CN115873103B - 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途 - Google Patents
一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115873103B CN115873103B CN202111108723.XA CN202111108723A CN115873103B CN 115873103 B CN115873103 B CN 115873103B CN 202111108723 A CN202111108723 A CN 202111108723A CN 115873103 B CN115873103 B CN 115873103B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- thr
- antibody
- ser
- gly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本发明涉及一种抗新型冠状病毒N蛋白的抗体及其制备方法和用途。本发明制备的单克隆抗体亲和力、反应活性、特异性和灵敏度都明显优于现有的单克隆抗体，具有非常大的市场价值。
Description
技术领域
本发明属于抗体技术领域。更具体地，涉及一种抗新型冠状病毒N蛋白的抗体及其制备方法和用途。
背景技术
冠状病毒是一类单链正义RNA病毒。冠状病毒基因组由大约30000个核苷酸组成，依次编码棘突蛋白(Spike protein)、包膜蛋白(Envelopeprotein)、膜蛋白(Membraneprotein)和核衣壳蛋白(Nucleocapsid)。其中，核衣壳蛋白(Nucleocapsid)暴露于病毒表面，是冠状病毒中含量最丰富的蛋白，在病毒感染早期患者的血清样品中即可检测到N蛋白存在，因而N蛋白检测被视为检测SARS-CoV的可靠依据。
目前，核酸检测是检测病毒感染的病原学“金标准”，但核酸检测存在样品预处理难度大、试剂成本高以及对环境/人员要求比较高等诸多缺点。虽然通过新冠抗原针对性的检测新冠抗体特异IgM和IgG可以有效地弥补核酸检测漏检的风险，但出现了较多的假阳性，困扰临床决策。相较于核酸检测，抗原检测具有方便、快速和低价等优势，而相较于抗体检测，抗原检测无窗口期，可对刚出现感染症状的患者进行及时检测。此外基于双抗体夹心的金标记免疫层析技术检测新型冠状病毒2019-nCoV抗原快速试剂盒，可适用于疑似感染者咽喉部棉试子样本新型冠状病毒抗原检测。检测过程简单，不需要任何设施设备，现场或家庭即可完成检测，3-5分钟出检测结果，检测结果可人工直接读取。同时同样基于双抗体夹心的化学发光类检测试剂盒也应运而生，30分钟内就可以出检测结果；不管是胶体金还是化学发光都是基于抗原抗体免疫学原理，都需要相应的单克隆抗体原料。
兔单克隆抗体是新一代单克隆抗体，应用于科研、诊断和治疗。与小鼠单克隆抗体相比，兔单克隆抗体由于其独特免疫机制和抗体基因类型，具有更高亲和力，更强的特异性，广谱的抗原识别位点和易于人源化等特点，是近年来复合增长率最快的一种抗体，已经迅速成为诊断和治疗各种传染性疾病，自身免疫病与肿瘤等人类疾病的重要工具。
对于该类传染性强的新冠病毒感染，提高检测便利程度和敏感度格外重要，尤其是高亲和力的配对抗体在抗原检测产品开发中显得尤为重要。目前国内2019-nCoV N蛋白单克隆抗体产品较少，性能存在差异。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明旨在提供一种亲和力高、活性强、可稳定保存、特异性和灵敏度高的抗新型冠状病毒N蛋白的兔单克隆抗体，以解决现有抗新型冠状病毒N蛋白的单克隆抗体来源少及性能缺陷的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含以下CDRs：
重链CDR1，其包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或由其组成；
重链CDR2，其包含SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列，或由SEQ IDNO.2或SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列组成；和
重链CDR3，其包含SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22所示的氨基酸序列组成；
并且所述抗体或抗原结合片段还包含：
轻链CDR1，其包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，或由其组成；
轻链CDR2，其包含SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，或由其组成；和
轻链CDR3，其包含SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，或由其组成。
根据本发明的第二个方面，提供了一种编码上述抗体或抗原结合片段的核酸、包含所述核酸的细胞，及制备上述抗体或抗原结合片段的方法。
根据本发明的第三个方面，提供了一种包含上述抗体或抗原结合片段的抗体偶联物。
根据本发明的第四个方面，提供了一种包含上述抗体或抗原结合片段或抗体偶联物的检测试剂或试剂盒。
根据本发明的第五个方面，提供了上述的抗体或抗原结合片段或抗体偶联物在制备检测试剂或试剂盒中的用途。
附图说明
图1是7A12C、7A12D、7A12E、7A12F、7A12G、7A12、7A12I、7A12J、7A12K抗体(自左向右)的还原性SDS-PAGE结果。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
一方面，本发明实施例提供了一种抗体或抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段包含以下CDRs：
重链CDR1，其包含SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或由其组成；
重链CDR2，其包含SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列，或由SEQ IDNO.2或SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列组成；和
重链CDR3，其包含SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22所示的氨基酸序列，或由SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22所示的氨基酸序列组成；
并且所述抗体或抗原结合片段还包含：
轻链CDR1，其包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，或由其组成；
轻链CDR2，其包含SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，或由其组成；和
