CN112940110B

CN112940110B - 抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体及其应用

Info

Publication number: CN112940110B
Application number: CN202110400892.4A
Authority: CN
Inventors: 陈耀庆; 何兵; 刘舒宁; 王媛媛; 徐梦昕; 马勇
Original assignee: Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University; Sun Yat Sen University Shenzhen Campus
Priority date: 2021-04-14
Filing date: 2021-04-14
Publication date: 2022-09-20
Anticipated expiration: 2041-04-14
Also published as: CN112940110A

Abstract

本发明提供了抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包括SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:81所示的重链CDR3。本发明利用LIBRA‑seq高通量筛选得到9种SARS‑CoV‑2N蛋白特异性抗体，对SARS‑CoV‑2N蛋白具有较强的特异性结合能力，在检测及治疗SARS‑CoV‑2感染方面具有潜在的应用价值。

Description

抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其应用

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，涉及抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其应用。

背景技术

新型冠状病毒SARS-CoV-2是一种包膜单正链RNA病毒，属于冠状病毒β-CoV家族，基因组主要编码4种结构蛋白、约16种非结构蛋白(nap1-16)以及5～8种辅助蛋白，其中4种结构蛋白分别为刺突蛋白(S蛋白)、包膜蛋白(E蛋白)、膜蛋白(M蛋白)和核衣壳蛋白(N蛋白)。在4种结构蛋白中，S蛋白在SARS-CoV-2对宿主细胞的吸附、膜融合、侵入和传播过程中具有至关重要的作用。S蛋白包括参与病毒-受体结合的S1亚基和参与病毒膜融合的S2亚基，而S1亚基又进一步分为N末端区域(NTD)和受体结合区域(RBD)。SARS-CoV-2通过S蛋白识别结合ACE2受体及TMPRSS2辅助受体感染宿主细胞并开始复制周期。

N蛋白在多数冠状病毒中属于相对保守的抗原，且N抗原特异性抗体在早期血清学诊断中比S抗原特异性抗体具有更高的灵敏度与特异度，为提高血清学诊断的效率，需要寻找灵敏度更高、特异性更强的N抗体。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其应用，所述单克隆抗体对SARS-CoV-2N蛋白具有较强的特异性结合能力，有望成为SARS-CoV-2感染血清学早期诊断的筛查抗体。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了人源抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；

所述重链可变区包括SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:81所示的重链CDR3。

本发明中，抗体的重链CDR3是决定抗体对抗原特异性结合能力最主要的结构域，含有SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:43、SEQ IDNO:52、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:71或SEQ ID NO:81所示的重链CDR3的抗体对新型冠状病毒N蛋白具有较强的特异性结合能力。

优选地，所述轻链可变区包括SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:36、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:74或SEQ ID NO:84所示的轻链CDR3。

优选地，所述重链可变区还包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:21、SEQID NO:31、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:69或SEQ ID NO:79所示的重链CDR1。

优选地，所述重链可变区还包括SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:22、SEQID NO:32、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:80所示的重链CDR2。

优选地，所述轻链可变区还包括SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQID NO:34、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:72或SEQ ID NO:82所示的轻链CDR1。

优选地，所述轻链可变区还包括SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:25、SEQID NO:35、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:73或SEQ ID NO:83所示的轻链CDR2。

本发明中，含有SEQ ID NO:1～6、SEQ ID NO:11～16、SEQ ID NO:21～26、SEQ IDNO:31～36、SEQ ID NO:15&SEQ ID NO:41～45、SEQ ID NO:50～55、SEQ ID NO:25&SEQ IDNO:60～64、SEQ ID NO:69～74、SEQ ID NO:79～84的CDR的单克隆抗体对SARS-CoV-2N蛋白具有较强的特异性结合能力，在SARS-CoV-2血清学早期诊断领域具有重要的潜力。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C7410O1S的重链可变区包括SEQ ID NO:1所示的重链CDR1、SEQ ID NO:2所示的重链CDR2和SEQ ID NO:3所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C7410O1S的轻链可变区包括SEQ ID NO:4所示的轻链CDR1、SEQID NO:5所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:6所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:1：GYTFTSYA；

SEQ ID NO:2：ISAYNGNT；

SEQ ID NO:3：VRDRGNWFDP；

SEQ ID NO:4：SGSVSTSYY；

SEQ ID NO:5：STN；

SEQ ID NO:6：VLYMGSGTRV。

优选地，所述单克隆抗体C7410O1S包括SEQ ID NO:7所示的重链可变区和SEQ IDNO:8所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:7：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNSAQKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCVRDRGNWFDPWGQGTLVTVSS；

SEQ ID NO:8：

QTVVTQEPSFSVSPGGTVTLTCGLSSGSVSTSYYPSWYQQTPGQAPRTLIYSTNTRSSGVPDRFSGSILGNKAALTITGAQADDESDYYCVLYMGSGTRVFGGGTKLTVL。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C12832P1S的重链可变区包括SEQ ID NO:11所示的重链CDR1、SEQ ID NO:12所示的重链CDR2和SEQ ID NO:13所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C12832P1S的轻链可变区包括SEQ ID NO:14所示的轻链CDR1、SEQID NO:15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:16所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:11：GFTFSSHG；

