CN108077925A - 接骨木莓提取物的制备方法及具增强免疫功能的益生菌粉 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种接骨木莓提取物的制备方法，将接骨木莓果实打碎成果浆，加乙醇浸泡、过滤后得滤液，将滤液旋转蒸发至乙醇完全挥发，冻干成粉即得；本发明还提供了接骨木莓提取物的应用，采用添加接骨木莓提取物制备具增强免疫功能的益生菌粉，可提高人体免疫能力，且具有特殊果味，适合儿童、青少年等不同人群食用。本发明适用于增强人体免疫力及具有增强免疫功能的益生菌粉的制备。
Description
技术领域
本发明属于食品领域，涉及一种植物提取物的制备，具体涉及一种接骨木莓提取物的制备方法及具增强免疫功能的益生菌粉。
背景技术
在我国内陆空气环境日趋恶化，雾霾加重的条件下，由于儿童、中老年体质较弱，免疫力低下，急慢性上呼吸道感染、流感等的发病率正在逐年升高。呼吸道感染的发生于多种因素相关，如病毒病菌、环境气候、年龄体质等，气候的异常变化、人体自身防御能力的下降、空气中或机体呼吸道所存在的病毒的侵袭，均易造成呼吸道感染的发生发展。除疾病发生后及时给药治疗外，还应适时提高机体免疫力，提前预防，更有助于改善疾病的发生发展。益生菌制剂是将对人体健康有益的益生菌制成微生物制剂，调节人体微生态平衡，增强免疫功能等。
水果一直是人们日常饮食中不可缺少的重要组成，其中的莓类水果不仅酸甜可口，还富含维生素C、花青素等多种有益成分。研究表明，欧美地区的一种黑色莓类，接骨木莓，不仅具有抗病毒、抗菌等活性，其中的花青素也可帮助调节免疫反应，增强人体抵抗力，但是目前还没有将其制备成益生菌粉的方法。
因此，研究一种既能够提高免疫功能又方便饮食的益生菌粉，具有重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题，是提供一种接骨木莓提取物的制备方法及相应的具增强免疫功能的益生菌粉，添加接骨木莓提取物可提高人体免疫能力，且具有特殊果味，适合儿童、青少年等不同人群食用；
本发明的另外一个目的，是提供上述具有增强免疫功能的益生菌粉的一种制备方法。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
一种接骨木莓提取物的制备方法，是将接骨木莓果实打碎成果浆，加30～65%乙醇于30～35℃下浸泡2 ～4 h；所得浸提液过滤后得滤液，将滤液在30～40℃下旋转蒸发至乙醇完全挥发，-40℃～-35℃冻干成粉后粉碎，过40目筛，即得。
本发明还提供了上述接骨木莓提取物的一种应用，它用于制备具有增强免疫功能的益生菌粉。
本发明也提供了一种具增强免疫功能的益生菌粉，制成它的原料以重量份数计包括：
副干酪乳杆菌N1115菌粉 0.1～15份、接骨木莓提取物1～30份、低聚异麦芽糖1～20份、低聚半乳糖1～10份、麦芽糊精1～30份、海藻糖0.5～5份、L-谷氨酸钠1～10份。
本发明另外还提供了上述具增强免疫功能的益生菌粉的一种制备方法，按照以下步骤顺序进行：
1）制备N1115干粉
将副干酪乳杆菌N1115发酵培养，富集浓缩后冷冻干燥，制备成副干酪乳杆菌N1115干粉，其中，麦芽糊精、海藻糖、L-谷氨酸钠于发酵完成后、冷冻干燥前加入；
2）混合搅拌
分别称取副干酪乳杆菌N1115干粉和接骨木莓提取物，预混，充分搅拌10min，再与低聚异麦芽糖、低聚半乳糖一起投入混料罐，混合搅拌10min，制得混合物a，即得。
作为优化，上述步骤2）后还设有步骤3），即将混合物a包装后入4℃冷库保存。
作为限定，所述步骤1），即制备N1115干粉，按照如下步骤顺序进行：
①将副干酪乳杆菌N1115接入MRS液体培养基，接种量为1～3%，37℃培养48h，重复培养三代；然后，
将上述培养好的种子液接入发酵罐继续扩大培养，控制培养液的OD值在4～6之间、pH≤ 4.0，转速为60 rpm匀速搅拌，于26～38℃发酵培养5～16 h；
②发酵液中菌体浓度达到106～108 CFU/mL后，离心收集菌体，离心转速为14000 rpm；加入麦芽糊精、海藻糖和L-谷氨酸钠，充分混匀3 h；
③将上述混合液装入真空冷冻机内冻干，温度控制在-40℃～-35℃，使冻干菌粉的水分低于或等于8%；
④冻干完成后继续进行粉碎，并将粉碎后的菌粉过40目筛，检测冻干菌粉的活菌数，达到1010～1011 CFU/g，即得。
