CN114674941A - 一种快速检测饲料中乙酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出的是一种快速检测饲料中乙酸的方法，通过液相色谱法检测乙酸标准品确定方法适配性，对饲料中的乙酸定性检测，制作乙酸定量标准曲线对饲料中的乙酸进行准确定量等步骤实现。本发明使用磷酸氢二铵溶液作为流动相对样品中的乙酸进行等度洗脱分离后，通过高效液相色谱仪检测，再通过标准曲线进行准确定量。本发明操作简单，检测灵敏且自动化程度高，特异性高；可进一步利用该方法对不同种类饲料中的乙酸进行检测，从而对饲料防腐剂安全使用进行更好的控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种饲料中防腐剂的检测方法，具体涉及一种快速检测饲料中乙酸的方法，属于分析检测技术领域。
背景技术
近年来，玉米由原本单一的粮食生产转变成为玉米加工业、饲料业和养殖业相结合的综合生产体系，玉米饲料营养丰富，水分、蛋白质和脂肪含量高，易腐败变质，产生异味，影响适口性，造成经济损失，因此，在保证使用优质原料的前提下，需向饲料中添加防腐剂。
《饲料添加剂品种目录》中允许使用苯甲酸、山梨酸、丙酸、乙酸等。《NY/T 2297-2012 饲料中苯甲酸和山梨酸的测定高效液相色谱法》适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和精料补充料中苯甲酸和山梨酸的测定，《GB/T17815-2018 饲料中丙酸、丙酸盐的测定》规定了饲料中丙酸、丙酸盐的气相色谱和高效液相色谱测定方法，饲料中乙酸的测定方法并无相关标准规定，而乙酸作为饲料防腐剂，目前已被广泛使用于饲料加工过程中，因此对饲料中丙酸定量显得尤为重要。由于苯甲酸、山梨酸、乙酸等防腐剂已在饲料行业广泛使用，为了广大消费者的健康考虑，建立一套快速定量饲料中乙酸的检测方法势在必行。
发明内容
本发明的目的在于解决现有饲料防腐剂检测方法存在的上述问题，提出一种快速检测饲料中乙酸的方法，使用磷酸溶液作为流动相对样品中的乙酸进行等度洗脱分离后紫外检测器检测，再通过标准曲线进行定量。
本发明的技术解决方案：一种快速检测饲料中乙酸的方法，具体包括如下步骤：
（1）标准溶液配制与标准曲线制作：
a、用纯水配制10mg/mL的乙酸标准品储备液作为最高浓度，用纯水将其稀释至1mg/mL作为乙酸标准工作液；再分别吸取一定体积的乙酸标准工作液至10mL容量瓶，分别加入1mol/L磷酸0.2mL，再用水定容至10mL，混匀，得到梯度浓度的乙酸标准溶液，最终浓度分别为0.02mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL；
b、使用高效液相色谱仪依次检测乙酸标准溶液，将乙酸标准溶液按浓度由低到高逐个进样，分别得到对应的液相色谱图；高效液相色谱仪的液相条件具体如下：色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流速1.0 mL /min；柱温25℃；进样量20μL；波长214nm；流动相为1.5g/L磷酸氢二铵溶液，使用时配制，用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7~3.5，再经0.45μm微孔滤膜过滤；
c、以液相色谱图的峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，绘制乙酸定量标准曲线；
（2）使用高效液相色谱仪对饲料试样中的乙酸进行定性检测：
a、准确称取5g饲料试样至100mL烧杯中，加水20mL，再加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，混匀，得试样溶液；
b、将试样溶液经超声波浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3，转移试样溶液至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀；
c、将定容后的试样溶液全部转移至50 mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后，使用高效液相色谱仪进行液相色谱测定，得到饲料试样中的乙酸液相色谱图；
（3）根据根据步骤（1）得到的乙酸定量标准曲线，结合步骤（2）得到的饲料试样中的乙酸液相色谱图，对饲料中的乙酸进行准确定量。
与现有技术相比，本发明的优点在于：建立了一种全新的快速检测乙酸的方法，使用1mol/L磷酸溶液作为流动相对样品中乙酸进行等度洗脱分离后紫外检测器检测，通过标准曲线，最终对饲料中乙酸进行准确定量，操作简单，检测灵敏且自动化程度高，特异性高。
附图说明
附图1是实施例中乙酸标准品高效液相色谱图。
附图2是实施例中高效液相色谱定性检测饲料中的乙酸液相色谱图。
附图3是实施例中高效液相色谱法定量检测乙酸的标准曲线图。
具体实施方式
下面根据多项实施例进一步说明本发明的技术方案。在本说明书的描述中，各项实施例的内容意指结合其描述的具体技术特征包含于本发明的至少一个实施方式中。在本说明书中，对各项实施例的示意性表述不一定指的是相同的实施方式或示例。而且，描述的具体技术特征可以在任何的一个或多个实施方式或示例中以合适的方式结合。
本实施例中提出的针对不同饲料厂饲料中乙酸的定性和定量检测方法，其具体步骤如下：
（1）标准溶液配制与标准曲线制作：
a、用纯水配制10mg/mL的乙酸标准品储备液作为最高浓度，用纯水将其稀释至1mg/mL作为乙酸标准工作液；再分别吸取一定体积标准工作液至10mL容量瓶，分别加入1mol/L磷酸0.2mL，用水定容至10mL，混匀，其乙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL；
b、使用高效液相色谱仪检测乙酸标准溶液，液相条件：流动相：1.5g/L磷酸氢二铵溶液，用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7~3.5（使用时配制），经0.45μm微孔滤膜过滤；流速1.0mL /min；柱温：25℃；色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；进样量20μL；波长：214nm，测得的高效液相色谱图如图1所示；
c、标准曲线制作：将乙酸标准溶液按浓度由低到高逐个进样，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标绘制标准曲线，如图3所示；