SEQ ID NO:12：IGAAGDP；

SEQ ID NO:13：ARSVAGGLFDY；

SEQ ID NO:14：QSVLYSSNNKNY；

SEQ ID NO:15：WAS；

SEQ ID NO:16：QQYYSSPYT。

优选地，所述单克隆抗体C12832P1S包括SEQ ID NO:17所示的重链可变区和SEQID NO:18所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:17：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCVASGFTFSSHGMHWVRQATGKGLEWVSAIGAAGDPYYPGSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCARSVAGGLFDYWGQGTLVTVSS；

SEQ ID NO:18：

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQCPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAIYYCQQYYSSPYTFGQGTKLEIK。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C3079O1S的重链可变区包括SEQ ID NO:21所示的重链CDR1、SEQ ID NO:22所示的重链CDR2和SEQ ID NO:23所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C3079O1S的轻链可变区包括SEQ ID NO:24所示的轻链CDR1、SEQID NO:25所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:26所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:21：GFTFSSYW；

SEQ ID NO:22：MAQDGSDK；

SEQ ID NO:23：AIHGGNLAFEY；

SEQ ID NO:24：QSISSW；

SEQ ID NO:25：KAS；

SEQ ID NO:26：QQYNSYPWT。

优选地，所述单克隆抗体C3079O1S包括SEQ ID NO:27所示的重链可变区和SEQ IDNO:28所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:27：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYWMSWVRQAPGKGLEWVASMAQDGSDKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLHMNSLRAEDTAVYSCAIHGGNLAFEYWGQGTLVTVSS；

SEQ ID NO:28：

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTISCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPWTFGQGTKVEIK。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C4251P2S的重链可变区包括SEQ ID NO:31所示的重链CDR1、SEQ ID NO:32所示的重链CDR2和SEQ ID NO:33所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C4251P2S的轻链可变区包括SEQ ID NO:34所示的轻链CDR1、SEQID NO:35所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:36所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:31：GFTFAHYG；

SEQ ID NO:32：TWSDGIRR；

SEQ ID NO:33：ARDHSIGLFYMDV；

SEQ ID NO:34：SDSVSTNYY；

SEQ ID NO:35：NTN；

SEQ ID NO:36：VLYMGSGIWV。

优选地，所述单克隆抗体C4251P2S包括SEQ ID NO:37所示的重链可变区和SEQ IDNO:38所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:37：

QVQLVESGGGEVQPGTSLRLSCVTSGFTFAHYGMHWVRQAPGKGLEWVAVTWSDGIRRYYGDSVRGRFTISKDTSKNTLYLQMNSLRVEDTAVYYCARDHSIGLFYMDVWGKGTTVTVSS；

SEQ ID NO:38：

QTVVTQEPSFSVSPGGTVTLTCGLNSDSVSTNYYPSWHQQTPGQAPRTLIYNTNIRSSGVPDRFSGSILGNKAALTITGAQADDESDYYCVLYMGSGIWVFGGGTRLTVL。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C3P2FS的重链可变区包括SEQ ID NO:41所示的重链CDR1、SEQ ID NO:42所示的重链CDR2和SEQ ID NO:43所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C3P2FS的轻链可变区包括SEQ ID NO:44所示的轻链CDR1、SEQ IDNO:15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:45所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:41：GGSISNYF；

SEQ ID NO:42：IYTTGST；

SEQ ID NO:43：ARESRTYDGSGYYIDS；

SEQ ID NO:44：HTLLYSLNNKSS；

SEQ ID NO:45：QQYYSVPRT。

优选地，所述单克隆抗体C3P2FS包括SEQ ID NO:46所示的重链可变区和SEQ IDNO:47所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:46：

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNYFWSWIRQPAGKGLEWIGRIYTTGSTDYNPSLKSRVSASVDTSKNQFSLKVRSVTAADTAMYYCARESRTYDGSGYYIDSWGQGALVTVSS；

SEQ ID NO:47：

DIVMTQSPDSLAVSLGERATLNCESSHTLLYSLNNKSSLAWYQQKPGQPPKVLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSVPRTFGQGTKVEIK。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C10897P3S的重链可变区包括SEQ ID NO:50所示的重链CDR1、SEQ ID NO:51所示的重链CDR2和SEQ ID NO:52所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C10897P3S的轻链可变区包括SEQ ID NO:53所示的轻链CDR1、SEQID NO:54所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:55所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:50：GFTFSIYA；

SEQ ID NO:51：ISGSGGST；

SEQ ID NO:52：GGLGRGYDILTGTFDY；

SEQ ID NO:53：QSVSSN；

SEQ ID NO:54：GAS；

SEQ ID NO:55：QQYNNWPPSIT。

优选地，所述单克隆抗体C10897P3S包括SEQ ID NO:56所示的重链可变区和SEQID NO:57所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:56：

EVQLLESGGGFIQPGGSLRLSCAASGFTFSIYAMTWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCGGLGRGYDILTGTFDYWGQGTLVTVSS；

SEQ ID NO:57：

EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWPPSITFGQGTRLEIK。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C2862O1S的重链可变区包括SEQ ID NO:60所示的重链CDR1、SEQ ID NO:61所示的重链CDR2和SEQ ID NO:62所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C2862O1S的轻链可变区包括SEQ ID NO:63所示的轻链CDR1、SEQID NO:25所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:64所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:60：GYTFTGYY；

SEQ ID NO:61：IKPNSGGT；

SEQ ID NO:62：ASRHEGYGSGSYYIDY；

SEQ ID NO:63：QSIYSW；

SEQ ID NO:64：QQYNSYFWT。

优选地，所述单克隆抗体C2862O1S包括SEQ ID NO:65所示的重链可变区和SEQ IDNO:66所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:65：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWIKPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCASRHEGYGSGSYYIDYWGQGTLVTVSS；

