JP6156698B2 - 抗腫瘍ペプチド及びその利用 - Google Patents
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Description
本発明は、腫瘍細胞（がん細胞）の増殖を抑制し得る人為的に合成された抗腫瘍ペプチドとその利用に関する。
なお、本出願は２０１１年１２月２０日に出願された日本国特許出願２０１１−２７８９７３号および日本国特許出願２０１１−２７８９７４号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
なお、本出願は２０１１年１２月２０日に出願された日本国特許出願２０１１−２７８９７３号および日本国特許出願２０１１−２７８９７４号に基づく優先権を主張しており、当該日本国出願の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
腫瘍細胞（がん細胞）の特徴の一つとして正常細胞に比べて細胞分裂が活発に行われ、その結果として細胞増殖速度が著しく高いことが挙げられる。従って、腫瘍細胞の死滅もしくは増殖阻害を目的とする抗がん剤の多くは、腫瘍細胞（がん細胞）の細胞分裂を阻害する薬剤である。例えば、アルキル化剤は、腫瘍細胞（がん細胞）のＤＮＡに作用して二重鎖の塩基同士を架橋することにより、ＤＮＡの複製を妨害して細胞分裂を阻止する薬剤である。また、５−ＦＵ等の代謝拮抗剤はＤＮＡの合成を阻害して細胞分裂を阻止する薬剤である。
かかる腫瘍細胞（がん細胞）の活発な細胞分裂を阻害する薬剤（抗がん剤）として、アミノ酸残基数が比較的短い低分子量の生理活性ペプチドから成る薬剤の開発が期待されている。生理活性ペプチドから成る薬剤は、従来の化学物質から成る抗がん剤と比較して副作用の低減が期待されるとともに、特定の標的細胞（がん細胞）のみに作用することが期待される。例えば、特許文献１や特許文献２には、アミノ酸残基数が５０以下のような短い抗腫瘍ペプチド（抗がんペプチド）が開示されている。
プロテインエンジニアリング、デザイン＆セレクション（Protein Engineering, Design & Selection）、１８巻（２号）、２００５年、ｐｐ．８５−９１
ジャーナル・オブ・アンチマイクロバイアルケモセラピー(Journalof Antimicrobial Chemotherapy)、５４巻（１号）、２００４年、ｐｐ．２７８−２８０
本発明は、上記特許文献に記載されているような従前の抗腫瘍ペプチドとは作用機序の異なる新たな抗腫瘍性（抗がん性）のペプチドならびに該ペプチドを成分とする少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための抗腫瘍組成物（抗がん性の組成物）を提供することを目的として創出されたものである。
本発明者は、上記非特許文献１或いは非特許文献２において報告された幾つかのペプチド、具体的には、原核生物である細菌に存在し、細菌の細胞分裂に関与するＺリングと呼ばれるタンパク質集合体を構成するタンパク質であるフィラメント状温度感受性変異株Ｚ(Filamenting temperature-sensitive mutant Z：ＦｔｓＺ)タンパク質、或いは、該ＦｔｓＺタンパク質のＣ末端側に結合してＦｔｓＺタンパク質を細胞膜に繋ぎ止めるアンカーとして機能することが知られているフィラメント状温度感受性変異株Ａ(Filamenting temperature-sensitive mutant A：ＦｔｓＡ)タンパク質の活性（即ち、ＦｔｓＺタンパク質のＧＴＰアーゼ活性またはＦｔｓＡタンパク質のＡＴＰアーゼ活性）を阻害するペプチドとして、一般的なファージディスプレー法を採用して単離された幾つかのペプチド（即ちＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能し得るペプチド）に着目した。
そして、これらＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能し得るペプチドを種々の腫瘍細胞（がん細胞）に供給すると、該腫瘍細胞（がん細胞）中に正常な二極性の紡錘体ではなく多極紡錘体、即ち細胞中に多数の中心体（中心体の周辺物質（Pericentriolar material：ＰＣＭ）の断片である場合を包含する。以下同じ。）が散在し該散在した多数の中心体を極として二極性とは異なり該多数の中心体の各々からランダムに伸びる紡錘体（多極紡錘体）が高頻度に形成され得ることを見出した。
さらに、かかる多極紡錘体の形成（以下、単に「多極化」ともいう。）を誘導することによって、正常な細胞分裂が阻害され、対象（標的）とする腫瘍細胞（がん細胞）の増殖を阻止若しくは抑制し得ることを確認して本発明を完成するに至った。
本明細書において、用語「腫瘍細胞」は「がん細胞」と同義であり、がん化（悪性腫瘍化）していない正常細胞と区分するために使用される用語である。
そして、これらＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能し得るペプチドを種々の腫瘍細胞（がん細胞）に供給すると、該腫瘍細胞（がん細胞）中に正常な二極性の紡錘体ではなく多極紡錘体、即ち細胞中に多数の中心体（中心体の周辺物質（Pericentriolar material：ＰＣＭ）の断片である場合を包含する。以下同じ。）が散在し該散在した多数の中心体を極として二極性とは異なり該多数の中心体の各々からランダムに伸びる紡錘体（多極紡錘体）が高頻度に形成され得ることを見出した。
さらに、かかる多極紡錘体の形成（以下、単に「多極化」ともいう。）を誘導することによって、正常な細胞分裂が阻害され、対象（標的）とする腫瘍細胞（がん細胞）の増殖を阻止若しくは抑制し得ることを確認して本発明を完成するに至った。
本明細書において、用語「腫瘍細胞」は「がん細胞」と同義であり、がん化（悪性腫瘍化）していない正常細胞と区分するために使用される用語である。
上記の目的を実現するべく、本発明によると以下の構成の組成物が提供される。即ち、ここで開示される組成物の一態様は、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物であって、該少なくとも一種の腫瘍細胞中に多極紡錘体の発生を誘導し得る抗腫瘍ペプチドと、薬学上許容され得る少なくとも一種の担体とを備えている。
そして、上記抗腫瘍ペプチドとして、ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（13）ＳＶＳＶＧＭＫＰＳＰＲＰ （配列番号１３）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列から成る合成ペプチドを含有することを特徴とする。
そして、上記抗腫瘍ペプチドとして、ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（13）ＳＶＳＶＧＭＫＰＳＰＲＰ （配列番号１３）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列から成る合成ペプチドを含有することを特徴とする。
かかる構成の組成物によると、上記アミノ酸配列の合成ペプチド（抗腫瘍ペプチド）を含有する結果、該組成物（該抗腫瘍ペプチド）を対象（標的）とする腫瘍（即ち該腫瘍組織を構成している腫瘍細胞）に供給することにより、該組織を構成する腫瘍細胞中（典型的にはＭ期の細胞中）に３個以上（典型的には５個以上、好ましくは８個以上）の中心体を生じさせ、それら複数の中心体を極とする多極紡錘体の発生を誘導することができる。これにより、多極紡錘体が形成された細胞（多極化細胞）の細胞分裂が阻害され、結果、腫瘍細胞の増殖を阻止若しくは抑制することができる。