轻链CDR3，其包含SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，或由其组成。
在本发明中，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体，双特异性或多特异性抗体，以及嵌合抗体，只要它们展示所需的生物学活性。术语“抗原结合片段”是包含抗体CDR的一部分或全部的物质，其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合至抗原。此类片段具生物活性，因为其结合至抗原，且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位。此类片段选自Fab(由完整的轻链和Fd构成)，Fv(由VH和VL构成)，scFv(单链抗体，VH和VL之间由一连接肽连接而成)或单域抗体(仅由VH组成)。此类片段可通过重组核酸技术产生，或可通过抗原结合分子(包括完整抗体)的酶裂解或化学裂解产生。
在本发明中，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体或抗原结合片段与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。在本发明具体实施方式中，CDRs是指所述抗体的重链和轻链的高度可变区。
在本发明中，重链互补决定区用HCDR表示，其包括HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链互补决定区用LCDR表示，其包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。本领域常用的CDR标示方法包括：Kabat编号方案、IMGT编号方案、Chothia和Lesk编号方案以及1997年Lefranc等人为免疫球蛋白超家族的所有蛋白质序列引入的新的标准化编号系统。Kabat等人是第一个为免疫球蛋白可变区提出标准化编号方案的人。在过去的几十年中，序列的积累导致了KABATMAN数据库的创建，Kabat编号方案通常被认为是编号抗体残基广泛采用的标准。本发明采用Kabat注释标准标示CDR区，但其他方法标示的CDR区也属于本发明的保护范围。
在本发明中，“框架区”或“FR”区包括重链框架区和轻链框架区，是指抗体重链可变区和轻链可变区中除CDR之外的区域；其中，重链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4框架区；轻链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4框架区。
在本发明中，重链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4；轻链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。
在一些实施方式中，所述抗体还包含重链可变区的框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，和轻链可变区的框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其中：
HFR1包含SEQ ID NO:7或与SEQ ID NO:7具有90％以上一致性的氨基酸序列；
HFR2包含SEQ ID NO:8或与SEQ ID NO:8具有90％以上一致性的氨基酸序列；
HFR3包含SEQ ID NO:9或与SEQ ID NO:9具有90％以上一致性的氨基酸序列；
HFR4包含SEQ ID NO:10或与SEQ ID NO:10具有90％以上一致性的氨基酸序列；和
LFR1包含SEQ ID NO:11或与SEQ ID NO:11具有90％以上一致性的氨基酸序列；
LFR2包含SEQ ID NO:12或与SEQ ID NO:12具有90％以上一致性的氨基酸序列；
LFR3包含SEQ ID NO:13或与SEQ ID NO:13具有90％以上一致性的氨基酸序列；
LFR4包含SEQ ID NO:14或与SEQ ID NO:14具有90％以上一致性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，HFR1由选自SEQ ID NO:7或与SEQ ID NO:7具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；
HFR2由SEQ ID NO:8或与SEQ ID NO:8具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；
HFR3由SEQ ID NO:9或与SEQ ID NO:9具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；
HFR4由SEQ ID NO:10或与SEQ ID NO:10具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；和
LFR1由SEQ ID NO:11或与SEQ ID NO:11具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；
LFR2由SEQ ID NO:12或与SEQ ID NO:12具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；
LFR3由SEQ ID NO:13或与SEQ ID NO:13具有90％以上一致性的氨基酸序列组成；
LFR4由SEQ ID NO:14或与SEQ ID NO:14具有90％以上一致性的氨基酸序列组成。
在一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:23-30任一所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述重链可变区的氨基酸序列由SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:23-30任一所示的氨基酸序列组成，所述轻链可变区由SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列组成。
在一些实施方式中，所述抗体还包含重链恒定区和轻链恒定区；所述重链恒定区为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE或IgM中的任一种或几种，所述轻链恒定区为κ链或λ链。
在一些实施方式中，所述重链恒定区和轻链恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
在一些实施方式中，所述抗体的重链的氨基酸序列由SEQ ID NO:17组成；所述抗体的轻链的氨基酸序列由SEQ ID NO:18组成。
在一些实施方式中，所述抗原结合片段选自Fab，Fab'，F(ab')2，scFv，Fv，Fd，单链抗体，双价抗体或结构域抗体。
