CN111657053B - 蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法 - Google Patents

Abstract

蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，涉及食药用菌培育技术领域。本发明的目的是要解决固体栽培蛹虫草耗粮多、成本高，液体菌种活性低，成熟蛹虫草子实体品质低的问题。方法：无菌条件下，将带有菌丝体球的液体种子接种于固体培养基上，在18℃～22℃的温度条件下，避光培养10d～15d；培养结束后，进行光照和温差刺激，持续5d～8d后，停止光照和温差刺激；在20℃～23℃的温度条件下，继续培养5d～7d，进行第一次补水、保持光照和通风，继续培养7d～9d；培养结束后，进行第二次补水，最后继续培养至蛹虫草子实体成熟，采摘并烘干。本发明可获得蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法。

Description

蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法

技术领域

本发明涉及食药用菌培育技术领域，具体涉及蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法。

背景技术

蛹虫草（Cordyceps militaris）又称北冬虫夏草、北虫草，是一种珍稀的食药用真菌，已经被医学界证实具有较高滋补和药用价值。我国蛹虫草种质资源丰富，在菌种选育、栽培管理及培养基质选择等方面的研究有一定的优势。自20世纪80年代我国科研工作者首次成功培养出蛹虫草子实体以来，其人工栽培技术发展快速。

目前研究热点是固体栽培基质，主要在于寻找可替代基质材料，以减少粮食资源的消耗，并获得更好的栽培效果。培育蛹虫草子实体的目的一方面在于直接用于产品的开发制备，另一方面是对蛹虫草培养过程中产生的代谢产物进行提取和利用。不管基于何种用途，培养含有特定营养元素和功能的蛹虫草产品，必将成为研究的热点。

1993年，李江（CN1094754A）为了获得富硒蛹虫草，采用富硒原料进行栽培；1996年（CN1156177A），孙婕为了获得富锶产物，又通过对蚕幼虫喂食富锶的桑叶获得富锶的虫体。为了提高蛹虫草的抗病性能，张显科（CN1138097A）选择在固体培养基中加入相应的抗菌药剂。田敬华（CN1546645A）、李宏（CN1861782A）、邹玉华（CN101050426A）、曹玉宽（CN102246657A）和徐州工程学院的陈宏伟（CN102172171A）等均通过在培养基中加入相应的原料以增加最终产品中的硒、锌和锗等营养元素含量；自2002年CHUNG W S（KR432472B）首次在培养基中加入草药植物以来，对如何选择中草药原料加入到蛹虫草培养基中以使其最终产物含有中药性能，提高虫草的药理性能，简化中医配伍用药，也将逐渐成为研究的热点。

在固体栽培方面，寻找可替代粮食作物的栽培原料，如工农业和生活废弃物等的研究较多。已报道可利用的固体废弃物有棉籽壳（CN102100152）、醋泥（JP2003116342）、酒糟（CN101946638）、咖啡废渣（JP2012060974A）、青稞（CN102301912A）、豆渣（CN103503689）、蚕蛾的下脚料（CN103238458）和餐厨垃圾（CN103348872）等。并发现以青稞、墨米、甘薯渣、发芽玉米和藕粉等谷物为原料，加入桑叶、乌饭叶、吸收了茶水的米、禽畜肉和海产品（海参和蛤蜊）等，均可用于栽培。如何进一步扩大可用于栽培的废弃物来源，获得更多的固体栽培基质也将成为研究的热点。目前，在培养基中加入中药组分获得功能性产物的技术渐趋成熟，已知宜加入的中草药原料有：多种草药植物（KR432472B）、黄芪（CN101940611）、五味子（CN102293122A）、五味子废渣（CN103098650）、多种中草药营养液（CN103621315）和淫羊藿（CN103688748）。扩大中药组分的选择，使中药中的有效成分被虫草最大限度地吸收；加入功能性原料，如特殊氨基酸、嘌呤等，促进虫草有效营养元素含量的增加，提升产品的品质，这些既是今后研究的热点，更是研究的难点。

