WO2023241416A1 - 抗p24抗体、检测p24的试剂和试剂盒 - Google Patents

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WO2023241416A1
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antibody
seq
amino acid
acid sequence
functional fragment
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孟媛
钟冬梅
唐丽娜
游辉
姜瑢瑢
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    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host

Definitions

  • the present disclosure relates to the field of antibody technology, specifically, to an anti-P24 antibody, reagents and kits for detecting P24.
  • HIV Human Immunodeficiency Virus
  • AIDS also known as acquired immunodeficiency syndrome virus
  • HIV is a virus that causes defects in the human immune system. It is a lentivirus that infects human immune system cells and is a type of retrovirus. HIV is the causative agent of AIDS and is mainly transmitted through sexual contact, blood and mother-to-child transmission. In recent years, the number of HIV-infected patients has been on the rise.
  • measuring serum HIV antibodies is a routine experimental method for diagnosing HIV infection.
  • measuring HIV antibodies has limitations: more than 70% of HIV-infected people can only detect antibodies 6 months after infection. In the gay community, this number exceeds 80%.
  • the method of detecting antibodies increases the risk of HIV transmission during the "window period"; in addition, it takes 1 year after birth for a newborn to produce antibodies, and HIV antibodies from the mother will cause false positives; due to the persistence of HIV antibodies during the disease process, only It disappears in the late stages of AIDS and cannot be used as a stable indicator for treatment monitoring.
  • P24 is the main structural protein of HIV virus particles and is the product of the structural gene GAG. It plays an important role in the packaging and maturation process of the virus.
  • the amino acid sequence of P24 protein is highly conserved among HIV strains. Deletion of P24 will cause the virus to fail to assemble normally.
  • the P24 protein is very specific and has no cross-reactivity with most other retroviruses. HIV infects the human body, and the first viral marker that appears in the blood of an infected person is the viral P24 protein. There is a long window period between viral infection and the detection of HIV antibodies. Therefore, the detection of HIV-P24 antigen has been used in the early diagnosis and treatment of HIV infection. It plays an important role in determining patient prognosis, screening and evaluating anti-HIV drugs, and detecting mother-to-child transmission.
  • HIV-1P24 antigen is detected using serological diagnostic methods, including double-antibody sandwich ELISA, immune complex lysis detection, ultra-sensitive EIA, enzyme-linked immunofluorescence, etc.
  • double-antibody sandwich method is commonly used to detect the human immunodeficiency virus P24 antigen, and obtaining anti-P24 antibodies is the key to realizing the double-antibody sandwich method. Therefore, there is a strong need in the art for antibodies that are potent and bind to and detect P24.
  • the present disclosure provides an anti-P24 antibody or a functional fragment thereof, the antibody or a functional fragment thereof comprising three complementarity determining regions of a heavy chain variable region having the amino acid sequence SEQ ID NO: 17 and having the amino acid sequence SEQ ID NO.
  • the complementary determining region is defined by any one of Kabat, Chothia, IMGT, Lesk, AbM or Contact system or a combination of multiple systems.
  • complementarity determining regions are defined by Kabat, Chothia, IMGT or Lesk systems.
  • the antibody or functional fragment thereof includes the following complementarity determining regions:
  • HCDR1 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:1;
  • HCDR2 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2;
  • HCDR3 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3;
  • LCDR3 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
  • the present disclosure provides an anti-P24 antibody or a functional fragment thereof, which includes an amino acid sequence such as HCDR1, HCDR2, and HCDR3 shown in SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 3, and an amino acid sequence Such as LCDR1, LCDR2, LCDR3 shown in SEQ ID NO:4 to SEQ ID NO:6.
  • the present disclosure provides an anti-P24 antibody or a functional fragment thereof, which includes HCDR1, HCDR2, HCDR3 whose amino acid sequences are shown in sequence as SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 3, and amino acids
  • the sequences are LCDR1, LCDR2, and LCDR3 shown in SEQ ID NO:4 to SEQ ID NO:6.
  • the antibody or functional fragment thereof described in any one of the above also has at least one of HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, LFR1, LFR2, LFR3 and LFR4;
  • the HFR3 includes SEQ ID NO: 9 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • the LFR3 includes SEQ ID NO: 13 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • the constant region includes a heavy chain constant region and/or a light chain constant region.
  • the species source of the constant region is cattle, horse, pig, sheep, goat, rat, mouse, dog, cat, rabbit, donkey, deer, mink, chicken, duck, goose or human.
  • the species source of the constant region is mouse.
  • the antibody or functional fragment thereof includes the heavy chain shown in SEQ ID NO: 19 and the light chain shown in SEQ ID NO: 20.
  • the present disclosure provides an anti-P24 antibody, including a heavy chain and/or a light chain.
  • the heavy chain includes the heavy chain variable region described in any one of the above.
  • the light chain includes the heavy chain variable region described in any one of the above. The light chain variable region.
  • amino acid sequence of the heavy chain is shown in SEQ ID NO: 19.
  • the present disclosure provides an anti-P24 antibody, including a heavy chain and/or a light chain, the amino acid sequence of the heavy chain is shown in SEQ ID NO: 19; the amino acid sequence of the light chain is shown in SEQ ID NO: 20 .
  • the antibody is coupled to a label.
  • the label is selected from fluorescent dyes, enzymes, radioisotopes, chemiluminescent reagents and nanoparticle labels.
  • the label is colloidal gold.
  • the present disclosure provides a reagent or kit for detecting P24, which reagent or kit includes the antibody described in any one of the above Or its functional fragment or the above-mentioned antibody conjugate.
  • the present disclosure provides a method for detecting P24, including: contacting any of the above-mentioned antibodies or functional fragments thereof, antibody conjugates, reagents or kits with P24 in a sample to be detected to form an immune complex .
  • the immune complex further includes a second antibody that binds to the antibody or a functional fragment thereof;
  • the immune complex further includes a second antibody that binds to P24.
  • the present disclosure also provides a nucleic acid encoding an antibody or a functional fragment thereof as described in any one of the above.
  • the present disclosure also provides a cell containing the nucleic acid or vector described above.
  • the present disclosure also provides a method for preparing the antibody or functional fragment thereof as described in any one of the above, which includes: culturing the cell as described above.
  • the present disclosure also provides the use of any of the above-mentioned antibodies or functional fragments thereof, antibody conjugates, reagents or kits in detecting P24, preparing products for detecting P24, and diagnosing HIV infection.
  • the present disclosure also provides a method for diagnosing HIV infection in a subject, comprising: a) combining any of the above antibodies or functional fragments thereof, antibody conjugates, reagents or kits from the subject; contact with P24 in the sample to form immune complexes; and
  • the immune complex further includes a second antibody, and the second antibody binds to the antibody or a functional fragment thereof.
  • antibody is used in the broadest sense and may include full-length monoclonal antibodies, bispecific or multispecific antibodies, and chimeric antibodies, so long as they display the desired biological active.
  • the heavy chain complementarity determining region is represented by "HCDR”, which includes HCDR1, HCDR2, and HCDR3;
  • the light chain complementarity determining region is represented by "LCDR”, which includes LCDR1, LCDR2, and LCDR3.
  • CDR definition methods include: Kabat definition, Chothia definition, IMGT definition, Contact definition and AbM definition.
  • Kabat Definitions refers to the definition system described in Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest” (1983).