また、ここで開示される組成物の他の好ましい一態様は、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物であって、該少なくとも一種の腫瘍細胞の多極化を誘導し得る抗腫瘍ペプチドと、薬学上許容され得る少なくとも一種の担体とを備えている。
そして、上記抗腫瘍ペプチドとして、ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（13）ＳＶＳＶＧＭＫＰＳＰＲＰ （配列番号１３）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列と、核小体局在シグナル（ＮｏＬＳ）を構成するアミノ酸配列であって配列番号２３〜配列番号３０のうちから選択される何れかの配列番号のアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列とから成る合成ペプチドを含有することを特徴とする。
そして、上記抗腫瘍ペプチドとして、ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（13）ＳＶＳＶＧＭＫＰＳＰＲＰ （配列番号１３）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列と、核小体局在シグナル（ＮｏＬＳ）を構成するアミノ酸配列であって配列番号２３〜配列番号３０のうちから選択される何れかの配列番号のアミノ酸配列又は該アミノ酸配列について１個、２個又は３個のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加されて形成されたアミノ酸配列とから成る合成ペプチドを含有することを特徴とする。
本発明者は、核小体局在シグナル（ＮｏＬＳ：Nucleolar
localization signal）として知られるアミノ酸配列（特許文献３、４及び５参照）が細胞外から核内（典型的には核小体）へのペプチド移行に関与するアミノ酸配列であることを見出しており、該アミノ酸配列を含むように構成された合成ペプチド（ＮｏＬＳ付き抗腫瘍ペプチド）を使用することにより、対象とする腫瘍組織（腫瘍細胞）により効率よく抗腫瘍ペプチドを導入することができる。従って、本態様の組成物（抗腫瘍ペプチド）の利用により、多極化細胞の形成効率が向上し、より効果的に腫瘍細胞の増殖を阻止若しくは抑制することができる。
localization signal）として知られるアミノ酸配列（特許文献３、４及び５参照）が細胞外から核内（典型的には核小体）へのペプチド移行に関与するアミノ酸配列であることを見出しており、該アミノ酸配列を含むように構成された合成ペプチド（ＮｏＬＳ付き抗腫瘍ペプチド）を使用することにより、対象とする腫瘍組織（腫瘍細胞）により効率よく抗腫瘍ペプチドを導入することができる。従って、本態様の組成物（抗腫瘍ペプチド）の利用により、多極化細胞の形成効率が向上し、より効果的に腫瘍細胞の増殖を阻止若しくは抑制することができる。
また、本発明は、ここで開示される何れかの組成物を、対象とする腫瘍細胞に対して（例えば生体外において、或いは生体内において）少なくとも１回供給することを特徴とする、少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制する方法を提供する。
かかる構成の方法では、上述した何れかのアミノ酸配列から成る合成ペプチド（抗腫瘍ペプチド）を腫瘍細胞に供給することによって、該腫瘍細胞を多極化して細胞分裂を阻害し、結果として対象とする腫瘍細胞（腫瘍：癌組織）の増殖を阻止若しくは抑制することができる。
好ましい一態様では、ここで開示される方法によって、扁平上皮癌を構成する腫瘍細胞若しくは腺癌を構成する腫瘍細胞の増殖を効果的に抑制することができる。
かかる構成の方法では、上述した何れかのアミノ酸配列から成る合成ペプチド（抗腫瘍ペプチド）を腫瘍細胞に供給することによって、該腫瘍細胞を多極化して細胞分裂を阻害し、結果として対象とする腫瘍細胞（腫瘍：癌組織）の増殖を阻止若しくは抑制することができる。
好ましい一態様では、ここで開示される方法によって、扁平上皮癌を構成する腫瘍細胞若しくは腺癌を構成する腫瘍細胞の増殖を効果的に抑制することができる。
以下、本発明の好適な実施形態を説明する。なお、本明細書において特に言及している事項（例えばここで開示される抗腫瘍ペプチドの一次構造）以外の事柄であって本発明の実施に必要な事柄（例えばペプチドの化学合成法、細胞培養技法、ペプチドを成分とする薬学的組成物の調製に関するような一般的事項）は、細胞工学、生理学、医学、薬学、有機化学、生化学、遺伝子工学、タンパク質工学、分子生物学、遺伝学等の分野における従来技術に基づく当業者の設計事項として把握され得る。本発明は、本明細書に開示されている内容と当該分野における技術常識とに基づいて実施することができる。なお、以下の説明では、場合に応じてアミノ酸をIUPAC-IUBガイドラインで示されたアミノ酸に関する命名法に準拠した１文字表記（但し配列表では３文字表記）で表す。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
また、本明細書中で引用されている全ての文献の全ての内容は本明細書中に参照として組み入れられている。
本明細書において「合成ペプチド」とは、人為的な化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって製造されるペプチド断片をいう。
また、本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されないが、典型的には全アミノ酸残基数が概ね５０以下（例えば３０以下）のような比較的分子量の小さいものをいう。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
また、本明細書において「ペプチド」とは、複数のペプチド結合を有するアミノ酸ポリマーを指す用語であり、ペプチド鎖に含まれるアミノ酸残基の数によって限定されないが、典型的には全アミノ酸残基数が概ね５０以下（例えば３０以下）のような比較的分子量の小さいものをいう。
また、本明細書において「アミノ酸残基」とは、特に言及する場合を除いて、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸及びＣ末端アミノ酸を包含する用語である。
本明細書において「腫瘍」とは、広義に解釈される用語であり、癌腫及び肉腫或いは血液や造血組織の病変（白血病、リンパ腫等）を含む腫瘍一般（典型的には悪性腫瘍）をいう。また、「腫瘍細胞」とは、そのような腫瘍を形成する細胞であって、典型的には周辺の正常組織とは無関係に異常に増殖を行うに至った細胞（所謂がん化した細胞）をいう。従って、特別に規定しない限り、正常細胞ではなく腫瘍細胞（がん細胞）に区分される細胞であれば、該細胞の起源や性状に関わりなく腫瘍細胞と呼称される。上皮性腫瘍（扁平上皮癌、腺癌等）、非上皮性腫瘍（各種の肉腫、骨肉腫等）、各種の細胞腫（神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫等）、リンパ腫、メラノーマ等を構成する細胞は、ここでいう腫瘍細胞に包含され得る。
