KR20230038783A - Sars-cov-2 단백질, 항-sars-cov-2 항체, 및 이를 사용하는 방법 - Google Patents

Sars-cov-2 단백질, 항-sars-cov-2 항체, 및 이를 사용하는 방법 Download PDF

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마크 에쎄르
2세 패트릭 맥탐니
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제임스 스타인하르트
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Abstract

본 개시내용은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및 이러한 스파이크 단백질을 함유하는 삼량체를 제공한다. 본 개시내용은 또한 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 예를 들어, 단백질, 삼량체, 및 항체는 대상체로부터 얻은 샘플에서 항-SARS-CoV-2 항체를 검출하는데 사용될 수 있다.

Description

SARS-COV-2 단백질, 항-SARS-COV-2 항체, 및 이를 사용하는 방법
본 개시내용은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질, SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편, 및 예를 들어 항-SARS-CoV-2 항체의 검출 시 이를 제조하고 사용하는 방법에 관한 것이다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다. 2021년 7월 9일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 COVID-101-WO-PCT_SL.txt이며, 파일 크기는 68,970 바이트이다.
중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)로 인해 코로나바이러스 2019(COVID19) 팬데믹이 나타났다. SARS-CoV-2는 2019년 12월에 중국 우한에서 처음 확인되었고, 전 세계적으로 빠르게 감염을 야기하였다. 이 바이러스의 치사율은 현재 불확실하지만, 전 세계적으로 발생한 사례와 사망자 수는 엄청나다: 2020년 7월 기준으로, 전 세계적으로 1,400만 건이 넘는 사례와 60만 명 넘게 사망한 것이 확인되었다. 바이러스는 감염된 사람이 기침, 재채기를 하거나, 말을 할 때 배출된, 코 또는 입으로부터의 작은 비말을 통해서 사람과 사람 간에 확산될 수 있다. 잠복기(노출부터 증상 발현까지의 시간)는 0 내지 24일이며, 평균 3 내지 5일이지만, 바이러스가 이 기간 중에 전염성이 있을 수 있다. 증상에는 발열, 기침 및 호흡 곤란이 포함된다. 일부 환자의 경우, 폐의 감염이 심해 심각한 호흡곤란을 일으키거나 심지어 사망에 이를 수도 있다. 그러나, 바이러스에 감염된 많은 환자들은 경미한 증상만 보이거나 무증상이다. 불행하게도, 이 환자들이 다른 사람들에게 바이러스를 퍼뜨릴 수도 있다.
현재, 여러 백신 및 항바이러스 접근방식을 연구 중이기는 하지만, 승인된 백신은 없으며, 과학 및 의학계의 광범위한 승인을 받은 구체적인 치료법은 없다. 따라서, SARS-CoV-2의 확산을 방지하는 것이 중요하다. SARS-CoV-2에 감염되었다가 회복된 환자는 회복 후에도 감염되지 않을 수 있다는 가설이 있다. 감염되지 않을 사람을 식별할 수 있다는 것은 SARS-CoV-2의 확산을 막는 데 유용할 것이다. 환자의 항-SARS-CoV-2 항체를 테스트하는 일부 분석법이 현재 이용 가능하지만, 원하는 민감도와 특이성이 부족하다. 따라서, SARS-CoV-2에 감염된 환자를 식별하는 데 유용한 시약 및 분석법이 절실히 필요하다.
일부 양태에서, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는 항체와 동일한 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공되며, 여기서 VH 및 VL의 아미노산 서열은 (a) 각각 서열번호 55 및 서열번호 64; (b) 각각 서열번호 56 및 서열번호 65; (c) 각각 서열번호 57 및 서열번호 66; (d) 각각 서열번호 58 및 서열번호 67; (e) 각각 서열번호 59 및 서열번호 68; (f) 각각 서열번호 60 및 서열번호 69; (g) 각각 서열번호 61 및 서열번호 70; (h) 각각 서열번호 62 및 서열번호 71; 또는 (i) 각각 서열번호 63 및 서열번호 72의 서열을 포함한다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 대한 참조 항체의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공되며, 여기서 참조 항체는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, 여기서 VH 및 VL의 아미노산 서열은, (a) 각각 서열번호 55 및 서열번호 64; (b) 각각 서열번호 56 및 서열번호 65; (c) 각각 서열번호 57 및 서열번호 66; (d) 각각 서열번호 58 및 서열번호 67; (e) 각각 서열번호 59 및 서열번호 68; (f) 각각 서열번호 60 및 서열번호 69; (g) 각각 서열번호 61 및 서열번호 70; (h) 각각 서열번호 62 및 서열번호 71; 또는 (i) 각각 서열번호 63 및 서열번호 72의 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH-CDR1-3 및 VL CDR1-3 아미노산 서열을 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다: (a) 각각 서열번호 1, 2, 및 3 및 서열번호 28, 29, 및 30; (b) 각각 서열번호 4, 5, 및 6 및 서열번호 31, 32, 및 33; (c) 각각 서열번호 7, 8, 및 9 및 서열번호 34, 35, 및 36; (d) 각각 서열번호 10, 11, 및 12 및 서열번호 37, 38, 및 39; (e) 각각 서열번호 13, 14, 및 15 및 서열번호 40, 41, 및 42; (f) 각각 서열번호 16, 17, 및 18 및 서열번호 43, 44, 및 45; (g) 각각 서열번호 19, 20, 및 21 및 서열번호 46, 47, 및 48; (h) 각각 서열번호 22, 23, 및 24 및 서열번호 49, 50, 및 51; 또는 (i) 각각 서열번호 25, 26, 및 27 및 서열번호 52, 53, 및 54.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: (a) 서열번호 55; (b) 서열번호 56; (c) 서열번호 57; (d) 서열번호 58; (e) 서열번호 59; (f) 서열번호 60; (g) 서열번호 61; (h) 서열번호 62; 및 (i) 서열번호 63.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하며, 여기서 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: (a) 서열번호 64; (b) 서열번호 65; (c) 서열번호 66; (d) 서열번호 67; (e) 서열번호 68; (f) 서열번호 69; (g) 서열번호 70; (h) 서열번호 71; 및 (i) 서열번호 72.
일부 양태에서, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공되며, 여기서 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: (a) 서열번호 55; (b) 서열번호 56; (c) 서열번호 57; (d) 서열번호 58; (e) 서열번호 59; (f) 서열번호 60; (g) 서열번호 61; (h) 서열번호 62; 및 (i) 서열번호 63.
일부 양태에서, 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공되며, 여기서 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다: (a) 서열번호 64; (b) 서열번호 65; (c) 서열번호 66; (d) 서열번호 67; (e) 서열번호 68; (f) 서열번호 69; (g) 서열번호 70; (h) 서열번호 71; 및 (i) 서열번호 72.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열 및 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열을 포함한다: (a) 각각 서열번호 55 및 서열번호 64; (b) 각각 서열번호 56 및 서열번호 65; (c) 각각 서열번호 57 및 서열번호 66; (d) 각각 서열번호 58 및 서열번호 67; (e) 각각 서열번호 59 및 서열번호 68; (f) 각각 서열번호 60 및 서열번호 69; (g) 각각 서열번호 61 및 서열번호 70; (h) 각각 서열번호 62 및 서열번호 71; 및 (i) 각각 서열번호 63 및 서열번호 72.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV와 교차-반응한다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 중쇄 불변 영역은 인간 면역글로불린 IgG 및 IgM으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 양태에서, 경쇄 불변 영역은 카파 경쇄 불변 영역이다. 일부 양태에서, 경쇄 불변 영역은 람다 경쇄 불변 영역이다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 전장 항체이다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항원-결합 단편이다. 일부 양태에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, 단일쇄 Fv(scFv), 이황화 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트라이어바디(triabody), 다이어바디(diabody), 단일-도메인 항체, (scFv)2 또는 scFv-Fc를 포함한다.
일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 단리된다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 단클론성이다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 재조합체이다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2를 중화하지 않는다. 일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 슈도바이러스를 중화하지 않는다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 표지를 더 포함한다. 일부 양태에서, 상기 표지는 효소 표지, 금 입자, 면역형광 표지, 화학발광 표지, 인광 표지, 방사성 표지, 아비딘/비오틴, 유색 입자 및 자기 입자로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 상기 표지는 효소 면역분석법, 측방 유동 시험, 방사면역분석법, 웨스턴 블롯 분석법, 면역형광 분석법, 면역침강 분석법, 화학발광 분석법, 세포측정법 또는 면역조직화학적 분석법에 의해 검출된다.
일부 양태에서, 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 폴리펩티드가 단리된다. 일부 양태에서, 폴리펩티드는 재조합적으로 생성되거나 화학적으로 합성된다. 일부 양태에서, 폴리펩티드를 포함하는 삼량체가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 삼량체가 단리된다. 일부 양태에서, 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 벡터가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드, 본원에 제공된 벡터, 또는 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 제1 벡터 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 제2 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, (a) 본원에 제공된 세포를 배양하는 단계 및 (b) 상기 배양된 세포로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 단백질을 단리하는 단계를 포함하는, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 본원에 제공된 단백질을 제조하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 샘플 내에서 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 검출하는 방법으로서, 상기 샘플을 본원에 제공된 폴리펩티드 또는 삼량체와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공되며, 선택적으로 상기 방법은 폴리펩티드 또는 삼량체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 사이의 결합을 검출하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 샘플은 생물학적 샘플이다. 일부 양태에서, 검출 방법은 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)이다. 일부 양태에서, 상기 검출 방법은 측방 유동 분석법이다. 일부 양태에서, 샘플은 인간 대상체로부터 유래된다. 일부 양태에서, 샘플은 IgG 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유한다. 일부 양태에서, 샘플은 IgM 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유한다.
일부 양태에서, 본원에 제공된 방법은 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대조군으로 사용하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, (i) 본원에 제공된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 본원에 제공된 삼량체, 또는 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드 및 (ii) SARS-CoV-2에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 키트는 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 양태에서, 키트는 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 SARS-Co-V2 스파이크 단백질 항원을 포함한다. 일부 양태에서, 키트는 사용 또는 판매 승인을 반영하는 안내문을 포함한다.
도 1은 상이한 질환 단계에 있는 환자의 바이러스 RNA 및 항체의 양성 비율의 동역학을 나타낸다.
도 2는 SARS2 삼량체(왼쪽 그래프) 및 SARS 수용체 결합 도메인(RBD)(오른쪽 그래프)에 대한 CV1-CV13 및 R347(대조군) 항체의 결합을 나타낸다.
도 3은 CV1-CV12 항체가 슈도바이러스를 중화시키지 않는다는 것을 나타낸다. MEDI8897은 항호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 항체이다. 안지오텐신 전환 효소-2(ACE2)는 SARS-CoV-2의 수용체이다.
도 4는 CV7 항체의 IgG 및 IgM 형식이 ELISA 분석법에서 일관되게 긍정적인 결과를 생성함을 나타낸다.
도 5는 스파이크 단백질에 결합하는 IgG 항체에 대한 ELISA의 특이성을 나타낸다.
도 6은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체를 검출하기 위한 분석법에 사용될 수 있는 단계를 나타낸다.
SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 단클론성 항체) 및 이의 항원-결합 단편, 및 이의 제조, 선택 및 이용 방법이 본원에 제공된다.
