CN112011585A - 一种南瓜籽多肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种南瓜籽多肽的制备方法，包括如下步骤：将南瓜籽粕与正己烷混合均匀加热脱脂粉碎，得到脱脂南瓜籽粕粉；制备南瓜籽粕蛋白；制备蛋白酶解物；将蛋白酶解物用蒸馏水配制成酶解物溶液，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，待Plastein反应结束灭酶离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得南瓜籽多肽。该南瓜籽多肽的制备方法，工艺安全，制备便捷。
Description
技术领域
本发明涉及多肽技术领域，具体涉及一种南瓜籽多肽的制备方法。
背景技术
我国是世界上最重要的南瓜籽生产和出口国之一，种植面积和总产量均名列前茅，主要种植地区集中在黑龙江省、新疆维吾尔族自治区、甘肃省、吉林省、内蒙古自治区和云南省等省区，年总产量可达50万～60万t。南瓜籽中脂肪含量为30％～50％，2017年10月27日国家粮食局颁布了LS/T 3250—2017《南瓜籽油》标准,南瓜籽油正式进入食用油行列。南瓜籽油可以有效预防湿疹、抗过敏，具有预防并治疗前列腺疾病的功效，是一种优质的功能性油源，因此越来越受到人们的欢迎。随着南瓜籽油产量的增加，南瓜籽粕作为油脂加工的副产品，其产量也不断提高。南瓜籽粕中蛋白含量高达40％以上，南瓜籽蛋白含有人体必需的8种氨基酸和儿童必需的氨基酸，含量超过FAO(联合国粮农组织)与WHO(世界卫生组织)规定的标准，在必需氨基酸比例上与人体所需氨基酸组成模式相似，是一种优质的植物蛋白，是食品工业的优质原料。因此，以南瓜籽粕为原料制备高抗氧化活性的南瓜籽多肽，对于提高南瓜籽粕的附加值具有重要的现实意义。生物活性肽是生命机体里发挥一定功能的多肽类化合物，对细胞生理功能及体内代谢的调节具有十分重要的作用。由氧化应激引起的疾病和由氧化反应引起的食品品质恶化吸引了全世界的关注。人工合成的抗氧剂(BHT、BHA、TBHQ、PG)的身影几乎遍布所有的加工食品，但由于消费者对合成抗氧化剂的误解，他们的使用愈加受到严格的监管和限制，而一些天然抗氧化剂(如生育酚、草本植物提取物)或因成本过高或因对食品感官有影响而存在使用上的局限性。从食源性蛋白质资源中获取的抗氧化肽在功能性食品、保健品和美容护肤品领域有着潜在的应用价值。随着各种生物活性肽的不断被发现，为提高生物蛋白资源的利用率，着重利用农产品加工过程中的副产物制备抗氧化肽，已成为我国生物活性肽开发与研究的热点。活性肽的制备主要采用蛋白酶水解的方法，但是常规酶解存在水解效率低、水解速度慢、酶利用率低、生产成本高等缺点。利用一些物理手段对底物或参与反应的其它物质进行预处理往往能够加快水解进程。超微粉碎是指将直径在3mm以上的颗粒通过物理(机械、气流、球磨)的方法将颗粒粉碎到10～25μm的过程。超微粉碎技术对蛋白质的功能特性具有显著改善作用，随着蛋白质粒度的减小,超微粉碎技术可以有效地改善蛋白质溶解特性，从而对酶解过程具有促进作用。Plastein反应通常是指在一定条件下，通过蛋白酶的催化作用将高浓度的蛋白质水解物与蛋白酶一起加热处理，生成一种类似高分子蛋白质物质的反应。这种类似蛋白质物质，对蛋白质的加工特性和营养功能有一定提高，从而使蛋白质的附加值得到提升，满足了现在食品工业对蛋白质这些性质日益提高的要求。已有研究表明，蛋白质水解物的Plastein反应可以提高其抗氧化性质。
发明内容
针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺安全、制备便捷的南瓜籽多肽的制备方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将南瓜籽粕与正己烷按质量与体积比1：5～10g/mL混合均匀，将其加热脱脂，并回收正己烷，干燥4～6小时后得到脱脂南瓜籽粕，将脱脂南瓜籽粕粉碎，过55～65目筛，得到脱脂南瓜籽粕粉；
步骤二、将所述脱脂南瓜籽粕粉与蒸馏水按料液比1:3～8g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH调节所述粕粉混合液pH值至8～10，在温度45～60℃下搅拌反应3～5小时，离心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL调节所述粕粉上清液pH值至4.0～6.0，在温度45～60℃下搅拌反应3～5小时，离心得到沉淀，采用去离子水洗涤沉淀至中性，将所述沉淀冷冻干燥，得到南瓜籽粕蛋白；
步骤三、将所述南瓜籽粕蛋白在球磨仪中进行研磨处理，得到南瓜籽粕蛋白粉，将所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸馏水配制成质量分数为5～10％的蛋白溶液，用1mol/L NaoH调节所述蛋白溶液pH值至8～10，向其加入一次复合酶在水浴条件下进行酶解，得到酶解液，将酶解液于沸水浴中灭酶10～20分钟后冷却至室温，离心取酶解上清液冷冻干燥,得到蛋白酶解物；