SEQ ID NO:66：

DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIYSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYFWTFGQGTKVEIK。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C10543O1S的重链可变区包括SEQ ID NO:69所示的重链CDR1、SEQ ID NO:70所示的重链CDR2和SEQ ID NO:71所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C10543O1S的轻链可变区包括SEQ ID NO:72所示的轻链CDR1、SEQID NO:73所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:74所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:69：GYTFTSYD；

SEQ ID NO:70：MNPNSGNT；

SEQ ID NO:71：ATREGPDLRWLQEDAFDI；

SEQ ID NO:72：QSLVHNNGNTY；

SEQ ID NO:73：NVS；

SEQ ID NO:74：LQATHWPLT。

优选地，所述单克隆抗体C10543O1S包括SEQ ID NO:75所示的重链可变区和SEQID NO:76所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:75：

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSINTAYMELSSLRSEDTAVYYCATREGPDLRWLQEDAFDIWGQGTMVTVSS；

SEQ ID NO:76：

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVHNNGNTYLCWFQQRPGQSPRRLIYNVSNRDSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQATHWPLTFGGGTKLEIK。

在一优选实施例中，所述单克隆抗体C42P3F的重链可变区包括SEQ ID NO:79所示的重链CDR1、SEQ ID NO:80所示的重链CDR2和SEQ ID NO:81所示的重链CDR3；

所述单克隆抗体C42P3F的轻链可变区包括SEQ ID NO:82所示的轻链CDR1、SEQ IDNO:83所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:84所示的轻链CDR3；

SEQ ID NO:79：GFTFTDAT；

SEQ ID NO:80：INAGSGNT；

SEQ ID NO:81：AGGVHTDGVR；

SEQ ID NO:82：SSDVGTYNY；

SEQ ID NO:83：EVS；

SEQ ID NO:84：TSHAGFNNFVV。

优选地，所述单克隆抗体C42P3F包括SEQ ID NO:85所示的重链可变区和SEQ IDNO:86所示的轻链可变区；

SEQ ID NO:85：

QVQFVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFTDATMYWVRQAPGQRLEWVGWINAGSGNTEFPQKFRGRVTVTRDTSASVLYMELSSLTSEDTAVYYCAGGVHTDGVRWGQGTLVTVSS；

SEQ ID NO:86：

QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGTYNYVSWYQHHPGQAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGHTASLTVSGLQADDEADYYCTSHAGFNNFVVFGGGTKLTVL。

优选地，所述单克隆抗体还包括恒定区，所述恒定区包括IgG、IgA或IgM中的任意一种。

优选地，所述单克隆抗体还包括J链，其中，单克隆抗体C7410O1S的J链为IGHJ5和IGLJ3，单克隆抗体C12832P1S的J链为IGHJ4和IGKJ2，单克隆抗体C3079O1S的J链为IGHJ4和IGKJ1，单克隆抗体C4251P2S的J链为IGHJ6和IGLJ3，单克隆抗体C3P2FS的J链为IGHJ4和IGKJ1，单克隆抗体C10897P3S的J链为IGHJ4和IGKJ5，单克隆抗体C2862O1S的J链为IGHJ4和IGKJ1，单克隆抗体C10543O1S的J链为IGHJ3和IGKJ4，单克隆抗体C42P3F的J链为IGHJ4和IGLJ2。

本发明中，利用BCR到抗原特异性连接测序技术(linking B cell receptor toantigen specification throughsequencing，LIBRA-seq)高通量测定B细胞受体序列与抗原特异性的映射，从COVID-19恢复期患者中快速筛选到了9个SARS-CoV-2N蛋白单克隆抗体C7410O1S、C12832P1S、C3079O1S、C4251P2S、C3P2FS、C10897P3S、C2862O1S、C10543O1S和C42P3F，对SARS-CoV-2N蛋白具有较强的特异性结合能力，在血清学早期诊断SARS-CoV-2感染方面具有重要的潜力。

第二方面，本发明提供了核酸分子，所述核酸分子包括第一方面所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的编码基因。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:9～10所示的核酸序列，为单克隆抗体C7410O1S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:9(C7410O1S的重链可变区)：

caggttcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaccagctacgctatcagctgggtgcgacaggcccctggacaaggccttgagtggatgggatggatcagcgcttacaatggtaacacaaactctgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgagcacagcctacatggagctgaggagcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgtgagagatagggggaactggttcgacccctggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag；

SEQ ID NO:10(C7410O1S的轻链可变区)：

cagactgtggtgacccaggagccatcgttttcagtgtcccctggagggacagtcacactcacttgtggcttgagctctggctcagtctctactagttactaccccagctggtaccagcagaccccaggccaggctccacgcacgctcatctacagcacaaacactcgctcttctggggtccctgatcgcttctctggctccatccttgggaacaaagctgccctcaccatcacgggggcccaggcagatgatgaatctgattattactgtgtgctgtatatgggtagtggcacccgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctag。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:19～20所示的核酸序列，为单克隆抗体C12832P1S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:19(C12832P1S的重链可变区)：

gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgtagcctctggattcaccttcagtagccacggcatgcactgggtccgccaagctacaggaaaaggtctggagtgggtctcagctattggtgctgctggtgacccatactatccaggctccgtgaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaactccttgtatcttcaaatgaacagcctgagagccggggacacggctgtgtattactgtgcaagatctgtggctgggggactctttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcgtcag；