1.1 용어
용어 "항체"는 면역글로불린 분자의 가변 영역 내의 적어도 하나의 항원 인식 부위를 통해 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 또는 전술한 것들의 조합과 같은 표적을 인식하고 이에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 의미한다. 본원에 사용되는 용어 "항체"는 항체가 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 온전한 다클론성 항체, 온전한 단클론성 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마, 및 뮤로 지칭되는 이들의 중쇄 불변 도메인의 독자성을 기반으로 하는, 5가지 주요 면역글로불린 클래스 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM, 또는 이의 하위 클래스(이소형)(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 중 임의의 것일 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린은 상이하면서도 널리 공지되어 있는 서브유닛 구조 및 3차원 형상을 갖는다. 항체는 네이키드 항체이거나, 독소, 방사성 동위원소 등과 같은 다른 분자에 접합될 수 있다.
용어 "항체 단편"은 온전한 항체의 일부분을 지칭한다. "항원-결합 단편", "항원-결합 도메인", 또는 "항원-결합 영역"은 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 지칭한다. 항원-결합 단편은 온전한 항체의 항원성 결정 영역(예를 들어, 상보성 결정 영역(CDR))을 함유할 수 있다. 항체의 항원 결합 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 선형 항체, 및 단쇄 항체를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 항체의 항원 결합 단편은 임의의 동물 종, 예를 들어, 설치류(예를 들어, 마우스, 래트, 또는 햄스터) 및 인간으로부터 유래할 수 있거나, 인위적으로 제조할 수 있다.
용어 "항-SAR2-CoV-2 항체," "SARS-CoV-2 항체" 및 "SARS-CoV-2에 결합하는 항체"는 SARS-CoV-2에 결합할 수 있는 항체를 지칭하기 위해 본원에서 상호 호환적으로 사용된다. 관련 없는 비-SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 SARS-CoV-2 항체의 결합 정도는, 예를 들어, ForteBio 또는 Biacore를 이용하여 측정될 때 SARS-CoV-2에 대한 항체 결합의 약 10% 미만일 수 있다. 본원에 제공된 일부 양태에서, SARS-CoV-2 항체는 또한 SARS-1에 결합할 수 있다. 본원에 제공된 일부 양태에서, SARS-CoV-2 항체는 SARS-1에 결합하지 않는다.
용어 "SAR2-CoV-2 항체의 항-스파이크 단백질", "SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체" 및 "SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체"는 항체가 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합함에 있어서 진단제로서 유용하도록 충분한 친화도로 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합할 수 있는 항체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 관련 없는 비-SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체의 결합 정도는, 예를 들어, ForteBio 또는 Biacore를 이용하여 측정될 때 SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 항체 결합의 약 10% 미만일 수 있다. 본원에 제공된 일부 양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체는 또한 SARS-1의 스파이크 단백질에 결합할 수 있다. 본원에 제공된 일부 양태에서, SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체는 SARS-1의 스파이크 단백질에 결합하지 않는다.
"단클론성" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단일 항원 결정기 또는 에피토프의 고도로 특이적인 인식 및 결합에 관련된 동종 항체 또는 항원-결합 단편 집단을 지칭한다. 이는 전형적으로 상이한 항원 결정기들에 대한 상이한 항체들을 포함하는 다클론성 항체와 대조된다. 용어 "단클론성 항체" 또는 이의 항원-결합 단편은 온전한 단클론성 항체와 전장 단클론성 항체뿐만 아니라 항체 단편(예컨대 Fab, Fab', F(ab')2, Fv), 단일 쇄(scFv) 돌연변이체, 항체 일부를 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 임의의 다른 변형된 면역글로불린 분자를 포괄한다. 더 나아가, "단클론성" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현 및 유전자이식 동물을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 임의의 수의 방식으로 생성된 이러한 항체 및 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 상호 호환적으로 사용되고, 당업계에서 통상적이다. 가변 영역은 전형적으로는, 항체 간에 서열이 광범위하게 상이하며 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용되는, 항체의 일부, 일반적으로는, 경쇄 또는 중쇄의 일부, 전형적으로는 성숙 중쇄에서 약 아미노-말단의 110 내지 120개의 아미노산 또는 110 내지 125개의 아미노산 및 성숙 경쇄에서 약 90 내지 115개의 아미노산을 지칭한다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 해당 영역에 집중되지만, 가변 도메인의 더 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 임의의 특정 메커니즘 또는 이론으로 구속되는 일 없이, 경쇄 및 중쇄의 CDR은 항체와 항원의 상호작용 및 특이성을 주로 담당하는 것으로 여겨진다. 일부 양태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 일부 양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 일부 양태에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 일부 양태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
본원에 사용되는 바와 같은 용어 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 서열이 초가변적이고/이거나 구조적으로 정의된 루프(초가변 루프)를 형성하고/하거나 항원-접촉 잔기를 포함하는 항체 가변 도메인 영역 각각을 지칭한다. 항체는 6개의 CDR, 예를 들어, VH에서 3개 및 VL에서 3개를 포함할 수 있다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 상호 호환적으로 사용되어 항체의 경쇄 가변 영역을 지칭한다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 상호 호환적으로 사용되어 항체의 중쇄 가변 영역을 지칭한다.
용어 "Kabat 넘버링" 및 유사한 용어는 당업계에서 인지되고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 지칭한다. 일부 양태에서, CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다(예를 들면, 문헌[Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391] 및 [Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조). Kabat 넘버링 시스템을 사용하여, 항체 중쇄 분자 내의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35에 존재하고, 이는 선택적으로, 35(Kabat 넘버링 체계에서 35A 및 35B로서 지칭됨)(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65(CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102(CDR3) 다음에, 1 또는 2개 추가의 아미노산을 포함할 수 있다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하여, 항체 경쇄 분자 내의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56(CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97(CDR3)에 존재한다.
대신, Chothia는 구조적 루프의 위치를 지칭한다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Kabat 넘버링 규칙을 사용하여 넘버링했을 때 Chothia CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34로 달라진다(이는 Kabat 넘버링 체계가 삽입을 H35A 및 H35B에 위치시키기 때문이다; 35A와 35B가 존재하지 않는 경우, 루프는 32번에서 종결되고; 35A만 존재할 경우, 루프는 33번에서 종결되며; 35A 및 35B 둘 다 존재할 경우, 루프는 34번에서 종결된다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조적 루프 사이의 절충을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된다.
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본원에 사용된 바와 같이, 용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 상호 호환적인 것으로, 당업계에서의 통상적인 의미를 갖는다. 불변 영역은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만 Fc 수용체와의 상호 작용과 같은 다양한 이펙터(effector) 기능을 나타낼 수 있는 항체 부분, 예를 들어, 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복실 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 보다 보존된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 양태에서, 항체 또는 항원-결합 단편은 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC)에 충분한 불변 영역 또는 이의 일부를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "중쇄"는, 항체와 관련하여 사용된 경우, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초한 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ), 및 뮤(μ)를 지칭할 수 있으며, 이는 각각 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 부류(IgG의 하위 부류, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함)를 형성한다. 중쇄 아미노산 서열은 당업계에 널리 공지되어 있다. 일부 양태에서, 중쇄는 인간 중쇄이다.
본원에 사용된 용어 "경쇄"는, 항체와 관련하여 사용된 경우, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초한 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 카파(κ) 또는 람다(λ)를 지칭할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 널리 공지되어 있다. 일부 양태에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
용어 "키메라" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 아미노산 서열이 둘 이상의 종으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다. 전형적으로, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변 부위는 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 가진, 포유류의 한 종(예를 들면, 마우스, 래트, 토끼 등)으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 가변 부위에 상응하는 반면, 불변 부위는 그 종에서 면역 반응을 유발하는 것을 피하기 위해 또 다른 종(통상적으로 인간)으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 서열에 상동성이다.
용어 "인간화" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 최소 비-인간(예를 들어, 뮤린) 서열을 포함하는 특정 면역글로불린 쇄, 키메라 면역글로불린 또는 이의 단편인 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체 또는 항원-결합 단편의 형태를 지칭한다. 전형적으로, 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 비-인간 종(예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 햄스터)의 CDR로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린("CDR 접합")이다(Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-327 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534-1536 (1988)). 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 부위(FR) 잔기는 원하는 특이성, 친화도, 및 능력을 갖는 비-인간 종으로부터의 항체 또는 단편 내 상응하는 잔기로 대체된다. 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fv 프레임워크 영역에서 및/또는 대체된 비-인간 잔기 내에서 추가적인 잔기의 치환에 의해 더 변형되어 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 특이성, 친화도 및/또는 능력을 개선하고 최적화할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 비-인간 면역글로불린에 상응하는 CDR 영역을 전부, 또는 실질적으로 전부 함유하는, 적어도 하나의, 전형적으로는 2개 또는 3개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이나, FR 영역의 전부, 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 공통 서열의 것이다. 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 적어도 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 일부분, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 일부를 포함할 수 있다. 인간화 항체를 생성하는 데 사용되는 방법의 예는 미국 특허 제5,225,539호; 문헌[Roguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 91(3):969-973 (1994)], 및 문헌[Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895-904 (1996)]에 기재되어 있다. 일부 양태에서, "인간화 항체"는 리서페이싱(resurfaced) 항체이다.
용어 "인간" 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 면역글로불린 유전자 좌위로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 의미하며, 이러한 항체 또는 항원-결합 단편은 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 생성된다. 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 이런 정의는 온전한 또는 전장 항체 및 이의 단편을 포함한다.
"결합 친화도"는 일반적으로 분자의 단일 결합 부위(예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편)와 이의 결합 상대(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용 총 합계의 강도를 지칭한다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용되는 바와 같은 "결합 친화도"는 결합쌍의 구성원(예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 상대 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타낼 수 있다. 친화도는, 평형해리상수(KD), 및 평형결합상수(KA)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는, 당업계에 공지된 다수의 방법으로 측정 및/또는 표현될 수 있다. KD는 koff/kon의 몫에서 계산되는 반면, KA는 kon/koff의 몫으로부터 계산된다. kon은 예를 들어, 항원에 대한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합 속도 상수를 지칭하며, koff는 예를 들어, 항원으로부터의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 해리를 지칭한다. kon 및 koff는 BIAcore® 또는 KinExA와 같이 당업자에게 공지된 기법에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "에피토프"는 당해 분야의 용어로, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 지칭한다. 에피토프는, 예를 들어, 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나(선형 또는 인접 에피토프), 또는 에피토프는 예를 들어, 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 2개 이상의 비-인접 영역으로부터 합칠 수 있다(형태적, 비-선형, 불연속, 또는 비-인접 에피토프). 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 결합하는 에피토프는, 예를 들면, NMR 분광학, X-선 회절 결정학 연구, ELISA 분석, 질량 분광분석법(예를 들어, 액체 크로마토그래피 전기분무 질량 분광분석법)과 결합된 수소/중수소 교환, 어레이 기반의 올리고펩티드 스캐닝 분석, 및/또는 돌연변이 유발 맵핑(예를 들어, 부위 지정 돌연변이 유발 맵핑)으로 결정할 수 있다. X선 결정학의 경우, 결정화는 당해 분야에서 공지된 임의의 방법을 이용하여 달성될 수 있다(예를 들어, 문헌[Gieg
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R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303]). 항체/이의 항원-결합 단편:항원 결정은 잘 알려진 X-선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있고, X-PLOR(Yale University, 1992, distributed by Molecular Simulations, Inc.; 예를 들어, Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,; U.S. 2004/0014194 참조), 및 BUSTER(Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323)와 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 정제될 수 있다. 돌연변이 유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 이용하여 달성될 수 있다. 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 기법을 비롯한 돌연변이유발 기법의 설명에 대해 예를 들어, 문헌[Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 및 Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085]을 참조한다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는" 항체는 참조 항체와 동일한 아미노산 잔기에 결합하는 항체를 지칭한다. 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체의 능력은 수소/중수소 교환 분석법에 의해 결정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Coales et al. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2009; 23: 639-647] 참조).
