CN112791174A - 一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法 - Google Patents
一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法。所述制备方法包括如下步骤：将下述重量配比的原料，加入发酵菌种发酵，即可：橘皮10～20份、竹茹10～20份、生姜1～10份、人参1～5份、大枣5～30份、甘草1～8份；所述的发酵菌种由乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌中两种或三种组成。本发明采用特定方法制备得到的含有橘皮竹茹的组合物，其在保留橘皮竹茹方剂良好的药效同时，克服了传统橘皮竹茹汤剂和橘皮竹茹颗粒剂味苦、适口性差，不易被人接受的缺点，其感官品质优良，性质稳定、外观适宜、口感香甜，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法。
背景技术
橘皮竹茹汤是一种理气的中药方剂，具有降逆止呃，益气清热之功效。主治胃虚有热之呃逆。呃逆或干呕，虚烦少气，口干，舌红嫩，脉虚数。临床常用于治疗妊娠呕吐、幽门不完全性梗阻、膈肌痉挛及术后呃逆不止等属胃虚有热者。
呃逆之证，皆因胃气不能和降而起，但有寒热虚实之分。本方证因胃虚有热，气逆不降所致。胃虚宜补，有热宜清，气逆宜降，故立清补降逆之法。方中橘皮辛温，行气和胃以止呃；竹茹甘寒，清热安胃以止呕，皆重用为君药。人参甘温，益气补虚，与橘皮合用，行中有补；生姜辛温，和胃止呕，与竹茹合用，清中有温，共为臣药。甘草、大枣助人参益气补中以治胃虚，并调药性，是为佐使药。诸药合用，补胃虚，清胃热，降胃逆，且补而不滞，清而不寒，对于胃虚有热之呃逆、干哕，最为适宜。
《金匮要略·呕吐哕下利病脉证治》记载“哕逆者，橘皮竹茹汤主之。吴昆《医方考》卷3记载“大病后，呃逆不已，脉来虚大者，此方主之。呃逆者，由下达上，气逆作声之名也。大病后则中气皆虚，余邪乘虚入里，邪正相搏，气必上腾，故令呃逆。脉来虚大，虚者正气弱，大者邪热在也。是方也，橘皮平其气，竹茹清其热，甘草和其逆，人参补其虚，生姜正其胃，大枣益其脾。”
传统橘皮竹茹汤为汤剂，但汤剂煎煮不便、味苦量大，不易被人接受，影响使用效果和疗效。专利CN106540233A将此方制备成橘皮竹茹颗粒制剂，解决了汤剂稳定性差，服用、携带、贮藏及运输不方便等问题。但是，颗粒剂还是存在易潮解，保质期短，机动性差，无法随证加减，适口性较差等缺点。
为了进一步促进橘皮竹茹汤的应用，需要将橘皮竹茹汤制备成新的剂型，解决易潮解、保质期短、机动性差、适口性较差等缺点，以满足更多的需求。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法。
本发明提供了一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法，它包括如下步骤：将下述重量配比的原料，加入发酵菌种发酵，即可：
橘皮10～20份、竹茹10～20份、生姜1～10份、人参1～5份、大枣5～30份、甘草1～8份；
所述的发酵菌种由乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌中两种或三种组成。
进一步地，前述的制备方法包括如下步骤：将下述重量配比的原料，加入发酵菌种发酵，即可：
橘皮15份、竹茹15份、生姜9份、人参3份、大枣15～20份、甘草6份。
进一步地，前述的制备方法包括如下步骤：将橘皮、竹茹、生姜、人参、大枣、甘草制备成原生药材粉末、或水提物、或有机溶剂提取物，再加入发酵菌种发酵制备成的食品、保健食品或药品制剂。
进一步地，所述含有橘皮竹茹的组合物是由下述重量体积比的原料及辅料制备而成：
前述原料制备得到的提取物100～500体积份、蔗糖1～20重量份、牛奶900～5000体积份、发酵菌种90～270体积份。
进一步地，所述含有橘皮竹茹的组合物是由下述重量体积比的原料及辅料制备而成：