另一方面，本发明实施例提供了一种核酸，所述核酸编码所述抗体或抗原结合片段。
核酸通常是RNA或DNA，核酸分子可以是单链或双链的。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。当其连入载体时采用DNA核酸。
另一方面，本发明实施例提供了一种载体，所述载体含有上述的核酸。
另一方面，本发明实施例提供了一种细胞，所述细胞含有上述的核酸或载体。
另一方面，本发明实施例提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包含所述抗体或抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分；
在一些实施方式中，所述偶联部分选自纯化标签(如His标签)，可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧光标记、发色团标记、电子致密标记，例如放射性同位素、荧光团、罗丹明及其衍生物、荧光素酶、荧光素、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记。
另一方面，本发明实施例还提供了一种检测试剂或试剂盒，其包含所述抗体或抗原结合片段或所述抗体偶联物。
所述抗体或抗原结合片段或所述抗体偶联物在制备检测试剂或试剂盒中的用途同样在本发明的保护范围之内。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。
以下实施例中，限制性内切酶、rTaq DNA聚合酶购自Takara公司。MagExtractor-RNA提取试剂盒购自TOYOBO公司。BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒购自Takara公司。pMD-18T载体购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自天根公司。引物合成和基因测序由Invitrogen公司完成。
实施例1抗2019-nCoV N蛋白单克隆抗体的制备
1、表达质粒构建
(1)7A12抗体可变区基因克隆及测序
从分泌Anti-2019-nCoV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取重链(Heavy Chain)及轻链(Light Chain)基因克隆各4个克隆送基因测序公司进行测序。
(2)7A12抗体可变区基因的序列分析
将上述测序得到的基因序列放在Kabat抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中Light Chain扩增出的基因片段中，VL基因序列为342bp，其前方有57bp的前导肽序列；Heavy Chain引物对扩增出的基因片段中，VH基因序列为357bp，属于VH1基因家族，其前方有57bp的前导肽序列。
(3)重组抗体表达质粒的构建
pcDNATM 3.4
vector为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据上述pMD-18T中抗体可变区基因测序结果，设计7A12抗体的VL和VH基因特异性引物，两端分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.75KB的Light Chain基因片段和1.42kb的Heavy Chain基因片段。
Heavy Chain和Light Chain基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将片段和载体纯化回收后Heavy Chain基因和Light Chain基因分别连接3.4A表达载体中，分别得到Heavy Chain和Light Chain的重组表达质粒。
2、稳定细胞株筛选
(1)重组抗体表达质粒瞬时转染CHO细胞，确定表达质粒活性
将步骤1-(3)步骤制备得到的质粒用超纯水稀释至40μg/100μL，调节CHO细胞1.43×107cells/mL于离心管中，100μL上述质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，第3、5、7天取样计数，第7天收样检测。
包被液(主要成分NaHCO3)稀释ncov-ps-Ag6(购自菲鹏，2019-nCoV N蛋白抗原)至1ug/ml，每孔100uL，4℃过夜；次日，洗涤液(主要成份Na2HPO4+Nacl)清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120uL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的细胞上清，100uL/孔，37℃，30min(部分上清1h)；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗兔IgG-HRP，每孔100uL，37℃，30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50uL/孔，主要成份柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)，加入显色液B液(50uL/孔，主要成份柠檬酸+EDTA·2Na+TMB+浓HCL)，10min；加入终止液(EDTA·2Na+浓H2SO4)，50uL/孔；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。
结果显示细胞上清稀释1000倍后反应OD仍大于1.0，未加细胞上清孔反应OD小于0.1，表明质粒瞬转后产生的抗体对ncov-ps-Ag6抗原有活性。
(2)重组抗体表达质粒线性化
准备下述试剂：Buffer 50μL、步骤1-(3)步骤制备得到的质粒100μg/管、PvuⅠ酶10μL、无菌水补至500μL，37℃水浴酶切过夜；先用等体积酚/氯仿/异戊醇(下层)25:24:1，再用氯仿(水相)依次进行抽提；0.1倍体积(水相)3M醋酸钠和2倍体积乙醇冰上沉淀，70％乙醇漂洗沉淀，去除有机溶剂，待乙醇挥发完全用适量的灭菌水进行复融，最后进行浓度的测定。
(3)重组抗体表达质粒稳定转染，加压筛选稳定细胞株
步骤2-(2)步骤制备得到的质粒用超纯水稀释至40μg/100μL，调节CHO细胞1.43×107cells/mL于离心管中，100μL上述质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，次日计数；25μmol/L MSX 96孔加压培养约25天。
显微镜下观察标记长有细胞的克隆孔，并记录汇合度；取培养上清，送样检测；挑选抗体浓度、相对浓度高的细胞株转24孔，3天左右转6孔；3天后保种批培，调整细胞密度0.5×106cells/mL，2.2mL进行批培养，细胞密度0.3×106cells/mL，2mL进行保种；7天6孔批培上清送样检测，挑选抗体浓度及细胞直径较小的细胞株转TPP保种传代。
3、重组抗体生产
(1)细胞扩培