본원에 사용된 용어 "면역특이적 결합", "면역특이적 인식", "특이적 결합", 및 "특이적 인식"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 관련하여 유사한 용어이다. 이들 용어는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 자신의 항원-결합 도메인을 통해 에피토프에 결합함을 나타내고, 이 결합이 항원 결합 도메인과 에피토프 사이에 약간의 상보성을 수반함을 나타낸다. 따라서, 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는 또한 하나 이상의 관련 바이러스(예를 들어, SARS-1)의 스파이크 단백질에 결합할 수 있고/있거나 또한 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 변이체에 결합할 수 있지만, 관련 없는, 비-SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 대한 결합 정도가, 예를 들어, ForteBio 또는 Biacore를 이용하여 측정된 바와 같은 SARS-CoV-의 스파이크 단백질에 대한 항체 결합의 약 10% 미만이다.
항체는 이것이 어느 정도로 에피토프에 대한 참조 항체의 결합을 차단하는 정도까지 해당 에피토프 또는 중첩하는 에피토프에 우선적으로 결합하는 경우, 주어진 에피토프에 대한 참조 항체의 결합을 "경쟁적으로 저해한다"고 말한다. 경쟁적 억제는 당해 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 경쟁 ELISA 분석에 의해 결정될 수 있다. 항체는 주어진 에피토프에 대한 참조 항체의 결합을 적어도 90%, 적어도 80%, 적어도 70%, 적어도 60%, 또는 적어도 50% 경쟁적으로 저해하는 것으로 언급될 수 있다.
"단리된" 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 자연에서 발견되지 않는 형태로 존재하는 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물이다. 단리된 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 이들이 자연에서 발견된 형태로는 더 이상 존재하지 않을 정도까지 정제된 단리된 폴리펩티드, 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물을 포함한다. 일부 양태에서, 단리된 항체, 폴리뉴클레오티드, 벡터, 세포 또는 조성물은 실질적으로 순수하다. 본원에 사용되는 바와 같은 "실질적으로 순수한"은 적어도 50% 순수(즉, 오염물질이 없음), 적어도 90% 순수, 적어도 95% 순수, 적어도 98% 순수 또는 적어도 99% 순수한 물질을 지칭한다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 임의의 길이의 아미노산의 중합체를 지칭하기 위하여 본 명세서에서 상호 호환가능하게 사용된다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있으며, 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 비-아미노산에 의해 방해될 수 있다. 상기 용어는 또한 천연적으로 또는 개입에 의해; 예를 들어, 이황화 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화 또는 임의의 다른 조작 또는 변형, 예컨대 표지화 성분과의 컨쥬게이션에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다. 예를 들어, (예를 들어, 비천연 아미노산 등을 포함하는) 아미노산의 하나 이상의 유사체뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 개질도 함유하는 폴리펩티드도 이러한 정의 내에 포함된다. 본 발명의 폴리펩티드는 항체를 기반으로 하기 때문에, 일부 양태에서 폴리펩티드는 단쇄로서 또는 회합된 쇄로서 나타날 수 있음이 이해된다.
"동일성 백분율"은 두 서열(예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 사이의 동일성 정도를 지칭한다. 동일성 백분율은 두 서열을 정렬하고, 갭을 도입하여 서열 사이의 동일성을 최대화함으로써 결정될 수 있다. 정렬은 당업계에 공지된 프로그램을 이용하여 생성될 수 있다. 본 명세서의 목적을 위해, 뉴클레오티드 서열의 정렬은 디폴트 파라미터로 설정된 blastn 프로그램 세트에 의해 수행될 수 있고, 아미노산 서열의 정렬은 디폴트 파라미터로 설정된 blastp 프로그램에 의해 수행될 수 있다(월드와이드 웹, ncbi.nlm.nih.gov 상의 미국 국립생물정보센터(NCBI) 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 소수성 측쇄를 갖는 아미노산은 알라닌(A), 아이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M), 발린(V), 페닐알라닌(F), 트립토판(W) 및 타이로신(Y)을 포함한다. 지방족 소수성 측쇄를 갖는 아미노산은 알라닌(A), 아이소류신(I), 류신(L), 메티오닌(M) 및 발린(V)을 포함한다. 방향족 소수성 측쇄를 갖는 아미노산은 페닐알라닌(F), 트립토판(W) 및 타이로신(Y)을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 극성 중성 측쇄를 갖는 아미노산은 아스파라긴(N), 시스테인(C), 글루타민(Q), 세린(S) 및 트레오닌(T)을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 하전된 측쇄를 갖는 아미노산은 아스파르트산(D), 글루탐산(E), 아르기닌(R), 히스티딘(H) 및 리신(K)을 포함한다. 산성의 하전된 측쇄를 갖는 아미노산은 아스파르트산(D) 및 글루탐산(E)을 포함한다. 염기성의 하전된 측쇄를 갖는 아미노산은 아르기닌(R), 히스티딘(H), 및 리신(K)을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"는 임의의 세포 유형, 예를 들어, 1차 세포, 배양물 내 세포 또는 세포주로부터의 세포일 수 있다. 일부 양태에서, 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 형질감염된 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은, 예를 들어, 후속 세대에서 일어날 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈에 핵산 분자의 통합으로 인해, 핵산 분자로 형질감염된 모 세포와 동일하지 않을 수도 있다.
용어 "약제학적 제형"은, 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 허용하는 형태이고, 제형이 투여될 대상체에게 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 추가의 성분을 포함하지 않는 제제를 지칭한다. 이 제형은 멸균될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 상호 호환적으로 사용된다. 대상체는 동물일 수 있다. 일부 양태에서, 대상체는 포유류, 예컨대, 비-인간 동물(예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트, 마우스, 원숭이 또는 다른 영장류 등)이다. 일부 양태에서, 대상체는 인간이다.
본 명세서 및 청구범위에서 사용되는 단수형은 문맥에 분명히 달리 명시되지 않는 한, 복수형을 포함한다.
본원에 "포함하는"이라는 어구와 함께 양상이 기재되어 있는 경우에, "~으로 이루어진" 및/또는 "~으로 본질적으로 이루어진"에 관해 기재된 다른 유사한 양상도 제공된다는 것이 이해된다. 본 개시내용에서, "포함하다(comprise)", "포함하는(comprising)", "함유하는" 및 "갖는" 등은 "포함하다(include)", "포함하는(including)" 등을 의미할 수 있고; "본질적으로 이루어진" 또는 "본질적으로 이루어지다"는, 선행 기술 양상을 제외하고, 열거된 것보다 더 많은 것의 존재에 의해 열거된 것의 기본적 또는 신규한 특징이 변화되지 않는 한, 열거된 것보다 더 많은 것의 존재를 허용하는 개방형이다.
구체적으로 언급되거나, 문맥상 명백하지 않다면, 본원에 사용된 용어 "또는"은 포함의 의미로 이해된다. 본 명세서에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A", 및 "B"를 포함하고자 한 것이다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는"은 다음의 양태 각각을 포함하고자 한 것이다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "약" 및 "대략"은 수치 값 또는 수치 범위를 수식하기 위해 사용될 때, 값 또는 범위의 10% 초과까지 및 10% 미만까지의 편차가 열거된 값 또는 범위의 의도된 의미 내에 포함된다는 것을 나타낸다. 양태가 "약" 또는 "대략" 수치 값 또는 범위로 본 명세서에 기재되는 곳이면 어디든지 ("약" 없이) 특정 수치 값 또는 범위를 언급하는 유사한 양태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
본원에 제공된 임의의 조성물 또는 방법은 본원에 제공된 임의의 다른 조성물 및 방법 중 하나 이상과 조합될 수 있다.
1.2 SARS-CoV-2 스파이크 단백질
SARS-CoV-2에서의 천연 유래 스파이크 단백질의 아미노산 서열은 서열번호 100에 제공된다:
Figure pct00003
서열번호 100의 아미노산 1-12는 스파이크 단백질의 신호 펩티드이다. 따라서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 성숙 형태는 서열번호 100의 아미노산 13-1273을 포함한다. 서열번호 100의 아미노산 13-1213은 세포외 도메인에 상응하고; 아미노산 1214-1234는 막관통 도메인에 상응하며; 아미노산 1235-1273은 세포질 도메인에 상응한다.
개선된 특성, 예를 들어 (예를 들어, 세포 배양에서의) 개선된 발현 및 개선된 항-SARS-CoV-2 항체 검출 효능을 갖는 스파이크 단백질이 본원에 제공된다. 한 양태에서, SARS-CoV-2 단백질은 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00004
한 양태에서, 본원에 제공된 단백질은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 한 양태에서, 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 포함하는 삼량체가 본원에 제공된다.
1.3 항체 및 이의 항원-결합 단편
구체적 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체(예를 들어, 단클론성 항체, 예컨대, 인간 항체) 및 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 및/또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질에 결합할 수 있다. 일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 100에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 및/또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 포함하는 삼량체에 결합할 수 있다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS2 삼량체에 결합할 수 있다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인(RBD, 서열번호 100의 아미노산 334-526)에 결합할 수 있다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS2 삼량체 및 스파이크 단백질의 수용체 결합 도메인(RBD)에 결합할 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질에 결합할 수 있다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 (예를 들어, 각각 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 갖는 3개의 단백질을 포함하는) SARS2 삼량체에 결합할 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개 CDR(즉, 항체의 3개의 VH CDR 및 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 85% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 85% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 96% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 97% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 97% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 98% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 98% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 1 및 2에 열거된 항체의 6개의 CDR(즉, 표 1에 열거된 항체의 3개의 VH CDR 및 표 2에 열거된 동일한 항체의 3개의 VL CDR)을 포함하고, 표 3의 동일한 항체의 VH 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 VH 및 표 4의 동일한 항체의 VL 서열과 적어도 99% 동일한 서열을 포함하는 VL을 포함한다.
[표 1]
Figure pct00005
[표 2]
Figure pct00006
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 3 및 4에 열거된 항체의 가변 중쇄(VH) 및/또는 가변 경쇄(VL)를 포함하는 항체와 동일한 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2 항체의 스파이크 단백질에 대한 참조 항체의 결합을 경쟁적으로 억제하고, 여기서 참조 항체는 표 3에 열거된 가변 중쇄(VH) 및/또는 표 3 및 4에 열거된 항체의 가변 경쇄(VL)를 포함한다.