  • Chothia definition see Chothia et al., J Mol Biol 196: 901-917 (1987).
  • CDR definition methods may not strictly follow one of the above schemes but will still overlap with at least part of the Kabat-defined CDR regions, although they may be shortened or lengthened based on predictions or experimental results for specific residues or groups of residues.
  • CDRs are listed in Table 1 below, with slightly different definitions in different documents. Given the variable region amino acid sequence of an antibody, one skilled in the art can routinely determine which residues comprise a particular CDR. It should be noted that CDRs defined by other methods that are not limited to Table 1 also fall within the scope of the present disclosure.
  • CDR definition 1 The numbering of all CDR definitions in Table 1 is based on the Kabat numbering system (see below). The amino acid numbering on the heavy chain is represented by “H+ numbers”, and the amino acid numbering on the light chain is represented by “L+ numbers”.
  • Kabat numbering refers to the numbering system described in Kabat et al., USDept. of Health and Human Services, "Sequence of Proteins of Immunological Interest” (1983).
  • the complementarity determining regions are defined by Kabat, Chothia, IMGT, and Lesk systems.
  • the complementarity determining regions are defined by the Kabat system.
  • the complementarity determining regions are defined by the AbM system.
  • the complementarity determining region is defined by the Contact system.
  • the Kabat numbering positions corresponding to the amino acid sequences of HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 or LCDR3 defined by the above-mentioned Kabat, Chothia, AbM or IMGT systems are as follows:
  • amino acid sequences of HCDR1, HCDR2 and HCDR3 of the heavy chain variable region SEQ ID NO:17 are shown in sequence as SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 and SEQ ID NO:3, then The amino acid sequences of HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the antibody or functional fragment thereof are also shown in sequence as SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, and SEQ ID NO:3.
  • the antibody or functional fragment thereof includes the following complementarity determining regions:
  • HCDR2 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:2;
  • HCDR3 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:3;
  • LCDR2 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:5;
  • LCDR3 which contains or consists of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO:6.
  • Embodiments of the present disclosure provide an anti-P24 antibody or a functional fragment thereof.
  • the antibody or a functional fragment thereof includes HCDR1, HCDR2, HCDR3 with amino acid sequences as shown in SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 3, and the amino acid sequence Such as LCDR1, LCDR2, LCDR3 shown in SEQ ID NO:4 to SEQ ID NO:6.
  • the embodiments of the present disclosure provide an anti-P24 antibody or a functional fragment thereof.
  • the antibody or a functional fragment thereof includes HCDR1, HCDR2, HCDR3 whose amino acid sequences are shown in SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 3, and the amino acid sequence The sequences are LCDR1, LCDR2, and LCDR3 shown in SEQ ID NO:4 to SEQ ID NO:6.
  • the "framework region” or "FR” region includes the heavy chain framework region and the light chain framework region, and refers to the region in the antibody heavy chain variable region and light chain variable region other than the CDR; where, the heavy chain region
  • the chain framework region can be further subdivided into contiguous regions separated by CDRs, including the HFR1, HFR2, HFR3, and HFR4 framework regions;
  • the light chain framework region can be further subdivided into contiguous regions separated by CDRs, including LFR1 , LFR2, LFR3 and LFR4 framework regions.
  • the heavy chain variable region is obtained by connecting the following numbered CDRs and FRs in the following combination: HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4; the light chain variable region is obtained by connecting the following numbered CDRs and FRs: Arrange and connect according to the following combination to obtain: LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4.
  • the antibody or functional fragment thereof also has at least one of HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, LFR1, LFR2, LFR3 and LFR4;
  • HFR1 includes SEQ ID NO:7 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • HFR2 includes SEQ ID NO:8 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • HFR3 includes SEQ ID NO:9 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • HFR4 includes SEQ ID NO: 10 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • LFR1 includes SEQ ID NO: 11 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • LFR2 includes SEQ ID NO: 12 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • LFR3 includes SEQ ID NO: 13 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto;
  • LFR4 includes SEQ ID NO: 14 or an amino acid sequence having at least 80% homology thereto.
  • the antibody or functional fragment thereof also includes HFR1, HFR2, HFR3, HFR4 with amino acid sequences such as SEQ ID NO:7 to SEQ ID NO:10 and amino acid sequences such as SEQ ID NO:11 to LFR1, LFR2, LFR3 and LFR4 shown in SEQ ID NO:14.
  • the antibody or functional fragment thereof also includes HFR1, HFR2, HFR3, HFR4 whose amino acid sequences are shown in sequence as SEQ ID NO:7 to SEQ ID NO:10 and the amino acid sequence is as shown in SEQ ID NO: 11 to LFR1, LFR2, LFR3 and LFR4 shown in SEQ ID NO:14.
  • each framework region of the antibody or functional fragment thereof provided by the present disclosure can be the same as the corresponding framework region (SEQ ID NO: 7, 8, 9, 10, 11, 12 , 13 or 14) with at least 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% Or 99% identical.
  • the antibody or functional fragment thereof binds P24 with an affinity of KD ⁇ 10 -10 M or KD ⁇ 10 -11 M.
  • Embodiments of the present disclosure also provide an anti-P24 antibody or functional fragment thereof.
  • the antibody or functional fragment thereof contains a heavy chain variable region and/or a light chain variable region.
  • the heavy chain variable region contains HFR1-HCDR1-HFR2.
  • the light chain variable region contains the sequence structure of LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4.
  • the amino acid sequences of HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are The amino acid sequences of the above-mentioned HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, and the amino acid sequences of HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, LFR1, LFR2, LFR3, and LFR4 are the above-mentioned HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, LFR1, LFR2, Amino acid sequences of LFR3 and LFR4.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region is as shown in SEQ ID NO: 17.
  • Embodiments of the present disclosure also provide an anti-P24 antibody or a functional fragment thereof, the antibody or a functional fragment thereof comprising a heavy chain variable region and/or a light chain variable region, and the amino acid sequence of the heavy chain variable region is such as SEQ ID NO:17 is shown; the amino acid sequence of the light chain variable region is shown as SEQ ID NO:18.
  • the antibody or functional fragment thereof further comprises a constant region.
  • the constant region includes a heavy chain constant region and/or a light chain constant region.
  • the heavy chain constant region is selected from the heavy chain constant region of IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgM, IgE or IgD, and the light chain constant region is selected from the kappa or lambda light chain constant region.
  • the antibody or functional fragment thereof includes the heavy chain shown in SEQ ID NO: 19 and the light chain shown in SEQ ID NO: 20.
  • the functional fragment is selected from any one of F(ab')2, Fab', Fab, Fv and scFv of an antibody.
  • amino acid sequence of the heavy chain is as shown in SEQ ID NO: 19.
  • amino acid sequence of the light chain is as shown in SEQ ID NO: 20.
  • Embodiments of the present disclosure also provide an antibody conjugate, which includes the above-mentioned antibody.
  • the antibody is directly or indirectly covalently coupled to the substance to be coupled.
  • the antibody is coupled to the substance to be conjugated in a non-covalent manner.
  • the antibody is conjugated to biotin or a biotin derivative.
  • the antibody is conjugated to a label in an antibody conjugate.
  • a marker refers to a type of substance that has characteristics that can be directly observed by the naked eye or detected by an instrument, such as luminescence, color development, radioactivity, etc., through which characteristics can be used to detect the corresponding target object. Qualitative or quantitative testing.