また、本明細書において所定のアミノ酸配列に対して「改変アミノ酸配列」とは、当該所定のアミノ酸配列が有する機能（例えば上記抗腫瘍ペプチドが有する多極化誘導能やＮｏＬＳが有する細胞外から核内への移行能）を損なうことなく、１個又は数個（例えば２個又は３個）のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加（挿入）されて形成されたアミノ酸配列をいう。例えば、１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換（conservative amino acid replacement）によって生じた配列（例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列：例えばリジン残基とアルギニン残基との相互置換）、或いは、所定のアミノ酸配列について１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が付加（挿入）した若しくは欠失した配列等は、本明細書でいうところの改変アミノ酸配列に包含される典型例である。従って、ここで開示される抗腫瘍ペプチドには、各配列番号のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列で構成される合成ペプチドに加え、各配列番号のアミノ酸配列において１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が置換（例えば上記同類置換）、欠失及び／又は付加したアミノ酸配列であって、同様に多極化誘導性を示すアミノ酸配列からなる合成ペプチドを包含する。
また、本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、複数のヌクレオチドがリン酸ジエステル結合で結ばれたポリマー（核酸）を指す用語であり、ヌクレオチドの数によって限定されない。種々の長さのＤＮＡフラグメント及びＲＮＡフラグメントが本明細書におけるポリヌクレオチドに包含される。また、「人為的に設計されたポリヌクレオチド」とは、そのヌクレオチド鎖（全長）がそれ単独で自然界に存在するものではなく、化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって人為的に合成されたポリヌクレオチドをいう。
また、本明細書において所定のアミノ酸配列に対して「改変アミノ酸配列」とは、当該所定のアミノ酸配列が有する機能（例えば上記抗腫瘍ペプチドが有する多極化誘導能やＮｏＬＳが有する細胞外から核内への移行能）を損なうことなく、１個又は数個（例えば２個又は３個）のアミノ酸残基が置換、欠失及び／又は付加（挿入）されて形成されたアミノ酸配列をいう。例えば、１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が保守的に置換したいわゆる同類置換（conservative amino acid replacement）によって生じた配列（例えば塩基性アミノ酸残基が別の塩基性アミノ酸残基に置換した配列：例えばリジン残基とアルギニン残基との相互置換）、或いは、所定のアミノ酸配列について１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が付加（挿入）した若しくは欠失した配列等は、本明細書でいうところの改変アミノ酸配列に包含される典型例である。従って、ここで開示される抗腫瘍ペプチドには、各配列番号のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列で構成される合成ペプチドに加え、各配列番号のアミノ酸配列において１個又は数個（典型的には２個又は３個）のアミノ酸残基が置換（例えば上記同類置換）、欠失及び／又は付加したアミノ酸配列であって、同様に多極化誘導性を示すアミノ酸配列からなる合成ペプチドを包含する。
また、本明細書において「ポリヌクレオチド」とは、複数のヌクレオチドがリン酸ジエステル結合で結ばれたポリマー（核酸）を指す用語であり、ヌクレオチドの数によって限定されない。種々の長さのＤＮＡフラグメント及びＲＮＡフラグメントが本明細書におけるポリヌクレオチドに包含される。また、「人為的に設計されたポリヌクレオチド」とは、そのヌクレオチド鎖（全長）がそれ単独で自然界に存在するものではなく、化学合成或いは生合成（即ち遺伝子工学に基づく生産）によって人為的に合成されたポリヌクレオチドをいう。
ここで開示される組成物は、本発明者によって初めて所定の腫瘍細胞において上述の多極化を誘導し得るという作用が見出されたアミノ酸配列から成る抗腫瘍ペプチド若しくは該ペプチドのアミノ酸配列のＮ末端側若しくはＣ末端側にＮｏＬＳを連結して構成されるＮｏＬＳ付き抗腫瘍ペプチドを有効成分として含有する腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物（以下、「抗腫瘍組成物」と略称する場合がある。）である。腫瘍細胞の増殖阻害剤ともいう。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドの幾つかは、配列番号１〜配列番号２２のうちの何れかの配列番号に示すアミノ酸配列（又はその改変配列）から構成される。これらアミノ酸配列から成るペプチドは、上述のとおり、上記非特許文献１或いは非特許文献２において報告されたように、ある種の細菌に対してＦｔｓＡインヒビター（配列番号１〜１０，１３〜２１）またはＦｔｓＺインヒビター（配列番号１１〜１２，２２）として機能し得るペプチドである。しかし、従来、かかるＦｔｓＡインヒビターまたはＦｔｓＺインヒビターとして機能し得る種々のペプチドが腫瘍細胞（真核細胞）において多極化を誘導することは全く知られておらず、そのことを示唆するものも存在しない。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドの幾つかは、配列番号１〜配列番号２２のうちの何れかの配列番号に示すアミノ酸配列（又はその改変配列）から構成される。これらアミノ酸配列から成るペプチドは、上述のとおり、上記非特許文献１或いは非特許文献２において報告されたように、ある種の細菌に対してＦｔｓＡインヒビター（配列番号１〜１０，１３〜２１）またはＦｔｓＺインヒビター（配列番号１１〜１２，２２）として機能し得るペプチドである。しかし、従来、かかるＦｔｓＡインヒビターまたはＦｔｓＺインヒビターとして機能し得る種々のペプチドが腫瘍細胞（真核細胞）において多極化を誘導することは全く知られておらず、そのことを示唆するものも存在しない。
或いはまた、ここで開示される抗腫瘍ペプチドの幾つかは、配列番号１〜配列番号２２のうちの何れかの配列番号に示すアミノ酸配列（又はその改変配列）と、以下に示す配列番号２３〜配列番号３０：
（23）ＫＫＲＴＬＲＫＮＤＲＫＫＲ （配列番号２３）；
（24）ＷＲＲＱＡＲＦＫ （配列番号２４）；
（25）ＲＳＲＫＹＴＳＷＹＶＡＬＫＲ （配列番号２５）；
（26）ＭＡＫＳＩＲＳＫＨＲＲＱＭＲＭＭＫＲＥ （配列番号２６）；
（27）ＭＡＲＲＲＲＨＲＧＰＲＲＰＲＰＰ （配列番号２７）；
（28）ＧＲＣＲＲＬＡＮＦＧＰＲＫＲＲＲＲＲＲ （配列番号２８）；
（29）ＲＲＲＫＲＮＲＤＡＲＲＲＲＲＫＱ （配列番号２９）；
（30）ＭＱＲＫＰＴＩＲＲＫＮＬＲＬＲＲＫ （配列番号３０）；
のうちの何れかの配列番号に示すＮｏＬＳを構成するアミノ酸配列（又はその改変配列）とから構成される。これら列挙したアミノ酸配列はいずれもＮｏＬＳとして知られており、その情報は例えばＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）が提供するタンパク質のアミノ酸配列データベースから得ることができる。