[표 3]
Figure pct00007
[표 4]
Figure pct00008
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 3에 열거된 항체의 VH를 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 4에 열거된 항체의 VL을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하고, 표 3 및 4에 열거된 항체의 VH 및 VL(즉, 항체의 VH 및 동일한 항체의 VL)을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이의 VL 도메인 단독, 또는 이의 VH 도메인 단독에 의해, 또는 이의 3개의 VL CDR 단독, 또는 이의 3개의 VH CDR 단독에 의해 기재될 수 있다. 예를 들어, 본래 항체의 친화도만큼 높거나 더 높은 친화도를 갖는 인간화 항체 변이체를 생성하는 인간 경쇄 또는 중쇄 라이브러리로부터 각각 상보성 경쇄 또는 중쇄를 확인하는 것에 의한 마우스 항-αvβ3 항체의 인간화를 기재하는, 문헌[Rader C et al., (1998) PNAS 95: 8910-8915]을 참조하며, 이는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다. 또한 특이적 VL 도메인(또는 VH 도메인)을 이용하고 상보성 가변 도메인에 대한 라이브러리를 선별함으로써 특정 항원에 결합하는 항체를 생산하는 방법을 기재하는 문헌[Clackson T et al., (1991) Nature 352: 624-628]을 참조하며, 이는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다. 선별은 ELISA에 의해 결정할 때, 강한 결합제인, 특이적 VH 도메인에 대한 14개의 새로운 상대 및 특이적 VL 도메인에 대한 13개의 새로운 상대를 생성하였다. 또한 특이적 VH 도메인을 이용하고 상보성 VL 도메인에 대한 라이브러리(예를 들어, 인간 VL 라이브러리)를 선별함으로써 특정 항원에 결합하는 항체를 생성하고; 선택된 VL 도메인은 결국 추가적인 상보성(예를 들어, 인간) VH 도메인의 선택을 유도하는 데 사용될 수 있는, 방법을 기재하는, 문헌[Kim SJ & Hong HJ, (2007) J Microbiol 45: 572-577]을 참조하며, 이는 본 명세서에 전문이 참조에 의해 원용된다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 면역글로불린 구조적 루프의 위치를 나타내는 Chothia 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82]; 및 미국 특허 제7,709,226호 참조). 전형적으로, Kabat 넘버링 규칙을 이용할 때, Chothia CDR-H1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33, 또는 34번에 존재하고, Chothia CDR-H2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56번에 존재하고, Chothia CDR-H3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102번에 존재하는 한편, Chothia CDR-L1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34번에 존재하고, Chothia CDR-L2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하고, Chothia CDR-L3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97번에 존재한다. Kabat 넘버링 규칙을 사용하여 넘버링했을 때 Chothia CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34로 달라진다(이는 Kabat 넘버링 체계가 삽입을 H35A 및 H35B에 위치시키기 때문이다; 35A와 35B가 존재하지 않는 경우, 루프는 32번에서 종결되고; 35A만 존재할 경우, 루프는 33번에서 종결되며; 35A 및 35B 둘 다 존재할 경우, 루프는 34번에서 종결된다).
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하고, 표 3 및 4에 열거된 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체의 Chothia VH 및 VL CDR(즉, 항체의 VH 및 동일한 항체의 VL)을 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하나 이상의 CDR을 포함하며, 이때 Chothia와 Kabat CDR은 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하고 Kabat CDR과 Chothia CDR의 조합을 포함하는, 항체 및 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 문헌[Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136] 및 [Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212]에 기재된 바와 같은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다. IMGT 넘버링 체계에 따르면, VH-CDR1은 26 내지 35번 위치에 존재하고, VH-CDR2는 51 내지 57번 위치에 존재하고, VH-CDR3은 93 내지 102번 위치에 존재하고, VL-CDR1은 27 내지 32번 위치에 존재하고, VL-CDR2는 50 내지 52번 위치에 존재하고, VL-CDR3은 89 내지 97번 위치에 존재한다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하고 예를 들어, 상기 문헌[Lefranc M-P (1999)] 및 상기 문헌[Lefranc M-P et al., (1999)]에 기재된 바와 같은, 표 3 및 4에 열거된 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체의 IMGT VH 및 VL CDR(즉, 항체의 VH 및 동일한 항체의 VL)을 포함하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은 문헌[MacCallum RM et al., (1996) J Mol Biol 262: 732-745]에 따라 결정될 수 있다. 또한, 예를 들어, 문헌[Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and D
Figure pct00009
bel, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)]을 참조한다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하고, 문헌[MacCallum RM et al]의 방법에 의해 결정된 바와 같이 표 4 및 4에 열거된 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체의 VH 및 VL CDR(즉, 항체의 VH 및 동일한 항체의 VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR은, Kabat CDR과 Chothia 구조적 루프 사이의 절충을 나타내며 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular Group, Inc.)에 의해 사용되는 AbM 초가변 영역을 나타내는 AbM 넘버링 체계에 따라 결정될 수 있다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하고, AbM 넘버링 체계에 의해 결정된 바와 같이 표 3 및 4에 열거된 VH 및 VL 서열을 포함하는 항체의 VH 및 VL CDR(즉, 항체의 VH 및 동일한 항체의 VL)을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 중쇄 및/또는 경쇄를 포함하는 항체가 본원에 제공된다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예는 당업계에 기재되었고, 예를 들어, 미국 특허 제5,693,780호 및 상기 문헌[Kabat EA et al., (1991)]을 참조한다.
중쇄에 대해, 일부 양태에서, 본원에 기재된 항체의 중쇄는 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄일 수 있다. 일부 양태에서, 기재된 항체의 중쇄는 인간 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 중쇄를 포함하되, VH 도메인의 아미노산 서열은 표 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄의 불변 영역은 인간 감마(γ) 중쇄 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG1 중쇄 불변 영역)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 중쇄를 포함하되, VH 도메인의 아미노산 서열은 표 3에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄의 불변 영역은 인간 IgM 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 중쇄를 포함하되, VH 도메인의 아미노산 서열은 표 3에 제시된 서열을 포함하고, 중쇄의 불변 영역은 본원에 기재되거나 당업계에 공지된 인간 중쇄의 아미노산을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄는 인간 카파 경쇄 또는 인간 람다 경쇄이다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 경쇄를 포함하되, VL 도메인의 아미노산 서열은 표 4에 제시된 서열을 포함하고, 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄를 포함하되, VL 도메인의 아미노산 서열은 표 4에 제시된 서열을 포함하고, 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체의 경쇄는 람다 경쇄이다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 경쇄를 포함하되, VL 도메인의 아미노산 서열은 표 4에 제시된 서열을 포함하고, 경쇄의 불변 영역은 인간 람다 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 본원에 기재된 임의의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하되, 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 또는 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체는 본원에 기재된 임의의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하되, 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 면역글로불린 분자의 임의의 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 양태에서, 불변 영역은 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 면역글로불린 분자의 임의의 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2를 중화시키지 않는다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 슈도바이러스를 중화시키지 않는다.
경쟁 결합 분석은 두 항체가 중복 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 경쟁적 결합은 시험 하의 면역글로불린이 공통 항원, 예컨대, SARS-CoV-2 또는 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 저해하는 분석에서 결정될 수 있다. 예를 들어 다음과 같은 다양한 유형의 경쟁적 결합 분석이 알려져 있다: 고체상 직접 또는 간접 방사면역분석(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(문헌[Stahli C et al., (1983) Methods Enzymol 9: 242-253] 참조); 고체상 직접 비오틴-아비딘 EIA(문헌[Kirkland TN et al., (1986) J Immunol 137: 3614-9] 참조); 고체상 직접 표지 분석, 고체상 직접 표지 샌드위치 분석(문헌[Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); I-125 표지를 사용하는 고체상 직접 표지 RIA(문헌[Morel GA et al., (1988) Mol Immunol 25(1): 7-15] 참조); 고체상 직접 비오틴-아비딘 EIA(문헌[Cheung RC et al., (1990) Virology 176: 546-52] 참조); 및 직접 표지 RIA(문헌[Moldenhauer G et al., (1990) Scand J Immunol 32: 77-82]). 전형적으로, 이러한 분석은 비표지 시험 면역글로불린 및 표지된 참조 면역글로불린 중 하나를 보유하는 세포 또는 고체 표면에 결합된 정제된 항원의 사용을 수반한다. 경쟁적 저해는 시험 면역글로불린의 존재 중 세포 또는 고체 표면에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정할 수 있다. 보통 시험 면역글로불린은 과량으로 존재한다. 보통, 경쟁 항체가 과량으로 존재할 때, 적어도 50 내지 55%, 55 내지 60%, 60 내지 65%, 65 내지 70%, 70 내지 75% 이상만큼 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 저해할 것이다. 경쟁 결합 분석은 표지 항원 또는 표지 항체 중 하나를 이용하여 다수의 상이한 형식으로 구성될 수 있다. 이 분석의 공통 형태에서, 항원은 96-웰 플레이트 상에 고정된다. 이어서, 비표지 항체가 항원에 대한 표지된 항체의 결합을 차단하는 능력은 방사성 또는 효소 표지를 이용하여 측정된다. 추가적인 상세한 설명을 위해, 예를 들어, 문헌[Wagener C et al., (1983) J Immunol 130: 2308-2315; Wagener C et al., (1984) J Immunol Methods 68: 269-274; Kuroki M et al., (1990) Cancer Res 50: 4872-4879; Kuroki M et al., (1992) Immunol Invest 21: 523-538; Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11: 391-407]; 및 상기 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors, pp. 386-389]을 참조한다.
일부 양태에서, 경쟁 분석은, 예를 들어, 문헌[Abdiche YN et al., (2009) Analytical Biochem 386: 172-180]에 의해 기재되는 것과 같은 '탠덤 접근'에 의해, 표면 플라즈몬 공명(BIAcore®)을 이용하여 수행되며, 이에 의해 항원은 칩 표면, 예를 들어, CM5 센서 칩 상에 고정되고, 이어서, 항체 또는 항원-결합 단편은 칩 위에서 실행된다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 본원에 기재된 바와 같은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체와 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해, 항체 또는 항원-결합 단편은 칩 표면 상에서 처음 실행되어 포화를 달성하고, 이어서, 잠재적 경쟁 항체가 첨가된다. 이어서, 경쟁 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합이 결정되고, 비경쟁 대조군에 대해 정량화될 수 있다.
다른 양태에서, 당업자에게 공지되거나 또는 본원에 기재된 분석(예를 들어, ELISA 경쟁 분석 또는 현탁액 분석 또는 표면 플라즈몬 공명 분석)을 이용하여 결정된 바와 같이 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 대한 결합 또는 SARS-CoV-2에 대한 결합으로부터 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 (예를 들어, 용량 의존적 방식으로) 경쟁적으로 저해하는 항체가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택되되, Fab, Fab', F(ab')2 또는 scFv는 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 또는 SARS-CoV-2에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역 서열 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. Fab, Fab', F(ab')2 또는 scFv는, 본원에 기재된 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 당업자에게 공지된 임의의 기법에 의해 생성될 수 있다.
SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 표지 또는 물질에 융합 또는 접합(예를 들어, 공유적으로 또는 비공유적으로 연결)될 수 있다. 검출 가능한 표지 또는 물질의 예는 효소 표지, 예컨대, 글루코스 옥시다제; 방사성동위원소, 예컨대, 아이오딘(125I, 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(121In) 및 테크네튬(99Tc); 발광 표지, 예컨대, 루미놀; 및 형광 표지, 예컨대, 플루오레세인 및 로다민 및 바이오틴을 포함한다. 이러한 표지된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질 또는 SARS-CoV-2 또는 SARS-CoV-2에 결합하는 항체를 검출하는데 사용될 수 있다.
1.4 단백질 및 항체 생산
SARS-CoV-2의 스파이크 단백질 및 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편은 단백질 및 항체 및 이의 항원-결합 단편의 합성을 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 화학적 합성에 의해 또는 재조합 발현 기법에 의해 생산될 수 있다. 본원에 기재된 방법은 달리 표시되지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오티드 합성 및 변형, 핵산 혼성화 및 당업계 기술의 관련 분야의 통상적인 기법을 사용한다. 이들 기법은, 예를 들어, 본원에 인용된 참고문헌에 기재되어 있으며, 문헌에서 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 문헌[Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al. , Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987, 매년 업데이트됨); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987, 매년 업데이트됨) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]을 참조한다.