SEQ ID NO:20(C12832P1S的轻链可变区)：

gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgcaagtccagtcagagtgttttatacagctccaacaataagaactacttagcttggtaccagcagaaaccaggacagtgtcctaagctgctcatttactgggcatctacccgggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcaatttattactgtcaacaatattatagtagtccgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaaac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:29～30所示的核酸序列，为单克隆抗体C3079O1S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:29(C3079O1S的重链可变区)：

gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagtagctattggatgagctgggtccgccaggctccagggaaagggctggagtgggtggccagcatggcccaagatggcagtgacaaatactatgtggactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaattcactgtatctgcacatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtgtattcctgtgcgatacacggtggtaacttagcttttgagtactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag；

SEQ ID NO:30(C3079O1S的轻链可变区)：

gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcagttgccgggccagtcagagtattagtagctggttggcctggtatcagcaaaaaccagggaaagcccctaaactcctgatctataaggcgtctagtttagaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagaattcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttattactgccaacagtataatagttatccgtggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:39～40所示的核酸序列，为单克隆抗体C4251P2S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:39(C4251P2S的重链可变区)：

caggtgcagctggtggagtctgggggaggcgaggtccagcctgggacgtccctgagactctcctgtgtaacgtctggattcacgttcgcccactatggcatgcactgggtccgccaggctccaggcaaggggctggagtgggtggcagttacctggagtgatggaattagaagatactatggagactccgtgaggggccgattcaccatctccaaagacacttcgaagaacacactgtatcttcaaatgaatagcctgagagtcgaggacacggctgtgtattattgtgcaagagatcacagtattggcttgttctacatggacgtctggggcaaagggaccacggtcaccgtctcctca；

SEQ ID NO:40(C4251P2S的轻链可变区)：

cagactgtggtgacccaggagccatcgttctcagtgtcccctggagggacagtcacactcacttgtggcttgaactctgactcagtctctactaattactaccccagctggcaccagcagaccccaggccaggctccacgcacgctcatctacaacacaaacattcgctcttctggggtccctgatcgcttctctgggtccatccttgggaacaaagctgccctcaccatcacgggggcccaggcagatgatgaatctgattattactgtgtgctgtatatgggtagtggcatttgggtgttcggcggagggaccagactgaccgtcctac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:48～49所示的核酸序列，为单克隆抗体C3P2FS的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:48(C3P2FS的重链可变区)：

caggtgcagctgcaggagtcgggcccaggactggtgaagccttcggagaccctgtccctcacctgcactgtctctggtggctccatcagtaattacttctggagctggatccgccaacccgccgggaaggggttggagtggattgggcgtatttacaccactgggagtaccgactacaacccctccctcaagagtcgagtcagcgcgtcagtggacacctcgaagaaccaattctccctgaaggtgaggtctgtgaccgccgcggacacggccatgtattattgtgcgagagaatcacgcacctatgatgggagtggttattacattgactcctggggccagggagccctggtcaccgtctcctcag；

SEQ ID NO:49(C3P2FS的轻链可变区)：

gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgaaagggccaccctcaactgcgagtccagccacactcttttatacagtctcaacaataagagctccttagcttggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaaggtgctcatatactgggcatctacccgggaatccggggtccctgaccgattcagtggcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaggatgtggcagtttattactgtcaacaatattatagtgttccaaggacgttcggccaagggaccaaggtggagatcaaac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:58～59所示的核酸序列，为单克隆抗体C10897P3S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:58(C10897P3S的重链可变区)：

gaggtgcagctgttggagtctgggggaggcttcatacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcatctatgccatgacctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtagtggtggtagcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtggggggctggggcggggttacgatattttgactggtacttttgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag；

SEQ ID NO:59(C10897P3S的轻链可变区)：

gaaatagtgatgacgcagtctccagccaccctgtctgtgtctccaggggaaagagccaccctctcctgcagggccagtcagagtgttagcagcaacttagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatggtgcatccaccagggccactggtatcccagccaggttcagtggcagtgggtctgggacagagttcactctcaccatcagcagcctgcagtctgaagattttgcagtttattactgtcagcagtataataactggcctccgtcgatcaccttcggccaagggacacgactggagattaaac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:67～68所示的核酸序列，为单克隆抗体C2862O1S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:67(C2862O1S的重链可变区)：

caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcgtctggatacaccttcaccggctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcaaacctaacagtggtggcacaaactatgcacagaagtttcagggcagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacatggagctgagcaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcttcgagacatgaaggatatggttcggggagttattacattgactactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag；

SEQ ID NO:68(C2862O1S的轻链可变区)：

gacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccgggccagtcagagtatttatagctggttggcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctataaggcgtctagtttagaaagtggggtcccatcaaggttcagcggcagtggatctgggacagacttcactctcaccatcagcagcctgcagcctgatgattttgcaacttattactgccaacagtataatagttatttctggacgttcggccaagggaccaaggtggaaatcaaac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:77～78所示的核酸序列，为单克隆抗体C10543O1S的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:77(C10543O1S的重链可变区)：

caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggatacaccttcaccagttatgatatcaactgggtgcgacaggccactggacaagggcttgagtggatgggatggatgaaccctaacagtggtaacacaggctatgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccaggaacacctccataaacacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgccacccgggagggtcccgacctgagatggctacaagaagacgcttttgatatctggggccaagggacaatggtcaccgtctcttcag；