即ち、配列番号２３のアミノ酸配列は、細胞内情報伝達に関与するプロテインキナーゼの１種であるヒト内皮細胞に存在するＬＩＭキナーゼ２（LIM Kinase 2）の第４９１番目のアミノ酸残基から第５０３番目のアミノ酸残基までの１３個のアミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２４のアミノ酸配列は、コロナウイルス属に属するＩＢＶ（トリ伝染性気管支炎ウイルス：avian infectious bronchitis virus）のＮタンパク質（nucleocapsid protein）に含まれる８個のアミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２５のアミノ酸配列は、ＦＧＦ２（塩基性線維芽細胞増殖因子）由来の合計１４アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２６のアミノ酸配列は、核小体タンパク質の一種（ＡｐＬＬＰ）由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２７のアミノ酸配列は、ＨＳＶ−１（単純ヘルペスウイルス タイプ１）のタンパク質（γ（１）３４．５）由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２８のアミノ酸配列は、ＨＩＣ（human I-mfa domain-containing protein）のｐ４０タンパク質由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２９のアミノ酸配列は、ＭＤＶ（Ｍａｒｅｋ病ウイルス）のＭＥＱタンパク質由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号３０のアミノ酸配列は、アポトーシスを抑制するタンパク質であるSurvivin- deltaEx3由来の合計１７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
これら配列番号に示されるＮｏＬＳを上記配列番号１〜配列番号２２のうちの何れかの配列番号に示すアミノ酸配列（又はその改変配列）のＮ末端側若しくはＣ末端側に配置することにより、好適な抗腫瘍ペプチド（合成ペプチド）を構築することができる。
（23）ＫＫＲＴＬＲＫＮＤＲＫＫＲ （配列番号２３）；
（24）ＷＲＲＱＡＲＦＫ （配列番号２４）；
（25）ＲＳＲＫＹＴＳＷＹＶＡＬＫＲ （配列番号２５）；
（26）ＭＡＫＳＩＲＳＫＨＲＲＱＭＲＭＭＫＲＥ （配列番号２６）；
（27）ＭＡＲＲＲＲＨＲＧＰＲＲＰＲＰＰ （配列番号２７）；
（28）ＧＲＣＲＲＬＡＮＦＧＰＲＫＲＲＲＲＲＲ （配列番号２８）；
（29）ＲＲＲＫＲＮＲＤＡＲＲＲＲＲＫＱ （配列番号２９）；
（30）ＭＱＲＫＰＴＩＲＲＫＮＬＲＬＲＲＫ （配列番号３０）；
のうちの何れかの配列番号に示すＮｏＬＳを構成するアミノ酸配列（又はその改変配列）とから構成される。これら列挙したアミノ酸配列はいずれもＮｏＬＳとして知られており、その情報は例えばＮＣＢＩ（National Center for Biotechnology Information）が提供するタンパク質のアミノ酸配列データベースから得ることができる。
即ち、配列番号２３のアミノ酸配列は、細胞内情報伝達に関与するプロテインキナーゼの１種であるヒト内皮細胞に存在するＬＩＭキナーゼ２（LIM Kinase 2）の第４９１番目のアミノ酸残基から第５０３番目のアミノ酸残基までの１３個のアミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２４のアミノ酸配列は、コロナウイルス属に属するＩＢＶ（トリ伝染性気管支炎ウイルス：avian infectious bronchitis virus）のＮタンパク質（nucleocapsid protein）に含まれる８個のアミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２５のアミノ酸配列は、ＦＧＦ２（塩基性線維芽細胞増殖因子）由来の合計１４アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２６のアミノ酸配列は、核小体タンパク質の一種（ＡｐＬＬＰ）由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２７のアミノ酸配列は、ＨＳＶ−１（単純ヘルペスウイルス タイプ１）のタンパク質（γ（１）３４．５）由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２８のアミノ酸配列は、ＨＩＣ（human I-mfa domain-containing protein）のｐ４０タンパク質由来の合計１９アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号２９のアミノ酸配列は、ＭＤＶ（Ｍａｒｅｋ病ウイルス）のＭＥＱタンパク質由来の合計１６アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
配列番号３０のアミノ酸配列は、アポトーシスを抑制するタンパク質であるSurvivin- deltaEx3由来の合計１７アミノ酸残基から成るＮｏＬＳに対応する。
これら配列番号に示されるＮｏＬＳを上記配列番号１〜配列番号２２のうちの何れかの配列番号に示すアミノ酸配列（又はその改変配列）のＮ末端側若しくはＣ末端側に配置することにより、好適な抗腫瘍ペプチド（合成ペプチド）を構築することができる。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、少なくとも一つのアミノ酸残基がアミド化されているものが好ましい。アミノ酸残基（典型的にはペプチド鎖のＣ末端アミノ酸残基）のカルボキシル基のアミド化により、合成ペプチドの構造安定性（例えばプロテアーゼ耐性）を向上させることができる。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドはアミノ酸残基数が比較的少ない（典型的には３０以下）鎖長の短いペプチドである。このため、化学合成が容易であり、容易に抗腫瘍ペプチドを提供することができる。なお、ペプチドのコンホメーション（立体構造）については、使用する環境下（生体外若しくは生体内）で抗腫瘍活性（即ち上記多極化を誘導して細胞分裂ひいては細胞増殖を阻害又は抑制する活性）を発揮する限りにおいて、特に限定されるものではないが、免疫原（抗原）になり難いという観点から直鎖状又はへリックス状のものが好ましい。このような形状のペプチドはエピトープを構成し難い。かかる観点から、ここで開示される少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物（抗腫瘍剤）を作製するのに用いられるペプチドとして好ましい。
なお、ここで開示される抗腫瘍ペプチドとしては、全てのアミノ酸残基がＬ型アミノ酸であるものが好ましいが、上記多極化を誘導する能力を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部又は全部がＤ型アミノ酸に置換されているものであってもよい。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドはアミノ酸残基数が比較的少ない（典型的には３０以下）鎖長の短いペプチドである。このため、化学合成が容易であり、容易に抗腫瘍ペプチドを提供することができる。なお、ペプチドのコンホメーション（立体構造）については、使用する環境下（生体外若しくは生体内）で抗腫瘍活性（即ち上記多極化を誘導して細胞分裂ひいては細胞増殖を阻害又は抑制する活性）を発揮する限りにおいて、特に限定されるものではないが、免疫原（抗原）になり難いという観点から直鎖状又はへリックス状のものが好ましい。このような形状のペプチドはエピトープを構成し難い。かかる観点から、ここで開示される少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物（抗腫瘍剤）を作製するのに用いられるペプチドとして好ましい。