일부 양태에서, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 제조하는 방법으로서, 본원에 기재된 세포 또는 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 제조하는 방법으로서, 본원에 기재된 세포 또는 숙주 세포 (예를 들어, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포 또는 숙주 세포)를 사용하여 단백질을 발현하는 (예를 들어, 재조합적으로 발현하는) 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 세포는 단리된 세포이다. 일부 양태에서, 외인성 폴리뉴클레오티드는 세포에 도입되었다. 일부 양태에서, 상기 방법은 세포, 숙주 세포 또는 배양물로부터 얻은 단백질을 분리 또는 정제하는 단계를 더 포함한다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 세포 또는 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 세포 또는 숙주 세포(본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포 또는 숙주 세포)를 이용하여 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는(예를 들어, 재조합적으로 발현시키는) 단계를 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편의 제조 방법이 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 세포는 단리된 세포이다. 일부 양태에서, 외인성 폴리뉴클레오티드는 세포에 도입되었다. 일부 양태에서, 상기 방법은 세포, 숙주 세포 또는 배양물로부터 얻은 항체 또는 항원-결합 단편을 분리 또는 정제하는 단계를 더 포함한다.
다클론성 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New York]의 챕터 11 참조).
단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하이브리도마, 재조합체 및 파지 디스플레이 기술, 효소-기반 제시 기술 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는 당업계에 공지된 매우 다양한 기법을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 당업계에 공지되고, 예를 들어, 문헌[Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)]에 교시되거나, 문헌[Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495]에 기재된 바와 같은 하이브리도마 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 본원에 기재된 항체를 선택 및 생성하기 위해 사용될 수 있는 효모-기반 제시 방법의 예는, 예를 들어, WO2009/036379A2; WO2010/105256; 및 WO2012/009568에 개시된 것을 포함하고, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
일부 양태에서, 단클론성 항체 또는 항원-결합 단편은 클론 세포(예를 들어, 재조합 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하는 하이브리도마 또는 숙주 세포)에 의해 생산된 항체 또는 항원-결합 단편이되, 항체 또는 항원-결합 단편은, 예를 들어, ELISA 또는 당업계에 공지된 다른 항원-결합 분석, 예컨대 측방 유동 분석법에 의해 또는 본원에 제공된 실시예에서 결정된 바와 같이, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합한다. 일부 양태에서, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편일 수 있다. 일부 양태에서, 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fab 단편 또는 F(ab')2 단편일 수 있다. 본원에 기재된 단클론성 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어, 문헌[Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495]에 기재된 바와 같은 하이브리도마 방법에 의해 생산될 수 있거나, 또는 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 기법을 이용하여 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 클론 세포주 및 이에 의해 발현된 단클론성 항체 및 이의 항원-결합 단편의 제조를 위한 다른 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, 상기 문헌[Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al.]의 챕터 11 참조).
본원에 기재된 항체의 항원-결합 단편은 당업자에게 공지된 임의의 기법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 Fab 및 F(ab')2 단편은 파파인(Fab 단편을 생산) 또는 펩신(F(ab')2 단편을 생산)과 같은 효소를 이용하여, 면역글로불린 분자의 단백질분해 절단에 의해 생산될 수 있다. Fab 단편은 사량체 항체 분자의 2개의 동일한 아암(arm) 중 하나에 대응하고, 중쇄의 VH 및 CH1 도메인과 짝지어진 완전한 경쇄를 포함한다. F(ab')2 단편은 힌지 영역에서 이황화 결합에 의해 연결된 사량체 항체 분자의 2개의 항원-결합 아암을 포함한다.
추가로, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 당업계에 공지된 다양한 파지 디스플레이 및/또는 효모-기반 제시 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 단백질은 이들을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 지닌 파지 입자의 표면에 디스플레이된다. 특히 VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA 서열은 동물 cDNA 라이브러리(예를 들어, 영향받은 조직의 인간 또는 뮤린 cDNA 라이브러리)로부터 증폭된다. VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA는 PCR에 의해 scFv 링커와 함께 재조합된 후, 파지미드 벡터에 클로닝된다. 벡터는 전기천공을 통해 이.콜라이(E.coli) 내에 도입되고, 이.콜라이는 조력자 파지(helper phage)로 감염된다. 이러한 방법에서 사용된 파지는 통상적으로 fd 및 M13을 포함한 사상 파지이고, VH 및 VL 도메인은 보통 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 중 어느 하나와 재조합에 의해 융합된다. 특정 항원에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 파지는 항원, 예를 들어, 표지된 항원 또는 고체 표면 또는 비드에 결합 또는 포획된 항원에 의해 선택 또는 확인될 수 있다. 본원에 기재된 항체 또는 단편을 생성하기 위해 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 문헌[Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186; Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958; Persic L et al., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280; PCT 출원 PCT/GB91/001134]; 국제 특허 출원 공개 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, 및 WO 97/13844; 및 미국 특허 제5,698,426호, 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,580,717호, 제5,427,908호, 제5,750,753호, 제5,821,047호, 제5,571,698호, 제5,427,908호, 제5,516,637호, 제5,780,225호, 제5,658,727호, 제5,733,743,호 및 제5,969,108호에 개시된 것을 포함한다.
1.4.1 폴리뉴클레오티드
일부 양태에서, 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인(예를 들어, 가변 경쇄 영역 및/또는 가변 중쇄 영역)을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 벡터, 예를 들어, 숙주 세포(예를 들어, 이.콜라이 및 포유류 세포)에서 재조합 발현을 위해 이러한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 면역특이적으로 결합하고 본원에 기재된 바와 같은 아미노산 서열뿐만 아니라 SARS-CoV-2에 대한 결합에 대해 (예를 들어, 용량-의존적 방식으로) 이러한 항체 또는 항원-결합 단편과 경쟁하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하거나, 또는 이러한 항체 또는 항원-결합 단편과 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 표 5에 열거된 중쇄 가변 영역(VH)을 암호화하는 핵산 분자 및/또는 표 6에 열거된 경쇄 가변 영역(VL)을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다.
[표 5]
Figure pct00010
Figure pct00011
[표 6]
Figure pct00012
Figure pct00013
또한, 서열번호 101의 스파이크 단백질을 암호화하거나, 예를 들어, 코돈/RNA 최적화, 이종성 신호 서열로의 대체, 및 mRNA 불안정 요소의 제거에 의해 최적화된, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 본원에 제공된다. 따라서, 코돈 변화(예를 들어, 유전자 코드의 축퇴로 인해 동일한 아미노산을 암호화하는 코돈 변화)를 도입하고/하거나 mRNA에서 억제 영역을 제거함으로써 재조합 발현을 위한 최적화된 핵산을 생성하는 방법은, 예를 들어, 미국 특허 제5,965,726호; 제6,174,666호; 제6,291,664호; 제6,414,132호; 및 제6,794,498호에 기재된 최적화 방법들을 적응시킴으로써 수행될 수 있다.
본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 당업계에 잘 공지된 방법(예를 들어, PCR 및 다른 분자 클로닝 방법)을 이용하여 적합한 공급원(예를 들어, 하이브리도마)로부터의 핵산으로부터 생성될 수 있다. 예를 들어, 알려진 서열의 3' 및 5' 말단에 혼성화 가능한 합성 프라이머를 이용하는 PCR 증폭은 관심의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포로부터 얻은 게놈 DNA를 이용하여 수행될 수 있다. 이러한 PCR 증폭 방법은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄 및/또는 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 핵산을 얻는 데 사용될 수 있다. 이러한 PCR 증폭 방법은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 가변 경쇄 영역 및/또는 가변 중쇄 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 핵산을 얻는 데 사용될 수 있다. 증폭된 핵산은, 예를 들어, 키메라 및 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하기 위해, 숙주 세포에서의 발현을 위해 그리고 추가 클로닝을 위해 벡터에 클로닝될 수 있다.
본원에 제공된 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어, RNA 형태 또는 DNA 형태일 수 있다. DNA는 cDNA, 게놈 DNA 및 합성 DNA를 포함하고, DNA는 이중가닥 또는 단일가닥일 수 있다. 단일 가닥의 경우, DNA는 암호화 가닥 또는 비암호화(안티-센스) 가닥일 수 있다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 내인성 인트론을 결여하는 cDNA 또는 DNA이다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 비천연 유래 폴리뉴클레오티드이다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 재조합적으로 생산된다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 단리된다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 실질적으로 순수하다. 일부 양태에서, 폴리뉴클레오티드는 자연적 성분으로부터 정제된다.
1.4.2 세포 및 벡터
일부 양태에서, 숙주 세포, 예를 들어 포유동물 세포에서 재조합 발현을 위한 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 본원에 제공된다. 또한, 세포, 예를 들어, 스파이크 단백질 또는 스파이크 단백질의 삼량체를 재조합적으로 발현하기 위한 이러한 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본원에 제공된다. 특정 양태에서, 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 또는 이의 삼량체를 생산하는 방법으로서, 숙주 세포에서 이러한 단백질을 발현시키는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 숙주 세포에서, 예를 들어, 포유류 세포에서 재조합 발현을 위해 스파이크에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 본원에 제공된다. 또한 스파이크에 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 재조합적으로 발현시키기 위한 이러한 벡터를 포함하는, 세포, 예를 들어, 숙주 세포가 본원에 제공된다. 특정 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 방법으로서, 숙주 세포에서 이러한 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질의 재조합 발현은 스파이크 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 발현 벡터의 작제를 수반한다. 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 얻어지면, 이의 단백질의 생산을 위한 벡터는 당업계에 잘 공지된 기법을 이용하여 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 스파이크 단백질-암호화 뉴클레오티드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드를 발현시킴으로써 단백질을 제조하는 방법이 본원에 기재되어 있다.
일부 양태에서, 스파이크에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 중쇄 또는 경쇄)의 재조합 발현은 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 작제를 수반한다. 일단 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인(예를 들어, 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 얻어지면, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생산을 위한 벡터는 당업계에 잘 공지된 기법을 이용하여 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 뉴클레오티드 서열을 암호화하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄)를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 발현시킴으로써 단백질을 제조하는 방법이 본원에 기재되어 있다.
단백질- 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 도메인(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄)-암호화 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 포함하는 발현 벡터를 작제하는 데에는, 당업자에게 잘 공지된 방법이 사용될 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어, 시험관 내 재조합 DNA 기법, 합성 기법 및 생체 내 유전자 재조합을 포함한다. 프로모터에 작동 가능하게 연결된, 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 중쇄 또는 경쇄, 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 복제 가능한 벡터가 또한 제공된다. 이러한 벡터는, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 불변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 86/05807 및 WO 89/01036; 및 미국 특허 제5,122,464호 참조), 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 가변 도메인은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄와 경쇄 둘 다의 발현을 위해 이러한 벡터에 클로닝될 수 있다.
