CN112956372B

CN112956372B - 一种灵芝的培育方法

Info

Publication number: CN112956372B
Application number: CN202110265576.0A
Authority: CN
Inventors: 张梅娟; 钱朋智; 于梦尧; 王艳菊
Original assignee: Qiqihar University
Current assignee: Heilongjiang Kunjian Agricultural Co ltd
Priority date: 2021-03-11
Filing date: 2021-03-11
Publication date: 2022-04-26
Anticipated expiration: 2041-03-11
Also published as: CN112956372A

Abstract

一种灵芝的培育方法，涉及食药用菌培育技术领域。本发明的目的是要解决现有灵芝培育技术存在灵芝总培育周期长、生物学效率低和有效成分(多糖和灵芝三萜)含量低以及培育成本高的问题。方法：无菌条件下，将液体生产种子接种于固体培养基上；将接种后的固体培养基在20～23℃的温度条件下，避光培养28～32d；培养结束后，进行光照、温差和氧气刺激，持续14～16d后，进行补水，然后进行光照、温度刺激和通风，继续培养8～12d；培养结束后，进行光照和温度刺激，持续7～10d后，进行补水，再进行光照、温度刺激和通风，持续14～16d后，得到成熟的灵芝，进行采收。本发明可获得一种灵芝的培育方法。

Description

一种灵芝的培育方法

技术领域

本发明涉及食药用菌培育技术领域，具体涉及一种灵芝的培育方法。

背景技术

灵芝是著名的食药用真菌，素有“仙草”、“瑞草”、“还魂草”之称，是我国一味传统的名贵中药，自古至今在中医药界享有极高的美誉。现在不仅作为药物正式被国家药典收录，同时又是国家批准的新资源食品。

我国灵芝的药用已经有3000多年的历史，20世纪50年代中国科学院微生物研究所首次成功栽培灵芝，逐渐实现了灵芝规模化生产。近年来，灵芝的开发利用越来越受到人们的重视，消费量增长迅速。

在当下从业者众多，产品市场竞争激烈，培养基主料木材供应紧张、辅料氮源原料与养殖业争用豆粕和麸皮，在价格持续上涨同时袋栽、瓶栽等固体接种方式操作繁琐、接种劳动力价格居高以及生物学效率低、产品有效成分少的大环境下，从替代原料开发等方面入手，并尽最大努力采用轻简的培育方法，努力提高培养料生物转换效率，使培养料充分利用，子实体更加优质高产，这不仅是挖掘培养料本身价值，更是生产链中附加支出成本的节约，增产增质综合措施应用，才能有效提高栽培灵芝收益。

发明内容

本发明的目的是要解决现有灵芝培育技术存在灵芝总培育周期长、生物学效率低和有效成分(多糖和灵芝三萜)含量低以及培育成本高的问题，而提供一种灵芝的培育方法。

一种灵芝的培育方法，按以下步骤进行：

一、将菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液加入到去离子水中，充分搅拌后，灭菌，冷却至室温，得到灭菌后的液体培养基；无菌条件下，将灵芝母种接种于灭菌后的液体培养基中，接种量为3～5块/0.5cm³，并在18～22℃的温度条件和140～160r/min的转速条件下培养6～8d，得到液体生产种子；将菊芋粕、栎木木屑和麸皮加入到营养液中，灭菌，然后冷却至室温，得到固体培养基；

二、无菌条件下，将液体生产种子接种于固体培养基上，接种量为8～12％；将接种后的固体培养基在20～23℃的温度条件下，避光培养28～32d；培养结束后，进行光照、温差和氧气刺激，持续14～16d后，进行第一次补水，然后进行光照、温度刺激和通风，继续培养8～12d；培养结束后，进行第二次光照和温度刺激，持续7～10d后，进行第二次补水，再进行第三次光照、温度刺激和通风，持续14～16d后，得到成熟的灵芝，进行采收。