  • labels include, but are not limited to, fluorescent dyes, enzymes, radioisotopes, chemiluminescent reagents, and nanoparticle-based labels.
  • Alexa series dyes and their derivatives for example, including but not limited to Limited to AlexaFluor350, 405, 430, 488, 532, 546, 555, 568, 594, 610, 33, 647, 680, 700, 750, etc. or their analogs
  • protein dyes and their derivatives including but not limited to Phycoerythrin (PE), phycocyanin (PC), allophycocyanin (APC), polydinophycoxanthin-chlorophyll protein (preCP), etc.
  • radioactive isotopes include, but are not limited to, 212Bi, 131I, 111In, 90Y, 186Re, 211At, 125I, 188Re, 153Sm, 213Bi, 32P, 94mTc, 99mTc, 203Pb, 67Ga, 68Ga, 43Sc, 47Sc, 110mIn ⁇ 97Ru, 62Cu, 64Cu, 67Cu, 68Cu, 86Y, 88Y, 121Sn, 161Tb, 166Ho, 105Rh, 177Lu, 172Lu and 18F.
  • chemiluminescent reagents include, but are not limited to, luminol and its derivatives, lucigenin, crustacean fluorescein and its derivatives, ruthenium bipyridyl and its derivatives, acridinium esters and its derivatives , dioxetane and its derivatives, lopranine and its derivatives and peroxyoxalate and its derivatives.
  • nanoparticle-based markers include, but are not limited to, nanoparticles, colloids, organic nanoparticles, magnetic nanoparticles, quantum dot nanoparticles, and rare earth complex nanoparticles.
  • colloids include, but are not limited to, colloidal metals, disperse dyes, dye-labeled microspheres, and latex.
  • colloidal metals include, but are not limited to, colloidal gold, colloidal silver, and colloidal selenium.
  • the colloidal metal is colloidal gold.
  • the antibody in the antibody conjugate is coupled to a solid phase.
  • the solid phase is selected from microspheres, plates and membranes.
  • solid phases include, but are not limited to, magnetic microspheres, plastic microspheres, plastic particles, microplates, glass, capillary tubes, nylon, and nitrocellulose membranes.
  • the solid phase is a nitrocellulose membrane.
  • Embodiments of the present disclosure also provide the use of the above-mentioned antibodies or functional fragments thereof, antibody conjugates, or the above-mentioned reagents or kits in P24 detection.
  • the immune complex further includes a second antibody that binds to the antibody or a functional fragment thereof.
  • Embodiments of the present disclosure also provide cells containing the above-mentioned vectors.
  • Embodiments of the present disclosure also provide a method of preparing an antibody or a functional fragment thereof, which includes: culturing the cells as described above.
  • Embodiments of the present disclosure also provide the use of the above-mentioned antibodies or functional fragments thereof, antibody conjugates, reagents or kits in detecting P24, preparing products for detecting P24, and diagnosing HIV infection.
  • Embodiments of the present disclosure also provide a method for diagnosing HIV infection in a subject, including: a) contacting the above-mentioned antibody or functional fragment thereof, antibody conjugate, reagent or kit with a sample from the subject to form immune complexes; and
  • the present disclosure provides an anti-P24 antibody, a reagent and a kit for detecting P24.
  • the antibody can specifically bind to P24 and has improved activity and/or affinity for it.
  • the antibody can be used to detect P24 with improved sensitivity and specificity.
  • the present disclosure provides a richer selection of antibodies for the detection of P24.
  • the heavy chain and light chain gene fragments were digested with HindIII/EcoRI double enzymes respectively, and the 3.4A vector was digested with HindIII/EcoRI double enzymes. After the fragments and vectors were purified and recovered, the heavy chain genes and light chain genes were connected into the 3.4A expression vector respectively. Recombinant expression plasmids of heavy chain and light chain were obtained.
  • the plasmid was diluted to 40 ⁇ g/100 ⁇ l with ultrapure water, and the CHO cells were adjusted to 1.43 ⁇ 10 7 cells/mL in a centrifuge tube. 100 ⁇ L of plasmid was mixed with 700 ⁇ L of cells, transferred to an electroporation cup, electroporated, and sampled and counted on the 3rd, 5th, and 7th days. , collect samples for testing on the 7th day.
  • the plasmid was diluted to 40 ⁇ g/100uL with ultrapure water, and the CHO cells were adjusted to 1.43 ⁇ 10 7 cells/mL in a centrifuge tube. 100 ⁇ L of plasmid was mixed with 700 ⁇ L of cells, transferred to an electroporation cup, electroporated, and counted the next day; 25 ⁇ mol/L MSX 96 The wells are cultured under pressure for about 25 days.
  • the cells were first cultured in a 125 mL shake flask with an inoculation volume of 30 mL and a 100% Dynamis medium.
  • the cells were placed in a shaker with a rotation speed of 120 r/min, a temperature of 37°C, and a carbon dioxide concentration of 8%.
  • Cultivate for 72 hours inoculate and expand at a seeding density of 500,000 cells/mL.
  • the expansion volume is calculated based on production needs.
  • the culture medium is 100% Dynamis medium. After that, the culture was expanded every 72 hours. When the amount of cells meets production needs, the inoculation density is strictly controlled to about 500,000 cells/mL for production.
  • Shaking flask parameters rotation speed 120r/min, temperature 37°C, and carbon dioxide 8%.
  • Fed-batch feeding Start feeding every day when culturing in the shake flask for 72 hours.
  • HyCloneTM Cell BoostTM Feed 7a feeds 3% of the initial culture volume every day, and Feed 7b feeds 1/1000 of the initial culture volume every day. Supplement until the 12th day (feeding on the 12th day).
  • Glucose was supplemented by 3g/L on the sixth day. Samples were collected on the 13th day.
  • Affinity purification was performed using proteinA affinity chromatography column. Take 6 ⁇ g of the purified antibody and perform reducing SDS-PAGE. The electrophoresis pattern is as shown in the figure. After reducing SDS-PAGE, two bands are shown, one Mr is 50KD and the other Mr is 28KD.
  • the Anti-P24 5F11 monoclonal antibody obtained in Example 1 has the ability to bind to P24, its affinity and antibody activity are not ideal. Therefore, the applicant carried out targeted mutation of the light chain CDR and heavy chain CDR of the antibody. That is, computers are used to simulate the structure of the antibody variable region, the structure of the interaction complex between the antigen and the antibody variable region, analysis of the key amino acids of the antibody, and mutation design. According to the mutation plan, bidirectional primers covering the mutation site are designed and synthesized, and primers at both ends of the target DNA are synthesized. , perform a high-fidelity PCR reaction, clone the PCR product into a vector, and then prepare the mutant antibody according to the method described in Example 1.
  • Anti-P24 5F11mut After screening, a monoclonal antibody with significantly improved affinity and antibody activity was obtained and named: Anti-P24 5F11mut.
  • the heavy chain and light chain amino acid sequences of Anti-P24 5F11mut are shown in SEQ ID NO:19 and SEQ ID NO:20 respectively.
  • Operation process Premix EDC and NHS, 10 ⁇ L/min 60s ⁇ antigen, 10 ⁇ L/min 420s ⁇ blocking solution (composition: 10.5mL 1.0M ethanolamine-HCl pH 8.5), 10 ⁇ L/min 60s ⁇ antibody, 30 ⁇ L/min 120s ⁇ Dissociate with HBS-EP 10 ⁇ L/min 90s ⁇ Sensor regeneration: 10mM GLY pH2.5, 10 ⁇ L/min 30s.