步骤四、将所述蛋白酶解物用蒸馏水配制成质量分数为30～50％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH调节所述酶解物溶液pH值至8～10，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，待Plastein反应结束再于沸水浴中灭酶10～20分钟，离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；
步骤五、将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，得到浓缩液；
步骤六：将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得南瓜籽多肽。
优选的，所述步骤一中加热脱脂条件如下：加热温度50～60℃，加热时间1.5～3小时。
优选的，所述步骤三中研磨处理时间为5～15分钟。
优选的，所述步骤三中的酶解条件如下：酶解温度50～60℃，酶解时间8～14小时。
优选的，所述一次复合酶为质量比1:1的碱性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次复合酶的添加量为所述南瓜籽粕蛋白粉质量的1～3％。
优选的，所述步骤四中的Plastein反应条件如下：反应温度50～60℃，反应时间8～14小时。
优选的，所述二次复合酶为质量比1:1的风味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次复合酶的添加量为所述蛋白酶解物质量的1～3％。
优选的，所述外源氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一种，所述外源氨基酸的添加量为所述蛋白酶解物质量的1～3％。
优选的，所述步骤五中的浓缩条件如下：控制真空度为0.04～0.08MPa，温度为55～60℃，使其固形物质量分数为45～75％。
优选的，所述步骤六中的冷冻干燥条件如下：冷冻干燥真空度20～30MPa，冷冻干燥温度-20～-40℃下，冷冻干燥时间36～48小时。
本发明与现有技术相比，其有益效果是：本发明提供的南瓜籽多肽的制备方法，通过对南瓜籽粕蛋白进行酶解反应得到蛋白酶解物，再通过对蛋白酶解物催化发生Plastein反应，可有效提高制得的南瓜籽多肽的抗氧化活性，可作为抗氧化功能性食品的原料，帮助机体清除多余的自由基，提高机体抗衰老、抗疾病能力，从而降低腹水综合征、癌症、动脉硬化、糖尿病等疾病的发病率。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本发明提供了一种南瓜籽多肽的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、将南瓜籽粕与正己烷按质量与体积比1：5～10g/mL混合均匀，将其加热脱脂，加热温度50～60℃，加热时间1.5～3小时，并回收正己烷，干燥4～6小时后得到脱脂南瓜籽粕，将脱脂南瓜籽粕粉碎，过55～65目筛，得到脱脂南瓜籽粕粉；
步骤二、将所述脱脂南瓜籽粕粉与蒸馏水按料液比1:3～8g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH调节所述粕粉混合液pH值至8～10，在温度45～60℃下搅拌反应3～5小时，离心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL调节所述粕粉上清液pH值至4.0～6.0，在温度45～60℃下搅拌反应3～5小时，离心得到沉淀，采用去离子水洗涤沉淀至中性，将所述沉淀冷冻干燥，得到南瓜籽粕蛋白；
步骤三、将所述南瓜籽粕蛋白在球磨仪中进行研磨处理5～15分钟，得到南瓜籽粕蛋白粉，将所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸馏水配制成质量分数为5～10％的蛋白溶液，用1mol/LNaoH调节所述蛋白溶液pH值至8～10，向其加入一次复合酶在水浴条件下进行酶解，酶解温度50～60℃，酶解时间8～14小时，得到酶解液，将酶解液于沸水浴中灭酶10～20分钟后冷却至室温，离心取酶解上清液冷冻干燥,得到蛋白酶解物；
其中，所述一次复合酶为质量比1:1的碱性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次复合酶的添加量为所述南瓜籽粕蛋白粉质量的1～3％；
