血(CI)、脑损伤(BI)、癫痫；后者主要包括但不限于包括肌萎缩性侧索硬化(ALS)、额颞叶痴呆(FTD)、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)和亨廷顿病(HD)等。

本发明所述的活性肽或活性肽的基因或表达活性肽或活性肽的基因的载体可以作为活性成分制备成药物。

所述载体可以为表达质粒或病毒载体，例如原核表达载体、真核表达载体、腺病毒表达载体和慢病毒表达载体等。

优选的，载体选自哺乳动物表达质粒，如pCS2、pcDNA3、pCMV、pTRE、pMEP4、pCGN、pCAGGS等，或者腺病毒表达、慢病毒表达载体，例如pDC316、pDC311、pDC312或pDC315。

优选的，所述药物为可携带促进来源于Caprin1的活性肽或表达来源于Caprin1的活性肽的基因细胞穿膜的药物传递载体或传递系统，例如脂质体、纳米材料等药物传递系统等。

或者，优选的，将所述来源于Caprin1的活性肽与促进穿膜的物质偶联或者将来源于Caprin1的活性肽与细胞穿膜肽的共表达载体或者使用具有穿膜能力的表达载体表达来源于Caprin1的活性肽。

本发明另一目的在于提供一种偶联穿膜肽的来源于Caprin1的活性肽，所述穿膜肽包括(1)阳离子型肽，如人类免疫缺陷病毒HIV的转录反式激活因子TAT(YGRKKRRQRRR，HIV-1 tat Protein)、VP22、乳铁蛋白肽hLF、多聚精氨酸寡聚体R5、R6、R7、R8、R9或多聚赖氨酸、核定位信号序列肽(nuclear localization sequences,NLSs)，如单分型NLSs(PKKKRKV)，双分型NLSs(KRPAATKKAGQAKKKK)；抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)，如抗菌肽LL-37、S413-PV、TP10、Buforin 2等；(2)两亲性肽，如模型两亲性肽(MAP)、MPG、penetratin、transportan、CADY、C6M1、血管内皮-钙黏蛋白(pVEC)、ARF(1-22)、BPrPr、芳香箭头肽(sweet arrow peptide,SAP，VRLPPP)；(3)疏水性肽，如从整合素β3中发现的信号序列VTVLALGALAGVGVG、卡波济成纤维细胞生长因子(AAVALLPAVLLALLAP)。

所述穿膜肽与来源于Caprin1的活性肽的N端或C端直接或者通过连接肽连接。

优选连接肽是指1～50个富含Gly和/或Ala和/或Ser氨基酸残基的柔性肽。

具体的一个示例，所述穿膜肽选自人类免疫缺陷病毒HIV的转录反式激活因子TAT(YGRKKRRQRRR，HIV-1 tat Protein)，氨基酸序列如SEQ ID No：9所示。

具体的一个示例，偶联穿膜肽的Caprin1的活性肽氨基酸序列如SEQ ID No：10-13所示。

本发明优点：

1.本发明对Caprin1蛋白的最小G3BP1结合区进行了研究。通过免疫共沉淀和GST-pull down实验方法发现Caprin1的351-390位序列和Caprin1的361-385位序列仍然保留了与G3BP1的结合能力，提示该区域为Caprin1蛋白与G3BP1结合的重要区域。本发明进一步通过GST-pull down实验观察到Caprin1((351-390))、Caprin1(361-385))与Caprin1竞争结合G3BP1，能够有效抑制Caprin1与G3BP1的结合。免疫荧光实验结果显示Caprin1(351-390)和Caprin1(361-385)均能够抑制由亚砷酸钠诱导的SGs。

2本发明将Caprin1(351-390))和Caprin1(361-385)与穿膜肽TAT偶联，分别命名为SIP-C1和SIP-C2。实验结果显示，SIP-C1和SIP-C2能够有效抑制Sorafenib诱导HeLa细胞产生的SGs，并促进细胞凋亡。提示本发明所述的来源于Caprin1的活性肽能够用于耐药性肿瘤的治疗。

