CN104509864B - 一种具有改善胃肠功能的营养保健食品及其制备方法 - Google Patents
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- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
- A23V2400/533—Longum
Abstract
本发明公开了一种具有改善胃肠功能的营养保健食品及其制备方法，从增加益生菌种类和数量、增加益生菌营养物质、抑制有害菌生长及增加人体免疫力等多方面调整肠道菌群，改善胃肠功能。以植物乳杆菌等益生菌粉剂为主要原料，科学复配食用菌提取物、改性膳食纤维；可显著提高人体免疫力、抗炎镇痛、具有抗氧化、抗辐射和抗疲劳等功能的雪莲培养物提取物等，进而在增加肠道益生菌菌群种类的同时，显著增强了内源和外源益生菌在人体肠道内的定植能力及定植时间，有效抑制了肠道有害菌尤其是革兰氏阴性菌的生长及繁殖，充分调节了肠道益生菌菌群的组成，制备出一种益生性强、显著提高人体免疫力、具有改善胃肠功能的营养保健食品。
Description
技术领域
本发明涉及营养保健食品，具体涉及一种具有改善胃肠功能的营养保健食品及其制备方法。
背景技术
改善胃肠功能包括通便、调节肠道菌群、促进消化、对胃粘膜损伤有辅助保护四种功能。肠道菌菌相间的平衡受宿主的生理、食物、药物和肠道菌的相互作用等影响,各种因素都会破坏菌相间的平衡,导致肠道从有益菌占优势转向有害菌占优势,从而造成许多肠道疾病。因此,增加肠道有益菌的数量,减少有害菌数量,是保证肠胃健康运转的关键所在。
菌群失调(dysbacteriosis)是指机体某部位正常菌群中各菌种间的比例发生较大幅度变化而超出正常范围的状态，由此产生的病症，称为菌群失调症或菌群交替症(microbial selection and substitution)。菌群失调时，多引起二重感染或重叠感染(superinfection)，即在原发感染的治疗中，发生了另一种新致病菌的感染。菌群失调的发生多见于使用抗生素和慢性消耗性疾病等。临床上长期大量应用广谱抗生素后，大多数敏感菌和正常菌群被抑制或杀灭，但耐药菌则获得生存优势而大量繁殖致病，如耐药金黄色葡萄球菌引起腹泻、败血症，对抗生素不敏感的白假丝酵母菌引起鹅口疮、阴道炎、肠道和肛门感染。
目前，调整肠道菌群的方式主要以补充益生菌种类和数量、补充益生菌所需营养物质(益生因子)、抑制或杀灭肠道有害菌(主要是革兰氏阴性菌)、增强人体免疫力以提高巨噬细胞对有害菌的吞噬作用等方式以达到肠道菌群平衡的目的，中国专利CN 10155908A公开了一种降血脂及调节肠道菌群的益生菌制剂的制备方法，其步骤为(1)将Kefir源植物乳杆菌MA2进行高密度培养，得到发酵液，其菌体密度不小于108cfu/mL；(2)上述发酵液经离心收集获得菌体，加入保护剂，冻干成菌粉；(3)在冻干的菌粉中加入低聚糖混合物，混合均匀即得益生菌制剂成品。该品具有降血脂功能的同时还具有调节肠道菌群的生理功能，可以治疗和预防高血脂症状和调节肠道菌群，且无毒、安全、保存期长，可制成胶囊、微胶囊、冲剂、片剂等。中国专利CN 102511707 B公开了一种调节肠道的保健食品及其制作方法，包括以下重量份的组份：天然植物提取物50-60％；低聚果糖8-12％；微生态制剂益生菌2-3％；蜂蜜20-30％；其中，所述天然植物提取物包括无花果提取物、西梅提取物、罗望子提取物、蜜枣提取物，其重量比为10∶1∶1∶1。将天然植物提取物粉碎；称取蜂蜜于蒸发皿中加热至沸，待蜜表面泛起气泡，立即取下；将称量好的天然植物提取物与低聚果糖、益生菌混合，混合的时候要等蜜温度降至30-40℃时再加入，做成面团状的软材；将活好的面团状软材放置，使药料与蜂蜜成分充分混合滋润，制成圆球形丸粒。此产品以纯天然植物提取物、低聚果糖、微生态制剂为主要原料，在不刺激肠道的前提下调节肠道功能，达到预防治疗便秘的效果。中国专利CN 103054938 A公开了一种调节胃肠菌群失调的口服制剂，它涉及一种口服制剂。本发明要解决现在临床上长期大量应用广谱抗生素调节胃肠菌群失调，产生耐药性的问题。本发明的口服制剂是由菊粉、人参提取物、白术提取物、茯苓提取物、甘草提取物制成。本发明一种有助于改善胃肠功能的口服制剂组方科学、原料易得、配制方便、作用明显，副作用小，且适合于工业化生产。
上述公开的专利采用为传统的益生菌和益生因子及其组合，没有分离或培养出益生性更强的益生菌，其益生菌生物活性还不是很理想，传统的益生因子对益生菌的增殖作用滞后，并且在抑制肠道有害菌、增强人体免疫力进而提高巨噬细胞对有害菌的吞噬作用，以改善肠道益生菌群方面研究的较少。
发明内容
本发明所解决的技术问题是克服现有改善胃肠功能保健品的缺陷，从增加益生菌种类和数量、增加益生菌营养物质、抑制有害菌生长及增加人体免疫力等多方面调整肠道菌群，改善胃肠功能。以植物乳杆菌等益生菌粉剂为主要原料，科学复配可修复细胞组织、具有抗溃疡作用、抗氧化作用、清除自由基作用和抗衰老作用，可显著提升人体整体免疫力和增强体力、改善胃肠功能的食用菌提取物；含有高含量可溶性纤维素的改性膳食纤维；可显著提高人体免疫力、抗炎镇痛、具有抗氧化、抗辐射和抗疲劳等功能的雪莲培养物提取物等为原料，进而在增加肠道益生菌菌群种类的同时，显著增强了内源和外源益生菌在人体肠道内的定植能力及定植时间，有效抑制了肠道有害菌尤其是革兰氏阴性菌的生长及繁殖，充分调节了肠道益生菌菌群的组成，制备出一种益生性强、显著提高人体免疫力、具有改善胃肠功能的营养保健食品。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种具有改善胃肠功能的营养保健食品，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇5-50份，麦芽糊精5-30份，微晶纤维素5-30份，益生菌粉剂2-20份，改性膳食纤维5-20份，低聚木糖3-15份，异麦芽酮糖醇3-15份，浓缩乳清蛋白3-15份，食用菌提取物3-15份，雪莲培养物提取物3-10份，果胶分解物2-10份，α-环状糊精1-10份，柠檬酸0.1-3份，硬脂酸镁0.1-3份，牛奶香精0.1-3份，β-胡萝卜素0.01-3份；
优选地，所述具有改善胃肠功能的营养保健食品，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇15-35份，麦芽糊精10-20份，微晶纤维素10-20份，益生菌粉剂8-12份，改性膳食纤维8-12份，低聚木糖7-11份，异麦芽酮糖醇7-11份，浓缩乳清蛋白7-11份，食用菌提取物7-11份，雪莲培养物提取物5-8份，果胶分解物5-7份，α-环状糊精1.5-5份，柠檬酸1.5-2.5份，硬脂酸镁1.5-2.5份，牛奶香精1.5-2.5份，β-胡萝卜素1-2份；
更优选地，所述具有改善胃肠功能的营养保健食品，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇25份，麦芽糊精15份，微晶纤维素15份，益生菌粉剂10份，改性膳食纤维10份，低聚木糖9份，异麦芽酮糖醇9份，浓缩乳清蛋白9份，食用菌提取物9份，雪莲培养物提取物7份，果胶分解物6份，α-环状糊精3份，柠檬酸2份，硬脂酸镁2份，牛奶香精2份，β-胡萝卜素1.5份；
进一步地，所述益生菌粉剂包括但不限于以下益生菌粉剂中的一种或多种：例如：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、婴儿双岐杆菌(B.infantis)、长双岐杆菌(B.longum)、短双岐杆菌(B.breve)、青春双岐杆菌(B.adolescentis)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus.Bulgaricus)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、干酪乳杆菌(LactobacillusCasey)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)；也包括用于保健食品的真菌粉剂中的一种或多种，例如：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、产朊假丝酵母(Cadidaatilis)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、卡氏酵母(Saccharomycescarlsbergensis)、蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Chen et Dai,sp.nov)、蝙蝠蛾被毛孢(Hirsutella hepiali Chen et Shen)、灵芝(Ganoderma lucidum)、紫芝(Ganoderma sinensis)、松杉灵芝(Ganoderma tsugae)、红曲霉(Monacus anka)、紫红曲霉(Monacus purpureus)；
