CN112461943A - 一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112461943A
CN112461943A CN202011085067.1A CN202011085067A CN112461943A CN 112461943 A CN112461943 A CN 112461943A CN 202011085067 A CN202011085067 A CN 202011085067A CN 112461943 A CN112461943 A CN 112461943A
Authority
CN
China
Prior art keywords
milk
column
liquid chromatography
high performance
performance liquid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011085067.1A
Other languages
English (en)
Inventor
闫磊
张震
高娜
任小丽
皇超英
闫跃飞
岳婷婷
薛永康
李静茹
刘欢
潘磊
侯玉芳
魏成斌
邓红雨
马平安
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Cow Production Performance Determination Center
Henan Qianxiang Agriculture And Animal Husbandry Technology Co ltd
Henan Cow Performance Test Co ltd
Original Assignee
Henan Cow Production Performance Determination Center
Henan Qianxiang Agriculture And Animal Husbandry Technology Co ltd
Henan Cow Performance Test Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Cow Production Performance Determination Center, Henan Qianxiang Agriculture And Animal Husbandry Technology Co ltd, Henan Cow Performance Test Co ltd filed Critical Henan Cow Production Performance Determination Center
Priority to CN202011085067.1A priority Critical patent/CN112461943A/zh
Publication of CN112461943A publication Critical patent/CN112461943A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/60—Construction of the column
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8831—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving peptides or proteins

Abstract

本发明提供了一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括样品预制及色谱柱检测等两个步骤。本发明建立了一种全新的牛乳中免疫球蛋白IgG的测定方法，有效的拓展了牛乳中免疫球蛋白IgG的检测方法的种类和类型，且检测精度高，为检测领域提供更多的选择，而且本方法采用的液相色谱仪较传统的检测备普及率高，仪器运行稳定性好且容易操作，同时还可有效的简化检测样品的前处理步骤，从而提高了检测的效率。

Description

一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法
技术领域
本发明涉及一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，属微生物检测技术领域。
背景技术
目前的标准中检测牛乳中免疫球蛋白IgG的方法只有分光光度计法，《NY/T 2070-2011 牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG的测定 分光光度法》，该方法虽然可以满足时间检测作业的需要，但操作步骤繁琐，检测效率低下，而且兔抗牛IgG抗体粉剂在市场上很难购买，进一步增加了检测作业的成本和难度和成本。
因此针对这一现状，需要开发一种全新的牛乳中免疫球蛋白检测方法，以满足实际使用的需要。
发明内容
本发明的目的是提供本发明提供一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法。
为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：
S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；
S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至10℃—45℃，然后将S1步骤制备的样品取8—15μL，并以0.3—0.6mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。
进一步的，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:2—10。
进一步的，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。
本发明建立了一种全新的牛乳中免疫球蛋白IgG的测定方法，有效的拓展了牛乳中免疫球蛋白IgG的检测方法的种类和类型，且检测精度高，为检测领域提供更多的选择，而且本方法采用的液相色谱仪较传统的检测备普及率高，仪器运行稳定性好且容易操作，同时还可有效的简化检测样品的前处理步骤，从而提高了检测的效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明结构示意图；
图2为液相流动相梯度洗脱条件表。
具体实施方式
下面将结合本发明的附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
如图1所示，一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：
S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；
S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至10℃，然后将S1步骤制备的样品取8μL，并以0.3mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。
其中，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:2。
同时，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。
实施例2
如图1所示，一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：
S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；
S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至45℃，然后将S1步骤制备的样品取15μL，并以0.6mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。
本实施例中，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1: 10。
同时，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。
实施例3
如图1所示，一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，包括如下步骤：
S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；
S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—Bio Protein G column调节至25℃，然后将S1步骤制备的样品取5μL，并以0.5mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—Bio Protein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。
本实施例中，所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:5。
本实施例中，所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。
本发明建立了一种全新的牛乳中免疫球蛋白IgG的测定方法，有效的拓展了牛乳中免疫球蛋白IgG的检测方法的种类和类型，且检测精度高，为检测领域提供更多的选择，而且本方法采用的液相色谱仪较传统的检测备普及率高，仪器运行稳定性好且容易操作，同时还可有效的简化检测样品的前处理步骤，从而提高了检测的效率。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。

Claims (3)