附图说明

图1为Caprin1(258-415)、Caprin1(301-390)、Caprin1(301-350)、Caprin1(351-390)和Caprin1与hG3BP1免疫共沉淀实验结果。

图2为GST-pull down实验考察Caprin1(351-390)、Caprin1(361-385)与蛋白Caprin1竞争结合G3BP1的能力。

图3为Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)抑制SGs活性的免疫荧光实验结果。

图4为Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)抑制抗肿瘤药物Sorafenib诱导形成的SGs的免疫荧光实验结果。

图5为偶联穿膜肽的Caprin1(351-390)和Caprin1(361-385)抑制SGs的活性免疫荧光实验结果。

图6为偶联穿膜肽的Caprin1(351-390)和Caprin1(361-385)诱导细胞凋亡的活性。

具体实施方式

以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。

在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实例并参照数据进一步详细描述本发明。

应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

实施例1基于阻断Caprin1与G3BP1互作的多肽类SGs抑制剂的设计1.根据研究报道，SGs的两个成核蛋白Caprin1与G3BP1的互作会促进SGs的组装。本发明探究了Caprin1蛋白的最小G3BP1结合区，根据Caprin1蛋白设计了四种多肽片段：Caprin1(258-415)、Caprin1(301-390)、Caprin1(301-350)、Caprin1(351-390)。委托上海吉尔生化公司合成上述多肽片段。

2.构建Caprin1和hG3BP1表达质粒，设计并合成以下引物：

G3BP1:

G3BP1-F 5’-atggtgatggagaagcctagtcccctgct-3’(SEQ ID No：14)；

G3BP1-Xba-R 5’-ccatctagattcactgccgtggcgcaagcc-3’(SEQ ID No：15)；

Caprin1：

Caprin1-F 5’-atgccctcggccaccagccaca-3’(SEQ ID No：16)；

Caprin1-Xba-R 5’-tcttctagaaacatattatggtacactgg-3’(SEQ ID No：17)。

参考《分子克隆实验指南(第四版)》(冷泉港实验室出版社/科学出版社)，分别以293T cDNA为模板，分别以上述引物，采用高保真Q5聚合酶PCR扩增上述多肽片段编码基因。

PCR条件为：98℃变性2min；98℃10s，64℃30s，72℃70s进行30个循环；72℃延伸5min。将Caprin1的PCR产物纯化后克隆到pCS2-GFP-Myc载体(Addgene，#15681)，将hG3BP1的PCR产物纯化后克隆到pCS2-FLAG(Addgene,#16331载体中，并送北京擎科生物科技有限公司测序。测序结果显示正确。

将293T细胞接种到所需的细胞培养皿中，待细胞生长密度达到60％～70％使用上述Caprin1和hG3BP1表达质粒共转染细胞，二氧化碳细胞培养箱培养。

3.将四种多肽片段：Caprin1(258-415)、Caprin1(301-390)、Caprin1(301-350)、Caprin1(351-390)和Caprin1与hG3BP1进行免疫共沉淀实验。

取培养好的已转染Caprin1和FLAG-hG3BP1的293T细胞，加入0.5％NP-40细胞裂解液(含0.5％PI)，制备得到含有Caprin1和hG3BP1蛋白裂解液，再加入等量FLAG抗体(Sigma,#F1804)稀释液，孵育过夜。制备Protein G

(以下简称Protein G)，等量分配到蛋白裂解液与抗体的孵育管中，置于4℃旋转混合仪上孵育1h。

向上述孵育管中分别加入Caprin1(258-415)、Caprin1(301-390)、Caprin1(301-350)、Caprin1(351-390)，用蛋白印迹方法检测蛋白之间的相互作用。