前述原料制备得到的提取物300体积份、蔗糖9重量份、牛奶2700体积份、发酵菌种180～270体积份。
进一步地，所述提取物的制备方法包括如下步骤：取各重量配比的原料，加水煎煮后将滤液浓缩，即得。
进一步地，所述煎煮为煎煮1～3次；和/或，每次煎煮30～60分钟；和/或，每次煎煮时加入8～10倍量(ml/g)的水；和/或，所述浓缩为浓缩至50℃时相对密度为1.02～1.06；
优选地，所述煎煮为煎煮2次；和/或，每次煎煮60分钟；和/或，每次煎煮时加入8倍量(ml/g)的水。
进一步地，所述牛奶为纯牛奶或全脂牛奶。
进一步地，所述发酵菌种由乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌组成；或所述发酵菌种由乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌组成；
优选地，所述乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌的接种量比例为1:1；或，所述乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的接种量比例为1:1:1。
进一步地，所述乳酸乳球菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌的接种量均为3％。
进一步地，前述的制备方法包括如下步骤：
(1)在提取物中加入蔗糖得药液；
(2)在药液中加入牛奶配制成培养基；
(3)将发酵菌种接种到培养基中发酵，即得。
进一步地，步骤(1)中，所述药液中蔗糖的浓度为1～3wt％；和/或，步骤(2)中，所述药液和牛奶的体积比为1：(1～9)；
优选地，步骤(1)中，所述药液中蔗糖的浓度为3wt％；和/或，步骤(2)中，所述药液和牛奶的体积比为1：9。
进一步地，步骤(3)中，所述发酵为37℃密封发酵72h。
本发明中重量体积比“重量份/体积份”的单位是g/mL。
本发明采用特定方法制备得到的含有橘皮竹茹的组合物，其在保留橘皮竹茹方剂良好的药效同时，克服了传统橘皮竹茹汤剂和橘皮竹茹颗粒剂味苦、适口性差，不易被人接受的缺点，其感官品质优良，性质稳定、外观适宜、口感香甜，具有良好的应用前景
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为不同奶源制备的组合物的外观对比图。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
实施例1、本发明含有橘皮竹茹的组合物的制备
1、原料处方
橘皮15g、竹茹15g、生姜9g、人参3g、大枣5枚(大约为15g)、甘草6g。
2、制备方法
按照上述处方称取六味原料药，加水煎煮提取2次，每次加原料药总重量8倍量体积(mL/g)的水煎煮60分钟，煎煮后合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.02～1.06(50℃)的清膏，加入蔗糖，将蔗糖加入清膏中后，清膏中蔗糖的浓度为3wt％，得到药液。将灭菌(121℃，20分钟，湿热灭菌)好的药液与全脂纯牛奶按照体积比1:9的比例混合，配制成培养液。乳酸乳球菌菌种液、嗜热链球菌菌种液和保加利亚乳杆菌菌种液各按3％的接种量接种于培养液中，37℃密闭发酵72h，即得。
各菌种菌种液的配制方法如下：
(1)菌种活化：分别将乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌冻干粉(各冻干粉由200μl菌液冻干而得，菌密度为106～107个/mL)用0.3-0.5ml的无菌水或MRS液体培养基配制成菌悬液。吸取菌悬液，打入1-2个MRS固体平板，200μL/个，涂布均匀，37℃倒置培养48h，即得单菌落。
(2)挑取单菌落菌种接入5ml MRS培养液中(10ml试管)，塞上塞子，37℃静置培养48h，即得菌种液。
实施例2、本发明含有橘皮竹茹的组合物制备工艺的筛选
1、检测指标和指标检测方法的确定
(1)检测指标的确定
橘皮和竹茹为本方君药，均行气和胃以止呃之功效，橘皮中主要有效成分为橙皮苷，是发挥疗效的主要物质基础，竹茹中主要有效成分为竹茹多糖，多糖在药典中的检测方法多为紫外吸收法，若将竹茹多糖含量作为检测指标，易受处方中其他多糖物质的干扰，综合考虑选择橙皮苷含量作为检测指标，来筛选制备工艺。
(2)指标检测方法的确定
色谱柱的选择：在其他条件一致的前提下，分别对色谱柱的柱长和不同品牌的色谱柱进行了筛选，以橙皮苷对照品为研究对象，观察不同色谱柱的色谱峰峰形和分离度情况。结论：根据橙皮苷对照品色谱峰峰形和有无杂峰，选择Aglient C18柱150×4.6mm作为后续试验的色谱柱。
流动相的选择：在其他条件一致的前提下，分别对流动相进行了筛选，以橙皮苷对照品和样品(实施例1制备的清膏)作为研究对象，观察不同流动相对橙皮苷对照品和样品中橙皮苷的分离情况。结果显示，当流动相为乙腈：水(80:20，v/v)或甲醇：水(80:20，v/v)时，对照品为单峰，但样品峰中杂质峰较多，且目标峰和杂峰分离度不够。调整甲醇或乙腈和水的比例后，目标峰与杂峰仍很难分开。经过研究最终选择流动相为乙腈：0.2％磷酸水溶液＝25:75(v/v)。
确定的色谱条件：Agilent 1260InfinityⅡ，DAD检测器，CDS 2.2色谱工作站，Aglient C18柱150×4.6mm，柱温35℃，检测波长284±4nm，流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液(25:75，v/v)，流速0.4ml/min，进样量为10μl。
对照品溶液的制备：精密称取橙皮苷对照品(Hesperidin，普思生物科技有限股份公司，批号：PS1441-0025)2.51mg，置于10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.251mg/ml的橙皮苷对照品溶液。
供试品溶液的制备：按照各煎煮工艺制备的清膏，各精密吸取10ml，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇80ml，超声(100W)提取60min，放冷，滤过；精密量取续滤液2ml，0.22μm滤过，取续滤液即得。
线性关系：精密吸取对照品溶液(浓度为0.251mg/ml)，加入流动相梯度稀释至最终浓度为0.251mg/ml、0.125mg/ml、0.0625mg/ml、0.03125mg/ml、0.015625mg/ml。分别吸取上述各浓度的溶液各10μl注入液相色谱仪，测定峰面积值。以峰面积(A)为纵坐标，对照品进样浓度(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，求得橙皮苷回归方程为为Y＝38007X+387.59，r2＝0.9974。
精密度测定：精密吸取上述对照品溶液(0.215mg/ml)10μl注入液相色谱仪，重复进样6次，流动相为乙腈：0.2％磷酸水溶液(25:75，v/v)，测定峰面积值。该实验精密度RSD值为0.88％，小于1.0％，其精密度满足实验要求。
稳定性实验：按照上述方法将实施例1制备的清膏制备成供试品溶液，取供试品溶液在0，2，4，8，12，24小时分别进样10μl，测定峰面积，结果显示，RSD＝0.16％(n＝6)，表明供试品在24小时内保持稳定。
重复性实验：按照上述方法将实施例1制备的清膏制备成供试品溶液，取上述供试品溶液，共进样6次，测定，考察其重复性。结果显示，RSD＝0.35％(n＝6)，表明本方法重复性良好。
加样回收率试验：精密量取已测定橙皮苷含量为60μg/ml的供试品溶液100μl，分别精密加入一定量的橙皮苷标准品(浮动80％～120％)，按上述条件测定，并计算回收率。本法有良好的回收率。
样品中橙皮苷含量的测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件测定，计算峰面积值，通过计算即得。
干浸膏得率的测定方法：将按照各煎煮工艺制备的清膏，各精密吸取100ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，迅速移置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，按下式计算干浸膏得率(干膏率，％)。
2、煎煮工艺的筛选
(1)煎煮工艺的考察
原料处方为橘皮15g、竹茹15g、生姜9g、人参3g、大枣5枚(大约为15g)、甘草6g。按照实施例1所述方法，仅改变每次煎煮时间(提取时间)、煎煮次数(提取次数)和每次煎煮的料液比(加入水的体积)制备清膏，提取时间、提取次数和每次煎煮的料液比的选择如表1所示。检测得到各组清膏中橙皮苷含量和干浸膏得率，结果如表2所示。除有效成分含量评价外，本申请制备的组合物为口服制剂，需要考虑适口性，因此还需要综合考虑其口感、气味和沉淀物等感官指标，选择来自食品专业的10名学生，对各组煎煮工艺制备得到的清膏的颜色、澄清度、气味以及口感等感官指标进行评价，评价结果如表3所示。
表1.煎煮工艺的选择
表2.各组煎煮工艺得到的清膏的橙皮苷含量和干膏率
注：综合加权评分＝(干膏率)×40+(橙皮苷含量)×60。
表3.各组煎煮工艺得到的清膏的感官指标评价结果
由上述结果可知：从有效成分含量来看，第3、6、8、9、10组综合加权评分高，有效成分含量高，其中第9组和第8组最高。但是，第8组和第9组沉淀物较多，且气味重，口感偏苦，适口性差，不适于用于制备组合物。第3组也存在沉淀物较多、苦味重的问题，也不适于用于制备组合物。第6组和第10组的清膏颜色、气味好，口感均偏甜、苦味小，沉淀较少，其中第10组的沉淀物更少，溶液更澄清，且第6组提取3次，耗时较长，在方大试验中会出现耗能、提取效能较低等问题，因此选择第10组提取工艺更优。综合考虑，最终确定橘皮竹茹汤的提取工艺为提取2次，每次提取料液比为1:8，提取60min。
3、矫味剂的筛选
口服制剂应具有良好的口感且易于让患者接受的特点，而在橘皮竹茹汤提取工艺研究时，发现该药液带苦味，影响患者服用顺应性。本发明选择不同矫味剂对药液口感进行改善。本发明采用实施例1所述的煎煮方法得到清膏后，取清膏共16份，每份20ml，分别加入不同品种(木糖醇、甜蜜素、甜菊素和蔗糖)和不同用量的矫味剂搅拌均匀。选择20名不同年龄段的品尝者，其中16-25岁者5名，26-35岁者占6名，36-50岁者4名，50岁以上者5名，均进行品尝并评价所得药液的口感。品尝结果见表4。
表4.不同矫味剂品种和用量对药液口感的影响
结果表明：虽然四种矫味剂均随着用量增加而使药液甜味增加，但是木糖醇、甜蜜素和甜菊素对药液苦味的影响并不明显，所得的药液仍然具有苦味。同时，木糖醇甜味不明显，成本较高；甜蜜素存在食品安全问题。只有蔗糖在用量为3wt％时，甜味明显，无苦味，利于患者服用，同时，蔗糖在食品制剂中应用广泛，安全无毒，故确定清膏中添加浓度为3wt％的蔗糖作为矫味剂。
4、牛奶用量的筛选
研究牛奶用量对含有橘皮竹茹的组合物的影响。采用实施例1所述的原料处方和制备方法制备得到组合物，仅仅改变药液与全脂纯牛奶的体积比，研究不同体积比的药液与全脂纯牛奶对组合物的影响(药液与全脂纯牛奶的体积比如表5所示)。以纯药液(1组，按照实施例1所述的方法制备得到的药液)和全脂纯牛奶(8组)作为空白对照，加入相同量蔗糖和接种相同量的菌种。
表5.不同体积比例的纯牛奶和药液配比
选择20名不同年龄段的品尝者(其中16-25岁者5名，26-35岁者占6名，36-50岁者4名，50岁以上者5名)对制备得到的含有橘皮竹茹的组合物的颜色、性状、澄清度、气味以及口感等指标进行评价，结果如表6所示。品质良好的组合物应为色泽均匀的浅黄色或白色乳状固体、具有酸奶气味，无腐败，无异臭，无肉眼可见的杂质，口感应细腻绵密，甜度适宜。
表6.牛奶用量对组合物结果的影响
综合分析结果显示，随着纯牛奶用量的增加，凝乳成型性越好，液体性状由液体逐渐变为固液混合物，再到凝乳，且质地越来越均匀，沉淀物逐渐减少。其次，从口感和嗅味上对比显示，加入牛奶后大大改善了药液的苦味和药味，使人食用感大大提升。从以上结果看，第7组所得的组合物最优，其成型性好，外观适宜、口感香甜，故纯牛奶和药液最优体积比为9:1。
5、牛奶品种的筛选
选用脱脂奶粉、全脂奶粉与全脂纯牛奶进行对比试验。按照实施例1所述方法制备组合物，仅改变牛奶品种，制备得到不同的组合物。结果如图1所示。
结果显示，全脂纯牛奶乳质最为均匀，颜色乳白，其次为实验用全脂奶粉，颜色偏黄，而脱脂奶粉的成型性较差，有分层，较多乳清析出。综合外观、性状和味道考虑，纯牛奶是最佳奶源选择，但若从经济节约的角度考虑，全脂性奶粉也可作为替代。
6、发酵菌种的筛选
采用实施例1所述的原料处方和制备方法制备组合物，仅改变菌种的种类和用量(菌种的种类和用量选择见表7)。选择20名不同年龄段的品尝者(其中16-25岁者5名，26-35岁者占6名，36-50岁者4名，50岁以上者5名)对制备得到的组合物的颜色、性状、气味以及口感等指标进行评价，结果如表8所示。品质良好的含有橘皮竹茹的组合物应为色泽均匀的浅黄色或白色乳状固体、具有酸奶气味，无腐败，无异臭，无肉眼可见的杂质，口感应细腻绵密，甜度适宜。
表7.不同菌种及接种量
表8.不同菌种及接种量发酵制得的组合物的感官评价结果
上述结果显示：加入单一菌种发酵，所得的组合物颜色均为黄色至深黄色，大部分组合物都有液体析出，无法形成均一的乳状固体，且气味与口感差，甚至变质。可见加入单一菌种发酵无法得到品质优良的含有橘皮竹茹的组合物。
加入双菌种发酵，所得的组合物在凝乳成型性上更稳定一点，但是仍然较难形成均一的乳状固体，且存在气味过浓、味道变质的现象。除第10组能够形成乳质均匀、摇之不散的固体外，其他试验均无法形成均一的乳状固体或有部分液体析出；同时，第10组奶香味适宜，不刺鼻，具甜味。第16组小剂量生产时出现少量液体析出，若放大生产后，可影响组合物的整体性状，故采用双菌发酵时，第10组菌种和接种配比，即乳酸乳球菌种子液：保加利亚乳杆菌种子液接种量为1:1(接种量均为3％)制备得到的含有橘皮竹茹的组合物最优。
三菌种混合发酵时基本上都有凝乳形成，但当菌种接种量偏大时，液体析出的量也偏多，且具有发酵味，口感不好；如第22组、24组和25组制备得到的组合物为深黄色，气味略微刺鼻且口感不好，品质差。第19组能够形成乳质均一，摇之不散的固体，无液体析出，且具有浓郁的酸奶香味，具甜味，口感绵密，品质优良。
综合分析结果显示，第19组从颜色、乳质均匀度和香味、口感上最为适宜，因此本发明最佳发酵菌为乳酸乳球菌、保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌三菌等量混合发酵，且这三种细菌种子液的接种量均为3％。
7、不同发酵温度对组合物发酵的影响
按照实施例1所述方法发酵制备组合物，仅改变发酵温度。分别考察发酵温度为27℃、30℃、37℃、40℃和45℃时对组合物的影响。
研究结果显示，27℃、30℃发酵72h时，有凝乳形成，但乳质不均匀，轻摇即散，37℃和40℃发酵温度下，组合物凝乳均匀且基本无乳清液体析出，但40℃组合物发酵味道偏浓，45℃有刺鼻的发酵味。故最终选择37℃作为发酵温度。
8、不同发酵时间对组合物发酵的影响
按照实施例1所述方法发酵制备组合物，仅改变发酵时间。分别考察发酵时间为4h、8h、12h、24h、48h和72h时对组合物的影响。
研究结果显示，在37℃环境下，发酵4h、8h、12h和24h时，组合物均为均匀的液体，无凝乳出现，当发酵至48h时，有凝乳产生，但乳质不均匀，轻摇即散，发酵至72h时取出，组合物凝乳均匀且基本无乳清液体析出。故最终选择72h作为发酵时间。
综上，本发明采用特定方法制备得到的含有橘皮竹茹的组合物，其在保留橘皮竹茹方剂良好的药效同时，克服了传统橘皮竹茹汤剂和橘皮竹茹颗粒剂味苦、适口性差，不易被人接受的缺点，其感官品质优良，性质稳定、外观适宜、口感香甜，具有良好的应用前景。
Claims (13)
1.一种含有橘皮竹茹的组合物的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：将下述重量配比的原料，加入发酵菌种发酵，即可：
橘皮10～20份、竹茹10～20份、生姜1～10份、人参1～5份、大枣5～30份、甘草1～8份；
所述的发酵菌种由乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌中两种或三种组成。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：将下述重量配比的原料，加入发酵菌种发酵，即可：
橘皮15份、竹茹15份、生姜9份、人参3份、大枣15～20份、甘草6份。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：将橘皮、竹茹、生姜、人参、大枣、甘草制备成原生药材粉末、或水提物、或有机溶剂提取物，再加入发酵菌种发酵制备成的食品、保健食品或药品制剂。
4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于：所述含有橘皮竹茹的组合物是由下述重量体积比的原料及辅料制备而成：
权利要求1或2所述原料制备得到的提取物100～500体积份、蔗糖1～20重量份、牛奶900～5000体积份、发酵菌种90～270体积份。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述含有橘皮竹茹的组合物是由下述重量体积比的原料及辅料制备而成：
权利要求1或2所述原料制备得到的提取物300体积份、蔗糖9重量份、牛奶2700体积份、发酵菌种180～270体积份。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述提取物的制备方法包括如下步骤：取各重量配比的原料，加水煎煮后将滤液浓缩，即得。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述煎煮为煎煮1～3次；和/或，每次煎煮30～60分钟；和/或，每次煎煮时加入8～10倍量(ml/g)的水；和/或，所述浓缩为浓缩至50℃时相对密度为1.02～1.06；
优选地，所述煎煮为煎煮2次；和/或，每次煎煮60分钟；和/或，每次煎煮时加入8倍量(ml/g)的水。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述牛奶为纯牛奶或全脂牛奶。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述发酵菌种由乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌组成；或所述发酵菌种由乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌组成；
优选地，所述乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌的接种量比例为1:1；或，所述乳酸乳球菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的接种量比例为1:1:1。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述乳酸乳球菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌的接种量均为3％。
11.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)在提取物中加入蔗糖得药液；
(2)在药液中加入牛奶配制成培养基；
(3)将发酵菌种接种到培养基中发酵，即得。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述药液中蔗糖的浓度为1～3wt％；和/或，步骤(2)中，所述药液和牛奶的体积比为1：(1～9)；
优选地，步骤(1)中，所述药液中蔗糖的浓度为3wt％；和/或，步骤(2)中，所述药液和牛奶的体积比为1：9。
13.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述发酵为37℃密封发酵72h。
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