其中，固体栽培蛹虫草的基质大多以粮食为主，如果大批量生产会造成粮食的大量消耗，造成成本的增加；液体菌种活性低，直接导致成熟蛹虫草子实体品质低（虫草素和硒等营养元素含量低），因此，得到的蛹虫草子实体产品不会具备很高的药用以及营养保健价值。

发明内容

本发明的目的是要解决固体栽培蛹虫草耗粮多、成本高，液体菌种活性低，成熟蛹虫草子实体品质低的问题，而提供蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法。

蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，按以下步骤完成：

一、高活性液体菌种培养基的制备、培养和固体培养基的制备：将富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液加入到蒸馏水中，充分搅拌后，灭菌，冷却至室温，得到高活性液体菌种培养基；无菌条件下，将蛹虫草母种接种于高活性液体菌种培养基中，并在21℃~25℃的温度条件和150r/min~200r/min的转速条件下培养4d~6d，得到带有菌丝体球的液体种子；将黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦加入到营养液中，灭菌，然后冷却至室温，得到固体培养基；

二、接种以及生长阶段的培养：无菌条件下，将带有菌丝体球的液体种子接种于固体培养基上，接种量为8%~12%；将接种后的固体培养基在18℃~22℃的温度条件下，避光培养10d~15d；培养结束后，进行光照和温差刺激，持续5d~8d后，停止光照和温差刺激；然后在20℃~23℃的温度条件下，继续培养5d~7d，然后进行第一次补水、保持光照和通风，继续培养7d~9d；培养结束后，进行第二次补水，最后继续培养至蛹虫草子实体成熟，采摘并烘干。

本发明的有益效果：

一、本发明蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，以富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液为原料制备液体培养基，富硒麦芽粉是液体培养基和蛹虫草子实体中硒的来源，苏氨酸母液作为虫草素的诱导物，使液体培养基自身具有高含量的虫草素和硒；将黑果腺肋花楸果渣和油莎豆粕用到固体培养基培育中，一方面可替代基质材料、减少粮食资源的消耗，另一方面，黑果腺肋花楸果渣是蛹虫草子实体中多酚诱导物，油莎豆粕含有大量的淀粉、糖类等营养物质，是蛹虫草子实体中虫草素诱导物；在液体培养基和固体培养基的共同作用下，使成熟的蛹虫草子实体中具有很高含量的虫草素、硒和多酚，具备更高的药用以及营养保健价值。

本发明培育出的蛹虫草子实体中的多糖含量、虫草素含量、麦角甾醇含量和硒含量均比野生的冬虫夏草含量高，蛹虫草子实体产品干基生物学效率达到10%以上。其中，蛹虫草子实体中硒含量为16.000μg/100g，是野生西藏那曲冬虫夏草硒含量的1.5倍以上，属于富硒蛹虫草；虫草素含量为9040mg/kg，是野生西藏那曲冬虫夏草虫草素含量的10倍以上，达到了一级水平；麦角甾醇含量是野生西藏那曲冬虫夏草麦角甾醇含量的3倍以上，还含有黑果腺肋花楸多酚（含量超过0.05%），是高品质、高产量产品。

二、本发明蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，培养基简单且来源广泛、投资少、能耗低、技术较简单，方法具有可行性，增加了黑果腺肋花楸、油莎豆的附加值，为仿野生规范化培育优质高产蛹虫草子实体（即富硒、高虫草素蛹虫草子实体）探索出了一条新途径；并且，在蛹虫草子实体生长到1厘米高度前，不需要对培养环境的湿度进行人为干预，减少水电的成本，节能降耗。

