CN113456563A - 一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶及其制备方法。一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,包括有效活性成分、凝胶成分、防腐成分、pH调节剂及去离子水,所述有效活性成分包括芦荟粉、红平菇多肽粉、酶切寡聚透明质酸钠、溶菌酶、α‑熊果苷、裂褶菌多糖和乳糖酸等,凝胶成分为增稠剂,防腐成分包括对羟基苯乙酮、1,2己二醇和1,3丙二醇。红平菇多肽与芦荟提取物均具有抗氧化,延缓皮肤衰老的功效,在增强透皮吸收的同时可降低透皮吸收的刺激性,达到深层温和、保湿、营养和修复的目的,特别适合敏感肌肤人群使用。制备方法是在在传统制备芦荟凝胶的工艺中,加入红平菇多肽、溶菌酶和裂褶菌多糖等活性成分。
Description
技术领域
本发明涉及一种芦荟溶菌酶凝胶及其制备方法,尤其是涉及一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶及其制备,属化妆品和食用菌资源的开发领域。
背景技术
红平菇(Pleurotus diamor),属于担子菌门下伞菌目侧耳科的一种,又被人们叫做是桃红侧耳、桃红平菇、草红平菇,红平菇也是平菇的一种,由于红平菇的菇体是呈浅红色、或者是粉色和深红色,所以称为红平菇。红平菇观赏性较强。红平菇具有生长快、出菇早和产量高的特点。数据分析表明,100g干物质中蛋白质、总糖、粗脂肪、还原糖、灰分和纤维素的最高含量分别为23.4g、36g、66.7g、3.2g、9.6g、8.4g和35.7g。红平菇子实体营养丰富,属于低脂肪,高蛋白的健康食品,含多种人体必需和非必需的氨基酸,维生素和矿物质,红平菇有抗菌,抗氧化性和提高机体免疫力等作用。因而,红平菇具有开发为功能保健食品和化妆品等较好的应用前景。
芦荟是一种营养成分十分丰富的天然植物。近年来,随着化妆品行业的不断发展,芦荟胶因具有补水、增白保湿、抗衰老和防晒等功效,其中以芦荟凝胶直接作为护肤品很受消费者的欢迎。但是由于现在消费者对于更高质量,高品质和高疗效化妆品的追求,原本的芦荟保湿凝胶,已经无法满足消费者的需要和市场的要求。而且芦荟凝胶已反映出抗原性较低,抗氧化能力较不突出和清除自由基能力较弱的缺点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,为了解决现有芦荟凝胶中天然保湿成分的不足和抗氧化性作用不强的问题,提出一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶。
本发明同时提供了一种制备富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶的方法。在传统制备芦荟凝胶的工艺中,加入红平菇多肽、溶菌酶和裂褶菌多糖等活性成分,从而制备出一种具有良好抗氧化性质的芦荟溶菌酶凝胶。
本发明还提供了一种从红平菇子实体中提取多肽的方法。利用酶解技术将蛋白质与其他组分分离降解为小分子多肽,通过醇沉进一步纯化多肽,利用真空冷冻技术进行干燥,最后得到红平菇子实体多肽粉。
红平菇多肽是红平菇蛋白的水解产物,氨基酸含量丰富且种类齐全,还富含在谷物蛋白和蔬菜蛋白中缺乏的亮氨酸和赖氨酸。红平菇多肽与蛋白相比在体内更易消化,抗原性低,具有许多独特的生理功能特性和理化性质,更易添加到化妆品中。
本发明采用的技术方案:
一种从红平菇子实体中提取多肽的方法,利用酶解技术将蛋白质与其他组分分离降解为小分子多肽,通过醇沉进一步纯化多肽,利用真空冷冻技术进行干燥,最后得到红平菇子实体多肽粉,其制备方法如下:
(1)取新鲜的红平菇的子实体,用刀切成小块放入烘箱60℃烘干至恒重,烘干后用粉碎机粉碎成粒径为小于75μm的粉末状,过筛,置于密封袋内存-80℃冰箱备用。