所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为：7x1012-9x1012cfu/g；
优选地，所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌40-50份，长双歧杆菌30-45份，两岐双岐杆菌25-35份，青春双岐杆菌15-20份，乳双歧杆菌15-20份，保加利亚乳杆菌15-20份，嗜酸乳杆菌10-15份，干酪乳杆菌8-10份，嗜热链球菌8-10份，酿酒酵母8-10份，产朊假丝酵母菌4-6份；
优选地，所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2014制备，该菌株已于2014年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号.中国科学院微生物研究所.邮编：100101)，保藏编号为CGMCC NO.9405，分类命名为：植物乳杆菌Lactobacillus plantarum。
进一步地，所述改性膳食纤维是将膳食纤维经物理、化学或生物的方法处理而得到的，可溶性纤维素含量高、生物活性强、对肠道益生菌群有重要的、积极作用的纤维素，与普通膳食纤维相比，其生物活性作用更强大：1)可溶性纤维素含量高，更容易被益生菌利用，可提高益生菌在肠道的生长及繁殖能力，增加益生菌菌群的种类和数量，降低大肠pH值，改善肠道微生态环境；2)强大的吸附能力，经改性后，纤维素的比表面积增大，网格结构丰富，吸附力增强，螯合、吸附胆固醇和胆汁酸类的有机分子能力更强、抑制人体对它们的吸收；3)离子交换能力增强，对金属元素，特别是重金属元素吸附效果更强；4)持水性、膨胀性、增稠性更强且不受酸、碱、盐的影响，5)调节和维持肠道菌群的定植时间，增强肠道的消化和吸收能力，提高人体免疫力；6)促进胃肠蠕动，减缓并消除胃胀、腹胀等不良反应；7)包埋作用强，防止外界环境(氧气、温度、光照、湿度等)因素对产品品质的影响，稳定了产品的生物活性，延长了产品的保质期；
优选地，所述改性纤维是由菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维中的一种或多种经生物酶酶解而得到的；
更优选地，所述改性膳食纤维的制备方法包括以下步骤：将菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维按质量比8-10:4-6:3-5:2-4均匀混合，加入其质量3-7倍的水，室温200-300W、35-40KHz条件超声提取10-15min,然后在电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场提取；用乳酸调节pH值为4.5-6.5，加入混合物质量0.1-0.3％的生物酶，于45-55℃酶解20-48min；酶解液减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得改性膳食纤维；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比5-9:2-4:2-4:2-4:1-3均匀混合。
进一步地，所述食用菌提取物是以修复细胞组织、具有抗溃疡作用、抗氧化作用、清除自由基作用和抗衰老作用，可显著提升人体整体疫免力和增强体力、改善胃肠功能的食用菌经超声清洗、高压脉冲电场处理和生物酶解而制备的；
优选地，所述食用菌提取物的制备方法包括如下步骤：将猴头菇、银杏和黑木耳分别放入装有0.3-0.5％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比按质量比8-10:5-7:4-6均匀混合，然后于-21—-25℃冷冻10-30min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.2-1mm；加入粉碎物质量3-5倍的水得混合物，调整混合物pH为4.5-6，室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间500-700μs,脉冲频率200-400Hz条件下进行高压脉冲电场处理，升温至45～55℃，加入混合物重量0.5-1.2％的混合酶酶解4～6小时，得到食用菌酶解液，减压浓缩至固形物含量为30％以上，冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得食用菌提取物；
所述食用菌酶解液中食用菌多糖含量高达6.82％；
所述混合酶重量份数组成为：木瓜蛋白酶20-30份，菠萝蛋白酶20-30份，葡聚糖酶10-15份，木聚糖酶10-15份，戊聚糖酶10-15份，无花果蛋白酶5-10份，中温淀粉酶5-10份，果胶酶5-10份，单宁酶3-5份。
进一步地，所述雪莲培养物购自大连普瑞康生物技术有限公司，为紫红色团块状颗粒，种源系“天山雪莲”；
进一步地，所述雪莲培养物提取物是以雪莲培养物为原料经冷冻、粉碎、微波辅助超声提取、低温酶解、高压脉冲电场提取等低温提取技术而制得，可最大限度地保留金合欢素、粗毛豚草素、芦丁、槲皮素等黄酮类物质和其它抗氧化、易挥发、热敏性有效成分；
优选地，所述雪莲培养物提取物的制备方法包括如下步骤：取雪莲培养物，浸入盛有质量百分比浓度为0.9-1.1％的无菌低聚果糖水溶液的容器中，取出，然后于-18—-23℃冷冻5-10min；立即粉碎至粒径0.3-1mm；置容器中并添加3-5倍重量的水或35-75％的乙醇，得混合物料，用乳酸调节pH值为3.5-5.5，于室温下在电场强度25-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理；然后升温至30-40℃，保温，在功率150-300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间60-80s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，如此辐照10次，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；继续升温至40-50℃，保温，然后加入混合物料总重量2.5-4％的复配酶酶解30-50min，过滤，得滤液；滤渣用1-3倍重量76-80℃水漂洗3次，漂洗液与滤液合并，均匀混合，于室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理即得雪莲培养物提取物；
所述复配酶由果胶酶、纤维素酶、单宁酶、淀粉酶和蛋白酶按质量比3-7:3-5:2-4:1-3:1-2均匀混合。
所述果胶分解物具有天然、柔和适口的酸味和显著的抑菌特性，尤其对大肠杆菌抑制作用最强，同时还具有较强的抗氧化性，浓度达到0.01％时即可作用，对超氧自由基、羟自由基和DPPH自由基都表现出很强的消除作用，当浓度达到1.0％时，消除效果达到100％；
所述果胶分解物的科学复配，可有效提高本发明营养保健食品的适口性，最主要的是其显著的抑菌特性和抗氧化性避免了有效成分的氧化和微生物侵害，稳定和提高了产品的生物活性，延长了产品的保质期；
进一步地，所述果胶分解物是以柠檬、橙、柚、柑桔、葡萄等果皮或山楂、甜菜、苹果等废渣经超声清洗、高压脉冲提取、热水浸提、醇沉获得果胶，然后经果胶酶酶解而制得的；优选地，所述果胶分解物的制备方法，包括如下步骤：将新鲜的山楂果渣、柚皮、苹果渣、甜菜渣分别放入装有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比8-12:3-5:2-4:2-4均匀混合，然后于-21—-25℃冷冻10-30min；立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.1-1mm；加入粉碎物质量3-5倍的去离子水，混合均匀，用柠檬酸调节pH值为2-3，室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间500-700μs,脉冲频率200-400Hz条件下进行高压脉冲电场处理，接着常压煮沸30-50min，布袋过滤，滤渣用其质量1-3倍的滤液常压煮沸40-60min,布袋过滤，合并滤液，硅藻土过滤，使滤液澄清，在75℃下减压浓缩至固形物含量为6-10％，迅速冷却至室温，加入浓缩液1.5倍体积的pH值为2-3的95％乙醇，静置20-30min,使果胶沉淀出来，4000r/min离心5-10min，回收沉淀，用2倍体积的无水乙醇洗脱，离心，回收沉淀，如此操作2次，得到的沉淀于40-60℃真空干燥2-3h,获得果胶，加入果胶质量4-5倍的40-50℃水，搅拌，均匀混合，保温，用乳酸调节pH值为4.5-5.5，加入0.3-0.8U/mL的果胶酶酶解2-4h,酶解液过滤，滤液于沸水中灭酶10-15min，冷却至室温，超滤浓缩、冷冻干燥即得果胶分解物。