本发明可获得蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法。

附图说明

图1为液体培养基的宏观特征；

图2为液体培养基的微观特征；

图3为灭菌后的瓶栽固体培养基；

图4为栽培瓶避光培养；

图5为避光培养结束；

图6为培养料的俯视图；

图7为培养料的侧面图；

图8为培养料的底部图；

图9为瓶栽原基萌发状态；

图10为栽培瓶去盖覆膜、第一次补水；

图11为1cm的蛹虫草子实体图；

图12为栽培瓶内第二次补水；

图13为5厘米的蛹虫草子实体图；

图14为栽培瓶内即将采收的蛹虫草子实体侧面图；

图15为瓶内鲜草俯视图；

图16为已经采摘的成熟蛹虫草子实体图。

具体实施方式

具体实施方式一：本实施方式蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，按以下步骤完成：

一、高活性液体菌种培养基的制备、培养和固体培养基的制备：将富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液加入到蒸馏水中，充分搅拌后，灭菌，冷却至室温，得到高活性液体菌种培养基；无菌条件下，将蛹虫草母种接种于高活性液体菌种培养基中，并在21℃~25℃的温度条件和150r/min~200r/min的转速条件下培养4d~6d，得到带有菌丝体球的液体种子；将黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦加入到营养液中，灭菌，然后冷却至室温，得到固体培养基；

二、接种以及生长阶段的培养：无菌条件下，将带有菌丝体球的液体种子接种于固体培养基上，接种量为8%~12%；将接种后的固体培养基在18℃~22℃的温度条件下，避光培养10d~15d；培养结束后，进行光照和温差刺激，持续5d~8d后，停止光照和温差刺激；然后在20℃~23℃的温度条件下，继续培养5d~7d，然后进行第一次补水、保持光照和通风，继续培养7d~9d；培养结束后，进行第二次补水，最后继续培养至蛹虫草子实体成熟，采摘并烘干。

本实施方式的有益效果：

一、本实施方式蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，以富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液为原料制备高活性液体菌种培养基，富硒麦芽粉是高活性液体菌种培养基和蛹虫草子实体中硒的来源，苏氨酸母液作为虫草素的诱导物，使高活性液体菌种培养基自身具有高含量的虫草素和硒；将黑果腺肋花楸果渣和油莎豆粕用到固体培养基培育中，一方面可替代基质材料、减少粮食资源的消耗，另一方面，黑果腺肋花楸果渣是蛹虫草子实体中多酚诱导物，油莎豆粕含有大量的淀粉、糖类等营养物质，是蛹虫草子实体中虫草素诱导物；在高活性液体菌种培养基和固体培养基的共同作用下，使成熟的蛹虫草子实体中具有很高含量的虫草素、硒和多酚，具备更高的药用以及营养保健价值。

本实施方式培育出的蛹虫草子实体中的多糖含量、虫草素含量、麦角甾醇含量和硒含量均比野生的冬虫夏草含量高，蛹虫草子实体产品干基生物学效率达到10%以上。其中，蛹虫草子实体中硒含量为16.000μg/100g，是野生西藏那曲冬虫夏草硒含量的1.5倍以上，属于富硒蛹虫草；虫草素含量为9040mg/kg，是野生西藏那曲冬虫夏草虫草素含量的10倍以上，达到了一级水平；麦角甾醇含量是野生西藏那曲冬虫夏草麦角甾醇含量的3倍以上，还含有黑果腺肋花楸多酚（含量超过0.05%），是高品质、高产量产品。

二、本实施方式蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，培养基简单且来源广泛、投资少、能耗低、技术较简单，方法具有可行性，增加了黑果腺肋花楸、油莎豆的附加值，为仿野生规范化培育优质高产蛹虫草子实体（即富硒、高虫草素蛹虫草子实体）探索出了一条新途径；并且，在蛹虫草子实体生长到1厘米高度前，不需要对培养环境的湿度进行人为干预，减少水电的成本，节能降耗。

具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同点是：步骤一中所述将富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液加入到蒸馏水中，充分搅拌后，在120℃~123℃下灭菌10min~20min，冷却至室温，得到高活性液体菌种培养基，所述富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液的质量与蒸馏水的体积的比为（0.5g~1.5g）：（0.2g~0.5g）：（0.2g~0.5g）：（0.2g~0.5g）：100mL。

其他步骤与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同点是：步骤一中所述无菌条件下，将蛹虫草母种接种于高活性液体菌种培养基中，并在23℃的温度条件和180r/min的转速条件下培养5d，得到带有菌丝体球的液体种子。

其他步骤与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤一中所述的黑果腺肋花楸果渣粉按以下步骤制备：将黑果腺肋花楸果渣在45℃~55℃下烘至水分低于15%，粉碎，过40目筛，取筛下物，得到黑果腺肋花楸果渣粉；油莎豆粕粉按以下步骤制备：将油莎豆粕在45℃~50℃下烘至水分低于15%，粉碎，过40目筛，取筛下物，得到油莎豆粕粉。