  • KD represents the equilibrium dissociation constant or affinity
  • Ka represents the binding rate
  • Kd represents the dissociation rate.
  • the main ingredients of HBS-EP are 0.01M HEPES, pH 7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.005% v/v Surfactant P20; EDC is 0.2mol/L N-ethyl-N'-(dimethylaminopropyl) - Aqueous solution of carbodiimide; NHS is 0.05ml/L aqueous solution of N-hydroxysuccinimide).
  • test sample NIBSC is a positive sample
  • LC is a clinical negative serum sample.

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Abstract

本申请提供了一种抗P24抗体、检测P24的试剂和试剂盒。本申请提供的抗P24抗体包括重链互补决定区和轻链互补决定区。该抗体为P24的检测提供了原料来源，且具有亲和力和活性。

Description

抗P24抗体、检测P24的试剂和试剂盒
相关申请的交叉引用
本公开要求于2022年06月17日提交中国专利局的申请号为202210684577.3、名称为“抗P24抗体、检测P24的试剂和试剂盒”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本公开中。
技术领域
本公开涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗P24抗体、检测P24的试剂和试剂盒。
背景技术
人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，即艾滋病病毒(AIDS)，也称获得性免疫缺陷综合征病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(Lentivirus)，属于逆转录病毒的一种。HIV是艾滋病的病原体，主要通过性接触、血液和母婴传播。近年来，HIV感染患者数量一直呈上升趋势。而目前测定血清HIV抗体是诊断HIV感染的常规实验方法，但是测定HIV抗体有局限性：有超过70％的HIV感染者在感染6个月后才能检测出抗体，在同性恋群体，这个数字超过80％，检测抗体方法增加了HIV“窗口期”传播的危险；另外新生儿产生抗体需要出生1年后，来自母亲的HIV抗体会致使假阳产生；由于HIV抗体在疾病过程中的持续存在，只有到艾滋病晚期时消失，无法作为治疗监测的稳定指标。
P24是HIV病毒颗粒的主要结构蛋白，是结构基因GAG的产物，在病毒的包装和成熟过程中起重要作用。P24蛋白的氨基酸序列在HIV各毒株之间高度保守，缺失P24会导致病毒无法正常组装。P24蛋白特异性很强，与多数其他逆转录病毒无交叉反应。HIV感染人体，感染者血液中首先出现的病毒标志物为病毒P24蛋白，从病毒感染到检出HIV抗体之间存在较长的窗口期，因此检测HIV-P24抗原已在HIV感染的早期诊断、患者的预后判断、筛选和评价抗HIV的药物，以及发现母婴传播等方面发挥了重要作用。
HIV-1P24抗原的检测采用血清学诊断方法，主要有双抗体夹心ELISA法、免疫复合物裂解检测法、超敏感EIA法、酶联免疫荧光法等。目前普遍使用双抗体夹心法检测人类免疫缺陷病毒P24抗原，而获得抗P24的抗体是实现双抗体夹心法检测的关键。因此，本领域对于有效且结合P24并对其进行检测的抗体存在着强烈需求。
发明内容
本公开提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:17的重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:18的轻链可变区的三个互补决定区。
可选地，所述互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT、Lesk、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义。
可选地，所述互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT或Lesk系统定义。
可选地，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
本公开提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
本公开提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3，和氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
可选地，上文任一项所述的抗体或其功能性片段还具有HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一；
所述HFR1包括SEQ ID NO:7或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述HFR2包括SEQ ID NO:8或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述HFR3包括SEQ ID NO:9或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述HFR4包括SEQ ID NO:10或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR1包括SEQ ID NO:11或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR2包括SEQ ID NO:12或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR3包括SEQ ID NO:13或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
所述LFR4包括SEQ ID NO:14或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
可选地，所述抗体或其功能性片段还包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和氨基酸序列依次如SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，或与所述各序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
可选地，上文任一项所述的抗体或其功能性片段以KD＜8.32×10-10M的亲和力结合P24。
可选地，上文任一项所述的抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示的轻链可变区。
本公开提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4的序列结构，所述轻链可变区区含有LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4的序列结构，所述HCDR1、 HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为上文任一项所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列为上文任一项所述的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列。
可选地，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。
可选地，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
本公开提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
可选地，上文任一项所述的抗体或其功能性片段还包含恒定区。
可选地，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区。
可选地，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。
可选地，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人。
可选地，所述恒定区的种属来源为小鼠。
可选地，所述重链恒定区序列如SEQ ID NO:15所示或与其具有至少80％同一性。
可选地，所述轻链恒定区序列如SEQ ID NO:16所示或与其具有至少80％同一性。
可选地，所述抗体或其功能性片段包括SEQ ID NO:19所示的重链和SEQ ID NO:20所示的轻链。
可选地，上文任一项所述的功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
本公开提供了一种抗P24抗体，包括重链和/或轻链，所述重链包括上文任一项所述的重链可变区，所述轻链包括上文任一项所述的轻链可变区。
可选地，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。
可选地，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
本公开提供了一种抗P24抗体，包括重链和/或轻链，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
本公开提供了一种抗体偶联物，所述抗体偶联物包括上文任一项所述的抗体或其功能性片段。
可选地，所述抗体偶联至生物素或生物素衍生物。
可选地，所述抗体偶联至固相。
可选地，所述抗体偶联至标记物。
可选地，所述标记物选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。
可选地，所述标记物为胶体金。
本公开提供了一种检测P24的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括上文任一项所述的的抗体 或其功能性片段或上述的抗体偶联物。
本公开提供了一种检测P24的方法，包括：使上文任一项所述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒与待检测样品中的P24接触形成免疫复合物。
可选地，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合；
可选地，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与P24结合。本公开还提供一种核酸，其编码上文任一项所述的抗体或其功能性片段。
本公开还提供一种载体，其含有上文所述的核酸。
本公开还提供一种细胞，其含有上文所述的核酸或载体。