なお、ここで開示される抗腫瘍ペプチドとしては、全てのアミノ酸残基がＬ型アミノ酸であるものが好ましいが、上記多極化を誘導する能力を失わない限りにおいて、アミノ酸残基の一部又は全部がＤ型アミノ酸に置換されているものであってもよい。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、一般的な化学合成法に準じて容易に製造することができる。例えば、従来公知の固相合成法又は液相合成法のいずれを採用してもよい。アミノ基の保護基としてＢｏｃ（t-butyloxycarbonyl）或いはＦｍｏｃ（9-fluorenylmethoxycarbonyl）を適用した固相合成法が好適である。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、市販のペプチド合成機（例えば、PerSeptive Biosystems社、Applied Biosystems社等から入手可能である。）を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、市販のペプチド合成機（例えば、PerSeptive Biosystems社、Applied Biosystems社等から入手可能である。）を用いた固相合成法により、所望するアミノ酸配列、修飾（Ｃ末端アミド化等）部分を有するペプチド鎖を合成することができる。
或いは、遺伝子工学的手法に基づいて抗腫瘍ペプチドを生合成してもよい。すなわち、所望する抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列（ＡＴＧ開始コドンを含む。）のポリヌクレオチド（典型的にはＤＮＡ）を合成する。そして、合成したポリヌクレオチド（ＤＮＡ）と該アミノ酸配列を宿主細胞内で発現させるための種々の調節エレメント（プロモーター、リボゾーム結合部位、ターミネーター、エンハンサー、発現レベルを制御する種々のシスエレメントを包含する。）とから成る発現用遺伝子構築物を有する組換えベクターを、宿主細胞に応じて構築する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の抗腫瘍ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
一般的な技法によって、この組換えベクターを所定の宿主細胞（例えばイースト、昆虫細胞、植物細胞）に導入し、所定の条件で当該宿主細胞又は該細胞を含む組織や個体を培養する。このことにより、目的とするペプチドを細胞内で発現、生産させることができる。そして、宿主細胞（分泌された場合は培地中）からペプチドを単離し、必要に応じてリフォールディング、精製等を行うことによって、目的の抗腫瘍ペプチドを得ることができる。
なお、組換えベクターの構築方法及び構築した組換えベクターの宿主細胞への導入方法等は、当該分野で従来から行われている方法をそのまま採用すればよく、かかる方法自体は特に本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
例えば、宿主細胞内で効率よく大量に生産させるために融合タンパク質発現システムを利用することができる。すなわち、目的の抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子（ＤＮＡ）を化学合成し、該合成遺伝子を適当な融合タンパク質発現用ベクター（例えばノバジェン社から提供されているｐＥＴシリーズ及びアマシャムバイオサイエンス社から提供されているｐＧＥＸシリーズのようなＧＳＴ(Glutathione S-transferase)融合タンパク質発現用ベクター）の好適なサイトに導入する。そして該ベクターにより宿主細胞（典型的には大腸菌）を形質転換する。得られた形質転換体を培養して目的の融合タンパク質を調製する。次いで、該タンパク質を抽出及び精製する。次いで、得られた精製融合タンパク質を所定の酵素（プロテアーゼ）で切断し、遊離した目的のペプチド断片（設計した抗腫瘍ペプチド）をアフィニティクロマトグラフィー等の方法によって回収する。また、必要に応じて適当な方法によってリフォールディングする。このような従来公知の融合タンパク質発現システム（例えばアマシャムバイオサイエンス社により提供されるＧＳＴ／Ｈｉｓシステムを利用し得る。）を用いることによって、ここで開示される抗腫瘍ペプチドを製造することができる。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の東洋紡績（株）から入手可能なPROTEIOS（商標）Wheat germ cell-free protein synthesis kit）が市販されている。
或いは、無細胞タンパク質合成システム用の鋳型ＤＮＡ（即ち抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む合成遺伝子断片）を構築し、ペプチド合成に必要な種々の化合物（ＡＴＰ、ＲＮＡポリメラーゼ、アミノ酸類等）を使用し、いわゆる無細胞タンパク質合成システムを採用して目的のポリペプチドをインビトロ合成することができる。無細胞タンパク質合成システムについては、例えばShimizuらの論文(Shimizu et al., Nature Biotechnology, 19, 751-755(2001))、Madinらの論文(Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(2), 559-564(2000))が参考になる。これら論文に記載された技術に基づいて、本願出願時点において既に多くの企業がポリペプチドの受託生産を行っており、また、無細胞タンパク質合成用キット（例えば、日本の東洋紡績（株）から入手可能なPROTEIOS（商標）Wheat germ cell-free protein synthesis kit）が市販されている。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドをコードするヌクレオチド配列及び／又は該配列と相補的なヌクレオチド配列を含む一本鎖又は二本鎖のポリヌクレオチドは、従来公知の方法によって容易に製造（合成）することができる。すなわち、設計したアミノ酸配列を構成する各アミノ酸残基に対応するコドンを選択することによって、抗腫瘍ペプチドのアミノ酸配列に対応するヌクレオチド配列が容易に決定され、提供される。そして、ひとたびヌクレオチド配列が決定されれば、ＤＮＡ合成機等を利用して、所望するヌクレオチド配列に対応するポリヌクレオチド（一本鎖）を容易に得ることができる。さらに得られた一本鎖ＤＮＡを鋳型として用い、種々の酵素的合成手段（典型的にはＰＣＲ）を採用して目的の二本鎖ＤＮＡを得ることができる。また、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡの形態であってもよく、ＲＮＡ（ｍＲＮＡ等）の形態であってもよい。ＤＮＡは、二本鎖又は一本鎖で提供され得る。一本鎖で提供される場合は、コード鎖（センス鎖）であってもよく、それと相補的な配列の非コード鎖（アンチセンス鎖）であってもよい。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、抗腫瘍ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