발현 벡터는 통상적인 기법에 의해 세포(예를 들어, 숙주 세포)에 전달될 수 있고, 이어서, 얻어진 세포는 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1 내지 4에 제공된 항체의 6개의 CDR, VH, VL, VH 및 VL, 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 또는 이의 도메인(예를 들어, 표 3 및 4에 제공된 항체의 VH, VL, VH 및 VL, 중쇄 또는 경쇄)을 생산하기 위해 통상적인 기법에 의해 배양될 수 있다. 따라서, 숙주 세포에서 이러한 서열의 발현을 위한 프로모터에 작동 가능하게 연결된 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1 내지 4에 제공된 항체의 6개 CDR, VH, VL, VH 및 VL, 중쇄, 경쇄 또는 중쇄와 경쇄를 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 또는 이의 도메인(예를 들어, 표 3 및 4에 제공된 항체의 VH, VL, VH 및 VL, 중쇄, 또는 경쇄)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포가 본원에 제공된다. 아래에 상세히 설명하는 바와 같이, 일부 양태에서, 이중-쇄 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 발현을 위해, 개별적으로 중쇄와 경쇄를 둘 다 암호화하는 벡터가 전체 면역글로불린의 발현을 위해 숙주 세포에서 공동 발현될 수 있다. 일부 양태에서, 숙주 세포는 본원에 기재된 항체의 중쇄와 경쇄 둘 다(예를 들어, 표 1 내지 4에 제공된 항체의 중쇄 및 경쇄), 또는 이의 도메인(예를 들어, 표 3 내지 4에 제공된 항체의 VH 및 VL)을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 함유한다. 일부 양태에서, 숙주 세포는 두 상이한 벡터, 즉, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터, 및 본원에 기재된 항체(예를 들어, 표 1 및 2에 제공된 항체의 6개의 CDR을 포함하는 항체)의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 이의 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 함유한다. 일부 양태에서, 제1 숙주 세포는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터를 포함하고, 제2 숙주 세포는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1 및 2에 제공된 항체의 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 포함한다. 일부 양태에서, 중쇄/중쇄 가변 영역은 제2 세포의 경쇄/경쇄 가변 영역과 회합된 제1 세포에 의해 발현되어 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1 및 2에 제공된 항체의 6개 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 형성한다. 일부 양태에서, 이러한 제1 숙주 세포 및 이러한 제2 숙주 세포를 포함하는 숙주 세포 집단이 본원에 제공된다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄/경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터, 및 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1 및 2에 제공된 항체의 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)의 중쇄/중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터의 집단이 본원에 제공된다. 대안적으로, 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 모두를 암호화하고 발현시킬 수 있는 단일 벡터가 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 예를 들어, 숙주 세포, 예를 들어 포유동물 세포에서의 재조합 발현을 위한, 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 본원에 제공된다.
본원에 기재된 단백질 및 항체 및 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1 및 2에 제공된 항체의 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 발현시키기 위해 다양한 숙주-발현 벡터 시스템이 이용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,807,715호 참조). 이러한 숙주-발현 시스템은 관심 암호화 서열이 생산된 후 정제될 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오티드 암호화 서열로 형질전환되거나 형질감염되는 경우, 원 위치에서 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시킬 수 있는 세포를 나타낸다. 이들에는 비제한적으로 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 미생물, 예컨대 박테리아(예로, 이.콜라이 및 바실러스 서브틸리스(B. subtilis)); 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모(예를 들어, 사카로마이세스 피키아(Saccharomyces Pichia)); 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예로, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예로, 컬리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염되거나 재조합 플라스미드 발현 벡터(예로, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템(예를 들어, 녹조류, 예컨대, 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii)); 또는 포유류 세포의 게놈에서 유도된 프로모터(예로, 메탈로티오나인 프로모터) 또는 포유류 바이러스에서 유도된 프로모터(예로, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)를 함유하는 재조합 발현 구축물을 보유하는 포유류 세포 시스템(예를 들어, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), CHO, BHK, MDCK, HEK 293, NS0, PER.C6, VERO, CRL7O3O, HsS78Bst, HeLa 및 NIH 3T3, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20 및 BMT10 세포)이 포함된다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 단백질 또는 항체 및 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 표 1에 제공된 항체의 CDR을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 발현시키기 위한 세포는 CHO 세포, 예를 들어, CHO GS System™(Lonza)로부터의 CHO 세포이다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 단백질 또는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 발현하기 위한 세포는 인간 세포, 예를 들어 인간 세포주이다. 일부 양태에서, 포유류 발현 벡터는 pOptiVEC™ 또는 pcDNA3.3이다. 일부 양태에서, 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위한 박테리아 세포, 예컨대 에스케리키아 콜라이 또는 진핵 세포(예를 들어, 포유류 세포), 진핵생물 세포가 재조합 항체 분자의 발현을 위해 이용된다. 예를 들어, 포유류 세포, 예컨대, 인간 사이토메갈로바이러스로부터의 주요 중간 조기 유전자 프로모터 요소와 같은 벡터와 함께 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포가 항체를 위해 효과적인 발현 시스템이다(문헌[Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-105; 및 Cockett MI et al., (1990) Biotechnology 8: 662-667]). 일부 양태에서, 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CHO 세포 또는 NS0 세포에 의해 생산된다.
또한, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 목적하는 특정한 방식으로 유전자 산물을 변형하고 가공하는 숙주 세포 균주가 선택될 수 있다. 단백질 산물의 이러한 변형(예로, 글리코실화) 및 가공(예로, 절단)은 단백질의 기능에 기여할 수 있다. 이를 위해, 유전자 산물의 1차 전사체의 적절한 가공, 글리코실화 및 인산화를 위한 세포 기구(cellular machinery)를 갖는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유류 숙주 세포는 CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK 293, NIH 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(임의의 면역글로불린 쇄를 내인성으로 생산하지 않는 뮤린 골수종 세포주), CRL7O3O, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), PER.C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 및 HsS78Bst 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 포유류 세포, 예컨대, CHO 세포에서 생산된다.
일단 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 재조합 발현에 의해 생산된다면, 단백질 또는 면역글로불린 분자의 정제를 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환, 친화도, 특히, 단백질 A 다음의 특정 항원에 대한 친화도, 및 크기 배제 크로마토그래피)에 의해, 원심분리, 차별적 용해도에 의해, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기법에 의해 정제될 수 있다. 추가로, 본원에 기재된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에 기재된 이종성 폴리펩티드 서열 또는 정제를 용이하게 하는 것으로 당업계에 알려진 다른 것에 융합될 수 있다.
일부 양태에서, 본원에 기재된 단백질 (예를 들어, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질) 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 단리되거나 정제된다. 일반적으로, 단리된 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 단백질 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 실질적으로 없는 것이다. 예를 들어, 일부 양태에서, 본원에 기재된 단백질 (예를 들어, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질) 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제제는 세포 물질 및/또는 화학적 전구체가 실질적으로 없다.
1.5 검출 및 진단 용도
단백질(예를 들어, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질)(예를 들어, 부문 2.2 참조) 및/또는 본원에 기재된 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 부문 2.3 참조)은, 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)과 같은 면역분석법을 비롯한, 당업자에게 공지된 대표적인 방법들을 사용하여 생물학적 샘플내 항-SARS-CoV-2 항체의 단백질 수준을 분석하는데 사용될 수 있다. 적합한 항체 분석법 표지는 당업계에 공지되어 있고, 글루코스 옥시다제와 같은 효소 표지를 포함한다. 이러한 표지는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 라벨링하거나 테스트 샘플(예를 들어, 대상체로부터 얻은 샘플)내 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 라벨링하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 본원에 기재된 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인식하거나, 테스트 샘플(예를 들어, 대상체로부터 얻은 샘플)내 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인식하는 이차 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항-SARS-CoV-2 항체를 검출하기 위해 표지되고 사용될 수 있다.
항-SARS-CoV-2 항체에 대한 분석에는 생물학적 샘플내 항-SARS-CoV-2 항체를 직접적으로(예를 들어, 절대 단백질 수준을 결정하거나 추정함으로써) 또는 상대적으로(예를 들어, 제2의 생물학적 샘플의 수준과 비교하여) 정성적으로 또는 정량적으로 측정하거나 추정하는 것이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "생물학적 샘플"은 대상체로부터 얻은 임의의 생물학적 샘플, 세포주, 조직 또는 항-SARS-CoV-2 항체를 잠재적으로 함유하는 다른 공급원을 지칭한다. 동물(예를 들어, 인간)로부터 조직 생검 및 체액을 얻는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다.
본원에 기재된 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 또는 기능성 표지를 지닐 수 있다. 형광 표지가 사용될 때, 현재 이용 가능한 현미경 및 형광-활성화 세포 분류기 분석(FACS) 또는 당업계에 공지된 방법 절차 둘 다의 조합물이 특정 결합 구성원을 확인하고 정량화하기 위해 이용될 수 있다. 본원에 기재된 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 형광 표지를 지닐 수 있다. 예시적인 형광 표지는, 예를 들어, 반응성 및 접합 프로브, 예를 들어, 아미노쿠마린, 플루오레세인 및 Texas red, Alexa Fluor 염료, Cy 염료 및 DyLight 염료를 포함한다. SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 방사성 표지, 예컨대, 동위원소 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 67Cu, 90Y, 99Tc, 111In, 117Lu, 121I, 124I, 125I, 131I, 198Au, 211At, 213Bi, 225Ac 및 186Re를 지닐 수 있다. 방사성 표지가 사용될 때, 당업계에 공지된 현재 이용 가능한 계수 절차가 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 확인 및 정량화하는 데 이용될 수 있다. 표지가 효소인 예에서, 당업계에 공지된 바와 같은 임의의 현재 이용되는 비색법, 분광광도법, 형광분광광도법, 전류측정법 또는 가스분석 기법에 의해 검출이 달성될 수 있다. 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질 사이의 복합체 형성을 가능하게 하는 조건 하에 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 샘플 또는 대조군 샘플을 접촉시킴으로써 달성될 수 있다. 항체 또는 항원-결합 단편과 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질 사이에 형성된 임의의 복합체가 검출되며, 샘플(및 선택적으로 대조군)에서 비교된다. SARS-CoV-2에 대해 본원에 기재된 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 특이적 결합에 비추어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 (예를 들어, 대상체에서) 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 특이적으로 검출하기 위해 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 대상체는 SARS-CoV-2에 노출되었다. 일부 양태에서, 대상체는 SARS-CoV-2에 노출되지 않았다. 일부 양태에서, 대상체는 SARS-CoV-2에 노출될 위험이 있다.
또한, 예를 들어, 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편 존재 정도의 정량적 분석을 위한 검사 키트의 형태로 제조될 수 있는 분석 시스템이 본원에 포함된다. 시스템 또는 검사 키트는 표지된 성분, 예를 들어, 표지된 항체 또는 항원-결합 단편, 및 1종 이상의 추가적인 면역화학 시약을 포함할 수 있다. 키트에 대해 더 상세하게는, 예를 들어, 아래의 부문 2.6을 참조한다.
일부 양태에서, 샘플내 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 시험관내에서 검출하는 방법으로서, 샘플을 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 포함하는 삼량체와 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 본원에 제공된다. 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 예를 들어 양성 대조군으로서 분석에서 사용될 수 있다.
일부 양태에서, (예를 들어, 시험관내에서) 샘플내 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 검출하는데 사용하기 위한, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 포함하는 삼량체가 본원에 제공된다. 검출은 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 예를 들어, 양성 대조군으로 사용하는 것을 추가로 포함하는 분석을 사용하여 수행될 수 있다.
한 양태에서, 진단용으로 사용하기 위한 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 또는 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 포함하는 삼량체가 본원에 제공된다. 검출은 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 예를 들어, 양성 대조군으로 사용하는 것을 추가로 포함하는 분석을 사용하여 수행될 수 있다.
일부 양태에서, 대상체는 인간이다.
서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질, 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 포함하는 삼량체, 및/또는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 사용하여 샘플내 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 검출하기 위한 분석법은 스파이크 단백질 또는 스파이크 단백질 삼량체 (선택적으로 스파이크 단백질이 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 삼량체가 서열번호 101에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질을 포함함) 테스트 샘플과 접촉시키는 단계를 포함할 수 있다. 테스트 샘플은 환자로부터 얻은 샘플일 수 있다. 테스트 샘플은 체액으로부터 얻은 샘플일 수 있다. 테스트 샘플은 대상체로부터 얻은 항체 및/또는 이의 항원-결합 단편을 함유하는 조성물일 수 있다. 테스트 샘플은 IgG 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유할 수 있다. 테스트 샘플은 IgM 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유할 수 있다. 테스트 샘플은 IgG 또는 IgM 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유할 수 있다. 분석법은 스파이크 단백질 및/또는 삼량체에 대한 샘플내 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 양태에서, 스파이크 단백질 및/또는 삼량체에 대한 샘플내 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하는 단계는 이차 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 사용을 포함한다. 이차 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 영역에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편일 수 있다. 이차 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출가능한 표지, 예를 들어 본원에 제공된 검출가능한 표지로 표지될 수 있다. 검출가능한 표지의 존재는 스파이크 단백질 및/또는 삼량체에 결합하는 테스트 샘플내 항체 또는 항원-결합 단편의 존재를 나타낼 수 있다.