本公开还提供一种制备上文任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养上文所述的细胞。
本公开还提供上文任一项所述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒在检测P24、制备检测P24的产品、诊断HIV感染中的用途。
本公开还提供一种诊断受试者感染HIV的方法，包括：a)使上文任一项所述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒与来自所述受试者样品中的P24接触以形成免疫复合物；和
b)检测所述免疫复合物的存在。
可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。
可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述P24结合。
附图说明
为了更清楚地说明本公开实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本公开的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为Anti-P24 5F11mut的还原性SDS-PAGE的结果。
具体实施方式
在本公开中，如本文所用，术语“抗体”在最广义上使用，其可以包括全长单克隆抗体，双特异性或多特异性抗体，以及嵌合抗体，只要它们展示所需的生物学活性。
在本公开中，如本文所用，术语“互补性决定区”、“CDR”或“CDRs”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区，指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体或抗原结合片段与其识别的抗原或表位的结合起作用的主要氨基酸残基的区域。在本公开具体实施方式中，CDRs是指抗体的重链和轻链的高度可变区。
在本公开中，重链互补决定区用“HCDR”表示，其包括HCDR1、HCDR2和HCDR3；轻链互补决定区用“LCDR”表示，其包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。
本公开的实施方式提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，抗体或其功能性片段包含具有氨基 酸序列SEQ ID NO:17的重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:18的轻链可变区的三个互补决定区。
本领域常用的CDR标示方法包括：Kabat编号方案、IMGT编号方案、Chothia和Lesk编号方案以及1997年Lefranc等人为免疫球蛋白超家族的所有蛋白质序列引入的新的标准化编号系统。Kabat等人是第一个为免疫球蛋白可变区提出标准化编号方案的人。在过去的几十年中，序列的积累导致了KABATMAN数据库的创建，Kabat编号方案通常被认为是编号抗体残基广泛采用的标准。本公开采用Kabat注释标准标示CDR区，但其他方法标示的CDR区也属于本公开的保护范围。
CDR的定义方法是本领域公知的，CDR定义方法包括：Kabat定义、Chothia定义、IMGT定义、Contact定义和AbM定义。如本文所述，“Kabat定义”是指Kabat等，U.S.Dept.of Health and Human Services，“Sequence of Proteins of Immunological Interest”(1983)所述的定义系统。“Chothia定义”参见Chothia等，J Mol Biol 196：901-917(1987)。还有其他CDR定义方法可能不严格遵循上述方案之一，但仍会与Kabat定义的CDR区的至少一部分重叠，尽管根据特定残基或残基组的预测或实验结果可能会缩短或延长它们。示例性的定义的CDR列于下表1中,不同文献中的定义略有不同。在给定抗体的可变区氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可以常规地确定哪些残基包含特定CDR。需要说明的是，不限于表1中的其他方法定义的CDR也属于本公开的保护范围。
表1：CDR定义1

1表1中所有CDR定义的编号是依据Kabat编号系统(参见下文)，重链上的氨基酸编号用“H+数
字”表示，轻链上的氨基酸编号用“L+数字”表示。本领域普通技术人员可以明确地将该Kabat编号系统对应到任何可变区序列，而不依赖于序列本身之外的任何实验数据。如本文所述，“Kabat编号”是指Kabat等，U.S.Dept.of Health and HumanServices，“Sequence of Proteins of Immunological Interest”(1983)所述的编号系统。
2如表1中使用的“AbM”具有小写“b”，是指通过Oxford Molecular的“AbM”抗体建模软件定义
的CDR。
3如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在35位；如果只有H35A存在时，那么
CDR-H1结束在35A位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在35B位。
4如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在32位；如果只有H35A存在时，那么
CDR-H1结束在33位；如果H35A和H35B同时存在，那么CDR-H1结束在34位。
5如果H35A和H35B都不存在时，那么CDR-H1结束在33位；如果只有H35A存在时，那么
CDR-H1结束在34位；如果H35A和H35B都存在时，那么CDR-H1结束在35位。
在可选的实施方式中，互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT、Lesk、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT、Lesk系统定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由Kabat系统定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由Chothia系统定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由IMGT系统定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由AbM系统定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由Contact系统定义。
在可选的实施方式中，互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT、Lesk、AbM或Contact系统组合定义。
在可选的实施方式中，上述Kabat、Chothia、AbM或IMGT系统定义的HCDR1，HCDR2，HCDR3，LCDR1，LCDR2或LCDR3的氨基酸序列对应的Kabat编号位置如下：
在可选的实施方式中，HCDR1的氨基酸序列对应的Kabat编号位置为H31～H35，HCDR2的氨基酸序列对应的Kabat编号位置为H50～H65，HCDR3的氨基酸序列对应的Kabat编号位置为95～H100D，LCDR1的氨基酸序列对应的Kabat编号位置为L24～L34，LCDR2的氨基酸序列对应的Kabat编号位置为L50～L56，LCDR3的氨基酸序列对应的Kabat编号位置为L89～L95。
在可选的实施方式中，重链可变区SEQ ID NO:17的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示，则抗体或其功能性片段的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列也依次如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
在可选的实施方式中，轻链可变区SEQ ID NO:18的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示，则抗体或其功能性片段的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列也依次如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
本公开实施方式提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3，和氨基酸序列如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
本公开实施方式提供了一种抗P24抗体或其功能性片段，抗体或其功能性片段包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3，和氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
在本公开中，“框架区”或“FR”区包括重链框架区和轻链框架区，是指抗体重链可变区和轻链可变区中除CDR之外的区域；其中，重链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含HFR1、HFR2、HFR3和HFR4框架区；轻链框架区可以被进一步细分成被CDR分隔开的毗邻区域，包含LFR1、LFR2、LFR3和LFR4框架区。
在本公开中，重链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4；轻链可变区由以下编号的CDR与FR按如下组合排列连接获得：LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段还具有HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一；
HFR1包括SEQ ID NO:7或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR2包括SEQ ID NO:8或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR3包括SEQ ID NO:9或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
HFR4包括SEQ ID NO:10或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR1包括SEQ ID NO:11或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR2包括SEQ ID NO:12或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR3包括SEQ ID NO:13或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