本发明的有益效果：

(1)本发明一种灵芝的培育方法，采用液体菌种接种，与固态菌种相比，液体菌种接种发菌快，无需额外打孔，大幅度减少人工接种成本，采用聚丙烯材质的长方体敞口栽培容器进行固体装料、菌丝培养、子实体培养等过程，最终获得高品质灵芝子实体，灵芝培育总周期比袋栽灵芝缩短了5-10d；灵芝干品生物学效率达10-12％，比袋栽灵芝干品子实体生物学效率高20％-25％；灵芝子实体多糖含量为1.5％-2％，比袋栽灵芝子实体多糖含量高15-20％；灵芝三萜含量在1.0-1.2％，比袋栽灵芝子实体灵芝三萜量高10-15％。

本发明在灵芝子实体培育过程中，不需要对培养环境的湿度进行人为干预，只需要分别在接种的第45d和第65d时对灵芝栽培容器内注入自来水即可，减少水电的成本，节能降耗。

(2)本发明一种灵芝的培育方法，以菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液为原料制备液体菌种，菊芋粕水解液作为液体菌种的碳源，5-氨基乙酰丙酸母液含有5-氨基乙酰丙酸成分，5-氨基乙酰丙酸是一种含氧和氮的碳氢化合物，它是一种非蛋白氨基酸，具有安全的活性物质，工业上可通过微生物发酵葡萄糖生产得到5-氨基乙酰丙酸。同时它具有调节生物生长发育的功能，被看作是一种新的生物生长调节物质。该液体菌种培养基、灵芝固态栽培培养基简单且来源广泛、投资少、能耗低以及技术简单，方法具有可行性，增加了菊芋和玉米淀粉的附加值等优势，对菊芋产业和玉米深加工产业等具有很好的经济效益和社会效益。

本发明可获得一种灵芝的培育方法。

附图说明

图1为液体生产种子；

图2为灵芝的原基萌发状态；

图3为1-2cm的小子实体；

图4为即将进入成熟阶段的灵芝；

图5为成熟的灵芝；

图6为采收的灵芝鲜品。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式一种灵芝的培育方法，按以下步骤进行：

本实施方式的有益效果：

(1)本实施方式一种灵芝的培育方法，采用液体菌种接种，与固态菌种相比，液体菌种接种发菌快，无需额外打孔，大幅度减少人工接种成本，采用聚丙烯材质的长方体敞口栽培容器进行固体装料、菌丝培养、子实体培养等过程，最终获得高品质灵芝子实体，灵芝培育总周期比袋栽灵芝缩短了5-10d；灵芝干品生物学效率达10-12％，比袋栽灵芝干品子实体生物学效率高20％-25％；灵芝子实体多糖含量为1.5％-2％，比袋栽灵芝子实体多糖含量高15-20％；灵芝三萜含量在1.0-1.2％，比袋栽灵芝子实体灵芝三萜量高10-15％。

本实施方式在灵芝子实体培育过程中，不需要对培养环境的湿度进行人为干预，只需要分别在接种的第45d和第65d时对灵芝栽培容器内注入自来水即可，减少水电的成本，节能降耗。

(2)本实施方式一种灵芝的培育方法，以菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液为原料制备液体菌种，菊芋粕水解液作为液体菌种的碳源，5-氨基乙酰丙酸母液含有5-氨基乙酰丙酸成分，5-氨基乙酰丙酸是一种含氧和氮的碳氢化合物，它是一种非蛋白氨基酸，具有安全的活性物质，工业上可通过微生物发酵葡萄糖生产得到5-氨基乙酰丙酸。同时它具有调节生物生长发育的功能，被看作是一种新的生物生长调节物质。该液体菌种培养基、灵芝固态栽培培养基简单且来源广泛、投资少、能耗低以及技术简单，方法具有可行性，增加了菊芋和玉米淀粉的附加值等优势，对菊芋产业和玉米深加工产业等具有很好的经济效益和社会效益。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同点是：步骤一中将菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液加入到去离子水中，充分搅拌后，在121℃下灭菌30min，冷却至室温，冷却至室温，得到灭菌后的液体培养基，所述菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液与去离子水的体积比为10mL：1mL：1L。