细胞复苏之后先在125mL规格的摇瓶中培养，接种体积为30mL，培养基为100％Dynamis培养基，放置于转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％的摇床中。培养72h，以50万cells/mL接种密度接种扩培，扩培体积根据生产需求进行计算，培养基为100％Dynamis培养基。之后每72h扩培一次。当细胞量满足生产需求时，严格控制接种密度为50万cells/mL左右进行生产。
(2)摇瓶生产及纯化
摇瓶参数：转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％。流加补料：在摇瓶中培养至72h时开始每天补料，HyCloneTM Cell BoostTM Feed 7a每天流加初始培养体积的3％，Feed 7b每天流加量为初始培养体积的千分之一，一直补到第12天(第12天补料)。葡萄糖在第六天补加3g/L。第13天收样。用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化。取6.6μg纯化的抗体进行还原性SDS-PAGE，电泳图如图所示。在还原性SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50KD(重链)，另一条Mr为28KD(轻链，兔抗体轻链不易着色)。
经上述步骤获得的7A12抗体的HCDR1-3氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示；LCDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4-6所示。重链可变区、轻链可变区、重链及轻链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15-18所示。
对7A12抗体的结构进行分析，并进行突变引物设计，重复步骤1-(3)至3-(2)，经活性鉴定，筛选得到八个突变抗体如表1所示。经测序分析，7A12C至7A12G的重链可变区分别如SEQ ID NO.23-27所示，7A12I至7A12K的重链可变区分别如SEQ ID NO.28-30所示，轻链可变区及恒定区与7A12相同。
实施例2亲和力分析及活性鉴定
1、亲和力分析
利用AMC传感器，纯化出来的抗体用PBST稀释到10ug/ml，ncov-ps-Ag6(购自菲鹏，2019-nCoV N蛋白抗原)用PBST进行梯度稀释；
运行流程：缓冲液1(PBST)中平衡60s，抗体溶液中固化抗体300s，缓冲液2(PBST)中孵育180s，抗原溶液中结合420s，缓冲液2中解离1200s，用10mM pH 1.69GLY溶液及缓冲液3(PBST)进行传感器再生，输出数据。(KD表示平衡解离常数即亲和力；kon表示结合速率；kdis表示解离速率。PBST主要成分Na2HPO4+NaCl+TW-20)
表1
| 样品名称 | KD(M) | kon(1/Ms) | kdis(1/s) |
| 对照 | 5.92E-10 | 1.28E+05 | 7.58E-05 |
| 7A12C | 9.37E-11 | 8.81E+05 | 8.25E-05 |
| 7A12D | 7.52E-11 | 8.27E+05 | 6.21E-05 |
| 7A12E | 5.86E-11 | 8.75E+05 | 5.13E-05 |
| 7A12F | 6.19E-11 | 8.12E+05 | 5.03E-05 |
| 7A12G | 6.76E-11 | 6.75E+05 | 4.56E-05 |
| 7A12 | 4.61E-12 | 1.61E+06 | 7.42E-06 |
| 7A12I | 5.42E-11 | 6.35E+05 | 3.44E-05 |
| 7A12J | 4.98E-11 | 8.54E+05 | 4.25E-05 |
| 7A12K | 4.86E-11 | 7.99E+05 | 3.88E-05 |
2、活性鉴定
包被液(主要成分NaHCO3)稀释ncov-ps-Ag6(购自菲鹏，2019-nCoV N蛋白抗原)至3ug/ml，每孔100uL，4℃过夜；次日，洗涤液(主要成份Na2HPO4+Nacl)清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120uL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的纯化抗体和对照抗体，100uL/孔，37℃，30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗兔IgG-HRP，每孔100uL，37℃，30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50uL/孔)，加入显色液B液(50uL/孔)，10min；加入终止液，50uL/孔；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。
表2
实施例3性能评价
将上述自产抗体与对照抗体作为标记抗体，分别与另一株新冠病毒N蛋白抗体(购自菲鹏，也可通过新冠病毒N蛋白为免疫原免疫得到)配套使用，在胶体金平台上比较自产抗体与对照抗体的性能差异，自产抗体能做到比对照略优的性能水平。具体见下表：
表3
实施例4稳定性考核
将自产最优的抗体(7A12)置于4℃(冰箱)、-80℃(冰箱)、37℃(恒温箱)放置21天，取7天、14天、21天样品进行状态观察，并对21天样品进行活性检测，结果显示三种考核条件下抗体放置21天均未见明显蛋白状态变化，活性也未随考核温度的升高呈下降趋势，说明自产抗体稳定。下表为考核21天的酶免活性检测OD结果。
表4
| 样品浓度(ng/ml) | 50.000 | 3.906 | 0.000 |
| 4℃，21天样品 | 2.222 | 0.693 | 0.067 |
| -80℃，21天样品 | 2.204 | 0.687 | 0.081 |
| 37℃，21天样品 | 2.293 | 0.646 | 0.077 |
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 东莞市朋志生物科技有限公司
<120> 一种抗新型冠状病毒N蛋白的抗体及其制备方法和用途
<130> P2021062CN01
<160> 30
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 1
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 2
Leu Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 3
Phe Phe Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 4
Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 5
Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 6