LFR4包括SEQ ID NO:14或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段还包括氨基酸序列如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和氨基酸序列如SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段还包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和氨基酸序列依次如SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4。
需要说明的是，在其他的实施方式中，本公开提供的抗体或其功能性片段的各框架区氨基酸序列可以与上述对应框架区(SEQ ID NO:7、8、9、10、11、12、13或14)具有至少80％、81％、 82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段以KD＜8.32×10-10M的亲和力结合P24。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段以KD≤10-10M或KD≤10-11M的亲和力结合P24。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段以KD≤2.61×10-11M的亲和力结合P24。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示的轻链可变区。
本公开实施方式还提供一种抗P24的抗体或其功能性片段，抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，重链可变区含有HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4的序列结构，轻链可变区区含有LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4的序列结构，HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为上述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列，HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列为上述的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列。在可选的实施方式中，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。
在可选的实施方式中，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
本公开实施方式还提供一种抗P24的抗体或其功能性片段，抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
在可选的实施方式中，抗体或其功能性片段还包含恒定区。
在可选的实施方式中，恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区。
在可选的实施方式中，重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区，轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区。
在可选的实施方式中，恒定区的种属来源为牛、马、乳牛、猪、羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
在可选的实施方式中，恒定区的种属来源为小鼠。
在可选的实施方式中，重链恒定区的序列(CH)如SEQ ID NO:15所示，轻链恒定区(CL)的序列如SEQ ID NO:16所示。
需要说明的是，在其他的实施方式中，恒定区序列可以与上述恒定区(SEQ ID NO:15或16)具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。
在可选的实施方式中，所述抗体或其功能性片段包括SEQ ID NO:19所示的重链和SEQ ID NO:20所示的轻链。
在可选的实施方式中，功能性片段选自抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
上述抗体的功能性片段通常具有与其来源抗体相同的结合特异性。本领域技术人员根据本公开记载的内容容易理解到，上述抗体的功能性片段可以通过比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或木瓜蛋白酶)和/或通过化学还原分裂二硫键的方法获得。在本公开提供了完整抗体的结构基础上，本领域技术人员容易获得上述的功能性片段。
上述抗体的功能性片段还可以通过也是本领域技术人员所知的重组遗传学技术或通过例如自动肽合成仪，比如Applied BioSystems等销售的自动肽合成仪合成获得。
本公开实施方式还提供一种抗P24的抗体，包括重链和/或轻链，重链包括上述的重链可变区和上述的重链恒定区；轻链包括上述的轻链可变区和上述的轻链恒定区。
在可选的实施方式中，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示。
在可选的实施方式中，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
本公开实施方式还提供一种抗体，包括重链和/或轻链，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
本公开实施方式还提供一种抗体偶联物，抗体偶联物包括上述的抗体。其中，所述抗体直接或间接共价偶联至待偶联物。或者，所述抗体以非共价吸附的方式偶联至待偶联物。
在可选的实施方式中，抗体偶联物中所述抗体偶联至生物素或生物素衍生物。
在可选的实施方式中，抗体偶联物中所述抗体偶联至标记物。
在可选的实施方式中，标记物是指具有能够被肉眼直接观察或被仪器检测或探测到的特性例如发光、显色、放射性等特性的一类物质，通过该特性可以实现对相应目标物的定性或定量检测。
在可选的实施方式中，标记物包括但不限于荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物。
在实际的使用过程中，本领域技术人员可以根据检测条件或实际需要选择合适的标记物，无论使用何种标记物，其均属于本公开的保护范围。
在可选的实施方式中，荧光染料包括但不限于荧光素类染料及其衍生物(例如包括但不限于异硫氰酸荧光素(FITC)羟基光素(FAM)、四氯光素(TET)等或其类似物)、罗丹明类染料及其衍生物(例如包括但不限于红色罗丹明(RBITC)、四甲基罗丹明(TAMRA)、罗丹明B(TRITC)等或其类似物)、Cy系列染料及其衍生物(例如包括但不限于Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy3等或其类似物)、Alexa系列染料及其衍生物(例如包括但不限于AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、33、647、680、700、750等或其类似物)和蛋白类染料及其衍生物(例如包括但不限于藻红蛋白(PE)、藻蓝蛋白(PC)、别藻蓝蛋白(APC)、多甲藻黄素-叶绿素蛋白(preCP)等)。
在可选的实施方式中，酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、碳酸酐酶、乙酰胆碱酯酶以及6-磷酸葡萄糖脱氧酶。
在可选的实施方式中，放射性同位素包括但不限于212Bi、131I、111In、90Y、186Re、211At、125I、188Re、153Sm、213Bi、32P、94mTc、99mTc、203Pb、67Ga、68Ga、43Sc、47Sc、110mIn、 97Ru、62Cu、64Cu、67Cu、68Cu、86Y、88Y、121Sn、161Tb、166Ho、105Rh、177Lu、172Lu和18F。
在可选的实施方式中，化学发光试剂包括但不限于鲁米诺及其衍生物、光泽精、甲壳动物荧光素及其衍生物、联吡啶钌及其衍生物、吖啶酯及其衍生物、二氧环乙烷及其衍生物、洛粉碱及其衍生物和过氧草酸盐及其衍生物。
在可选的实施方式中，纳米颗粒类标记物包括但不限于纳米颗粒、胶体、有机纳米颗粒、磁性纳米颗粒、量子点纳米颗粒和稀土络合物纳米颗粒。
在可选的实施方式中，胶体包括但不限于胶体金属、分散型染料、染料标记的微球和乳胶。
在可选的实施方式中，胶体金属包括但不限于胶体金、胶体银和胶体硒。
在可选的实施方式中，胶体金属为胶体金。
在可选的实施方式中，抗体偶联物中所述抗体偶联至固相。
在可选的实施方式中，固相选自微球、板和膜。
在可选的实施方式中，固相包括但不限于磁性微球、塑料微球、塑胶微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜。
在可选的实施方式中，固相为硝酸纤维素膜。
本公开实施方式还提供一种检测P24的试剂或试剂盒，试剂或试剂盒包括上述的抗体或其功能性片段或上述的抗体偶联物。
本公开实施方式还提供上述抗体或其功能性片段、抗体偶联物或上述的试剂或试剂盒在P24检测中的用途。
本公开实施方式还提供一种检测P24的方法，包括：使上述抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒与待检测样品中的P24接触形成免疫复合物。
在可选的实施方式中，免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。
在可选的实施方式中，免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与P24结合。
本公开实施方式还提供一种编码上述抗体或其功能性片段的核酸分子。
本公开实施方式还提供含有上述核酸分子的载体。
本公开实施方式还提供含有上述载体的细胞。
本公开实施方式还提供一种制备抗体或其功能性片段的方法，其包括：培养如上所述的细胞。
本公开实施方式还提供上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒在检测P24、制备检测P24的产品、诊断HIV感染中的用途。
本公开实施方式还提供一种诊断受试者感染HIV的方法，包括：a)使上述的抗体或其功能性片段、抗体偶联物、试剂或试剂盒与来自受试者的样品接触以形成免疫复合物；和
b)检测免疫复合物的存在。
在可选的实施方式中，在步骤a)中，免疫复合物中还包括第二抗体，第二抗体与抗体或其功能性片段结合。
在可选的实施方式中，在步骤a)中，免疫复合物中还包括第二抗体，第二抗体与P24结合。
本公开提供一种抗P24抗体、检测P24的试剂和试剂盒，该抗体可以特异性结合P24，对其具有改善的活性和/或亲和力，用该抗体检测P24具有改善的灵敏度和特异性。本公开为P24的检测提供了更为丰富的抗体选择。
在本公开公开了抗体或其功能性片段的氨基酸序列的基础上，本领域技术人员容易想到采用基因工程技术或其他技术(化学合成、重组表达)制备得到该抗体或其功能性片段，例如从能够重组表达如上任一项所述的抗体或其功能性片段的重组细胞的培养产物中分离纯化得到该抗体或其功能性片段，这对本领域技术人员来说是容易实现的，基于此，无论采用何种技术制备本公开的抗体或其功能性片段，其均属于本公开的保护范围。