免疫共沉淀实验结果如图1所示，结果显示Caprin1蛋白与G3BP1结合的区域为Caprin1(351-390)区段。

实施例2考察本发明所述源于Caprin1的活性肽与蛋白Caprin1竞争结合G3BP1的能力

基于实施例1的研究结果，在Caprin1(351-390)的基础上设计了序列更短的Caprin1(361-385)。

1.Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)表达质粒的构建

设计并合成以下引物：

Caprin1(351-390)：

Caprin1-351F 5’-gatccccttgtgagaagacagcgagtacaa-3’(SEQ ID No：18)；

Caprin1-Xba-390R 5’-ctgtctagatacaatggcaggatcaagtgt-3’(SEQ ID No：19)；

Caprin1(361-385)：

Caprin1-361F 5’-gaccttatggcacaaatgcagggtccctat-3’(SEQ ID No：20)；

Caprin1-Xba-385R 5’-tgatctagaaagtgtctgattttcaaaatc-3’(SEQ ID No：21)。

参考《分子克隆实验指南(第四版)》(冷泉港实验室出版社/科学出版社)，以实施例1制得的pCS2-Myc-hCaprin1为模板，分别以上述引物，采用高保真Q5聚合酶PCR扩增上述多肽片段编码基因。

PCR条件为：98℃变性2min；98℃10s，64℃30s，72℃10s进行30个循环；72℃延伸5min。PCR产物纯化后分别克隆到pCS2-GFP-Myc载体(Addgene，#15681)中并送北京擎科生物科技有限公司测序。测序结果显示正确。

将293T细胞接种到所需的细胞培养皿中，待细胞生长密度达到60％～70％，将Caprin1(实施例1制得)、Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)的质粒分别转染细胞，二氧化碳细胞培养箱培养。

取培养好的已转染质粒的293T细胞，加入0.5％NP-40细胞裂解液(含0.5％PI)，分别制备得到含有Caprin1、Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)的总蛋白提取液。

2.GST-pull down实验考察上述源于Caprin1的活性肽与蛋白Caprin1竞争结合G3BP1的能力。

具体实验步骤如下：

GST-hG3BP1的制备：

设计并合成G3BP1引物:

G3BP1-EcoRI-F 5’-gaggaattcgatggtgatggagaagcctagt-3’(SEQ ID No：22)；

G3BP1-Sa1I-R 5’-ccagtcgactcactgccgtggcgcaagcc-3’(SEQ ID No：23)；

参考《分子克隆实验指南(第四版)》(冷泉港实验室出版社/科学出版社)，以实施例1制得的FLAG-hG3BP1质粒为模板，使用上述引物，采用高保真Q5聚合酶PCR扩增上述多肽片段编码基因。

PCR条件为：98℃变性2min；98℃10s，64℃30s，72℃45s进行30个循环；72℃延伸5min。PCR产物纯化后分别克隆到pGEX6P3载体(Addgene，#15681)中并送北京擎科生物科技有限公司测序。测序结果显示正确。

将上述制得的质粒转化进DH5α大肠杆菌中，IPTG诱导GST-hG3BP1蛋白表达，取菌体超声破碎提取总蛋白，蛋白电泳，考马斯亮蓝染色，检测GST-hG3BP1蛋白诱导成功。

在1.5mL EP管，分别加入GST-hG3BP1和对照GST蛋白各5μg以及转染细胞裂解后提取的总蛋白：Caprin1、Caprin1(361-385)或Caprin1(351-390)4℃结合1h，3000转离心1min，去上清。加入1000μl GST-Pull down buffer洗涤beads 3次。吸尽GlutathioneSepharose 4B beads上方液体后，加入75μL2×SDS loading buffer，煮沸5min，冰上5min。采用标签抗体Western blot检测两个蛋白质相互作用。

结果如图2所示，结果显示，随着Caprin1(351-390)、Caprin1(361-385)剂量的增加。Caprin1(351-390)、Caprin1(361-385)能够竞争结合G3BP1，抑制Caprin1与G3BP1蛋白的结合。

实施例3考察Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)抑制SGs的活性将HeLa细胞系接种于6孔板中，当细胞汇合度达到60％左右时将实施例2构建得到的表达Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)的质粒分别转染HeLa细胞，在细胞中过表达。细胞汇合度达到80％左右时，取12mL细胞培养基于15mL离心管中，加入12μL 0.5mM AS，混合均匀，替换6孔板中的培养基，刺激HeLa细胞形成SGs(使用内源G3BP1作为SGs的标记物)。放入二氧化碳细胞培养箱继续培养45min。取出6孔板进行免疫荧光实验。