其他步骤与具体实施方式一至三相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤一中所述的营养液按以下步骤制备：将葡萄糖母液和苏氨酸母液加入到蒸馏水中，混合均匀，得到营养液，所述葡萄糖母液的质量和苏氨酸母液的质量与蒸馏水的体积的比为（1.0g~2.0g）：（0.3g~0.6g）：100mL。

其他步骤与具体实施方式一至四相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是：步骤一中所述黑果腺肋花楸果渣粉和油莎豆粕粉与小麦的质量比为（0.5~1.5）：（1~3.5）：（5~8.5），黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦的总质量与营养液的体积的比为（0.5g~1.5g）：1.3mL。

其他步骤与具体实施方式一至五相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是：步骤一中所述将黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦加入到营养液中，在120℃~123℃下灭菌1h~2h，然后冷却至室温，无菌保存，得到固体培养基。

其他步骤与具体实施方式一至六相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同点是：步骤二中所述的接种量为10%。

其他步骤与具体实施方式一至七相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同点是：步骤二中所述的光照刺激为：每天不少于10h的光照，光照强度为150Lx~250Lx；温差刺激为：昼夜温差7℃~13℃，白天20℃~23℃，晚上10℃~13℃。

其他步骤与具体实施方式一至八相同。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同点是：步骤二中所述的烘干为：在45℃~55℃下烘至蛹虫草子实体的水分≤12%。

其他步骤与具体实施方式一至九相同。

采用以下实施例验证本发明的有益效果：

实施例一：蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，按以下步骤完成：

一、原料的预处理：

高活性液体菌种培养基按以下步骤制备：将1g富硒麦芽粉、0.3g柞蚕蛹粉、0.3g葡萄糖母液和0.2g苏氨酸母液加入到100mL蒸馏水中，pH=7.0，充分搅拌后分装在250mL盐水瓶中，瓶口用聚丙烯塑料薄膜封扎好，在121℃下灭菌15min，冷却至室温，得到高活性液体菌种培养基，富硒麦芽粉购买自西安凌丰生物科技有限公司。

黑果腺肋花楸果渣粉按以下步骤制备：将黑果腺肋花楸果渣在50℃下烘至水分低于15%，粉碎，过40目筛，取筛下物，得到黑果腺肋花楸果渣粉，黑果腺肋花楸果渣购买自辽宁朝阳瑞得生物科技工程有限公司；油莎豆粕粉按以下步骤制备：将油莎豆粕在50℃下烘至水分低于15%，粉碎，过40目筛，取筛下物，得到油莎豆粕粉，油莎豆粕购买自吉林省好易收油莎豆油脂有限公司；营养液按以下步骤制备：将1.5g葡萄糖母液和0.5g苏氨酸母液加入到100mL蒸馏水中，混合均匀，得到营养液，葡萄糖母液和苏氨酸母液均购买自齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司。

栽培容器的消毒：利用75%的酒精溶液将聚丙烯栽培瓶浸泡30min，然后用无菌水进行冲洗，去掉水分，备用；聚丙烯栽培瓶尺寸为上口径8cm，下口径10cm，高度18cm，容积1400mL，购买自湖北随缘食用菌消毒剂有限公司。

二、产品生长数据、功效成分指标检测：

（一）生物学效率

对采集的蛹虫草子实体在50℃烘干至水分≤12%。

蛹虫草子实体生物效率（%）=蛹虫草子实体干制品/培养料干基重量×100%

（二）功效成分数据统计

按照已知技术领域的常规方法对采集的蛹虫草子实体检测功效成分指标（多糖、甘露醇、虫草素、麦角甾醇、硒等）。

三、高活性液体菌种培养基的培养：无菌条件下，用接种铲取蛹虫草母种0.5cm²菌种块2~3块，接种于装有高活性液体菌种的无菌液体培养基盐水瓶中，将盐水瓶放置恒温摇床，在23℃的温度条件和180r/min的转速条件下培养5d，得到带有菌丝体球的液体种子；图1为高活性液体菌种培养基的宏观特征，图2为高活性液体菌种培养基的微观特征；表1为高活性液体菌种培养基的宏观特征和微观特征；