本发明营养保健食品的剂型为口服制剂，可以为片剂、粉剂、胶囊剂或颗粒剂，优选为
片剂。所述片剂服用、运输、贮存及携带方便，性状稳定，剂量准确，成本低。
本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品片剂、胶囊剂或颗粒剂可以通过如下方法制备，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过60-120目筛，然后混合3-15min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成13-18％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用10-20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度55-65℃干燥3-8min，用10-20目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉剂混合5-10min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合5-10min，混合均匀后，制成片剂、胶囊剂或颗粒剂。
优选地，本发明营养保健食品片剂的制备方法，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过60-120目筛，然后混合3-15min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成13-18％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用10-20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度55-65℃干燥3-8min，用10-20目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉剂混合5-10min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合5-10min，混合均匀后，压片、包装即得营养保健食品片剂。
本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品粉剂的制备方法，包括如下步骤：
1)按配方比例，将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉剂混合5-10min,得包埋益生菌粉剂；
2)按照配方比例，将D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、果胶分解物、柠檬酸粉碎，过60-120目筛，然后与包埋益生菌粉剂、β-胡萝卜素、牛奶香精、硬脂酸镁混合3-15min即得营养保健食品粉剂。
本发明植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2014已于2014年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号.中国科学院微生物研究所.邮编：100101)，保藏编号为CGMCCNO.9405，分类命名为：植物乳杆菌Lactobacillus plantarum。
所述植物乳杆菌菌株特点如下：在显微镜下观察，该菌株为短杆状，革兰氏染色呈阳性，无鞭毛，不产芽孢；在固体培养基上，该菌菌落为白色，表面光滑，致密，形态为圆形，边缘较整齐。
理化特征为：过氧化氢酶(-)，明胶液化(-)，吲哚实验(+)，运动性(-)，发酵产气(-)，亚硝酸盐还原(-)，发酵产气(-)，产硫化氢气体(-)，pH4.0MRS培养基中生长(+)。
所述植物乳杆菌采用下述流程进行选育：
原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→亚硝基胍(NTG)诱变→等离子体诱变→平板初筛→摇瓶复筛→传代稳定性试验。
所述出发菌株在MRS葡萄糖培养基中，其乳酸的生产速率为1.5g/L/d,当培养基pH为3.5时几乎停止生长，对亚硝酸钠的分解速率为0.34mg/h/kg白菜。出发菌株为李政采集于宁夏盐池县育肥羊场的青储饲料，采集时间2013年9月15日。
为了提高其乳酸生产速率、耐酸能力和亚硝酸盐的分解速率，依次采用DES和NTG技术对该菌种进行诱变，诱变后菌株采用MRS碳酸钙平板进行初筛，然后采用500mL摇瓶发酵，生物传感器分析仪对高产菌进行复筛，选育优良的植物乳杆菌菌株，然后做传代实验，评价其遗传稳定性。
植物乳杆菌tlj-2014遗传稳定性结果表明：经过连续传代十次，各项性能指标都比较稳定，遗传性较好，性状没有回复，因此把植物乳杆菌tlj-2014作为选育得到的目的菌株。
经验证发现：该诱变菌株的乳酸生产速率可以达到35g/L/d，该菌株经过71小时发酵后乳酸浓度达到95g/L；能够在pH为1.80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到9.8mg/h/kg(自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为1.1mg/h/kg)，能够耐1％胆盐。
因此采用该菌种生产泡菜，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在5mg/kg以下，远低于国家标准GB2714-2003中规定的含量(20mg/kg)。
有益效果：
本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品从增加益生菌种类和数量、增加益生菌营养物质、抑制有害菌生长及增加人体免疫力等多方面调整肠道菌群，改善胃肠功能。以植物乳杆菌等益生菌粉剂为主要原料，科学复配可修复细胞组织、具有抗溃疡作用、抗氧化作用、清除自由基作用和抗衰老作用，可显著提升人体整体免疫力和增强体力、改善胃肠功能的食用菌提取物；含有高含量可溶性纤维素的改性膳食纤维；可显著提高人体免疫力、抗炎镇痛、具有抗氧化、抗辐射和抗疲劳等功能的雪莲培养物提取物等为原料，进而在增加肠道益生菌菌群种类的同时，显著增强了内源和外源益生菌在人体肠道内的定植能力及定植时间，有效抑制了肠道有害菌尤其是革兰氏阴性菌的生长及繁殖，充分调节了肠道益生菌菌群的组成，制备出一种益生性强、显著提高人体免疫力、具有改善胃肠功能的营养保健食品。具体技术原理为：
1.本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品益生菌种类多，其中的植物乳杆菌CGMCCNO.9405乳酸生产速率可以达到35g/L/d，该菌株经过71小时发酵后乳酸浓度达到95g/L；能够在pH为1.80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到9.8mg/h/kg(自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为1.1mg/h/kg)，能够耐1％胆盐，其益生性能更加优越。
2.本发明制备的改性膳食纤维将超声提取、高压脉冲电场提取和生物酶解科学结合，所得改性膳食纤维可溶性纤维素含量高，更容易被益生菌利用，提高益生菌在肠道的生长及繁殖能力，增加益生菌菌群的种类和数量，降低大肠pH值，改善肠道微生态环境；吸附能力强，经改性后，纤维素的比表面积增大，网格结构丰富，吸附力增强，螯合、吸附胆固醇和胆汁酸类的有机分子能力更强、抑制人体对他们的吸收；离子交换能力增强，对金属元素，特别是重金属元素吸附效果更强，有效防止了人体重金属中毒；持水性、膨胀性、增稠性更强且不受酸、碱、盐的影响。调节和维持肠道菌群的定植时间，增强肠道的消化和吸收能力，提高人体免疫力；有效促进胃肠蠕动，减缓并消除胃胀、腹胀等不良反应；强大的包埋作用可防止外界环境(氧气、温度、光照、湿度等)因素对产品品质的影响，稳定了产品的生物活性，延长了产品的保质期。