(2)粗蛋白提取:取重量份数为100-200份的步骤(1)中红平菇子实体粉剂,按1:30的料液比向50ml离心管中加入蒸馏水,浸泡30min之后,用1mol/L NaOH溶液将料液的PH调到8.0左右,调好之后,放到超声功率为100W,温度为50℃超声设备中,超声时间为30min,超声结束以后,放到4500r/min的离心机中,离心15min,然后取离心之后的上清液。
(3)酶解:取重量份数为50-100份的步骤(2)中蛋白提取液分别在90的热水浴中水浴15min,使蛋白质变性,之后向蛋白提取液中加入稀NaOH溶液,至pH为10左右,混合均匀,然后加入重量份数为10份的碱性蛋白酶加热搅拌酶解,加热震荡水解,酶解温度为45°C,酶解时间为3h,然后在95°C水浴中维持15min灭酶,最后以6000r/min离心取上清液,所得上清液即为红平菇蛋白酶解多肽溶液。
(4)醇沉:向步骤(3)中的滤液中加入3倍-4倍体积的无水乙醇,在温度4℃条件下,沉淀10-14h后,5000g冷冻离心20min,除去可溶性糖、未水解的蛋白和酶,取上清液;
(5)浓缩干燥:将步骤(4)中的上清液分别在温度50-60℃条件下,以30-40rpm的转速,旋转蒸发浓缩8-10倍,浓缩液在温度-20℃冰柜冷冻24h,然后在真空度20Pa,温度-75℃的条件下,连续真空冷冻干燥24h,得红平菇子实体多肽粉。
一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,包括有效活性成分、凝胶成分、防腐成分、pH调节剂及去离子水,其特征在于:所述有效活性成分包括芦荟粉、权利要求1所制备的红平菇子实体多肽粉、酶切寡聚透明质酸钠、溶菌酶、α-熊果苷、裂褶菌多糖和乳糖酸,凝胶成分为增稠剂,防腐成分包括对羟基苯乙酮、1,2己二醇和1,3丙二醇;所述各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉1-4.5份、红平菇子实体多肽粉2-9份、酶切寡聚透明质酸钠0.5-5份、溶菌酶0.5-5份、α-熊果苷1-4.5份、裂褶菌多糖35-60份、乳糖酸10-30份、增稠剂8-24份、防腐成分42-116份,其中包括羟基苯乙酮6-18份、1,2己二醇6-18份、1,3丙二醇30-80份、pH调节剂4-8份和100-200份去离子水。
溶菌酶在芦荟溶菌酶凝胶中具有除皱抑菌的作用。
裂褶菌多糖,又称裂褶菌素,是裂褶菌的主要活性物质之一,其主要成分是β-(1→3)和β-(1→6)糖苷键组成的β-葡聚糖。具有良好的保湿,抗氧化和抑菌作用,有广泛的应用开发前景。以此来代替传统化妆品中的酵母β-葡聚糖。
乳糖酸在芦荟溶菌酶凝胶中具有清洁毛孔的作用。
α-熊果苷在芦荟溶菌酶凝胶中具有较好的抗炎、修复和美白的作用。
一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶的制备方法,包括如下步骤:
(1)按配方称取各组分;并匀浆各组分;
(2)在真空乳化搅拌机组内投入去离子水和增稠剂,开启搅拌和升温;
(3)将酶切寡聚透明质酸钠以及1,3丙二醇、羟基苯乙酮、1,2己二醇混合分散均匀后投入真空乳化搅拌机组内,继续升温至70℃-75℃,保温搅拌30分钟;
(4)开启降温至50℃,将α-熊果苷、裂褶菌多糖投入真空乳化搅拌机组内;
(5)当温度≤45℃时,将乳糖酸、芦荟粉、红平菇子实体多肽粉投入到真空乳化搅拌机组内;
(6)继续降温,待温度≤35℃,将溶菌酶加入其中
(7)抽真空至-0.05MPa,均质10分钟(1200rpm),搅拌20分钟;
(8)将pH调节剂吸入真空乳化搅拌机组内,pH值调整到5.5,搅拌10分钟;
(9)排除真空,出料,得到芦荟溶菌酶凝胶。
发明有益效果:
1、本发明富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,有效活性成分包括芦荟粉、红平菇多肽粉、酶切寡聚透明质酸钠、溶菌酶、α-熊果苷、裂褶菌多糖和乳糖酸等。红平菇多肽与芦荟提取物均具有抗氧化,延缓皮肤衰老的功效,在增强透皮吸收的同时可降低透皮吸收的刺激性,达到深层温和、保湿、营养和修复的目的,特别适合敏感肌肤人群使用。