表1

表2为高活性液体菌种培养基的指标要求；

表2

固体培养基的制备：

将黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦(三者干基质量比为1：3：6，每瓶三者的总干基质量为150g)加入到营养液中，发酵混合料的固液比为1g:1.3mL，每瓶配完培养料后，扣上无棉体瓶盖，在121℃下灭菌1.5h，放入无菌室，然后冷却至室温，得到固体培养基，图3为灭菌后的瓶栽固体培养基。

四、接种：无菌条件下，用自动可调节接种枪将带有菌丝体球的液体种子接种于固体培养基上，接种量为10%（即液体种子的质量占培养料干基质量的百分比），接种完毕，送入栽培室，等待避光培养。

菌丝生长阶段：

周期：从接种开始计算至接种后的第14日；

具体操作：将接种完毕的栽培瓶放在培养架上，在20℃的温度条件（利用空调）下，避光培养（栽培架子用遮光布进行遮盖）14d，图4为栽培瓶避光培养，图5为避光培养结束；如图6~图8所示，第14天时，栽培瓶内的蛹虫草白色菌丝完全吃透培养料。

原基萌发阶段阶段：

时间节点：接种后的第21日出现原基；

具体操作要点：从接种后的第15日开始，进行光照刺激（每天不少于10h的光照，光照强度为150Lx~250Lx）和温差刺激（昼夜温差10℃，白天22℃，晚上12℃），大约持续7d后，原基萌发，图9为瓶栽原基萌发状态；

子实体1厘米阶段（栽培瓶开盖并覆膜，瓶内进行第一次补水）：

时间节点：接种后的第27日；

具体操作要点：从原基萌发后开始（即接种后第21日），栽培瓶不再需要温差刺激，在22℃的温度条件下，在栽培室继续培养6d，至接种后的第27日时，栽培瓶内的蛹虫草子实体已生长到1厘米高度，这时对栽培瓶进行开盖，并用聚丙烯薄膜封口，在聚丙烯薄膜上扎20个小孔。往栽培瓶里第一次补水，补水量为刚好淹没培养基菌饼即可。白天室内要有充足的散射光，傍晚可加补助光2-3h。每天通风2次，上下午各一次，每次1小时；图10为栽培瓶去盖覆膜、第一次补水，图11为1cm的蛹虫草子实体图；

子实体5厘米阶段（瓶内进行第二次补水）：

时间节点：接种后的第35日；

具体操作要点：至接种后的第35日时，栽培瓶内的蛹虫草子实体已生长到5厘米高度，这时往栽培瓶里第二次补水，补水量为刚好淹没培养基菌饼即可；图12为栽培瓶内第二次补水，图13为5厘米的蛹虫草子实体图；

采收阶段：

采收时间：接种后的第50日；

成熟的蛹虫草子实体感官状态：子实体生长到长度为8~10厘米，子实体顶端出现小突起时表明子实体生长已成熟，即可采收。将成熟的子实体鲜品在50℃的温度条件下烘至水分≤12%，测干品中的各有效成分含量；图14为栽培瓶内即将采收的蛹虫草子实体图，图15为瓶内鲜草图，图16为采摘的蛹虫草子实体图。

五、规范化培育的蛹虫草产品数据统计、检测：

表3为蛹虫草仿野生优质高产规范化培育指标；

表3

本实施例蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法培育出的蛹虫草子实体是高品质高产量产品。按照GB28050-2011《预包装食品营养标签通则》中“富含硒的要求≥0.15mg/kg”的要求，本实施例培育的蛹虫草子实体中硒的含量为16.000μg/100g，属于富硒蛹虫草。

按照GH/T 1240—2019《干制蛹虫草》中“蛹虫草中的虫草素≥10000mg/kg为特级蛹虫草；5000mg/kg≤虫草素＜10000mg/kg为一级蛹虫草；1000mg/kg≤虫草素＜5000mg/kg为二级蛹虫草”的要求，本实施例培育出的蛹虫草子实体产品中虫草素的含量为9040mg/kg，达到了一级水平。