SEQ ID NO:78(C10543O1S的轻链可变区)：

gatgttgtcatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccttggacagccggcctccatctcctgcaggtctagtcaaagcctcgtacacaataatggaaacacttacttgtgttggtttcagcagaggccaggccaatctccaaggcgcctgatttataacgtttctaaccgggactctggggtcccagacagattcagcggcagtgggtcaggcactgatttcaccctgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcttgcaagctacacactggcctctcactttcggcggagggaccaagctggagatcaaac。

优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:87～88所示的核酸序列，为单克隆抗体C42P3F的重链可变区的编码基因和轻链可变区的编码基因；

SEQ ID NO:87(C42P3F的重链可变区)：

caggtccaatttgtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcttccggattcaccttcactgacgccactatgtattgggtgcgccaggctcccggacaaaggcttgagtgggtgggatggatcaacgctggcagtggcaacacagagtttccacagaagttccgaggcagagtcaccgtaaccagagacacatccgcgagcgttctctacatggagttgagcagcctgacatctgaggacacggctgtctattattgtgcgggaggtgtgcatacagacggcgtcaggtggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcag；

SEQ ID NO:88(C42P3F的轻链可变区)：

cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtacttataactatgtctcctggtaccaacaccacccaggccaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggccacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgacgatgaggctgattactactgcacctcacatgcaggcttcaacaatttcgtagtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctga。

第三方面，本发明提供了表达载体，所述表达载体包括第二方面所述的核酸分子。

第四方面，本发明提供了重组细胞，所述重组细胞表达第一方面所述的单克隆抗体。

优选地，所述重组细胞的基因组中整合有第二方面所述的核酸分子。

优选地，所述重组细胞包括第三方面所述的表达载体。

第五方面，本发明提供了一种第一方面所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将编码抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的核酸分子连接入质粒，转入感受态细胞，培养后挑取单克隆细胞进行筛选；

(2)提取筛选的阳性克隆的表达载体，转入宿主细胞，培养并收集上清液，分离纯化得到所述抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体。

第六方面，本发明提供了一种新冠病毒肺炎检测试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的单克隆抗体。

优选地，所述试剂盒为新型冠状病毒酶联免疫吸附检测试剂盒，所述酶联免疫吸附检测试剂盒包括第一方面所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体包被的酶标板。

优选地，所述酶联免疫吸附检测试剂盒还包括封闭液、酶标二抗、显色液或终止液中的任意一种或至少两种的组合。

第七方面，本发明提供了第一方面所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体、第二方面所述的核酸分子、第三方面所述的表达载体、第四方面所述的重组细胞或第六方面所述的试剂盒在制备新冠病毒肺炎检测试剂中的应用。

第八方面，本发明提供了一种检测新冠病毒肺炎的方法，所述方法包括利用第一方面所述的单克隆抗体和/或第六方面所述的试剂盒检测血清样本中的新冠病毒的步骤。

与现有相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明利用LIBRA-seq技术快速高效地从COVID-19恢复期患者的血液中筛选到9个新冠病毒N蛋白特异性单克隆抗体，所述单克隆抗体与新冠病毒N蛋白的结合能力显著；

(2)本发明的抗新冠病毒N蛋白单克隆抗体制备方法简单，特异性好、活性较强，在新冠病毒肺炎早期诊断领域具有广阔的应用价值。

附图说明

图1为ELISA检测SARS-CoV-2抗原特异性抗体，数据以均值±标准差表示。

具体实施方式

为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。

实施例1 10×Genomics建库和数据分析

本实施例首先利用淋巴细胞分离液提取COVID-19患者的外周血单个核细胞，分选CD19^阳性CD27^阳性记忆B细胞和CD19^阳性CD27^高CD38^高浆细胞，并标记新冠病毒受体结合区域特异的B细胞；

将准备好的细胞进行10×Genetics建库测序，构建3个文库：5’转录组文库、B细胞受体文库和特征标记文库，最后利用NovaSeq 6000进行高通量测序；

利用10×Genomics Cell Ranger软件(3.1.0版本)处理测序fastq文件，利用Seurat(Version 3.1)过滤低质量细胞(基因表达量<200或＞5000，线粒体基因>10％，基因表达少于3个细胞)，最后利用Seurat进行标准化、PCA降维、TSNE聚类、差异表达基因分析。

实施例2抗体的合成与表达

根据以下原则选择候选抗体：1)抗体克隆类型非IgE和IgD、2)抗原标记量较高且独立的克隆、3)排除体细胞突变率较高的克隆、4)高频V-J组合的克隆。由此筛选得到抗体C7410O1S(SEQ ID NO:7～8)、C12832P1S(SEQ ID NO:17～18)、C3079O1S(SEQ ID NO:27～28)、C4251P2S(SEQ ID NO:37～38)、C3P2FS(SEQ ID NO:46～47)、C10897P3S(SEQ ID NO:56～57)、C2862O1S(SEQ ID NO:65～66)、C10543O1S(SEQ ID NO:75～76)、C42P3F(SEQ IDNO:85～86)。

将筛选的抗体基因连接在包含恒定区的IgG载体上，通过转染HEK293T细胞进行抗体表达，加入转染试剂，收集上清并进行抗体纯化。

实施例3抗体的特异性鉴定

本实施例利用ELISA鉴定抗体的特异性，制备包被SARS-CoV-2N抗原的酶标板，加入筛选抗体C7410O1S、C12832P1S、C3079O1S、C4251P2S、C3P2FS、C10897P3S、C2862O1S、C10543O1S或C42P3F，同时设置空白对照组(PBS)，随后加入HRP标记山羊抗人IgG二抗，进行ELISA检测。