本发明中：
采用的副干酪乳杆菌N1115，为已公开菌种，它分离自内蒙古民族传统发酵乳制品，是一株具有耐酸耐胆盐特性和免疫调节作用的益生菌。
由于采用了上述的技术方案，本发明与现有技术相比，所取得的技术进步在于：
接骨木莓本身是具有增强免疫功能，本发明提供了接骨木莓提取物的制备方法，并采用添加接骨木莓提取物制备具可提高人体免疫能力的益生菌粉，且该菌粉具有特殊果味，适合儿童、青少年等不同人群食用。另外，添加低聚糖，低聚异麦芽糖作为益生菌粉的原料，不易被乳杆菌和人体消化液降解，可有效抵达肠道促进人体肠道双歧杆菌增殖。低聚半乳糖，可同时被副干酪乳杆菌N1115和人体肠道双歧杆菌利用，促进副干酪乳杆菌N1115和双歧杆菌产生胞外多糖，且不产生过敏反应，适合有乳糖不耐症状的人群食用。添加上述两种低聚糖，经副干酪乳杆菌N1115和人体肠道双歧杆菌利用，可被发酵分解成多种短链脂肪酸，降低肠道pH，有助于抑制有害菌的生长代谢。其水分活度低于蔗糖等其他常用糖类，具有较好的保存效果。
本发明适用于提取接骨木莓的有效成份，并用于能增强人体免疫力的益生菌粉的制备。
本发明下面将结合说明书附图与具体实施例作进一步详细说明。
附图说明
图1-图4为本发明对比例为副干酪乳杆菌N1115添加量和接骨木莓添加量对比图。
具体实施方式
实施例１-6 接骨木莓提取物的制备方法
实施例１-6 分别为一种接骨木莓提取物的制备方法，它们是将接骨木莓果实打碎成果浆，加30～65%乙醇于30～35℃下浸泡2～4h；所得浸提液过滤后得滤液，将滤液在30～40℃下旋转蒸发至乙醇完全挥发，-40℃～-35℃冻干成粉后粉碎，过40目筛，即得。
实施例7-12 实施例1-6所制备的接骨木莓提取物于制备具增强免疫功能的益生菌粉上的应用
实施例7-12将实施例1-6所制的各种接骨木莓提取物进行了应用，分别提供了一种具增强免疫功能的益生菌粉，制成它们的原料以重量份数计包括：
副干酪乳杆菌N1115菌粉 0.1～15份、接骨木莓提取物1～30份、低聚异麦芽糖1～20份、低聚半乳糖1～10份、麦芽糊精1～30份、海藻糖0.5～5份、L-谷氨酸钠1～10份。它们的制备方法按照以下步骤顺序进行：
1）制备N1115干粉
将副干酪乳杆菌N1115发酵培养，富集浓缩后冷冻干燥，制备成副干酪乳杆菌N1115干粉，其中，麦芽糊精、海藻糖、L-谷氨酸钠于发酵过程中加入。具体地，制备N1115干粉按照以下步骤①～③顺序进行：
①将副干酪乳杆菌N1115接入MRS液体培养基，接种量为1～3%，37℃培养48h，重复培养三代；然后，
将上述培养好的种子液接入发酵罐继续扩大培养，控制培养液的OD值在4～6之间、pH≤ 4.0，转速为60 rpm匀速搅拌，于26～38℃发酵培养5～16 h；
②发酵液中菌体浓度达到106～108 CFU/mL后，离心收集菌体，离心转速为14000 rpm；加入麦芽糊精、海藻糖和L-谷氨酸钠，充分混匀3 h；
③将上述混合液装入真空冷冻机内冻干，温度控制在-40℃～-35℃，使冻干菌粉的水分低于或等于8%；
④冻干完成后继续进行粉碎，并将粉碎后的菌粉过40目筛，检测冻干菌粉的活菌数，达到1010～1011 CFU/g，即得N1115干粉。
2）混合搅拌
分别称取副干酪乳杆菌N1115干粉和接骨木莓提取物，预混，充分搅拌10min，再与低聚异麦芽糖、低聚半乳糖一起投入混料罐，混合搅拌10min，制得混合物a。
3）将混合物a包装后入4℃冷库保存。
实施例13 体外细胞模型评价
本实施例设置不同的副干酪乳杆菌N1115添加量和接骨木莓添加量，通过体外细胞模型评价上述两种原料的优势配比。具体的评价方法如下：
将培养好的Caco-2细胞进行前处理，用无菌PBS洗涤2次后分别加入1 mL无抗生素的DMEM培养液和不同含量的副干酪乳杆菌N1115冻干菌粉和接骨木莓提取物，5% CO2培养箱中于37℃下静置3 h。静置结束，用无菌PBS洗涤3次，提取Caco-2细胞的总RNA，转录成cDNA后用于检测白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-12（Interleukin-12，IL-12）和肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表达量。采用Real-time PCR方法检测，反应条件为：95 ℃预变性15 min；95 ℃变性10 s，62℃退火20 s，72℃延伸30s，循环40次；在72℃延伸30 s的过程中收集荧光值。