Gln Gly Gly Tyr Tyr Ser Ser Gly Ala Thr Phe Thr
1 5 10
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 7
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 8
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 9
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 10
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 11
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 11
Asp Pro Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Gly Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys
20
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 12
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 13
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 14
Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
1 5 10
<210> 15
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 15
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Leu Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 16
Asp Pro Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Gly Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Tyr Ser Ser Gly
85 90 95
Ala Thr Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 442
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 17
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Leu Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser
180 185 190
Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
225 230 235 240
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
245 250 255
Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp
260 265 270
Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu
275 280 285
Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala
290 295 300
His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn
305 310 315 320
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly
325 330 335
Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr
355 360 365
Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp
370 375 380
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
385 390 395 400
Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp
405 410 415
Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
420 425 430
Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 18
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 18
Asp Pro Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Gly Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Gly Tyr Tyr Ser Ser Gly
85 90 95
Ala Thr Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp
100 105 110
Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Ile Phe Pro Pro Ala Ala Asp Gln Val
115 120 125
Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro
130 135 140
Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly
145 150 155 160
Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys
180 185 190
Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Asp Cys
210
<210> 19
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 19
Ile Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 20
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 20
Phe Phe Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Leu
1 5 10
<210> 21
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 21
Phe Phe Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Ile
1 5 10
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 22
Phe Phe Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Ile
1 5 10
<210> 23
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 23
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 24
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Ile Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 25
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 25
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Leu Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 26
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 27
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Leu Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 28
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Leu Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 29
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Leu Phe Phe Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<400> 30
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Ala
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Ser Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Phe Phe
85 90 95
Tyr Asp Asp Tyr Asp Asp Ile Phe Phe Leu Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
Claims (17)
1.一种抗新型冠状病毒的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包含以下CDRs：
重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.19所示；
重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21或SEQ ID NO.22所示；
轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；
轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；和
轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段还包含重链可变区的框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，和轻链可变区的框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，所述
HFR1包含SEQ ID NO:7或与SEQ ID NO:7具有90％以上一致性的氨基酸序列；
HFR2包含SEQ ID NO:8或与SEQ ID NO:8具有90％以上一致性的氨基酸序列；
HFR3包含SEQ ID NO:9或与SEQ ID NO:9具有90％以上一致性的氨基酸序列；
HFR4包含SEQ ID NO:10或与SEQ ID NO:10具有90％以上一致性的氨基酸序列；和
LFR1包含SEQ ID NO:11或与SEQ ID NO:11具有90％以上一致性的氨基酸序列；
LFR2包含SEQ ID NO:12或与SEQ ID NO:12具有90％以上一致性的氨基酸序列；
LFR3包含SEQ ID NO:13或与SEQ ID NO:13具有90％以上一致性的氨基酸序列；
LFR4包含SEQ ID NO:14或与SEQ ID NO:14具有90％以上一致性的氨基酸序列。
3.一种抗新型冠状病毒的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:23-30任一所示的氨基酸序列，或由其组成；
所述轻链可变区包含SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，或由其组成。
4.根据权利要求1或3所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述抗体或抗原结合片段还包含重链恒定区和/或轻链恒定区：所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgD、IgE或IgM中的任一种或几种的重链恒定区；所述轻链恒定区为κ链或λ链。
5.根据权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述重链恒定区和轻链恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、或人。
6.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述重链恒定区和轻链恒定区的种属来源为乳牛。
7.根据权利要求5所述的抗体或抗原结合片段，其特征在于，所述重链恒定区和轻链恒定区的种属来源为火鸡或斗鸡。
8.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1-7任一所述的抗体或抗原结合片段。
9.一种细胞，其特征在于，所述细胞包含权利要求8所述的核酸。
10.一种制备权利要求1-7任一所述的抗体或抗原结合片段的方法，其特征在于，所述方法包括培养权利要求9所述的细胞。
11.一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物包含权利要求1-7任一所述的抗体或抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分。