结果如图1所示，C7410O1S、C12832P1S、C3079O1S、C4251P2S、C3P2FS、C10897P3S、C2862O1S、C10543O1S和C42P3F单克隆抗体与N蛋白结合呈ELISA阳性结果。

综上所述，本发明利用LIBRA-seq技术筛选的新冠病毒N蛋白单克隆抗体C7410O1S、C12832P1S、C3079O1S、C4251P2S、C3P2FS、C10897P3S、C2862O1S、C10543O1S和C42P3F与N蛋白的结合能力，功能活性稳定，制备方法简单高效，在新冠病毒肺炎早期诊断领域具有广阔的应用价值。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 中山大学

<120> 抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体及其应用

<130> 20210402

<160> 88

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala

1 5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr

1 5

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Val Arg Asp Arg Gly Asn Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210> 4

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 5

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 5

Ser Thr Asn

1

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 6

Val Leu Tyr Met Gly Ser Gly Thr Arg Val

1 5 10

<210> 7

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Ser Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Arg Asp Arg Gly Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 8

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Ser Ser Gly Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Tyr Tyr Pro Ser Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Ser Thr Asn Thr Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Tyr Met Gly Ser

85 90 95

Gly Thr Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 9

<211> 352

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctacgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag gccttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactct 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240

atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgt gagagatagg 300

gggaactggt tcgacccctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag 352

<210> 10

<211> 331

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

cagactgtgg tgacccagga gccatcgttt tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc 60

acttgtggct tgagctctgg ctcagtctct actagttact accccagctg gtaccagcag 120

accccaggcc aggctccacg cacgctcatc tacagcacaa acactcgctc ttctggggtc 180

cctgatcgct tctctggctc catccttggg aacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc 240

caggcagatg atgaatctga ttattactgt gtgctgtata tgggtagtgg cacccgggtg 300

ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta g 331

<210> 11

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 11

Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Gly

1 5

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 12

Ile Gly Ala Ala Gly Asp Pro

1 5

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 13

Ala Arg Ser Val Ala Gly Gly Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 14

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 14

Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr

1 5 10

<210> 15

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 15

Trp Ala Ser

1

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 16

Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 17

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 17

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Gly Ala Ala Gly Asp Pro Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ser Val Ala Gly Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 18

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Cys Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 19

<211> 352

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgtag cctctggatt caccttcagt agccacggca tgcactgggt ccgccaagct 120

acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attggtgctg ctggtgaccc atactatcca 180

ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagacaatg ccaagaactc cttgtatctt 240

caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag atctgtggct 300

gggggactct ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcgtc ag 352

<210> 20

<211> 340

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60

atcaactgca agtccagtca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120

tggtaccagc agaaaccagg acagtgtcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180

gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240

atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca atttattact gtcaacaata ttatagtagt 300

ccgtacactt ttggccaggg gaccaagctg gagatcaaac 340

<210> 21

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 21

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp

1 5

<210> 22

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 22

Met Ala Gln Asp Gly Ser Asp Lys

1 5

<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 23

Ala Ile His Gly Gly Asn Leu Ala Phe Glu Tyr

1 5 10

<210> 24

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 24

Gln Ser Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 25

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 25

Lys Ala Ser

1

<210> 26

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 26

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp Thr

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<210> 27

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 27

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Met Ala Gln Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu His Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys

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Ala Ile His Gly Gly Asn Leu Ala Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 28

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 28

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 29

<211> 355

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt agctattgga tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaaag ggctggagtg ggtggccagc atggcccaag atggcagtga caaatactat 180

gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ttcactgtat 240

ctgcacatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attcctgtgc gatacacggt 300

ggtaacttag cttttgagta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355

<210> 30

<211> 322

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcagttgcc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtatca gcaaaaacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt atccgtggac gttcggccaa 300

gggaccaagg tggaaatcaa ac 322

<210> 31

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 31

Gly Phe Thr Phe Ala His Tyr Gly

1 5

<210> 32

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 32

Thr Trp Ser Asp Gly Ile Arg Arg

1 5

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<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 33

Ala Arg Asp His Ser Ile Gly Leu Phe Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 34

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 34

Ser Asp Ser Val Ser Thr Asn Tyr Tyr

1 5

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<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 35

Asn Thr Asn

1

<210> 36

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 36

Val Leu Tyr Met Gly Ser Gly Ile Trp Val

1 5 10

<210> 37

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Glu Val Gln Pro Gly Thr

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Ala His Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Thr Trp Ser Asp Gly Ile Arg Arg Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp His Ser Ile Gly Leu Phe Tyr Met Asp Val Trp Gly Lys

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 38

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 38

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Leu Asn Ser Asp Ser Val Ser Thr Asn

20 25 30

Tyr Tyr Pro Ser Trp His Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr

35 40 45

Leu Ile Tyr Asn Thr Asn Ile Arg Ser Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Val Leu Tyr Met Gly Ser

85 90 95

Gly Ile Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 39

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gaggtccagc ctgggacgtc cctgagactc 60

tcctgtgtaa cgtctggatt cacgttcgcc cactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt acctggagtg atggaattag aagatactat 180

ggagactccg tgaggggccg attcaccatc tccaaagaca cttcgaagaa cacactgtat 240

cttcaaatga atagcctgag agtcgaggac acggctgtgt attattgtgc aagagatcac 300

agtattggct tgttctacat ggacgtctgg ggcaaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360