结果如图3所示，结果表明，与对照组相比，Caprin1(351-390)、Caprin1(361-385)过表达抑制了由AS诱导的SGs(图3A)。为了保证实验数据的真实性和可重复性，共进行三次实验重复，并在每次实验中随机选取100个细胞，对其抑制效果进行了统计(图3B)。由柱状统计图可以看出，Caprin1(351-390)抑制了由AS诱导的SGs的形成，Caprin1(361-385)在高达98％的细胞中抑制了由AS诱导的SGs的形成(图3C)。

实施例4Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)抑制抗肿瘤药物Sorafenib诱导形成的SGs

将HeLa细胞系接种于6孔板中，当细胞汇合度达到60％左右时将实施例2构建得到的表达Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)的质粒分别转染HeLa细胞，在细胞中过表达。并用50μM Sorafenib处理HeLa细胞，刺激HeLa细胞形成SGs(使用内源G3BP1作为SGs的标记物)。通过免疫荧光实验发现，与对照组相比，Caprin1(361-385)、Caprin1(351-390)过表达抑制了由抗肿瘤药物Sorafenib诱导形成的SGs(图4)。

实施例5偶联穿膜肽的Caprin1(351-390)和Caprin1(361-385)抑制SGs的活性将Caprin1(351-390)和Caprin1(361-385)与穿膜肽TAT偶联，分别命名为SIP-C1和SIP-C2。委托上海吉尔生化公司合成上述多肽片段。

将HeLa细胞系接种于6孔板中，当细胞汇合度达到80％左右时，弃掉培养基，加入1.2mL细胞培养基以及300μL 1mM TAT、SIP-C1或SIP-C2，放入二氧化碳细胞培养箱继续培养2h。取出6孔板，再向每个孔加入已配制好的15μL 5mM Sorafenib，放入二氧化碳细胞培养箱继续培养1.5h，进行免疫荧光实验。结果如图4所示。

结果显示，与对照Sorafenib组、Sorafenib和TAT联用组相比，浓度为200μM的SIP-C1或SIP-C2在HeLa细胞中能有效抑制由50μM Sorafenib诱导形成的SGs，这种抑制作用不是TAT而是SIP-C1或SIP-C2产生的。

实施例6偶联穿膜肽的Caprin1(351-390)和Caprin1(361-385)诱导细胞凋亡的活性将HeLa细胞系接种于6孔板中，当细胞汇合度达到95％左右时，弃掉培养基，分别加入含有浓度为200μM的TAT、SIP-C1或SIP-C2的培养基处理细胞，放入二氧化碳细胞培养箱培养2h。取出6孔板，再向每个孔加入已配制好的15μL 5mM Sorafenib，放入二氧化碳细胞培养箱继续培养1.5h，取出6孔板，弃掉培养基，向每个孔加入1mL 4.5μM PI染色液，放入二氧化碳细胞培养箱染色15min，倒置显微镜下观察，拍照，并对凋亡细胞计数，进行了数据统计。结果如图6所示。

PI染色结果如图6A所示，凋亡细胞计数统计结果如图6B所示。结果表明与对照Sorafenib组、Sorafenib和TAT联用组相比，SIP-C1和SIP-C2均能够有效增强HeLa细胞对Sorafenib的敏感性，促进Sorafenib诱导的细胞凋亡，其中SIP-C1的效果更为显著。