일부 양태에서, 스파이크 단백질 및/또는 삼량체에 대한 샘플내 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하는 단계는 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편의, 예를 들어 대조군으로서의 사용을 포함한다. 이러한 경우에 이차 항체 또는 이의 항원-결합 단편(선택적으로 표지됨)은 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 결합할 수 있고, 샘플 내의 항체 또는 항원-결합 단편에 결합할 수 있다.
1.6 키트
본원에 기재된 하나 이상의 단백질, 삼량체, 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 이의 접합체를 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
또한 진단 방법에서 사용될 수 있는 키트가 본원에 제공된다. 일부 양태에서, 키트는 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 또는 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 단백질을 포함하는 삼량체를 하나 이상의 용기내에 포함한다. 일부 양태에서, 키트는 하나 이상의 용기에 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 바람직하게는 정제된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 키트는 본원에 기재된 실질적으로 단리된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 삼량체 및/또는, 예를 들어 대조군으로 사용될 수 있는, 본원에 제공된 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 키트는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항원과 반응하지 않는 대조군 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 본원에 기재된 키트는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하기 위한 하나 이상의 구성요소를 포함한다(예를 들어, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 물질, 예컨대, 형광 화합물, 효소 기질, 방사성 화합물 또는 발광 화합물에 접합될 수 있거나, 또는 제1 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인식하는 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 기질에 접합될 수 있다). 일부 양태에서, 본원에 제공된 키트는 재조합적으로 생산된 또는 화학적으로 합성된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및/또는 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 삼량체를 포함할 수 있다. 키트에 제공된 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 및/또는 삼량체는 또한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 일부 양태에서, 위에 기재된 키트의 검출 수단은 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 또는 삼량체가 부착된 고체 지지체를 포함한다. 이러한 키트는 또한 비부착 리포터-표지 항-인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 항-마우스/래트 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함할 수 있다. 이 양태에서, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항원에 대한 결합은 리포터-표지 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합에 의해 검출될 수 있다.
다음의 실시예들은 예시로 제공되며, 이에 제한하려는 것은 아니다.
2. 실시예
본 실시예 부문(즉, 부문 2)의 실시예는 예시로 제공되며, 이에 제한하려는 것은 아니다.
2.1 실시예 1: SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체
사람에게서 SARS-CoV-2의 존재 또는 부재를 결정하는 PCR 검사가 이용 가능하다. 음성 PCR 검사 결과는 PCT 검사에 사용된 샘플을 채취한 시점에 사람이 감염되지 않았음을 나타낸다. 그러나, 감염되지 않은 사람(따라서 미래에 감염될 수 있고 전염성을 가질 수 있음)과 이전에 감염되었다가 지금 회복된 사람(따라서 미래에 전염성을 갖지 않을 수 있음)을 구분하지 않는다. 사람에게서 항-SARS-CoV-2의 존재를 테스트하는 분석은 이 두 유형의 사람들을 구별할 수 있다. 도 1은 상이한 질환 단계에 있는 환자의 바이러스 RNA 및 항체의 양성 비율의 동역학을 나타낸다. 질병 초기(예를 들어, 증상이 처음 개시된 후 0~5일)에, 사람은 PCR 분석에서 SARS-CoV-2 양성 반응을 보일 가능성이 더 높고, 항-SARS-CoV-2 항체를 가질 가능성이 낮다. 질병 후기(예를 들어, 증상이 처음 개시된 후 15일 이상), 사람은 더 이상 PCR 분석에서 SARS-CoV-2 양성 반응을 보이지 않을 수 있고, 항-SARS-CoV-2 항체가 생겼을 수 있다. 따라서, 항-SARS-CoV-2 항체의 존재를 결정하기 위한 분석법이 개발되었다.
SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 결합하는 항체가 바이러스를 중화할 수 있기 때문에 분석은 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 초점을 맞춘다. 측방 유동 검사(LFT) 및 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA)이 개발되었다. LFT의 성능을 테스트하기 위해, 항-SARS-CoV-2 항체가 양성 및 음성 대조군으로 생산되었다. 항체, CV1-CV13(표 1-4에 제공된 서열)이 SARS2 삼량체 및 SARS-CoV-2의 수용체 결합 도메인(RBD)에 결합하는 능력을 분석하였다. 결과를 도 2에 나타낸다. 항체 CV7은 삼량체와 RBD 모두에 결합하는 데 특히 효과적이다.
2.2 실시예 2: 항체는 SARS-CoV-2 슈도바이러스를 중화하지 않는다
또한 항체가 SARS-CoV-2 슈도바이러스를 중화시키는 능력을 분석하였다.
도 3은 CV1, CV2, CV4, CV6, CV7, CV9, CV10, CV11, 및 CV12 항체가 SARS-CoV-2 슈도바이러스를 중화시키지 않음을 입증한다.
2.3 실시예 3: 항체는 측방 유동 검사에 효과적이다
CV7은 IgG 형식 및 IgM 형식으로 발현되었으며, 이들 둘 다 LFT에서 테스트되었다. 도 4에 도시된 바와 같이, LFT는 CV7 형식을 모두 사용하여 일관되게 정확한 결과를 생성하였다.
2.4 실시예 4: 항체는 효소 결합 면역흡착 분석에 효과적이다
분석의 특이성을 테스트하기 위해, 2019년 12월 이전에 건강한 지원자로부터 채취한 126개의 혈장 샘플(팬데믹-전 샘플)을 ELISA 분석에서 테스트했다. 결과를 도 5에 나타낸다. 분석의 특이성은 98%였으며, 분석의 민감도는 100%였다.
2.5 실시예 5: 항-SARS-CoV-2 항체의 검출 분석
항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 검출하기 위한 예시적인 분석이 도 6에 제공된다. 이러한 예시적인 분석에서, 검정색 384-웰 Greiner 고 결합 플레이트는 3 μg/ml의 PBS 중 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 스파이크 단백질 삼량체의 웰 당 20 μl로 코팅된다. 플레이트를 4℃에서 밤새 인큐베이션한다. 그런 다음, 플레이트를 실온에 도달하도록 하고, PBST로 3회 세척한다. 그런 다음, 80 μl의 1% 카제인 블록을 실온에서 1시간 동안 첨가한 후, 플레이트를 PBST로 3회 세척한다. 그런 다음, 1% 카제인 블록에 희석된 테스트 샘플(예를 들어, IgG 테스트 샘플) 20 μl를 실온에서 1.5시간 동안 첨가한다. 테스트 샘플은 환자(예를 들어, 인간 환자)로부터 얻은 샘플일 수 있다. 대조군으로서, 대조군 항체(예를 들어, CV07)를 함유하는 유사한 20 μl 샘플을 웰에 첨가할 수 있다. 그런 다음, 플레이트를 PBST로 3회 세척한다. 그런 다음, 1% 카제인에 50 ng/ml으로 희석된 20 μl의 항-인간 Fc HRP를 실온에서 1시간 동안 첨가하고, 플레이트를 다시 PBST로 3회 세척한다. 그런 다음, 20 μl TMB 또는 QuantaBlu 기질을 첨가한다. QuantaBlue의 경우, 20 μl의 정지 용액을 30분 후에 첨가하여 반응을 정지시키고, 플레이트를 멀티드롭에서 20초 동안 진탕한다. 프로토콜 전체에서 플레이트를 각 첨가 후 300 g에서 1분 동안 원심분리한다. 웰 내 HRP의 존재(예를 들어, CV07과 같은 대조군 항체를 갖는 웰 내 HRP 수준과 유사한 수준)는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유한 웰 내의 샘플이 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질 삼량체에 결합함을 나타낸다.
SEQUENCE LISTING <110> ASTRAZENECA UK LIMITED <120> SARS-COV-2 PROTEINS, ANTI-SARS-COV-2 ANTIBODIES, AND METHODS OF USING THE SAME <130> COVID-101-WO-PCT <140> <141> <150> 63/054,104 <151> 2020-07-20 <160> 101 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Ser Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Ser Gly Tyr Tyr Thr His Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 4 Gly Tyr Tyr Met His 1 5 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89 gccatccgga tgacccagtc tccatcctca ttctctgcat ctacaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagctg cctgcagtct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagtt accctccgct cactttcggc 300 ggagggacca aggtggagat caaa 324 <210> 90 <211> 324 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 90 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatact gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagctg cctgcagtct 240 gaagattttg caacttatta ctgtcaacag tattatagtt accctccgct cactttcggc 300 caggggacca aggtggagat caaa 324 <210> 91 <400> 91 000 <210> 92 <400> 92 000 <210> 93 <400> 93 000 <210> 94 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Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 165 170 175 Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 180 185 190 Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 195 200 205 Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 210 215 220 Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 225 230 235 240 Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 245 250 255 Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 260 265 270 Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 275 280 285 Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 290 295 300 Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 305 310 315 320 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 325 330 335 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 340 345 350 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 355 360 365 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 370 375 380 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 385 390 395 400 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 405 410 415 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 420 425 430 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 435 440 445 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 450 455 460 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 465 470 475 480 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 485 490 495 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 500 505 510 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 515 520 525 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 530 535 540 Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 545 550 555 560 Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 565 570 575 Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 580 585 590 Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 595 600 605 Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 610 615 620 His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 625 630 635 640 Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 645 650 655 Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 660 665 670 Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala 675 680 685 Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 690 695 700 Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 705 710 715 720 Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 725 730 735 Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 740 745 750 Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 755 760 765 Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln 770 775 780 Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe 785 790 795 800 Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser 805 810 815 Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly 820 825 830 Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp 835 840 845 Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu 850 855 860 Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly 865 870 875 880 Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile 885 890 895 Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr 900 905 910 Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn 915 920 925 Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala 930 935 940 Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn 945 950 955 960 Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val 965 970 975 Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln 980 985 990 Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 995 1000 1005 Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn 1010 1015 1020 Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys 1025 1030 1035 Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro 1040 1045 1050 Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 1055 1060 1065 Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His 1070 1075 1080 Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn 1085 1090 1095 Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln 1100 1105 1110 Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val 1115 1120 1125 Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro 1130 1135 1140 Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn 1145 1150 1155 His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn 1160 1165 1170 Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 1175 1180 1185 Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu 1190 1195 1200 Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu 1205 1210 1215 Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met 1220 1225 1230 Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys 1235 1240 1245 Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro 1250 1255 1260 Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1265 1270 <210> 101 <211> 1286 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 101 Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val 1 5 10 15 Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe 20 25 30 Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu 35 40 45 His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp 50 55 60 Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp 65 70 75 80 Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu 85 90 95 Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser 100 105 110 Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile 115 120 125 Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr 130 135 140 Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr 145 150 155 160 Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu 165 170 175 Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe 180 185 190 Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr 195 200 205 Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu 210 215 220 Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr 225 230 235 240 Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser 245 250 255 Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro 260 265 270 Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala 275 280 285 Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys 290 295 300 Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val 305 310 315 320 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 325 330 335 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 340 345 350 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 355 360 365 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 370 375 380 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 385 390 395 400 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 405 410 415 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 420 425 430 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 435 440 445 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 