为使本公开实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本公开实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。尽管与本文描述的那些方法和材料类似或等同的任何方法和材料都可用于本文的制剂或单位剂量的实践或测试，但现在描述一些方法和材料。除非另有说明，否则本文采用或考虑的技术是标准方法。材料、方法和实例仅是说明性而非限制性的。
除非另外指明，否则实践本公开将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(Oligonucleotide Synthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods in Enzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(Current Protocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:The Polymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。
以下结合实施例对本公开的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1Anti-P24 5F11单克隆抗体的制备
本实施例中限制性内切酶、Prime Star DNA聚合酶购自Takara公司。MagExtractor-RNA提取试剂盒购自TOYOBO公司。BD SMARTTM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒购自Takara公司。pMD-18T载体购自Takara公司。质粒提取试剂盒购自天根公司。引物合成和基因测序由Invitrogen 公司完成。
1重组质粒的构建
(1)抗体基因制备
从本实验室制备的分泌抗P24的单克隆抗体的杂交瘤细胞株中提取mRNA，通过RT-PCR方法获得DNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取重链及轻链基因克隆，各4个克隆送基因测序公司进行测序。
(2)Anti-P24 5F11抗体可变区基因的序列分析
将上述测序得到的基因序列放在Kabat抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的，其中轻链扩增出的基因片段中，VL(轻链可变区)基因序列为342bp，其前方有57bp的前导肽序列；重链引物对扩增出的基因片段中，VH(重链可变区)基因序列为363bp，属于VH1基因家族，其前方有57bp的前导肽序列。
(3)重组抗体表达质粒的构建
pcDNATM 3.4载体(vector)为构建的重组抗体真核表达载体，该表达载体已经引入HindIII、BamHI、EcoRI等多克隆酶切位点，并命名为pcDNA3.4A表达载体，后续简称3.4A表达载体；根据上述pMD-18T中抗体可变区基因测序结果，设计该抗体的VL和VH基因特异性引物，两端分别带有HindIII、EcoRI酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.70kb的轻链基因片段和1.42kb的重链基因片段。
重链和轻链基因片段分别采用HindIII/EcoRI双酶切，3.4A载体采用HindIII/EcoRI双酶切，将片段和载体纯化回收后重链基因和轻链基因分别连接3.4A表达载体中，分别得到重链和轻链的重组表达质粒。
2稳定细胞株筛选
(1)重组抗体表达质粒瞬时转染CHO细胞，确定表达质粒活性
质粒用超纯水稀释至40μg/100μl，调节CHO细胞1.43×107个细胞/mL于离心管中，100μL质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，第3、5、7天取样计数，第7天收样检测。
包被液(主要成分NaHCO3)稀释P24重组抗原至1μg/mL，每孔100μL，4℃过夜；次日，洗涤液清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的细胞上清，100μL/孔，37℃，30min(部分上清1h)；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100μL，37℃，30min；洗涤液清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μL/孔，含柠檬酸+醋酸钠+乙酰苯胺+过氧化脲)，加入显色液B液(50μL/孔，含柠檬酸+EDTA·2Na+TMB+浓HCL)，10min；加入终止液(50μL/孔，含EDTA·2Na+浓H2SO4)；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。结果显示细胞上清稀释1000倍后反应OD仍大于1.0，未加细胞上清孔反应OD小于0.1，表明质粒瞬转后产生的抗体对P24重组抗原有活性。
(2)重组抗体表达质粒线性化
准备下述试剂：Buffer 50μL、DNA 100μg/管、PuvⅠ酶10μL、无菌水补至500μL，37℃水浴酶切过夜；先用等体积酚/氯仿/异戊醇(下层)25:24:1(体积比)，再用氯仿(水相)依次进行抽提；0.1倍体积(水相)3M醋酸钠和2倍体积乙醇冰上沉淀，70％乙醇漂洗沉淀，去除有机溶剂，待乙醇挥发完全用适量的灭菌水进行复融，最后进行浓度的测定。
(3)重组抗体表达质粒稳定转染，加压筛选稳定细胞株
质粒用超纯水稀释至40μg/100uL，调节CHO细胞1.43×107个细胞/mL于离心管中，100μL质粒与700μL细胞混合，转入电转杯，电转，次日计数；25μmol/L MSX 96孔加压培养约25天。
显微镜下观察标记长有细胞的克隆孔,并记录汇合度；取培养上清，送样检测；挑选抗体浓度、相对浓度高的细胞株转24孔，3天左右转6孔；3天后保种批培，调整细胞密度0.5×106个细胞/mL，2.2mL进行批培养，细胞密度0.3×106个细胞/mL，2mL进行保种；7天6孔批培上清送样检测，挑选抗体浓度及细胞直径较小的细胞株转TPP保种传代。
3重组抗体生产
(1)细胞扩培
细胞复苏之后先在125mL规格的摇瓶中培养，接种体积为30mL，培养基为100％Dynamis培养基，放置于转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％的摇床中。培养72h，以50万个细胞/mL接种密度接种扩培，扩培体积根据生产需求进行计算，培养基为100％Dynamis培养基。之后每72h扩培一次。当细胞量满足生产需求时，严格控制接种密度为50万个细胞/mL左右进行生产。
(2)摇瓶生产及纯化
摇瓶参数：转速120r/min，温度为37℃，二氧化碳为8％。流加补料：在摇瓶中培养至72h时开始每天补料，HyCloneTM Cell BoostTM Feed 7a每天流加初始培养体积的3％，Feed 7b每天流加量为初始培养体积的千分之一，一直补到第12天(第12天补料)。葡萄糖在第六天补加3g/L。第13天收样。用proteinA亲和层析柱进行亲和纯化。取6μg纯化的抗体进行还原性SDS-PAGE，电泳图如图所示，在还原性SDS-PAGE后显示两条带，1条Mr为50KD，另一条Mr为28KD。
实施例2亲和力及活性优化
实施例1得到的Anti-P24 5F11单克隆抗体虽然具备结合P24的能力，但亲和力和抗体活性均不够理想，因而申请人通过对该抗体的轻链CDR及重链CDR进行定向突变。即利用计算机进行抗体可变区结构模拟、抗原与抗体可变区作用复合物结构模拟、抗体关键氨基酸分析及突变设计，根据突变方案设计合成覆盖突变位点的双向引物，合成目的DNA两端引物，进行高保真PCR反应，将PCR产物克隆至载体，再按照实施例1所述的方法进行突变抗体的制备。经筛选，得到亲和力和抗体活性显著提升的单克隆抗体，并命名为：Anti-P24 5F11mut。Anti-P24 5F11mut的重链和轻链氨基酸序列分别如SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示。
实施例3抗体的性能检测
1.亲和力分析
利用仪器Biacore 8K+，CM5芯片进行亲和力分析，将纯化的抗体用HBS-EP从200nM开始进 行梯度稀释，将P24重组抗原用10mM乙酸pH4.5稀释到500nM。
运行流程：将EDC与NHS预混后，10μL/min 60s→抗原，10μL/min 420s→封闭液(成份为10.5mL 1.0M乙醇胺-HCl pH 8.5)，10μL/min 60s→抗体，30μL/min 120s→用HBS-EP解离10μL/min 90s→传感器再生：10mM GLY pH2.5，10μL/min 30s。
KD表示平衡解离常数即亲和力；Ka表示结合速率；Kd表示解离速率。HBS-EP主要成分是0.01M HEPES，pH 7.4，0.15M NaCl，3mM EDTA，0.005％v/v Surfactant P20；EDC为0.2mol/L的N-乙基-N'-(二甲氨基丙基)-碳化二亚胺的水溶液；NHS为0.05ml/L的N-羟基琥珀酰亚胺水溶液)。
表2亲和力数据
2.活性鉴定
包被液(主要成分NaHCO3)稀释P24重组抗原至1μg/mL，每孔100μL，4℃过夜；次日，洗涤液清洗2次，拍干；加入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的上述单克隆抗体，100μL/孔，37℃，30min-60min；洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG-HRP，每孔100μL，37℃，30min；洗涤液(PBS)清洗5次，拍干；加入显色液A液(50μL/孔，含2.1g/L柠檬酸、12.25g/L柠檬酸、0.07g/L乙酰苯胺和0.5g/L过氧化脲)，加入显色液B液(50μL/孔，含1.05g/L柠檬酸、0.186g/LEDTA·2Na、0.45g/L TMB和0.2ml/L浓HCl)，10min；加入终止液(50μL/孔，含0.75g/EDTA·2Na和10.2ml/L浓H2SO4)；酶标仪上450nm(参考630nm)处读OD值。结果见下表。
表3活性数据
3.稳定性考核
将上述抗体置于4℃(冰箱)、-80℃(冰箱)、37℃(恒温箱)放置21天，取7天、14天、21天样品进行状态观察，并对21天样品进行活性检测，结果显示三种考核条件下抗体放置21天均未见明显蛋白状态变化，活性也未随考核温度的升高呈下降趋势，说明上述抗体稳定。下表4为抗体考核21天的酶免活性检测OD结果。
表4稳定性数据
4.检测性能评估
将上述实施例的抗体Anti-P24 5F11mut作为包被抗体，包被磁珠；另一株抗体(获自菲鹏生物)作为标记抗体，标记吖啶酯，并将该抗体与包被了磁珠的Anti-P24 5F11mut抗体配对，该配对抗体下表中简称Anti-P24 5F11mut配对。采用双抗体夹心法，在化学发光平台测试上述抗体的性能。使用仪器：迎凯Shine I2910，反应模式：1)20μL测试样本+100μL磁珠包被的抗体(浓度0.05％)，在37℃条件下反应10min，用PBST洗3次；2)加入100μL吖啶酯标记的抗体，37℃下反应10min，用PBST洗3次；3)加入200μL吖啶酯底物，仪器读值。
备注：测试样本NIBSC为阳性样品，LC为临床阴性血清样本。