2、本发明了一种富含红平菇子实体多肽粉的芦荟溶菌酶凝胶的制备方法。其中加入了裂褶菌多糖,裂褶菌多糖有良好的保湿,抗氧化和抑菌作用。
3. 本发明涉及了一种红平菇子实体多肽粉的制备方法,包括如下步骤:红平菇粗蛋白的提取、酶解、醇沉和浓缩干燥等步骤。红平菇子实体多肽具有良好的抗氧化能力和抑菌能力,将其添加进芦荟溶菌酶凝胶的制备中,可有效提高芦荟溶菌酶凝胶清除自由基的功效。
附图说明
图1所示为红平菇酶解液多肽DPPH清除率;
图2所示为红平菇酶解液多肽ABTS清除率。
具体实施方式
为了使发明创造实现其发明目的的技术构思及优点更加清楚明白,下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的详细描述。应当理解的是,以下各实施例仅用以解释和说明本发明的优选实施方式,不应当构成对本发明要求专利保护的范围的限定。
实施例1: 红平菇多肽粉的制备
选择由大棚培育的新鲜红平菇子实体,在温度60℃条件下,鼓风干燥12h,然后粉碎成粒径小于75μm的红平菇粉剂;称取重量份数为100份的红平菇粉剂加入到重量份数为1000份的pH8.0稀氢氧化钠溶液中,混合均匀,然后加入重量份数为10份的碱性蛋白酶搅拌酶解,酶解温度55℃,搅拌速率60rpm,酶解5h后,过滤除杂,得滤液;向滤液中加入4倍体积的无水乙醇,4℃沉淀12h,5000g冷冻离心20min,除去可溶性糖,取上清。将上清在55℃,以40rpm的转速,旋转蒸发浓缩10倍,浓缩液在-20冰柜冷冻24h后,在真空度20Pa,温度-75℃的条件下,连续真空冷冻干燥24h,得红平菇多肽冻干粉。
实施例2: 红平菇多肽粉的制备
选择由大棚培育的新鲜红平菇子实体,在温度60℃条件下,鼓风干燥12h,然后粉碎成粒径小于38μm的红平菇粉剂;称取重量份数为150份的红平菇粉剂加入到重量份数为1000份的pH8.0稀氢氧化钠溶液中,混合均匀,然后加入重量份数为10份的碱性蛋白酶搅拌酶解,酶解温度55℃,搅拌速率60rpm,酶解6h后,过滤除杂,得滤液;向滤液中加入4倍体积的无水乙醇,4℃沉淀12h,5000g冷冻离心20min,除去可溶性糖,取上清。将上清在55℃,以40rpm的转速,旋转蒸发浓缩10倍,浓缩液在-20冰柜冷冻24h后,在真空度20Pa,温度-75℃的条件下,连续真空冷冻干燥24h,得红平菇多肽冻干粉。
实施例3:富含红平菇多肽粉的芦荟溶菌酶凝胶的制备
1、配方:所述各组分在芦荟凝胶中的份数为芦荟粉1份、红平菇多肽粉2份、酶切寡聚透明质酸钠0.5份、α-熊果苷1份、裂褶菌多糖35份、乳糖酸10份、糖基海藻糖15份、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物8份、羟基苯乙酮6份、1,2己二醇6份、1,3丙二醇30份、甘油40份、氨甲基丙醇4份及100份去离子水。
2.制备
按上述配方,在真空乳化搅拌机组内投入去离子水,并将预先溶胀好的丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物投入真空乳化搅拌机组内,开启搅拌和升温,速度为搅拌40rpm/min;将酶切寡聚透明质酸钠以及1,3丙二醇、甘油、羟基苯乙酮、1,2己二醇、糖基海藻糖混合分散均匀后投入真空乳化搅拌机组内,继续升温至70℃~75℃,保温搅拌30分钟;开启降温,将α-熊果苷、裂褶菌多糖投入真空乳化搅拌机组内;当温度≤45℃时,将乳糖酸、芦荟提取物、红平菇多肽粉投入真空乳化搅拌机组内;继续降温,待温度≤35℃,将溶菌酶加入其中;抽真空至-0.05MPa,以1200rpm/min的速度均质10分钟,搅拌15分钟;将氨甲基丙醇吸入真空乳化搅拌机组内,PH值调整到5.5,搅拌10分钟;排除真空,出料,得到芦荟凝胶。
实施例4:富含红平菇多肽粉的芦荟溶菌酶凝胶的制备