450 455 460 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 465 470 475 480 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 485 490 495 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 500 505 510 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 515 520 525 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn 530 535 540 Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu 545 550 555 560 Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val 565 570 575 Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe 580 585 590 Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val 595 600 605 Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile 610 615 620 His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser 625 630 635 640 Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val 645 650 655 Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala 660 665 670 Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Gly Ser Ala Ser Ser Val Ala 675 680 685 Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser 690 695 700 Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile 705 710 715 720 Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val 725 730 735 Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu 740 745 750 Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr 755 760 765 Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln 770 775 780 Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe 785 790 795 800 Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser 805 810 815 Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly 820 825 830 Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp 835 840 845 Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu 850 855 860 Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly 865 870 875 880 Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile 885 890 895 Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr 900 905 910 Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn 915 920 925 Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala 930 935 940 Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn 945 950 955 960 Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val 965 970 975 Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Pro Pro Glu Ala Glu Val Gln 980 985 990 Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val 995 1000 1005 Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn 1010 1015 1020 Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys 1025 1030 1035 Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro 1040 1045 1050 Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val 1055 1060 1065 Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His 1070 1075 1080 Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn 1085 1090 1095 Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln 1100 1105 1110 Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val 1115 1120 1125 Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro 1130 1135 1140 Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn 1145 1150 1155 His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn 1160 1165 1170 Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu 1175 1180 1185 Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu 1190 1195 1200 Gly Lys Tyr Glu Gln Gly Ser Gly Tyr Ile Pro Glu Ala Pro Arg 1205 1210 1215 Asp Gly Gln Ala Tyr Val Arg Lys Asp Gly Glu Trp Val Leu Leu 1220 1225 1230 Ser Thr Phe Leu Gly Arg Ser Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro 1235 1240 1245 Gly His His His His His His His His Ser Ala Trp Ser His Pro 1250 1255 1260 Gln Phe Glu Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser 1265 1270 1275 Ala Trp Ser His Pro Gln Phe Glu 1280 1285

Claims (46)

  1. 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는 항체와 동일한 SARS-CoV-2의 스파이크 단백질의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 여기서 VH 및 VL의 아미노산 서열은,
    (a) 각각 서열번호 55 및 서열번호 64;
    (b) 각각 서열번호 56 및 서열번호 65;
    (c) 각각 서열번호 57 및 서열번호 66;
    (d) 각각 서열번호 58 및 서열번호 67;
    (e) 각각 서열번호 59 및 서열번호 68;
    (f) 각각 서열번호 60 및 서열번호 69;
    (g) 각각 서열번호 61 및 서열번호 70;
    (h) 각각 서열번호 62 및 서열번호 71; 또는
    (i) 각각 서열번호 63 및 서열번호 72
    의 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  2. SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 대한 참조 항체의 결합을 경쟁적으로 억제하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 여기서 참조 항체는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, 여기서 VH 및 VL의 아미노산 서열은,
    (a) 각각 서열번호 55 및 서열번호 64;
    (b) 각각 서열번호 56 및 서열번호 65;
    (c) 각각 서열번호 57 및 서열번호 66;
    (d) 각각 서열번호 58 및 서열번호 67;
    (e) 각각 서열번호 59 및 서열번호 68;
    (f) 각각 서열번호 60 및 서열번호 69;
    (g) 각각 서열번호 61 및 서열번호 70;
    (h) 각각 서열번호 62 및 서열번호 71; 또는
    (i) 각각 서열번호 63 및 서열번호 72
    의 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  3. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 VH-CDR1-3 및 VL CDR1-3 아미노산 서열을 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
    (a) 각각 서열번호 1, 2, 및 3 및 서열번호 28, 29, 및 30;
    (b) 각각 서열번호 4, 5, 및 6 및 서열번호 31, 32, 및 33;
    (c) 각각 서열번호 7, 8, 및 9 및 서열번호 34, 35, 및 36;
    (d) 각각 서열번호 10, 11, 및 12 및 서열번호 37, 38, 및 39;
    (e) 각각 서열번호 13, 14, 및 15 및 서열번호 40, 41, 및 42;
    (f) 각각 서열번호 16, 17, 및 18 및 서열번호 43, 44, 및 45;
    (g) 각각 서열번호 19, 20, 및 21 및 서열번호 46, 47, 및 48;
    (h) 각각 서열번호 22, 23, 및 24 및 서열번호 49, 50, 및 51; 또는
    (i) 각각 서열번호 25, 26, 및 27 및 서열번호 52, 53, 및 54.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, 여기서 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열은,
    (a) 서열번호 55;
    (b) 서열번호 56;
    (c) 서열번호 57;
    (d) 서열번호 58;
    (e) 서열번호 59;
    (f) 서열번호 60;
    (g) 서열번호 61;
    (h) 서열번호 62; 및
    (i) 서열번호 63
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하고, 여기서 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열은,
    (a) 서열번호 64;
    (b) 서열번호 65;
    (c) 서열번호 66;
    (d) 서열번호 67;
    (e) 서열번호 68;
    (f) 서열번호 69;
    (g) 서열번호 70;
    (h) 서열번호 71; 및
    (i) 서열번호 72
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  6. 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 여기서 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열은,
    (a) 서열번호 55;
    (b) 서열번호 56;
    (c) 서열번호 57;
    (d) 서열번호 58;
    (e) 서열번호 59;
    (f) 서열번호 60;
    (g) 서열번호 61;
    (h) 서열번호 62; 및
    (i) 서열번호 63
    으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  7. 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는, SARS-CoV-2의 스파이크 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 여기서 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열은,
    (a) 서열번호 64;
    (b) 서열번호 65;
    (c) 서열번호 66;
    (d) 서열번호 67;
    (e) 서열번호 68;
    (f) 서열번호 69;
    (g) 서열번호 70;
    (h) 서열번호 71; 및
    (i) 서열번호 72
    로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 가변 중쇄(VH) 아미노산 서열 및 가변 경쇄(VL) 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
    (a) 각각 서열번호 55 및 서열번호 64;
    (b) 각각 서열번호 56 및 서열번호 65;
    (c) 각각 서열번호 57 및 서열번호 66;
    (d) 각각 서열번호 58 및 서열번호 67;
    (e) 각각 서열번호 59 및 서열번호 68;
    (f) 각각 서열번호 60 및 서열번호 69;
    (g) 각각 서열번호 61 및 서열번호 70;
    (h) 각각 서열번호 62 및 서열번호 71; 및
    (i) 각각 서열번호 63 및 서열번호 72.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV와 교차 반응하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 중쇄 불변 영역은 인간 면역글로불린 IgG 및 IgM으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 항원-결합 단편은 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 경쇄 불변 영역이 카파 경쇄 불변 영역인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  14. 제12항에 있어서,
    상기 경쇄 불변 영역이 람다 경쇄 불변 영역인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    전장 항체인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    항원-결합 단편인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제16항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, 단일쇄 Fv(scFv), 이황화 연결된 Fv, V-NAR 도메인, IgNar, IgGΔCH2, 미니바디, F(ab')3, 테트라바디, 트라이어바디, 다이어바디, 단일-도메인 항체, (scFv)2, 또는 scFv-Fc를 포함하는, 항원 결합 단편.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리된, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단클론성인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 재조합체인, 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2를 중화시키지 않는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  22. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SARS-CoV-2의 슈도바이러스를 중화시키지 않는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
    검출 가능한 표지를 추가로 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  24. 제23항에 있어서,
    상기 표지가 효소 표지, 금 입자, 면역형광 표지, 화학발광 표지, 인광 표지, 방사성 표지, 아비딘/비오틴, 유색 입자, 및 자기 입자로 이루어진 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  25. 제24항에 있어서,
    상기 표지는 효소 면역분석법, 측방 유동 시험, 방사면역분석법, 웨스턴 블롯 분석법, 면역형광 분석법, 면역침강 분석법, 화학발광 분석법, 세포측정법, 또는 면역조직화학적 분석법에 의해 검출되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  26. 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  27. 제26항에 있어서,
    상기 폴리펩티드가 단리되는, 폴리펩티드.
  28. 제26항 또는 제27항에 있어서,
    상기 폴리펩티드가 재조합적으로 생성되거나 화학적으로 합성되는, 폴리펩티드.
  29. 제27항 또는 제28항의 폴리펩티드를 포함하는 삼량체로서, 선택적으로 상기 삼량체가 단리되는, 삼량체.
  30. 제26항 또는 제27항의 폴리펩티드를 암호화하는 핵산 분자를 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오티드.
  31. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는, 단리된 폴리뉴클레오티드.
  32. 제30항 또는 제31항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 단리된 벡터.
  33. 제30항 또는 제31항의 폴리뉴클레오티드, 제32항의 벡터, 또는 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 제1 벡터 및 경쇄 가변 영역을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 제2 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  34. (a) 제33항의 세포를 배양하는 단계; 및 (b) 상기 배양된 세포로부터 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 단백질을 단리하는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 제27항 내지 제27항 중 어느 한 항의 단백질을 제조하는 방법.
  35. 샘플 내에서 항-SARS-CoV-2 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 검출하는 방법으로서, 상기 샘플을 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항의 폴리펩티드 또는 제29항의 삼량체와 접촉시키는 단계를 포함하고, 선택적으로 상기 방법은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 폴리펩티드 또는 삼량체 사이의 결합을 검출하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  36. 제35항에 있어서,
    상기 샘플은 생물학적 샘플인, 방법.
  37. 제35항 또는 제36항에 있어서,
    상기 검출 방법은 효소 결합 면역흡착 분석법(ELISA)인, 방법.
  38. 제35항 또는 제36항에 있어서,
    상기 검출 방법은 측방 유동 분석법인, 방법.
  39. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 샘플은 인간 대상체로부터 유래되는, 방법.
  40. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 샘플은 IgG 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유하는, 방법.
  41. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 샘플은 IgM 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 함유하는, 방법.
  42. 제35항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 대조군으로 사용하는 것을 포함하는, 방법.
  43. (i) 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항의 SARS-CoV-2 스파이크 단백질, 제29항의 삼량체, 또는 제30항의 폴리뉴클레오티드 및 (ii) SARS-CoV-2에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트.
  44. 제43항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 키트.
  45. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 SARS-Co-V2 스파이크 단백질 항원을 포함하는 키트.
  46. 제43항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    사용 또는 판매 승인을 반영하는 안내문을 추가로 포함하는, 키트.
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023144779A1 (en) * 2022-01-28 2023-08-03 Pfizer Inc. Coronavirus antigen variants

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
JP2532858B2 (ja) 1985-04-01 1996-09-11 セルテツク リミテツド 形質転換したミエロ―マ細胞系
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
EP1892296A1 (en) 1988-09-02 2008-02-27 Dyax Corporation Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
AU7247191A (en) 1990-01-11 1991-08-05 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
CA2405246A1 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with alterred binding properties
DE69233750D1 (de) 1991-04-10 2009-01-02 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer Rezeptoren mittels Phagemiden
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
ES2341666T3 (es) 1991-12-02 2010-06-24 Medimmune Limited Produccion de autoanticuerpos de repertorios de segmentos de anticue rpos expresados en la superficie de fagos.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
EP0733070A1 (en) 1993-12-08 1996-09-25 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
ATE243745T1 (de) 1994-01-31 2003-07-15 Univ Boston Bibliotheken aus polyklonalen antikörpern
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
EP2298809A3 (en) 2001-07-12 2012-02-15 FOOTE, Jefferson Super humanized antibodies
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
KR101206206B1 (ko) * 2003-07-22 2012-11-29 크루셀 홀란드 비.브이. 사스-코로나바이러스에 대한 결합분자 및 그것의 용도
US8877688B2 (en) 2007-09-14 2014-11-04 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
US8691730B2 (en) 2007-09-14 2014-04-08 Adimab, Llc Rationally designed, synthetic antibody libraries and uses therefor
CN105734678B (zh) 2010-07-16 2019-11-05 阿迪马布有限责任公司 合成多核苷酸文库

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