结果显示Anti-P24 5F11mut配对抗体临床样本均值为535，标准差100.69，具有良好特异性，未检出疑似假阳样本，抗HAMA干扰也未检出疑似假阳样本。Anti-P24 5F11mut配对抗体活性和特异性较对照有优势。具体性能评估结果如下表：
表5性能评估数据

以上所述仅为本公开的优选实施例而已，并不用于限制本公开，对于本领域的技术人员来说，本公开可以有各种更改和变化。凡在本公开的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。
本申请涉及的部分氨基酸序列如下表6所示：
表6氨基酸序列

工业实用性
本公开提供一种抗P24抗体、检测P24的试剂和试剂盒，该抗体可以特异性结合P24，对其具有改善的活性和/或亲和力，用该抗体检测P24具有改善的灵敏度和特异性。本公开为P24的检测提供了更为丰富的抗体选择。

Claims (20)

  1. 一种抗P24抗体或其功能性片段，所述抗体或其功能性片段包含具有氨基酸序列SEQ ID NO:17的重链可变区的三个互补决定区和具有氨基酸序列SEQ ID NO:18的轻链可变区的三个互补决定区。
  2. 根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT、Lesk、AbM或Contact任意一种系统或多种系统组合定义；
    可选地，所述互补决定区由Kabat、Chothia、IMGT或Lesk系统定义。
  3. 根据权利要求1或2所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括如下互补决定区：
    HCDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或由其组成；
    HCDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，或由其组成；
    HCDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或由其组成；
    LCDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或由其组成；
    LCDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，或由其组成；
    LCDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或由其组成。
  4. 一种抗P24抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3，和氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4至SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2、LCDR3。
  5. 根据权利要求1至4任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还具有HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3和LFR4中的至少之一；
    所述HFR1包括SEQ ID NO:7或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述HFR2包括SEQ ID NO:8或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述HFR3包括SEQ ID NO:9或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述HFR4包括SEQ ID NO:10或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述LFR1包括SEQ ID NO:11或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述LFR2包括SEQ ID NO:12或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述LFR3包括SEQ ID NO:13或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    所述LFR4包括SEQ ID NO:14或与其具有至少80％同源性的氨基酸序列；
    可选地，所述抗体或其功能性片段还包括氨基酸序列依次如SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:10所示的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4和氨基酸序列依次如SEQ ID NO:11至SEQ ID NO:14所示的LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，或与所述各序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    可选地，所述抗体或其功能性片段以KD＜8.32×10-10M的亲和力结合P24；
    可选地，所述抗体或其功能性片段包括氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示的重链可变区，和氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示的轻链可变区。
  6. 一种抗P24抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区含有HFR1-HCDR1-HFR2-HCDR2-HFR3-HCDR3-HFR4的序列结构，所述轻链可变区区含有LFR1-LCDR1-LFR2-LCDR2-LFR3-LCDR3-LFR4的序列结构，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列为权利要求1至4任一项所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列，所述HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列为权利要求5所述的HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4的氨基酸序列；
    可选地，所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；
    可选地，所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
  7. 一种抗P24抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
  8. 根据权利要求1至7任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段还包含恒定区；
    可选地，所述恒定区包括重链恒定区和/或轻链恒定区；
    可选地，所述重链恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE或IgD的重链恒定区；所述轻链恒定区选自κ型或λ型轻链恒定区；
    可选地，所述恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅或人；
    可选地，所述恒定区的种属来源为小鼠；
    可选地，所述重链恒定区序列如SEQ ID NO:15所示或与其具有至少80％同一性；
    可选地，所述轻链恒定区序列如SEQ ID NO:16所示或与其具有至少80％同一性；
    可选地，所述抗体或其功能性片段包括SEQ ID NO:19所示的重链和SEQ ID NO:20所示的轻链。
  9. 根据权利要求1至8任一项所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述功能性片段选自所述抗体的F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种。
  10. 一种抗P24抗体，包括重链和/或轻链，其特征在于，所述重链包括权利要求5至7任一项所述的重链可变区和权利要求8所述的重链恒定区；所述轻链包括权利要求5至7任一项所述的轻链可变区和权利要求8所述的轻链恒定区；
    可选地，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；
    可选地，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
  11. 一种抗P24抗体，包括重链和/或轻链，其特征在于，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。
  12. 一种抗体偶联物，其特征在于，所述抗体偶联物包括权利要求1至11任一项所述的抗体或其功能性片段；
    可选地，所述抗体偶联至生物素或生物素衍生物；
    可选地，所述抗体偶联至固相；
    可选地，所述抗体偶联至标记物；
    可选地，所述标记物选自荧光染料、酶、放射性同位素、化学发光试剂和纳米颗粒类标记物；
    可选地，所述标记物为胶体金。
  13. 一种检测P24的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括权利要求1至11任一项所述的抗体或其功能性片段或权利要求12所述的抗体偶联物。
  14. 一种检测P24的方法，其特征在于，包括：
    使权利要求1至11任一项所述抗体或其功能性片段、权利要求12所述抗体偶联物、权利要求13所述试剂或试剂盒与待检测样品中的P24接触形成免疫复合物；
    可选地，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合；
    可选地，所述免疫复合物还包括第二抗体，所述第二抗体与P24结合。
  15. 一种核酸，其特征在于，其编码权利要求1至11任一项所述的抗体或其功能性片段。
  16. 一种载体，其特征在于，其含有权利要求15所述的核酸。
  17. 一种细胞，其特征在于，其含有权利要求15所述的核酸或权利要求16所述的载体。
  18. 一种制备权利要求1至11任一项所述的抗体或其功能性片段的方法，其特征在于，其包括：培养权利要求17所述的细胞。
  19. 权利要求1至11任一项所述的抗体或其功能性片段、权利要求12所述的抗体偶联物，或者权利要求13所述的试剂或试剂盒在检测P24、制备检测P24的产品、诊断HIV感染中的用途。
  20. 一种诊断受试者感染HIV的方法，包括：
    a)使权利要求1至11任一项所述抗体或其功能性片段、权利要求12所述抗体偶联物、权利要求13所述试剂或试剂盒与来自所述受试者样品中的P24接触形成免疫复合物；和
    b)检测所述免疫复合物的存在。
    可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述抗体或其功能性片段结合。
    可选地，在步骤a)中，所述免疫复合物中还包括第二抗体，所述第二抗体与所述P24结合。
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