こうして得られるポリヌクレオチドは、上述のように、種々の宿主細胞中で又は無細胞タンパク質合成システムにて、抗腫瘍ペプチド生産のための組換え遺伝子（発現カセット）を構築するための材料として使用することができる。
ここで開示される抗腫瘍ペプチドは、少なくとも１種の腫瘍細胞に作用し、（典型的にはＭ期の）該腫瘍細胞中に多数の中心体（典型的には一つの細胞中に３個以上、好ましくは５個以上、特に好ましくは８個以上、さらに好ましくは１０個以上、例えば３〜２０個程度の中心体）を生じさせ、それに対応する数の多極紡錘体が形成されることを誘導することができる。かかる多極紡錘体の形成により、正常な細胞分裂は阻害され、結果として当該腫瘍細胞を増殖させることなく死に至らしめることができる。このため、腫瘍細胞の増殖を抑制（或いは阻害）する用途の組成物（即ち、抗腫瘍剤等の薬学的組成物）の有効成分として好適に使用し得る。なお、抗腫瘍ペプチドは、上記多極化の形成誘導活性を損なわない限りにおいて塩の形態であってもよい。例えば、常法に従って通常使用されている無機酸又は有機酸を付加反応させることにより得られ得る該ペプチドの酸付加塩を使用することができる。或いは、上記多極化の形成誘導活性を有する限り、他の塩（例えば金属塩）であってもよい。従って、本明細書及び特許請求の範囲に記載の「ペプチド」は、かかる塩形態のものを包含する。
ここで開示される抗腫瘍組成物は、有効成分である抗腫瘍ペプチドの上記多極化を誘導する能力が失われない状態で保持し得る限りにおいて、使用形態に応じて薬学（医薬）上許容され得る種々の担体を含み得る。例えば、希釈剤、賦形剤等としてペプチド医薬において一般的に使用される担体を適用し得る。
ここで開示される組成物（即ち抗腫瘍組成物）の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、典型的には、水、生理学的緩衝液、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。また、抗腫瘍組成物に含有させ得る副次的成分としては、種々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等が挙げられる。
抗腫瘍組成物（抗腫瘍剤）の典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、抗腫瘍ペプチド（主成分）及び種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の組成物（薬剤）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
ここで開示される組成物（即ち抗腫瘍組成物）の用途や形態に応じて適宜異なり得るが、典型的には、水、生理学的緩衝液、種々の有機溶媒が挙げられる。適当な濃度のアルコール（エタノール等）水溶液、グリセロール、オリーブ油のような不乾性油であり得る。或いはリポソームであってもよい。また、抗腫瘍組成物に含有させ得る副次的成分としては、種々の充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、表面活性剤、色素、香料等が挙げられる。
抗腫瘍組成物（抗腫瘍剤）の典型的な形態として、液剤、懸濁剤、乳剤、エアロゾル、泡沫剤、顆粒剤、粉末剤、錠剤、カプセル、軟膏、水性ジェル剤等が挙げられる。また、注射等に用いるため、使用直前に生理食塩水又は適当な緩衝液（例えばＰＢＳ）等に溶解して薬液を調製するための凍結乾燥物、造粒物とすることもできる。
なお、抗腫瘍ペプチド（主成分）及び種々の担体（副成分）を材料にして種々の形態の組成物（薬剤）を調製するプロセス自体は従来公知の方法に準じればよく、かかる製剤方法自体は本発明を特徴付けるものでもないため詳細な説明は省略する。処方に関する詳細な情報源として、例えばComprehensive Medicinal Chemistry, Corwin Hansch監修，Pergamon Press刊(1990)が挙げられる。この書籍の全内容は本明細書中に参照として援用されている。
ここで開示される抗腫瘍組成物（抗腫瘍ペプチド）の適用対象細胞は、腫瘍細胞であって多極化を誘導し得る腫瘍細胞（がん細胞）であれば特に制限されず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物に発生する種々のタイプの腫瘍細胞に対して適用可能である。例えば、扁平上皮癌を構成する細胞、腺癌を構成する細胞、或いは、神経芽細胞腫（神経芽腫）、網膜芽細胞腫、褐色細胞腫その他の細胞腫を構成する細胞が挙げられる。
ここで開示される抗腫瘍組成物は、従来のペプチド製剤と同様、その形態及び目的に応じた方法や用量で使用することができる。例えば、液剤として、静脈内、筋肉内、皮下、皮内若しくは腹腔内への注射によって患者(即ち生体)の患部（典型的には悪性腫瘍組織）に所望する量だけ投与することができる。或いは、錠剤等の固体形態のものや軟膏等のゲル状若しくは水性ジェリー状のものを、直接所定の組織（即ち腫瘍細胞を含む組織や器官等の患部）に投与することができる。或いは、錠剤等の固体形態のものは経口投与することができる。経口投与の場合は、消化管内での消化酵素分解を抑止すべくカプセル化や保護（コーティング）材の適用が好ましい。
或いは、生体外（インビトロ）において培養している腫瘍細胞（生体から摘出された細胞塊又は組織又は器官である場合を包含する。）に対し、ここで開示される抗腫瘍組成物の適当量（即ち抗腫瘍ペプチドの適当量）を、対象とする培養細胞（組織等）の培地に供給するとよい。
１回当たりの供給量及び供給回数は、培養する腫瘍細胞の種類、細胞密度（培養開始時の細胞密度）、継代数、培養条件、培地の種類、等の条件によって異なり得るため特に限定されないが、培地中の抗腫瘍ペプチド濃度が概ね２０μＭ〜２００μＭの範囲内、好ましくは５０μＭ〜１００μＭの範囲内となるように、１回〜複数回添加することが好ましい。
或いは、生体外（インビトロ）において培養している腫瘍細胞（生体から摘出された細胞塊又は組織又は器官である場合を包含する。）に対し、ここで開示される抗腫瘍組成物の適当量（即ち抗腫瘍ペプチドの適当量）を、対象とする培養細胞（組織等）の培地に供給するとよい。
１回当たりの供給量及び供給回数は、培養する腫瘍細胞の種類、細胞密度（培養開始時の細胞密度）、継代数、培養条件、培地の種類、等の条件によって異なり得るため特に限定されないが、培地中の抗腫瘍ペプチド濃度が概ね２０μＭ〜２００μＭの範囲内、好ましくは５０μＭ〜１００μＭの範囲内となるように、１回〜複数回添加することが好ましい。
以下、本発明に関するいくつかの実施例を説明するが、本発明をかかる実施例に示すものに限定することを意図したものではない。
＜実施例１：ペプチド合成＞
表１、２に示す各アミノ酸配列から成る計４４種類の合成ペプチドを、後述するペプチド合成機を用いて製造した。なお、以下の説明では、合成した計４４種類のペプチドをサンプル１〜４４と呼称する。
表１、２に示す各アミノ酸配列から成る計４４種類の合成ペプチドを、後述するペプチド合成機を用いて製造した。なお、以下の説明では、合成した計４４種類のペプチドをサンプル１〜４４と呼称する。