步骤四、将所述蛋白酶解物用蒸馏水配制成质量分数为30～50％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH调节所述酶解物溶液pH值至8～10，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，反应温度50～60℃，反应时间8～14小时，待Plastein反应结束再于沸水浴中灭酶10～20分钟，离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；
其中，所述二次复合酶为质量比1:1的风味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次复合酶的添加量为所述蛋白酶解物质量的1～3％；所述外源氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一种，所述外源氨基酸的添加量为所述蛋白酶解物质量的1～3％；
步骤五、将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，控制真空度为0.04～0.08MPa，温度为55～60℃，使其固形物质量分数为45～75％，得到浓缩液；
步骤六：将所述浓缩液进行冷冻干燥，冷冻干燥真空度20～30MPa，冷冻干燥温度-20～-40℃下，冷冻干燥时间36～48小时，即得南瓜籽多肽。
实施例1
将南瓜籽粕与正己烷按质量与体积比1：5g/mL混合均匀，将其加热脱脂，加热温度50℃，加热时间3小时，并回收正己烷，干燥4小时后得到脱脂南瓜籽粕，将脱脂南瓜籽粕粉碎，过55目筛，得到脱脂南瓜籽粕粉；将所述脱脂南瓜籽粕粉与蒸馏水按料液比1:3g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH调节所述粕粉混合液pH值至8，在温度45℃下搅拌反应5小时，离心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL调节所述粕粉上清液pH值至4.0，在温度45℃下搅拌反应5小时，离心得到沉淀，采用去离子水洗涤沉淀至中性，将所述沉淀冷冻干燥，得到南瓜籽粕蛋白；将所述南瓜籽粕蛋白在球磨仪中进行研磨处理5分钟，得到南瓜籽粕蛋白粉，将所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸馏水配制成质量分数为5％的蛋白溶液，用1mol/LNaoH调节所述蛋白溶液pH值至8，向其加入一次复合酶在水浴条件下进行酶解，酶解温度50℃，酶解时间14小时，得到酶解液，将酶解液于沸水浴中灭酶10分钟后冷却至室温，离心取酶解上清液冷冻干燥,得到蛋白酶解物；其中，所述一次复合酶为质量比1:1的碱性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次复合酶的添加量为所述南瓜籽粕蛋白粉质量的1％；将所述蛋白酶解物用蒸馏水配制成质量分数为30％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH调节所述酶解物溶液pH值至8，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，反应温度50℃，反应时间14小时，待Plastein反应结束再于沸水浴中灭酶10分钟，离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；所述二次复合酶为质量比1:1的风味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次复合酶的添加量为所述蛋白酶解物质量的1％；所述外源氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一种，所述外源氨基酸的添加量为所述蛋白酶解物质量的1％；将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，控制真空度为0.04MPa，温度为55℃，使其固形物质量分数为45％，得到浓缩液；将所述浓缩液进行冷冻干燥，冷冻干燥真空度20MPa，冷冻干燥温度-20℃下，冷冻干燥时间48小时，即得南瓜籽多肽。
实施例2
将南瓜籽粕与正己烷按质量与体积比1：10g/mL混合均匀，将其加热脱脂，加热温度60℃，加热时间1.5小时，并回收正己烷，干燥6小时后得到脱脂南瓜籽粕，将脱脂南瓜籽粕粉碎，过65目筛，得到脱脂南瓜籽粕粉；将所述脱脂南瓜籽粕粉与蒸馏水按料液比1:8g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH调节所述粕粉混合液pH值至10，在温度60℃下搅拌反应3小时，离心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL调节所述粕粉上清液pH值至6.0，在温度60℃下搅拌反应3小时，离心得到沉淀，采用去离子水洗涤沉淀至中性，将所述沉淀冷冻干燥，得到南瓜籽粕蛋白；将所述南瓜籽粕蛋白在球磨仪中进行研磨处理15分钟，得到南瓜籽粕蛋白粉，将所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸馏水配制成质量分数为10％的蛋白溶液，用1mol/L