本实施例的评价结果参考图1-图4。
由图1-图4可知，无N1115菌粉和接骨木莓提取物添加时，Caco-2内的三种细胞因子的含量正常；单独加入不同比例的接骨木莓提取物或N1115菌粉后，Caco-2内的细胞因子表达量均略有变化；同时加入5%N1115菌粉和10%接骨木莓提取物后，对Caco-2内细胞因子的表达量的影响较为明显，IL-6提高2倍，TNF-α提高3倍。
实施例14 具增强免疫功能的益生菌粉的动物实验
本实施例对实施例7-12所制的具增强免疫功能的益生菌粉进行了动物实验，验证其对动物免疫能力的调节作用。具体的实验方法如下：
共选取20只小鼠，随机平均分为2组，2组灌胃计量均为8g/kgBW，每天一次，连续30天，灌胃前、后检验小鼠免疫力各项指标，包括抗体细胞生成数量、NK细胞活性、巨噬细胞吞噬鸡红细胞率。对照为麦芽糊精。以上三项检测均采用已有标准检测方法，抗体生成细胞检测实验采用Jerme改良玻片法、NK细胞活性测定实验采用乳酸脱氢酶LDH测定法、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验采用半体内法，在此不再赘述。
上述结果表明，本发明所制的具增强免疫功能的益生菌粉对小鼠具有一定免疫调节能力。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述技术内容作为启示加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作出的简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明权利要求的保护范围。
Claims (6)
1.一种接骨木莓提取物的制备方法，其特征在于：它是将接骨木莓果实打碎成果浆，加30～65%乙醇于30～35℃下浸泡2 ～4 h；所得浸提液过滤后得滤液，将滤液在30～40℃下旋转蒸发至乙醇完全挥发，-40℃～-35℃冻干成粉后粉碎，过筛，即得。
2.如权利要求1所述的接骨木莓提取物的一种应用，其特征在于：它用于制备具有增强免疫功能的益生菌粉。
3.一种具增强免疫功能的益生菌粉，其特征在于制成它的原料以重量份数计包括：
副干酪乳杆菌N1115菌粉 0.1～15份、接骨木莓提取物1～30份、低聚异麦芽糖1～20份、低聚半乳糖1～10份、麦芽糊精1～30份、海藻糖0.5～5份、L-谷氨酸钠1～10份。
4.权利要求3所述的具增强免疫功能的益生菌粉的一种制备方法，其特征在于它按照以下步骤顺序进行：
1）制备N1115干粉
将副干酪乳杆菌N1115发酵培养，富集浓缩后冷冻干燥，制备成副干酪乳杆菌N1115干粉，其中，麦芽糊精、海藻糖、L-谷氨酸钠于发酵完成后、冷冻干燥前加入；
2）混合搅拌
分别称取副干酪乳杆菌N1115干粉和接骨木莓提取物，预混，充分搅拌10min，再与低聚异麦芽糖、低聚半乳糖一起投入混料罐，混合搅拌10min，制得混合物a，即得。
5.权利要求4所述的具增强免疫功能的益生菌粉的制备方法，其特征在于所述步骤2）后还设有步骤3），即将混合物a包装后入4℃冷库保存。
6.权利要求4或5所述的具增强免疫功能的益生菌粉的制备方法，其特征在于：所述制备N1115干粉按照如下步骤顺序进行：
①将副干酪乳杆菌N1115接入MRS液体培养基，接种量为1～3%，37℃培养48h，重复培养三代；然后，
将上述培养好的种子液接入发酵罐继续扩大培养，控制培养液的OD值在4～6之间、pH≤ 4.0，转速为60 rpm匀速搅拌，于26～38℃发酵培养5～16 h；
②发酵液中菌体浓度达到106～108 CFU/mL后，离心收集菌体；加入麦芽糊精、海藻糖和L-谷氨酸钠，充分混匀；
③将上述混合液装入真空冷冻机内冻干，温度控制在-40℃～-35℃，使冻干菌粉的水分低于或等于8%；
④冻干完成后继续进行粉碎，并将粉碎后的菌粉过筛，检测冻干菌粉的活菌数，达到1010～1011 CFU/g，即得。
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