其他步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同点是：所述菊芋粕水解液按以下步骤制备：将菊芋粕加入到浓度为1.5％的硫酸溶液中，固液比为1：10，然后在121℃的温度条件下反应2.5h，固液分离后，得到初始水解液；将初始水解液经碳酸钙乳液中和至pH为3.0，再经0.5％活性炭脱色15min后，得到菊芋粕水解液，菊芋粕水解液中可溶性固形物的质量分数为10.0％，总还原糖的质量分数为8.5％；总还原糖由85％果糖、10％葡萄糖和5％木糖组成。

其他步骤与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤一中菊芋粕、栎木木屑和麸皮的质量比为2：7：1。

其他步骤与具体实施方式一至三相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤一中所述的营养液按以下步骤制备：将1.5g菊芋粕水解液和0.5g 5-氨基乙酰丙酸母液加入到100mL蒸馏水中，混合均匀，得到营养液。

其他步骤与具体实施方式一至四相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤一中将菊芋粕、栎木木屑和麸皮加入到营养液中，在121℃下灭菌1.5h，然后冷却至室温，得到固体培养基，所述固体培养基的含水量为50％。

其他步骤与具体实施方式一至五相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是：步骤二中所述的光照、温差和氧气刺激：光照刺激为每天不少于10小时的光照，光照强度为150Lx～250Lx；温差刺激为：昼夜温差10℃，白天22℃，晚上12℃；氧气刺激为每天上、下午各通风30min。

其他步骤与具体实施方式一至六相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同点是：步骤二中所述的光照、温度刺激和通风：光照刺激为每天不少于10小时的光照；温度刺激为温度22℃；通风为每天通风两次，上、下午各一次，每次30min。

其他步骤与具体实施方式一至七相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同点是：步骤二中所述的第二次光照和温度刺激：第二次光照刺激为每天不少于10小时的光照；第二次温度刺激为温度22℃。

其他步骤与具体实施方式一至八相同。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同点是：步骤二中所述的第三次光照、温度刺激和通风：第三次光照刺激为每天不少于10小时的光照；第三次温度刺激为温度20℃；通风为每天通风2次，上、下午各一次，每次30min。

其他步骤与具体实施方式一至九相同。

采用以下实施例验证本发明的有益效果：

实施例1：一种灵芝的培育方法，按以下步骤进行：

一、液体种子制备：

1.液体培养基：

菊芋粕水解液10mL，5-氨基乙酰丙酸母液1mL，去离子水1L。

菊芋粕水解液制备过程及成分组成：

将菊芋粕加入到浓度为1.5％的硫酸溶液中，固液比为1：10，然后在121℃的温度条件下反应2.5h，固液分离后，得到初始水解液；将初始水解液经碳酸钙乳液中和至pH为3.0，再经0.5％活性炭脱色15min后，得到菊芋粕水解液，菊芋粕水解液中可溶性固形物的质量分数为10.0％，总还原糖的质量分数为8.5％；总还原糖由85％果糖、10％葡萄糖和5％木糖组成。

2.培养基灭菌：

按液体菌种培养基的配方精确称取各物质，充分搅拌后分装于培养瓶中，装液量为500mL，瓶口用聚丙烯塑料薄膜封好，在121℃下灭菌30min，冷却至常温，备用。

3.种子培养：

无菌条件下，用接种铲取灵芝斜面母种0.5cm³菌种块4块，接入灭完菌的液体培养基的培养瓶中，于恒温摇床中在20℃的温度条件和150r/min的转速条件下培养7d，得到澄清透明、菌丝均匀一致的液体生产种子，备用。如图1所示，灵芝液体菌种的宏观特征为：菌丝絮状或小球状，均匀一致，挂瓶壁的菌丝短绒毛状，淡黄色，培养瓶菌圈较厚较白；菌液澄清透明，菌球在菌液中分散均匀、无上浮、无沉淀；有灵芝独有的菌香味、无其他异味。