NaoH调节所述蛋白溶液pH值至10，向其加入一次复合酶在水浴条件下进行酶解，酶解温度60℃，酶解时间8小时，得到酶解液，将酶解液于沸水浴中灭酶20分钟后冷却至室温，离心取酶解上清液冷冻干燥,得到蛋白酶解物；其中，所述一次复合酶为质量比1:1的碱性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次复合酶的添加量为所述南瓜籽粕蛋白粉质量的3％；将所述蛋白酶解物用蒸馏水配制成质量分数为50％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH调节所述酶解物溶液pH值至10，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，反应温度60℃，反应时间8小时，待Plastein反应结束再于沸水浴中灭酶20分钟，离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；所述二次复合酶为质量比1:1的风味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次复合酶的添加量为所述蛋白酶解物质量的3％；所述外源氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一种，所述外源氨基酸的添加量为所述蛋白酶解物质量的3％；将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，控制真空度为0.08MPa，温度为60℃，使其固形物质量分数为75％，得到浓缩液；将所述浓缩液进行冷冻干燥，冷冻干燥真空度30MPa，冷冻干燥温度-40℃下，冷冻干燥时间36小时，即得南瓜籽多肽。
实施例3
将南瓜籽粕与正己烷按质量与体积比1：8g/mL混合均匀，将其加热脱脂，加热温度55℃，加热时间2小时，并回收正己烷，干燥5小时后得到脱脂南瓜籽粕，将脱脂南瓜籽粕粉碎，过60目筛，得到脱脂南瓜籽粕粉；将所述脱脂南瓜籽粕粉与蒸馏水按料液比1:5g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH调节所述粕粉混合液pH值至9，在温度55℃下搅拌反应4小时，离心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL调节所述粕粉上清液pH值至5.0，在温度55℃下搅拌反应4小时，离心得到沉淀，采用去离子水洗涤沉淀至中性，将所述沉淀冷冻干燥，得到南瓜籽粕蛋白；将所述南瓜籽粕蛋白在球磨仪中进行研磨处理10分钟，得到南瓜籽粕蛋白粉，将所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸馏水配制成质量分数为8％的蛋白溶液，用1mol/LNaoH调节所述蛋白溶液pH值至9，向其加入一次复合酶在水浴条件下进行酶解，酶解温度55℃，酶解时间11小时，得到酶解液，将酶解液于沸水浴中灭酶15分钟后冷却至室温，离心取酶解上清液冷冻干燥,得到蛋白酶解物；其中，所述一次复合酶为质量比1:1的碱性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次复合酶的添加量为所述南瓜籽粕蛋白粉质量的2％；将所述蛋白酶解物用蒸馏水配制成质量分数为40％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH调节所述酶解物溶液pH值至9，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，反应温度55℃，反应时间11小时，待Plastein反应结束再于沸水浴中灭酶15分钟，离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；所述二次复合酶为质量比1:1的风味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次复合酶的添加量为所述蛋白酶解物质量的2％；所述外源氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一种，所述外源氨基酸的添加量为所述蛋白酶解物质量的2％；将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，控制真空度为0.06MPa，温度为58℃，使其固形物质量分数为60％，得到浓缩液；将所述浓缩液进行冷冻干燥，冷冻干燥真空度25MPa，冷冻干燥温度-30℃下，冷冻干燥时间42小时，即得南瓜籽多肽。
对比例1