序列表

<110> 浙江师范大学

<120> 一类来源于Caprin1的活性肽及其应用

<160> 23

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 25

<212> PRT

<213> human

<400> 1

Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser

1 5 10 15

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu

20 25

<210> 2

<211> 40

<212> PRT

<213> human

<400> 2

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met

1 5 10 15

Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn

20 25 30

Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val

35 40

<210> 3

<211> 35

<212> PRT

<213> human

<400> 3

Asp Pro Leu Val Arg Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met

1 5 10 15

Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn

20 25 30

Gln Thr Leu

35

<210> 4

<211> 30

<212> PRT

<213> human

<400> 4

Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser

1 5 10 15

Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val

20 25 30

<210> 5

<211> 75

<212> DNA

<213> human

<400> 5

gaccttatgg cacaaatgca gggtccctat aatttcatac aggattcaat gctggatttt 60

gaaaatcaga cactt 75

<210> 6

<211> 120

<212> DNA

<213> human

<400> 6

gatccccttg tgagaagaca gcgagtacaa gaccttatgg cacaaatgca gggtccctat 60

aatttcatac aggattcaat gctggatttt gaaaatcaga cacttgatcc tgccattgta 120

<210> 7

<211> 105

<212> DNA

<213> human

<400> 7

gatccccttg tgagaagaca gcgagtacaa gaccttatgg cacaaatgca gggtccctat 60

aatttcatac aggattcaat gctggatttt gaaaatcaga cactt 105

<210> 8

<211> 90

<212> DNA

<213> human

<400> 8

gaccttatgg cacaaatgca gggtccctat aatttcatac aggattcaat gctggatttt 60

gaaaatcaga cacttgatcc tgccattgta 90

<210> 9

<211> 11

<212> PRT

<213> Human immunodeficiency virus

<400> 9

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg

1 5 10

<210> 10

<211> 51

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 10

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Asp Pro Leu Val Arg

1 5 10 15

Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn

20 25 30

Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu Asp Pro

35 40 45

Ala Ile Val

50

<210> 11

<211> 37

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 11

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gln Asp Leu Met Ala

1 5 10 15

Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe

20 25 30

Glu Asn Gln Thr Leu

35

<210> 12

<211> 46

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 12

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Asp Pro Leu Val Arg

1 5 10 15

Arg Gln Arg Val Gln Asp Leu Met Ala Gln Met Gln Gly Pro Tyr Asn

20 25 30

Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu Asn Gln Thr Leu

35 40 45

<210> 13

<211> 41

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 13

Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Asp Leu Met Ala Gln

1 5 10 15

Met Gln Gly Pro Tyr Asn Phe Ile Gln Asp Ser Met Leu Asp Phe Glu

20 25 30

Asn Gln Thr Leu Asp Pro Ala Ile Val

35 40

<210> 14

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 14

atggtgatgg agaagcctag tcccctgct 29

<210> 15

<211> 30

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 15

ccatctagat tcactgccgt ggcgcaagcc 30

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 16

atgccctcgg ccaccagcca ca 22

<210> 17

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 17

tcttctagaa acatattatg gtacactgg 29

<210> 18

<211> 30

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 18

gatccccttg tgagaagaca gcgagtacaa 30

<210> 19

<211> 30

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 19

ctgtctagat acaatggcag gatcaagtgt 30

<210> 20

<211> 30

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 20

gaccttatgg cacaaatgca gggtccctat 30

<210> 21

<211> 30

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 21

tgatctagaa agtgtctgat tttcaaaatc 30

<210> 22

<211> 31

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 22

gaggaattcg atggtgatgg agaagcctag t 31

<210> 23

<211> 29

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 23

ccagtcgact cactgccgtg gcgcaagcc 29

Claims (7)

1.一种来源于Caprin1的活性肽、表达所述来源于Caprin1的活性肽的核苷酸或者偶联穿膜肽的Caprin1的活性肽在制备应激颗粒抑制剂中的应用，所述来源于Caprin1的活性肽氨基酸序列如SEQ ID No：1或2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述表达所述来源于Caprin1的活性肽的核苷酸序列如SEQ ID No：5或6所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述偶联穿膜肽的Caprin1的活性肽氨基酸序列如SEQ ID No：10或11所示。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于所述应激颗粒抑制剂为治疗与SGs生成有关的疾病的药物，所述疾病为肿瘤或神经退行性疾病。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述肿瘤包括头颈癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、乳腺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、肝癌、胃癌、直肠癌、肾癌、膀胱癌、子宫内膜癌、宫颈癌或睾丸癌，所述神经退行性疾病包括脑缺血、脑损伤、癫痫、肌萎缩性侧索硬化、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、帕金森病或亨廷顿病。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述肿瘤为对抗肿瘤药物产生耐药性的肿瘤。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于所述抗肿瘤药物选自奥沙利铂、硼替佐米、5-氟尿嘧啶、多西他赛、卡巴他赛、索拉非尼中的一种或几种。

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