3.本发明制备的食用菌提取物是以修复细胞组织、具有抗溃疡作用、抗氧化作用、清除自由基作用和抗衰老作用，可显著提升人体整体疫免力和增强体力、改善胃肠功能的食用菌经超声清洗、高压脉冲电场处理和生物酶解得到的，有效成分提取率高，食用菌酶解液中食用菌多糖含量高达6.82％，生物活性更强，食品安全性高，无农药及虫卵残留。
4.本发明制备的雪莲培养物提取物是以具有镇痛、抗炎、抗风湿；抑制血小板聚集、降血脂、改善血液循环；对免疫系统具有调节作用；同时还有抗氧化、抗辐射和抗疲劳等多方面的药效学作用的天山雪莲为种源的雪莲培养物为原料经冷冻、粉碎、微波辅助超声提取、低温酶解、高压脉冲电场提取等低温提取技术而制得，可最大限度地保留金合欢素、粗毛豚草素、芦丁、槲皮素等黄酮类物质和其它抗氧化、易挥发、热敏性有效成分，有效成分获取率高，工艺简单、时间短，提高了原料利用率，降低了生产成本，提高了生产效率。试验证明，本发明制备的雪莲培养物提取物黄酮得率可达97％，固形物得率可达65％。且雪莲细胞培养物不再含有对人体有副作用的秋水仙碱，卫生部已于2010年5月20日批准雪莲培养物为新资源食品，对推动我国中药现代化、保护野生植物资源、发展社会经济具有重要意义。
5.本发明制备的果胶分解物具有天然、柔和适口的酸味和显著的抑菌特性，尤其对大肠杆菌抑制作用最强，同时还具有较强的抗氧化性，浓度达到0.01％时即可作用，对超氧自由基、羟自由基和DPPH自由基都表现出很强的消除作用，当浓度达到1.0％时，消除效果达到100％；果胶分解物的科学复配，可有效提高本发明营养保健食品的适口性，最主要的是其显著的抑菌特性和抗氧化性避免了有效成分的氧化和微生物侵害，稳定和提高了产品的生物活性，延长了产品的保质期。
6.本发明科学复配的异麦芽酮糖醇具有低热量、甜度天然纯正、高耐受性、非致龋齿性、较合理的负溶解热、高稳定性和非吸湿性，在提升产品的品质、延长保质期、促进胃肠消化和吸收方面具有优良的特性，同时还是一种优良的双歧杆菌增殖因子，虽然异麦芽酮糖醇不能被人体和绝大多数微生物的酶系所利用，但却可以被人体肠道中的双歧杆菌所分解利用，促进双歧杆菌的生长繁殖，维持肠道的微生态平衡，提高人体整体免疫力，有利于人体的健康。
7.本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品的效果是各组分相互协同作用的结果，并非简单的原料功能的叠加，各原料组分的科学复配，产生的效果远远超过各单一组份功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。
8.本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品的制备方法工艺简单，操作方便，对设备要求低，可工业化和规模化生产，将改性膳食纤维最后混合，发挥了其强大的包埋作用，使得产品的性状更稳定、保质期更长。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
实施例1 原料制备
1.植物乳杆菌粉剂的制备：
(1)一级种子培养：将植物乳杆菌CGMCC NO.9405菌种接入500毫升摇瓶中，种子培养基装量100毫升，培养温度37℃，培养时间24小时；
(2)二级种子培养：将一级种子按照10％的接种量接入500毫升二级种子摇瓶中，培养条件与一级种子相同；
(3)三级种子培养：将二级种子以10％接种量接入5000毫升三级种子摇瓶中，种子培养基装量1000毫升，培养温度37℃，培养时间24小时；
(4)一级种子罐培养：将三级种子以5％接种量接入总容积为150L的一级种子罐，发酵培养基装量100L，培养温度37℃，罐压0.05MPa,培养时间18小时；
(5)发酵罐培养：将一级种子罐菌种以5％接种量接入总容积为3吨二级种子罐，发酵培养基装量2吨，培养条件培养温度37℃，罐压0.05MPa,培养时间22小时。发酵完毕发酵液静置沉淀、离心得到沉淀物，然后添加沉淀物质量0.8倍的载体，混合均匀，50℃流化床干燥即得植物乳杆菌粉剂，载体重量组成为：酸奶粉25份，糊精12份。
所述种子培养基质量组成为：酪蛋白1％,牛肉膏1％,酵母浸膏0.5％,葡萄糖0.5％,乙酸钠0.5％,柠檬酸二胺0.2％,Tween 80 0.1％,K2HPO4 0.2％,MgSO4.7H2O0.02％,MnSO4.H2O 0.005％,CaCO3 2％,余量为水,pH6.8。
所述发酵培养基质量组成为：大豆蛋白1％,牛肉提取物1％,酵母提取物0.5％,葡萄糖0.5％,乙酸钠0.5％,柠檬酸二胺0.2％,K2HPO4 0.2％,MgSO4.7H2O 0.02％,MnSO4.H2O0.005％,CaCO3 2％,余量为水,pH6.8。
所述植物乳杆菌粉剂中活菌含量为9x1012cfu/g。
2.改性膳食纤维的制备
所述改性膳食纤维的制备方法包括以下步骤：将菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维按质量比9:5:4:3均匀混合，加入其质量5倍的水，室温300W、40KHz条件超声提取12min,然后在电场强度30kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场提取；用乳酸调节pH值为5.0，加入混合物质量0.2％的生物酶，于50℃酶解35min；酶解液减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.2mm即得改性膳食纤维；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比7:3:3:3:2均匀混合。
3.食用菌提取物的制备
所述食用菌提取物的制备方法包括如下步骤：将猴头菇、银杏和黑木耳分别放入装有0.4％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗8min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比按质量比9:6:5均匀混合，然后于-23℃冷冻20min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.5mm；加入粉碎物质量4倍的水得混合物，调整混合物pH为5.2，室温下在电场强度40kV/cm，脉冲时间600μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理，升温至50℃，加入混合物重量0.8％的混合酶酶解5小时，得到食用菌酶解液，减压浓缩至固形物含量为30％以上，冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.2mm即得食用菌提取物；
所述食用菌酶解液中食用菌多糖含量高达6.82％；
所述混合酶重量份数组成为：木瓜蛋白酶25份，菠萝蛋白酶25份，葡聚糖酶12份，木聚糖酶12份，戊聚糖酶12份，无花果蛋白酶8份，中温淀粉酶8份，果胶酶7份，单宁酶4份。
4.雪莲培养物提取物的制备
所述雪莲培养物提取物的制备方法包括如下步骤：取雪莲培养物，浸入盛有质量百分比浓度为1.0％的无菌低聚果糖水溶液的容器中，取出，然后于-20℃冷冻8min；立即粉碎至粒径0.5mm；置容器中并添加4倍重量的40％的乙醇，得混合物料，用乳酸调节pH值为4.5，于室温下在电场强度30kV/cm，脉冲时间400μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理；然后升温至35℃，保温，在功率200W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间70s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，如此辐照10次，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；继续升温至45℃，保温，然后加入混合物料总重量3.3％的复配酶酶解40min，过滤，得滤液；滤渣用2倍重量78℃水漂洗3次，漂洗液与滤液合并，均匀混合，于室温下在电场强度40kV/cm，脉冲时间500μs,脉冲频率250Hz条件下进行高压脉冲电场处理即得雪莲培养物提取物；
所述复配酶由果胶酶、纤维素酶、单宁酶、淀粉酶和蛋白酶按质量比5:4:3:2:1.5均匀混合。
5.果胶分解物的制备