1.配方:所述各组分在芦荟凝胶中的份数为芦荟粉2份、红平菇多肽粉4份、酶切寡聚透明质酸钠1份、α-熊果苷2份、裂褶菌多糖70份、乳糖酸20份、糖基海藻糖30份、丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物16份、羟基苯乙酮12份、1,2己二醇12份、1,3丙二醇60份、甘油80份、氨甲基丙醇8份及150份去离子水。
2.制备,同实施例3。
实施例5
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉4.5份、红平菇子实体多肽粉5份、酶切寡聚透明质酸钠2份、溶菌酶3份、α-熊果苷3份、裂褶菌多糖35份、乳糖酸10份、增稠剂14份、羟基苯乙酮18份、1,2己二醇8份、1,3丙二醇30份、pH调节剂4份,去离子水100份。
实施例6
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉3份、红平菇子实体多肽粉9份、酶切寡聚透明质酸钠5份、溶菌酶5份、α-熊果苷4份、裂褶菌多糖60份、乳糖酸30份、增稠剂24份、羟基苯乙酮18份、1,2己二醇18份、1,3丙二醇30份、pH调节剂8份,去离子水200份。
实施例7
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉2.5份、红平菇子实体多肽粉6份、酶切寡聚透明质酸钠3份、溶菌酶5份、α-熊果苷4份、裂褶菌多糖35份、乳糖酸10份、增稠剂8份、羟基苯乙酮6份、1,2己二醇6份、1,3丙二醇30份、pH调节剂4份,去离子水120份。
实施例8
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉4.5份、红平菇子实体多肽粉9份、酶切寡聚透明质酸钠5份、溶菌酶2份、α-熊果苷2份、裂褶菌多糖50份、乳糖酸20份、增稠剂20份、羟基苯乙酮10份、1,2己二醇12份、1,3丙二醇50份、pH调节剂6份,去离子水150份。
实施例9
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉2份、红平菇子实体多肽粉8份、酶切寡聚透明质酸钠2份、溶菌酶3份、α-熊果苷3份、裂褶菌多糖45份、乳糖酸18份、增稠剂20份、羟基苯乙酮8份、1,2己二醇12份、1,3丙二醇60份、pH调节剂7份,去离子水100份。
实施例10
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,与实施例5-9不同的是:有效活性成分还包括糖基海藻糖,糖基海藻糖在芦荟凝胶中的重量百分比为15-45份。
实施例11
本实施例的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,与实施例5-10不同的是:还添加有甘油,甘油在芦荟凝胶中的重量份占比为40-80。
本发明富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,所述增稠剂为丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物,pH调节剂为氨甲基丙醇。
实施例12
本实施例以实施例11为例,具体说明富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶的制备方法,包括如下步骤:
(1)按配方称取各组分;并匀浆各组分;
(2)在真空乳化搅拌机组内投入去离子水和增稠剂,开启搅拌和升温;
(3)将酶切寡聚透明质酸钠以及1,3丙二醇、羟基苯乙酮、1,2己二醇混合分散均匀后投入真空乳化搅拌机组内,继续升温至70℃-75℃,保温搅拌30分钟;在加入酶切寡聚透明质酸钠的同时加入糖基海藻糖和甘油;
(4)开启降温至50℃,将α-熊果苷、裂褶菌多糖投入真空乳化搅拌机组内;