二、固态培养基：

将菊芋粕、栎木木屑和麸皮(三者干基质量比为2：7：1，)混合，加营养液拌料均匀，使培养基的含水量达到50％。每栽培容器(材质为聚丙烯，形状为敞口长方体，侧面带通气口，尺寸为长28cm×宽18cm×高9cm)，装湿料培养基1500g，装完培养料后，栽培容器套上聚丙烯薄膜，并在通气口出塞上无菌棉塞，在121℃下灭菌1.5h，放入无菌室，冷却至常温，备用。

营养液按以下步骤制备：将1.5g菊芋粕水解液和0.5g 5-氨基乙酰丙酸母液加入到100mL蒸馏水中，混合均匀，得到营养液。

三、接种：

无菌条件下，用自动可调节接种枪进行接种，接种量为10％(即液体种子的质量占培养料干基质量的百分比)，接种完毕，送入栽培室，等待避光培养。

四、菌丝培养管理：

时间节点：从接种开始计算至接种后的第30d。

具体操作：将接种完毕的培养料放在培养架上，避光培养30d(栽培架子用遮光布进行遮盖)。栽培室内的温度控制在22℃(利用空调)。第30d时，栽培容器内的灵芝白色菌丝完全吃透培养料，准备见光培养管理。

五、子实体培养管理：

1.原基萌发阶段：

时间节点：从接种后的第30d开始，至接种后的第45d出现原基，共需要15d的时间。

具体操作要点：从接种后的第30d开始，用一次性注射器针头将栽培容器的聚丙烯薄膜刺孔60个，进行光照(每天不少于10小时的光照，光照强度为150Lx～250Lx)、温差(昼夜温差10℃，白天22℃，晚上12℃)和氧气刺激(每天上、下午各通风30min)；大约经过15d的时间，原基萌发，如图2所示。

2.小子实体阶段：

小子实体阶段周期：从原基萌发起，即接种的第45d起，至灵芝菌柄高2-4cm，灵芝菌盖外圈生长线直径为1cm左右(即接种后的第55d)，这一时期为灵芝的小子实体阶段，共需要10d的时间。具体操作过程：在接种的第45d时将栽培容器的聚丙烯薄膜去掉，往栽培容器内注入自来水，水位刚好淹没培养基表面即可；然后进行光照(每天不少于10小时的光照)、温度(温度22℃)刺激和通风(每天通风两次，上、下午各一次，每次30min)。经过10d的时间，灵芝子实体菌柄生长至3-4cm高，菌盖外圈白色生长线扩展至直径为1-2cm左右，如图3所示。

3.子实体稳定成长阶段：

子实体成长阶段周期：灵芝小子实体继续培养10天，即接种后第55d起，至接种后的第65d，共需要10d的时间。

具体操作过程：进行第二次光照(每天不少于10小时的光照)和温度刺激(温度22℃)。经过7-10天，灵芝菌盖直径继续扩展，菌盖边缘生长线略小，灵芝菌柄呈黄色或橙黄色。菌柄高6～8cm，菌柄粗1-2cm，菌盖直径为5～7cm，从此子实体即进人成熟阶段，如图4所示。

4.子实体成熟阶段：

子实体成熟阶段周期：子实体继续培养10天，即接种后的第65d起，至接种后的第75d。

具体操作过程：在接种后的第65d时往栽培容器内注入自来水，水位刚好淹没培养基表面即可；再进行第三次光照(每天不少于10小时的光照)、温度(温度20℃)刺激和通风(每天通风2次，上、下午各一次，每次30min)。经过15d的时间，子实体柄一般不再增粗伸长，灵芝菌盖外圈白色生长线消失，菌盖直径8-10cm，有孢子粉即将散发，至此，子实体完全成熟，全株呈黄色或橙黄色，即可采收，如图5-6所示。