所述果胶分解物的制备方法，包括如下步骤：将新鲜的山楂果渣、柚皮、苹果渣、甜菜渣分别放入装有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗8min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比10:4:3:3均匀混合，然后于-23℃冷冻20min；立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.5mm；加入粉碎物质量4倍的去离子水，混合均匀，用柠檬酸调节pH值为2.5，室温下在电场强度40kV/cm，脉冲时间600μs,脉冲频率300Hz条件下进行高压脉冲电场处理，接着常压煮沸40min，布袋过滤，滤渣用其质量2倍的滤液常压煮沸50min,布袋过滤，合并滤液，硅藻土过滤，使滤液澄清，在75℃下减压浓缩至固形物含量为8％，迅速冷却至室温，加入浓缩液1.5倍体积的pH值为2.5的95％乙醇，静置25min,使果胶沉淀出来，4000r/min离心8min，回收沉淀，用2倍体积的无水乙醇洗脱，离心，回收沉淀，如此操作2次，得到的沉淀于50℃真空干燥2.5h,获得果胶，加入果胶质量4.5倍的45℃水，搅拌，均匀混合，保温，用乳酸调节pH值为5，加入0.5U/mL的果胶酶酶解3h,酶解液过滤，滤液于沸水中灭酶12min，冷却至室温，超滤浓缩、冷冻干燥即得果胶分解物。
以下实施例所使用的植物乳杆菌粉剂、改性膳食纤维、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、果胶分解物均为实施例1制备，其它原料为市购商品。
实施例2
一种具有改善胃肠功能的营养保健食品片剂，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇25份，麦芽糊精15份，微晶纤维素15份，益生菌粉剂10份，改性膳食纤维10份，低聚木糖9份，异麦芽酮糖醇9份，浓缩乳清蛋白9份，食用菌提取物9份，雪莲培养物提取物7份，果胶分解物6份，α-环状糊精3份，柠檬酸2份，硬脂酸镁2份，牛奶香精2份，β-胡萝卜素1.5份；
所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌45份，长双歧杆菌38份，两岐双岐杆菌30份，青春双岐杆菌18份，乳双歧杆菌18份，保加利亚乳杆菌18份，嗜酸乳杆菌12份，干酪乳杆菌9份，嗜热链球菌9份，酿酒酵母9份，产朊假丝酵母菌5份；
所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为：9x1012cfu/g；
制备方法，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过80目筛，然后混合10min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成15％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用16目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度60℃干燥5min，用16目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉混合8min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合8min，混合均匀后，压片、包装即得营养保健食品片剂。
实施例3
一种具有改善胃肠功能的营养保健食品片剂，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇15份，麦芽糊精10份，微晶纤维素10份，益生菌粉剂8份，改性膳食纤维8份，低聚木糖7份，异麦芽酮糖醇7份，浓缩乳清蛋白7份，食用菌提取物7份，雪莲培养物提取物5份，果胶分解物5份，α-环状糊精1.5份，柠檬酸1.5份，硬脂酸镁1.5份，牛奶香精1.5份，β-胡萝卜素1份；
所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌40份，长双歧杆菌30份，两岐双岐杆菌25份，青春双岐杆菌15份，乳双歧杆菌15份，保加利亚乳杆菌15份，嗜酸乳杆菌10份，干酪乳杆菌8份，嗜热链球菌8份，酿酒酵母8份，产朊假丝酵母菌4份；
所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为：7x1012cfu/g；
制备方法，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过60目筛，然后混合3min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成13％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用10目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度55℃干燥3min，用10目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉混合5min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合5min，混合均匀后，压片、包装即得营养保健食品片剂。
实施例4
一种具有改善胃肠功能的营养保健食品胶囊剂，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇35份，麦芽糊精20份，微晶纤维素20份，益生菌粉剂12份，改性膳食纤维12份，低聚木糖11份，异麦芽酮糖醇11份，浓缩乳清蛋白11份，食用菌提取物11份，雪莲培养物提取物8份，果胶分解物7份，α-环状糊精5份，柠檬酸2.5份，硬脂酸镁2.5份，牛奶香精2.5份，β-胡萝卜素2份；
所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌50份，长双歧杆菌45份，两岐双岐杆菌35份，青春双岐杆菌20份，乳双歧杆菌20份，保加利亚乳杆菌20份，嗜酸乳杆菌15份，干酪乳杆菌10份，嗜热链球菌10份，酿酒酵母10份，产朊假丝酵母菌6份；
所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为：8x1012cfu/g；
制备方法，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过80目筛，然后混合10min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成15％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用16目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度60℃干燥5min，用16目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉混合8min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合8min，混合均匀后，装粒，选囊，抛光，制成营养保健食品胶囊剂。
实施例5
一种具有改善胃肠功能的营养保健食品颗粒剂，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇5份，麦芽糊精5份，微晶纤维素5份，益生菌粉剂2份，改性膳食纤维5份，低聚木糖3份，异麦芽酮糖醇3份，浓缩乳清蛋白3份，食用菌提取物3份，雪莲培养物提取物3份，果胶分解物2份，α-环状糊精1份，柠檬酸0.1份，硬脂酸镁0.1份，牛奶香精0.1份，β-胡萝卜素0.01份；
所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌45份，长双歧杆菌38份，两岐双岐杆菌30份，青春双岐杆菌18份，乳双歧杆菌18份，保加利亚乳杆菌18份，嗜酸乳杆菌12份，干酪乳杆菌9份，嗜热链球菌9份，酿酒酵母9份，产朊假丝酵母菌5份；
所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为：9x1012cfu/g；
制备方法，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过80目筛，然后混合10min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成15％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用16目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度60℃干燥5min，用16目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉混合8min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合8min，混合均匀后，装袋、密封即得营养保健食品颗粒剂。