(5)当温度≤45℃时,将乳糖酸、芦荟粉、红平菇子实体多肽粉投入到真空乳化搅拌机组内;
(6)继续降温,待温度≤35℃,将溶菌酶加入其中;
(7)抽真空至-0.05MPa,均质10分钟(1200rpm),搅拌20分钟;
(8)将pH调节剂吸入真空乳化搅拌机组内,pH值调整到5.5,搅拌10分钟;
(9)排除真空,出料,得到芦荟溶菌酶凝胶。
步骤(2)和步骤(7)中,搅拌速度为25-55rpm/min,步骤(7)的均质速度为1000-1500rpm/min。
以上所述仅为本发明的较佳实施方式,并不构成对本发明的限定。本领域技术人员在现有技术的指引下,无需进行创造性劳动即可对本发明的实施情况进行其他修改,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改或者采用本领域惯用技术手段进行的简单置换或等同替换,均应包含在本发明的保护范围之内。
红平菇子实体多肽抗氧化活力的测定
(1)DPPH实验
DPPH工作液配制:取DPPH固体1mg溶于24mL的无水乙醇中,至于磁力搅拌器上充分混匀,避光保存。
为方便计算样品的清除率,可配成1mg/mL的浓度。把样品液的每个浓度分为三个浓度梯度,并把每个梯度的浓度设为三个平行实验,每个浓度都设置有阳性对照、空白对照和无水乙醇对照。阳性对照为200uL VC和200uL DPPH溶液,空白对照为200uL水和200uLDPPH溶液,无水乙醇对照为200uL样品和200uL无水乙醇,样品为200uL样品溶液和200uLDPPH溶液,混匀之后避光0.5h,然后在酶标仪517nm处测得吸光值。计算公式:
Ai—为样品和DPPH的吸光值
Aj—为样品和无水乙醇的吸光值
Ac—VC和DPPH的吸光值
实验结果如下:
表1多肽对DPPH自由基清除作用的测定结果
DPPH自由基清除率是体外检测抗氧化活性最为常用的方法,如图1所示,为红平菇酶解多肽和VC对DPPH自由基清除能力结果。红平菇酶解多肽对DPPH自由基的清除能力随着浓度增加而增强。
(2)ABTS实验
ABTS工作液:5.0 mL ABTS(7.0 mmol/L)与88.0 mL过氧酸钾(40.0 mmol/L)混匀后,避光放置过夜,制成ABTS储备液,使用时,用无水乙醇稀释50倍,制成工作溶液(此时的吸光度测量值约为0.7)。
ABTS溶液,为方便计算样品的清除率,可配成1mg/mL的浓度。把样品液的每个浓度分为三个浓度梯度,并把每个梯度的浓度设为三个平行实验,每个浓度都设置有阳性对照、空白对照和蒸馏水对照。阳性对照为200uL VC和200uL ABTS溶液,空白对照为200uL水和200uL ABTS溶液,蒸馏水对照为200uL样品和200uL蒸馏水,样品为200uL样品溶液和200uLABTS溶液,混匀之后避光0.5h,然后在酶标仪734nm处测得吸光值。
Ai—为样品和ABTS的吸光值
Aj—为样品和蒸馏水的吸光值
Ac—VC和ABTS的吸光值
实验结果如下:
表2多肽对ABTS自由基清除作用的测定结果
如图2所示,为红平菇酶解多肽和VC对ABTS自由基的清除能力结果。红平菇酶解多肽对ABTS自由基的清除能力随着浓度增加而增强。与DPPH自由基清除率相比,对ABTS的清除能力明显增强。
Claims (7)
1.一种富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,由有效活性成分、凝胶成分、防腐成分、pH调节剂及去离子水制成,其特征在于:所述有效活性成分包括芦荟粉、红平菇子实体多肽粉、酶切寡聚透明质酸钠、溶菌酶、α-熊果苷、裂褶菌多糖和乳糖酸,凝胶成分为增稠剂,防腐成分包括对羟基苯乙酮、1,2己二醇和1,3丙二醇;所述各组分在芦荟凝胶中的重量百分比为芦荟粉1-4.5份、红平菇子实体多肽粉2-9份、酶切寡聚透明质酸钠0.5-5份、溶菌酶0.5-5份、α-熊果苷1-4.5份、裂褶菌多糖35-60份、乳糖酸10-30份、增稠剂8-24份、对羟基苯乙酮6-18份、1,2己二醇6-18份、1,3丙二醇30-80份、pH调节剂4-8份和100-200份去离子水。