12.根据权利要求11所述的抗体偶联物，其特征在于，所述偶联部分选自纯化标签或可检测的标记。
13.根据权利要求12所述的抗体偶联物，其特征在于，所述纯化标签或可检测的标记选自胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质或酶。
14.根据权利要求12所述的抗体偶联物，其特征在于，所述纯化标签或可检测的标记选自荧光标记、发色团标记、电子致密标记。
15.根据权利要求12所述的抗体偶联物，其特征在于，所述纯化标签或可检测的标记选自放射性同位素、荧光团、罗丹明及其衍生物、荧光素酶、荧光素、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖类氧化酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记的一种或多种。
16.一种检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包含权利要求1-7任一所述的抗体或抗原结合片段或权利要求11～15任一项所述的抗体偶联物。
17.权利要求1-7任一所述的抗体或抗原结合片段或权利要求11～15任一项所述的抗体偶联物在制备新冠检测试剂或试剂盒中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111108723.XA CN115873103B (zh) | 2021-09-22 | 2021-09-22 | 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111108723.XA CN115873103B (zh) | 2021-09-22 | 2021-09-22 | 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115873103A CN115873103A (zh) | 2023-03-31 |
| CN115873103B true CN115873103B (zh) | 2023-06-27 |
Family
ID=85762338
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111108723.XA Active CN115873103B (zh) | 2021-09-22 | 2021-09-22 | 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115873103B (zh) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111592594B (zh) * | 2020-03-13 | 2022-05-10 | 北京大学 | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 |
| CN113278068B (zh) * | 2020-06-04 | 2023-11-10 | 山东宽和正生物医药有限公司 | 针对新冠病毒SARS-CoV-2的单克隆抗体F5 |
| CN112940110B (zh) * | 2021-04-14 | 2022-09-20 | 中山大学 | 抗新型冠状病毒n蛋白单克隆抗体及其应用 |
-
2021
- 2021-09-22 CN CN202111108723.XA patent/CN115873103B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115873103A (zh) | 2023-03-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| WO2023078447A1 (zh) | 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒 | |
| CN112979788B (zh) | 特异性结合HBeAg的结合蛋白、诊断HBV感染的试剂和试剂盒 | |
| CN116693676B (zh) | 抗肺炎支原体的抗体、检测肺炎支原体的试剂和试剂盒 | |
| CN116143909B (zh) | 一种抗hiv-1 p24的抗体及其制备方法和用途 | |
| WO2023241416A1 (zh) | 抗p24抗体、检测p24的试剂和试剂盒 | |
| CN116143917B (zh) | 一种抗d-二聚体的抗体及其制备方法和用途 | |
| CN116444657B (zh) | 抗新型冠状病毒的抗体、检测新型冠状病毒试剂和试剂盒 | |
| CN115873103B (zh) | 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途 | |
| CN112979787B (zh) | 结合HBeAg的结合蛋白及其应用 | |
| CN115785262B (zh) | 一种抗登革ns1蛋白的抗体及其应用 | |
| CN116082499B (zh) | 一种抗登革ns1蛋白的抗体及其应用 | |
| CN115838417B (zh) | 一种抗新冠突变型n蛋白的抗体、其制备方法和用途 | |
| CN115677853B (zh) | 抗HBeAg抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| CN115677852B (zh) | 一种抗HBeAg抗体及其应用 | |
| CN115785273B (zh) | 一种抗胃蛋白酶原i的抗体及其应用 | |
| CN115785274B (zh) | 一种抗胃蛋白酶原i的抗体及其应用 | |
| CN115785275B (zh) | 一种抗疟原虫的抗体及其应用 | |
| CN116535505B (zh) | 抗红细胞胞膜抗原的抗体、含有其的试剂和试剂盒及截留或分离红细胞的方法 | |
| CN115677856B (zh) | 抗人IgM抗体及其应用 | |
| CN116143931B (zh) | 一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途 | |
| CN116693678B (zh) | 抗肺炎支原体的抗体、检测肺炎支原体的试剂和试剂盒 | |
| CN116836273B (zh) | 抗血清淀粉样蛋白a抗体、检测血清淀粉样蛋白a的试剂和试剂盒 | |
| CN112979801B (zh) | 一种可特异性结合hrp-ii的结合蛋白及其制备方法和应用 | |
| CN112920272B (zh) | 抗cTnI的蛋白和检测cTnI的方法 | |
| CN117659180A (zh) | 抗新型冠状病毒抗体或其功能性片段、检测新型冠状病毒的试剂和试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |