CN112674199B - 一种多肽食品防腐剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种多肽食品防腐剂，主要由夏威夷果多肽、锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯制成，其中，夏威夷果多肽由夏威夷果仁通过碱解酸解制得夏威夷果仁蛋白、再将夏威夷果仁蛋白通过复合酶水解制得，锡兰莓提取物由锡兰莓果肉以乙醇水溶液为提取溶剂通过超声提取而得。本发明还提供了该多肽食品防腐剂的制备方法。本发明提供的多肽食品防腐剂的主要成分为多肽，具有较好的抗菌、抗氧化性能和稳定性。
Description
技术领域
本发明涉及一种防腐剂，特别是涉及一种多肽食品防腐剂及其制备方法。
背景技术
在加工、贮藏、运输及消费过程中导致食品腐败变质的原因较多，包括物理因素、化学因素和生物性等因素，其中由微生物污染所引起的食品腐败变质最为普遍。微生物滋生导致食品腐败变质的同时，也给食品安全带来严重危害，因此食品防腐剂应运而生。食品防腐剂是能防止由微生物引起的腐败变质、延长食品保质期的添加剂，因兼有防止微生物繁殖引起食物中毒的作用，又称抗微生物剂(antimicrobial)。它的主要作用是抑制食品中微生物的繁殖。食品防腐剂按来源分，有化学防腐剂和天然防腐剂两大类，化学防腐剂由于其安全性等方面的局限，已经难以满足人类发展的需求，食品防腐剂的天然化已成为目前的发展趋势。
中国专利申请CN200610042587.8公开了“食品生物防腐剂”，由乳酸链球菌产生的一种多肽物质乳酸链球菌素经增菌、分离、培养、制备菌悬液进行合理混配，勾兑而成一种食品生物防腐剂，具有如下配方(组分及其重量百分比％)：乳酸链球菌素(5.0-6.0)；溶菌酶(0.01-0.02)；对羧基苯甲酸脂(0.01-0.02)；纯化水加至100。该发明存在的问题是其抗菌、抗氧化性能以及稳定性均表现不佳。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种多肽食品防腐剂，其主要成分为多肽，具有较好的抗菌、抗氧化性能和稳定性。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种多肽食品防腐剂，由以下步骤制成：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1-2小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2-3小时得到酸提液，将酸提液离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，将夏威夷果仁蛋白溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入复合酶后55℃下酶解2-3小时得到酶解液，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入乙醇水溶液中浸泡30分钟，然后置于超声波清洗机中超声处理45-60分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1-2小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中微射流处理5分钟，取出后离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
进一步地，本发明所述步骤S1中，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL，微波处理的强度为50mW/cm2。
进一步地，本发明所述步骤S2中，氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L，盐酸溶液的浓度为0.5mol/L，离心时的速度为5000r/min。
进一步地，本发明所述步骤S3中，夏威夷果仁蛋白粉与蒸馏水的比例为1:80g/mL，氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L，复合酶由质量比为3:1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，复合酶与夏威夷果仁蛋白粉溶液的比例为2000U/g,离心时的速度为8000r/min。
进一步地，本发明所述步骤S4中，乙醇水溶液的体积浓度为60％，锡兰莓果肉粉与乙醇水溶液的比例为1:18g/mL，超声提取时的超声功率为280W，浸膏与正己烷的比例为1:15g/mL。
进一步地，本发明所述步骤S5中，夏威夷果多肽、锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯的质量比为(8-10):(1-1.5):(0.1-0.2)，微射流设备的压力为60MPa，离心时的速度为5000r/min。
本发明要解决的另一技术问题是提供上述多肽食品防腐剂的制备方法。
为解决上述技术问题，技术方案是：
一种多肽食品防腐剂的制备方法，包括以下步骤：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1-2小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2-3小时得到酸提液，将酸提液离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，将夏威夷果仁蛋白溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入复合酶后55℃下酶解2-3小时得到酶解液，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入乙醇水溶液中浸泡30分钟，然后置于超声波清洗机中超声处理45-60分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1-2小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中微射流处理5分钟，取出后离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)夏威夷果是一种原产于澳洲的树生坚果，其果仁部分还有丰富的蛋白质，本发明将夏威夷果仁通过碱解酸解制得夏威夷果仁蛋白，再将夏威夷果仁蛋白通过复合酶水解制得夏威夷果多肽，其具有优异的抗菌活性和抗氧化活性，使得本发明所述多肽食品防腐剂具有较好的抗菌性能和抗氧化性能，对食品能起到很好的防腐作用。
(2)本发明在将夏威夷果仁制成夏威夷果仁蛋白之前还对夏威夷果仁进行了微波预处理，微波预处理能加快后续碱解、酸解过程，提高夏威夷果仁蛋白收率，还能进一步提高夏威夷果多肽以及多肽食品防腐剂的抗菌性能和抗氧化性能。
(3)锡兰莓是大风子科、锡兰莓属常绿小乔木，本发明将锡兰莓果肉(锡兰莓浆果的果肉部分)以乙醇水溶液为提取溶剂通过超声提取得到锡兰莓提取物，该锡兰莓提取物也具有较好的抗菌活性，因此能进一步提高本发明所述多肽食品防腐剂的抗菌性能，此外，锡兰莓提取物的耐热、耐寒性能较强，因而还能改善本发明所述多肽食品防腐剂的热稳定性和低温贮藏稳定性。
(4)本发明将夏威夷果多肽、锡兰莓提取物在蔗糖脂肪酸酯的帮助下混合均匀，再经过微射流处理后制得多肽食品防腐剂，微射流处理能改善夏威夷果多肽和锡兰莓提取物的结合程度，提高多肽食品防腐剂的低温贮藏稳定性。
具体实施方式
下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例及其说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
实施例1
按照以下步骤制备多肽食品防腐剂：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下强度为50mW/cm2条件下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1.5小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用浓度为0.5mol/L的盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2.5小时得到酸提液，将酸提液5000r/min速度下离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，夏威夷果仁蛋白粉与蒸馏水的比例为1:80g/mL，将夏威夷果仁蛋白溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入由质量比为3:1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合酶后55℃下酶解2.5小时得到酶解液，复合酶与夏威夷果仁蛋白粉溶液的比例为2000U/g，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，8000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入体积浓度为60％的乙醇水溶液中浸泡30分钟，锡兰莓果肉粉与乙醇水溶液的比例为1:18g/mL，然后置于超声波清洗机中超声功率为280W条件下超声处理50分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，浸膏与正己烷的比例为1:15g/mL，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将质量比为9:1.2:0.15的步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1.5小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中60MPa压力下微射流处理5分钟，取出后5000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
实施例2
按照以下步骤制备多肽食品防腐剂：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下强度为50mW/cm2条件下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用浓度为0.5mol/L的盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2小时得到酸提液，将酸提液5000r/min速度下离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，夏威夷果仁蛋白粉与蒸馏水的比例为1:80g/mL，将夏威夷果仁蛋白溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入由质量比为3:1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合酶后55℃下酶解2小时得到酶解液，复合酶与夏威夷果仁蛋白粉溶液的比例为2000U/g，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，8000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入体积浓度为60％的乙醇水溶液中浸泡30分钟，锡兰莓果肉粉与乙醇水溶液的比例为1:18g/mL，然后置于超声波清洗机中超声功率为280W条件下超声处理60分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，浸膏与正己烷的比例为1:15g/mL，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将质量比为8:1:0.1的步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌2小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中60MPa压力下微射流处理5分钟，取出后5000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
实施例3
按照以下步骤制备多肽食品防腐剂：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下强度为50mW/cm2条件下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取2小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用浓度为0.5mol/L的盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置3小时得到酸提液，将酸提液5000r/min速度下离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，夏威夷果仁蛋白粉与蒸馏水的比例为1:80g/mL，将夏威夷果仁蛋白溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入由质量比为3:1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合酶后55℃下酶解3小时得到酶解液，复合酶与夏威夷果仁蛋白粉溶液的比例为2000U/g，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，8000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入体积浓度为60％的乙醇水溶液中浸泡30分钟，锡兰莓果肉粉与乙醇水溶液的比例为1:18g/mL，然后置于超声波清洗机中超声功率为280W条件下超声处理45分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，浸膏与正己烷的比例为1:15g/mL，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将质量比为10:1.5:0.2的步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中60MPa压力下微射流处理5分钟，取出后5000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
实施例4
按照以下步骤制备多肽食品防腐剂：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下强度为50mW/cm2条件下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1.5小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用浓度为0.5mol/L的盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2.5小时得到酸提液，将酸提液5000r/min速度下离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，夏威夷果仁蛋白粉与蒸馏水的比例为1:80g/mL，将夏威夷果仁蛋白溶液用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入由质量比为3:1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成的复合酶后55℃下酶解2.5小时得到酶解液，复合酶与夏威夷果仁蛋白粉溶液的比例为2000U/g，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，8000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入体积浓度为60％的乙醇水溶液中浸泡30分钟，锡兰莓果肉粉与乙醇水溶液的比例为1:18g/mL，然后置于超声波清洗机中超声功率为280W条件下超声处理55分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，浸膏与正己烷的比例为1:15g/mL，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将质量比为8:1:0.1的步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1.5小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中60MPa压力下微射流处理5分钟，取出后5000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
参比实施例1
与实施例1不同的地方在于：步骤S1改为：“将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL”，步骤S2中的预处理夏威夷果仁粉溶液替换为夏威夷果仁粉溶液，即省去微波预处理操作。
参比实施例2
与实施例1不同的地方在于：省去步骤S4，步骤S5中缺少锡兰莓提取物。
参比实施例3
与实施例1不同的地方在于：步骤S5改为“将质量比为8:1:0.1的步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1.5小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液5000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂”，即省去微射流处理步骤。
对比例1：申请号为CN200610042587.8的中国专利的实施例1。
试验例一：抗菌性能测试
将50μL 108CFU/mL的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液均匀涂布于无菌LB平板上，将实施例1-4、参比实施例1-3、对比例分别配制成1％质量浓度的防腐剂水溶液，分别取10μL防腐剂水溶液滴加到LB平板上，置于37℃的恒温培养箱中培养24小时，用游标卡尺测定抑菌圈直径。抑菌圈直径越大表明抗菌性能越好，测试结果如表1所示：
表1
由表1可看出，本发明实施例1-4的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径均明显大于对比例，表明本发明制得的多肽食品防腐剂具有较好的抗菌性能，其中实施例1的抗菌性能最好。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例1和参比实施例2的抑菌圈直径有所减小，说明微波预处理操作和锡兰莓提取物均能提高多肽食品防腐剂的抗菌性能。
试验例二：抗氧化性能测试
将实施例1-4、参比实施例1-3、对比例分别配制成2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL的样品溶液备用，用无水乙醇配制0.04mg/mL的DPPH溶液，分别取2mL不同浓度的样品溶液加入2mL DPPH溶液，混合均匀后室温静置1小时，5000r/min速度下离心15分钟得到上清液，将上清液在517nm处测定吸光值，以VC作为阳性对照，按照下式计算出各样品溶液对DPPH自由基清除率：
DPPH自由基清除率＝(A0-A1+A2)/A0×100％。
A0为2mL无水乙醇+2mL DPPH溶液的吸光值；A1为2mL样品溶液+2mL DPPH溶液的吸光值；A2为2mL无水乙醇+样品溶液的吸光值。
DPPH自由基清除率越高表明抗氧化性能越好，测试结果如表2所示：
| DPPH自由基清除率(％) | |
| 实施例1 | 76.53 |
| 实施例2 | 76.38 |
| 实施例3 | 76.42 |
| 实施例4 | 76.50 |
| 参比实施例1 | 72.67 |
| 参比实施例2 | 76.52 |
| 参比实施例3 | 76.53 |
| 对比例 | 67.84 |
表2
由表2可看出，本发明实施例1-4的DPPH自由基清除率均明显高于对比例，表明本发明制得的多肽食品防腐剂具有较好的抗氧化性能，其中实施例1的抗氧化性能最好。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例1的DPPH自由基清除率有所降低，说明微波预处理操作能提高多肽食品防腐剂的抗氧化性能。
试验例三：热稳定性测试
将实施例1-4、参比实施例1-3、对比例分别配制成1mg/mL的样品溶液备用，取10mL样品溶液分别置于60℃的水浴锅中保温1小时后冷却至室温，按照试验例二的方法再次测定DPPH自由基清除率，按照下式计算出DPPH自由基清除率保持率A：
DPPH自由基清除率保持率A＝保温后DPPH自由基清除率/初始DPPH自由基清除率×100％。
DPPH自由基清除率保持率A越高表明热稳定性越好，测试结果如表3所示：
| DPPH自由基清除率保持率A(％) | |
| 实施例1 | 88.76 |
| 实施例2 | 88.68 |
| 实施例3 | 88.74 |
| 实施例4 | 88.71 |
| 参比实施例1 | 88.76 |
| 参比实施例2 | 79.55 |
| 参比实施例3 | 88.75 |
| 对比例 | 75.39 |
表3
由表3可看出，本发明实施例1-4的DPPH自由基清除率保持率A均明显高于对比例，表明本发明制得的多肽食品防腐剂具有较好的热稳定性，其中实施例1的热稳定性最好。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例2的DPPH自由基清除率保持率A有所降低，说明锡兰莓提取物能提高多肽食品防腐剂的热稳定性。
试验例四：低温贮藏稳定性测试
将实施例1-4、参比实施例1-3、对比例分别配制成1mg/mL的样品溶液备用，取10mL样品溶液分别置于4℃的冰箱中保存，30天后取出按照试验例二的方法再次测定DPPH自由基清除率，按照下式计算出DPPH自由基清除率保持率B：
DPPH自由基清除率保持率B＝低温保存后DPPH自由基清除率/初始DPPH自由基清除率×100％。
DPPH自由基清除率保持率B越高表明低温贮藏稳定性越好，测试结果如表3所示：
表4
由表4可看出，本发明实施例1-4的DPPH自由基清除率保持率B均明显高于对比例，表明本发明制得的多肽食品防腐剂具有较好的低温贮藏稳定性，其中实施例1的低温贮藏稳定性最好。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例2、参比实施例3的DPPH自由基清除率保持率B均有所降低，说明锡兰莓提取物和微射流提取操作均能提高多肽食品防腐剂的低温贮藏稳定性。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其性能，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (6)
1.一种多肽食品防腐剂，其特征在于：由以下步骤制成：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1-2小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2-3小时得到酸提液，将酸提液离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，将夏威夷果仁蛋白溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入复合酶后55℃下酶解2-3小时得到酶解液，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4. 将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入乙醇水溶液中浸泡30分钟，然后置于超声波清洗机中超声处理45-60分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将质量比为（8-10）:（1-1.5）:（0.1-0.2）的步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1-2小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中微射流处理5分钟，取出后离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂，微射流设备的压力为60MPa，离心时的速度为5000r/min。
2.根据权利要求1所述的一种多肽食品防腐剂，其特征在于：所述步骤S1中，夏威夷果仁粉与蒸馏水的比例为1:30g/mL，微波处理的强度为50mW/cm²。
3.根据权利要求1所述的一种多肽食品防腐剂，其特征在于：所述步骤S2中，氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L，盐酸溶液的浓度为0.5mol/L，离心时的速度为5000r/min。
4.根据权利要求1所述的一种多肽食品防腐剂，其特征在于：所述步骤S3中，夏威夷果仁蛋白粉与蒸馏水的比例为1:80g/mL，氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L，复合酶由质量比为3:1的碱性蛋白酶和中性蛋白酶组成，复合酶与夏威夷果仁蛋白粉溶液的比例为2000U/g, 离心时的速度为8000r/min。
5.根据权利要求1所述的一种多肽食品防腐剂，其特征在于：所述步骤S4中，乙醇水溶液的体积浓度为60%，锡兰莓果肉粉与乙醇水溶液的比例为1:18g/mL，超声提取时的超声功率为280W，浸膏与正己烷的比例为1:15g/mL。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种多肽食品防腐剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.将夏威夷果仁粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁粉，将夏威夷果仁粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁粉溶液，将夏威夷果仁粉溶液置于微波反应器中，30℃下微波处理5分钟后取出得到预处理夏威夷果仁粉溶液；
S2.将步骤S1所得预处理夏威夷果仁粉溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为9.5，搅拌提取1-2小时得到碱提液，将碱提液离心15分钟得到上清液，将上清液用盐酸溶液调节pH值为5.0，室温下静置2-3小时得到酸提液，将酸提液离心15分钟得到沉淀物，将沉淀物用去离子水洗涤至中性后真空冷冻干燥得到夏威夷果仁蛋白；
S3.将步骤S2所得夏威夷果仁蛋白粉碎后过80目筛得到夏威夷果仁蛋白粉，将夏威夷果仁蛋白粉加入蒸馏水中混合均匀得到夏威夷果仁蛋白粉溶液，将夏威夷果仁蛋白溶液用氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，加入复合酶后55℃下酶解2-3小时得到酶解液，将酶解液沸水浴灭酶15分钟后冷却至室温，离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到夏威夷果多肽；
S4.将锡兰莓果肉烘干后粉碎至80目得到锡兰莓果肉粉，将锡兰莓果肉粉加入乙醇水溶液中浸泡30分钟，然后置于超声波清洗机中超声处理45-60分钟得到提取液，将提取液过滤后得到滤液，将滤液浓缩成浸膏，将浸膏用正己烷萃取得到萃取液，将萃取液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到锡兰莓提取物；
S5.将步骤S3所得夏威夷果多肽、步骤S4所得锡兰莓提取物、蔗糖脂肪酸酯混合，加热至60℃后搅拌1-2小时，冷却至室温后得到混合液，将混合液置于微射流设备中微射流处理5分钟，取出后离心15分钟得到上清液，将上清液旋蒸浓缩后真空冷冻干燥得到多肽食品防腐剂。
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