本对比例技术方案同实施例1，其区别仅在于，去掉步骤三。
对比例2
本对比例技术方案同实施例1，其区别仅在于，去掉步骤四。
将实施例1、实施例2、实施例3和对比例1、对比例2制得的南瓜籽多肽(多肽浓度为10mg/mL)进行抗氧化活性评价，如下表所示：
| 序号 | DPPH自由基清除率/％ | ABTS自由基清除率/％ |
| 实施例1 | 65.8 | 93.5 |
| 实施例2 | 63.6 | 91.4 |
| 实施例3 | 64.2 | 92.8 |
| 对比例1 | 60.3 | 88.6 |
| 对比例2 | 55.8 | 84.1 |
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，易实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (10)
1.一种南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将南瓜籽粕与正己烷按质量与体积比1：5～10g/mL混合均匀，将其加热脱脂，并回收正己烷，干燥4～6小时后得到脱脂南瓜籽粕，将脱脂南瓜籽粕粉碎，过55～65目筛，得到脱脂南瓜籽粕粉；
步骤二、将所述脱脂南瓜籽粕粉与蒸馏水按料液比1:3～8g/mL混合，得到粕粉混合液，用1mol/L的NaoH调节所述粕粉混合液pH值至8～10，在温度45～60℃下搅拌反应3～5小时，离心收集得到粕粉上清液，用1mol/L的HCL调节所述粕粉上清液pH值至4.0～6.0，在温度45～60℃下搅拌反应3～5小时，离心得到沉淀，采用去离子水洗涤沉淀至中性，将所述沉淀冷冻干燥，得到南瓜籽粕蛋白；
步骤三、将所述南瓜籽粕蛋白在球磨仪中进行研磨处理，得到南瓜籽粕蛋白粉，将所述南瓜籽粕蛋白粉用蒸馏水配制成质量分数为5～10％的蛋白溶液，用1mol/L NaoH调节所述蛋白溶液pH值至8～10，向其加入一次复合酶在水浴条件下进行酶解，得到酶解液，将酶解液于沸水浴中灭酶10～20分钟后冷却至室温，离心取酶解上清液冷冻干燥,得到蛋白酶解物；
步骤四、将所述蛋白酶解物用蒸馏水配制成质量分数为30～50％的酶解物溶液，用1mol/L NaoH调节所述酶解物溶液pH值至8～10，向其加入二次复合酶和外源氨基酸在水浴条件下催化发生Plastein反应，待Plastein反应结束再于沸水浴中灭酶10～20分钟，离心取反应后的上清液，得到反应修饰物溶液；
步骤五、将所述反应修饰物溶液用旋转蒸发器浓缩，得到浓缩液；
步骤六：将所述浓缩液进行冷冻干燥，即得南瓜籽多肽。
2.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤一中加热脱脂条件如下：加热温度50～60℃，加热时间1.5～3小时。
3.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤三中研磨处理时间为5～15分钟。
4.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤三中的酶解条件如下：酶解温度50～60℃，酶解时间8～14小时。
5.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述一次复合酶为质量比1:1的碱性蛋白酶和氨肽酶1，所述一次复合酶的添加量为所述南瓜籽粕蛋白粉质量的1～3％。
6.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤四中的Plastein反应条件如下：反应温度50～60℃，反应时间8～14小时。
7.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述二次复合酶为质量比1:1的风味蛋白酶和氨肽酶2，所述二次复合酶的添加量为所述蛋白酶解物质量的1～3％。
8.如权利要求7所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述外源氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸中的任意一种，所述外源氨基酸的添加量为所述蛋白酶解物质量的1～3％。
9.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤五中的浓缩条件如下：控制真空度为0.04～0.08MPa，温度为55～60℃，使其固形物质量分数为45～75％。
10.如权利要求1所述的南瓜籽多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤六中的冷冻干燥条件如下：冷冻干燥真空度20～30MPa，冷冻干燥温度-20～-40℃下，冷冻干燥时间36～48小时。