1.一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述的牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法包括如下步骤：
S1，样品预制，首先精确称取待检测牛乳，并向牛乳中添加磷酸钠缓冲液稀释，然后将稀释后的牛乳通过离心机进行离心分离并静置，最后取静置后的上清液并将清液通过离子膜过滤后得到成品并备用；
S2，色谱柱检测，首先选用色谱柱—Bio Protein G column，并匀速调节色谱柱—BioProtein G column调节至10℃—45℃，然后将S1步骤制备的样品取8—15μL，并以0.3—0.6mL/min的速度匀速添加到色谱柱—Bio Protein G column中，然后向色谱柱—BioProtein G column中匀速添加浓度为50mmol/L磷酸钠缓冲液（pH7.4）和浓度为0.5mol/L乙酸进行梯度洗脱作业，即可在梯度洗脱过程中进行检测作业。
2.根据权利要求1所述的一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法的检测方法，其特征在于：所述S1步骤中，牛乳与磷酸钠缓冲液间的使用比例为1:2—10。
3.根据权利要求1所述的一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法的检测方法，其特征在于：所述S2中，在进行梯度洗脱过程中，单次操作仅使用磷酸钠缓冲液（pH7.4）与乙酸中的任意一种。
CN202011085067.1A 2020-10-12 2020-10-12 一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法 Pending CN112461943A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011085067.1A CN112461943A (zh) 2020-10-12 2020-10-12 一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011085067.1A CN112461943A (zh) 2020-10-12 2020-10-12 一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112461943A true CN112461943A (zh) 2021-03-09

Family

ID=74834028

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011085067.1A Pending CN112461943A (zh) 2020-10-12 2020-10-12 一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112461943A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1642976A (zh) * 2002-03-25 2005-07-20 阿默森生物科学有限公司 一种突变的免疫球蛋白－结合蛋白
US20180362595A1 (en) * 2008-12-24 2018-12-20 Emd Millipore Corporation Caustic stable chromatography ligands
CN109633053A (zh) * 2018-12-19 2019-04-16 杭州奕安济世生物药业有限公司 细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法和系统

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1642976A (zh) * 2002-03-25 2005-07-20 阿默森生物科学有限公司 一种突变的免疫球蛋白－结合蛋白
US20180362595A1 (en) * 2008-12-24 2018-12-20 Emd Millipore Corporation Caustic stable chromatography ligands
CN109633053A (zh) * 2018-12-19 2019-04-16 杭州奕安济世生物药业有限公司 细胞培养物蛋白质表达量和蛋白质聚集体量的检测方法和系统

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PATRICK T. HOLLAND等: "Determination of Soluble Immunoglobulin G in Bovine Colostrum Products by Protein G Affinity Chromatography_Turbidity Correction and Method Validation", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
S P FULTON等: "Antibody quantitation in seconds using affinity perfusion chromatography", 《BIOTECHNIQUES》 *
ZHE YAN等: "Chromatographic behavior of mouse serum immunoglobulin G in protein G perfusion affinity chromatography", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B》 *
杨祖英等: "高效亲和色谱法测定初乳素免疫球蛋白IgG", 《卫生研究》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104535664B (zh) 一种同时检测芝麻酱中多种霉菌毒素的方法
Lönnberg et al. Rapid affinity purification of erythropoietin from biological samples using disposable monoliths
CN104237363B (zh) 一种蛋白质定量方法
CN104330512B (zh) 基于在线SPE的快速测定尿液中轭合态β-受体激动剂的方法
CN103616454A (zh) 一种定量检测人β-酪蛋白含量的方法以及试剂盒
CN109900815B (zh) 血清中IgG糖肽的绝对定量分析
CN104198613A (zh) 一种分析蛋白o-糖基化位点的方法
CN101672835B (zh) 一种测定乳制品中乳铁蛋白的方法
WO2023179804A1 (zh) 一种利用超滤法换算平衡透析下游离物质含量的测定方法
CN104777257A (zh) 一种乳制品中乳清蛋白成分的快速分离检测方法
CN110940746A (zh) 一种分析肉桂多糖中单糖组成的测定方法
CN112461943A (zh) 一种牛乳中免疫球蛋白igG高效液相色谱检测方法
Viau et al. Determination of rat β2‐microglobulin in urine and in serum. I. Development of an immunoassay based on latex particles agglutination
CN111323527B (zh) 一种用复合二维液相色谱同时测定多种精神药物的方法
CN104749371B (zh) 人肾母细胞瘤过度表达基因编码蛋白酶联免疫试剂盒
CN115436542A (zh) 一种鉴别猪肠粘膜肝素中羊来源肝素掺杂比例的方法
CN110780005B (zh) 一种克立硼罗原料及其合成中间体的分析方法
CN104165951B (zh) 一种啤酒及麦汁中蛋白质分布和含量的测定方法
CN110806447B (zh) 百日咳杆菌气管细胞毒素的筛查方法和含量测定方法
CN116087389B (zh) 一种注射用比伐芦定有关物质的hplc测定方法
CN105651921A (zh) 一种利用硫酸寡糖组鉴别北极刺参的方法
CN110763785A (zh) 一种毒品测定方法
CN102565234A (zh) 一种乳制品中α-乳白蛋白含量的检测方法
CN110426470B (zh) 一种鸡蛋中生物素含量的测定方法
CN114674941A (zh) 一种快速检测饲料中乙酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210309