本实施例培育出的蛹虫草子实体产品干基生物学效率达到10%以上。其蛹虫草子实体中的多糖含量、虫草素含量、麦角甾醇含量和硒含量均比野生的冬虫夏草含量高。子实体中虫草素含量是野生西藏那曲冬虫夏草虫草素含量的10倍以上，本实施例中测定的野生冬虫夏草对照品中含有少量的虫草素，可能是染了构巢曲霉菌（冬虫夏草中一般是不含有虫草素的，构巢曲霉菌中含有虫草素）；子实体中麦角甾醇含量是野生西藏那曲冬虫夏草麦角甾醇含量的3倍以上；子实体中硒含量是野生西藏那曲冬虫夏草硒含量的1.5倍以上。子实体中还含有黑果腺肋花楸多酚（含量超过0.05%）。

Claims (5)

1.蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，其特征在于该培育方法按以下步骤完成：

一、高活性液体菌种的制备、培养和固体培养基的制备：将富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液加入到蒸馏水中，充分搅拌后，在120℃~123℃下灭菌10min~20min，冷却至室温，得到液体培养基，所述富硒麦芽粉、柞蚕蛹粉、葡萄糖母液和苏氨酸母液的质量与蒸馏水的体积的比为（0.5g~1.5g）：（0.2g~0.5g）：（0.2g~0.5g）：（0.2g~0.5g）：100mL；无菌条件下，将蛹虫草母种接种于液体培养基中，并在23℃的温度条件和180r/min的转速条件下培养5d，得到带有菌丝体球的高活性液体种子；将黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦加入到营养液中，灭菌，然后冷却至室温，得到固体培养基；所述黑果腺肋花楸果渣粉和油莎豆粕粉与小麦的质量比为（0.5~1.5）：（1~3.5）：（5~8.5），黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦的总质量与营养液的体积的比为（0.5g~1.5g）：1.3mL；所述的营养液按以下步骤制备：将葡萄糖母液和苏氨酸母液加入到蒸馏水中，混合均匀，得到营养液，所述葡萄糖母液的质量和苏氨酸母液的质量与蒸馏水的体积的比为（1.0g~2.0g）：（0.3g~0.6g）：100mL；

二、接种以及生长阶段的培养：无菌条件下，将带有菌丝体球的高活性液体种子接种于固体培养基上，接种量为10%；将接种后的固体培养基在18℃~22℃的温度条件下，避光培养10d~15d；培养结束后，进行光照和温差刺激，持续5d~8d后，停止光照和温差刺激；然后在20℃~23℃的温度条件下，继续培养5d~7d，进行第一次补水、保持光照和通风，继续培养7d~9d；培养结束后，进行第二次补水，最后继续培养至蛹虫草子实体成熟，采摘并烘干。

2.根据权利要求1所述的蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，其特征在于步骤一中所述的黑果腺肋花楸果渣粉按以下步骤制备：将黑果腺肋花楸果渣在45℃~55℃下烘至水分低于15%，粉碎，过40目筛，取筛下物，得到黑果腺肋花楸果渣粉；油莎豆粕粉按以下步骤制备：将油莎豆粕在45℃~50℃下烘至水分低于15%，粉碎，过40目筛，取筛下物，得到油莎豆粕粉。

3.根据权利要求1所述的蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，其特征在于步骤一中所述将黑果腺肋花楸果渣粉、油莎豆粕粉和小麦加入到营养液中，在120℃~123℃下灭菌1h~2h，然后冷却至室温，无菌保存，得到固体培养基。

4.根据权利要求1所述的蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，其特征在于步骤二中所述的光照刺激为：每天不少于10h的光照，光照强度为150Lx~250Lx；温差刺激为：昼夜温差7℃~13℃，白天20℃~23℃，晚上10℃~13℃。

5.根据权利要求1所述的蛹虫草仿野生优质高产规范化培育方法，其特征在于步骤二中所述的烘干为：在45℃~55℃下烘至蛹虫草子实体的水分≤12%。

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