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112674199A (zh) * | 2020-12-09 | 2021-04-20 | 广州市金龟寿药品有限公司 | 一种多肽食品防腐剂及其制备方法 |
| CN113480602A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-10-08 | 江南大学 | 南瓜籽源锌络合肽及其序列 |
| CN114591393A (zh) * | 2022-04-18 | 2022-06-07 | 青岛科技大学 | 杜仲籽粕多肽及在抗疲劳产品/制备抗疲劳产品中的应用 |
| CN116268391A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-06-23 | 北京中科生物科技有限公司 | 一种含有南瓜籽多肽的保健品组合物及其制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103749939A (zh) * | 2014-01-06 | 2014-04-30 | 东北农业大学 | 一种富含支链氨基酸的大豆分离蛋白制备方法 |
| CN107557422A (zh) * | 2017-10-24 | 2018-01-09 | 西北民族大学 | 一种具有高ace抑制活性的棉籽蛋白多肽及其制备方法 |
| CN109207542A (zh) * | 2018-09-27 | 2019-01-15 | 武汉轻工大学 | 一种大豆多肽的修饰方法 |
| CN110483633A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-11-22 | 浙江海洋大学 | 一种非蛋白氨基酸修饰的胶原蛋白抗氧化肽及其制备方法 |
| CN111019990A (zh) * | 2018-10-09 | 2020-04-17 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种南瓜籽肽粉及其制备方法和用途 |
| CN111406899A (zh) * | 2020-04-10 | 2020-07-14 | 西南民族大学 | 一种具有高抗氧化活性的发酵血肠制作方法 |
-
2020
- 2020-09-09 CN CN202010938025.1A patent/CN112011585A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103749939A (zh) * | 2014-01-06 | 2014-04-30 | 东北农业大学 | 一种富含支链氨基酸的大豆分离蛋白制备方法 |
| CN107557422A (zh) * | 2017-10-24 | 2018-01-09 | 西北民族大学 | 一种具有高ace抑制活性的棉籽蛋白多肽及其制备方法 |
| CN109207542A (zh) * | 2018-09-27 | 2019-01-15 | 武汉轻工大学 | 一种大豆多肽的修饰方法 |
| CN111019990A (zh) * | 2018-10-09 | 2020-04-17 | 杏辉天力（杭州）药业有限公司 | 一种南瓜籽肽粉及其制备方法和用途 |
| CN110483633A (zh) * | 2019-08-28 | 2019-11-22 | 浙江海洋大学 | 一种非蛋白氨基酸修饰的胶原蛋白抗氧化肽及其制备方法 |
| CN111406899A (zh) * | 2020-04-10 | 2020-07-14 | 西南民族大学 | 一种具有高抗氧化活性的发酵血肠制作方法 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112674199A (zh) * | 2020-12-09 | 2021-04-20 | 广州市金龟寿药品有限公司 | 一种多肽食品防腐剂及其制备方法 |
| CN113480602A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-10-08 | 江南大学 | 南瓜籽源锌络合肽及其序列 |
| CN113480602B (zh) * | 2021-07-05 | 2023-07-25 | 江南大学 | 南瓜籽源锌络合肽及其序列 |
| CN114591393A (zh) * | 2022-04-18 | 2022-06-07 | 青岛科技大学 | 杜仲籽粕多肽及在抗疲劳产品/制备抗疲劳产品中的应用 |
| CN116268391A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-06-23 | 北京中科生物科技有限公司 | 一种含有南瓜籽多肽的保健品组合物及其制备方法 |
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