实施例6
一种具有改善胃肠功能的营养保健食品粉剂，由以下重量份数的原料制备：
D-甘露糖醇50份，麦芽糊精30份，微晶纤维素30份，益生菌粉剂20份，改性膳食纤维20份，低聚木糖15份，异麦芽酮糖醇15份，浓缩乳清蛋白15份，食用菌提取物15份，雪莲培养物提取物10份，果胶分解物10份，α-环状糊精10份，柠檬酸3份，硬脂酸镁3份，牛奶香精3份，β-胡萝卜素3份；
所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌45份，长双歧杆菌38份，两岐双岐杆菌30份，青春双岐杆菌18份，乳双歧杆菌18份，保加利亚乳杆菌18份，嗜酸乳杆菌12份，干酪乳杆菌9份，嗜热链球菌9份，酿酒酵母9份，产朊假丝酵母菌5份；
所述益生菌粉剂益生菌活菌含量为：9x1012cfu/g；
制备方法，包括如下步骤：
1)按配方比例，将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉混合8min,得包埋益生菌粉剂；
2)按照配方比例，将D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、果胶分解物、柠檬酸粉碎，过100目筛，然后与包埋益生菌粉剂、β-胡萝卜素、牛奶香精、硬脂酸镁混合8min即得营养保健食品粉剂。
实施例7 本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品的感官品评试验
邀请24名人员对本发明实施例2-6制备的营养保健食品与市售两种含益生菌的保健食品进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各12名，专业人员青年、中年、老年各4名，男女各半，非专业人员少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，具体见表1：
表1 感官品评统计结果
注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。
以上结果表明，本发明制备的营养保健食品从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售市售含益生菌的保健食品，特别是风味极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。
实施例8本发明具有改善胃肠功能的营养保健食品的益生性试验
将本发明实施例2制备的营养保健食品片剂，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的益生菌溶液，于4℃保存备用；
1、取保存好的10mL益生菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上，迅速摇匀。再将装有10mL益生菌溶液的试管2置于80-90℃水浴锅中加热15-25min，取加热后的益生菌溶液进行十倍逐级稀释至10-8，取1mL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45℃的MRS琼脂培养基倾注在平板(灭菌)上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35℃条件下培养24h，计算加热前后的数量。
结果表明，活菌存活率达到了88％。
2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为1.5、2.5和3.5，取100mL稀盐酸溶液，分别加入1g胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟胃液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取磷酸二氢钾6.8g，加水500mL使溶解，用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8；另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，将两液混合后，加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。取1mL保存好的益生菌溶液加入到9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释)，并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为97％。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL，分别接种于9mL pH值为6.8的人工肠液中，置于30-45℃静置培养2-4h，并分别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99％。
3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成1g/L的溶液，并在溶液中加入0.8％的猪胆盐，用10％的NaOH调整pH为8.0，然后用0.45μm微滤膜过滤并除菌。将0.5mL保存好的益生菌溶液接种到4.5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10-8，并用MRS倾注，然后置于35℃静置培养24h。结果表明活菌存活率为99％。
以上试验结果表明，本发明营养保健食品中的益生菌益生性(耐热性、耐pH性、耐胆盐)较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠功能。
需要说明的是：本发明实施例3-6制备的营养保健食品同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
实施例9 营养保健食品小鼠肠道性能试验
将本发明实施例2制备的营养保健食品片剂，用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的益生菌溶液，于4℃保存备用；
选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18-20g，常规词养。从中随机挑选40只，每天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小鼠，随机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的益生菌溶液0.5ml(2×1010cfu/ml)/只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对益生菌片剂治疗组和自然恢复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表1；每5天测各组小鼠粪便大肠杆菌数量，计算平均数，结果如表2。取小鼠粪便约0.1g，于无菌操作台内加入3粒玻璃珠(以0.1g粪样加0.5mL稀释液)，稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的大肠杆菌数。
表2 小鼠增重情况
| 分组 | 平均始重(g/只) | 平均末重(g/只) | 平均增长率(％) |
| 自然恢复组 | 20.69±1.33 | 27.34±1.59 | 32.14a |
| 治疗组 | 20.41±1.45 | 32.58±1.62 | 59.63b |
表3 小鼠粪便中大肠杆菌数的情况
| 分组 | 初始 | 结束 | 降低率(％) |
| (×105cfu/g) | (×105cfu/g) | ||
| 自然恢复组 | 5.77±0.53 | 4.34±0.19 | 24.78a |
| 治疗组 | 5.81±0.25 | 1.01±0.08 | 82.62b |
营养保健食品治疗组小鼠体重平均增长率(59.63％)显著高于自然恢复组(32.14％)；饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低82.62％，显著低于自然恢复组(24.78％)，表明本发明营养保健食品片剂中的益生菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道性能。