各サンプルは、表１、２（及び配列表）に示す何れかのアミノ酸配列を有するように構成されている。具体的には、サンプル１〜１２は、上記非特許文献１若しくは非特許文献２に記載のＦｔｓＡインヒビター（配列番号１〜１０）またはＦｔｓＺインヒビター（配列番号１１〜１２）として機能し得るペプチドであり、何れもＮ末端及びＣ末端のアミノ酸残基がシステインであることを特徴とする計９アミノ酸残基から成る合成ペプチドである。サンプル１３〜２２は、上記非特許文献１若しくは非特許文献２に記載のＦｔｓＡインヒビター（配列番号１３〜２１）またはＦｔｓＺインヒビター（配列番号２２）として機能し得るペプチドであり、何れも計１２アミノ酸残基から成る合成ペプチドである。
また、サンプル２３〜４４は、それぞれ、サンプル１〜２２の各ペプチドのアミノ酸配列のＣ末端側に、上記配列番号２３のＮｏＬＳを構成するアミノ酸配列を連結したことを特徴とする計２２アミノ酸残基（サンプル２３〜３４）または計２５アミノ酸残基（サンプル３５〜４４）から成る合成ペプチドである。
いずれのペプチドも、市販のペプチド合成機（Intavis AG社製品）を用いてマニュアルどおりに固相合成法（Ｆｍｏｃ法）を実施して合成した。なお、ペプチド合成機の使用態様自体は本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
合成した各サンプルは、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）に溶かし、ペプチド濃度が１ｍＭのストック液を調製した。
また、サンプル２３〜４４は、それぞれ、サンプル１〜２２の各ペプチドのアミノ酸配列のＣ末端側に、上記配列番号２３のＮｏＬＳを構成するアミノ酸配列を連結したことを特徴とする計２２アミノ酸残基（サンプル２３〜３４）または計２５アミノ酸残基（サンプル３５〜４４）から成る合成ペプチドである。
いずれのペプチドも、市販のペプチド合成機（Intavis AG社製品）を用いてマニュアルどおりに固相合成法（Ｆｍｏｃ法）を実施して合成した。なお、ペプチド合成機の使用態様自体は本発明を特徴付けるものではないため、詳細な説明は省略する。
合成した各サンプルは、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）に溶かし、ペプチド濃度が１ｍＭのストック液を調製した。
＜実施例２：各合成ペプチドの抗腫瘍活性（多極化誘導能）評価試験１＞
上記実施例１において得られたサンプルペプチドのうちの幾つかの抗腫瘍活性を、培養腫瘍細胞を対象にして調べた。評価試験の詳細は以下のとおりである。
供試腫瘍細胞として市販のマウス神経芽細胞腫の細胞株（Ｎ１Ｅ−１１５）を使用した。かかる細胞株を予めＤＭＥＭ培地（即ち、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ：Gibco社製品）、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０ユニット／ｍＬのペニシリン、及び５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むダルベッコのＭＥＭ培地（ＤＭＥＭ培地：Gibco社製品））で培養し、９６穴（ウェル）プレートの１ウェルあたりの細胞数が約５×１０３個となるように調整した。このときの培地量はウェルあたり１００μＬとした。
次いで、ウェル中のペプチド濃度が５０μＭ或いは１００μＭとなるように、表３に示す何れかのサンプルペプチドの上記ストック液を各ウェルに注入した。
上記実施例１において得られたサンプルペプチドのうちの幾つかの抗腫瘍活性を、培養腫瘍細胞を対象にして調べた。評価試験の詳細は以下のとおりである。
供試腫瘍細胞として市販のマウス神経芽細胞腫の細胞株（Ｎ１Ｅ−１１５）を使用した。かかる細胞株を予めＤＭＥＭ培地（即ち、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ：Gibco社製品）、２ｍＭのＬ−グルタミン、５０ユニット／ｍＬのペニシリン、及び５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを含むダルベッコのＭＥＭ培地（ＤＭＥＭ培地：Gibco社製品））で培養し、９６穴（ウェル）プレートの１ウェルあたりの細胞数が約５×１０３個となるように調整した。このときの培地量はウェルあたり１００μＬとした。
次いで、ウェル中のペプチド濃度が５０μＭ或いは１００μＭとなるように、表３に示す何れかのサンプルペプチドの上記ストック液を各ウェルに注入した。
上記のようにしてサンプルペプチドを添加後、当該９６穴（ウェル）プレートを、ＣＯ２インキュベータ内に配置し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で静置培養した。そして、ペプチド添加時（処理開始時）、ペプチド添加培養開始から６時間或いは２４時間を経過して時点において、供試培養細胞の生存状態を市販の発色測定キットを使用して測定した。即ち、細胞培養ウェルに発色試薬として「水溶性テトラゾリウム塩（ＷＳＴ−８）」を添加し、添加から２時間インキュベート後、該発色試薬を添加した細胞培養液を回収するとともにテトラゾリウム塩の還元に基づき波長４５０ｎｍの吸光度（波長６２０ｎｍの吸光度で補正した値：Ａ４５０−Ａ６２０）を測定する比色法により、細胞増殖阻害の程度を評価した。そして、サンプルペプチド添加時（処理開始時）の吸光度を基準として６時間或いは２４時間経過時の吸光度の減少率を細胞増殖阻害率（％）とした。結果を表３に示す。
表３に示すように、本実施例において使用したサンプルペプチドは何れも供試腫瘍細胞（マウス神経芽細胞腫：Ｎ１Ｅ−１１５）の増殖を阻害した。特に、サンプル１のペプチドや、ＮｏＬＳが付加されたサンプル２３、２４、２６、３８、４２、４３のペプチドについて、高い抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）が認められた。一方、詳細な結果は示していないが、供試細胞として正常細胞であるヒト皮膚線維芽細胞（CCD1079sk）やヒト胎児皮膚細胞（WS-1）を使用して同様の試験を行った結果、細胞増殖阻害率は概ね５％未満（典型的には３％未満）であった。このことは、ここで開示されるペプチドが腫瘍細胞に対して特異的に多極化を誘導して当該腫瘍細胞（がん細胞）の増殖を阻止若しくは抑制し得ることを示している。
＜実施例３：各合成ペプチドの抗腫瘍活性（多極化誘導能）評価試験２＞
供試腫瘍細胞をＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ Ｓ３）に代え、上述した実施例２と同様の試験を行った。本実施例では、サンプル１〜７、９、１０、１３、１６、２１、３５のペプチドを使用した。サンプル１〜７、９、１０に係る細胞増殖阻害率（％）を表４に示す。
供試腫瘍細胞をＨｅＬａ細胞（ＨｅＬａ Ｓ３）に代え、上述した実施例２と同様の試験を行った。本実施例では、サンプル１〜７、９、１０、１３、１６、２１、３５のペプチドを使用した。サンプル１〜７、９、１０に係る細胞増殖阻害率（％）を表４に示す。
表４に示すように、本実施例において使用したサンプル１〜７、９、１０のペプチドは、何れも供試腫瘍細胞（ＨｅＬａ細胞）の増殖を阻害した。