<210> 40

<211> 331

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

cagactgtgg tgacccagga gccatcgttc tcagtgtccc ctggagggac agtcacactc 60

acttgtggct tgaactctga ctcagtctct actaattact accccagctg gcaccagcag 120

accccaggcc aggctccacg cacgctcatc tacaacacaa acattcgctc ttctggggtc 180

cctgatcgct tctctgggtc catccttggg aacaaagctg ccctcaccat cacgggggcc 240

caggcagatg atgaatctga ttattactgt gtgctgtata tgggtagtgg catttgggtg 300

ttcggcggag ggaccagact gaccgtccta c 331

<210> 41

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 41

Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr Phe

1 5

<210> 42

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 42

Ile Tyr Thr Thr Gly Ser Thr

1 5

<210> 43

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 43

Ala Arg Glu Ser Arg Thr Tyr Asp Gly Ser Gly Tyr Tyr Ile Asp Ser

1 5 10 15

<210> 44

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 44

His Thr Leu Leu Tyr Ser Leu Asn Asn Lys Ser Ser

1 5 10

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 45

Gln Gln Tyr Tyr Ser Val Pro Arg Thr

1 5

<210> 46

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 46

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ala Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Tyr Thr Thr Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Ser Ala Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Val Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Ser Arg Thr Tyr Asp Gly Ser Gly Tyr Tyr Ile Asp Ser Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 47

<211> 113

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 47

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Asn Cys Glu Ser Ser His Thr Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Leu Asn Asn Lys Ser Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Val Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Val Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 48

<211> 367

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt aattacttct ggagctggat ccgccaaccc 120

gccgggaagg ggttggagtg gattgggcgt atttacacca ctgggagtac cgactacaac 180

ccctccctca agagtcgagt cagcgcgtca gtggacacct cgaagaacca attctccctg 240

aaggtgaggt ctgtgaccgc cgcggacacg gccatgtatt attgtgcgag agaatcacgc 300

acctatgatg ggagtggtta ttacattgac tcctggggcc agggagccct ggtcaccgtc 360

tcctcag 367

<210> 49

<211> 340

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga aagggccacc 60

ctcaactgcg agtccagcca cactctttta tacagtctca acaataagag ctccttagct 120

tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aaggtgctca tatactgggc atctacccgg 180

gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240

atcagcagcc tgcaggctga ggatgtggca gtttattact gtcaacaata ttatagtgtt 300

ccaaggacgt tcggccaagg gaccaaggtg gagatcaaac 340

<210> 50

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 50

Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr Ala

1 5

<210> 51

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 51

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 52

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 52

Gly Gly Leu Gly Arg Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Thr Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 53

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 53

Gln Ser Val Ser Ser Asn

1 5

<210> 54

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 54

Gly Ala Ser

1

<210> 55

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 55

Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro Ser Ile Thr

1 5 10

<210> 56

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 56

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Phe Ile Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ile Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Gly Gly Leu Gly Arg Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Thr Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 57

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 57

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Pro

85 90 95

Ser Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 58

<211> 370

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 58

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttcatacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc atctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgg ggggctgggg 300

cggggttacg atattttgac tggtactttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360

gtctcctcag 370

<210> 59

<211> 328

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 59

gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctccgtc gatcaccttc 300

ggccaaggga cacgactgga gattaaac 328

<210> 60

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 60

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr

1 5

<210> 61

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 61

Ile Lys Pro Asn Ser Gly Gly Thr

1 5

<210> 62

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 62

Ala Ser Arg His Glu Gly Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ile Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 63

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 63

Gln Ser Ile Tyr Ser Trp

1 5

<210> 64

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 64

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Phe Trp Thr

1 5

<210> 65

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 65

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Lys Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Ser Arg His Glu Gly Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Ile Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 66

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 66

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Phe Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 67

<211> 370

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 67

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cgtctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaaaccta acagtggtgg cacaaactat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc ttcgagacat 300

gaaggatatg gttcggggag ttattacatt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360

gtctcctcag 370

<210> 68

<211> 322

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 68

gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggccagtca gagtatttat agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt atttctggac gttcggccaa 300

gggaccaagg tggaaatcaa ac 322

<210> 69

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 69

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp

1 5

<210> 70

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 70

Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr

1 5

<210> 71

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 71

Ala Thr Arg Glu Gly Pro Asp Leu Arg Trp Leu Gln Glu Asp Ala Phe

1 5 10 15

Asp Ile

<210> 72

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 72

Gln Ser Leu Val His Asn Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 73

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 73

Asn Val Ser

1

<210> 74

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 74

Leu Gln Ala Thr His Trp Pro Leu Thr

1 5

<210> 75

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 75

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Arg Glu Gly Pro Asp Leu Arg Trp Leu Gln Glu Asp Ala Phe

100 105 110

Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 76

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 76

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Asn

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Cys Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Asn Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ala