2.根据权利要求1所述的具有红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,其特征在于:有效活性成分还包括糖基海藻糖,糖基海藻糖在芦荟凝胶中的重量份占比为15-45份。
3.根据权利要求1所述的具有红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,其特征在于:还添加有甘油,甘油在芦荟凝胶中的重量份占比为40-80份。
4.根据权利要求1、2或3所述的具有红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶,其特征在于:所述增稠剂为丙烯酸/酯类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物,pH调节剂为氨甲基丙醇。
5.一种如权利要求1所述的富含红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶的制备方法,包括如下步骤:
(1)按配方称取各组分;并匀浆各组分;
(2)在真空乳化搅拌机组内投入去离子水和增稠剂,开启搅拌和升温;
(3)将酶切寡聚透明质酸钠以及1,3丙二醇、羟基苯乙酮、1,2己二醇混合分散均匀后投入真空乳化搅拌机组内,继续升温至70℃-75℃,保温搅拌30分钟;在加入酶切寡聚透明质酸钠的同时加入糖基海藻糖和甘油;
(4)开启降温至50℃,将α-熊果苷、裂褶菌多糖投入真空乳化搅拌机组内;
(5)当温度≤45℃时,将乳糖酸、芦荟粉、红平菇子实体多肽粉投入到真空乳化搅拌机组内;
(6)继续降温,待温度≤35℃,将溶菌酶加入其中;
(7)抽真空至-0.05MPa,均质10分钟,搅拌20分钟;
(8)将pH调节剂吸入真空乳化搅拌机组内,pH值调整到5.5,搅拌10分钟;
(9)排除真空,出料,得到芦荟溶菌酶凝胶。
6.根据权利要求5所述的具有红平菇子实体多肽的芦荟溶菌酶凝胶的制备方法,其特征在于:步骤(2)和步骤(7)中,搅拌速度为25-55rpm/min,步骤(7)的均质速度为1000-1500rpm/min。
7.一种红平菇子实体多肽粉的制备方法,其特征是,包括如下步骤:
(1)取新鲜的红平菇子实体,切成小块放入烘箱烘干至恒重,烘干后粉碎成粒径为小于75μm的粉末状,过筛,置于密封袋内存-80℃冰箱备用;
(2)粗蛋白提取:取重量份数为100-200份的步骤(1)中红平菇子实体粉剂,按1:30的料液比向50ml离心管中加入蒸馏水,浸泡30min之后,用1mol/L NaOH溶液将料液的PH调到8.0±0.2,调好之后,放到超声功率为100W,温度为50℃超声设备中,超声时间为30min,超声结束以后,放到4500r/min的离心机中,离心15min,然后取离心之后的上清液;
(3)酶解:取重量份数为50-100份的步骤(2)中蛋白提取液分别在90°C的热水浴中水浴15min,使蛋白质变性,之后向蛋白提取液中加入稀NaOH溶液,至pH为10±0.2,混合均匀,然后加入重量份数为10份的碱性蛋白酶加热搅拌酶解,加热震荡水解,酶解温度为45°C,酶解时间为3h,然后在95°C水浴中维持15min灭酶,最后以6000r/min离心取上清液,所得上清液即为红平菇蛋白酶解多肽溶液;
(4)醇沉:向步骤(3)中的滤液中加入3-4倍体积的无水乙醇,在温度4℃条件下,沉淀10-14h后,5000g冷冻离心20min,除去可溶性糖、未水解的蛋白和酶,取上清液;
(5)浓缩干燥:将步骤(4)中的上清液分别在温度50~60℃条件下,以30~40rpm的转速,旋转蒸发浓缩8-10倍,浓缩液在温度-20℃冰柜冷冻24h,然后在真空度20Pa,温度-75℃的条件下,连续真空冷冻干燥24h,得红平菇子实体多肽粉。
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