（2）高效液相色谱法对饲料中的乙酸定性检测：准确称取5g（精确至0.01g）试样至100mL烧杯中，加水20mL，加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，混匀，经超声波浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3左右，转移试样至50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。将试验全部转移至50 mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后，液相色谱测定，测得的高效液相色谱图如图2所示；
（3）根据乙酸定量标准曲线对饲料中的乙酸进行准确定量：
饲料中乙酸的定量分析：使用高效液相色谱法检测样品，用标准曲线进行定量检测，结果如表1所示。
表1 不同饲料中乙酸的含量
| 企业名称 | 饲料名称 | 乙酸含量（g/kg） |
| 石家庄某饲料有限公司 | 小鸡饲料 | 1.72 |
| 西安某饲料科技有限公司 | 复合预混合饲料 | 2.13 |
| 湖南某科技有限公司 | 仔猪前期配合饲料 | 1.46 |
（4）定量饲料中乙酸方法的评价：
通过上述标准曲线分析图表可知，该方法对于定量乙酸有很宽的线性范围，而且在线性范围内线性关系很好（R2>0.99），可见该方法的适用范围比较广。
在饲料中添加相似浓度的乙酸标准品，计算乙酸定量方法的回收率，并通过重复性实验的相对标准偏差来考察该定量方法的精确性，具体如表2所示。
表2 乙酸定量方法的回收率和精确性（n=7）
| 检测样品 | 猪饲料 | 鸡饲料 |
| RSD（%） | 1.17 | 1.26 |
| 回收率（%） | 97 | 93 |
该方法定量乙酸的下限低于样品中乙酸的含量，可以采用此方法对饲料中的乙酸进行定量，且该方法表现出很好的准确性（相对标准偏差在1.17%~2.26%之间）和精确性（回收率在93%~97%之间），完全能够满足饲料中乙酸的定量检测。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种快速检测饲料中乙酸的方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：
（1）标准溶液配制与标准曲线制作：
a、用纯水配制10mg/mL的乙酸标准品储备液作为最高浓度，用纯水将其稀释至1mg/mL作为乙酸标准工作液；再分别吸取一定体积的乙酸标准工作液至10mL容量瓶，分别加入1mol/L磷酸0.2mL，再用水定容至10mL，混匀，得到梯度浓度的乙酸标准溶液；
b、使用高效液相色谱仪依次检测乙酸标准溶液，将乙酸标准溶液按浓度由低到高逐个进样，分别得到对应的液相色谱图；
c、以液相色谱图的峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，绘制乙酸定量标准曲线；
（2）使用高效液相色谱仪对饲料试样中的乙酸进行定性检测：
a、准确称取5g饲料试样至100mL烧杯中，加水20mL，再加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，混匀，得试样溶液；
b、将试样溶液经超声波浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液调pH为3，转移试样溶液至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀；
c、将定容后的试样溶液全部转移至50 mL具塞塑料离心管中，以不低于4000r/min离心10min，取上清液，经0.45μm微孔滤膜过滤后，使用高效液相色谱仪进行液相色谱测定，得到饲料试样中的乙酸液相色谱图；
（3）根据根据步骤（1）得到的乙酸定量标准曲线，结合步骤（2）得到的饲料试样中的乙酸液相色谱图，对饲料中的乙酸进行准确定量。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测饲料中乙酸的方法，其特征在于：所述
步骤（1）中梯度浓度的乙酸标准溶液的最终浓度分别为0.02mg/mL、0.05 mg/mL、0.1mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种快速检测饲料中乙酸的方法，其特征在于：所述
步骤（1）中高效液相色谱仪的液相条件具体如下：色谱柱：C18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流速1.0 mL /min；柱温25℃；进样量20μL；波长214nm。
4.根据权利要求1所述的一种快速检测饲料中乙酸的方法，其特征在于：所述
步骤（1）中高效液相色谱仪的流动相为1.5g/L磷酸氢二铵溶液，使用时配制，用1mol/L磷酸溶液调pH为2.7~3.5，再经0.45μm微孔滤膜过滤。
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| CN102998385A (zh) * | 2012-11-22 | 2013-03-27 | 孙彬 | 一种同时测定玉米秸秆发酵液中两种有机酸含量的方法 |
| CN112763629A (zh) * | 2021-01-18 | 2021-05-07 | 上海美农生物科技股份有限公司 | 用于同时检测复合酸化剂中6种酸化剂的方法 |
-
2021
- 2021-12-31 CN CN202111662467.9A patent/CN114674941A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102998385A (zh) * | 2012-11-22 | 2013-03-27 | 孙彬 | 一种同时测定玉米秸秆发酵液中两种有机酸含量的方法 |
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 柳俊超 等: "青贮饲料中主要有机酸的高效液相色谱分离分析", 畜牧与兽医, vol. 47, no. 10, 10 October 2015 (2015-10-10), pages 47 - 52 * |
| 邓虹 等: "饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定", 饲料博览, vol. 2018, no. 6, 25 June 2018 (2018-06-25), pages 8 - 12 * |
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