85 90 95

Thr His Trp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 77

<211> 376

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 77

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc 120

actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180

gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataaa cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc cacccgggag 300

ggtcccgacc tgagatggct acaagaagac gcttttgata tctggggcca agggacaatg 360

gtcaccgtct cttcag 376

<210> 78

<211> 337

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 78

gatgttgtca tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccttggaca gccggcctcc 60

atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacaataatg gaaacactta cttgtgttgg 120

tttcagcaga ggccaggcca atctccaagg cgcctgattt ataacgtttc taaccgggac 180

tctggggtcc cagacagatt cagcggcagt gggtcaggca ctgatttcac cctgaaaatc 240

agcagggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgct tgcaagctac acactggcct 300

ctcactttcg gcggagggac caagctggag atcaaac 337

<210> 79

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 79

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Ala Thr

1 5

<210> 80

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 80

Ile Asn Ala Gly Ser Gly Asn Thr

1 5

<210> 81

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 81

Ala Gly Gly Val His Thr Asp Gly Val Arg

1 5 10

<210> 82

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 82

Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr Asn Tyr

1 5

<210> 83

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 83

Glu Val Ser

1

<210> 84

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 84

Thr Ser His Ala Gly Phe Asn Asn Phe Val Val

1 5 10

<210> 85

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 85

Gln Val Gln Phe Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Ala

20 25 30

Thr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Ala Gly Ser Gly Asn Thr Glu Phe Pro Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Gly Arg Val Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Val Leu Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Gly Val His Thr Asp Gly Val Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 86

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 86

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Thr Tyr

20 25 30

Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly His Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Thr Ser His Ala Gly Phe

85 90 95

Asn Asn Phe Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 87

<211> 352

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 87

caggtccaat ttgtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60

tcctgcaagg cttccggatt caccttcact gacgccacta tgtattgggt gcgccaggct 120

cccggacaaa ggcttgagtg ggtgggatgg atcaacgctg gcagtggcaa cacagagttt 180

ccacagaagt tccgaggcag agtcaccgta accagagaca catccgcgag cgttctctac 240

atggagttga gcagcctgac atctgaggac acggctgtct attattgtgc gggaggtgtg 300

catacagacg gcgtcaggtg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc ag 352

<210> 88

<211> 334

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 88

cagtctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60

tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt acttataact atgtctcctg gtaccaacac 120

cacccaggcc aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180

cctgatcgct tctctggctc caagtctggc cacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240

caggctgacg atgaggctga ttactactgc acctcacatg caggcttcaa caatttcgta 300

gtattcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctga 334

Claims

1.抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区；

所述重链可变区包括SEQ ID NO:1所示的重链CDR1、SEQ ID NO:2所示的重链CDR2和SEQ ID NO:3所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:4所示的轻链CDR1、SEQ IDNO:5所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:6所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:11所示的重链CDR1、SEQ ID NO:12所示的重链CDR2和SEQ ID NO:13所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:14所示的轻链CDR1、SEQID NO:15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:16所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:21所示的重链CDR1、SEQ ID NO:22所示的重链CDR2和SEQ ID NO:23所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:24所示的轻链CDR1、SEQID NO:25所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:26所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:31所示的重链CDR1、SEQ ID NO:32所示的重链CDR2和SEQ ID NO:33所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:34所示的轻链CDR1、SEQID NO:35所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:36所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:41所示的重链CDR1、SEQ ID NO:42所示的重链CDR2和SEQ ID NO:43所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:44所示的轻链CDR1、SEQID NO:15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:45所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:50所示的重链CDR1、SEQ ID NO:51所示的重链CDR2和SEQ ID NO:52所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:53所示的轻链CDR1、SEQID NO:54所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:55所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:60所示的重链CDR1、SEQ ID NO:61所示的重链CDR2和SEQ ID NO:62所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:63所示的轻链CDR1、SEQID NO:25所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:64所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:69所示的重链CDR1、SEQ ID NO:70所示的重链CDR2和SEQ ID NO:71所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:72所示的轻链CDR1、SEQID NO:73所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:74所示的轻链CDR3；或者

所述重链可变区包括SEQ ID NO:79所示的重链CDR1、SEQ ID NO:80所示的重链CDR2和SEQ ID NO:81所示的重链CDR3；所述轻链可变区包括SEQ ID NO:82所示的轻链CDR1、SEQID NO:83所示的轻链CDR2和SEQ ID NO:84所示的轻链CDR3。

2.根据权利要求1所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:7所示的重链可变区和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:17所示的重链可变区和SEQ ID NO:18所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:27所示的重链可变区和SEQ ID NO:28所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:37所示的重链可变区和SEQ ID NO:38所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:46所示的重链可变区和SEQ ID NO:47所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:56所示的重链可变区和SEQ ID NO:57所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:65所示的重链可变区和SEQ ID NO:66所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:75所示的重链可变区和SEQ ID NO:76所示的轻链可变区；或者

所述单克隆抗体包括SEQ ID NO:85所示的重链可变区和SEQ ID NO:86所示的轻链可变区。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体还包括恒定区；

所述恒定区包括IgG、IgM或IgA中的任意一种。

4.根据权利要求3所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体还包括J链。

5.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括权利要求1-4任一项所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的编码基因。

6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括SEQ ID NO:9～10所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:19～20所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:29～30所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:39～40所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:48～49所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:58～59所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:67～68所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:77～78所示的核酸序列；或者

所述核酸分子包括SEQ ID NO:87～88所示的核酸序列。

7.一种权利要求1-4任一项所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

8.一种新型冠状病毒酶联免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫吸附检测试剂盒包括权利要求1-4任一项所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体包被的酶标板。

9.根据权利要求8所述的新型冠状病毒酶联免疫吸附检测试剂盒，其特征在于，所述酶联免疫吸附检测试剂盒还包括封闭液、酶标二抗、显色液或终止液中的任意一种或至少两种的组合。

10.权利要求1-4任一项所述的抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体、权利要求5或6所述的核酸分子或权利要求8或9所述的新型冠状病毒酶联免疫吸附检测试剂盒在制备新冠病毒肺炎检测试剂中的应用。