また、あわせてペプチドを添加した培養細胞の蛍光顕微鏡観察を行った。ここでは、一例として、サンプル１、９、１３、１６、２１、３５に係る観察例を示す。具体的には、各ウェル中のペプチド濃度が５０μＭ（サンプル１、９）または１００μＭ（サンプル１３、１６、２１、３５）となるようにペプチドを添加して、２４時間経過後、培養細胞についてＤＡＰＩ（4',6-diamidino-2-phenylindole）による核染色を行い、蛍光顕微鏡で観察した。また、紡錘体のマーカーとしてα−チューブリンを採用し、当該チューブリンを識別する蛍光色素標識抗チューブリン抗体を用いた蛍光抗体法によって細胞中のチューブリンの存在（即ち紡錘体の存在）を調べた。図１〜６は、ＤＡＰＩによる染色画像と、蛍光色素標識抗チューブリン抗体を使用した免疫抗体法で調べた結果を示す蛍光画像とを重ねた（マージした）画像である。
各画像が示すように、サンプル１（図１）、サンプル９（図２）、サンプル１３（図３）、サンプル１６（図４）、サンプル２１（図５）、サンプル３５（図６）の何れかのペプチドを添加して培養した培養液中では、図示されるように、多極紡錘体の形成、即ち多極化した細胞（ここではＨｅＬａ細胞）が数多く認められた。
また、あわせてペプチドを添加した培養細胞の蛍光顕微鏡観察を行った。ここでは、一例として、サンプル１、９、１３、１６、２１、３５に係る観察例を示す。具体的には、各ウェル中のペプチド濃度が５０μＭ（サンプル１、９）または１００μＭ（サンプル１３、１６、２１、３５）となるようにペプチドを添加して、２４時間経過後、培養細胞についてＤＡＰＩ（4',6-diamidino-2-phenylindole）による核染色を行い、蛍光顕微鏡で観察した。また、紡錘体のマーカーとしてα−チューブリンを採用し、当該チューブリンを識別する蛍光色素標識抗チューブリン抗体を用いた蛍光抗体法によって細胞中のチューブリンの存在（即ち紡錘体の存在）を調べた。図１〜６は、ＤＡＰＩによる染色画像と、蛍光色素標識抗チューブリン抗体を使用した免疫抗体法で調べた結果を示す蛍光画像とを重ねた（マージした）画像である。
各画像が示すように、サンプル１（図１）、サンプル９（図２）、サンプル１３（図３）、サンプル１６（図４）、サンプル２１（図５）、サンプル３５（図６）の何れかのペプチドを添加して培養した培養液中では、図示されるように、多極紡錘体の形成、即ち多極化した細胞（ここではＨｅＬａ細胞）が数多く認められた。
＜実施例４：各合成ペプチドの抗腫瘍活性（多極化誘導能）評価試験３＞
供試腫瘍細胞をヒトの扁平上皮癌を構成する細胞（ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞：Ａ５４９細胞）に代え、上述した実施例２と同様の試験を行った。本実施例では、サンプル１〜１３、１５〜２２、２４、２９、３５、４０のペプチドを使用した。結果を表５に示す。
供試腫瘍細胞をヒトの扁平上皮癌を構成する細胞（ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞：Ａ５４９細胞）に代え、上述した実施例２と同様の試験を行った。本実施例では、サンプル１〜１３、１５〜２２、２４、２９、３５、４０のペプチドを使用した。結果を表５に示す。
表５に示すように、本実施例において使用したサンプルペプチドは何れも供試腫瘍細胞（ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞：Ａ５４９細胞）の増殖を阻害した。なかでも、サンプル１、３、６、１１、２１のペプチドや、ＮｏＬＳが付加されたサンプル２４、２９、３５、４０のペプチドについて高い抗腫瘍活性（腫瘍細胞増殖阻害活性）が認められた。このことは、ここで開示されるペプチドが、ヒトに発生し得る腫瘍細胞の多極化を誘導し、当該腫瘍細胞（がん細胞）の増殖を阻止若しくは抑制し得ることを示している。
上述のように、ここで開示される抗腫瘍ペプチドによると、腫瘍細胞の多極化を高頻度に誘導し、当該腫瘍細胞の増殖を阻害又は抑制することができる。このため、本発明によって提供される抗腫瘍ペプチドを使用することによって、腫瘍細胞の増殖を阻害若しくは抑制する抗腫瘍組成物（抗腫瘍剤）を提供することができる。
配列番号１〜２２，３１〜５２ 合成ペプチド
Claims (5)
- 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物であって、
該少なくとも一種の腫瘍細胞中に多極紡錘体の発生を誘導し得る抗腫瘍ペプチドと、
薬学上許容され得る少なくとも一種の担体と、
を備えており、
前記抗腫瘍ペプチドとして、ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列から成る合成ペプチドを含有する、腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物。 - 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物であって、
該少なくとも一種の腫瘍細胞中に多極紡錘体の発生を誘導し得る抗腫瘍ペプチドと、
薬学上許容され得る少なくとも一種の担体と、
を備えており、
前記抗腫瘍ペプチドとして、ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（13）ＳＶＳＶＧＭＫＰＳＰＲＰ （配列番号１３）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列と、
核小体局在シグナル（ＮｏＬＳ）を構成するアミノ酸配列であって配列番号２３〜配列番号３０のうちから選択される何れかの配列番号のアミノ酸配列と、
から成る合成ペプチドを含有する、腫瘍細胞の増殖を抑制するための組成物。 - 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制する人工的に合成されたペプチドであって、
ＦｔｓＺインヒビターまたはＦｔｓＡインヒビターとして機能する以下のアミノ酸配列：
（１）ＣＳＳＡＴＧＫＳＣ （配列番号１）；
（２）ＣＬＡＰＳＰＳＫＣ （配列番号２）；
（３）ＣＬＧＱＴＫＭＲＣ （配列番号３）；
（４）ＣＧＨＲＰＹＱＹＣ （配列番号４）；
（５）ＣＷＡＦＰＬＨＨＣ （配列番号５）；
（６）ＣＴＬＮＳＨＳＮＣ （配列番号６）；
（７）ＣＥＩＳＡＫＲＴＣ （配列番号７）；
（８）ＣＨＩＬＨＡＱＡＣ （配列番号８）；
（９）ＣＰＲＰＰＳＬＥＣ （配列番号９）；
（10）ＣＴＧＨＷＡＳＥＣ （配列番号１０）；
（11）ＣＳＹＥＫＲＰＭＣ （配列番号１１）；
（12）ＣＬＴＫＳＹＴＳＣ （配列番号１２）；
（13）ＳＶＳＶＧＭＫＰＳＰＲＰ （配列番号１３）；
（14）ＦＴＴＳＮＨＴＳＲＨＧＳ （配列番号１４）；
（15）ＴＰＳＬＰＰＴＭＦＲＬＴ （配列番号１５）；
（16）ＧＰＨＨＹＷＹＨＬＲＬＰ （配列番号１６）；
（17）ＱＳＰＶＮＨＨＹＨＹＨＩ （配列番号１７）；
（18）ＮＭＴＴＹＰＭＨＮＮＴＶ （配列番号１８）；
（19）ＳＬＬＰＨＳＮＨＡＫＨＹ （配列番号１９）；
（20）ＥＦＥＹＦＨＰＡＴＦＲＬ （配列番号２０）；
（21）ＧＰＨＬＧＭＮＱＲＲＲＰ （配列番号２１）；
（22）ＧＡＶＴＹＳＲＩＳＧＱＹ （配列番号２２）；
のうちの何れかのアミノ酸配列と、
核小体局在シグナル（ＮｏＬＳ）を構成するアミノ酸配列であって配列番号２３〜配列番号３０のうちから選択される何れかの配列番号のアミノ酸配列と、
から成る、合成ペプチド。 - 少なくとも一種の腫瘍細胞の増殖を抑制する方法であって、
請求項１又は２に記載の組成物を、生体外において対象とする腫瘍細胞に対して少なくとも１回供給することを特徴とする、方法。 - 前記腫瘍細胞が、扁平上皮癌若しくは腺癌を構成する細胞である、請求項４に記載の方法。
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