本实施例采用液体菌种接种，与固态菌种相比，液体菌种接种发菌快，无需额外打孔，大幅度减少人工接种成本，采用聚丙烯材质的长方体敞口栽培容器进行固体装料、菌丝培养、子实体培养等过程，最终获得高品质灵芝子实体，灵芝培育总周期比袋栽灵芝缩短了5-10d；灵芝干品生物学效率达10-12％，比袋栽灵芝干品子实体生物学效率高20％-25％；灵芝子实体多糖含量为1.5％-2％(采用NY/T 1676-2008食用菌中粗多糖含量的测定)，比袋栽灵芝子实体多糖含量高15-20％；灵芝三萜含量在1.0-1.2％(采用NY/SJ 339-2001灵芝三萜含量的测定)，比袋栽灵芝子实体灵芝三萜量高10-15％。

Claims

1.一种灵芝的培育方法，其特征在于该培育方法按以下步骤进行：

一、将菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液加入到去离子水中，充分搅拌后，在121℃下灭菌30min，冷却至室温，得到灭菌后的液体培养基，所述菊芋粕水解液和5-氨基乙酰丙酸母液与去离子水的体积比为10mL：1mL：1L；无菌条件下，将灵芝母种接种于灭菌后的液体培养基中，接种量为3～5块/0.5cm³，并在18～22℃的温度条件和140～160r/min的转速条件下培养6～8d，得到液体生产种子；将菊芋粕、栎木木屑和麸皮加入到营养液中，灭菌，然后冷却至室温，得到固体培养基；

所述菊芋粕水解液按以下步骤制备：将菊芋粕加入到浓度为1.5％的硫酸溶液中，固液比为1：10，然后在121℃的温度条件下反应2.5h，固液分离后，得到初始水解液；将初始水解液经碳酸钙乳液中和至pH为3.0，再经0.5％活性炭脱色15min后，得到菊芋粕水解液，菊芋粕水解液中可溶性固形物的质量分数为10.0％，总还原糖的质量分数为8.5％；总还原糖由85％果糖、10％葡萄糖和5％木糖组成；

所述的营养液按以下步骤制备：将1.5g菊芋粕水解液和0.5g 5-氨基乙酰丙酸母液加入到100mL蒸馏水中，混合均匀，得到营养液；

2.根据权利要求1所述的一种灵芝的培育方法，其特征在于步骤一中菊芋粕、栎木木屑和麸皮的质量比为2：7：1。

3.根据权利要求1所述的一种灵芝的培育方法，其特征在于步骤一中将菊芋粕、栎木木屑和麸皮加入到营养液中，在121℃下灭菌1.5h，然后冷却至室温，得到固体培养基，所述固体培养基的含水量为50％。

4.根据权利要求1所述的一种灵芝的培育方法，其特征在于步骤二中所述的光照、温差和氧气刺激：光照刺激为每天不少于10小时的光照，光照强度为150Lx～250Lx；温差刺激为：昼夜温差10℃，白天22℃，晚上12℃；氧气刺激为每天上、下午各通风30min。

5.根据权利要求1所述的一种灵芝的培育方法，其特征在于步骤二中所述的光照、温度刺激和通风：光照刺激为每天不少于10小时的光照；温度刺激为温度22℃；通风为每天通风两次，上、下午各一次，每次30min。

6.根据权利要求1所述的一种灵芝的培育方法，其特征在于步骤二中所述的第二次光照和温度刺激：第二次光照刺激为每天不少于10小时的光照；第二次温度刺激为温度22℃。

7.根据权利要求1所述的一种灵芝的培育方法，其特征在于步骤二中所述的第三次光照、温度刺激和通风：第三次光照刺激为每天不少于10小时的光照；第三次温度刺激为温度20℃；通风为每天通风2次，上、下午各一次，每次30min。