需要说明的是：本发明实施例3-6制备的营养保健食品同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
实施例10 本发明营养保健食品对机体免疫力的影响
1实验目的
通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，验证本发明营养保健食品的提高免疫力、抗疲劳作用。
2实验材料与试剂
2.1供试药物：
市售含益生菌的保健食品(G1)；市售含益生菌的保健食品(G2)；本发明实施例2-6制备的营养保健食品(G3-G7)。
2.2试剂：
肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸(AR)，南京化学试剂有限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。
3.实验动物
ICR小鼠，♂，清洁级，体重18-22g，由扬州大学比较医学中心提供，合格证号：SCXK(苏)2007–0001，实验期间小鼠自由饮食。
4.主要仪器
铝制游泳箱(50cm×50cm×40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司；秒表，温度计
5.实验分组
5.1剂量分组及受试样品给予时间随机将小鼠分为8组，每组10只，第1组至第7组分别给G1～G7的药物，第8组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2ml/10g，连续给予受试样品30天。
5.2样品配制第1组至第7组：称取2.25g药物样品，用蒸馏水配至150ml；空白对照组：双蒸水150ml。
6.实验方法
6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。
6.2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min,休息60min后摘眼球采血0.5mL(不加抗凝剂),置4℃冰箱3h,血凝固后2000r/min离心15min,取血清送连云港市第一人民医院检验科检测。
6.3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。
6.4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20μL加入40μL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。(血乳酸曲线下面积＝5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后20min的血乳酸值)
7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值
8.统计方法实验数据用表示，采用t检验进行组间比较
9.实验结果
9.1本发明营养保健食品对小鼠体重的影响
各组小鼠在给予G1～G7药物后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G7药物均无明显的毒性。实验结果详见表4。
表4负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重
9.2本发明营养保健食品对小鼠负重游泳时间的影响
经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明营养保健食品G3～G7药物与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表5。
表5本发明营养保健食品对小鼠负重游泳时间的影响
“*”p<0.05vs空白对照；
“**”p<0.01vs空白对照；
9.3本发明营养保健食品对小鼠运动前后血乳酸的影响
经口给予小鼠本发明营养保健食品后，本发明营养保健食品G3～G7药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)，G1～G2药物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异(P＞0.05)。结果见表6。
表6本发明营养保健食品对小鼠运动前后血乳酸水平的影响
“*”p<0.05vs空白对照；
9.4本发明营养保健食品对小鼠肝糖原的影响
经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明营养保健食品G3～G7药物与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表7。
表7本发明营养保健食品对小鼠肝糖原含量的影响
“*”p<0.05vs空白对照；
“**”p<0.01vs空白对照；
9.5本发明营养保健食品对小鼠血清尿素的影响
经口给予小鼠G1～G7药物后，G1～G2药物组与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明营养保健食品G3～G7药物与与空白对照组比较，小鼠运动后血清尿素含量均有明显的降低均有明显的降低，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G2药物。结果详见表8。
表8本发明营养保健食品对小鼠血清尿素含量的影响
“*”p<0.05vs空白对照；
“**”p<0.01vs空白对照；
10.实验结论
本实验主要通过小鼠负重游泳实验，同时检测小鼠肝糖原的储备来观察本发明营养保健食品的提高免疫力、抗疲劳效果。初步研究结果显示如下：
1、本发明G3～G7营养保健食品均能延长小鼠负重游泳时间(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2的市售保健食品。
2、生化检测方面显示，本发明G3～G7营养保健食品各剂量组均能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，而其它G1～G2的市售保健食品虽然也能减少运动后小鼠血清中葡萄糖无氧酵解所产生的乳酸含量，但与对照组比较，无统计学差异(P＞0.05)；
3、本发明G3～G7营养保健食品各剂量组均能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2的市售保健食品；
4、高尿酸模型发现，本发明G3～G7营养保健食品能显著降低小鼠游泳后血清中尿素的含量(P＜0.01)，且效果明显优于其它G1～G2市售保健食品；
11.结论
上述实验证明本发明营养保健食品能显著提高机体免疫力，提高小鼠的体力和耐力，降低小鼠运动后血清中尿素及乳酸的含量，且能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备，有助于缓解运动负荷引起的疲劳；能延长小鼠负重游泳至力竭的时间。
Claims (9)
1.一种具有改善胃肠功能的营养保健食品，由以下重量份数的原料制备：D-甘露糖醇5-50份，麦芽糊精5-30份，微晶纤维素5-30份，益生菌粉剂2-20份，改性膳食纤维5-20份，低聚木糖3-15份，异麦芽酮糖醇3-15份，浓缩乳清蛋白3-15份，食用菌提取物3-15份，雪莲培养物提取物3-10份，果胶分解物2-10份，α-环状糊精1-10份，柠檬酸0.1-3份，硬脂酸镁0.1-3份，牛奶香精0.1-3份，β-胡萝卜素0.01-3份；
所述益生菌粉剂由以下重量份数的粉剂均匀混合而成：植物乳杆菌40-50份，长双歧杆菌30-45份， 两歧双歧杆菌25-35份，青春 双歧杆菌15-20份，乳双歧杆菌15-20份，保加利亚乳杆菌15-20份，嗜酸乳杆菌10-15份，干酪乳杆菌8-10份，嗜热链球菌8-10份，酿酒酵母8-10份，产朊假丝酵母菌4-6份；
所述植物乳杆菌粉剂是由植物乳杆菌tlj-2014制备，该菌株已于2014年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.9405，分类命名为：植物乳杆菌Lactobacillus plantarum；
所述改性膳食纤维的制备方法包括以下步骤：将菊粉、苹果纤维、燕麦纤维、小麦纤维按质量比8-10:4-6:3-5:2-4均匀混合，加入其质量3-7倍的水，室温200-300W、35-40KHz条件超声提取10-15min,然后在电场强度20-40kV/cm，脉冲时间400-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场提取；用乳酸调节pH值为4.5-6.5，加入混合物质量0.1-0.3％的生物酶，于45-55℃酶解20-48min；酶解液减压浓缩、冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得改性膳食纤维；
所述生物酶为木聚糖酶、纤维素酶、漆酶、果胶酶、单宁酶按质量比5-9:2-4:2-4:2-4:1-3均匀混合。
2.如权利要求1所述的具有改善胃肠功能的营养保健食品，其特征在于，由以下重量份数的原料制备：D-甘露糖醇15-35份，麦芽糊精10-20份，微晶纤维素10-20份，益生菌粉剂8-12份，改性膳食纤维8-12份，低聚木糖7-11份，异麦芽酮糖醇7-11份，浓缩乳清蛋白7-11份，食用菌提取物7-11份，雪莲培养物提取物5-8份，果胶分解物5-7份，α-环状糊精1.5-5份，柠檬酸1.5-2.5份，硬脂酸镁1.5-2.5份，牛奶香精1.5-2.5份，β-胡萝卜素1-2份。
3.如权利要求1所述的具有改善胃肠功能的营养保健食品，其特征在于，由以下重量份数的原料制备：D-甘露糖醇25份，麦芽糊精15份，微晶纤维素15份，益生菌粉剂10份，改性膳食纤维10份，低聚木糖9份，异麦芽酮糖醇9份，浓缩乳清蛋白9份，食用菌提取物9份，雪莲培养物提取物7份，果胶分解物6份，α-环状糊精3份，柠檬酸2份，硬脂酸镁2份，牛奶香精2份，β-胡萝卜素1.5份。
4.如权利要求1所述的具有改善胃肠功能的营养保健食品，其特征在于，所述食用菌提取物 的制备方法包括如下步骤：将猴头菇、银杏和黑木耳分别放入装有0.3-0.5％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比8-10:5-7:4-6均匀混合，然后于-21—-25℃冷冻10-30min，立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.2-1mm；加入粉碎物质量3-5倍的水得混合物，调整混合物pH为4.5-6，室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间500-700μs,脉冲频率200-400Hz条件下进行高压脉冲电场处理，升温至45～55℃，加入混合物重量0.5-1.2％的混合酶酶解4～6小时，得到食用菌酶解液，减压浓缩至固形物含量为30％以上，冷冻干燥、低温粉碎至粒径为0.1-0.3mm即得食用菌提取物；
所述混合酶重量份数组成为：木瓜蛋白酶20-30份，菠萝蛋白酶20-30份，葡聚糖酶10-15份，木聚糖酶10-15份，戊聚糖酶10-15份，无花果蛋白酶5-10份，中温淀粉酶5-10份，果胶酶5-10份，单宁酶3-5份。
5.如权利要求1所述的具有改善胃肠功能的营养保健食品，其特征在于，所述雪莲培养物提取物的制备方法包括如下步骤：取雪莲培养物，浸入盛有质量百分比浓度为0.9-1.1％的无菌低聚果糖水溶液的容器中，取出，然后于-18—-23℃冷冻5-10min；立即粉碎至粒径0.3-1mm；置容器中并添加3-5倍重量的水或35-75％的乙醇，得混合物料，用乳酸调节pH值为3.5-5.5，于室温下在电场强度25-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理；然后升温至30-40℃，保温，在功率150-300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间60-80s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，如此辐照10次，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；继续升温至40-50℃，保温，然后加入混合物料总重量2.5-4％的复配酶酶解30-50min，过滤，得滤液；滤渣用1-3倍重量76-80℃水漂洗3次，漂洗液与滤液合并，均匀混合，于室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理即得雪莲培养物提取物；
所述复配酶由果胶酶、纤维素酶、单宁酶、淀粉酶和蛋白酶按质量比3-7:3-5:2-4:1-3:1-2均匀混合。
6.如权利要求1所述的具有改善胃肠功能的营养保健食品，其特征在于，所述果胶分解物的制备方法包括如下步骤：将新鲜的山楂果渣、柚皮、苹果渣、甜菜渣分别放入装有1.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min，沥干，切分成相等规格,长、宽为5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按质量比8-12:3-5:2-4:2-4均匀混合，然后于-21—-25℃冷冻10-30min；立即进行粉碎，粉碎物粒径为0.1-1mm；加入粉碎物质量3-5倍的去离子水，混合均匀，用柠檬酸调节pH值为2-3，室温下在电场强度35-45kV/cm，脉冲时间500-700μs,脉冲频率200-400Hz条件下进行高压脉冲电场处理，接着常压煮沸30-50min，布袋过滤，滤渣用其质量1-3倍的滤液常压煮沸40-60min,布袋过滤，合并滤液，硅藻土过滤，使滤液澄清，在75℃下减压浓缩至固形物含量为6-10％，迅速冷却至室温，加入浓缩液1.5倍体积的pH值为2-3的95％乙醇，静置20-30min,使果胶沉淀出来，4000r/min离心5-10min，回收沉淀，用2倍体积的无水乙醇洗脱，离心，回收沉淀，如此操作2次，得到的沉淀于40-60℃真空干燥2-3h,获得果胶，加入果胶质量4-5倍的40-50℃水，搅拌，均匀混合，保温，用乳酸调节pH值为4.5-5.5，加入0.3-0.8U/mL的果胶酶酶解2-4h,酶解液过滤，滤液于沸水中灭酶10-15min，冷却至室温，超滤浓缩、冷冻干燥即得果胶分解物。
7.如权利要求1-6任一所述具有改善胃肠功能的营养保健食品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过60-120目筛，然后混合3-15min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成13-18％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用10-20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度55-65℃干燥3-8min，用10-20目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉剂混合5-10min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合5-10min，混合均匀后，制成片剂、胶囊剂或颗粒剂。
8.如权利要求7所述具有改善胃肠功能的营养保健食品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)按照配方比例，分别取D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、牛奶香精粉碎，过60-120目筛，然后混合3-15min，得混合粉；
2)将果胶分解物、柠檬酸、β-胡萝卜素溶于水中制成13-18％的水溶液，作为粘合剂；
3)向所述混合粉中加入所述粘合剂制成软材，用10-20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率3000W、频率2450MHz、温度55-65℃干燥3-8min，用10-20目筛快速整粒；
4)将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉剂混合5-10min,得包埋益生菌粉剂；
5)整好的颗粒与包埋益生菌粉剂、硬脂酸镁混合5-10min，混合均匀后，压片、包装即得营养保健食品片剂。
9.如权利要求1-6任一所述具有改善胃肠功能的营养保健食品的制备方法，其特征在于，包 括如下步骤：
1)按配方比例，将改性膳食纤维、α-环状糊精和益生菌粉剂混合5-10min,得包埋益生菌粉剂；
2)按照配方比例，将D-甘露糖醇、麦芽糊精、微晶纤维素、低聚木糖、异麦芽酮糖醇、浓缩乳清蛋白、食用菌提取物、雪莲培养物提取物、果胶分解物、柠檬酸粉碎，过60-120目筛，然后与包埋益生菌粉剂、β-胡萝卜素、牛奶香精、硬脂酸镁混合3-15min即得营养保健食品粉剂。
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